بہت سے مطالعات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ الرجک بیماریاں نہ صرف پیدائشی مدافعتی ایکٹیویشن کا نتیجہ ہیں۔

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ:مستول کے خلیے جلد کی الرجی اور سوزش میں بہت اہم کردار ادا کرتے ہیں، بشمول atopic dermatitis اور psoriasis۔ ماضی میں، یہ پایا گیا تھا کہ حوالہ جلد پر سوزش اور اینٹی ایجنگ اثرات رکھتا ہے، لیکن مستول خلیوں پر اس کے اثرات کا ابھی تک تفصیل سے مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے مستول خلیات (RBL-2H3 خلیات) اور ماؤس ماڈلز کا استعمال کیا تاکہ حوالہ کے اینٹی الرجک اور سوزش کے اثرات کا مطالعہ کیا جا سکے۔ سب سے پہلے، ہم نے محسوس کیا کہ حوالہ مستول خلیوں کی تنزلی اور سائٹوکائنز کے اظہار کو روکتا ہے۔ اس کے علاوہ، ہم نے مشاہدہ کیا کہ جب مستول خلیوں کو A23187/phorbol 12-myristate-13-acetate (PMA) کے ذریعے متحرک کیا گیا تھا، تو انٹرا سیلولر کیلشیم کی بلندی کو حوالہ کے ذریعہ روک دیا گیا تھا۔ MAPK/NF-KB پاتھ وے کا فاسفوریلیشن بھی حوالہ سے پہلے کے علاج سے کم ہوتا ہے۔ ان ویوو اسٹڈیز کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ حوالہ ڈائنیٹروکلوروبینزین (DNCB) کی وجہ سے ہونے والی جلد کی سوزش اور ماسٹ سیل کی دراندازی کی ظاہری شکل کو بہتر بنا سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، جلد میں رکاوٹ پروٹین کے اظہار کو بھی بحال کیا جاتا ہے.cistanchآخر میں، یہ پتہ چلا کہ حوالہ کمپاؤنڈ 48/80 کی وجہ سے کھرچنے والے رویے کو کم کر سکتا ہے۔ ایک ساتھ لے کر، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ حوالہ ایک بہت اچھا اینٹی الرجک اور اینٹی سوزش قدرتی پروڈکٹ ہے۔ مستول خلیوں پر اس کا اثر اس کے فارماسولوجیکل میکانزم میں حصہ ڈالتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:حوالہ؛ قدرتی مصنوعات؛ مستول سیل؛ جلد کی سوزش؛ خارش زدہ

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

بہت سے مطالعات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ الرجی کی بیماریاں نہ صرف پیدائشی مدافعتی ایکٹیویشن کا نتیجہ ہیں بلکہ انکولی ایکٹیویشن کا بھی نتیجہ ہیں۔ ان میں سے، مستول کے خلیے مختلف قسم کی الرجک بیماریوں جیسے کہ الرجک ناک کی سوزش، دمہ، اور الرجک ڈرمیٹائٹس میں بہت اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ مستول خلیے اپنے خلیے کی جھلیوں پر IgE ریسیپٹرز (FceRI) کا اظہار کرتے ہیں، اور FceRI ریسیپٹرز کا IgE اینٹی باڈیز [1,2] سے زیادہ تعلق ہوتا ہے۔ جب اینٹیجن مخصوص IgE FceRI سے منسلک ہوتا ہے، ایک تعامل ہوتا ہے اور الرجک رد عمل ہوتا ہے۔ FceRI کا مجموعہ ریسیپٹر ٹائروسین کنیز کو چالو کر سکتا ہے، بہاو کے رد عمل کو شروع کر سکتا ہے، اور مختلف کلیدی پروٹینز (جیسے mitogen-activated protein kinase؛ MAPKs) کے فاسفوریلیشن کو فروغ دے سکتا ہے، جو بالآخر کیلشیم آئنوں کی آمد کا باعث بنتا ہے (Ca2 پلس) ماسٹ سیل ڈیگرینولیشن میں اہم واقعہ [3]۔cistanche آسٹریلیاچالو مستول خلیے کیمیاوی ثالثوں کو گرا کر چھوڑ دیتے ہیں۔ الرجک رد عمل میں استعمال ہونے والے یہ کیمیائی ثالث سوزش کا سبب بن سکتے ہیں [4]، اس لیے الرجی کی علامات کے علاج میں ماسٹ سیل ڈیگرینولیشن روکنے والے شامل ہوتے ہیں۔ لہذا، IgE-ثالثی ماسٹ سیل ڈیگرینولیشن کی روک تھام کو اکثر الرجی کی بیماریوں کی روک تھام اور علاج کے لیے نئے مرکبات کی شناخت کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ یہ قائم کیا گیا ہے کہ اینٹی ڈائنیٹروفینائل (DNP)IgE اینٹی باڈیز اور اینٹی جینز جلد کی غیر حساسیت (PCA) کے رد عمل کو فوری طور پر انتہائی حساسیت کے ویوو ماڈل میں عام طور پر اور اینٹی اینٹی جینک الرجی کی صلاحیت کے لیے تحقیقی دوا کے طور پر پیدا کر سکتے ہیں۔ ] اس کے علاوہ، ماسٹ سیل ڈیگرینولیشن غیر مدافعتی محرکات، جیسے مرکبات 48/80 اور A23187 کی وجہ سے بھی ہو سکتا ہے۔ A23187 کیلشیم آئنوفور، ایک طویل عرصے سے ماسٹ سیل کے اخراج کو متحرک کرنے کے لیے جانا جاتا ہے جو پہلے سے تیار شدہ ثالثوں، جیسے کہ ان کے دانے داروں سے ہسٹامین کے اخراج کے ساتھ، ایک مثال کے طور پر پیش کرتا ہے [4]کمپاؤنڈ 48/80 p-methoxy-N-methylphenethylamine کا مخلوط پولیمر ہے۔ formaldehyde کے ذریعے کراس لنک، جو مستول خلیوں کی آزادانہ محرک کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال ہوتا ہے [7,8]لہذا، مرکب 48/80 اور A23187 کی مناسب مقدار کو عام طور پر الرجک رد عمل کے طریقہ کار کا مطالعہ کرنے کے لیے ری ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ شماریاتی تشخیص کے مطابق، تقریباً 15-20 فیصد آبادی ایٹوپک ڈرمیٹائٹس کا شکار ہے۔ چاہے وہ بچے ہوں یا بالغ جو اس بیماری کا شکار ہیں، مناسب علاج کے بغیر، ایٹوپک ڈرمیٹائٹس مریضوں کو نفسیاتی پریشانی کا باعث بن سکتا ہے اور ان کے خاندانی اور سماجی صحت کے اخراجات پر بوجھ ڈال سکتا ہے [9]۔ بدقسمتی سے، الرجک ڈرمیٹیٹائٹس کا علاج کرنے کے لئے کوئی مناسب طریقہ علاج نہیں ہے. موجودہ علاج کے اختیارات اب بھی بیماری پیدا کرنے والے الرجین سے بچتے ہیں، اور سٹیرائڈز کا مسلسل استعمال علاج کا سنہری معیار ہے۔ ناگزیر الرجین اور دوائیوں کے مضر اثرات نے نئی علاج کی دوائیوں کی فوری ترقی کی ترغیب دی ہے۔ دواؤں کی جڑی بوٹیوں اور پودوں سے الگ تھلگ قدرتی مرکبات سوزش کی بیماریوں کو روکنے اور ان کا علاج کرنے اور الرجی کے عوارض میں مبتلا مریضوں کے معیار زندگی کو بہتر بنانے کے علاج کے ممکنہ ذرائع ہیں۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

حوالہ نیلمبو نیوسیفیرا پلانٹ کے لوٹس کور (بیج کا جنین) سے آتا ہے اور یہ ایک بڑا بیسبینزیلیسوکوئنولائن الکلائڈ ہے۔ اس بات کے شواہد موجود ہیں کہ حوالہ فارماسولوجیکل خصوصیات کی ایک وسیع رینج رکھتا ہے، جیسے کہ اینٹی کینسر، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی سوزش، اور نیورو پروٹیکٹو اثرات، بہت سی بیماریوں میں [10-15]۔cistanche فوائدخان وغیرہ۔ پتہ چلا کہ حوالہ آر او ایس اور میلونڈیالڈہائڈ (ایم ڈی اے) کی سطح میں UV ثالثی اضافہ کو روک کر فوٹو گرافی کے مخالف اثرات پیدا کرتا ہے اور انسانی کیراٹینوسائٹس اور فائبرو بلاسٹس میں جلد کی سوزش یا جلد سے متعلق دیگر سوزش کی بیماریاں[18]۔ تاہم، آیا حوالہ مستول خلیوں میں جلد کی الرجی مخالف اثر ادا کرتا ہے یا نہیں، یہ اب بھی غیر یقینی ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے انسانی ماسٹ سیل لائنوں (RBL-2H3 خلیات) اور ایک کمپاؤنڈ 48/80-اور DNCB-حوصلہ افزائی anaphylaxis کا استعمال کرتے ہوئے ماسٹ سیل کی ثالثی والی الرجک بیماریوں پر حوالہ کے اثرات کی تحقیقات کرنا تھا۔ چوہوں کا ماڈل

La referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la referencia tiene una amplia gama de propiedades farmacológicas, como efectos anticancerígenos, antioxidantes, antiinflamatorios y neuroprotectores, en muchas enfermedades [10-15]۔ Beneficios de la cistanche Khan et al. encontró que la referencia کی پیداوار efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descubritenemotiento descubrientemotiento para descubritos de la referencia. de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]۔ گناہ کی پابندی، sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones de ratones de compduciia8NC/D808NC. .

2. نتائج

2.1. Neferine Cytotoxicity Test on Rat Mast Cells(RBL-2H3)

چونکہ چوہا بیسوفیلک لیوکیمیا (RBL)-2H3 خلیات، ایک ہسٹامین جاری کرنے والے ماسٹ سیل اینالاگ، مستول سیل ثالثی سوزش کے اثرات کی جانچ کرنے کے لیے موزوں خلیے ہیں [19]، ہم نے ان خلیوں کو اینٹی الرجی کی تحقیقات کے لیے استعمال کیا۔ حوالہ کے اثرات سب سے پہلے، ہم نے جانچ کی کہ آیا حوالہ مستول خلیوں میں سائٹوٹوکسٹی پیدا کرسکتا ہے۔ جب خلیات کو 24 گھنٹے کے لیے 1 سے 30 μM تک حوالہ کے ساتھ پیش کیا جاتا ہے، تو حوالہ کے علاج سے خلیات کی عملداری متاثر نہیں ہوگی (شکل 1)۔

2.2.نیفرین مختلف ایکٹیوٹرز کے ذریعے متحرک RBL-2H3 کے انحطاطی اثر کو کم کرتی ہے

RBL-2H3 خلیات کو عام طور پر degranulation کے وٹرو اسٹڈیز کے لیے استعمال کیا جاتا ہے [20-22]RBL-2اینٹی ڈائنیٹروفینول (DNP)IgE اور DNP- کنجوگیٹڈ ہیومن سیرم البومین کے ساتھ H3 سیلز کی حوصلہ افزائی (HSA) تنزلی کو متحرک کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، مستول کے خلیے مصنوعی مرکبات کے جواب میں انحطاط کے لیے جانے جاتے ہیں، جیسے کہ کمپاؤنڈ 48/80 اور کیلشیم آئنوفور A23187، اور ان مرکبات کو وٹرو الرجی کے ردعمل کے طریقہ کار کے براہ راست مطالعہ کے لیے آسان ری ایجنٹس کے طور پر استعمال کیا گیا ہے [23، 24]۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ RBL-2H3 کا سائٹوپلازم جو ایکٹیویٹر کے ذریعے چالو نہیں کیا گیا تھا اس میں محدود سیکریٹری گرینولز موجود تھے۔cistanche کولیسٹرولصرف حوالہ کے علاج （10μM） نے RBL-2H3 (شکل 2A, B) کی سرگرمی کو متاثر نہیں کیا۔ تاہم، کمپاؤنڈ 48/80، A23187، اور اینٹی DNP/IgE پلس DNP/HSA سمیت مختلف ایکٹیویٹرز کے اضافے نے سائٹوپلازم کو خفیہ دانے داروں سے واضح طور پر بھر دیا۔ الیکٹران خوردبین کے تحت، یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ سائٹوپلازم میں خفیہ دانے داروں کی ایک بڑی تعداد موجود ہے، اور کچھ خفیہ دانے یہاں تک کہ خلیے کی جھلی کے ساتھ مل جاتے ہیں، جس سے انحطاط کا باعث بنتا ہے (شکل 2C-E)۔ حوالہ 10 uM کے ساتھ پہلے سے علاج کے بعد، سائٹوپلازم میں خفیہ دانے دار نمایاں طور پر کم ہو گئے تھے (شکل 2F-H)۔ ان نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ حوالہ ایکٹیویٹر کے ذریعے متحرک RBL-2H3 کی ایکٹیویشن اور انحطاط کو مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔

2.3.نیفرین PMA/A کو روکتا ہے{{2}RBL میں انٹرا سیلولر کیلشیم کی بلندی-2H3

کیلشیم آئن سیل ایکٹیویشن کے عمل میں ثانوی میسنجر کا کردار ادا کرتے ہیں۔ A23187 سیل کی جھلیوں کے ذریعے کیلشیم آئنوں کے داخلے کو بڑھانے اور مستول خلیوں کی فعالیت کو متحرک کرنے کا سب سے مؤثر طریقہ ہے۔ Phorbol myristate acetate (PMA) پروٹین کناز کینڈ کو چالو کر سکتا ہے اور A23187 کے اثر کو بڑھانے کے لیے انٹرا سیلولر کیلشیم آئنوں کو بڑھا سکتا ہے۔ مستول خلیوں میں کیلشیم آئنوں میں اضافے کو بھی مستول خلیوں کو متحرک کرنے میں ایک اہم عنصر سمجھا جاتا ہے تاکہ یہ مستول خلیوں کی تنزلی کو متاثر کرتا ہے اور مزید سوزش والی سائٹوکائنز اور کیموکائنز جاری کرتا ہے۔cistanche deserticola کے ضمنی اثرات،لہذا، اس مطالعہ نے یہ دریافت کرنے کی کوشش کی کہ آیا حوالہ RBL-2H3 میں کیلشیم آئن کے ارتکاز کو روک سکتا ہے جب یہ سوزش کو روکتا ہے۔ تجرباتی گروپ کو 20 منٹ کے لیے ریفرنس پریٹریٹمنٹ کے ساتھ یا اس کے بغیر تقسیم کیا گیا تھا، اور RBL-2H3 کو متحرک اور فعال کرنے کے لیے 1 mM CaClz اور PMA/A23187 شامل کیے گئے تھے۔ تجرباتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ RBL-2H3 کا صرف حوالہ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج نے انٹرا سیلولر کیلشیم آئن کی ارتکاز میں اضافہ کو متاثر نہیں کیا۔ PMA/A23187-کی حوصلہ افزائی Ca2t آمد گروپ میں، انٹرا سیلولر کیلشیم آئن کی حراستی میں نمایاں اضافہ ہوا۔ RBL-2H3 خلیات کو 20 منٹ تک حوالہ کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا تھا （3 μM اور 10 μM）، اور کیلشیم آئن کا ارتکاز نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا (شکل 3)۔

2.4.نیفرین نے RBL-2H3 کے ذریعے حوصلہ افزائی PMA/A23187 میں پرو-انفلامیٹری سائٹوکائنز کے mRNA اظہار کو کم کیا۔

جلد کا مدافعتی ردعمل جسم میں مستول خلیوں کی تعداد میں اضافہ کرے گا، اور مستول خلیے پھر سوزش والی سائٹوکائنز پیدا کریں گے اور بیماری کی ترقی کو تیز کریں گے۔ سوزش کی حامی سائٹوکائنز، خاص طور پر TNF-a، IL-6، IL-1، اور IL-8، نہ صرف سوزش کا باعث بنتی ہیں بلکہ لیوکوائٹ کی دراندازی، گرینولوما کی تشکیل، اور ٹشو فبروسس کا سبب بھی بنتی ہیں۔ PMA/A23187 مستول خلیوں پر کام کرتا ہے اور انہیں IL-16، IL-6، TSLP، اور TNF- پیدا کرنے پر اکساتا ہے، جس سے الرجی سے متعلق سوزش ہوتی ہے۔ لہذا، ہم نے RBL-2H3 کو 20 منٹ کے لیے حوالہ کے ساتھ پہلے سے علاج کیا اور PMA/A23187 کے ساتھ 6 گھنٹے کے لیے حوصلہ افزائی کی تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ آیا حوالہ IL-1 , IL{{ کے mRNA اظہار کو کم کر سکتا ہے۔ 19}}، TSLP، اور TNF-a۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ صرف حوالہ کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں، سائٹوکائن ایم آر این اے کا اظہار متاثر نہیں ہوا، اور اس گروپ میں ایم آر این اے کا اظہار جس نے PMA/A23187 کے ذریعے سوزش کی حوصلہ افزائی کی، نمایاں طور پر بڑھ گئی۔ حوالہ کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں، یہ دیکھا گیا کہ IL-1، IL-6، TSLP، اور TNF-a کے mRNA اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر دبا دیا گیا تھا (شکل 4)۔

2.5.Neferine PMA/A کو روکتا ہے23187-RBL میں MAPK پاتھ وے کی حوصلہ افزائی فاسفوریلیشن-2H3

پچھلے مطالعات نے نشاندہی کی ہے کہ مستول خلیوں کو MAPK کو فعال کرنے کے لیے انٹرا سیلولر کیلشیم آئنوں کو جاری کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ اس کے علاوہ، MAPK سگنلنگ پاتھ وے مونوسائٹس، ٹی لیمفوسائٹس، بی لیمفوسائٹس، سائٹوکائنز، اور کیموکائنز کے اظہار کو منظم کرتا ہے، اور خود بخود قوت مدافعت پیدا کرتا ہے۔ یہ طریقہ کار PMA/A23187 کے ایکٹیویشن پاتھ وے جیسا ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے دریافت کیا کہ آیا حوالہ MAPK راستوں کے ضابطے میں حصہ لے سکتا ہے۔ ہم نے 20 منٹ کے لیے RBL-2H3 کے حوالے سے مختلف ارتکاز (1,3، اور 10 uM) کا علاج کیا اور پھر PMA/A23187 کے ساتھ 30 منٹ تک سوزش پیدا کرنے کے لیے حوصلہ افزائی کی۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ جب RBL-2H3 کو اکیلے حوالہ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا تھا، p38، JNK، اور ERK پروٹین کی ایکٹیویشن متاثر نہیں ہوئی تھی۔ اکیلے PMA/A23187 کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں، ہم نے پایا کہ p38، JNK، اور ERK پروٹین چالو ہو چکے ہیں اور ان میں اہم فاسفوریلیشن ہے۔ حوالہ کے ساتھ پہلے سے تیار کردہ گروپ میں، یہ دیکھا گیا کہ حوالہ کے زیادہ ارتکاز کے لیے، p38، JNK، اور ERK پروٹینز کی فاسفوریلیشن نمایاں طور پر کم ہو گئی تھی (شکل 5A-C)۔

2.6.Neferine PMA/A کو روکتا ہے23187-RBL میں NF-B پاتھ وے کی حوصلہ افزائی فاسفوریلیشن-2H3

پرو سوزش والی سائٹوکائنز کا اظہار مستول خلیوں میں ٹرانسکرپشن فیکٹر NF-kB کے فعال ہونے پر منحصر ہے۔ جب IKB پروٹین کو فاسفوریلیٹ اور انحطاط کیا گیا تھا، NF-kB کو جاری کیا گیا تھا اور نیوکلئس میں منتقل کیا گیا تھا، اس کے متعلقہ DNA- جوابی عناصر کے ساتھ پابند تھا اور proinflammatory ثالثوں کی نقل کو فروغ دیتا تھا۔ بہت سی سائٹوکائنز اور کیموکائنز تیار کی گئیں، جو مدافعتی ردعمل، تفریق، اور سوزش کو منظم کرتی ہیں۔ لہذا، ہم نے دریافت کیا کہ آیا حوالہ کے ساتھ پیشگی علاج PMA/A23187 کے ذریعہ پروٹین فاسفوریلیشن کو متاثر کرتا ہے۔ ہم نے RBL-2H3 میں حوالہ کے مختلف ارتکاز (1,3، اور 10 μM) کا علاج کیا۔ 20 منٹ کے بعد، PMA/A23187 نے سوزش پیدا کرنے کے لیے RBL-2H3 کو 1 گھنٹے یا 2 گھنٹے کے لیے متحرک کیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ RBL-2H3 کا صرف حوالہ کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج IKBa اور NF-KB کے فاسفوریلیشن کو متاثر نہیں کرتا تھا۔ جب PMA/A23187 کو محرک کے لیے استعمال کیا گیا تو IkBo اور NF-KB کے فاسفوریلیشن میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا۔ حوالہ کے ساتھ پہلے سے تیار کردہ گروپ میں، یہ پایا گیا کہ IkBa (شکل 6A) اور NF-KB (شکل 6B) کے فاسفوریلیشن میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے۔

2.7.2 پر نیفرین کا اثر،4-Dinitrochlorobenzene(DNCB) حوصلہ افزائی ایٹوپک ڈرمیٹائٹس

بیماریوں کی تحقیق کے لیے ایک جانوروں کا ماڈل، DNCB ایک نمائندہ چڑچڑاپن ہے جو atopic dermatitis کا سبب بنتا ہے[25]۔ ہمارے تجربے میں 75 فیصد الکحل میں تحلیل شدہ 1 فیصد ڈائنائٹروکلوروبینزین (DNCB) کو حساسیت کے ردعمل کے پہلے مرحلے میں شامل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ حوالہ (3mg/kg اور 10 mg/kg) اور dexamethasone (Dexa,{{10}.2 mg/kg) DMSO میں تحلیل کیا گیا پانچویں دن دس دنوں کے لیے انٹراپریٹونی طور پر دیا گیا۔ . 8 ویں، 1st، اور 14 ویں دن، 0.5 فیصد DNCB سوزش پیدا کرنے کے دوسرے مرحلے کے طور پر لاگو کیا گیا تھا۔ چوہوں کو چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا - کنٹرول گروپ، ڈی این سی بی گروپ، حوالہ علاج گروپ، اور ڈیکسامیتھاسون سے علاج شدہ گروپ - اور پھر، گروپوں کے درمیان موازنہ کے بعد، اختلافات کو نوٹ کیا گیا۔ ہم نے مشاہدہ کیا کہ DNCB نے چوہوں کی جلد پر atopic جلد کی سوزش کے رد عمل کو جنم دیا۔ DNCB لگانے کے بعد پتہ چلا کہ چوہوں کی جلد میں سرخی اور اسکیلنگ بڑھ گئی ہے۔ یہ سب keratinocyte کے غیر معمولی پھیلاؤ، دراندازی، اور مدافعتی خلیوں کے جمع ہونے کی وجہ سے ہیں۔ چار دن تک 3 ملی گرام/کلوگرام اور ڈیکسامیتھاسون 0.2 ملی گرام/کلوگرام کے حوالے سے علاج کرنے والے گروپ نے لالی کو ختم کر دیا۔ ہم نے 15 دن تک چوہوں کی جلد کی جلد کی حالت کا مشاہدہ جاری رکھا۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، DNCB گروپ کی جلد کی شدید سرخ اور سوجی ہوئی حالت تھی، اور خشکی اور زخم تھے جو کہ خارش اور درد کی وجہ سے ہوتے تھے۔ . ہم حوالہ اور ڈیکسامیتھاسون (شکل 7A) کے علاج کے بعد ڈگری میں کمی کا رجحان تلاش کر سکتے ہیں۔ Toluidine نیلے رنگ کا داغ مستول خلیوں کی مجموعی تعداد کو دیکھنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ مستول کے خلیات جب خوردبین کے نیچے دیکھے گئے تو وہ ارغوانی رنگ کے نظر آئے۔ یہ مقداری طور پر دکھایا جا سکتا ہے کہ DNCB تجرباتی گروپ کے ڈرمیس میں بہت سے مستول خلیات گھس گئے اور جمع ہوئے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں اضافہ ہوا۔ حوالہ اور ڈیکسامیتھاسون کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں، دراندازی، جمع، اور مستول خلیوں کی تعداد میں کمی واقع ہوئی تھی (شکل 7B، C)۔

2.8۔نیفرین ڈی این سی بی کے علاج کے بعد رکاوٹ سے متعلقہ مالیکیولز کے ایم آر این اے اظہار کو بہتر بناتا ہے۔

AD کی وجہ سے جلد سے متعلق سوزش جلد کی غیر معمولی رکاوٹ کا سبب بن سکتی ہے۔ اگر جلد کی رکاوٹ عیب دار ہے، تو اینٹیجنز یا خارش کے لیے جلد کے ایپیڈرمس میں گھسنا اور جسم میں داخل ہونے سے مدافعتی سے متعلق رد عمل پیدا کرنا آسان ہوتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، تفریق پروٹین کی پیداوار، بشمول filaggrin، loricrin، اور involucrin، کو دبا دیا جائے گا۔ لہذا، خراب شدہ جلد کی رکاوٹ کو بحال کرنا AD کی روک تھام اور علاج کے لئے بہت اہم ہے [26]۔ ہمارے مطالعے میں، ہم نے ڈی این سی بی سے متاثرہ ایٹوپک ڈرمیٹیٹائٹس کے جانوروں کے ماڈل میں مداخلت کرنے کے لیے حوالہ جات کا استعمال کیا۔ چوہوں کی قربانی کے بعد، ڈورسل جلد کے ٹشو کو RI-qPCR تجزیہ کے لیے گراؤنڈ کیا گیا تھا تاکہ اس بات کا اندازہ کیا جا سکے کہ آیا ڈی این سی بی کے علاج کے بعد فلیگرین، لوریکرین، اور انوولوکرین میں ایم آر این اے اظہار میں کمی کو بہتر بنا سکتا ہے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ DNCB تجرباتی گروپ نے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں filaggrin، loricrin، اور involucrin کے mRNA اظہار کو نمایاں طور پر کم کیا ہے۔ ڈی این سی بی گروپ (شکل 8) کے مقابلے ریفرنس اور ڈیکسامیتھاسون کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں فائلگرین، لوریکرین، اور انوولوکرین کے ایم آر این اے اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا۔

ہم نے مزید ثابت کیا کہ حوالہ ایک اینٹی الرجک سکریچنگ اثر رکھتا ہے۔ ہم نے BALB/c چوہوں میں کھرچنے والے رویے کو دلانے کے لیے ایک ماسٹ سیل ڈیگرینولیشن ایجنٹ، کمپاؤنڈ 48/80 کا استعمال کیا۔ جیسا کہ شکل 9 میں دکھایا گیا ہے، ہم نے پایا کہ حوالہ کے علاج نے مرکب 48/80（50 ug/site） کی وجہ سے ہونے والے خراش کے رویے کو روکا ہے۔ مسلسل 5 دنوں تک حوالہ کی نچلی اور زیادہ خوراکوں (3 اور 10 ملی گرام/کلوگرام) کی بار بار انتظامیہ نے کمپاؤنڈ 48/80 کی وجہ سے ہونے والے خراشوں کی تعداد میں نمایاں کمی کی۔