کارنووسکی کا فکسٹیو اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ کے ساتھ علاج کیے جانے والے گردوں میں ٹشو پروسیسنگ سے اخذ کردہ ویکیولیشن کے طور پر ظاہر ہونے والے نمونوں کو روکتا ہے Ⅱ

میکروسکوپی طور پر، کوئی غیر معمولی تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔ مزید برآں، خون کی کیمسٹری میں، گردوں کے پیرامیٹرز (یعنی، BUN اور CRE) نے کسی بھی گروپ میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دکھائی (ٹیبل 1)۔

Cistanche سپلیمنٹ کڈنی فنکشن سپورٹ سپلیمنٹ PhGs75% Ech 30% Act 12%

گردے میں 10% NBF کے ساتھ طے شدہ ہسٹوپیتھولوجیکل نتائج کا خلاصہ ٹیبل 2 میں دکھایا گیا ہے۔ مائکروسکوپی طور پر، قریبی نلیوں میں بیسوفیلک گرینولز اور ویکیولز، خاص طور پر S1 اور S2 حصوں میں، دونوں ASO-1W میں دیکھے گئے تھے۔ اور ASO-2گردوں کے لیے W گروپس 10% NBF کے ساتھ طے کیے گئے ہیں (تصویر 1A)۔ یہ تبدیلیاں ASO-2W گروپ میں ASO-1W گروپ کی نسبت زیادہ شدید تھیں۔ بیسوفیلک دانے داروں کا جمع ہونا بنیادی طور پر قریبی نلیوں کے برش بارڈر پر مجموعی اور/یا پنکٹیٹ ڈھانچے کے طور پر دیکھا گیا تھا۔ جیسا کہ بیسوفیلک دانے داروں کے بارے میں اطلاع دی جاتی ہے کہ وہ اینڈوسومس یا لائزوسومز دونوں کے اندر اور قربت والے نلی نما اپیتھلیم 14 کے سائٹوپلازم میں آزادانہ طور پر موجود ہیں، یہ مختلف شکلیں ان کے جمع شدہ علاقے کی عکاسی کر سکتی ہیں۔ یعنی، مجموعی اور اوقافی ڈھانچے بالترتیب lysosomes اور cytoplasm میں جمع ہو سکتے ہیں۔ قربت والے نلیوں میں ویکیولز گول اور کھردری شکل کے تھے، اور زیادہ تر ملحقہ ویکیولز کے ساتھ مل گئے تھے۔ مزید برآں، کچھ ویکیولز میں بیہوش بیسوفیلک گرینولز (تصویر 1E) موجود تھے، جو تجویز کرتے ہیں کہ ویکیولز ASOs کے جمع ہونے سے متعلق تھے۔ امیونو ہسٹو کیمیکل طور پر، LAMP-2 ویکیولز کی جھلی کی سطح پر مثبت تھا (تصویر 1G اور 1H)۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ ویکیولیشن لیزوزوم کا پھیلاؤ تھا۔ ASO-1W اور ASO-2W گروپوں کے درمیان خلا کی شدت میں فرق لائزوزوم میں جمع ASOs کی تعداد میں فرق کی نشاندہی کر سکتا ہے۔ ہم قیاس کرتے ہیں کہ ASOs میں ASOs کی نمائش کے وقت میں اضافہ کے ساتھ lysosomes میں جمع ASOs کی مقدار بڑھ جاتی ہے۔ اس کے نتیجے میں، ٹشو پروسیسنگ کی وجہ سے لیسوسومل توسیع ویکیولیشن کے طور پر ظاہر ہوئی۔

ٹیبل 1. بلڈ کیمسٹری ڈیٹا

ٹیبل 2. گردے میں ہسٹوپیتھولوجیکل نتائج 10% N کے ساتھ طے کیے گئے ہیں۔

اگرچہ اعتدال پسند خلا کا مشاہدہ کیا گیا تھا، قربت والے نلی نما انحطاط واضح نہیں تھا، اور ویکیولیٹڈ اپیتھیلیا کی اکثریت امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ (تصویر 1D) میں KIM-1 کے لیے منفی تھی۔ اس کے برعکس، کارنووسکی کے فکسٹیو میں طے کیے گئے نمونوں کے لیے، تمام افراد میں قربت والی نلیوں میں خلاء موجود نہیں تھے، جب کہ بیسوفیلک دانے دار کثرت سے دیکھے گئے تھے (تصویر 1 بی)۔ بیسوفیلک گرینول ان نمونوں کے مقابلے میں زیادہ نمایاں تھے جن میں 10% NBF فکسیشن کا نشانہ بنایا گیا تھا کیونکہ سیل کی ساخت اچھی طرح سے محفوظ تھی (تصویر 1F)۔ 4% پی ایف اے فکسیشن سے مشروط نمونوں میں، ویکیولز اور بیسوفیلک گرینولز دیکھے گئے۔ تاہم، خلا کی شدت 10% NBF فکسیشن (تصویر 1C) سے مشروط نمونوں کے مقابلے میں قدرے کم تھی۔

Oligonucleotides انتہائی پانی میں گھلنشیل مالیکیولز ہیں اور سیلولر اجزاء کو مکمل طور پر کراس لنک کرنے میں ناکامی کی وجہ سے پروسیسنگ کے دوران ٹشوز سے نکالے جاتے ہیں۔

ان نتائج کی بنیاد پر، ہم نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ قربت والے نلیوں میں خلاء فکسیشن کے طریقہ کار سے متاثر ہوئے تھے اور یہ کہ 10٪ NBF اور 4٪ PFA فکسیشن کے تابع ٹشوز میں دیکھی جانے والی مورفولوجیکل تبدیلیاں ٹشو پروسیسنگ کے دوران ASO جمع ہونے کے علاقے میں نمونے ہو سکتی ہیں۔ دوسرے لفظوں میں، ویکیولیشن زہریلے طور پر غیر اہم ہو سکتی ہے کیونکہ کوئی نلی نما انحطاط، KIM-1 کے اظہار میں اضافہ، یا گردوں کے پیرامیٹرز میں غیر معمولی تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔ اس لیے، ہم تجویز کرتے ہیں کہ ASO سے علاج کیے جانے والے جانوروں میں گردے کے درست پیتھولوجیکل معائنہ کے لیے اختیاری فکسیشن کے طریقہ کار کے طور پر Karnovsky's fixative استعمال کریں۔

آخر میں، ہمارے موجودہ نتائج نے روایتی NBF فکسیشن طریقہ استعمال کرتے وقت خلا کے ممکنہ حد سے زیادہ تخمینہ کا انکشاف کیا۔ کارنووسکی کا درست کرنے والا مصنوعی خلاء کو حقیقی نیفروٹوکسٹی سے ممتاز کرنے کے لیے ایک مفید آلہ ہو سکتا ہے۔

تصویر 1. اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ (ASO) کے ساتھ علاج شدہ گردوں کے نمائندہ فوٹومیکروگراف۔ ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں گردے کے لیے اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ (LNA-ASO) سے علاج شدہ گروپ (ASO-2W) پر مشتمل ہفتے کے بند نیوکلک ایسڈ میں (A) 10٪ نیوٹرل بفرڈ فارملڈہائڈ حل (NBF)، ( ب) کارنووسکی کا درست کرنے والا، یا (C) 4% paraformaldehyde فاسفیٹ بفر (PFA)۔ (D) ASO-2ڈبلیو کے گردے کی چوٹ کے مالیکیول-1 (KIM-1) ​​کے لیے امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ 10% NBF کے ساتھ طے شدہ گردے کے لیے۔(E) 10% NBF اور (F) Karnovsky کے فکسٹیو کے ساتھ طے شدہ گردوں کے لیے 1-ہفتہ LNA-ASO-علاج شدہ گروپ (ASO-1W) میں ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں۔ 10% NBF کے ساتھ طے شدہ گردوں کے لیے (G) ASO-1W اور (H) ASO-2W کے lysosomal سے وابستہ جھلی پروٹین 2 (LAMP-2) کے لیے امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ۔ (A) بیسوفیلک گرینولز (سیاہ تیر) اور ویکیولز (سیاہ تیر کے نشان) قربت والے نلیوں میں دیکھے جاتے ہیں۔ Hematoxylin اور eosin (H&E) کے داغ۔ بار=20 μm۔ (B) ویکیولز کا مشاہدہ نہیں کیا جاتا ہے، لیکن بیسوفیلک گرینولس (سیاہ تیر) کا مشاہدہ کیا جاتا ہے۔ H&E سٹیننگ۔ بار=20 μm۔ (C) باسوفیلک گرینولز (سیاہ تیر) اور ویکیولز (سیاہ تیر کے نشان) دیکھے جاتے ہیں۔ تاہم، خلا کی شدت 10% NBF فکسیشن سے مشروط نمونوں میں اس سے کم تھی۔ H&E سٹیننگ۔ بار=20 μm۔ (D) خالی ہونے والی قربت والی نلیاں کی اکثریت KIM-1 کے لیے منفی ہیں۔ بار=20 μm۔ (E, F) قربت والے نلیوں میں مشاہدہ کیے گئے کچھ ویکیولز میں بیسوفیلک دانے دار بیہوش ہوتے ہیں (سبز تیر)۔ بیسوفیلک دانے دار واضح طور پر دیکھے جاتے ہیں، اور سیل کی ساخت محفوظ رہتی ہے (سبز تیر کے نشان)۔ H&E سٹیننگ۔ بارز=20 μm۔ (G, H) ویکیولز کی جھلی کی سطح LAMP-2 (نیلے تیر) کے لیے مثبت ہے۔ بارز=20 ملی میٹر۔

دلچسپی کے ممکنہ تنازعات کا انکشاف: مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کے مفادات کا کوئی تنازعہ نہیں ہے۔

اعتراف: مصنفین کیسوکے یوشیکاوا اور ٹیٹسویا اوہٹا کے مشکور ہیں۔

حوالہ جات

1. رینالڈی سی، اور ووڈ ایم جے اے۔ اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈس: اعصابی عوارض کے علاج کے لئے اگلا محاذ۔ نیٹ ریو نیورول۔ 14:9-21۔ 2018. [میڈ لائن] [کراس ریف]

2. Uemura Y، اور Kobayashi K. antisense oligonucleotides پر مشتمل مقفل نیوکلک ایسڈ کی انٹراٹریچیل انتظامیہ کے ذریعہ مورین الیوولر میکروفیجز کو نشانہ بنانا۔ ڈرگ ڈیلیو۔ 26: 803–811۔ 2019۔ [میڈ لائن] [کراس ریف]

3. بینیٹ سی ایف۔ علاج سے متعلق اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈس عمر کے ساتھ آرہے ہیں۔ Annu Rev Med. 70: 307–321۔ 2019۔ [میڈ لائن] [کراس ریف]

4. Frazier KS. اینٹی سینس اولیگونیوکلیوٹائڈ علاج: زہریلا پیتھالوجسٹ کے نقطہ نظر سے وعدہ اور چیلنجز۔ ٹاکسیکول پاتھول۔ 43:78–89۔ 2015. [میڈ لائن] [کراس ریف]

5. Engelhardt JA. اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈس کی تقابلی رینل ٹاکسیکوپیتھولوجی۔ نیوکلک ایسڈ تھیر۔ 26: 199–209۔ 2016. [میڈ لائن] [کراس ریف]

6. Frazier KS, Sobry C, Derr V, Adams MJ, Besten CD, De Kimpe S, Francis I, Gales TL, Haworth R, Maguire SR, Mirabile RC, Mullins D, Palate B, Doorten YPS, Ridings JE, Scicchitano MS , Silvano J، اور Woodfine J. دوسری نسل کے antisense oligonucleotide کی دائمی انتظامیہ کے بعد چوہوں اور بندروں میں گلوومیرولر گھاووں کی نشوونما کے لیے ایک بنیادی جزو کے طور پر پرجاتیوں کے لیے مخصوص اشتعال انگیز ردعمل۔ ٹاکسیکول پاتھول۔ 42: 923–935۔ 2014. [میڈ لائن] [کراس ریف]

7. سلائی S, Gubler M, Gérard R, Avignon B, Mueller Y, Braendli-Baiocco A, Odin M, اور Moisan A. GalNAc کنجوجیشن گردوں کے نلی نما خلیوں میں اینٹی سینس اولیگونیوکلیوٹائڈ ادویات کی سائٹوٹوکسائٹی کو کم کرتا ہے۔ مول تھر نیوکلک ایسڈز۔ 14: 67–79۔ 2019۔ [میڈ لائن] [کراس ریف]

8. Kakiuchi-Kiyota S, Koza-Taylor PH, Mantena SR, Nelms LF, Enayetallah AE, Hollingshead BD, Burdick AD, Reed LA, Warneke JA, Whiteley LO, Ryan AM, اور Mathialagan N. ہیپاٹک ٹرانسکرپشن پروفائلز کا موازنہ ribonucleic acid antisense oligonucleotides: چوہوں میں غیر ہدف ثالثی زہریلا میں تعاون کرنے والے الگ الگ راستوں کا ثبوت۔ ٹاکسیکول سائنس۔ 138: 234–248۔ 2014. [میڈ لائن] [کراس ریف]

9. Hagedorn PH, Yakimov V, Ottosen S, Kammler S, Nielsen NF, Høg AM, Hedtjärn M, Meldgaard M, Møller MR, Ørum H, Koch T, and Lindow M. ہیپاٹوٹوکسک ممکنہ علاج کے oligonucleotides سے ان کی پیشگی حیثیت کی جا سکتی ہے اور ترمیم پیٹرن. نیوکلک ایسڈ تھیر۔ 23: 302–310۔ 2013. [میڈ لائن] [کراس ریف]