نیٹ ورک فارماکولوجی کے ذریعے جلد کی رنگت کو کم کرنے والے ممکنہ ایجنٹ کے طور پر سیٹوگلوسائیڈ کی شناخت

رابطہ: ali.ma@wecistanche.com

ہوران گوو، 1 ہونگلیانگ زینگ، 2 چوہان فو، 1 جنہوا ہوانگ، 1 جیانیون لو، 1 ییبو ہو، 1 ینگ زو، 1 لیپنگ لو، 1 یوشان ژانگ، 1 لان ژانگ، 1 جینگ چن، 1 اور چنگھائی زینگ 1

بہت سی روایتی چینی ادویات (TCMs) کے ساتھجلد کو سفید کرناخصوصیات بین-کاو-گینگ-مو اور معلوماتی نسخوں میں درج کی گئی ہیں، اور کچھ ادب اس بات کی تصدیق کرتا ہے کہ ان کے نچوڑ میں روکنے کی صلاحیت موجود ہے۔رنگت. تاہم، nosystematic مطالعہ نے ممکنہ فعال اجزاء کے مخصوص ریگولیٹری میکانزم کی نشاندہی کی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد TCMs میں موجود اجزاء کی جانچ کرنا تھا جو جلد کو روکتے ہیں۔رنگتنیٹ ورک فارماکولوجی سسٹم کے ذریعے اور زیرِ نظر میکانزم کو دریافت کرنا۔ ہم نے 14 TCMs سے 148 ممکنہ فعال اجزاء کی نشاندہی کی، اور ٹاپولوجیکل پیرامیٹرز کی اوسط "ڈگری" کی بنیاد پر، سب سے اوپر پانچ TCMs (Fructus Ligustri Lucidi، Hedysarum multijugum Maxim.، Ampelopsis japonica، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، اور Paeoniae) کا سب سے زیادہ امکان تھاجلد کو سفید کرناسوزش کے عمل کے ذریعے منتخب کیا گیا تھا. Sitogluside، سب سے اوپر پانچ TCMs میں سب سے عام جزو، melanogenesisin human melanoma خلیات (MNT1) اور murine melanoma خلیات (B16F0) کو روکتا ہے اور جلد کو کم کرتا ہے۔رنگتمزید برآں، میکانکی تحقیق سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ سیٹوگلوسائیڈ کم کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ٹائروسینیز(TYR) اظہار ERK اور p38 راستوں کو روک کر اور TYR سرگرمی کو روک کر۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ نیٹ ورک فارماکولوجی جلد کو سفید کرنے والی خصوصیات کے ساتھ قدرتی مرکبات کی دریافت اور ان کے ممکنہ میکانزم کے تعین کے لیے ایک مؤثر ذریعہ ہے۔ Sitogluside ایک نیا جلد کو سفید کرنے والا فعال جزو ہے جس میں دوہری ریگولیٹری اثرات ہیں جو روکتے ہیںTYRاظہار اور سرگرمی

پر کلک کریں۔جلد کو سفید کرنے کے لیے Cistanche DHT کا عرق

تعارف

میلانین نہ صرف انسانی جلد، آنکھوں اور بالوں کے رنگ کا تعین کرتا ہے بلکہ یہ چھلاورن، نقالی، سماجی رابطے، اور بالائے بنفشی شعاعوں سے تحفظ میں بھی کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔ تاہم، جب میلانین زیادہ پیدا ہوتا ہے اور epidermis میں غیر معمولی طور پر تقسیم ہوتا ہے، تو یہ مختلف اقسام کا سبب بنتا ہے۔ ایسے حالات، جیسے فریکلز اور میلاسما، جو کسی کی سمجھی جانے والی خوبصورتی اور سماجی اعتماد کو منفی طور پر متاثر کر سکتے ہیں [1]۔ میلانین ایل ٹائروسین کی حتمی پیداوار ہے جو انزیمیٹک رد عمل کے متعدد مراحل کے بعد ہے اور میلانوسائٹ میلانوسومز میں ترکیب کی جاتی ہے [2]۔ جلد میں، melanocytes epidermis کے basallayer میں واقع ہوتے ہیں اور maturemelanosomes پیدا کر سکتے ہیں اور keratinocytes میں منتقل کر سکتے ہیں، اس طرح جلد کا سبب بنتا ہے۔رنگت [3]. TYRمیلانین کی پیداوار میں بنیادی شرح کو محدود کرنے والا انزائم ہے [4]، اور مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) اہم ٹرانسکرپشن عنصر ہے جو TYR [5] کے ٹرانسکرپشنی اظہار کو منظم کرتا ہے۔

حال ہی میں، مطالعات سے پتا چلا ہے کہ اشتعال انگیز ردعمل میلانوجینیسیس [6] کے ضابطے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ مثال کے طور پر، IL-18، جو لینگرہانس کے خلیات، ڈینڈریٹک سیلز، اور ایپیڈرمس میں کیراٹینوسائٹس کے ذریعے تیار ہوتے ہیں، TRP کے اظہار کو بڑھا سکتے ہیں{{2} }} (ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین 1) اور TRP-2 (ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 2) thep38/MAPK (mitogen-activated protein kinase) اور PKA (protein kinase A) راستوں کو چالو کر کے، اس طرح میلانوجینیس کو فروغ دیتا ہے[7, 8 ] TNF- بنیادی طور پر NF-κB کو چالو کرکے B16 میلانین کی پیداوار کو کم کرتا ہے [9]۔ PGe2 (prostaglandin e2)، جو fibroblasts اور keratinocytes کے ذریعے چھپایا جاتا ہے، دکھایا گیا ہے کہ ڈینڈریٹک خلیوں کے فرق کو متحرک کرتے ہیں اور CAMP (سائیکلک اڈینوسین مونو فاسفیٹ) اور Plc (فاسفولیپیس c) سگنلنگ پاتھ کے ذریعے میلانوسائٹس میں TYR سرگرمی شروع کرتے ہیں۔ PIH (postinflammatory hyperpigmentation) ایک قسم کی رد عمل والی جلد کی میلانائزیشن ہے [11]۔ جلد کی مختلف بیماریاں، صدمے، یا کاسمیٹک سرجری اکثر اس کا باعث بنتی ہے۔رنگتمتاثرہ علاقے کا، خاص طور پر رنگین لوگوں میں [12]۔ PIH والے مریض عام طور پر بہت زیادہ نفسیاتی تناؤ برداشت کرتے ہیں، جو کہ سنگین صورتوں میں ان کے معیار زندگی کو منفی طور پر متاثر کرتے ہیں۔ لہذا، کچھ ادویات جو سوزش کو کنٹرول کرتی ہیں ان کا استعمال PIH اور دیگر بیماریوں کے علاج کے لیے کیا جاتا ہے جو ہائپر پگمنٹیشن کا سبب بنتے ہیں۔ مثال کے طور پر، resveratrol، جس نے HaCaT خلیوں میں سوزش کے نقصان کو کم کیا [13]، kinase1/2 کے ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹنگ اور سگنلنگ کے ذریعے میلانن سنتھیسز کو روکتا پایا گیا۔ phosphoinositide 3-kinase/Akt [14]۔

سفید کرناایجنٹس، جیسے ہائیڈروکوئنون (HQ) اور وٹامن سی، روایتی طور پر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے استعمال ہوتے ہیں [15]۔ HQ ایک ہائیڈروکسی فینول ہے جس میں میلانوجینیسیس پر طاقتور روک تھام کا اثر ہوتا ہے۔ تاہم، مختلف ضمنی اثرات کی وجہ سے جلن یا الرجک کانٹیکٹ ڈرمیٹیٹائٹس، ناخن کی رنگت، اور زخم کی خرابی کی وجہ سے، HQ کا استعمال محدود ہے[16, 17]۔ وٹامن سی کو روکتا ہے۔TYRTYR فعال سائٹس پر کاپریئنز کے ساتھ تعامل کرتے ہوئے، اس طرح میلانوجینیسیس میں کمی واقع ہوتی ہے۔ تاہم، تیار شدہ مصنوعات میں وٹامن سی غیر مستحکم ہے۔ اس کے علاوہ، اگر وٹامن سی کا ارتکاز 20 فیصد سے زیادہ ہے، تو یہ جلد کی خارش کا سبب بن سکتا ہے [18]۔ لہذا، قدرتی اجزاء کی ایک وسیع رینج سے جو محفوظ، موثر، انتہائی مستحکم اور ذخیرہ کرنے میں آسان ہیں ان کی زیادہ مانگ ہے۔

حال ہی میں، TCM کے مزید اجزاء جلد کو روکنے میں موثر پائے گئے ہیں۔رنگت، جیسے ایپیگینی اور پیونی فلورین [19-21]۔ بین-کاو-گینگ-مو میں بیان کردہ سفید کرنے کی سرگرمی کے ساتھ TCM چین میں بڑے پیمانے پر خفیہ نسخوں کے طور پر استعمال ہوتے ہیں، اور آج کل، ان کے پگمنٹیشن کو روکنے کا اثر ہونے کی تصدیق ہوتی ہے۔ مثال کے طور پر، Hedysarum multijugum Maxim (Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge کا rhizome) کا نچوڑ ERK کے راستے کو روک کر جلد کو سفید کرتا ہے [22]۔ Typhonii Rhizoma (Suromatum gigan-teum (Engl.) Cusimano اور Hett. کا rhizome) کا خشک عرق مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔ٹائروسینیزوٹرو میں سرگرمی [23]۔ اور شواہد پر مبنی ادویات نے بھی تصدیق کی ہے کہ SapindiMukorossi Semen (Sapindus mukorossi Gaertn کا پھل) کا نچوڑ، جو ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روکتا ہے، ایک دوا اور کاسمیٹک اضافی کے طور پر استعمال کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے [24]۔ کچھ روایتی لوک نسخے، اگرچہ ایک مجموعہ میں مرتب نہیں کیے گئے ہیں، وہ بھی بڑے پیمانے پر استعمال ہوتے ہیں۔ سان-بائی تانگ (SBT) ایک عام مثال ہے۔ آپ وغیرہ۔ نے یہ ظاہر کیا کہ SBT p38/MAPK سگنلنگ پاتھ وے اور TYR سرگرمی کو روک کر میلانین کی پیداوار کو کم کر سکتا ہے [25]۔ دیگر TCMs بیان کیے گئے بعض نسخوں میں بھی دکھایا گیا ہے۔جلد کی سفیدیاثرات Coicis Semen (Coix AquaticaRoxb کا بیج) نچوڑ MITF، TYR، TRP-1، اور TRP-2 [26] کو کم کرکے میلانین کی پیداوار کو روکتا ہے۔ اس کے علاوہ، کی ایک سیلسیTYRظاہر ہوا کہ Ampelopsis japonica (Ampelopsis japonica (thunb.) Makino کا rhizome) مشروم TYR کی سرگرمی کو 50 فیصد سے زیادہ روکتا ہے [27]۔ ان قدیم نسخوں میں درج سفید کرنے والے TCMs کو جدید تجرباتی تکنیکوں کے ذریعہ موثر ثابت کیا گیا ہے، لیکن ان میں سے زیادہ تر کی تصدیق نچوڑوں کی شکل میں ہوتی ہے، اور فعال اجزاء جو کام کرتے ہیں وہ واضح نہیں ہوتے ہیں۔ قدیم نسخوں میں

اس کے علاوہ، TCMs یا نسخوں میں پیچیدہ اجزاء، عمل کے متنوع طریقے، اور نامعلوم فعال اجزاء ہوتے ہیں۔ اس کے علاوہ، خام مال کے معیار، پروسیسنگ کے طریقے، تیاری کی تکنیک، مرکب میں استعمال ہونے والے اجزاء کی مطابقت، اور خوراک کی شکل جیسے عوامل کی عدم مطابقت TCMs کی افادیت پر زیادہ اثر ڈالتی ہے [19، 28]۔ لہذا، کے ساتھ بعض TCMs کا استعمالجلد کو سفید کرنااثرات محدود ہیں. اس لیے ان اجزاء کی حفاظت، افادیت اور استحکام کو یقینی بنانے کے لیے منظم اسکریننگ کے ذریعے جلد پر سفیدی کے ممکنہ اثرات والے فعال اجزاء کی نشاندہی کرنا ضروری ہے۔

حالیہ برسوں میں، TCM کے میدان میں نظام حیاتیات کے اطلاق نے بہت ترقی کی ہے۔ TCM کا نیٹ ورک فارماکولوجی ایک نیا کراس ڈسپلن ہے جو TCMs کی فارماکولوجی کو نیٹ ورک سائنس، سسٹم بائیولوجی، کمپیوٹیشنل سائنس، اور بائیو انفارمیٹکس [29] کے ساتھ جوڑتا ہے۔ یہ "پیچیدہ-پروٹین/جین-بیماری" نیٹ ورک [30] کے نقطہ نظر سے ادویات، بیماریوں اور حیاتیاتی نظام کے درمیان پیچیدگی کو پوری طرح سمجھتا ہے۔ نیٹ ورک فارماکولوجی فارماکولوجیکل ایکشن، میکانزم، حفاظت، اور جڑی بوٹیوں کی ادویات کے دیگر پہلوؤں، خاص طور پر TCMs کا مطالعہ کرنے کے لیے ایک مؤثر اور منظم ٹول ہے، اور موجودہ ادویات کی دریافت کے لیے قیمتی بصیرت فراہم کرتا ہے [31, 32]۔

جلد کو سفید کرنے والے اجزاء

2. مواد اور طریقہ

2.1 نیٹ ورک فارماکولوجیکل عمل

2.1.1 کیمیائی اجزاء کے لیے ڈیٹا بیس کی عمارت

مطالعہ شدہ تجرباتی پروگرام کا ایک فلو چارٹ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ اینٹی پگمنٹیشن اثرات کے ساتھ TCMs، جن کی وضاحت بین-کاو-گینگ-مو اور لوک نسخوں میں کی گئی ہے، نیٹ ورک فارماسولوجیکل تجزیہ کے لیے استعمال کیے گئے ہیں۔ Typhonii Rhizoma، Ricini Semen، Hedysarum multijugum Maxim.، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، اور Sapindi MukorossiSemen، جن کا بیان Ben-Cao-Gang-Mu میں بیان کیا گیا ہے۔سفید کرنااور پیلے رنگ کو کم کرنے والی خصوصیات اور چہرے کے دھبوں اور چھچھوں کو دور کرسکتی ہیں۔ Poria cocos (Schw.) وولف (Smilax china L. کا سکلیروٹیم)، Paeoniae Radix Alba، اور Atractylodes macrocephala Koidz (Atractylodes macrocephalaKoidz کا rhizome.) جو SBT کے اجزاء ہیں جلد کی ساخت کو بہتر بنانے اور کم کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔رنگت. دیگر روایتی طور پر ریکارڈ شدہ جڑی بوٹیاں، جیسے Bletilla striata (Thunb. Murray) Rchb.F. (Bletilla striata (Thunb.) Rchb.F. کا rhizome)، Ampelopsis japonica، A. dahurica (Fisch.)Benth. Et Hook (Angelica dahurica کا rhizome (Hoffm.) Benth. and Hook.f. ex Franch. and Sav.), Atractylodes lancea (thunb.) Dc. (Atractylodes lancea (thunb.)DC کا rhizome)، Fructus Ligustri Lucidi، اور Coicis Semen، کو بھی اس تحقیق میں شامل کیا گیا تھا۔ اس مطالعے میں شامل TCM کی ایک بڑی تعداد کی وجہ سے، متعدد چینی ادویات کے ڈیٹا بیس کی اسکریننگ ڈیٹا پروسیسنگ میں الجھن کا باعث بنے گی۔ فالو اپ اسکریننگ کے لیے ہم صرف روایتی چائنیز میڈیسن سسٹم فارماکولوجی (TCMSP) ڈیٹا بیس کا استعمال کرتے ہیں، جو کہ زیادہ عام طور پر استعمال ہونے والا ڈیٹا بیس ہے۔ ان TCMs کے کیمیائی اجزاء کو TCMSP میں تلاش کیا گیا (24 اپریل کو اپ ڈیٹ کیا گیا020) [33]۔ منشیات سے مشابہت (DL) اور زبانی جیو دستیابی (OB) عام طور پر اسکریننگ کے پیرامیٹرز استعمال کیے جاتے ہیں۔ ٹاپیکل اورسسٹمک ادویات جلد کی رنگت کی بیماریوں کے لیے عام علاج ہیں۔ لہذا، ہم نے صرف ڈی ایل کو اسکریننگ کے معیار کے طور پر استعمال کیا۔ DL > 0:18 کے ساتھ بہترین کمپلیکس کو منشیات کے امیدواروں کی ہٹ ریٹ بڑھانے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔

2.1.2 TCMs کے ٹارگٹ جینز اور پگمنٹیشن سے وابستہ جینز کے درمیان تقاطع۔

کے ساتھ منسلک جین سیٹرنگتجین کارڈز ڈیٹا بیس کی بنیاد پر منتخب کیا گیا تھا (24 اپریل 2020 کو اپ ڈیٹ کیا گیا تھا)، جس سے ایجین-ڈیزیز سکور> 1 والے اہداف کا انتخاب کیا گیا تھا۔ آخر کار، 6180 پگمنٹیشن سے متعلق اہداف کی نشاندہی کی گئی۔ TCMs کے ٹارگٹ جینز اور پگمنٹیشن سے وابستہ جینوں کے درمیان چوراہے کو وین ڈایاگرام [34] کا استعمال کرتے ہوئے دکھایا گیا تھا۔

2.1.3 ایک فعال کمپاؤنڈ-ٹارگٹ-پاتھ وے نیٹ ورک کی تعمیر۔

وین ڈایاگرام کے نتائج کے مطابق فعال اجزاء اور ریگولیٹڈ ٹارگٹ جینز کی اسکریننگ کی گئی۔ یہ نیٹ ورک Cytoscape سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا تھا [35] اور اسے TCMs کے فعال مرکبات اور ٹارگٹ جینز کے درمیان تعلق کی نشاندہی کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔رنگتاے ٹی سی ایم میں ایک فعال جزو کے ذریعے ریگولیٹ کیے جانے والے ہر ہدف کے جین کو ایک "ڈگری" سمجھا جاتا تھا۔ ہر TCM کے اوسط "ڈگری" ٹاپولوجیکل پیرامیٹرز کو منتخب TCMs کی اہمیت کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ مرکبات کی درجہ بندی کی گئی، اور کلیدی تجزیوں کے لیے سرفہرست پانچ TCM کا انتخاب کیا گیا۔ مزید برآں، پگمنٹیشن کو منظم کرنے کے لیے رپورٹ کیے گئے ممکنہ فعال اجزاء کے بارے میں تفصیلی معلومات کا تجزیہ کیا گیا۔

2.1.4 کیوٹو انسائیکلوپیڈیا آف جینز اینڈ جینوم (KEGG)ممکنہ طور پر موثر TCMs کے ذریعے ریگولیٹڈ ٹارگٹ جینز کی افزودگی کا تجزیہ۔

کے ای جی جی ٹارگٹ پاتھ ویز کا تعین کرنے اور ان TCMs میں ممکنہ طور پر موثر اجزاء کے ممکنہ میکانزم کو دریافت کرنے کے لیے ٹاپ پانچ TCM کے ذریعے ریگولیٹ کیے گئے ٹارگٹ جینز کا انتخاب کیا گیا۔رنگتDAVID بائیو انفارمیٹکس وسائل 6.8 کا استعمال KEGG ہدف کے راستوں کی افزودگی کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ مؤثر فعال اجزاء کے ممکنہ اہداف کے جین کی علامتیں اپ لوڈ کی گئیں۔ حاصل شدہ جین شناخت کنندگان کو پھر ڈاؤن لوڈ کیا گیا اور KOBAS3 میں داخل کیا گیا۔ وہ جین جس نے ڈی پی ویلیو کو 0.05 سے کم ایڈجسٹ کیا۔

2.1.5 مالیکیولر ڈاکنگ سمولیشن۔

سیٹوگلوسائیڈ، آربوٹین، نیکوٹینامائیڈ، ایچ کیو، کوجک ایسڈ، اور ایسکوربک ایسڈ کے 2D ڈھانچے پب چیم ڈیٹا بیس سے حاصل کیے گئے تھے۔ چھوٹے مالیکیولز کے مکینیکل ڈھانچے کو ChemBio3D الٹرا 14 کا استعمال کرتے ہوئے بہتر بنایا گیا تھا۔{3}}۔ مشروم کا 3D کرسٹل ڈھانچہTYR(PDB ID: 2Y9X، ڈاکنگ کوآرڈینیٹ: X =−8:87، Y=−30:74، اور Z=−41:52) پروٹین ڈیٹا بینک سے حاصل کیا گیا تھا ( PDB) ڈیٹا بیس [36]۔ چھ جھلی ریسیپٹرز کے 3D کرسٹل ڈھانچے (opioid u ریسیپٹر، PDB ID: 4DKI؛ melanocortin 1 رسیپٹر، PDB ID: 2L1J؛ اینڈوتھیلین B ریسیپٹر، PDB ID: 5GLI؛ ایڈرینرجک ریسیپٹر، PDB ID: PDB ID: 4DBR6، 6GB ریپٹر سٹیم سیل فیکٹر ریسیپٹر، PDB ID: 2EC8) PDB ڈیٹا بیس سے حاصل کیے گئے تھے۔ پروٹین کے ڈھانچے کو آٹو ڈاک ٹولز کا استعمال کرتے ہوئے پانی کے مالیکیولز کو ہٹا کر، ہائیڈروجن شامل کر کے، اور دھاتوں اور ڈسلفائیڈ بانڈز کے لیے زیرو آرڈر بانڈز بنا کر تیار کیے گئے تھے۔ آخر میں، مالیکیولر ڈاکنگ سمیولیشنز کو AutoDock Vina 1.1.2 [37] کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا، اور PyMoL 1.7.2.1 کا استعمال کرتے ہوئے نتائج کا تجزیہ کیا گیا۔

2.2 تجرباتی توثیق

2.2.1 کیمیکل اور اینٹی باڈیز۔

Sitogluside (پاکیزگی 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) ChemFaces (#CFN98, 713, Chem Faces) سے خریدی گئی تھی۔ Dimethylsulfoxide (DMSO) سگما-الڈرچ سے خریدا گیا تھا۔ غیر جانبدار پیرافارمیلڈہائڈ (4 فیصد) بائیوشارپ (ہیفی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ کوجک ایسڈ، فونٹانا-میسن سٹین کٹ، سوڈیم ڈوکسائیکولیٹ، اور ایل ڈوپا سولربیو (بیجنگ، چین) سے خریدے گئے تھے۔ Dulbecco کا ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM) Gibco (#C11995500BT, Gibco) سے خریدا گیا تھا۔ فیٹل بووائن سیرم (FBS) اور سیل کاؤنٹنگ کٹ-8 (CCK8) BI (Kibbutz Beit-Haemek, Israel) سے خریدے گئے تھے۔ PMA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate، ERK/MAPK ایکٹیویٹر) APExBIO (#N2060, APExBIO) سے خریدا گیا تھا۔ Anisomycin (p38/MAPK ایکٹیویٹر) MedChem Express (HY-18982, MedChemExpress) سے خریدی گئی تھی۔ راس سے متعلق پروٹین Rab-27A (RAB27A) (#69295,CST)، ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کناز (ERK) (#4695,CST)، p-ERK (#4370, CST)، c- کے خلاف پرائمری اینٹی باڈیز Jun N-terminal kinase JNK(#9252, CST), p-JNK (#4668, CST), p38 (#8690, CST), p38 (#4511, CST), cAMP ردعمل عنصر بائنڈنگ پروٹینCREB ( #9107، CST)، اور p-CREB (#9198، CST) سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی سے خریدے گئے تھے۔ TRP1 (ab235447، Abcam)، TRP2 (NBP1-56058،Novusbio)، MITF (STJ94134، سینٹ جان کی لیبارٹری) کے خلاف بنیادی اینٹی باڈیز،TYR(BS1484، Bioworld)، اور GAPDH (#AP0066، Bioworld) بالترتیب Abcam، Novusbio، St. John's Laboratory، اور Bioworld سے خریدے گئے تھے۔

2.2.2. سیل کلچر اور علاج۔

MNT1 اور B16F0، جو میلانوسومز سے بھرپور ہوتے ہیں، بڑے پیمانے پر میلانوجینیسیس کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں [38]۔ اس کے نتیجے میں، ان دو سیل لائنوں کو بعد کے تجربات کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ MNT1 اور B16F0 خلیات DMEM میں 20 فیصد یا 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (بائیولوجیکل انڈسٹریز، اسرائیل) اور 1 فیصد پینسلین-اسٹریپٹومائسن (گبکو) میں کلچر کیے گئے تھے۔ تمام خلیوں کو گیلے انکیوبیٹر میں 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 پر کلچر کیا گیا تھا۔ سیٹوگلوسائیڈ کو DMSO میں تحلیل کر دیا گیا تھا، اور DMSO کی حتمی حراستی تھی۔<0.1%. pma="" and="" anisomycin="" were="" separately="" dissolved="" in="" dmso,="" and="" the="" final="" concentration="" of="" dmso="" was=""><>

2.2.3 زیبرا فش کی ثقافت اور علاج۔

زیبرا فش ایمبریو اور کلچر میڈیم EzeRinka Biotech (Nanjing, China) سے خریدا گیا تھا۔ تجرباتی پروٹوکول کو سینٹرل ساؤتھ یونیورسٹی (نمبر 2021-S137) کے تیسرے Xiangya ہسپتال کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ مچھلیوں سے نکلنے کے پہلے دن، زیبرا فش کو ایک 12-کنویں کی پلیٹ (10 پرویل) میں پالا گیا، روشنی سے محفوظ رکھا گیا، اور 37 ڈگری پر پالا گیا۔ زیبرا فش کے ساتھ سیٹوگلوسائیڈ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا، اور زیبرا فش کی دموں میں میلانین میں ہونے والی تبدیلیوں کو ریکارڈ کرنے کے لیے 24 گھنٹے کے وقفوں پر الٹی مائکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے تصاویر لی گئیں۔ تصاویر لینے کے بعد، مختلف ارتکاز کے سیٹوگلوسائیڈ سلوشنز کو ایک ہفتے تک پڑھا اور ریکارڈ کیا گیا۔

2.2.4 سیل وابستگی۔

CCK8.MNT1 اور B16F0 سیلز کو 2000 سیل/کنویں یا 500 سیل/کنویں کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا تھا۔ خلیوں کا علاج سیٹوگلوسائڈ (25، 50،100، 200، 400، 600، اور 800 μM) کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔ 24 گھنٹے یا 48 گھنٹے کے بعد، ہر کنویں میں 10 μLof CCK8 ریجنٹ شامل کیا گیا، اور خلیات کو 1 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ جب نارنجی کا رنگ درمیانے رنگ کا ہو گیا تو ثقافت کو ختم کر دیا گیا، اور 490 nm پر جاذبیت کی پیمائش کرنے کے لیے ایک مائکروپلیٹریڈر (PerkinElmer EnVision Xcite، UK) کا استعمال کیا گیا۔

2.2.5 فونٹانا-میسن میلانین سٹیننگ۔

خلیات کو ایک 6-کنواں پلیٹ میں کلچر کیا گیا تھا اور 2 دن تک سیٹوگلوسائیڈ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا تھا، اور کوجک ایسڈ کو مثبت کنٹرول کے طور پر 200 μM پر شامل کیا گیا تھا۔ اس کے بعد خلیوں کو 15 منٹ کے لئے 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ میں رکھا گیا تھا۔ پانی سے کلی کرنے کے بعد، خلیات کو 24 گھنٹے کے لیے فونٹانا امونیا سلور محلول سے انکیوبیٹ کیا جاتا تھا، ایک تاریک چیمبر میں پانی سے دھویا جاتا تھا، اور پھر اضافی 5 منٹ کے لیے ہائپو سلفائٹ ڈالا جاتا تھا۔ میلانین کا مشاہدہ کرنے کے لیے ایک الٹی خوردبین کا استعمال کیا گیا۔

2.2.6 فنکشن ریکوری کا تجربہ۔

PMA، ERK/MAPK [39, 40] کے ایک تسلیم شدہ ایکٹیویٹر کے طور پر، مختلف ارتکاز (6.25,12.5, 25, 50, 100, 200, 400, and 800 ng/mL) 24 گھنٹے کے لیے۔ اور MNT1 اور B16F0 خلیات کو PMA کے مختلف ارتکاز (25, 50، اور 100 ng/mL) کے ساتھ 2 گھنٹے تک علاج کرنے کے بعد، ERK کی فاسفوریلیشن لیول ویسٹرن بلوٹنگ کے تجربے سے پتہ چلا۔ منتخب کردہ ارتکاز میں، خلیات کو 0، 1، 2، 4، 6، اور 8 گھنٹے کے ساتھ علاج کیا گیا تاکہ ایکٹیویشن کے موثر وقت کا پتہ لگایا جا سکے۔ 48 گھنٹے (ہر 8 گھنٹے بعد پیچھے ہٹنا) کے بعد خلیوں کا سیٹوگلوسائیڈ (200 μM) اور PMA (25 ng/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا، پروٹین کی سطحTYRandp-ERK کا پتہ چلا۔ فونٹانا-میسن میلانین سٹیننگ نے میلانین مواد کا پتہ لگایا۔ Anisomycin [41] p38/MAPK کا ایکٹیویٹر ہے، جس کا ایکسپلوریشن ارتکاز 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, اور 512 nM ہے اور دیگر تجرباتی طریقے PMA جیسے ہی ہیں۔

2.2.7 TYR سرگرمی کی پیمائش۔

خلیوں کا علاج 2 دن تک سیٹوگلوسائڈ کی مختلف حراستی کے ساتھ کیا گیا۔ ہاضمہ اور سینٹرفیوگریشن کے بعد، خلیات کو شمار کیا گیا اور فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) میں دو بار معطل کیا گیا۔ اگلا، 500 μL کا 0.5 فیصد سوڈیم ڈوکسائیکولیٹ محلول ہر ایک نمونے میں شامل کیا گیا۔ نمونے 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر پھر 15 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر لگائے گئے۔ 1 فیصد L-DOPA محلول کا 1 mL شامل کیا گیا، جس کے بعد 200 μL کو فوری طور پر ایک 96-کنویں پلیٹ میں ڈال دیا گیا۔ اس کے بعد، ایک ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر کو 475 nm پر جاذبیت کی قدروں (A0) کی پیمائش کرنے کے لیے استعمال کیا گیا، اور پیمائش کو 30 منٹ (A30) کے بعد دہرایا گیا۔TYRسرگرمی کا حساب (A{{0}A0)/سیل نمبر کے طور پر کیا گیا۔

2.2.8 TYR سرگرمی کی تحقیقات۔

کے لیے ایک قریب اورکت فلوروسینس پروبTYRریزوروفین پر مبنی سرگرمی کا استعمال زندہ خلیوں میں سرگرمی کو دیکھنے کے لیے کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا . ایک 10 μM فلوروسینس تحقیقات شامل کی گئیں ، اور 4 گھنٹے کے بعد ، خلیوں کو پی بی ایس سے تبدیل کردیا گیا۔ سرخ روشنی کے پرجوش ہونے کے بعد، تصاویر لینے کے لیے فوری طور پر فلوروسینٹ الٹی مائکروسکوپ کا استعمال کیا گیا۔

2.2.9 پروٹین نکالنا اور مغربی بلوٹنگ۔

2 دن تک سیٹوگلوسائیڈ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ خلیوں کا علاج کرنے کے بعد، کل سیلولر پروٹین کو RIPA Lysis Buffer (Thermo Fisher) اور Protease inhibitor and Phosphatase inhibitor cocktails (Roche) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا۔ BCA پروٹین assaykit (KeyGEN Biotec) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی حراستی کا تعین کیا گیا تھا۔ 1 فیصد BSA کے ساتھ بلاک کرنے کے بعد، بنیادی اینٹی باڈیز کے خلافTYR، MITF, TRP1, TRP2, RAB27A,CREB, p-CREB, ERK, p-ERK, JUK, p-JUK, p38, اور p-p38 راتوں رات 4 ڈگری پر 1: 1000 اور GAPDH 1: 300 پر جھلیوں کے ساتھ انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ جھلیوں کو TBS-T سے دھویا گیا اور 1:3000 پر 1 گھنٹہ کے لیے بکری کے اینٹی خرگوش سیکنڈری اینٹی باڈی سے لگایا گیا۔ بائنڈنگ اینٹی باڈی کا پتہ الیکٹرو کیمیلومینیسینس (ECL) کے ذریعے کیا گیا تھا۔

2.2.10 شماریاتی تجزیہ.

ایس پی ایس ایس 22۔ Mann-Whitney U ٹیسٹ نان پیرامیٹرک ڈیٹا کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ p < 0:05="" تمام="" معاملات="" میں="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" ∗∗∗p="">< 0:001،="" ∗∗p=""><0:01، اور="" ∗p=""><>

3. نتائج

3.1 TCMs کے جامع اجزاء۔

بین-کاو-گینگ-مو میں اور لوک نسخوں میں درج چودہ TCMs، اینٹی پگمنٹیشن اثرات کے ساتھ مطالعہ کیا گیا۔ 14 TCMs میں سے کل 372 چینی ادویات کے اجزاء TCMSP ڈیٹا بیس (ضمنی جدول S1) سے حاصل کیے گئے۔

3.2 ٹارگٹ جینز TCMs اور متعلقہ پگمنٹیشن جینز کے ذریعے ریگولیٹ ہوتے ہیں۔

TCMSP ڈیٹا بیس میں ہدف کی پیشن گوئی کے نظام کے مطابق، 14 TCMs سے کل 834 ٹارگٹ جینز حاصل کیے گئے۔ سے متعلق کل 9431 جینزرنگتGeneCardsdatabase سے بازیافت کیے گئے، جن میں سے 6180 کو منتخب کیا گیا اور ان کا متعلقہ سکور> 1 تھا۔

3.3 14 TCMs اور Disease-compound-TargetNetwork کی درجہ بندی۔

Cytoscape سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے ہر TCM اور پگمنٹیشن سے متعلق جینز کے ریگولیٹری جینز کو ملایا اور ممکنہ فعال اجزاء اور مشترکہ ہدف والے جین حاصل کیے۔ اگلا، TCM اور کے درمیان بیماری کمپاؤنڈ ہدف نیٹ ورکرنگتتعمیر کیا گیا تھا. اس کی بنیاد پر، ہم نے ہر ایک فعال اجزاء کی اوسط "ڈگری" حاصل کی اور TCMs کو ان کے اسکور کے مطابق درجہ دیا۔ درجہ بندی کے اسکور کے مطابق، سرفہرست 5 جڑی بوٹیاں Fructus Ligustri Lucidi، Hedysarum multijugum Maxim.، Ampelopsis japonica، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، اور Paeoniae Radix Alba (شکل 2(a)) تھیں۔ ٹاپ 5 TCMs کے 220 ٹارگٹ جینز کے KEGG تجزیہ کے ذریعے، 19.3 فیصد جینز PI3K-Akt سگنلنگ پاتھ وے سے بھرپور تھے، 13.6 فیصد جینز TNF سگنلنگ پاتھ وے سے متعلق تھے، اور تقریباً 12.3 فیصد جینز کا تعلق PI3K-Akt سگنلنگ پاتھ وے سے تھا۔ 12}}۔ اس کے علاوہ، MAPK پاتھ وے میں 37 جینز شامل تھے اور HIF-1 پاتھ وے میں 28 جینز شامل تھے۔ یہ راستے میلانین میٹابولزم اور جلد کی تصویر کشی کے ضابطے سے قریبی تعلق رکھتے ہیں۔ سرفہرست 20 افزودہ سگنلنگ راستوں میں، سوزش سے متعلق راستے ان میں سے ایک چوتھائی کے لیے ہیں (شکل 2(c))۔ اعداد و شمار 2(d)–2(h) بالترتیب Fructus Ligustri Lucidi، Hedysarum multijugum Maxim.، Ampelopsis japonica، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، Paeoniae Radix Alba، اور pigmentation کے درمیان بیماری کے کمپاؤنڈ ٹارگٹ نیٹ ورک کو ظاہر کرتے ہیں۔ سرفہرست پانچ ٹی سی ایم میں اجزاء کے وین ڈایاگرام کے مطابق، ہم نے پایا کہ چار ٹی سی ایم میں سیٹوگلوسائیڈ اور بیٹا سیٹوسٹرول (شکل 2(b)، ضمنی جدول S2) شامل ہیں۔

3.4 پگمنٹیشن کو روکنے میں ممکنہ فعال اجزاء۔

بیماری-کمپاؤنڈ-ٹارگٹ نیٹ ورک کے مطابق، 148 اجزاء سے متعلقرنگت14TCMs سے حاصل کیے گئے تھے۔ لٹریچر کی تلاش کے ذریعے، 148 اجزاء میں سے 25 کو میلانوجینیسیس کو روکنے کی اطلاع ملی۔ چار فعال اجزاء پودوں کے نچوڑ کے طور پر رپورٹ کیے گئے ہیں جو میلانوجینیسیس کو روکتے ہیں۔ چودہ فعال اجزاء کا مطالعہ کیا گیا، اور ان کے مشتقات کو رنگت کو منظم کرنے کی اطلاع دی گئی۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ melanogenesis کو فروغ دینے کے لیے چار اجزاء دکھائے گئے، جبکہ melanogenesis کو ریگولیٹ کرنے میں چھ اجزاء کا طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے۔ بقیہ 95 ممکنہ چینی ادویاتی اجزاء ابھی تک روغن کے ضابطے کے لیے تلاش نہیں کیے گئے ہیں۔ ان اجزاء کے بارے میں تفصیلی معلومات ضمنی جدول S3 میں فراہم کی گئی ہیں۔

3.5 میلانوجینیسیس پر سیٹوگلوسائیڈ کے وٹرو اور ان ویوو اثرات۔

مندرجہ بالا اسکریننگ کے عمل کے بعد، ہم نے پایا کہ اوپر والے TCM میں چار TCMs میں sitogluside اور -sitosterol شامل ہیں۔ -Sitosterol کو inhibitalpha-melanocyte-stimulating hormone (-MSH)، B16F10 میلانوما خلیات [43] میں p38 سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے میلانوجینیسیس کو متحرک کرنے کی اطلاع دی گئی ہے۔ تاہم، سیٹوگلوسائیڈ اور اس کے مخصوص طریقہ کار کے اینٹی پگمنٹیشن اثرات کی اطلاع نہیں دی گئی ہے۔ لہذا، ہم نے ان مطالعات کے لئے منشیات کے امیدوار کے طور پر sitogluside کا انتخاب کیا۔ CCK8 پرکھ MNT1 اور B16F0 خلیات میں sitogluside کے ممکنہ زہریلے ارتکاز کو تلاش کرنے کے لیے انجام دیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سیٹوگلوسائیڈ کا 400 μM سے کم ارتکاز پر خلیات (اعداد و شمار 3(a) اور 3(b)) کے پھیلاؤ پر کوئی واضح اثر نہیں تھا۔ 25، 50، 100، اور 200 μMsitogluside کا استعمال کرتے ہوئے میلانین سٹیننگ نے ظاہر کیا کہ سیٹوگلوسائیڈ کو کم کر سکتا ہے۔ MNT1 اور B16F0 خلیوں میں میلانین کا مواد خوراک پر منحصر انداز میں (شکل 3(c))۔ مزید برآں، sitogluside علاج نمایاں طور پر روکتا جلدرنگتزیبرا فش میں وقت اور خوراک پر منحصر انداز میں (شکل 3(d))۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ سیٹوگلوسائڈ نے وٹرو اور ویوو میں میلانوجینیسیس کو روکا۔

3.6۔ TYR اظہار پر Sitogluside کے اثرات۔

پچھلے نتائج سے، سیٹوگلوسائڈ مؤثر طریقے سے میلانین کے مواد کو کم کر سکتا ہے، لیکن یہ اس عمل کو کس طرح منظم کرتا ہے ابھی تک نامعلوم ہے اور اس لیے دلچسپی ہے۔ پروٹین کی سطح پر میلانوجینیسیس سے متعلق جینز (TYR،MITF، TRP1، TRP2، اور RAB27A) کے اظہار کا پتہ لگانے کے لیے مغربی بلوٹنگ کی گئی تھی۔ تجزیوں کے نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ TYR اظہار کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا اور MITF اور TRP1 کے اظہار کو اعتدال پسندی سے نیچے رکھنے کے بعد کیا گیا تھا۔ (شکل 4(a))۔ چونکہ MAPK اور PKA TYR کو ریگولیٹ کرنے والے کلیدی اپ اسٹریم سگنلنگ پاتھ ویز ہیں، اس لیے ہم نے ان دونوں راستوں میں کلیدی پروٹینز میں ہونے والی تبدیلیوں کو مزید دریافت کیا۔ MNT1 اور B16F0 سیلز کا 2 دن تک سیٹوگلوسائیڈ کے ساتھ علاج کرنے کے بعد، ERK اور P38 کی فاسفوریلیشن کی سطح غیر معمولی طور پر کم ہوگئی۔ ، جبکہ CREB، ERK، JNK، andp38 پروٹین کی کل سطحوں یا JNK اور CREB (شکل 4(b)، شکل S1A) کی فاسفوریلیشن کی سطحوں میں کوئی خاص تبدیلیاں نہیں ہوئیں۔ CCK8 تجربے کے نتائج کے مطابق، ہم نے پایا کہ 100 ng/mL سے کم PMA دونوں خلیات (Figure S1B) کے لیے زہریلا نہیں ہے، اور 25 ng/mL PMA واضح طور پر ERK کے فاسفوریلیشن کی سطح کو بڑھا سکتا ہے۔ ERK کی فاسفوریلیشن کی سطح 4 گھنٹے کے بعد آہستہ آہستہ کم ہوتی گئی (شکل S1C-D)۔ Fontana-Masson melaninstaining کے ذریعے، ہم نے محسوس کیا کہ PMA MNT1 اور B16F0 خلیات کے تھیملینین مواد کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے۔ ویسٹرن بلوٹنگ کے نتائج یہ بھی بتاتے ہیں کہ PMA ERK کے فاسفوریلیشن لیول کو اپ گریڈ کر سکتا ہے، اور سیٹوگلوسائیڈ PMA کے ذریعے اپ ریگولیٹ شدہ ERK کے فاسفوریلیشن لیول کو کم کر سکتا ہے۔ ERK کے فاسفوریلیشن کی سطح کو روک کر اور پروٹین کی سطح کو کم کر کےTYR، سیٹوگلوسائیڈ پی ایم اے (فگرز 4(سی) اور 4(ای)، فگر ایس 2 اے سے بڑھے ہوئے میلانین مواد کو کم کرتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، ہم نے پایا کہ anisomycin ہے اسی طرح کے نتائج. 8 nM سے کم Anisomycin دونوں خلیوں کے لیے زہریلا نہیں ہے، اور 2 nM anisomycin p38 کی فاسفوریلیشن کی سطح کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے۔ 8 گھنٹے میں، p38 کی فاسفوریلیشن لیول اب بھی زیادہ ہے (فگر S1B، Figure S1E-F)۔ Fontana-Masson melaninstaining اور western blotting کے نتائج یہ بھی بتاتے ہیں کہ sitoglusidecan p38 کے فاسفوریلیشن کی سطح کو انیسومائسن کے ذریعے اپ ریگولیٹ کرتا ہے، TYR پروٹین کے مواد کو کم کرتا ہے، اور روکتا ہے۔رنگت(اعداد و شمار 4(d) اور 4(f)، Figure S2B۔ اس لیے، سیٹوگلوسائیڈ ERK/MAPK اور p38/MAPK راستوں کو روک کر TYR اظہار کو کم کر سکتا ہے۔ تاہم، وہ طریقہ کار جس کے ذریعے سیٹوگلوسائیڈ ان سگنلنگ راستوں کو روکتا ہے، ابھی تک واضح نہیں ہے۔ ہم نے ان سگنلنگ پاتھ ویز کے اپ اسٹریم میمبرین ریسیپٹرز کا سراغ لگایا اور ڈاون اسٹریم راستوں کو ریگولیٹ کرنے کے طریقہ کار کو دریافت کرنے کے لیے مالیکیولر ڈاکنگ کا استعمال کیا۔ سیٹوگلوسائیڈ اور چھ جھلی ریسیپٹرز کے درمیان پابند توانائیاں، یعنی اوپیئڈ یو، میلانوکارٹن 1، اسٹیم سیل فیکٹر، اینڈوتھیلین بی، ایڈرینرجک، اور پروسٹگینڈن ریسیپٹرز -7.8،-5.8، {{9} تھے۔ }}.5، -5.4، -3.4، اور 0 کال/مول، بالترتیب۔ مالیکیولر ڈاکنگ کے ذریعے، ہم نے پایا کہ چھ جھلیوں کے رسیپٹرز میں سے، سیٹوگلوسائیڈ کی اوپیئڈ یو، میلانوکارٹن 1، اور اسٹیم سیل گروتھ فیکٹر ریسیپٹرز (شکل 4(جی)) کے ساتھ بہت زیادہ وابستگی تھی۔ ہم قیاس کرتے ہیں کہ سیٹوگلوسائڈمے ERK/MAPK اور p38/MAPK کے راستوں کو پہلے بیان کردہ جھلی کے رسیپٹرز کے ساتھ پابند کر کے روکتا ہے، اس طرح TYR اظہار کو کم کر دیتا ہے۔

3.7۔ TYR سرگرمی پر Sitogluside کا اثر۔

چونکہTYRمیلانین کی ترکیب میں کلیدی انزائم ہے، یہ میلانوجینیسیس کو روکنے کا سب سے نمایاں ہدف ہے۔ زیادہ تر تجارتی طور پر دستیاب کاسمیٹکس یا جلد کو روشن کرنے والے ایجنٹس، جیسے HQ، arbutin، اور kojic acid، TYR روکنے والے ہیں۔ ہم نے sitogluside استعمال کیا اور کچھ طبی طور پر استعمال کیاجلد کو سفید کرناایجنٹ (اربوٹین، نیکوٹینامائڈ، کوجک ایسڈ، ایچ کیو، اور ایسکوربک ایسڈ) TYR کے ساتھ مالیکیولر ڈاکنگ کرنے کے لیے۔ سائٹوگلوسائیڈ اور مذکورہ بالا ایجنٹوں کے درمیان تفصیلی تعاملTYRشکل 5(a) میں دکھایا گیا ہے۔ ان چھ مرکبات کی پابند توانائیاں تھیں -6.2، -6.4، -5.6، -5.7، -5.4، اور {{ 11}}.4 kcal/mol، بالترتیب۔ عام طور پر یہ خیال کیا جاتا ہے کہ جب وابستگی کی توانائی -4 ہوتی ہے، تو یہ ایک پابند قوت کی نشاندہی کرتی ہے، اور جب یہ -7 سے زیادہ یا اس کے برابر ہوتی ہے۔{15}}، یہ ایک مضبوط پابند قوت کی نشاندہی کرتی ہے۔ سیٹوگلو سائیڈ تعلق کے لحاظ سے دوسرے نمبر پر ہے، جو arbutin سے قدرے کمزور ہے، نسبتاً شاندار امتزاج کی صلاحیت کا مظاہرہ کرتا ہے۔

اسی وقت، کوجک ایسڈ کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کرتے ہوئے، TYR کی سرگرمی کا پتہ لگانے کے لیے L-DOPA کی تبدیلی کا تجربہ استعمال کیا گیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Sitogluside نے MNT1 اور B16F0 خلیوں میں TYR سرگرمی کو ارتکاز پر منحصر انداز میں روکا، اور اعلی ارتکاز گروپ (200 μM) نے 200 μM کوجک کے ذریعہ دکھائے جانے والے مساوی روک تھام کا اثر دکھایا۔ تیزاب (اعداد و شمار 5(b) اور 5(c))۔ اس کے علاوہ، TYR تحقیقات کے تجربے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ جیسے جیسے سیٹوگلوسائیڈ کا ارتکاز بڑھتا گیا، خلیات میں فلوروسینس کی شدت بتدریج کم ہوتی گئی، اور اعلی ارتکاز والے گروپ کی فلوروسینس کی شدت MNT1 اور B16F0 خلیات میں 200 μM کوجک ایسڈ کے قریب تھی (شکل 5)، شکل S2C)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ سیٹوگلوسائیڈ مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔TYRMNT1 اور B16F0 سیلز میں سرگرمی۔ مزید برآں، ہم قیاس کرتے ہیں کہ سیٹوگلوسائیڈ، آسا قدرتی سٹیرول کمپاؤنڈ، براہ راست خلیہ کی جھلی میں داخل ہو سکتا ہے اور TYR سے جڑ سکتا ہے اور اس کی سرگرمی کو روک سکتا ہے، اس طرح میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔

4. بحث

اس مطالعہ میں، ہم نے نیٹ ورک فارماکولوجی کا استعمال کیا تاکہ ممکنہ طریقہ کار کو تلاش کیا جا سکے۔جلد کو سفید کرنا14 TCMs میں پائے جانے والے اجزا، جو بین-کاو-گینگ-مو میں دستاویزی ہیں اور روک تھام کرنے والے نسخےرنگت. مطالعہ نے ایک جدید طریقہ بھی تجویز کیا جو جڑی بوٹیوں کی ممکنہ تاثیر کا اندازہ کرنے کے لیے ہر ایک فعال جزو کے اوسط "ڈگری" ٹاپولوجیکل پیرامیٹر کا استعمال کرتا ہے۔ اوسط "ڈگری" کے مطابق، Fructus Ligustri Lucidi، Hedysarummultijugum Maxim.، Ampelopsis japonica، PseudobulbusCremastrae Seu Pleiones، اور Paeoniae Radix Alba کو منتخب کیا گیا تھا، اور KEGG کی افزودگی کے تجزیے کے ذریعے ان جینز کے پانچ فیصد کو ٹی سی ایم کے ذریعے ریگولیٹ کیا گیا تھا، جو کہ 5 فیصد تک غیر منقولہ تھے۔ سگنلنگ پاتھ ویز سوزش سے متعلق تھے، بشمول IL-17, TNF, HIF-1, PI3K-Akt, اور MAPK سگنلنگ پاتھ ویز۔

حال ہی میں، میلانوجینیسیس سے متعلقہ سگنلنگ پاتھ کو چالو کرنے یا روکنے کے لیے کئی قسم کے سوزشی ثالث دکھائے گئے ہیں جو جلد کو فروغ دیتے یا روکتے ہیں۔رنگت[6]۔ incultured B16F10 میلانوما خلیات، TNF- کے اظہار کو کم کر دیاTYRاور TRP1 اور TYR سرگرمی خوراک پر منحصر انداز میں [44]۔ IL-17 اور TNF- melanocytes میں melanogenesis سے متعلق جین کے اظہار کو کم کر سکتے ہیں، اور IL-17 میلانوجینیسیس پر TNF- کے روکنے والے اثر کو نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں۔ etanercept (اینٹی TNF) کے ساتھ علاج کے بعد، psoriasis کے مریضوں کی جلد کے گھاووں میں melanogenesis سے متعلق جینز کو نمایاں طور پر الگ کر دیا گیا تھا[45]۔ HIF-1، ایک طاقتور ٹرانسکرپشن عنصر جو اشتعال انگیز ردعمل کو کنٹرول کرتا ہے، کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ وہ IL-17 اور TNF- [46–48] جیسے عوامل کے ضابطے میں شامل ہے۔ لہذا، HIF-1 کا سوزش کو متاثر کرکے میلانوجینیسیس کے ضابطے میں حصہ لینے کا امکان ہے۔ دیگر سائٹوکائنز جیسے IL-18، IL-33، GM-CSF، اور IL-1 PKA، MAPK، یا دیگر سگنلنگ پاتھ ویز کو چالو کرکے میلانوجینیسیس کو فروغ دے سکتے ہیں، جبکہ IFN-، IL-1، IL-4، اور IL-6 STAT1، NF-κB کو روک کر میلانوجینیسیس کو کم کرتے ہیں، اور JAK2-STAT6 سگنلنگ پاتھ ویز [6]۔ ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ سرفہرست پانچ TCMs (Fructus Ligustri Lucidi، Hedysarum multijugum Maxim.، Ampelopsis japonica، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، اور Paeoniae Radix Alba) ایک اینٹی پگمنٹیشن اثر ڈال سکتے ہیں بنیادی طور پر سوزش کے راستے کے ذریعے۔ پچھلے لٹریچر میں یہ بھی بتایا گیا ہے کہ ان ٹاپ پانچ ٹی سی ایم میں طاقتور سوزش اور اینٹی ایجنگ اثرات ہیں [49، 50]۔ اس سے ہمارے اس قیاس کی بھی تائید ہوتی ہے کہ TCMs پوسٹ انفلامیٹری پگمنٹیشن میں غیر معمولی کردار ادا کر سکتے ہیں۔

14 TCMs میں پائے جانے والے 148 اجزاء کے لٹریچر کا مطالعہ کرتے ہوئے، ہم نے یہ بھی پایا کہ رپورٹ ہونے والے 35 اجزاء میں سے، ان میں سے تقریباً 70 فیصد میں میلانین کے مواد کو کم کرنے یا TYR کی سرگرمی کو روکنے کی تصدیق ہوئی۔ یہ نہ صرف اس بات کی تصدیق کرتا ہے کہ قدیم کتابوں میں جلد کو سفید کرنے والے نسخوں کے ریکارڈ زیادہ تر قابل اعتماد ہیں بلکہ یہ بھی ظاہر کرتا ہے کہ قدیم ادب کا حوالہ TCMs کا علم حاصل کرنے کا ایک قابل اعتماد طریقہ ہے۔ ابھی بھی 95 مرکبات موجود ہیں جن کی تلاش نہیں کی گئی ہے، جو مزاحمت کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔رنگت. سب سے اوپر پانچ TCMs کے وین ڈایاگرام کے تجزیے کے ذریعے، 13 عام اجزاء حاصل کیے گئے۔ ان میں سے، وٹرو تجربات میں اس بات کی تصدیق ہوئی کہ ڈیڈزین، روٹین، اور (پلس) -کیٹیچن میلانین کے مواد کو کم کر سکتے ہیں آسموٹک تناؤ کو دلانے اور PI3 کناز کے راستے کو روک کر ، اس طرح میلانوجینیسیس میں مداخلت کرتا ہے [54]۔ کوئرسٹین آکسیڈیٹیو تناؤ سے متاثرہ میلانوجینیسیس کو کم کرتا ہے [55]۔ اس کے علاوہ، کیمیائی اور جسمانی طریقوں جیسے سپیکٹروسکوپک اور ساخت کی سرگرمی کے تجزیوں نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ lupeoland kaempferol روک سکتا ہے۔TYRاور melanogenesis کو کم کریں[56, 57]۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ نیٹ ورک فارماکولوجی شاید کھودنے کا ایک قابل عمل طریقہ ہے۔سفید کرنااجزاء ٹاپ پانچ ٹی سی ایم میں چار ٹی سی ایم میں سیٹوگلوسائیڈ موجود ہے، اور اس بارے میں کوئی رپورٹ نہیں ہے کہ آیا سیٹوگلوسائیڈ پگمنٹیشن یا اس سے متعلقہ میکانزم کو منظم کرتا ہے۔ لہذا، ہم نے ان مطالعات کے لیے سیٹوگلوسائیڈ کا انتخاب کیا۔

Sitogluside، ایک sterol glycoside جو بڑے پیمانے پر پودے لگانے میں موجود ہے، کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ وہ اینٹی ٹیومر، اینٹی آکسیڈیٹیو، اور نیورو پروٹیکٹو اثرات [58-60] استعمال کرتا ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے دریافت کیا کہ سیٹوگلوسائیڈ نے وٹرو اور ویوو میں میلانین مواد کو مؤثر طریقے سے کم کیا۔ بعد کے تجربات نے ثابت کیا کہ یہ TYR کے اظہار کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے۔ کوجک ایسڈ کو ایک مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا، اور یہ میلانوجینیسیس سے متعلق جینز جیسے TYR، MITF، اور TYRP1 کی پروٹین کی سطح کو بھی روک سکتا ہے -MSH محرک کے تحت، جس کی رپورٹ جیون ایٹ ال نے کی تھی۔ [61]۔ خارجی محرک کی عدم موجودگی کے پیش نظر، 200 μM کوجک ایسڈ نے ہمارے مطالعے میں جین کے اظہار پر صرف اعتدال پسند روک تھام کے اثرات مرتب کیے تھے، لیکن چونکہ کوجیک ایسڈ میں ٹائروسینیز کی زبردست روک تھام کی سرگرمی ہے، اس لیے ہم اب بھی اس مطالعہ میں اسے مثبت کنٹرول کا استعمال کرتے ہیں۔ TYR اظہار بالترتیب MAPKor PKA راستوں کے ذریعہ بالواسطہ یا بالواسطہ طور پر ریگولیٹ ہونے کی اطلاع دی گئی تھی۔ اجزاء کی بڑھتی ہوئی تعداد کی تصدیق کی گئی ہے کہ MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو روک کر جلد پر سفیدی کا اثر ڈالتا ہے۔ مثال کے طور پر، فارجیسن کا اظہارTYRP38/MAPK راستے کو روک کر [62]۔ Ganoderma lucidum polysaccharides MAPK کے راستے کو کم کرکے UVB کی حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کے خلاف مزاحمت کر سکتے ہیں [63]۔ ہمارے مطالعے سے پتا چلا ہے کہ 200 μM کے ارتکاز میں سیٹوگلوسائیڈ میں ERK/-MAPK اور P38/MAPK سگنلنگ راستوں کو روک کر TYR اظہار کو کم کرنے کی صلاحیت تھی۔ یہ MAPK پاتھ ویز [64] اور سیٹوگلوسائیڈ کے اپ اسٹریم میمبرین ریسیپٹرز کے درمیان مالیکیولر ڈاکنگ کے ذریعے رپورٹ کیا گیا ہے۔ ہم نے پایا کہ سیٹوگلوسائیڈ اوپیئڈ یو، میلانوکارٹن 1، اور سٹیم سیل گروتھ فیکٹر ریسیپٹرز سے مضبوطی سے جڑا ہوا ہے۔ لہذا، ہم قیاس کرتے ہیں کہ سیٹوگلوسائیڈ ان جھلی ریسیپٹرز کے ساتھ تعامل کر سکتا ہے، ERK/MAPKand P38/MAPK سگنلنگ پاتھ ویز کو روک سکتا ہے، اور TYR کے اظہار کو کم کر سکتا ہے۔

چونکہ TYR melanocytes میں melanin particles کی ترکیب میں کلیدی انزائم ہے، TYR کی کیٹلیٹک سائٹ کی سرگرمی کو روکنا جلد کو کم کرنے کے لیے ضروری ہے۔رنگت[65]۔ مارکیٹ میں جلد کو روشن کرنے والے بہت سے ایجنٹ TYRactivity inhibitors ہیں، جیسے HQ، arbutin، اور kojic acid۔ اس مطالعہ میں، ہم نے سیٹوگلوسائیڈ کے پابند اثرات کو دریافت کرنے کے لیے مالیکیولر ڈاکنگ کا استعمال کیا اور پانچ عامجلد کو سفید کرنافعال اجزاء (اربوٹین، نیکوٹینامائڈ، کوجک ایسڈ، ایچ کیو، اینڈاسکوربک ایسڈ) [66] کے ساتھTYR. نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سیٹوگلوسائڈ کا TYR کے ساتھ مضبوط پابند تعلق تھا، کمزور تھاناربوٹین، لیکن کوجک ایسڈ، نیکوٹینامائڈ، ایچ کیو، اور ایسکوربک ایسڈ سے زیادہ مضبوط۔ Arbutin HQ کا ایک پروڈکٹ ہے اور ایک قدرتی پروڈکٹ ہے جو TYR کو روکنے والے میلاننبی کی ترکیب کو کم یا روک سکتا ہے۔ تاہم، arbutin کی قدرتی شکل اسکیمیکل طور پر غیر مستحکم ہے اور HQ میں تبدیل ہو سکتی ہے، جو ہڈیوں کے گودے میں ممکنہ زہریلا ہونے کے ساتھ بینزین میٹابولائٹس میں اتپریرک اور میٹابولائز ہوتا ہے [67]۔ کوجک ایسڈ کاسمیٹکس کا استعمال محدود ہے کیونکہ اس کے سرطان پیدا ہونے اور ذخیرہ کرنے کے دوران عدم استحکام کی وجہ سے [68]۔ لہذا، سیٹوگلوسائڈ، ایک قدرتی سٹیرول مرکب جو مختلف قسم کے پودوں سے حاصل کیا جاتا ہے، توقع کی جاتی ہے کہ وہ جلد کو روشن کرنے والے ایک طاقتور ایجنٹ کے طور پر کام کرے گا۔ تاہم، DMSO میں sitogluside کی حل پذیری کم ہے، جو کہ اس قدرتی جزو کی بھی کمی ہے۔ بعد میں تجرباتی توثیق سے پتہ چلا کہ سیٹوگلوسائیڈ MNT1 اور B16F0 سیل لائنوں میں محفوظ ہے، اور کم ارتکاز والے گروپ نے TYR کی سرگرمی پر پہلے سے روکے ہوئے اثرات مرتب کیے تھے، جب کہ زیادہ ارتکاز والے گروپ کا وہی اثر تھا جو کوجک ایسڈ کی یکساں ارتکاز تھا۔ لہذا، سائٹوگلوسائیڈ کو علاج کے طور پر جلد کو سفید کرنے والے ریگولیٹر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، جو نہ صرف TYR کے اظہار کو کم کرتا ہے بلکہ اس کی سرگرمی کو بھی روکتا ہے (شکل 6)۔

5. نتائج

نیٹ ورک فارماکولوجی شاید قدرتی جلد کی رنگت کو کم کرنے والے فعال اجزاء اور ان کے ممکنہ میکانزم کی دریافت کے لیے ایک مؤثر ذریعہ ہے۔ Fructus LigustriLucidi، Hedysarum multijugum maxim.، Ampelopsis japonica، Pseudobulbus Cremastrae Seu Pleiones، اور PaeoniaeRadix Alba میں صلاحیت موجود ہے۔جلد کو سفید کرناخصوصیات اور روک سکتے ہیںرنگتسوزش کو منظم کرکے۔ Sitogluside ایک ناول ہے۔جلد کو سفید کرنادوہری ریگولیٹری اثرات کے ساتھ فعال جزو، یعنی۔ روکناTYRاظہار اور سرگرمی

cistanche گولیاں