جلد کی بڑھتی ہوئی عمر کو روکنے میں سرخ اور سفید شراب کے عرق کے کردار کی نشاندہی: فائبروبلسٹ رویے پر اینٹی آکسیڈنٹس کے اثرات

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ:ڈرمل فائبرو بلاسٹس بہت سے پروٹینوں کی رطوبت میں اہم کردار ادا کرتے ہیں، بشمول کولیجن، جلد کے افعال کو محفوظ رکھتے ہیں۔ آزاد ریڈیکلز جلد کی عمر بڑھنے اور مختلف سیلولر اجزاء کو پہنچنے والے نقصان میں ملوث ہیں۔ رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی مقدار اور قدرتی اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کے درمیان عدم توازن جلد کے ہومیوسٹاسس کو منفی طور پر متاثر کرتا ہے۔ قدرتی مرکبات حال ہی میں بافتوں کی تخلیق نو میں ایک ممکنہ اینٹی ایجنگ ٹول کے طور پر ابھرے ہیں۔ موجودہ مقالے میں، ہم نے سفید اور سرخ شرابوں کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا جائزہ لیا، ان کے ممکنہ استعمال پر غور کرتے ہوئے، خام مال کے طور پر، اینٹی ایجنگ خصوصیات کے ساتھ کاسمیٹک مصنوعات کی تشکیل کے لیے۔ ہم نے ایک ایسے طریقہ کا مطالعہ کیا جو الکحل کے الکحل والے حصے کو ہٹانے کی اجازت دیتا ہے اور LC-MS تجزیہ کے ذریعہ ان کی ساخت کا تعین کرتا ہے۔ پھر ہم نے 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT ) پرکھ، اور تناؤ کے حالات میں کیٹالیس سرگرمی ٹیسٹ کے ذریعہ ان کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔ آخر میں، ہم نے -galactosidase colorimetric پرکھ کے ذریعے ان کی عمر مخالف صلاحیت کا جائزہ لیا۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ شراب کے عرق ایک قابل ذکر اینٹی آکسیڈنٹ اور اینٹی ایجنگ سرگرمی کی نمائش کرتے ہیں، خاص طور پر ایسے خلیات پر جو تناؤ کی وجہ سے ظاہر ہوتے ہیں۔ یہ خصوصیات تجویز کر سکتی ہیں کہ جلد کی تخلیق نو کے لیے کاسمیٹک مصنوعات کے طور پر ان کا استعمال ممکن ہے۔

مطلوبہ الفاظ:سیل پھیلاؤ؛ اینٹی آکسائڈنٹ؛ سیل سنسنی؛ حیاتیاتی مالیکیولز؛ جلد کی عمر بڑھنے؛ اوکسیڈیٹیو تناؤ

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

جلد جسم کا سب سے وسیع عضو ہے اور اس کے متعدد افعال ہوتے ہیں، جو بنیادی بافتوں کو کیمیائی اور مکینیکل توہین، UV تابکاری، آزاد ریڈیکلز اور انفیکشن سے بچاتے ہیں۔ یہ تھرمورگولیشن میں ایک کردار ادا کرتا ہے، اینڈوکرائن اور بائیو کیمیکل افعال رکھتا ہے، اور زین بائیوٹکس (منشیات، زہر، کاسمیٹکس) [1-3] کے اطلاق اور/یا جذب کا عضو ہے۔ ڈرمس میں، ایلسٹن ریشے اور کولیجن فائبر جلد کی صحیح لچک کو یقینی بناتے ہیں۔ عمر، ہارمونز، اور الٹرا وائلٹ شعاعوں کے نقصان دہ اثرات جلد کی موٹائی اور لچک کو کم کر سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں جھریاں پڑ جاتی ہیں اور جلد کا رنگ ختم ہو جاتا ہے[4,5]۔ یہ پہلے سے ہی معلوم ہے کہ جلد کی عمر بڑھنے سے جلد کی رکاوٹ کے کام میں سمجھوتہ ہوتا ہے، جس کے نتیجے میں خشکی ظاہر ہوتی ہے اور ماحولیاتی حملہ آوروں کے لیے حساسیت پیدا ہوتی ہے [6]۔ رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS)، جو ایروبک میٹابولزم کے دوران الیکٹران کے نقصان کے نتیجے میں یا ماحولیاتی عوامل کے سامنے آنے کے بعد، غیر مستحکم انواع ہیں جو مختلف بائیو مالیکیولز کو نقصان پہنچا سکتی ہیں [7,8]۔ ان کے اثر کا مقابلہ کرنے کے لیے، جسم میں قدرتی اینٹی آکسیڈینٹ دفاع ROS کو جسمانی طور پر قابل قبول سطحوں کے اندر رکھنے کے قابل ہیں۔ ایسا لگتا ہے، درحقیقت، ROS، اگر کنٹرول شدہ مقدار میں موجود ہو، تو اس کا ایک جسمانی عمل بھی ہوتا ہے، جو خلیوں کے درمیان سگنل مالیکیولز کے طور پر کام کرتا ہے [9,10]۔چنگیز خانROS اور اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کے درمیان یہ عدم توازن، جیسے کیٹالیس، گلوٹاتھیون ریڈکٹیس، اور سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز، پروٹینز، لپڈز اور ڈی این اے کو نقصان پہنچاتا ہے [11]، اس طرح کیراٹینوسائٹس اور فائبرو بلاسٹس کے انٹرا سیلولر سگنلنگ راستوں میں منفی طور پر مداخلت کرتا ہے اور ایم ایم پی کو تبدیل کرتا ہے۔ (میٹرکس میٹالوپروٹیناسز)، پروکولجن، اور پرو سوزش والی سائٹوکائنز [12,13]۔ فینولک مرکبات جیسے resveratrol، hydroxytyrosol، اور epigallocatechin-3-gallate، جو سبزیوں، پھلوں اور مشتقات میں موجود ہیں، فنگس، بیکٹیریا اور وائرس کے خلاف اہم دفاعی مالیکیولز ہیں [14]۔ پولی فینولز کے فائدہ مند اثرات — جو کہ شراب میں بڑے پیمانے پر موجود ہیں— نے حالیہ برسوں میں دواسازی اور کاسمیٹک صنعت میں کافی توجہ مبذول کرائی ہے[15,16]۔ پولیفینول کی کھپت شدید اور دائمی بیماریوں میں حفاظتی اثرات ادا کر سکتی ہے، اور میٹابولزم اور خلیوں کے پھیلاؤ کے ضابطے میں [17]۔ فینولک مرکبات کے اخراج اور خصوصیت کے لیے ایک واحد موثر طریقہ کار کی ترقی میں بہت سی حدود ہیں، بنیادی طور پر فینولک مرکبات کی ساختی تنوع اور دوسرے سیلولر اجزاء کے ساتھ ان کے تعامل کی وجہ سے[18,19]۔ جدید سبز نکالنے کی تکنیک اور ہائی ریزولوشن ماس سپیکٹرو میٹری (LC-ESI-LTQ-Orbitrap-MS) ان بائیو ایکٹیو مالیکیولز کے انتظام کے لیے امید افزا طریقوں کی نمائندگی کرتی ہیں [20]۔ لہذا، ہم نے ایک سستے، لچکدار، مضبوط اور موثر طریقہ کا مطالعہ کیا جو الکحل کے الکحل والے حصے کو ہٹانے کی اجازت دے گا، جو کاسمیٹک مصنوعات کے طور پر قابل استعمال ہے۔ شراب کے استعمال سے منسلک متعدد صحت کے اثرات ایک طویل عرصے سے معلوم ہیں، اور خاص طور پر، اینٹی آکسیڈینٹ پولی فینولک مرکبات کا اعلیٰ مواد اسے زیادہ آکسیڈیٹیو تناؤ والی بیماریوں کے علاج میں مفید بناتا ہے آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف جلد کے اینٹی آکسیڈینٹ نظام کی مدد کرسکتا ہے اور اسے طویل مدتی تصویر کی عمر سے بچا سکتا ہے [23,24]۔ اس تناظر میں، موجودہ مقالے میں، ہمارا مقصد ایک مضبوط تناؤ والے واقعے کے سامنے آنے والے خلیوں میں سرخ اور سفید شراب کے عرق کے اینٹی آکسیڈینٹ اثرات کا جائزہ لینا تھا، تاکہ خلیے کی سنسنی کو روکنے کے لیے، اینٹی ایجنگ کے ساتھ مختلف ٹاپیکل فارمولیشنز میں ان کی ممکنہ شمولیت کا مشورہ دیا جائے۔ خصوصیات، بالغ اور خراب جلد کے علاج کے لئے.

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

2. مواد اور طریقہ

اس تحقیق میں استعمال ہونے والی سرخ اور سفید شرابیں Buio تھیں، جن میں کنٹرولڈ اوریجن کا فرق تھا، جو کینٹینا میسا، سارڈیگنا، اور جیونکو کے ذریعہ تیار کردہ کینٹینا میسا، سارڈیگنا، اور گیونکو سے حاصل کیا گیا تھا، جسے ورمینٹینو انگور سے حاصل کیا گیا تھا۔

وٹرو تجربات کے لیے، ان لائن انسانی جلد کے فائبرو بلاسٹس (HFF1) (ATCC، Manassas، VA، USA) کو گزرنے 5 پر استعمال کیا گیا۔ خلیات ایک بیسل گروتھ میڈیم کی موجودگی میں بڑھے تھے، جو ڈلبیکو کے ترمیم شدہ ایگلز میڈیم (DMEM) (Life Technologies Grand Island, NY, USA) پر مشتمل ہے جس میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم (FBS) (لائف ٹیکنالوجیز) شامل ہیں۔ , Grand Island, NY, USA), 200 mM L-glutamine (Euroclone, Milano, Italy)، اور 200 U/mL پینسلن—0.1 mg/mL streptomycin (Euroclone, Milano, Italy)۔ خلیوں کو تھرموسٹیٹک انکیوبیٹرز میں 37 ڈگری اور 5 فیصد (v/v) CO2 پر اگایا گیا تھا۔ 2.1. شراب کے عرق کی تیاری: سپرے ڈرائر

تحقیق کے ابتدائی مراحل کے دوران، ہم نے خلیات کے لیے زہریلے الکحل والے حصے کو ہٹانے کے طریقے کا مطالعہ کیا۔ ایک منی سپرے ڈرائر B{{0}}(BUCHIItalia srl, Cornaredo, Italy) خشک کرنے کے طریقہ کار کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ابتدائی طور پر، 100 ملی لیٹر الکحل کو انلیٹ اور آؤٹ لیٹ درجہ حرارت (نائٹروجن) کے ساتھ بالترتیب 25 اور 70 ڈگری کے ساتھ خشک کیا جاتا تھا۔ بہاؤ کی شرح 15 فیصد مقرر کی گئی تھی۔ اس کے بعد، شراب کے 100 ملی لیٹر حصے میں 0.2 گرام زانتھن گم اور مسوڑھوں کو حل کرنے کے لیے ضروری پانی کی کم از کم مقدار کے ساتھ شامل کیا گیا۔ inlet اور آؤٹ لیٹ درجہ حرارت (نائٹروجن) بالترتیب 135 اور 70 ڈگری تھے؛ فیڈ کے بہاؤ کی شرح 12 فیصد مقرر کی گئی تھی۔

2.2. شراب کے عرق کی تیاری: روٹاواپور

ہم نے 500mL فلاسکس میں Buchi Rotavapor卵R-10 (BUCHI Italia srl, Cornaredo, Italy) کی طرف سے 500g کو بالکل بخارات بنایا اور سرخ اور سفید شرابوں کا وزن کیا، جس کا درجہ حرارت 55 ڈگری ہے، فلاسک کی گردش کی رفتار 5 کے برابر ہے، اور ویکیوم کنڈیشنز 60 mmHg کے برابر ابتدائی طور پر، شراب کے 2 نمونے مکمل طور پر خشک لائے گئے تھے۔ پھر، ہم نے الکحل والے حصے کو ہٹانے کے لیے، 20 منٹ کے متعین وقت کے ساتھ، انہیں کنٹرول شدہ بخارات کا نشانہ بنایا۔

2.3.HPLC تجزیہ

مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹومیٹری (LC-MS) تجزیہ D'Urso et al کے مطابق کیا گیا تھا۔ （2020） 【25】 معمولی ترمیم کے ساتھ۔ مختصراً، 1 mg/mL (Ho میں) کی آخری ارتکاز پر روٹاواپور کے بخارات سے پہلے اور بعد میں 5 μL سرخ اور سفید شرابوں کو ایک مائع کرومیٹوگرافی سسٹم میں انجکشن کیا گیا تھا جس میں ایک کواٹرنری Accela 600 پمپ اور ایک اکیلا آٹو سیمپلر، جو الیکٹرو سپرے آئنائزیشن (ESI) کے ساتھ ایک لکیری Trap-Orbitrap ہائبرڈ ماس سپیکٹرومیٹر (LTQ-Orbitrap XL، Thermo Fisher Scientific، Bremen، Germany) سے منسلک ہے۔ کرومیٹوگرافک علیحدگی C18 مون کالم (100×2.0 ملی میٹر، پارٹیکل سائز 5um؛ Phenomenex) پر کی گئی تھی، جس میں 0.1 فیصد فارمک ایسڈ (سالوینٹ A) اور 0.1 فیصد فارمک ایسڈ (سالوینٹ B) H2O اور CHSCN کو ایلیونٹ مراحل کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ درج ذیل بائنری گریڈینٹ کا اطلاق 200 μL/min∶ 0-35 منٹ، 5 سے 95 فیصد （B）اور 35-40 منٹ، isocratic 95 فیصد （B ESI ماخذ پیرامیٹرز درج ذیل تھے: کیپلیری وولٹیج {{ 25} V; ٹیوب لینس وولٹیج-176.47; کیپلیری درجہ حرارت 280 ڈگری؛ میان اور معاون گیس کا بہاؤ (N2)، 15 اور 5؛ جھاڑو گیس 0; سپرے وولٹیج 5. MS سپیکٹرا m/z180-1400 کا احاطہ کرنے والے مکمل رینج کے حصول کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ فریگمینٹیشن اسٹڈیز کے لیے، ڈیٹا پر منحصر اسکین تجربہ کیا گیا، جس میں LC-MS تجزیہ میں انتہائی گہرا چوٹیوں کے مطابق پیشگی آئنوں کا انتخاب کیا گیا۔ Xcalibur سافٹ ویئر ورژن 2.1 کو آلہ کے کنٹرول، ڈیٹا کے حصول، اور ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

2.4.MTT قابل عمل پرکھ

ان کے ممکنہ سائٹوٹوکسک اثر کا جائزہ لینے کے لیے، سرخ اور سفید شراب کے نچوڑ کو HFFl پر مختلف ارتکاز (100,200,300,400، اور 500mg/mL) پر کل 24 سے 72h تک جانچا گیا، 3- کے رنگین میٹرک ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے (4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2۔{12}}diphenyltetrazolium (MTT) (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA)۔ اہم خلیے اس کم پاؤنڈ کو کم کرنے کے قابل تھے، جس سے فارمازان پیدا ہوتا ہے جسے 570 nm پر سپیکٹرو فوٹومیٹر کے ذریعے مقدار کا تعین کیا جا سکتا ہے۔ HFF1 کو 5000 خلیات/کنویں کے ارتکاز میں 96-کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ غیر علاج شدہ کنٹرول کے طور پر استعمال ہونے والے خلیوں کو صرف بنیادی بڑھتے ہوئے میڈیم میں اگایا گیا تھا۔ انکیوبیشن پیریڈ کے اختتام پر، نچوڑ پر مشتمل میڈیم کو ہٹا دیا گیا، اور 0.65 mg/mL کی حتمی حراستی میں MTTT کے 10 μL کو ہر کنویں میں شامل کیا گیا اور 2 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔cistanche زندگی کی توسیعانکیوبیشن کے بعد، فارمازان کو DMSO میں تحلیل کر دیا گیا اور 570 nm (Akribis Scientific, Common Farm, Frog Ln, Knutsford WA16 OJG, Great Britain) پر سپیکٹرو فوٹومیٹرک ریڈنگ کے ذریعے جذب کا پتہ چلا۔ مختلف نچوڑوں کی موجودگی میں مہذب خلیوں کی عملداری کو غیر علاج شدہ کنٹرول:(OD570 علاج شدہ خلیات) × 100/(OD570 کنٹرول) کے مقابلے فیصد سیل کی عملداری کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔

(1)

2.5.اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی

شراب کے نچوڑ کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا اندازہ کیٹالیس سرگرمی کی جانچ کرکے کیا گیا، ایک انزائم جو پانی اور آکسیجن میں ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کو کم کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ استعمال شدہ رنگین پرکھ (کیٹالیس پرکھ کٹ) (Sigma-Aldrich، Saint Louis, MO, USA) سپیکٹرو فوٹومیٹرک ریڈنگ کے ذریعہ علاج شدہ خلیوں میں اس انزائم کی سرگرمی کا جائزہ لینے کی اجازت دیتا ہے۔ 100 μM ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ （H2O2） کے ساتھ 1 گھنٹہ علاج کے ذریعے خلیات کو جوش پیدا کیا گیا اور بعد میں 248،44 کے لیے مختلف ارتکاز (10,200 300,400، اور 500 mg/mL) میں عرقوں کی موجودگی میں کاشت کی گئی۔ ، اور 72 ح. آکسیڈیٹیو تناؤ کے مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال ہونے والے خلیات H2 کی نمائش کے بعد بیسل بڑھتے ہوئے میڈیم میں اگائے گئے تھے۔ کنٹرول کے طور پر استعمال ہونے والے خلیوں کو H2O2 سے پہلے کی نمائش کے بغیر، اکیلے بیسل بڑھنے والے میڈیم میں اگایا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے وقت کے اختتام پر، نمونے، علاج اور کنٹرول دونوں، کو کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ کے لیے کٹ میں موجود ریجنٹس کے ساتھ رنگ کی نشوونما کا اندازہ لگایا گیا، اور ہر ایک کے جذب کو 520 پر سپیکٹرو فوٹومیٹرک ریڈنگ کے ذریعے ماپا گیا۔ nm (Akribis Scientific, Common Farm, Frog Ln, Knutsford WA16 OJG, Great Britain)۔ کیٹالیس کی سرگرمی کا حساب ہر نمونے میں موجود مائکرومولز کی تعداد پر لگایا گیا تھا اور اس کا موازنہ غیر علاج شدہ کنٹرول کی سرگرمی سے کیا گیا تھا۔

2.6۔ -Galactosidase Senescence Assay

-galactosidase colorimetric پرکھ (سیل سگنلنگ، MA، USA) ثقافت میں سنسنی خیز خلیوں کی شناخت کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ HFF1 کو 24-کنویں پلیٹوں میں، سفید اور سرخ شراب کے عرقوں کی موجودگی میں، 500 mg/mL کے ارتکاز پر، کل 72 گھنٹے کے لیے اگایا گیا تھا۔ خلیات کو پہلے 100 um ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H-O2) کے ساتھ 1 گھنٹے کے علاج کے ذریعے سنسنی کی طرف راغب کیا گیا تھا، انکیوبیشن ٹائم کے اختتام پر، پیرو آکسائیڈز پر مشتمل میڈیم کو ہٹا دیا گیا تھا، اور تازہ میڈیم جس میں کنڈیشنڈ کنسنٹریٹس شامل تھے خلیوں میں شامل کیے گئے تھے۔ غیر علاج شدہ کنٹرول کے طور پر استعمال ہونے والے خلیوں کو صرف بڑھتے ہوئے میڈیم کی موجودگی میں، H2O2 کی پیشگی نمائش کے بغیر مہذب کیا گیا تھا۔ اس کے بجائے، پیرو آکسائیڈز کے ساتھ پہلے سے علاج کیے جانے والے خلیوں کو سنسنی کے مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا، جو کہ عام نشوونما کے وسط میں مہذب ہوتے تھے۔ نچوڑوں کے ساتھ علاج کے 72 گھنٹے کے بعد، تمام خلیات کو ہلکے خوردبین کے نیچے مشاہدے کے لیے ڈائی کے ساتھ ٹھیک کر دیا گیا تھا۔ 2.7 شماریاتی تجزیہ

شماریاتی تجزیہ سوشل سائنسز ورژن 13 سافٹ ویئر (SPSSInc، شکاگو، IL، USA) کے لیے شماریاتی پیکیج کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔cistanche nzتجربات ہر علاج کے لیے 3 تکنیکی نقل کے ساتھ 2 بار کیے گئے۔ ہر گروپ کے تغیرات کی تقسیم کا اندازہ کرسکل-والس رینک کی رقم اور ولکوکسن کے دستخط شدہ رینک ٹیسٹ کے ساتھ کیا گیا، ایک پی-ویلیو فرض کرتے ہوئے<0.05 as="" statistically="">

3. نتائج

3.1 روٹاواپور کے ذریعے شراب نکالنا شراب کے فینولک پروفائلز کو برقرار رکھتے ہوئے نکالنے کے معیار کو بہتر بناتا ہے

شراب کے عرق کو حاصل کرنے کی پہلی کوشش اسپرے ڈرائر کے ذریعے کی گئی تھی، جو کہ الکحل کے حصے کو شراب سے نکالنے کے لیے موزوں ایک تیز اور آسان تکنیک تھی۔ بہر حال، حاصل کردہ اقتباس ہمارے دائرہ کار کے لیے موزوں نہیں تھا، اس لیے حیاتیاتی اور کیمیائی تجزیہ کے لیے نمونہ حاصل کرنے کے لیے ویکیوم کے نیچے سادہ اور سستی بخارات کو سمجھا جاتا تھا۔ 500 گرام شراب سے شروع ہوکر 55 ڈگری پر کام کرتے ہوئے، 20 منٹ کے بعد، 262 گرام نچوڑ برآمد ہوا۔

بخارات کے مرحلے کے دوران شراب میں موجود پولیفینول کی کسی بھی خرابی کا پتہ لگانے کے لیے، علاج سے پہلے اور بعد کے نمونوں کو مائع کرومیٹوگرافی کے تجزیہ کا نشانہ بنایا گیا۔ اعداد و شمار 1 اور 2 بخارات سے پہلے اور بعد میں سرخ اور سفید شرابوں کے LC-ESI-LTQ-Orbitrap MS پروفائلز دکھاتے ہیں۔ ڈیٹا کا حصول منفی آئنائزیشن موڈ میں کیا گیا تھا۔ یہ معلوم تھا کہ منفی آئنائزیشن موڈ زیادہ منتخب ہے اور فینولک مرکبات کے لیے زیادہ حساسیت حاصل کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ سرخ شراب کے نمونوں میں 33 فینولک مرکبات کی نشاندہی کی گئی ہے، اور سفید شراب کے نمونوں میں 26 مرکبات (ٹیبلز 1 اور 2)۔ فنگر پرنٹ نے نمونوں میں فینولک ایسڈز، کیٹیچنز، اور متعلقہ پروانتھوسیانائیڈنز، اسٹیلبینز، اور فلیوونائڈ گلائکوسائیڈز کی موجودگی کو ظاہر کیا۔ بخارات سے پہلے اور بعد میں سرخ شراب کے پروفائلز نے معمولی مقداری فرق کو ظاہر کیا (شکل 1)۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، اگر سفید شراب کے مقابلے میں سرخ شراب کے کرومیٹوگرام زیادہ ہجوم تھے، یعنی سرخ شراب میں سفید شراب سے زیادہ پولیفینول مرکبات ہوتے ہیں۔ (شکل 2)۔ معیار کے نقطہ نظر سے، خام نمونے اور متعلقہ شراب کا عرق مساوی تھے۔

3.2 شراب کے نچوڑ سیل کی عملداری اور اینٹی آکسیڈینٹ ردعمل کو بہتر بناتے ہیں۔

MIT پرکھ نے تمام جانچ شدہ ارتکاز (شکل 3) اور نمائش کے وقت کے لئے شراب کے عرق کی غیر زہریلی پن کو ظاہر کیا، غیر علاج شدہ خلیوں کے مقابلے میں سیل کی عملداری کو برقرار رکھا۔ صرف زیادہ ارتکاز کے لیے (400 اور 500 mg/mL سفید اور 500 mg/mL سرخ شراب کے عرق)، کیا خلیات نے 24 h (پینل A) اور 48 h (پینل B) کے بعد سیل کی قابل عملیت میں نمایاں کمی ظاہر کی، جیسا کہ غیر علاج شدہ خلیوں کو کنٹرول کریں۔ مختلف نچوڑوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں نے بہتر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی بھی ظاہر کی، جو آکسیجن اور پانی میں H-O2 کے انحطاط میں کیٹالیس سرگرمی کو متحرک کرتی ہے، خلیات کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے ہونے والے نقصانات سے بچاتی ہے (شکل 4)۔ علاج شدہ خلیوں میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں بہتری، جیسا کہ کنٹرول کے مقابلے میں، علاج کے 24 گھنٹے بعد پہلے ہی نظر آ رہی تھی، خاص طور پر زیادہ ارتکاز (500 mg/mL) (شکل 4A)، 48h پر چوٹی تک پہنچنا، اعداد و شمار کے لحاظ سے زیادہ ارتکاز کے لیے اہم ( شکل 4B) اور پھر 72h کے بعد مستحکم (شکل 4C)۔

3.3 شراب کا نچوڑ سیلولر ایجنگ کا مقابلہ کرتا ہے، ایک سخت تناؤ والے واقعے کی نمائش کے باوجود

شکل 5 مختلف بڑھتی ہوئی حالات میں -galactosidase کی سرگرمی کو ظاہر کرتی ہے۔ دو عرقوں (سفید اور سرخ 500 ملی گرام/ملی لیٹر) کی موجودگی میں مہذب ہونے والے خلیات نے نیلے رنگ کے مثبت خلیات کی تعداد میں واضح کمی ظاہر کی، اور اس وجہ سے، سنسنی، علاج نہ کیے جانے والے کنٹرول سیلز کے مقابلے میں جو صرف کی موجودگی میں مہذب ہوتے ہیں۔ بڑھتے ہوئے میڈیم (Ctrl) اور بغیر کسی نچوڑ کے H2O2 کے سامنے آنے والے خلیات (Ctrl H2O2)۔

4. بحث

پولیفینول شراب میں سب سے زیادہ پائے جانے والے بایو ایکٹو مالیکیولز ہیں، جو حال ہی میں کاسمیٹک ایپلی کیشنز کے شعبے میں بھی دلچسپی کا مرکز ہیں [26]۔ پولیفینول مرکبات کا ایک گروپ ہے جو پودوں میں بڑے پیمانے پر پائے جاتے ہیں، ساختی نقطہ نظر سے بہت مختلف لیکن خوراک اور پودوں کی آرگنولیپٹک اور غذائی خصوصیات کے لیے ذمہ دار ہیں [14]۔ کینسر، قلبی امراض، ذیابیطس، آسٹیوپوروسس، اور نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں [27-29] سے تحفظ فراہم کرتے ہوئے ان کا مثبت اثر بھی ہوتا ہے۔ دوسرے مصنفین نے پہلے آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش کا مقابلہ کرنے کے لئے اپنی خصوصیات بیان کیں [30]۔ خاص طور پر، atherosclerosis کے معروف روک تھام کا اثر LDL کولیسٹرول کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی پر منحصر ہے، جس کا آکسیڈیشن خون کے سفید خلیات کی گرفت کا باعث بنے گا جس کے بعد atheromatous plaque [31,32] بنتا ہے۔ اس تناظر میں، شراب حال ہی میں آنتوں کے انفیکشن کو روکنے کے بہترین طریقوں میں سے ایک کے طور پر ابھری ہے، جس میں گرام پازیٹو اور گرام منفی مائکروجنزموں، جیسے سالمونیلوسس، شیجیلوسس، کولیباسیلوسس، اسٹیفیلوکوکی، اور اسٹریپٹوکوکی کے خلاف اینٹی وائرل اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمی دکھائی گئی ہے [334] .

ریسویراٹرول کو شراب میں موجود سب سے موثر اینٹی آکسیڈنٹس میں سے ایک سمجھا جاتا ہے، جو جلد کو آزاد ریڈیکلز سے بچاتا ہے اور ٹائروسینیز ایکٹیویشن کی روک تھام کے ذریعے عمر بڑھنے کے عمل میں تاخیر کرتا ہے [35]۔ مزید یہ کہ یہ گلائکوسامینوگلیکانز کی پیداوار کو متاثر کرتا ہے، جو ڈرمیس میں پانی کی دوبارہ تقسیم کو آسان اور منظم کرتا ہے، اس کا توازن بحال کرتا ہے اور دیرپا ہائیڈریشن کا باعث بنتا ہے [36]۔ اس کے علاوہ، resveratrol سیل سائیکل، apoptosis، اور سنسنی کو ماڈیول کرتا ہے، ڈی این اے آکسیڈیٹیو نقصان کے خلاف حفاظتی اثرات دکھاتا ہے[37]۔ گیلک ایسڈ اور اس کے تمام مشتقات کو سب سے اہم فینولک ایسڈ سمجھا جاتا ہے، جس میں ایک اعلیٰ آزاد ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی ہوتی ہے، جو سیل سگنلنگ کے راستوں اور کینسر کے خلیوں کے اپوپٹوسس میں مداخلت کرنے کے قابل ہوتے ہیں [38]۔ Flavonoids اور anthocyanins ایک اہم اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کرتے ہیں۔cistanche عضو تناسل کا سائزیہ کینسر کے خلیوں کے پھیلاؤ کو کم کرنے اور دل کی بیماری، موٹاپے اور ذیابیطس [39,40] سے بچانے کی اپنی نمایاں صلاحیت کے لیے مشہور ہے۔ اس کے علاوہ، وہ نیورونل افعال کو ماڈیول کرنے اور عمر سے متعلق بیماریوں کو روکنے میں بھی شامل ہیں [41]۔ فینولک مرکبات کے استحکام کو برقرار رکھنے کے لیے ایک موثر نکالنے کا طریقہ کار انتہائی اہمیت کا حامل ہے[42]۔ اس تناظر میں، موجودہ مقالے میں، ہم نے الکحل سے پاک ارتکاز پیدا کرنے کے لیے ویکیوم بخارات کے تحت حاصل کی جانے والی دو قسم کی شراب کے نچوڑ کے اجزاء کا جائزہ لیا۔ اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ بخارات کے عمل نے شراب کے معیار اور مقدار کو متاثر نہیں کیا، سرخ اور سفید شراب کے نمونوں کے کیمیائی پروفائلز کا تجزیہ کیا گیا اور ان کا موازنہ بخارات کے بعد کے نمونوں سے کیا گیا۔ نمونوں کے فنگر پرنٹ کے تجزیے میں بڑی مقدار میں فینولک ایسڈز، کیٹیچنز، اور متعلقہ پروانتھوسیانائیڈنز، اسٹیلبینز، اور فلیوونائڈ گلائکوسائیڈز (اعداد و شمار 1 اور 2) کی موجودگی ظاہر ہوئی، جو حالات کاسمیٹک تیاری کے لیے خام مال کے طور پر مفید ہے [43]۔ جلد کے بہت سے عوارض میں ان کا ممکنہ علاج کا اثر، بشمول متاثرہ زخم اور UV-شعاع ریزی، شاید ان بایو ایکٹیو مالیکیولز کی ہم آہنگی کے عمل سے متعلق ہے [4]۔ یہ مرکبات ROS پیدا کرنے والے خامروں جیسے کہ xanthine oxidase اور nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase[45,46] کو روک سکتے ہیں۔

آکسیڈیٹیو تناؤ ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں کی زیادتی کی وجہ سے ہوتا ہے۔ آر او ایس، جو ایروبک میٹابولزم کے دوران الیکٹران کے نقصان سے یا ماحولیاتی عوامل کے سامنے آنے کے بعد حاصل ہوتا ہے، غیر مستحکم انواع ہیں جو بائیو مالیکیولز کی ساخت اور فنکشن میں تبدیلیاں لانے کے قابل ہیں [47,48] قدرتی اینٹی آکسیڈینٹ دفاع ROS کو جسمانی طور پر مناسب سطحوں کے اندر رکھنے میں شامل ہیں[49,50]۔ اس عمل میں کوئی بھی تبدیلی جلد کی عمر کو منفی طور پر متاثر کر سکتی ہے [51,52]۔ اس تناظر میں، بہت سے قدرتی اقتباسات ماحولیاتی تناؤ [53-56] کی نمائش کے بعد خراب شدہ جلد میں زخم بھرنے اور اینٹی آکسیڈنٹ ردعمل کو متحرک کرنے میں اپنے فائدہ مند اثرات کے لیے مشہور ہیں۔ اب یہ معلوم ہوا ہے کہ جلد کی عمر بڑھنے سے رکاوٹ کے کام کی خرابی ہوتی ہے، جس کے نتیجے میں خشکی ظاہر ہوتی ہے اور ماحولیاتی حملہ آوروں کے لیے حساسیت ہوتی ہے، لہٰذا، جلد کے امراض کے لیے زیادہ خطرے کی نمائندگی کرتا ہے [57,58]۔ مزید برآں، زخم کی شفا یابی مرمت، جلد کی سالمیت کو بحال کرنے، اور ٹشو ہومیوسٹاسس کا ایک پیچیدہ اور متحرک عمل ہے [59]۔ فعال اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیولز کی ٹاپیکل ایپلی کیشن جلد کے اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم کو آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مدد دے سکتی ہے، اس طرح اسے طویل مدتی تصویری عمر [24,60] سے بچاتا ہے۔ یہ بات اچھی طرح سے معلوم ہے کہ بائیو ایکٹیو مالیکیولز، جو اینٹی آکسیڈنٹ کے طور پر کام کرتے ہیں، خلیے کے سنسنی اور عمر بڑھنے کے عمل کا مقابلہ کرنے کے قابل ہوتے ہیں۔ سیل سینسنس سیل کی نشوونما کا ایک مستحکم مرحلہ ہے جو سنسنی فینو ٹائپس (SASP) سے وابستہ خفیہ عوامل کے سراو سے نمایاں ہوتا ہے[61]۔ SASP پڑوسی خلیوں کو ماڈیول کر سکتا ہے، جس کے نتیجے میں مختلف پیتھولوجیکل عمل میں شامل سگنلنگ جھرنوں کو چالو کیا جاتا ہے [62]۔ سینسنٹ سیلز ٹیلومیرس شارٹننگ اور ایک مستحکم پرو سوزش والے ماحول سے وابستہ ہیں، سیل ٹرانسفرنٹی کو فروغ دیتے ہیں [63]۔ اس تناظر میں، ہم نے حال ہی میں یہ ثابت کیا ہے کہ Myrtus Communis L. سٹیم سیل pluripotency اور اشتعال انگیز ردعمل کو ماڈیول کر کے اہم اینٹی آکسیڈنٹ اور تخلیقی خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے[64]۔ پولی فینول سے بھرپور اس پودے کے نچوڑ خلیات کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچانے کے قابل ہوتے ہیں، ٹیلومیریز ریورس ٹرانسکرپٹیس (TERT) کے اظہار کو دلاتے ہیں اور قبل از وقت سنسنی کا مقابلہ کرتے ہیں [65]۔

دوسرے مصنفین نے پہلے یہ ظاہر کیا تھا کہ سنسنی خیز خلیوں کی طرف علاج کی مداخلت دائمی سوزش کا مقابلہ کرکے اور زخم کی مرمت کر کے صحت کو بحال کر سکتی ہے[66]۔ اس کے باوجود، دوسرے مصنفین نے یہ بھی انکشاف کیا کہ کوئرسیٹن، فلیوونائڈز، اور گیلک ایسڈ براہ راست فری ریڈیکل اسکیوینجنگ سرگرمی کے ذریعے ہونے والے زخموں کو روک سکتے ہیں، سیل ڈیٹوکسیفیکیشن سسٹم کو سپورٹ کرتے ہیں، جیسے سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز، کیٹالیس، اور گلوٹاتھیون پیرو آکسیڈیز [67]۔ Catalase ROS detoxification میں شامل سب سے اہم انزائمز میں سے ایک ہے، جس کی بے ضابطگی عمر سے وابستہ بہت سی انحطاطی بیماریوں کا باعث بنتی ہے[68,69]۔cistanche پاؤڈریہ بات اچھی طرح سے معلوم ہے کہ کیٹالیس کی کمی کا تعلق پیروکسیسومل dysfunction کے ذریعے تیز ذیابیطس گردوں کی چوٹ سے ہوتا ہے [70]، اس طرح حیاتیاتی عمل کو متاثر کرتا ہے، بشمول خلیوں کے پھیلاؤ، تفریق، منتقلی، اور apoptosis [71]۔ موجودہ مقالے میں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ سرخ اور سفید شراب کے عرق، مختلف ارتکاز میں، آکسیڈیٹیو تناؤ سے پیدا ہونے والے خلیے کی سنسنی کا مقابلہ کرنے کے قابل ہوتے ہیں، آکسیڈیٹیو تناؤ کے ضابطے میں شامل مرکزی انزائم، کیٹالیس کی سرگرمی کو موڈیول کرتے ہوئے (شکل 4) اور -galactosidase (شکل 5)۔ ہمارے نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ شراب کے عرق ROS کے جمع ہونے کا مقابلہ کرنے کے قابل ہیں، H-O2 کے علاج کے بعد catalase کی سرگرمی میں اضافہ کرتے ہیں، اس طرح جلد کی دائمی بیماریوں کو روکتے ہیں اور سنسنی خلیوں کی تعداد کو کم کرتے ہیں۔ ایک ساتھ مل کر، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ یہ شراب کے عرق، جو ویکیوم بخارات کے تحت حاصل کیے جاتے ہیں، اس طرح جلد کی عمر کو روکنے کے لیے نئی کاسمیٹک مصنوعات کی تشکیل کے لیے ایک دلچسپ خام مال کی نمائندگی کر سکتے ہیں۔ مزید یہ کہ وٹرو میں اور ویوو میں بھی سنگل مرکبات پر مطالعہ ان نتائج کو بافتوں کی تخلیق نو کے لیے مستقبل کی ایپلی کیشنز میں ترجمہ کرنے میں مددگار ثابت ہو سکتا ہے۔

5. نتائج

جلد کی عمر بڑھنا ایک متحرک اور کثیر الجہتی عمل ہے جو UV کی نمائش اور رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کی متعلقہ تشکیل سے ہوتا ہے۔ فوٹو ایجنگ کے خلاف واحد معروف دفاع سورج کے فلٹرز اور اینٹی آکسیڈنٹس ہیں، خاص طور پر مجموعہ میں، آزاد ریڈیکل کی پیداوار کو کم اور بے اثر کرنے کے لیے۔ موجودہ مقالے میں، ہم نے شراب کے عرق کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت پر توجہ مرکوز کی، جن کے فلیوونائڈز عمر بڑھنے کا مقابلہ کرنے کے قابل ہوتے ہیں، خاص طور پر جب ان خلیات پر لاگو کیا جاتا ہے جو کسی نمایاں دباؤ والے واقعے کا سامنا کرتے ہیں۔ ایک نئے نکالنے کے طریقہ کار کی بدولت، ہم نے فلیوونائڈ اینٹی آکسیڈینٹ اجزاء کو قابلیت میں تبدیل کیے بغیر الکوحل کے حصے کو ہٹا دیا۔ اقتصادی نقطہ نظر سے، یہ واضح ہے کہ شراب کئی ضمنی مصنوعات سے زیادہ مہنگی ہے. یہ بات اچھی طرح سے معلوم ہے کہ کاسمیٹک انڈسٹری بھی شراب سے زیادہ مہنگے کئی خام مال استعمال کرتی ہے۔ سرخ اور سفید شراب کے عرق اس طرح نئی کاسمیٹک مصنوعات کی تشکیل کے لیے ایک دلچسپ خام مال کی نمائندگی کر سکتے ہیں تاکہ جلد کی عمر بڑھنے سے ٹشووں کی تخلیق نو کو بہتر بنایا جا سکے۔

یہ مضمون Antioxidants 2021, 10, 227 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/antiox10020227 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants