کارنووسکی کا فکسٹیو اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ کے ساتھ علاج کیے جانے والے گردوں میں ٹشو پروسیسنگ سے اخذ کردہ ویکیولیشن کے طور پر ظاہر ہونے والے نمونوں کو روکتا ہے Ⅰ

خلاصہ: اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ(ASO) کے علاج کی ایک نئی طریقہ علاج کے طور پر شناخت کی گئی ہے۔متضاد بیماریاں. میںASOs کے ساتھ گردے کا علاج کیا جاتا ہے۔vacuoles، basophilic granules کے علاوہ، اکثر proximal tubules میں دیکھے جاتے ہیں۔ کچھ رپورٹس میں بیان کیا گیا ہے کہ یہ خلا ایک ثانوی رجحان ہونے کا امکان ہے جس کے نتیجے میںASOs کا اخراجٹشو پروسیسنگ کے دوران. اس مطالعے میں، ہم نے فکسیشن کے بعد رینل مورفولوجی کا موازنہ Karnovsky کے fixative یا 4% paraformaldehyde فاسفیٹ بفر (PFA) کے ساتھ 10% نیوٹرل بفرڈ فارملڈہائیڈ سلوشن (NBF) سے کیا۔ مادہ اسپراگ-ڈولی ​​چوہوں کا 1 یا 2 ہفتوں تک 50 ملی گرام/کلوگرام لاک نیوکلک ایسڈ کے ساتھ چار بار نس کے ذریعے علاج کیا گیا جس میں اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈس (LNA-ASOs) شامل ہیں۔ خوردبینی طور پر، NBF کے ساتھ طے شدہ گردوں میں قربتی نلیوں میں ویکیولز اور بیسوفیلک گرینولز دیکھے گئے۔ باسوفیلک گرینولس ASOs کے جمع ہونے کی نشاندہی کرتے ہیں۔ مزید یہ کہ ، کچھ ویکیولس میں بیہوش بیسوفیلک گرینولز بھی شامل ہیں ، جو تجویز کرتے ہیں کہ ویکیولز ASOs کے جمع ہونے سے متعلق تھے۔ اگرچہ قربت والے نلیوں میں اعتدال پسند خلا کا مشاہدہ کیا گیا تھا، لیکن ویکیولیٹڈ ایپیتھیلیا کی اکثریت امیونو ہسٹو کیمیکل داغ پر گردے کی چوٹ کے مالیکیول-1 کے لیے منفی تھی۔ قرنوفسکی کے فکسیشن کے تابع نمونوں میں قربت والے نلیوں میں خلا کا مشاہدہ نہیں کیا گیا تھا، حالانکہ بیسوفیلک گرینولز کا مشاہدہ کیا گیا تھا۔ پی ایف اے فکسیشن سے مشروط نمونوں میں، ویکیولز اور بیسوفیلک گرینولز کا مشاہدہ قریبی نلیوں میں کیا گیا، جیسا کہ NBF فکسیشن کا نشانہ بننے والے نمونوں میں ہے۔ مجموعی طور پر، ہماری تلاشوں نے روایتی NBF فکسیشن کا استعمال کرتے وقت ٹشو پروسیسنگ کے دوران نمونے کی وجہ سے خلا کی حد سے زیادہ اندازہ لگانے کے امکان کو ظاہر کیا۔ کارنووسکی کے فکسٹیو کو مصنوعی خلا کو حقیقی نیفروٹوکسٹی سے ممتاز کرنے کے لیے ایک مفید متبادل سمجھا جاتا ہے۔ (DOI: 10.1293/tox۔{11}}; J Toxicol Pathol 2021; 34:367–371)

مطلوبہ الفاظ:اینٹی سینس اولیگونوکلیوٹائڈ، آرٹفیکٹ،کارنووسکی کا درست کرنے والا, vacuolation , basophilic granule , kidney

Cistanche سپلیمنٹ کڈنی فنکشن سپورٹ سپلیمنٹ PhGs75% Ech 30% Act 12%

حال ہی میں، اینٹی سینس اولیگونیوکلیوٹائڈ (ASO) کے علاج کو ناقابل علاج بیماریوں کے علاج کے لیے نئے طریقوں کے طور پر قائم کیا گیا ہے۔

زہریلے طور پر، ASO-حوصلہ افزائی زہریلا کو ہائبرڈائزیشن پر منحصر زہریلا میں درجہ بندی کیا جاتا ہے، جو ASO ترتیب سے متعلق ہیں، اور ہائبرڈائزیشن سے آزاد زہریلا، جو کیمیائی ترمیم سے متعلق ہیں. ہائبرڈائزیشن سے آزاد زہریلا تین اہم میکانزم کی طرف سے حوصلہ افزائی کی جاتی ہیں: 1) ASO جمع، 2) پرو سوزش اثرات، اور 3) اپٹامیرک بائنڈنگ اثرات4. ASOs کا جمع بنیادی طور پر جگر اور گردوں میں دیکھا جاتا ہے، اور ضرورت سے زیادہ جمع ہونے سے ان اعضاء کی خرابی ہوتی ہے۔ پرو اشتعال انگیز اثر چوہوں اور بندروں میں ٹول نما رسیپٹرز کے پابند ہونے یا بندروں6 میں ASOs کے ذریعہ عنصر H کی روک تھام کے ذریعے متبادل تکمیلی راستے کو چالو کرنے کے ذریعے فطری مدافعتی نظام کے محرک سے پیدا ہوتا ہے۔ اپٹامیرک بائنڈنگ اثر پلیٹلیٹ ایکٹیویشن اور ایگریگیشن/تھرومبوسائٹوپینیا کو پلیٹلیٹ مخصوص ریسیپٹر7 کو باندھنے کے لیے اکساتا ہے۔ مزید یہ کہ ہیپاٹوسائٹس میں انٹرا سیلولر پروٹین کے ساتھ اپٹامیرک بائنڈنگ کو ہیپاٹوٹوکسٹی 8–10 کی ایک وجہ سمجھا جاتا ہے۔ ان زہریلے عناصر کا پتہ لگانے کے لیے، محققین نے کئی نان کلینیکل اسسز تیار کیے ہیں۔ ان میں سے، ہسٹوپیتھولوجیکل امتحان ASO کے جمع ہونے کا پتہ لگانے کے لیے سب سے زیادہ حساس ٹیسٹوں میں سے ایک ہے۔

ہسٹوپیتھولوجیکل طور پر، ASOs کے جمع ہونے کو عام طور پر جگر میں Kupffer خلیوں کے cytoplasm یا گردوں کے proximal tubules میں basophilic granules کے طور پر دیکھا جاتا ہے۔ بیسوفیلک دانے داروں کا نمایاں جمع انحطاطی تبدیلیوں کے بڑھتے ہوئے واقعات یا شدت سے منسلک ہوتا ہے، جسے عام طور پر گردوں میں قربت والے نلی نما اپکلا کے خلا یا انحطاط/نیکروسس کے طور پر دیکھا جاتا ہے۔ اکیلے بیسوفیلک گرینولز کو زہریلے طور پر اہم نہیں سمجھا جاتا۔ لہذا، ASO سے متعلق زہریلا کا اندازہ کرنے کے لئے انحطاطی تبدیلیوں سے بیسوفیلک گرینول کے جمع ہونے کا فرق اہم ہے۔

ویکیولز، جو اکثر ASO کے ساتھ علاج کیے جانے والے cynomolgus بندروں کے گردے کے قریبی نلکوں میں دیکھے جاتے ہیں، ان میں بیسوفیلک مواد ہوتا ہے اور خلیات کے اندر وہی عام تقسیم کو ظاہر کرتا ہے جیسا کہ basophilic granules 11, 12۔ phagolysosomal compartment5, 11 کے اندر ASO جمع ہونے کی ظاہری شکل۔ مزید برآں، Henry et al. اور اینجل ہارڈ نے بیان کیا کہ پروکسیمل ٹیوبلز میں ویکیولز ایک ثانوی رجحان ہونے کا امکان ہے جو پروسیسنگ کے دوران ASOs کے نکالنے کے نتیجے میں ہوتا ہے کیونکہ ویکیولز paraformaldehyde/glutaralde hyde perfusion-fixed kidneys5، 11 میں موجود نہیں ہوتے ہیں۔ mipomersen کے ساتھ طے کرنے کے عمل کے دوران ظاہر ہونے کا قیاس کیا گیا تھا۔

اس طرح، اگرچہ ASO کے علاج کی وجہ سے خالی ہونا بعض صورتوں میں ایک نمونہ ہو سکتا ہے، لیکن یہ مفروضہ واضح طور پر ثابت نہیں ہوا ہے، اور کسی بھی رپورٹ نے زہریلے تشخیص کے لیے مناسب تعین کے طریقہ کار کی نشاندہی نہیں کی ہے۔ اسی مناسبت سے، اس مطالعے میں، ہم نے فکسیشن کے بعد رینل مورفولوجی کا موازنہ Karnovsky کے fixative یا 4% paraformaldehyde فاسفیٹ بفر (PFA) کے ساتھ 10% نیوٹرل بفرڈ فارملڈہائیڈ سلوشن (NBF) سے کیا۔ مزید برآں، ہم نے کرنووسکی کے فکسٹیو کی افادیت کو ایک متبادل فکسٹیو کے طور پر ظاہر کیا تاکہ آرٹفیکٹ سے حاصل ہونے والے خلا کو روکا جا سکے۔

چار ہفتے پرانے مادہ سپراگ ڈولی چوہوں کو چارلس ریور لیبارٹریز جاپان انکارپوریشن (کاناگاوا، جاپان) سے خریدا گیا اور لیبارٹری کے حالات کے مطابق بنایا گیا۔ جانوروں کو کنٹرول شدہ حالات میں برقرار رکھا گیا تھا (12-گھنٹہ روشنی/تاریک چکر، درجہ حرارت 23 ± 2 ڈگری، رشتہ دار نمی 50 ± 25%) اور انہیں معیاری تجارتی خوراک تک مفت رسائی کی اجازت دی گئی تھی (آٹوکلویڈ CR-LPF؛ Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) اور نل کا پانی۔ بیس جانوروں کو مندرجہ ذیل چار گروپوں میں مختص کیا گیا تھا (ہر ایک میں پانچ جانوروں کے ساتھ): 1-ہفتہ نمکین علاج کرنے والا گروپ (کنٹرول- 1ڈبلیو)، 2-ہفتہ نمکین علاج کرنے والا گروپ (کنٹرول{) {14}}W)، 1-ہفتہ بند نیوکلک ایسڈ جس میں اینٹی سینس اولیگونیوکلیوٹائڈ (LNA-ASO) سے علاج شدہ گروپ (ASO-1W)، اور 2- ہفتہ کا LNA ASO-علاج شدہ گروپ (ASO-2W)۔ 50 mg/kg LNA-ASO انتظامیہ کے آغاز کے وقت جانور 5 ہفتے کے تھے۔ LNA-ASO کو درج ذیل طریقہ کار کے مطابق مجموعی طور پر چار بار نس کے ذریعے دیا گیا: ASO-2W گروپ میں دن 1، 4، 8، اور 11؛ اور ASO-1W گروپ میں دن 1، 2، 3، اور 4۔ کنٹرول-1W اور ASO-1W گروپوں میں جانوروں کی قربانی 7ویں دن کی گئی۔ 14. ہر ٹرمینل نیکروپسی میں، کلینکل پیتھالوجی کے لیے خون کے نمونے پیٹ کے وینا کاوا سے گہرے اینستھیزیا کے تحت isoflurane کے ساتھ جمع کیے گئے تھے۔ خون کے نمونے لینے کے بعد، تمام چوہوں کو فوری طور پر پیٹ کی شہ رگ کاٹ کر خارج کر دیا گیا۔ بیرونی جسم کی سطح، چھاتی اور پیٹ کی گہاوں، اور ویزرا کا میکروسکوپی طور پر معائنہ کیا گیا، اور بائیں گردے کو ہٹا دیا گیا اور خوردبینی معائنہ کے لیے کارروائی کی گئی۔ تمام طریقہ کار مٹسوبشی تانابے فارما کارپوریشن کے تجرباتی جانوروں اور جانوروں کے تجربات کی خوراک اور ذخیرہ کرنے کے قواعد کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔

سیرم کے نمونے 4 ڈگری پر خون کے نمونوں کی سینٹرفیوگریشن کے ذریعے حاصل کیے گئے تھے۔ خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) اور کریٹینائن (CRE) کی سطح کا اندازہ لگانے کے لیے سیرم بائیو کیمیکل تجزیہ TBA-2000FR آلہ (کینن میڈیکل سسٹمز کارپوریشن، ٹوچیگی، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

گردے کو تین درست کرنے والے حل کا استعمال کرتے ہوئے اس طرح ٹھیک کیا گیا تھا: گردے کو تین حصوں میں ٹرانسورسی طور پر تقسیم کرنے کے بعد، گردوں کے شرونی سمیت درمیانی حصہ، 5 دنوں کے لیے 10% NBF میں طے کیا گیا تھا۔ کرینل کا حصہ کارنووسکی کے فکسٹیو (Muto Pure Chemicals Co., Ltd., Tokyo, Japan) میں طے کیا گیا تھا۔ اور کاڈل حصہ 4% PFA میں 17 گھنٹے کے لیے 4 ڈگری پر طے کیا گیا اور پھر 24 گھنٹے کے لیے 10% NBF میں رکھا گیا۔ ہر مقررہ نمونہ پانی کی کمی اور پیرافین میں سرایت کر گیا تھا۔ ٹشو سیکشن ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) داغ لگانے کے لیے تیار کیے گئے تھے۔ امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی جو گردے کی چوٹ کے مالیکیول کو نشانہ بناتے ہیں 13}}؛ تھرمو فشر سائنٹیفک انکارپوریشن، والتھم، ایم اے، یو ایس اے؛ 1:1000 ڈائلیشن) اینٹیجن کی بازیافت کے بعد (سائٹریٹ بفر، پی ایچ 6.0، 10 منٹ کے لیے گرم یا 20 منٹ کے لیے دباؤ میں)۔ ہسٹو فائن سادہ داغ چوہا MAX PO (Nichirei Biosciences Inc.، Tokyo, Japan) کو سیکنڈری اینٹی باڈی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

Wecistanche کی معاون خدمت:

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https://www.xjcistanche.com٪2014-شاپ