گردے کی بیماری: نکل کس طرح گردے میں آٹوفیجی پیدا کرتا ہے؟

مزید معلومات کے لیے:Ali.ma@wecistanche.com

حصہ Ⅰ: نکل ماؤس کے گردے میں PI3K/AKT/mTOR اور AMPK راستوں کے ذریعے آٹوفجی کی حوصلہ افزائی کرتا ہے

Heng Yin، Zhicai Zuo اور et al.

1. تعارف

نکل(Ni)، ایک قدرتی عنصر، مٹی، پانی، اور ہوا سمیت ماحولیاتی حصوں میں وسیع پیمانے پر تقسیم کیا جاتا ہے (Schrenk et al,2020)۔ نی (نکل)مرکبات اور دھاتی Ni (نکل)بہت سے صنعتی اور تجارتی ایپلی کیشنز ہیں، جیسے الائے پروڈکشن، الیکٹروپلاٹنگ، نکل کیڈیمیم بیٹریاں، اور کیمیکل اور فوڈ انڈسٹری میں کیٹالسٹ (Genchi et al., 2020)۔ تاہم، نی کا وسیع صنعتی استعمال (نکل)وسیع پیمانے پر ماحولیاتی آلودگی کا باعث بنتا ہے، جو کھانے اور پینے کے پانی کے ذریعے انسانوں کو نی سے متاثر ہونے کا خطرہ بڑھاتا ہے (Das et al,2018)۔ اگرچہ نی (نکل) انسانوں اور جانوروں کے لیے ایک ضروری مائیکرو نیوٹرینٹ ہے، نی کا زیادہ استعمال انسانی صحت کے لیے انتہائی مضر ہے (Das et al.,2018)۔

نی کے بڑھتے ہوئے واقعات کے ساتھ (نکل)حالیہ برسوں میں آلودگی، نی ٹاکسیکولوجی، بشمول امیونوٹوکسائٹی، ہیپاٹوٹوکسٹی، نیفروٹوکسٹی، اور پلمونری زہریلا، نے بڑھتی ہوئی توجہ مبذول کرائی ہے (گٹھوان ایٹ ال۔ 2020b)۔ دیگردہ، نی میں ایک اہم ہدف کے عضو کے طور پر (نکل)ٹاکسولوجی، Ni کے جمع ہونے کے ساتھ (نکل)اور نی (نکل)دائمی نمائش کے ذریعے اس میں موجود مرکبات گردوں کو اہم نقصان پہنچا سکتے ہیں (ایلنگووان ایٹ ال، 2018)۔ ہماری تحقیقی ٹیم کی موجودہ تحقیق میں آکسیڈیٹیو تناؤ، اپوپٹوسس، سوزش، اور سیل سائیکل گرفتاری کا مظاہرہ کیا گیا ہے۔گردہبرائلرز کی طرف سے NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2) 300 mg/kg سے زیادہ کھانے میں (Guo et al, 2014, 2016a,2016b)۔ متعدد مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ نی رینل ٹاکسیکولوجی کے طریقہ کار میں آکسیڈیٹیو نقصان، ڈی این اے اسٹرینڈ بریکس، اور اپوپٹوس (لی ایٹ ال، 2001؛ چن ایٹ ال، 2010) شامل ہیں۔

سیلولر ہومیوسٹاسس میں ایک اہم کردار ادا کرنا،آٹوفجیمختلف بیماریوں کے واقعات اور روگجنن کے ساتھ ایک تعلق پایا گیا ہے (مارٹن ایٹ ال، 2019)۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ خلیوں کی موت کو کنٹرول سے باہر یا حد سے زیادہ حوصلہ افزائی کے ذریعہ مداخلت کی جاسکتی ہے۔آٹوفجی(ڈینٹن اور کمار، 2019)۔ ایک پیچیدہ اور انتہائی ترتیب شدہ انٹرا سیلولر عمل کے طور پر،آٹوفجیسائٹوسول اور آرگنیلز (مارٹن ایٹ ال، 2019) کے حصے کو گھیرے ہوئے آٹوفاگوسومز کے نام سے جانے والے ڈبل جھلی والے ویسکلز کی تشکیل سے شروع ہوتا ہے۔ اس کے بعد، آٹوفاگوسوم لیزوزوم میں منتقل ہونے کے بعد لپیٹے ہوئے مادوں کے پروٹولیسس میں حصہ لیتے ہیں۔

آٹوفجیمختلف قسم کے سیلولر تناؤ کے لیے حساس ہے، جیسے کہ نمو یا غذائیت کے عنصر کی کمی، ہائپوکسیا، ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان، ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS)، پروٹین کی جمع، انٹرا سیلولر پیتھوجینز، یا آرگنیلز کو پہنچنے والے نقصان (Dodson et al,2013)۔ یہ ریگولیٹ کرنے کا ایک انتہائی پیچیدہ عمل ہے۔آٹوفجی، جس میں سگنلنگ کے بہت سے راستے شامل ہیں، بشمول اڈینوسین مونو فاسفیٹ ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (AMPK)، فاسفیٹائیڈلینوسیٹول 3-کناز-I(PI3K)، اور ریپامائسن (mTOR) پاتھ ویز (Cao et al2021) کا ممالیہ ہدف۔ اور، ایم ٹی او آر کا راستہ ایک اہم اثر رکھتا ہے۔آٹوفجیآغاز ایم ٹی او آر کی سرگرمی ایک بنیادی چیک پوائنٹ ہے۔آٹوفجی، جس کا روکنے والا اثر یو ایل کے 1 سے نجات کے ڈیفاسفوریلیشن کا باعث بنتا ہے۔آٹوفجیروکنا (Parzvch and Klionsky، 2014)۔ مزید برآں، PI3K/Akt اور AMPK mTOR (Gong et al,2020; Xu et al,2020) کے بڑے اپ اسٹریم ریگولیٹرز ہیں۔ پچھلی دوبارہ تلاشوں نے تجویز کیا کہ بھاری دھاتیں (جیسے سی ڈی، ایچ جی، کیو، اور پی بی) اس کی موجودگی کو جنم دے سکتی ہیں۔آٹوفجی(Su et al, 2017)۔ اگرچہ Huang et al.(2016) اور Son et al. (2017) نے پایا ہے کہ Ni (نکل)نمائش مؤثر طریقے سے آمادہ کر سکتا ہےآٹوفجیbronchial epithelial خلیات میں، عین مطابق طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے،

نی کا اثر (نکل)پرآٹوفجیشاذ و نادر ہی رپورٹ کیا گیا ہے، اور، گردوں پر Ni کے اثرات کے بارے میں صرف چند مطالعات دستیاب ہیں۔آٹوفجیvivo میں چوہوں کی. لہذا، موجودہ کام کا مقصد اس بات کی تصدیق کرنا ہے کہ آیا NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)علاج کی حوصلہ افزائی کر سکتے ہیںآٹوفجیاور NiCl کے ممکنہ طریقہ کار کا جائزہ لینا (نکلکلورائیڈ)- حوصلہ افزائیآٹوفجیبشمول AMPK اور PI3K/AKT/mTOR راستے۔

نکل گردے کو متاثر کرتا ہے اور گردے کی بیماری کا سبب بنتا ہے۔

گردے کی بیماری کے لیے Cistanche پر کلک کریں۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 کیمیکل اور اینٹی باڈیز

نکلکلورائیڈ(NiCl) Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd (Chengdu, China) نے فراہم کیا تھا۔ امیونو بلوٹ تجزیہ میں، تمام اینٹی باڈیز سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی (CST، USA) سے خریدی گئی تھیں، بشمول اینٹی خرگوش مائکروٹوبول سے وابستہ پروٹین1 لائٹ چین 3B(LC3B)(Cat no.43566T)، anti-rabbit p62(SQSTM1)(Cat نمبر 5114D)، اینٹی خرگوش بیکلن 1 (بلی نمبر 3495T)، خرگوش مخالفآٹوفجیمتعلقہ پروٹین12 (Atg12)(Cat no.4180T)، اینٹی خرگوش Atg5(Cat no.12994T)، اینٹی خرگوش Atg16L1(Cat no.8089T)، اینٹی خرگوش Atg7 (Cat no.8558T)، اینٹی خرگوش Atg3 (Cat no.8558T) بلی نمبر 3415T)، اینٹی خرگوش ممالیہ جانور کا ہدف rapamycin (mTOR)(Cat no.2983T)، اینٹی خرگوش p-mTOR(Cat no.5536T)، اینٹی خرگوش unc-51 جیسے کناز 1 (ULK1) )(Cat no.8054D), اینٹی خرگوش p-UIK1(Cat no.5869T), اینٹی خرگوش PI3K(Cat no.4292S), اینٹی خرگوش p PI3K(Cat no.4228T, anti-rabbit Akt(Cat no. .9272S)، اینٹی خرگوش p-Akt (Cat no.4060T)، اینٹی خرگوش mTOR (Cat no.2972S)، اینٹی خرگوش p-mTOR (بلی نمبر 5536S)، اینٹی خرگوش AMPK (بلی نمبر 5831S) )، اینٹی خرگوش p-AMPK (Cat no.2535S)، اور -actin (Cat no.4970T)۔

2.2.جانور اور علاج

Dashuo Biological Technology Company (Chengdu, China) کی طرف سے آٹھ ہفتے کی عمر کے 160 صحت مند نر ICR چوہوں کو فراہم کیا گیا۔ تمام جانوروں کو مستقل حالات (درجہ حرارت 25±2C؛12-ہلکے تاریک چکر) پر ایسپٹک ماحول میں رکھا گیا تھا، اور انہیں معیاری گولیوں کی خوراک اور واٹر ایڈ لیبٹم کے ساتھ کھلایا گیا تھا۔ چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں درجہ بندی کیا گیا تھا، ہر ایک میں سات دن تک موافقت کے بعد چالیس مائکس تھے۔ آست پانی کو انٹراگاسٹرک طریقے سے کنٹرول میں دیا گیا تھا، جبکہ نی (نکل)(NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2).6H2O) 7.5,15، اور 30 ​​mg/kg کی خوراک کے ساتھ تجرباتی گروپوں میں جانوروں کے لیے انٹرا گیسٹرک طور پر فراہم کی گئی تھی۔ نر چوہوں کی شدید زبانی زہریلا پر تحقیق میں حاصل کی گئی اوسط مہلک خوراک (LD50, 306.11 mg/kg) کی قدر کے مطابق نی یہاں اپناتا ہے۔ NiCl (نکلکلورائیڈ),.6HZO تجربات کرنے سے پہلے آست پانی کا استعمال کرکے پتلا کیا گیا تھا۔ چاروں گروپوں کو 28 دنوں کے لیے دن میں ایک بار 1 ملی لیٹر فی 100 گرام جسمانی وزن کی خوراک دی گئی۔ 14 اور 28 دن کے علاج کے بعد، تمام جانوروں کو ان کے جمع کرنے کے لئے انسانی طور پر قربان کیا گیا تھاگردہذیل کے حصوں میں تجزیہ کے لیے نمونے۔ تمام تجرباتی جانور اور طریقہ کار سیچوان ایگریکلچرل یونیورسٹی (منظوری نمبر:2012-024، چینگڈو، چین) میں اینیمل کیئر اور ایتھکس کمیٹی سے منظوری حاصل کرنے کے معاہدے کے بعد کیے گئے تھے۔

2.3۔ گردے کے انڈیکس اور افعال کا تعین

تمام چوہوں کا ہر ہفتے وزن کیا جاتا تھا اور علاج مکمل کرنے کے بعد انسانی طور پر قربانی دی جاتی تھی۔گردےکاٹ کر وزن کیا گیا تھا۔ دیگردہاستعمال شدہ انڈیکس کے درمیان تناسب تھا۔گردہوزن اور جسم کا وزن.

محققین نے چین کے نیننگ جیانچینگ بائیو انجینیئرنگ انسٹی ٹیوٹ (نانجنگ، چین) کے ذریعہ تیار کردہ تجارتی کٹس کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) اور سیرم کریٹینائن (CRE) کی سطح کی پیمائش کی۔

2.4 Ni کے گردے کے جمع ہونے کا تعین (نکل)

گردہتجربے کے دوران 28ویں دن نمونے لیے گئے۔ پھر، 1 mL HCiO، اور 9 mL HNO۔ (Chengdu Kelong Chemical Co.,Ltd., China) کو 24 گھنٹے کے لیے نمونوں کے 0.5 گرام حصے کو زیادہ درجہ حرارت کے خلاف مزاحمت والی ٹیوبوں میں گیلا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ اس کے بعد، ان ٹیوبوں کو تمام مائع بخارات سے باہر نکالنے کے لیے ایک گرم پلیٹ پر رکھا گیا، جس کے بعد 10 mL 0.1 M/L HNO کا استعمال کرتے ہوئے باقیات کو معطل کر دیا گیا۔ اس کے بعد، محققین نے نی کے لحاظ سے نمونوں کا تجزیہ کیا۔ (نکل)شعلہ جوہری جذب سپیکٹرو فوٹومیٹر (AAS700، PerkinElmer، USA) کی مدد سے۔

2.5 ہسٹوپیتھولوجیکل اور الٹراسٹرکچر مشاہدہ

جمع کرنے اور پھر 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ میں طے کرنے کے بعد،گردہنمونوں کو الکحل کے ساتھ پانی کی کمی کی گئی تھی، پیرافین میں سرایت کی گئی تھی، 5 um پر کٹے ہوئے تھے، اور ہیماتوکسیلین اور eosin کے ساتھ داغدار ہونے کے لیے کارروائی کی گئی تھی۔ ایک ڈیجیٹل کیمرہ (Nikon DS-Ri1, Japan) کو ٹکڑوں کا مشاہدہ کرنے اور ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیوں کے لیے تصاویر لینے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ہر ایک کے دس مائکروسکوپک فیلڈزگردہکا جائزہ لیا گیا۔ کاغذ میں دکھائی گئی تصاویر نمائندہ تصویریں تھیں۔

الٹراسٹرکچرل تشخیص کے لیے، 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائیڈ کو درست کرنے کے لیے لاگو کیا گیا تھا۔گردہٹشوز (تقریباً 1 ملی میٹر 5) کمرے کے درجہ حرارت پر۔ اس کے بعد ان ٹشوز کو 1 فیصد اوسمیم ٹیٹرو آکسائیڈ، ایسٹون میں ڈیہائی ڈریٹڈ اور ایپوکسی رال میں سرایت کرنے کے بعد کیا گیا۔ تیار شدہ انتہائی پتلی سلکس کو کاپر گرڈز پر ڈالا گیا اور پھر یورینیل ایسیٹیٹ اور لیڈ ایسیٹیٹ کا استعمال کرتے ہوئے داغ دیا گیا۔ الٹرا سٹرکچر کی تصاویر JEM-1400فلیش ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (JEOL, Japan) کا استعمال کرتے ہوئے کیپچر کی گئیں۔

گردے کے افعال کو بحال اور بہتر بنائیں: cistanche

2.6۔ امیونو ہسٹو کیمیکل

xylene کا استعمال کرتے ہوئے dewaxed ہونے کے بعد، پیرافین کے ٹکڑوں کو ایتھنول محلول کے درجہ بند سیٹ کا استعمال کرکے دوبارہ ہائیڈریٹ کیا گیا۔ اس کے بعد ڈسٹل واٹر اور پی بی ایس سے دھونا، اور EPA کو بجھانے کے لیے 3 فیصد H,O.in میتھانول کا استعمال کرتے ہوئے انکیوبیشن کے ذریعے اینڈوجینس پیرو آکسیڈیز سرگرمیوں (EPAs) کو 15 منٹ تک روکنا۔ اینٹیجن کی بازیافت کو آسان بنانے کے لیے، ہم نے 0 میں 15 منٹ تک مائیکرو ویو ہیٹنگ کے ذریعے سلائسز کا علاج کیا۔ اس کے بعد سلائسیں 4 ڈگری پر راتوں رات بنیادی اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے انکیوبیشن سے گزریں۔ 1 فیصد بایوٹینیلیٹڈ بکری اینٹی خرگوش/ماؤس آئی جی جی سیکنڈری اینٹی باڈی (بوسٹر، ووہان، چین) پی بی ایس کے ساتھ دھوئے گئے ٹکڑوں کو 37 ڈگری پر 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، اور پھر 37 ڈگری پر اسٹریپٹاویڈن بائیوٹین کمپلیکس (SABC؛ Boster) ، ووہان، چین) 30 منٹ تک استعمال کیا گیا۔ اس کے بعد امیونو بینزائڈائن ہائیڈروکلورائیڈ (DAB؛ بوسٹر، ووہان، چین) میں ٹکڑوں کو امیونورییکشن ویژو الائزیشن کے لیے ڈبویا گیا۔ آخر کار، ہیماتوکسیلین کا استعمال کرتے ہوئے ہلکے کاؤنٹرسٹیننگ کے بعد، سلائسوں کو ایتھنول سے پانی کی کمی کی گئی، زائلین سے صاف کیا گیا اور لگاتار نصب کیا گیا۔

انٹیگریٹڈ آپٹیکل ڈینسٹی (IOD) کا استعمال LC3B اور p62 کی پرو ٹین لیول کی مقدار درست کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ IOD قدر کے لیے تجزیاتی طریقہ Fanget al.(2018) کا حوالہ دیا گیا ہے۔ تصاویر لینے کے لیے Nikon DS-Ril ڈیجیٹل مائکروسکوپ کیمرہ سسٹم (جاپان) اپنایا گیا تھا۔ اس کے بعد محققین نے امیج-پرو پلس v6.0 سافٹ ویئر (Media Cy-bernetics Inc, Bethesda, MD, USA) کی مدد سے تجزیہ کے لیے ہر سلائس کی تصاویر کے ہر علاقے میں پانچ فیلڈ (0.064 mm²) کا انتخاب کیا۔ )۔

2.7۔ مغربی دھبہ

سے پروٹین نکالناگردہنمونے RIPA lysis بفر کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیئے گئے تھے، اور BCA پروٹین پرکھ ری ایجنٹ (P0010S، Beyotime Technology، China) حراستی کی پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد SDS-PAGE پروٹین کے نمونوں کے لیے کیا گیا، جو بعد میں نائٹروسیلوز جھلیوں میں منتقل کر دیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لیے 5 فیصد سکمڈ دودھ کا استعمال کرتے ہوئے، جھلیوں کو رات بھر 4 ڈگری پر پرائمری اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا تھا۔ ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس کنججٹیڈ سیکنڈری اینٹی باڈی کو 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، ایک کیمیڈوک XRS کو ECL کٹ (P0018A، بیو ٹائم ٹیکنالوجی، چین) کا استعمال کرتے ہوئے جھلیوں پر پروٹین بینڈ کا پتہ لگانے کے لیے لگایا گیا تھا۔

2.8. مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (qRT-PCR)

گردےایک موسل کا استعمال کرتے ہوئے ایک مارٹر میں مائع نائٹروجن کے ساتھ پیس کر لیا گیا اور پھر کم درجہ حرارت (-80 ڈگری) پر محفوظ کیا گیا، رینل کل RNA کو RNAiso Plus (9108/9109, Takara, Otsu, Japan) کی سفارشات کے بعد نکالا گیا۔ کارخانہ دار اس کے بعد تکمیلی DNA (cDNA) کی ترکیب RR047A Prim-ScriptTM RT ریجنٹ کٹ کے ساتھ جاپان میں Takara کے ذریعہ تیار کردہ ہدایات کے بعد عمل میں آئی۔ اس کے بعد، qRT-PCR لائٹ سائکلر ⑩ 480 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم (بائیو ریڈ، یو ایس اے) اور ایک ایس وائی بی آر پریمکس ایکس ٹاک ٹی ایم آئی آئی کٹ (DRR820A، تکارا، جاپان) کے استعمال سے کیا گیا۔ پی سی آر کے لیے استعمال ہونے والے پرائمر ٹیبل 1 میں درج ہیں۔ -ایکٹین کو جین کے اظہار کو معمول پر لانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور mRNA کے متعلقہ اظہار کا حساب 2-4ac طریقہ (Livak and Schmittgen, 2001) کے ذریعے کیا گیا تھا۔

2.9 شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کا اظہار اوسط ± معیاری انحراف کی شکل میں کیا گیا تھا اور LSD یا Dunnett کے T3 تغیرات کے تجزیہ کے ذریعے تجزیہ کیا گیا تھا۔ SPSS سافٹ ویئر (ورژن 22۔{2}}, IBM Corp, Armonk, NY, USA) ونڈوز کے تمام شماریاتی تجزیوں کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ پی<0.05 represents="" a="" significant="">

جدول 1: مطالعہ میں استعمال ہونے والے پرائمر کی ترتیب،

3. نتائج

3.1.NiClz (نکلکلورائیڈ)گردوں کی تقریب کو متاثر کرتا ہے۔

جیسا کہ تصویر 1A میں دکھایا گیا ہے، NiCl2 کے ساتھ علاج کیے گئے تین گروپوں میں جسمانی وزن میں کمی واقع ہوئی۔ (نکلکلورائیڈ 2). اور، کے رشتہ دار وزن میں بھی نمایاں کمی پائی گئی۔گردہ(P<0.05) in="" the="" 30="" mg/kg="" group="" at="" 28="" days="" (fig.="">

سیرم CRE اور BUN کو رینل فنکشن کے لیے معیاری بائیو مارکر کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ رینل فنکشن کے نتائج تصویر 1C اور D میں دکھائے گئے تھے، اور CRE اور BUN کے ارتکاز میں نمایاں اضافہ ہوا تھا (P<0.05)in the=""> (نکلکلورائیڈ 2)14 اور 28 دنوں میں علاج کرنے والے گروپس کنٹرول میں ہیں۔

Fig.1E سے پتہ چلتا ہے کہ تین نی (نکل)علاج کے گروپوں میں گردے میں Ni کی نمایاں طور پر بڑی تعداد ہوتی ہے (P<0.05)compared to="" the="">

3.2 NiCl (نکلکلورائیڈ)- گردے کے ہسٹوپیتھولوجیکل تغیرات کو آمادہ کرتا ہے۔

تصویر 2 سے پتہ چلتا ہے کہ NiClz (نکلکلورائیڈ)علاج کی وجہ سے ہسٹوپیتھولوجیکل تغیراتگردہخوراک اور وقت کے ساتھ، سوجن گلوومیرولس کے ساتھ ساتھ تنگ کیپسولر جگہ، ویکیولر، اور رینل ٹیوبلر اپیٹیلیم میں دانے دار انحطاط شامل ہے۔

تصویر 2. NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)گردے میں ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں لاتا ہے۔

ہسٹوپیتھولوجیکل گھاووں میں سوجن گلومیرولس کے ساتھ تنگ کیپسولر اسپیس (*)، ویکیولر ڈیجنریشن (سیاہ تیر) اور رینل نلی نما اپکلا میں دانے دار انحطاط (سفید تیر) شامل تھے۔ HE سٹیننگ، اسکیل بار=50 µm۔

3.3.NiCl (نکلکلورائیڈ)آٹوفجی کو اکساتا ہے اور گردے میں آٹوفجی سے متعلق جینز اور پروٹین کو بڑھاتا ہے۔

LC3 اور p62 کے اہم بائیو مارکر ہیں۔آٹوفجی(Gomez-San-chez et al..2016)۔ کنٹرول کے ساتھ مقابلے میں، تین NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2) علاج کے گروپوں نے LC3-I/I (P< 0.05)on="" days="" 14="" and="" 28,="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" the="" protein="" level="" of="">< 0.05)(fig.3a-c).="" inconsistent="" with="" the="" protein="" experiment="" results,="" relative="" to="" the="" control="" group(fig.="" 3d="" and="" e),="" the="" treatment="" groups="" showed="" significantly="" increased="" mrna="" expression="" level="" of="" lc3=""><0.05)and significantly="" decreased="" mrna="" expression="" level="" of=""><0.05). otherwise,="">آٹوفجیاس مطالعہ میں TEM کا عزم بھی ہے۔ جیسا کہ تصویر 3F میں دکھایا گیا ہے، TEM مشاہدات سے پتہ چلتا ہے کہ NiCl2 کے بعد گردوں کے بافتوں میں آٹولیسومز کی تعداد میں اضافہ ہوا ہے۔ (نکلکلورائیڈ 2)ایکسپوژر.

تصویر 3. NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)چوہوں کے گردے میں آٹوفیجی کو بڑھاتا ہے۔

(A) LC3 اور p62 کے مغربی دھبے کے نتائج۔ (B, C) LC3-II/I اور p62 کی مقدار (DE) LC3 اور p62 کا mRNA اظہار۔ (ف)

قربت والے کنولوٹیڈ ٹیوبول کے اپکلا سیل کا الٹراسٹرکچرل ڈھانچہ (دائیں اعداد و شمار جو بائیں اعداد کی جزوی توسیع کو ظاہر کرتے ہیں؛ کالے تیر جو آٹولیسووم ڈھانچے کی نشاندہی کرتے ہیں)۔

اقدار ± معیاری انحراف (n {{0}}) کے ذرائع کے ساتھ پیش کی جاتی ہیں۔ مختلف حروف کے ساتھ نشان زد کالم اہم فرق ہیں (P <>

مزید برآں، امیونو ہسٹو کیمسٹری کا استعمال LC3B اور p62 کے پروٹین کی سطح کی پیمائش کے لیے کیا گیا تھا۔گردہموجودہ مطالعہ میں ٹشو. جیسا کہ تصویر 4 میں دکھایا گیا ہے، مثبت خلیات بھورے داغدار ہیں، اور LC3B اور p62 بنیادی طور پر گردوں کی نالی کے اپکلا خلیوں کے سائٹوپلازم میں ظاہر کیے گئے تھے۔ کنٹرول کے مقابلے میں، LC3B کی IOD اقدار میں نمایاں اضافہ ہوا (P< 0.05)in="" the="" three="" groups="" treated="" with=""> (نکلکلورائیڈ) 14 اور 28 دن۔ اس کے علاوہ، p62 کی IOD قدروں میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P< 0.05)in="" these="" three="" treatment="" groups="" on="" days="" 14="" and="" 28="" when="" in="" comparison="" with="" the="">

تصویر 4. چوہوں کے گردے میں LC3B اور p62 کے امیونو ہسٹو کیمسٹری کے نتائج۔

(A) LC3B کی امیونو ہسٹو کیمسٹری امیجز۔ (اسکیل بار=50 µm) (B) p62 کی امیونو ہسٹو کیمسٹری امیجز (اسکیل بار=50 µm)

(C) LC3B کی مربوط نظری کثافت (IOD)۔ (D) p62 کی مربوط نظری کثافت (IOD)۔

اقدار ± معیاری انحراف (n {{0}}) کے ذرائع کے ساتھ پیش کی جاتی ہیں۔ مختلف حروف کے ساتھ نشان زد کالم اہم فرق ہیں (P <>

جینز اور پروٹین سے متعلقآٹوفجیاور میں ملوثآٹوفجیNiCl کے اثرات کی مزید تصدیق کے لیے بہاؤ کی پیمائش کی گئی۔ (نکلکلورائیڈ) پرآٹوفجی. ان میں Beclin1, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7, اور Atg3 (Li and Zhang.2019; Nishimura and Tooze, 2020) شامل تھے۔ جیسا کہ Fig.5A-C میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول کے مقابلے میں، نی کے علاج کے گروپس (نکل)Beclinl، Atg5، Atg12، Atg16L1، Atg7، اور Atg3 (P) کے پروٹین کی نمایاں طور پر اعلی سطح دکھائیں<0.05)on days="" 14="" and="" 28.="" additionally,="" the="" treatment="" groups="" of="" ni="" also="" exhibited="" significantly="" elevated="" mrna="" expressions="" of="" beclin1,="" atg5,="" atg12,="" atg16l1,="" atg7,="" and=""><0.05)on days="" 14="" and="" 28="" of="" the="" experiment="" (fig.6d-e)relative="" to="" the="">

تصویر 5. NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)چوہوں کے گردے میں آٹوفجی سے متعلق جینز اور پروٹین کو بڑھاتا ہے۔

(A) Beclin1، Atg5، Atg12، Atg16L1، Atg7، اور Atg3 کے مغربی دھبے کے نتائج۔ (B&G) Beclin1، Atg5، Atg12، Atg16L1، Atg7، اور Atg3 پروٹین اظہار کی مقدار کا تعین۔

(HM) Beclin1، Atg5، Atg12، Atg16L1، Atg7، اور Atg3 کا mRNA اظہار۔ اقدار ± معیاری انحراف (n=8) ​​کے ذرائع کے ساتھ پیش کی جاتی ہیں۔ مختلف حروف کے ساتھ نشان زد کالم اہم فرق ہیں (P <>

3.4.NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)گردے میں PI3K/Akt/mTOR اور AMPK کے راستوں کو آمادہ کرتا ہے۔

ایم ٹی او آر کا لازمی ریگولیٹر ہے۔آٹوفجی(Wang et al.,2017)۔اور mTOR کے اچھی طرح سے قائم اپ اسٹریم ریگولیٹر راستوں میں PI3K/Akt اور AMPK (Gong et al..2020:Xu et al..2020) شامل ہیں۔ اس طرح، اس مطالعہ نے AMPK اور PI3K/Akt راستوں کے پروٹین کی پیمائش کی۔

جیسا کہ Fg.6Aand B ظاہر کرتا ہے کہ p-PI3K، p-AKT، اور p-mTOR کی پروٹین کی سطح میں نمایاں کمی پائی گئی< 0.05)in="" the="" three="" groups="" treated="" with=""> (نکلکلورائیڈ 2)کنٹرول کے حوالے سے تجربے کے 14 اور 28 دنوں پر۔ علاج کے گروپوں نے p-AMPK اور p-ULK1 کی پروٹین کی سطح نمایاں طور پر زیادہ (P<0.05)than those="" of="" the="" control="" on="" days="" 14="" and="" 28.="" it="" can="" be="" seen="" from="" fig.6="" chat,="" compared="" to="" the="" control.="" the=""> (نکلکلورائیڈ 2)-علاج گروپوں میں PI3K، AKT، اور mTOR (P) کے mRNA اظہار میں نمایاں کمی پائی گئی۔<0.05)on days="" 14="" and="" 28.="" ampk="" and="" ulk1="" of="" the="" treatment="" groups="" showed="" significant="" increases="" in="" mrna="">< 0.05)on="" days="" 14="" and="" 28="" in="" comparison="" with="" the="" control.="">یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں۔آٹوفجیNiCl2 کی طرف سے حوصلہ افزائی (نکلکلورائیڈ 2)ماؤس کڈنی میں AMPK اور PI3K/Akt/mTOR راستے شامل ہیں۔

تصویر 6. NiCl2 (نکلکلورائیڈ 2)چوہوں کے گردوں میں PI3K/Akt/mTOR اور AMPK سگنلنگ پاتھ ویز کو آمادہ کرتا ہے۔

(A) p-PI3K، PI3K، p-AKT، AKT، p-AMPK، AMPK، p-mTOR، mTOR، p-ULK1، اور ULK1 کے مغربی دھبے کے نتائج۔

(BF) p-PI3K/PI3K، p-AKT/AKT، p-AMPK/AMPK، p-mTOR/mTOR، اور p-ULK1/ULK1 پروٹین اظہار کی مقدار کا تعین۔ (جی، کے)

PI3K، AKT، AMPK، mTOR، اور ULK1 کا mRNA اظہار۔ قدروں کو ذرائع ± معیاری انحراف (n=8) کے ساتھ پیش کیا جاتا ہے۔ مختلف حروف کے ساتھ نشان زد کالم اہم فرق ہیں (P <>

حصہ کے لیے یہاں کلک کریں۔Ⅱ