بڑی آنت کے کینسر کے موثر علاج کے لیے TLR Agonist اور CD47-SIRP چیک پوائنٹ بلاکڈ کے ساتھ Liposome-based Co-Immunotherapy

خلاصہ:

اینٹیٹیمر استثنیٰ کینسر کے علاج کا ایک لازمی جزو ہے اور بنیادی طور پر پیدائشی مدافعتی ردعمل کے ذریعے ثالثی کی جاتی ہے، جو مدافعتی ردعمل کو شروع کرنے اور تشکیل دینے میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ ابھرتے ہوئے شواہد نے پیدائشی مدافعتی چوکیوں اور پیٹرن کی شناخت کرنے والے ریسیپٹرز، جیسے CD47 اور ٹول نما رسیپٹر 7 (TLR7) کی نشاندہی کی ہے، جو کینسر کے علاج کے لیے امید افزا علاج کے اہداف کے طور پر ہیں۔ فیوژن پروٹین Fc-CV1 کی بنیاد پر، جس میں ایک اعلی وابستگی SIRP متغیر (CV1)، اور انسانی IgG1 اینٹی باڈی کے Fc ٹکڑے پر مشتمل ہے، ہم نے ایک ایسی تیاری کا استحصال کیا جس نے Fc-CV1 کو imiquimod (TLR7 agonist) سے جوڑا۔ CILPs) فعال طور پر CT26 کو نشانہ بنانے کے لیے۔ WT syngeneic کولون ٹیومر ماڈل۔ وٹرو اسٹڈیز میں انکشاف ہوا ہے کہ CILPs نے مفت امیکوموڈ کے مقابلے میں اعلی پائیدار ریلیز خصوصیات اور سیل اپٹیک کی کارکردگی کی نمائش کی۔ Vivo میں، assays نے ثابت کیا کہ CILPs نے ٹیومر میں زیادہ موثر جمع ہونے اور کنٹرول گروپس کے مقابلے میں زیادہ اہم ٹیومر دبانے والے اثر کی نمائش کی۔ اس امیونو تھراپی کی تیاری میں کم خوراک اور کم زہریلا ہونے کے فوائد تھے۔ ان نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ امیون چیک پوائنٹ ناکہ بندی (ICB) تھراپی اور فطری قوت مدافعت کا ایک مجموعہ، جیسے Fc-CV1 اور imiquimod-loaded liposome کی تیاری جو اس مطالعے میں استعمال کی گئی ہے، ٹیومر کے علاج کے لیے ایک انتہائی موثر حکمت عملی کی نمائندگی کر سکتی ہے۔

cistanche tubulosa-Antitumor کے فوائد

مطلوبہ الفاظ:

imiquimod liposome Fc-CV1; امیونو تھراپی؛ بڑی آنت کا کینسر

1. تعارف

کینسر کے عالمی واقعات میں سالانہ اضافہ جاری ہے، جو دنیا کی آبادی کی صحت کے لیے ایک سنگین خطرہ ہے اور صحت کی دیکھ بھال کے نظام پر بہت زیادہ بوجھ ڈال رہا ہے۔ عالمی ادارہ صحت کی رپورٹ کے مطابق 2020 میں دنیا بھر میں کینسر کے 19.29 ملین نئے کیسز اور کینسر سے 9.96 ملین اموات ہوئیں [1]۔ تاہم، طبی تشخیص، سرجری، ریڈیو تھراپی، اور کیموتھراپی میں مسلسل ترقی کے ساتھ، کینسر کے مریضوں کی مجموعی بقا اور معیار زندگی میں نمایاں بہتری آئی ہے۔ خاص طور پر، امیونو تھراپی، جو 1890 کی دہائی میں کولی ویکسین کے ساتھ شروع ہوئی تھی [2]، ریڈیو تھراپی اور کیموتھراپی دونوں سے پہلے کی ہے اور اس نے گزشتہ دہائی میں اہم پیش رفت کی ہے، جس سے کینسر کے مریضوں کو فائدہ پہنچا ہے۔

ٹیومر امیونو تھراپی کو اس کی بہترین بائیو کمپیٹیبلٹی اور اعلیٰ خصوصیت کے لیے تسلیم کیا گیا ہے اور یہ ٹیومر کے خلیوں کو ختم کرنے کے لیے مدافعتی ردعمل پیدا کرنے کی صلاحیت رکھتی ہے [3–5]۔ ٹیومر امیونو تھراپی کے لئے دو اہم حکمت عملی ہیں مدافعتی اضافہ اور مدافعتی معمول [6]۔ قوت مدافعت بڑھانے کے نمونے بنیادی طور پر سائٹوکائن تھراپی، ٹیومر کے علاج کی ویکسین، اور مونوکلونل اینٹی باڈیز پر مشتمل ہوتے ہیں۔ ٹول نما رسیپٹرز (TLRs) کو پیدائشی مدافعتی نظام کو فعال کرنے میں ان کے کردار کی وجہ سے کینسر امیونو تھراپی کا ممکنہ ہدف سمجھا جاتا ہے۔ TLR agonists کو ایک مدافعتی معاون کے طور پر تیار کیا گیا ہے، اور TLR agonists کی ایک قسم کلینیکل ٹرائلز سے گزر رہی ہے [7]۔ Monophosphoryl lipid A اور imiquimod، TLR4، اور TLR7 agonists، بالترتیب، طبی درخواست [7-9] کے لیے فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن سے منظوری حاصل کر چکے ہیں۔ Imiquimod، ایک TLR7 agonist [9]، مدافعتی ردعمل کو چالو کرتا ہے اور TLR7 [10,11] کو متحرک کرکے ٹیومر مخالف سرگرمی کو بڑھاتا ہے۔ مدافعتی نظام کو معمول پر لانے کی حکمت عملی کی نمائندگی امیون چیک پوائنٹ ناکہ بندی (ICB) ادویات کے ذریعے کی جاتی ہے جو ٹیومر کے مدافعتی ردعمل کو درست کرتی ہیں۔ پہلے چیک پوائنٹ انحیبیٹرز کے بعد سے، ipilimumab کو 2011 میں USA میں کلینیکل ایپلی کیشن کے لیے منظور کیا گیا تھا، مدافعتی چیک پوائنٹ انحیبیٹرز، جیسے PD1/PDL1 inhibitors، نے کینسر کے امیونو تھراپی [12–14] میں ایک پیش رفت کی ہے۔ PD1/PDL1 سے ملتے جلتے مدافعتی چوکیوں کے علاوہ، کچھ پیدائشی مدافعتی چوکیاں، جیسے SIRP-CD47، نے بھی بہت زیادہ توجہ مبذول کی ہے اور اینٹی باڈی منشیات کی نشوونما [15-17] میں اہم دلچسپی کے شعبے بن گئے ہیں۔

SIRP -CD47 چوکی کی شناخت پہلی بار 1999 [18,19] میں ہوئی تھی۔ SIRP ایک CD47 ریسیپٹر ہے جس کا اظہار مرکزی اعصابی نظام کے نیوران [20] اور مائیلوڈ خلیات میں ہوتا ہے، بشمول مونوسائٹس، میکروفیجز، گرینولوسائٹس، اور ڈینڈریٹک خلیات۔ CD47 ایک "خود لیبلنگ مالیکیول" ہے جس کا اظہار تقریباً تمام عام خلیات پر ہوتا ہے اور زیادہ تر ٹیومر خلیوں پر ظاہر ہوتا ہے [21]۔ ٹیومر کے خلیات کی سطح پر، CD47 SIRP سے منسلک ہوتا ہے، جو میکروفیج میں ثالثی فگوسیٹوسس کو روکتا ہے، جو ٹیومر کے مدافعتی فرار کا ایک اہم ذریعہ ہے [22]۔ یہ دکھایا گیا ہے کہ ٹیومر مائیکرو ماحولیات کے اندر میکروفیجز کی فگوسائٹوسس کو اس وقت بڑھایا جا سکتا ہے جب CD47 اور SIRP کی بائنڈنگ کو بلاک کیا جاتا ہے [20-25]۔ لہذا، مدافعتی چوکی روکنے والے جو CD47/SIRP راستے کو روکتے ہیں، تیار کیے گئے ہیں اور کینسر کے علاج میں لاگو کیے گئے ہیں [26]۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

اس مطالعہ میں، ہم نے بڑی آنت کے کینسر کے علاج کے لیے imiquimod اور فیوژن پروٹین (Fc-CV1) کا ایک مجموعہ استعمال کیا۔ CV1 ایک ترمیم شدہ انسانی ریکومبیننٹ SIRP پروٹین ہے جس کی اصل پروٹین سے CD47 کے لیے 50،{{4}گنا زیادہ تعلق ہے [27]۔ Fc-CV1 کو "Knobs-into-holes" ٹیکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا تھا، جس کی بنیاد CV1 مونومر اور انسانی IgG1 کے Fc ٹکڑے پر تھی۔ imiquimod [28,29] کے ساتھ منسلک غریب علاج کی افادیت اور نظاماتی زہریلا کی حدود پر قابو پانے کے لئے، ہم نے ایتھنول انجکشن کے طریقہ کار کے ذریعہ نانولیپوسومز تیار کیے. نانولیپوسوم میں منشیات کی ترسیل میں کم زہریلا کی خصوصیات ہیں [30,31]۔ اس کے بعد، imiquimod کو liposomes میں سمیٹ لیا گیا جس کی سطح Fc-CV1 کو جوڑ دیتی ہے۔ آخر میں، یہ ناول نینو تیاری فعال طور پر TLR7 agonists کو ٹیومر ٹشوز تک پہنچا سکتا ہے اور ICB دوائی اور TLR agonist کے طور پر دوہری افعال رکھتا ہے۔ یہ CD47+ CT26.WT syngeneic کولون ٹیومر ماڈل [32] کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

2. نتائج اور بحث

2.1 LPs (خالی لیپوسومز)، ILPs (نان-CD47-ٹارگیٹڈ Imiquimod-Encapsulated Liposomes)، CLPs (CD47 ٹارگٹڈ Liposomes)، اور CILPs (کپلڈ Fc-CV1 سے Imiquimod (TLR7 ایگونسٹ) - لوڈ شدہ)

CILPs کو کامیابی کے ساتھ ایتھنول انجیکشن اور امونیم سلفیٹ گریڈینٹ طریقہ سے تیار کیا گیا۔ شکل 1A CILPs کی ترکیب کے عمل کو دکھاتا ہے۔ ایک TEM تجزیہ نے یہ ظاہر کیا کہ CILPs کروی اور شکل میں یکساں تھے (شکل 1B)۔ مزید برآں، ڈی ایل ایس کے نتیجے سے یہ بات سامنے آئی کہ چار لیپوسومز کے ذرہ کا سائز یکساں تقسیم (شکل 1C) تھا۔ بائنڈنگ ریٹ (BR) کی تصدیق SDS-PAGE کے ذریعے کی گئی تھی، جو کہ شکل 1D، E میں دکھائی گئی ہے۔ شکل 1D Fc-CV1 کا مالیکیولر وزن اور ڈائیلائزڈ اور پری ڈائیلائزڈ CILPs کے رشتہ دار بینڈ کی چمک کو ظاہر کرتا ہے۔ BR کا تخمینہ 67.13 ± 37.10% امیج جے کی الیکٹروفوریٹک بینڈز (شکل 1E) کی اسکیننگ ڈینسٹومیٹری کے ذریعے کیا گیا تھا، جس سے ٹیومر سیلز کو نشانہ بنانے والے CD47-کا امکان ملتا ہے۔

شکل 1. (A) CILPs کی ترکیب کی منصوبہ بندی کی مثال۔ (B) CILPs کی TEM تصویر

HPLC کا استعمال imiquimod (ضمنی اعداد و شمار S1) کی encapsulation Efficiency (EE) کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ سپلیمنٹری فگر S1A میں دکھایا گیا ہے، مفت imiquimod نے ایک اہم سنگل چوٹی دکھائی، جبکہ CLPs نے اسی ٹیسٹ کے حالات (ضمنی اعداد و شمار S1B) کے تحت کوئی چوٹی نہیں دکھائی۔ لہذا، ٹیسٹ کے حالات میں براہ راست CILPs کا پتہ لگانا ممکن ہے۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، ڈائیلاسز سے پہلے اور بعد میں CILPs کی کھوج کی قدروں کو بالترتیب لیپوسومز میں منشیات کے کل مواد اور منشیات کے مواد کے طور پر شمار کیا گیا تھا (ضمنی اعداد و شمار S1C، D)۔ imiquimod کا EE 85.44 ± 4.11% شمار کیا گیا۔ رپورٹ شدہ غیر فعال لوڈنگ ڈرگ ڈیلیوری سسٹم [33–35] کے مقابلے میں، اس مطالعے نے اعلی انکیپسولیشن کی کارکردگی اور زیادہ آسان تیاری کا عمل حاصل کیا۔

DLS نے ظاہر کیا کہ LPs کا قطر 111.567 ± 0.655 nm تھا، جب کہ CLPs، ILPs، اور CILPs نے 117.467 ± 0.34{{10 کا تھوڑا بڑا سائز دکھایا۔ }nm، 120.233 ± 0.776 nm، اور 13{{30}۔{38}}33 ± 0.974 nm، بالترتیب (ٹیبل 1)۔ ان لیپوسومز کے سائز میں ہونے والی تبدیلیوں کو Fc-CV1 اور imiquimod کی ترمیم سے منسوب کیا جا سکتا ہے۔ PDI 0.1 (ٹیبل 1) کے قریب تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ منشیات کی ترسیل کرنے والی یہ گاڑیاں اپنی تقسیم میں انتہائی یکساں تھیں۔ مزید برآں، LPs، CLPs، ILPs، اور CILPs کی zeta-ممکنہ اقدار کو −2.231 ± 0.167 mV، −2.492 ± 0.033 mV، −2.383 ± 0.070 mV، اور −2.07 ± قابل احترام (−2.07 ± 070 mV) ناپا گیا۔ ، یہ تجویز کرتا ہے کہ سطح سے منسلک Fc-CV1 اور encapsulated imiquimod کا liposomes کے چارج پر بہت کم اثر پڑتا ہے۔

ٹیبل 1۔ بالترتیب LPs، CLPs، ILPs، اور CILPs کے قطر، زیٹا پوٹینشل، PDI، اور EE۔

2.2 وٹرو سیل اپٹیک ایفیشنسی میں

CILPs کے سیل اپٹیک کی کارکردگی کا اندازہ Cy5 کی فلوروسینس شدت کے ذریعے کیا گیا جو CT26.WT سیلز کے ذریعے ہائی-کونٹنٹ امیجنگ سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے لیا گیا۔ جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے، مفت Cy5 اور ILP-Cy5 گروپس کے مقابلے میں، CILPs-Cy5 گروپوں نے 30 منٹ کے انکیوبیشن کے بعد سیل کے زیادہ سے زیادہ اٹھانے کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا۔ ان نتائج نے اندازہ لگایا کہ Fc-CV1 نے Fc-CV1 ریسیپٹر سے مخصوص تعلق کی وجہ سے imiquimod-loaded liposomes کی انٹرا سیلولر ڈیلیوری کی صلاحیت کو بڑھایا، جس کے نتیجے میں ٹیومر مخالف اثر زیادہ مضبوط ہوا۔

شکل 2. مفت Cy5، ILPs-Cy5، اور CILPs-Cy5 (سرخ) کے ساتھ انکیوبیشن کے بعد CT26.WT خلیوں کی تصاویر 0.5 h کے لیے، اور DAPI (نیلے) کے ساتھ داغ۔ اسکیل بار: 50 µm۔ (n {{10}})۔ * p <0.05; **** p <0.0001

2.3 لیپوسومز کے منحنی خطوط جاری کریں۔

فری imiquimod، ILPs اور CILPs کے منشیات کی رہائی کے منحنی خطوط کو ویوو ماحول میں نقلی انداز میں ماپا گیا۔ شکل 3 سے پتہ چلتا ہے کہ مفت imiquimod کو مکمل طور پر 1 گھنٹے کے بعد جاری کیا گیا تھا، جبکہ imiquimod کی رہائی کی شرح (RR) جو ILPs اور CILPs کے ساتھ شامل تھی صرف 54.75 ± 4 تھی۔{8}}12 گھنٹے پر 8% اور 39.70 ± 0.05% بالترتیب مزید برآں، ILPs اور CILPs میں imiquimod کی سست ریلیز کو liposomes کے کنٹرول شدہ منشیات کی رہائی کی خاصیت کے ساتھ بند کیا جا سکتا ہے۔ ILPs اور CILPs میں imiquimod کے RR نے 96 h پر کوئی خاص فرق نہیں دکھایا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ "پوسٹ انسریشن" نے لیپوسومز کی جھلی کے استحکام پر نہ ہونے کے برابر اثر ظاہر کیا۔

پی بی ایس میں 37 ◦C پر مفت imiquimod، ILPs، اور CILPs کے Imiquimod ریلیز کروز۔ ڈیٹا کو ذرائع کے طور پر پیش کیا جاتا ہے ± معیاری انحراف (n=3)۔ * p < 0۔{5}}5، ** p <0.01

2.4 سائٹوٹوکسٹی اسٹڈی

وٹرو میں CILPs کی cytotoxicity کا مطالعہ کرنے کے لیے، CCK{{0}} پرکھ CT26.WT سیلز پر کی گئی تھی۔ جیسا کہ شکل 4 میں دکھایا گیا ہے، کم ارتکاز (0.1–1 µg/mL) پر CILPs نے سائٹوٹوکسیٹی کی نمائش نہیں کی، جو امیونائزیشن تھراپی کی حفاظت کے مطابق ہے۔ 5 µg/mL imiquimod علاج کے بعد سیل کی عملداری میں قدرے کمی واقع ہوئی، شاید ROS اور endoplasmic reticulum-mediated immunogenic سیل کی موت کی وجہ سے imiquimod [36]۔ مزید یہ کہ، CILPs کنٹرول گروپس کے مقابلے سیل کی قابل عملیت میں نمایاں کمی کا باعث بنتے ہیں، جس کی وجہ imiquimod اور Fc-CV1 کے ہم آہنگی کے اثر سے ہے۔

شکل 4. Fc-CV1، imiquimod، CLPs، ILPs، اور CILPs کے ساتھ 24 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے خلیوں کی عملداری۔ Fc-CV1 اور imiquimod دونوں کا ارتکاز 0–10 µg/mL تھا۔ * p < 0.05, ** p <0.01, ns=کوئی خاص فرق نہیں

2.5 بایو ڈسٹری بیوشن اسٹڈی

ٹیومر اور بڑے اعضاء میں مختلف فارمولیشنز کی تقسیم اور جمع ہونا براہ راست علاج کے اثر کو متاثر کرتا ہے۔ انٹراوینس ایڈمنسٹریشن کے بعد، 24 گھنٹے کے بعد ٹیومر اور بڑے اعضاء میں مختلف فارمولیشنز کی تقسیم اور جمع ہونے کا اندازہ لگانے کے لیے قریب کے انفراریڈ ویوائزیشن سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس سگنلز کی نگرانی کی گئی۔ جیسا کہ شکل 5 میں دکھایا گیا ہے ILPs-Cy5 اور CILPs-Cy5 کی کل فلوروسینس کی شدت مفت Cy5 سے زیادہ تھی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ vivo میں liposomes کے پاس طویل گردش کرنے والی خاصیت ہے۔ اس کے علاوہ، CILPs-Cy5 ٹریٹمنٹ گروپ کی فلوروسینس کی شدت ٹیومر ٹشو میں سب سے زیادہ تھی، جو Fc-CV1 ligands کے ٹیومر کو نشانہ بنانے والے اثر سے منسوب کی جا سکتی ہے، اس طرح اینٹی ٹیومر اثر میں اضافہ ہوتا ہے۔ حیرت انگیز طور پر، جگر اور تلیوں کی فلوروسینس کی شدت دوسرے اعضاء کے مقابلے میں زیادہ قوی تھی، جو شاید جگر اور گردے میں reticuloendothelial نظام (RES) کے ذریعے liposomes کے phagocytosis کی وجہ سے ہے [37]۔

شکل 5. ٹیومر اور بڑے اعضاء میں سائی5-فلوریسنس کی تقسیم 24 گھنٹے بعد نس کے ذریعے۔ ڈیٹا کو بطور ذریعہ دکھایا گیا ہے ± معیاری انحراف (n=3)۔ **** p < 0.0001

2.6۔ Vivo ٹیومر روکنا مطالعہ میں

علاج کا نظام الاوقات (شکل 6A) اور مختلف تیاریوں کے اثرات کو شکل 6 میں دکھایا گیا ہے۔ PBS اور LP گروپوں کے مقابلے میں، دوسرے علاج کے گروپوں نے ٹیومر کو دبانے والے بعض اثرات ظاہر کیے ہیں۔ خاص طور پر، CILPs کے ساتھ علاج کے بعد ٹیومر کا حجم کم سے کم تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ CILPs میں ٹیومر دبانے والا ایک بہترین اثر ہوتا ہے (شکل 6B)۔

شکل 6. (A) CT26.WT ٹیومر ماڈل پر بڑی آنت کے کینسر کے علاج کی اسکیمیٹک مثال۔ (B) علاج کی مدت کے دوران ٹیومر کے حجم کے بڑھنے کے منحنی خطوط۔ (C) رشتہ دار ٹیومر کی تصاویر اور (D) ٹیومر کا وزن 17 ویں دن مختلف علاج گروپوں سے جمع کیا گیا۔ (E) 0 دن کے مقابلے میں جسمانی وزن کا رشتہ دار جسمانی وزن کا تناسب۔ ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف (n=5) کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ * p < 0۔{8}}5, ** p < 0.01, *** p <0.001.

تجربے کے اختتام پر، چوہوں کی قربانی دی گئی اور ان کے ٹیومر کو الگ کیا گیا، ان کی تصویر کشی کی گئی اور مختلف تیاریوں کی علاج کی افادیت کا تعین کرنے کے لیے وزن کیا گیا۔ جیسا کہ شکل 6C، D میں دکھایا گیا ہے، CILPs کے ٹریٹمنٹ گروپ میں دوسرے گروپوں کے مقابلے میں سب سے چھوٹے اور ہلکے ٹیومر تھے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ CILPs میں ٹیومر کو دبانے والے سب سے زیادہ اثرات ہیں۔ جدول 2 سے پتہ چلتا ہے کہ CILPs کی ٹیومر کی نشوونما کی روک تھام کی شرح 84.35٪ تھی۔ اس کے علاوہ، 84.35% ٹیومر دبانے کی شرح CLPs اور ILPs گروپوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی، اور اس کا مطلب یہ ہے کہ "مجھے مت کھاؤ" کے محور کو روکنے اور مدافعتی ردعمل کو چالو کرنے کا ایک ہم آہنگی اثر ہے۔ . وٹرو میں مساوی تیاری (2.5–5 µg/mL) کے مقابلے میں، اعلیٰ روک تھام کی شرح کا گہرا تعلق فارمولیشن سے چلنے والے مدافعتی ردعمل سے تھا اور اس نے Vivo میں مدافعتی فرار کے طریقہ کار کو روک دیا، جو وٹرو میں دستیاب نہیں تھا۔

ٹیبل 2. مختلف علاج گروپوں کے ٹیومر کے وزن اور ٹیومر کی ترقی کی روک تھام (TGI) کا ڈیٹا۔

2.7۔ CILPs نے T-Cell میں دراندازی اور IFN کے اخراج میں اضافہ کیا۔

ٹیومر کے مدافعتی خلیوں کے ماحول کو تلاش کرنے کے لئے، CILPs کے ذریعہ حوصلہ افزائی کرنے والے مدافعتی سیل کا اینٹی ٹیومر پرکھ کے اختتام پر امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ کیا گیا تھا۔ CILPs گروپس (شکل 7) کے ٹیومر حصوں میں CD4+ اور CD8+ T خلیات میں اضافہ کیا گیا تھا۔ Fc-CV1 اور imiquimod تھراپی کی مشترکہ ترسیل کے نتیجے میں اہم CD4+ اور CD8+ T سیل کی دراندازی ہوئی۔ اس کے علاوہ، CILPs کے علاج سے گزرنے والے ٹیومر میں ایک اہم IFN سراو تھا، جس کی وجہ یہ تھی کہ CILPs نے ٹول نما رسیپٹر 7 کو متحرک کیا اور مدافعتی ردعمل کو چالو کیا۔

تصویر 7. ماؤس ٹیومر ٹشوز کی امیونو ہسٹو کیمسٹری؛ مثبت خلیات بھورے رنگ کے ہوتے ہیں۔ اسکیل بار، 50 µm (n=5)۔

2.8۔ CILPs کا بائیو سیکیورٹی اسسمنٹ

CILPs کی ثالثی تھراپی کی بائیو سیفٹی بھی علاج کی تشخیص تک رسائی کے لحاظ سے ایک اہم اشاریہ تھا۔ Vivo میں ٹیومر کی روک تھام کے مطالعہ کے دوران، CILPs نے علاج کی مدت میں وزن میں نمایاں کمی نہیں کی (شکل 6D)۔ جگر اور گردے کے بائیو کیمیکل پیرامیٹرز چوہوں کی معیاری حوالہ رینج (ٹیبل 3) کے مطابق تمام نارمل رینج میں تھے، اور اعضاء کی ہسٹولوجی میں کوئی خاص تبدیلیاں نہیں آئیں، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ CILPs بہترین حیاتیاتی تحفظ کے حامل ہیں (شکل 8)۔ یہ نتائج کینسر کے علاج کے لیے ایک محفوظ اور موثر مدافعتی ایجنٹ کے طور پر CILPs کی صلاحیت کا اندازہ لگانے میں اہم ہیں۔

جدول 3. جگر اور گردے کے بائیو کیمیکل پیرامیٹرز

تصویر 8. H&E (ہیماتوکسیلین اور eosin) اہم اعضاء پر داغ پڑنا۔ اسکیل بار، 50 µm (n=3)

3. مواد اور طریقے

3.1 مواد

Imiquimod MedChem ایکسپریس (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ Fc-CV1 ریاستی کلیدی لیبارٹری آف اینٹی باڈی ڈرگز اینڈ ٹارگیٹڈ تھراپی کے ذریعے فراہم کیا گیا تھا۔ کولیسٹرول، ہائیڈروجنیٹڈ لیسیتھن (HSPC)، DSPE-PEG2000، DSPE-PEG2000-NHS، اور DSPE-PEGCy5 کو Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (Si'an, China) سے خریدا گیا تھا۔ 40،6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Keygen Biotech (Nanjing, China) سے حاصل کیے گئے تھے۔ امونیم سلفیٹ سینوفرم (شنگھائی، چین) سے حاصل کیا گیا تھا۔ میتھانول (کرومیٹوگرافک گریڈ) اور ایسٹونیٹرائل (کرومیٹوگرافک گریڈ) علاء الدین ریجنٹ کمپنی (شنگھائی، چین) سے خریدے گئے تھے۔ دوسرے ری ایجنٹس تمام گھریلو تجزیاتی گریڈ کے ہیں۔ ماؤس کولون کینسر سیل لائن CT26۔ WT چینی اکیڈمی آف سائنس کے سیل بینک نے فراہم کیا تھا۔ خلیوں کو RPMI 1640 میڈیم میں سیل انکیوبیٹر میں اگایا گیا تھا جس میں 10% FBS (تھرمو فشر سائنٹیفک، نیو یارک، NY، USA) 5% CO2 اور 95% ہوا موجود تھی۔ پینگیو لیبارٹری اینیمل بریڈنگ کمپنی لمیٹڈ (جنان، چین) کے ذریعے 4-6 ہفتوں کے مادہ BALB/c چوہوں کو فراہم کیا گیا تھا۔

3.2 خالی لیپوسومز کی تیاری

سب سے پہلے، 13.455 ملی گرام HSPC، 4.3595 mg DSPE-PEG2000، اور 4.7095 mg کولیسٹرول کو درست طریقے سے وزن کیا گیا اور 0.1 mL ایتھنول میں تحلیل کیا گیا (HSPC: DSPE-PEG2000:{12} cholesterol. 5.05:39.3 داڑھ کا تناسب)۔ دوم، ایتھنول محلول کو سرنج کے ذریعے پہلے سے گرم امونیم سلفیٹ محلول (250 mM, 1 mL, 65 ◦C) میں تیزی سے انجکشن کیا گیا اور پھر مقناطیسی ہلچل کے ساتھ 65 ◦C پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، تیار شدہ محلول کو پولی کاربونیٹ جھلیوں (Avanti, Alabaster, AL, USA) کے ذریعے یکے بعد دیگرے نکالا گیا۔ سائز بالترتیب 200 nm، 100 nm، اور 50 nm تھا۔ آخر میں، نتیجے میں حل 22.5 mg/mL کی لپڈ حراستی کے ساتھ خالی liposomes (LPs) تھا۔

3.3 CD47 ٹارگٹڈ Imiquimod-Encapsulated Liposomes کی تیاری

سب سے پہلے، DSPE-PEG2000-NHS کو ddH2O (60 ◦C) میں تحلیل کیا گیا اور پھر Fc-CV1 کے ساتھ ملایا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 5 گھنٹے (Fc-CV1:DSPEPEG2000- کے لیے ہلاتے ہوئے ٹیبل میں رکھا گیا۔ NHS=12:1 داڑھ کا تناسب)۔ Fc-CV1 اور DSPE-PEG2000-NHS کے درمیان تعلق کے کیمیائی رد عمل کے طریقہ کار میں Fc-CV1 پر پرائمری امائن کے ساتھ NHS ایسٹر کا رد عمل شامل تھا اور اس نے ایک ٹیبل امائن بانڈ کنجوگیٹ تشکیل دیا۔ تیار شدہ محلول کو متناسب طور پر ایل پی کے ساتھ ملایا گیا اور 1 گھنٹے کے لیے 60 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا تاکہ Fc-CV1 کو liposomes میں داخل کیا جا سکے، جسے "پوسٹ انسرشن" کا نام دیا گیا تھا [38]۔ مرکب کا تناسب یہ تھا کہ 2.25 ملی گرام Fc-CV1 فی 22.5 ملی گرام لیپوسومز میں ترمیم کی گئی تھی۔ اس کے بعد CD47 ٹارگٹڈ لیپوسومز (CLPs) حاصل کیے گئے۔

اس کے بعد، CLPs کو ڈائیلاسز بیگ (300 kDa) میں رکھا گیا اور HEPES (10 mM، pH=7.4) کے خلاف 1 گھنٹے کے لیے ڈائلائز کیا گیا تاکہ بیرونی پانی کے مرحلے میں امونیم سلفیٹ اور بقایا Fc-CV1 کو ہٹایا جا سکے۔ ڈائلائزڈ سی ایل پیز کو 24 گھنٹے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر 1 ملی گرام سے 7 µmol کل فاسفولیپڈس کے تناسب سے imiquimod محلول (5 mg/mL) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر PBS (300 kDa) کے خلاف تین بار ڈائلائز کیا گیا تاکہ غیر منقطع imiquimod کو ختم کیا جا سکے۔ امونیم سلفیٹ گریڈینٹ تکنیک [39]۔ اس کے بعد CILPs حاصل کیے گئے۔ مزید برآں، غیر CD47-ٹارگیٹڈ imiquimod-encapsulated liposomes (ILPs) تیار کیے گئے تھے۔ CLPs اور ILPs کو CILPs کے لیے کنٹرول سمجھا جاتا تھا۔

3.4 خصوصیت

ان لیپوسومز کی مورفولوجی کو ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (TEM، Joel، Tokyo، Japan) کے ساتھ تصویر کیا گیا تھا۔ ان لیپوسومز کے سائز، زیٹا پوٹینشل، اور پولیمر ڈسپرسٹی انڈیکس (PDI) کا تعین مالورن کے زیٹا سائزر ZSE (Malvern, UK) کا استعمال کرتے ہوئے ڈائنامک لائٹ سکیٹرنگ (DLS) اور الیکٹروفوریٹک لائٹ سکیٹرنگ (ELS) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ Liposomes میں داخل کردہ Fc-CV1 کی بائنڈنگ ریٹ (BR) کی پیمائش 15% سوڈیم لوریل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس (SDS-PAGE) اور امیج J سافٹ ویئر (Bethesda, MD, USA) سے کی گئی۔ imiquimod کی encapsulation Efficiency (EE) کا پتہ ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC، Thermo Fisher Scientific، New York, NY, USA) کے ذریعے کیا گیا۔

cistanche tubulosa-Antitumor کے فوائد

3.5 وٹرو سیل اپٹیک اسٹڈی میں

ان لیپوسومز کے ان وٹرو سیل اپٹیک کا تعین CT26 میں Cy5 کی مجموعی فلوروسینس شدت سے کیا گیا تھا۔ ڈبلیو ٹی سیل۔ DSPE-PEG-Cy5 کو CILPs اور ILPs (DSPE-PEG-Cy5: CILPs یا ILPs=1:5 بڑے پیمانے پر تناسب) کے ساتھ بالترتیب 60 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے، اور پھر فلوروسینٹ لیپوسومز CILPs-Cy5 اور ILPs-Cy5 کے نام سے حاصل کیے گئے تھے۔ CT26.WT سیلز کو 96-کنویں کی پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا اور تصادفی طور پر تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا (1 × 104 سیل/کنواں، n=3)۔ سیل کا سنگم 50-70٪ تک پہنچنے کے بعد، ہر گروپ کو مفت Cy5، ILPs-Cy5، اور CILPs-Cy5 کے ساتھ بالترتیب، 30 منٹ کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا، جس میں Cy5 کی حتمی تعداد 1 µg/mL تھی۔ 0.1 ملی لیٹر RPMI 1640 میڈیم۔ اس کے بعد، PBS کے ساتھ دو بار دھونے کے بعد 15 منٹ کے لیے خلیوں کو 4% paraformaldehyde کے ذریعے متحرک کیا گیا اور پھر PBS کے ساتھ دو بار دھونے کے بعد 10 منٹ کے لیے 10 µL DAPI (1 µg/µL) سے داغ دیا گیا۔ آخر میں، پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھونے کے بعد، خلیات کے ہر گروپ کے اپٹیک کو ایک اعلی مواد کے امیجنگ سسٹم (مالیکیولر ڈیوائسز، سنی ویل، CA، USA) کے ذریعے ریکارڈ کیا گیا۔

3.6۔ Imiquimod ریلیز اسٹڈی

مختلف دوائیوں سے لدے لیپوسومز کے ریلیز کروز کو ڈائلیسس طریقہ (300 kDa) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا، اور نتائج کا موازنہ مفت imiquimod محلول سے کیا گیا تھا۔ مختصراً، 0.6 ملی لیٹر ILPs، CILPs، اور imiquimod محلول کو الگ الگ ڈائلیسس بیگز میں پیک کیا گیا اور پھر 500 mL PBS محلول (pH=7.4, 37 ◦C) میں رکھا گیا۔ نمونوں کی مساوی مقداریں پہلے سے طے شدہ وقت کے وقفوں (0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, اور 96 h), اور رہائی کی شرح (RR) پر تھیلوں سے نکالی گئیں۔ imiquimod کا حساب درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

جہاں سنڈ اور ایس ڈی نے بالترتیب مختلف اوقات میں پہلے سے ڈائیلائزڈ اور ڈائیلائزڈ تیاریوں میں امیکوموڈ کے HPLC چوٹی کے علاقے کی نمائندگی کی (n=3)۔

3.7۔ CILPs کی سائٹوٹوکسٹی

CT{{0}}.WT خلیات کو ایک 96-کنویں پلیٹ (1 × 104/کنواں، n=3) میں سیڈ کیا گیا اور سنگم ہونے تک RPMI 1640 میڈیم کے 100 µL میں کاشت کیا گیا۔ قریب سے 70٪ تک پہنچ گیا۔ CILPs کی cytotoxicity کا تعین کرنے کے لیے، RPMI 1640 میڈیم کو ہر کنویں سے ہٹا دیا گیا اور CILPs اور RPMI 1640 میڈیم کے پیچیدہ حل کے ساتھ تبدیل کیا گیا، جس میں Fc-CV1 اور imiquimod کی تعداد 0 سے 10 µg/mL تک تھی۔ خلیوں کو 24 گھنٹوں کے لئے ایک پیچیدہ حل کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، Fc-CV1، CLPs، imiquimod محلول، اور ILPs کے ساتھ اسی طرح کے ارتکاز میں علاج کیے جانے والے خلیوں کو کنٹرول گروپ سمجھا جاتا تھا۔ زندہ بچ جانے والے خلیوں کا پتہ 24 گھنٹے کے بعد CCK-8 پرکھ کے ساتھ کیا گیا، اور علاج نہ کیے جانے والے خلیوں کی عملداری کو 100% سمجھا گیا۔

3.8۔ بایو ڈسٹری بیوشن اسٹڈی

نو خواتین BALB/c چوہوں کو CT26 کے ساتھ subcutaneous طور پر انجکشن لگایا گیا تھا۔ WT خلیات (5 × 105 ) دائیں طرف میں اور ان ٹیومر والے چوہوں کو تصادفی طور پر تین گروہوں میں تقسیم کیا گیا تھا (n=3)۔ ٹیومر کے حجم کو کیلیپرز کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا اور درج ذیل فارمولے سے اس کا حساب لگایا گیا:

جب ٹیومر کا حجم 100 mm3 تک پہنچ گیا، مفت Cy5، ILP-Cy5، اور CILPs-Cy5 کو 0.4 mg/kg کی Cy5 کی خوراک پر نس کے ذریعے انجکشن لگایا گیا۔ چوبیس گھنٹے بعد نس کے ذریعے ٹیومر، دل، جگر، تلی، پھیپھڑے اور گردے کو نکالا گیا۔ ٹیومر اور اہم اعضاء کے فلوروسینس سگنلز کا پتہ IVIS آپٹیکل امیجنگ سسٹم (IVIS Lumina LT III، PerkinElmer، Waltham، MA, USA) کے ذریعے لگایا گیا تھا۔

3.9 Vivo ٹیومر روکنا مطالعہ میں

پینتیس خواتین BALB/c چوہوں کو تصادفی طور پر سات گروپوں (n=5)، اور 5 × 105 CT26 میں تقسیم کیا گیا تھا۔ WT خلیوں کو ہر ماؤس کے دائیں حصے میں subcutaneously انجکشن لگایا گیا تھا۔ جب ماؤس ٹیومر کا سائز تقریبا 100 mm3 تھا، علاج شروع کیا گیا تھا. PBS, LPs, imiquimod, Fc-CV1, ILPs, CLPs اور CILPs کو 0، 4، 8 اور 12 دنوں میں نس کے ذریعے انجکشن لگایا گیا تھا۔ پہلے اور دوسرے انجیکشن میں imiquimod کی خوراک 2.5 mg/kg اور 5 mg/kg تھی۔ تیسرے اور چوتھے انجیکشن میں۔ تمام انجیکشن میں، Fc-CV1 کی خوراک 5 ملی گرام/کلو گرام تھی۔ اس خوراک پر، جسم میں منشیات کا ارتکاز 2.5–5 µg/mL تھا، جس نے وٹرو تجربے میں خلیات پر سائٹوٹوکسائٹی کا استعمال کیا۔ علاج کے دوران ٹیومر کے قطر اور جسمانی وزن کی پیمائش ہر روز کی جاتی تھی۔ 17 ویں دن چوہوں کے ٹیومر نکالے گئے اور ان کا وزن ناپا گیا۔ ٹیومر کی ترقی کی روک تھام (TGI) کا حساب درج ذیل فارمولے کے مطابق کیا گیا تھا۔

3.10 امیونو ہسٹو کیمسٹری

CD4، CD8، اور IFN کی امیونو ہسٹو کیمسٹری سٹیننگ ایک معیاری پروٹوکول کے مطابق ٹیومر ٹشوز میں کی گئی تھی۔ ٹیومر ٹشوز کے حصوں کے پیرافین سیکشن کو ڈیپرافینائز کرنے اور ری ہائیڈریٹ کرنے کے بعد، ٹشو کو ڈھانپنے کے لیے دائرے میں 3% BSA شامل کیا گیا، اور پھر اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ کے لیے سیل کر دیا گیا۔ حصوں کو CD4، CD8، اور IFN اینٹی باڈیز (Servicebio، Wuhan, China) سے راتوں رات 4 ◦C پر داغ دیا گیا تھا، اور پھر 50 منٹ کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر سیکنڈری اینٹی باڈی (HRP کا لیبل لگا ہوا، Servicebio، ووہان، چائنا) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پی بی ایس کے ساتھ دو دھونے کے بعد۔ آخر میں، DAB کروموجینک ایجنٹ کے ساتھ رد عمل ظاہر کرنے کے بعد حصوں کو خوردبین (Nikon, E100, Tokyo, Japan) کے نیچے دیکھا گیا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

3.11۔ CILPs کا بائیو سیکیورٹی اسسمنٹ

ٹیومر کی روک تھام کے مطالعے کے اختتام پر، تمام ٹیومر جمع کیے گئے، اور ان ٹیومر کا وزن ناپا گیا۔ بائیو کیمیکل پیرامیٹرز، بشمول الانائن ٹرانسامینیز (ALT)، اسپارٹیٹ ٹرانسامینیز (AST)، کریٹینائن (CREA)، اور یوریا (UREA)، چوہوں کے خون میں پائے گئے۔ تازہ ٹیومر کے ٹشوز اور بڑے اعضاء کو 4% پیرافارمیلڈہائیڈ کے ساتھ فکس کیا گیا تھا اور ایمبیڈنگ مشین (ووہان جنجی الیکٹرانکس، JB-P5، ووہان، چین) کا استعمال کرتے ہوئے پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا۔ 5 µm کی موٹائی والے ٹشو سلائسز کو مائکروٹوم (Leica Instrument, RM2016, Shanghai, China) کے ذریعے کاٹا گیا اور پھر پروٹوکول کے مطابق ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) سے داغ دیا گیا۔ اس کے بعد، داغدار ٹکڑوں کو ایک خوردبین (نیکون، ای 100، ٹوکیو، جاپان) کے نیچے دیکھا گیا۔

3.12۔ شماریاتی تجزیہ

تمام ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ گروپوں کے درمیان اہمیت کی سطح کو گراف پیڈ پرزم 8 کا استعمال کرتے ہوئے یک طرفہ ANOVA کے ذریعے جانچا گیا۔{2}}.2۔ p < 0.05 کو ایک اہم فرق کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔

3.13۔ جانوروں کی اخلاقیات

جانوروں سے متعلق تمام طریقہ کار اور سفارشات کو لیوچینگ یونیورسٹی کی سائنسی تحقیقی اخلاقیات کی خصوصی کمیٹی نے لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے قومی رہنما خطوط پر عمل کرتے ہوئے منظور کیا تھا (منظوری کوڈ: 2022111010؛ منظوری کی تاریخ: 1 نومبر 2022)۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

4. نتائج

خلاصہ طور پر، imiquimod-encapsulated CD47-ٹارگیٹڈ لائپوسومز کو کامیابی کے ساتھ تیار کیا گیا تھا، اور ان وٹرو نتائج نے ثابت کیا کہ CILPs ایک بہتر پائیدار ریلیز اور مخصوص ہدف سازی کے اثر کے حامل ہیں۔ Vivo کے نتائج سے ظاہر ہوا کہ تیاری کو ٹیومر کے خلیات کے ذریعے مؤثر طریقے سے لیا جا سکتا ہے اور یہ کہ مدافعتی ردعمل کے دوہرے کام اور پیدائشی مدافعتی چوکی کی ناکہ بندی کی وجہ سے اس نے ٹیومر کے علاج کی بہترین کارکردگی اور حیاتیاتی تحفظ کا مظاہرہ کیا۔ لہذا، Fc-CV1 کے ساتھ مل کر imiquimod-encapsulated liposomes CD47 اظہار ٹیومر کے علاج کو بہتر بنانے کے لیے نئی نینو میڈیسن کا وعدہ کر رہے ہیں۔ پیدائشی قوت مدافعت پر مبنی امیونو تھراپی مستقبل میں ICB کے ساتھ ہم آہنگی کے لیے ٹیومر کی نشوونما کے خلاف ایک عمومی حکمت عملی کے طور پر کام کر سکتی ہے۔

حوالہ جات

1. سنگ، ایچ. فیرلے، جے؛ سیگل، آر ایل؛ Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; جیمل، اے. Bray, F. عالمی کینسر کے اعدادوشمار 2020: عالمی سطح پر 185 ممالک میں 36 کینسر کے واقعات اور اموات کا گلوبوکن تخمینہ۔ CA کینسر جے کلین۔ 2021، 71، 209–249۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. کارلسن، آر ڈی؛ فلکنگر، جے سی، جونیئر؛ اسنوک، اے ای ٹاکن ٹاکسنز: کولیز سے لے کر جدید کینسر امیونو تھراپی تک۔ ٹاکسنز 2020، 12، 241۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. بربری، ج. فونٹین، ٹی. پیراجولی، پی. لامیچھانے، این۔ Jakubski, S.; Lamichhane، P.؛ دیشمکھ، آر آر امیونو تھراپیز اور امیونو آنکولوجی کے لیے امتزاج کی حکمت عملی۔ انٹر جے مول سائنس 2020، 21، 5009۔ [کراس ریف]

4. ہیگڑے، پی ایس؛ چن، ڈی ایس کینسر امیونو تھراپی میں ٹاپ 10 چیلنجز۔ استثنیٰ 2020، 52، 17–35۔ [کراس ریف]

5. جین، کے کے پرسنلائزڈ امیونو آنکولوجی۔ میڈ. پرنس پریکٹس 2021، 30، 1-16۔ [کراس ریف]

6. Sanmamed، MF؛ چن، ایل. کینسر امیونو تھراپی میں پیراڈائم شفٹ: افزائش سے نارملائزیشن تک۔ سیل 2018، 175، 313–326۔ [کراس ریف]

7. حسین، ڈبلیو ایم؛ لیو، ٹی وائی؛ Skwarczynski، M. Toth, I. Toll-like Receptor Agonists: A Patent Review (2011–2013)۔ ماہرانہ رائے۔ وہاں پیٹ 2014، 24، 453–470۔ [کراس ریف]

8. چی، ایچ. لی، سی. زاؤ، ایف ایس؛ ژانگ، ایل. این جی، ٹی بی؛ جن، جی؛ شا، O. ٹول لائک ریسیپٹر 7 ایگونسٹس کی اینٹی ٹیومر سرگرمی۔ سامنے والا۔ فارماکول۔ 2017، 8، 304۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

9. وانگ، وائی؛ Zhang, S.; لی، ایچ. وانگ، ایچ. ژانگ، ٹی. ہچنسن، ایم آر؛ ین، ایچ. وانگ، X. ٹول لائک ریسیپٹرز کے چھوٹے مالیکیول ماڈیولرز۔ اے سی سی کیم Res. 2020، 53، 1046–1055۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

10. لی مرسیئر، I.؛ پوجول، ڈی. سانلاویل، اے. Sisirak، V.؛ گوبرٹ، ایم؛ ڈیورنڈ، I.؛ Dubois, B.; Treilleux, I.; مارول، جے؛ ولاچ، جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. انٹراٹومورل پلازمیسیٹائڈ ڈینڈرٹک سیلز کے ذریعہ ٹیومر کا فروغ Tlr7 Ligand علاج کے ذریعہ الٹ جاتا ہے۔ کینسر ریس 2013، 73، 4629–4640۔ [کراس ریف]

11. ما، ف. ژانگ، جے؛ ژانگ، جے؛ Zhang, C. Tlr7 Agonists Imiquimod اور Gardiquimod چوہوں میں میلانوما کے لیے DC پر مبنی امیونو تھراپی کو بہتر بناتے ہیں۔ سیل مول امیونول۔ 2010، 7، 381–388۔ [کراس ریف]

12. بلان، ایس. Kaidar-Person, O.; Gil, Z. امیونو تھراپی کے دور میں ترقی کے بعد علاج۔ لینسیٹ آنکول۔ 2020, 21, e463–e476۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. ڈارون، ص. تور، ایس ایم؛ سسیدھرن نائر، وی۔ ایلکورڈ، ای امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز: حالیہ پیشرفت اور ممکنہ بائیو مارکر۔ ختم مول میڈ. 2018، 50، 1-11۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. لی، بی. چان، ایچ ایل؛ چن، پی. امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز: بنیادی باتیں اور چیلنجز۔ کرر میڈ. کیم 2019، 26، 3009–3025۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

15. جیا، ایکس۔ یان، بی؛ تیان، ایکس؛ لیو، Q. جن، جے؛ ش، جے؛ Hou, Y. Cd47/Sirpalpha پاتھ وے کینسر کے مدافعتی فرار اور امیونو تھراپی میں ثالثی کرتا ہے۔ انٹر J. Biol سائنس 2021، 17، 3281–3287۔ [کراس ریف]

16. سوبودا، ڈی ایم؛ سیلمین، ڈی اے دی وعدہ آف میکروفیج ڈائریکٹڈ چیک پوائنٹ انحیبیٹرز ان مائیلوڈ خرابی۔ بہترین پریکٹس اور ریسرچ۔ کلین ہیماتول۔ 2020، 33، 101221۔

17. لینٹز، آر ڈبلیو؛ کولٹن، ایم ڈی؛ مترا، ایس ایس؛ میسرزمتھ، ڈبلیو اے انیٹ امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز: میڈیکل آنکولوجی میں اگلی پیش رفت؟ مول کینسر وہاں۔ 2021، 20، 961–974۔ [کراس ریف]

18. جیانگ، پی. لگنور، سی ایف؛ Narayanan, V. Integrin-Associated Protein P84 Neural Adhesion Molecule کے لیے ایک Ligand ہے۔ J. Biol کیم 1999، 274، 559–562۔ [کراس ریف]

19. Seiffert، M.؛ کینٹ، سی. چن، زیڈ؛ Rappold, I.; برگر، ڈبلیو. کنز، ایل۔ براؤن، EJ؛ الریچ، اے. بوہرنگ، ایچ جے ہیومن سگنل ریگولیٹری پروٹین کا اظہار نارمل پر ہوتا ہے، لیکن لیوکیمک مائیلوڈ سیلز کے ذیلی سیٹوں پر نہیں اور اس کے کاؤنٹر ریسیپٹر Cd47 پر مشتمل سیلولر آسنجن میں ثالثی کرتا ہے۔ خون 1999، 94، 3633–3643۔ [کراس ریف]

20. متلونگ، ایچ ایل؛ Szilagyi, K.; بارکلے، این اے؛ وین ڈین برگ، ٹی کے دی سی ڈی47-سرپالفا سگنلنگ ایکسس کینسر میں ایک پیدائشی مدافعتی چیک پوائنٹ کے طور پر۔ امیونول۔ Rev. 2017, 276, 145–164. [کراس ریف] [پب میڈ]

21. اولڈن بورگ، PA؛ Zheleznyak, A.; Fang, YF; لگنور، سی ایف؛ گریشام، ایچ ڈی؛ لنڈبرگ، خون کے سرخ خلیات پر خود کے مارکر کے طور پر Cd47 کا FP کردار۔ سائنس 2000، 288، 2051–2054۔ [کراس ریف]

22. لی، زیڈ. لی، وائی؛ گاو، جے؛ فو، وائی۔ ہوا، پی. Jing, Y.; Cai، M. وانگ، ایچ. ٹونگ، ٹی. ٹیومر امیون ایویژن اور پیدائشی امیونو تھراپی میں سی ڈی47-سرپالفا امیون چیک پوائنٹ کا کردار۔ لائف سائنس. 2021، 273، 119150۔ [کراس ریف]

23. حیات، ایس ایم جی؛ بیانکونی، وی. پیرو، ایم؛ جعفری، ایم آر؛ حاتمی پور، ایم. صاحبکر، A. Cd47: مدافعتی نظام میں کردار اور کینسر کے علاج کے لیے درخواست۔ سیل اونکول۔ 2020، 43، 19-30۔ [کراس ریف]

24. ہوانگ، Y.؛ ما، وائی۔ گاو، پی. یاو، زیڈ ٹارگٹنگ Cd47: کینسر امیونو تھراپی پر موجودہ مطالعات کی کامیابیاں اور خدشات۔ J. Thorac ڈس 2017, 9, E168–E174۔ [کراس ریف]

25. ژانگ، ڈبلیو. ہوانگ، Q. Xiao, W. زاؤ، وائی؛ پائی، جے؛ سو، ایچ. زاؤ، ایچ. سو، جے؛ ایونز، عیسوی؛ جن، ایچ سی ڈی 47/سرپالفا محور کو نشانہ بناتے ہوئے اینٹی ٹیومر علاج میں پیشرفت۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 2020، 11، 18۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

26. لیو، ایکس۔ Pu, Y.; کرون، کے؛ ڈینگ، ایل. کلائن، جے؛ Frazier, WA; سو، ایچ. پینگ، ایچ. فو، وائی ایکس؛ Xu, MM Cd47 ناکہ بندی امیونوجینک ٹیومر کی T سیل میں ثالثی تباہی کو متحرک کرتی ہے۔ نیٹ میڈ. 2015، 21، 1209–1215۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

27. ویسکوف، K.؛ رنگ، AM؛ ہو، سی سی؛ وولکمر، جے پی؛ لیون، AM؛ وولکمر، اے کے؛ اوزکان، ای. Fernhoff، NB؛ وین ڈی رجن، ایم؛ ویس مین، آئی ایل؛ ET رحمہ اللہ تعالی. اینٹی کینسر اینٹی باڈیز کے لیے امیونوتھراپیٹک ایڈجیوینٹس کے طور پر انجینئرڈ سرپالفا ویریئنٹس۔ سائنس 2013، 341، 88-91۔ [کراس ریف]

28. Xiong، Z.؛ Ohlfest، JR ٹاپیکل Imiquimod میں انٹراکرینیل ٹیومر کے خلاف علاج اور امیونوموڈولیٹری اثرات ہیں۔ J. Immunother. 2011، 34، 264–269۔ [کراس ریف]

29. کامتھ، ص. ڈارون، ای. اروڑہ، ایچ. نوری، K. Imiquimod تھراپی پر ایک جائزہ اور بیسل سیل کارسنوماس کے بہترین انتظام پر بحث۔ کلین منشیات کی تحقیقات۔ 2018، 38، 883–899۔ [کراس ریف]

30. لیو، وائی؛ کاسترو براوو، کے ایم؛ لیو، جے ٹارگٹڈ لیپوسومل ڈرگ ڈیلیوری: ایک نینو سائنس اور بائیو فزیکل تناظر۔ نانوسکل ہوریز۔ 2021، 6، 78-94۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

31. فرجادیان، ف. قاسمی، اے. گوہری، او۔ Roointan, A.; کریمی، ایم. ہیمبلن، ایم آر نینو فارماسیوٹیکلز اور نینو میڈیسنز فی الحال مارکیٹ میں: چیلنجز اور مواقع۔ نینو میڈیسن 2019، 14، 93–126۔ [کراس ریف]

32. چاؤ، ایکس۔ جیاؤ، ایل۔ Qian, Y.; ڈونگ، Q. سورج، Y. زینگ، ڈبلیو. زاؤ، ڈبلیو. Zhai, W. کیو، ایل. وو، وائی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. Azelnidipine کو دوہری روکنے والے کے طور پر ٹارگٹنگ Cd47/Sirpalpha اور Tigit/Pvr پاتھ ویز کو کینسر امیونو تھراپی کے لیے تبدیل کرنا۔ بائیو مالیکیولز 2021، 11، 706۔ [کراس ریف]

33. نی، کے. لوو، ٹی. کلبرٹ، اے. کافمین، ایم. جیانگ، ایکس؛ لن، ڈبلیو نانوسکل میٹل-آرگینک فریم ورک Tlr-7 Agonists اور Anti-Cd47 اینٹی باڈیز کو میکروفیجز اور آرکسٹریٹ کینسر امیونو تھراپی کو ماڈیول کرنے کے لیے فراہم کرتا ہے۔ جے ایم کیم Soc 2020، 142، 12579–12584۔ [کراس ریف]

34. چن، Q.؛ Xu, L.; لیانگ، سی. وانگ، سی. پینگ، آر. Liu, Z. مؤثر کینسر امیونو تھراپی کے لئے چیک پوائنٹ بلاکڈ کے ساتھ مدافعتی معاون نینو پارٹیکلز کے ساتھ فوٹو تھرمل تھراپی۔ نیٹ کمیون 2016، 7، 13193۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

35. وی، جے؛ لانگ، وائی۔ گو، آر. لیو، ایکس؛ تانگ، ایکس؛ راؤ، جے؛ ین، ایس. ژانگ، Z. لی، ایم؛ وہ، Q. آرتھوٹوپک اور میٹاسٹیٹک بریسٹ کینسر کے موثر علاج کے لیے امیون چیک پوائنٹ بلاکیڈ کے ساتھ ملٹی فنکشنل پولیمرک مائیکل پر مبنی کیمو امیونو تھراپی۔ ایکٹا فارم۔ گناہ بی 2019، 9، 819–831۔ [کراس ریف]

36. ہوانگ، SW؛ وانگ، ایس ٹی؛ چانگ، ایس ایچ؛ چوانگ، KC؛ وانگ، ایچ وائی؛ کاو، جے کے؛ لیانگ، ایس ایم؛ وو، سی وائی؛ کاو، ایس ایچ؛ چن، وائی جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. Imiquimod امیونوجینک سیل کی موت کو دلانے کے ذریعہ اینٹی ٹیومر اثرات کا استعمال کرتا ہے اور گلائکولٹک انحیبیٹر 2-ڈی آکسی گلوکوز کے ذریعہ بڑھایا جاتا ہے۔ J. تحقیقات۔ ڈرمیٹول 2020, 140, 1771–1783.e6۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

37. وانگ، بی. وہ، ایکس۔ ژانگ، Z. زاؤ، وائی؛ Feng, W. Vivo میں نینو میٹریلز کا میٹابولزم: خون کی گردش اور اعضاء کی صفائی۔ اے سی سی کیم Res. 2013، 46، 761–769۔ [کراس ریف]

38. اختری، جے. رضایات، ایس ایم؛ تیموری، ایم؛ علویزادہ، ایس ایچ؛ گھیبی، ایف۔ بدی، اے. جعفری، ایم آر ٹارگٹنگ، بایو ڈسٹری بیوٹیو اور ٹیومر کی افزائش کو روکتا ہے اینٹی ہیر2 ایفی باڈی کپلنگ ٹو لیپوسومل ڈوکسوروبیسن بلب/سی مائس بیئرنگ ٹیوبو ٹیومر کے استعمال سے۔ انٹر جے فارم۔ 2016، 505، 89-95۔ [کراس ریف]

39. ووڈل، ایم سی؛ Papahadjopoulos، D. Liposome تیاری اور سائز کی خصوصیت. انزیمول کے طریقے۔ 1989، 171، 193–217۔ [پب میڈ]