NGF کولیسٹرول میٹابولزم کو ماڈیول کرتا ہے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف نیورو پروٹیکشن دینے والے گلیل سیلز میں ApoE کے اخراج کو متحرک کرتا ہے حصہ 1

خلاصہ:

کولیسٹرول دماغ میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے، جہاں astrocytic سرگرمی خاص طور پر میٹابولزم کو منظم کرتی ہے۔ درحقیقت، بالغ نیوران اپنے کولیسٹرول بائیو سنتھیسز کو دباتے ہیں اور اس سٹرول کو ApoE سے بھرپور ذرات کے ذریعے درآمد کرتے ہیں جو ایسٹروائٹس سے چھپتے ہیں۔ حالیہ شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ اعصابی نمو کا عنصر (این جی ایف) سیل میٹابولزم کو متاثر کر کے نیوروٹروفک سرگرمی کر سکتا ہے۔

نیوران بنیادی اکائیاں ہیں جو انسانی دماغ کو تشکیل دیتی ہیں۔ نیوران کے درمیان رابطوں کے ذریعے، وہ ہمارے دماغی پرانتستا کو تشکیل دیتے ہیں، جو ہمارے تمام علم اور یادوں کو لے جاتا ہے. اس لیے نیوران کا یادداشت کی صلاحیت سے گہرا تعلق ہے۔

نیوران کا بنیادی کام معلومات کو منتقل کرنا ہے۔ ہر نیوران میں ایک Synapse ہوتا ہے، جو دوسرے نیوران کے ڈینڈرائٹس اور ایکسون کو جوڑتا ہے۔ جب ایک نیوران سگنل وصول کرتا ہے، تو یہ سگنل کو نیوران تک پہنچاتا ہے جس سے یہ جڑا ہوا ہے۔ یہ سگنلنگ، جسے نیورونل ٹرانسمیشن کہا جاتا ہے، میموری کی تشکیل، ذخیرہ کرنے اور بازیافت کے اہم عملوں میں سے ایک ہے۔

اپنے دماغ کو صحت مند رکھنے میں، ہم ورزش کے ذریعے اپنے نیوران کے مناسب کام کو فروغ دے سکتے ہیں۔ جسمانی ورزش دماغ کو خون کی گردش اور آکسیجن کی فراہمی کو بہتر بناتی ہے، اس طرح نیوران کی تعداد اور رابطوں میں اضافہ ہوتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، متنوع سماجی اور سیکھنے کی سرگرمیاں دماغ کے نئے علاقوں میں نئے نیوران بنا سکتی ہیں اور دماغ کی پلاسٹکٹی کو بڑھا سکتی ہیں۔

جب ہمارے پاس زیادہ، زیادہ فعال نیوران ہوتے ہیں، تو ہماری یادداشت مضبوط ہو جاتی ہے۔ دماغی پرانتستا میں نیوران کے درمیان ہم آہنگی مزید یکساں ہو جاتی ہے، جس سے ہمارے لیے معلومات کو ذخیرہ کرنا اور بازیافت کرنا آسان ہو جاتا ہے، ہماری علمی صلاحیتوں میں بہتری آتی ہے۔ اس کے علاوہ نیوران کی ایک بڑی تعداد اور نیوران کے درمیان رابطے بھی ہمارے رد عمل کی رفتار اور فیصلہ کرنے کی صلاحیت کو بہتر بنائیں گے۔

لہذا، صحت مند نیوران کو برقرار رکھنے اور میموری کو بہتر بنانے کے ساتھ ساتھ چلتے ہیں. ہم جسمانی ورزش، مختلف سماجی اور سیکھنے کی سرگرمیوں، اور غذائی عادات پر توجہ دے کر صحت مند نیورونز کو فروغ دے کر اپنی یادداشت کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ آئیے اپنے دماغ کی صحت کو سپورٹ کرنے کے لیے مل کر کام کریں! یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche deserticola نمایاں طور پر یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے کیونکہ Cistanche deserticola ایک روایتی چینی ادویاتی مواد ہے جس میں بہت سے منفرد اثرات ہیں، جن میں سے ایک یادداشت کو بہتر بنانا ہے۔ کیما بنایا ہوا گوشت کی افادیت اس میں موجود متعدد فعال اجزاء سے آتی ہے، بشمول کاربو آکسیلک ایسڈ، پولی سیکرائڈز، فلیوونائڈز وغیرہ۔ یہ اجزاء مختلف ذرائع سے دماغ کی صحت کو فروغ دے سکتے ہیں۔

دماغی افعال کو بہتر بنانے کے طریقے جاننے پر کلک کریں۔

اس کے باوجود، گلیل کولیسٹرول ہومیوسٹاسس پر این جی ایف کے اثر کو ابھی تک واضح نہیں کیا گیا ہے۔ اس پروجیکٹ کا مقصد یہ اندازہ لگانا ہے کہ آیا NGF گلیل سیلز میں کولیسٹرول میٹابولزم کو متاثر کر سکتا ہے۔ اس مقصد تک پہنچنے کے لیے U373 ایسٹروسائٹ سے ماخوذ سیل لائن کو تجرباتی ماڈل کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ امیونو بلوٹ اور ELISA تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ کولیسٹرول میٹابولزم نیٹ ورک سے تعلق رکھنے والے پروٹین اور انزائمز glial خلیات میں NGF کے علاج پر بڑھ گئے تھے۔ مزید برآں، NGF نے ApoE سراو اور کلچر میڈیم میں ایکسٹرا سیلولر کولیسٹرول کی مقدار میں نمایاں اضافہ کیا۔

شریک ثقافت اور یو373-کنڈیشنڈ میڈیم تجربات نے ثابت کیا کہ NGF علاج نے N1E-115 نیورونل سیلز میں روٹینون ثالثی سائٹوٹوکسٹی کا مؤثر طریقے سے مقابلہ کیا۔ اس کے برعکس، NGF علاج کے ذریعے ثالثی کی گئی نیورو پروٹیکشن کو اس وقت دبا دیا گیا جب N1E-115 کو ApoE- خاموش U373 سیلز کے ساتھ ہم آہنگ کیا گیا۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ این جی ایف گلیل خلیوں میں کولیسٹرول ہومیوسٹاسس کو کنٹرول کرتا ہے۔ زیادہ اہم بات یہ ہے کہ، NGF آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف نیورو پروٹیکشن کا استعمال کرتا ہے، ممکنہ طور پر glial ApoE سراو کی شمولیت سے وابستہ ہے۔

مطلوبہ الفاظ:

ApoE؛ astrocyte کولیسٹرول؛ تفرق؛ اعصاب کی ترقی کا عنصر؛ میٹابولزم؛ نیوران ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز؛ روٹینون

1. تعارف

دماغ پورے جسم میں کولیسٹرول کی سب سے زیادہ مقدار کی خصوصیت رکھتا ہے [1]۔ مرکزی اعصابی نظام (سی این ایس) میں اس سٹرول کی غیر معمولی ارتکاز کا جواز یہ ہے کہ کولیسٹرول کئی بنیادی حیاتیاتی عمل میں شامل ہے۔ قابل غور بات یہ ہے کہ کولیسٹرول کی ایک قابل ذکر مقدار ایسٹروائٹس اور نیوران کی پلازما جھلیوں میں ضم ہوتی ہے، جہاں یہ ایک مناسب سیلولر مورفولوجی اور میمبرین ریسیپٹرز اور سینیپٹک نیورو ٹرانسمیشن کے درست کام کی وضاحت کرتا ہے [2]۔
کولیسٹرول نیورائٹ کی افزائش، synaptogenesis، اور نیورو ٹرانسمیٹر کی رہائی کے لیے درکار نئی جھلیوں کی تشکیل کے لیے بھی ضروری ہے، اس طرح نیورونل تفریق اور پختگی [3–7] میں اہم ہے۔

بنیادی طور پر، دماغ میں تمام کولیسٹرول ڈی نوو بائیو سنتھیسس ان سیٹو سے حاصل ہوتا ہے۔ خاص طور پر، خون کے دماغ کی رکاوٹ (BBB) ​​نظامی گردش کے ذریعے منتقل ہونے والے لیپو پروٹینز سے حاصل ہونے والے کولیسٹرول کی مقدار کو روکتا ہے [8]۔ اس وجہ سے، اعصابی خلیے اس لپڈ کی اپنی مانگ کو آزادانہ طور پر منظم کرنے کے لیے ایک مثالی ریگولیٹری نیٹ ورک تیار کرتے ہیں۔ ایک اچھی طرح سے قبول شدہ ماڈل یہ ثابت کرتا ہے کہ جنین کے بعد، بعد از پیدائش کے دوران، کولیسٹرول بائیو سنتھیسس ڈرامائی طور پر نیوران میں گرتا ہے، اس کوشش کے ساتھ کہ ایکشن پوٹینشل کی تخلیق کے لیے استعمال کی جانے والی توانائی کو بچانے کی کوشش کی جاتی ہے۔

اس کے مطابق، ایسٹروائٹس کولیسٹرول کی اففی نیورونل ضروریات کو پورا کرتے ہیں، جن کی ترکیب خاص طور پر واضح ہو جاتی ہے [1,9,10]۔ ایسٹروائٹس کے ذریعے نیوران تک کولیسٹرول کی ترسیل افقی نقل و حمل کا ایک خوبصورت طریقہ کار ہے، جس میں اہم پروٹین اور ذرات شامل ہیں۔ خاص طور پر، کولیسٹرول کی برآمد ایسٹروائٹس میں شروع ہوتی ہے، جہاں نو سنتھیٹائزڈ کولیسٹرول کو اپولیپوپروٹین ای (ApoE) پر مشتمل نوزائیدہ لیپوپروٹین ذرات میں بھرا جاتا ہے۔ جمع ہونے والے شواہد اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ ApoE سے بھرپور ذرات کی لپڈیشن ٹرانسپوٹر اے ٹی پی بائنڈنگ کیسٹ A1 (ABCA1) [11] کے ذریعے ثالثی کی جاتی ہے۔ اس کے بعد، ایک بار ایکسٹرا سیلولر اسپیس میں چھوڑے جانے کے بعد، ApoE پر مشتمل لیپوپروٹین سوپٹیکینٹیکن نیوران کے ذریعے رسیپٹر میڈیٹیڈ اینڈوسیٹوسسلو-کثافت لیپوپروٹین ریسیپٹر (LDLr) اور LDLr سے متعلق پروٹین 1 (LRP1) [12]۔

نیورونل ہومیوسٹاسس میں ایسٹروسائٹ سے ماخوذ کولیسٹرول کے اہم کردار کے مطابق، تجرباتی نتائج نے اشارہ کیا کہ ApoE سے بھرپور لیپو پروٹینز میں موجود کولیسٹرول ڈینڈرائٹ کی تفریق اور Synaptic فعل کو نمایاں طور پر بڑھاتا ہے [13,14]۔ ہنٹنگٹن کی بیماری (HD) ایسٹروائٹس سے Accordinastrocyte کنڈیشنڈ میڈیم، جو صرف ApoE-lipoprotein- پابند کولیسٹرول کی ایک معمولی مقدار کو چھپاتا ہے، HD نیوران [15] میں نیورائٹ کی افزائش اور Synaptic سرگرمی کو شدید متاثر کرتا ہے۔

Astrocyte سے ماخوذ ApoE پر مشتمل ذرات کی نیوروٹروفک کارروائی ApoE کی کمی کے اثر سے مزید برقرار رہتی ہے، جو واضح طور پر ہپپوکیمپس [16] میں بالغ نیوروجنسیس کو روکتا ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف نیورو پروٹیکشن میں ایسٹروسائٹ – نیوران کولیسٹرول کراسسٹالک بھی اہم ہے۔ مثال کے طور پر، کچھ رپورٹس سے پتہ چلتا ہے کہ ApoE ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کی نمائش [17,18] کی وجہ سے آکسیڈیٹیو نقصان اور apoptosis میں رکاوٹ ہے۔

ان مشاہدات سے، دماغ میں کولیسٹرول ہومیوسٹاسس کی بحالی اعصابی خلیوں کے کام کی ضمانت کے لیے ضروری ہے، اور اس لپڈ کے ضابطے کے تحت میٹابولک راستوں کو باریک طریقے سے کنٹرول کیا جانا چاہیے تاکہ کئی نیورو فزیوولوجیکل عمل کی موجودگی کو محفوظ رکھا جا سکے۔

حالیہ برسوں میں، نیوروٹروفین سیل میٹابولزم میں ضروری کھلاڑی کے طور پر ابھرے ہیں [2,19-22]۔ نیوروٹروفینس نمو کے عوامل کے ایک چھوٹے سے خاندان سے تعلق رکھتے ہیں جن کا اعصابی نشوونما، بقا اور پلاسٹکٹی [23] میں غیر متضاد کردار ہے۔ ابھی حال ہی میں، ان سگنلنگ مالیکیولز کو سیل میٹابولزم کے اہم ماڈیولرز کے طور پر بھی تسلیم کیا گیا ہے، بشمول کولیسٹرول میٹابولزم [2,22]۔

تجرباتی شواہد اس بات پر روشنی ڈالتے ہیں کہ اعصاب کی ترقی کا عنصر (این جی ایف)، نیوروٹروفین خاندان کا پروٹو ٹائپ رکن، نیورونل خلیات اور ہیپاٹوسائٹس [24,25] میں کولیسٹرول بائیو سنتھیس کو متحرک کرتا ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ان واقعات میں، کم از کم جزوی طور پر، کم وابستگی والے نیوروٹروفین ریسیپٹر p75NTR شامل ہیں، جو سٹرول ریگولیٹری عنصر بائنڈنگ پروٹین 2 (SREBP-2) کو چالو کرنے کا سبب بنتا ہے اور اس کے نتیجے میں، کولیسٹرول سے متعلق نقل کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ جینز [25]۔ کولیسٹرول میٹابولزم پر این جی ایف کی سرگرمی صرف بائیو سنتھیسس تک ہی محدود نہیں ہے، کیونکہ یہ نیورانز میں ایل ڈی ایل آر اظہار کو بڑھا کر کولیسٹرول کی مقدار کو بھی فروغ دیتا ہے [26]۔

اس معلومات کے باوجود، کولیسٹرول ہومیوسٹاسس کے ضابطے میں NGF کی ممکنہ شراکت کے بارے میں علم اب بھی خاصا محدود دکھائی دیتا ہے۔ خاص طور پر، ایسٹروسائٹک خلیوں میں کولیسٹرول میٹابولزم کے ضابطے میں NGF کے ذریعے ادا کیے گئے کردار کا اندازہ لگانے والے منظم مطالعات کی کمی ہے۔ اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ ایسٹروائٹس کے ذریعہ تیار کردہ کولیسٹرول نیورونل فزیالوجی کی ضمانت کے لیے ضروری ہے، یہ سمجھنا ضروری ہے کہ آیا گلیل سیلز کے ساتھ ساتھ انٹر سیلولر کولیسٹرول کی نقل و حمل میں کولیسٹرول میٹابولزم کو متاثر کر سکتا ہے، جس کا مخصوص ضابطہ دماغی صحت کو یقینی بنانے کے لیے ضروری ہے۔

اس بنیاد پر کام، مقصد یہ ہے کہ گلیل سیلز میں کولیسٹرول میٹابولزم کی ماڈیولیشن میں NGF کی ممکنہ شمولیت، نیز آکسیڈیٹیو تناؤ کے حالات میں نیورونل تفریق اور نیورونل بقا پر اس کے اثرات کو تلاش کرنا ہے۔

2. نتائج

2.1 U373 ایکسپریس دونوں NGF ریسیپٹرز TrkA اور p75NTR

این جی ایف کو ابتدائی طور پر نیورونل خلیوں کے لیے ایک مخصوص ٹراپزم کے ساتھ ترقی کے عنصر کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ تاہم، ثبوت جمع کرنا یہ ظاہر کرتا ہے کہ یہ نیوروٹروفین کئی غیر نیورونل خلیوں اور بافتوں میں حیاتیاتی اثرات کو بھی متاثر کرتا ہے [22]۔ NGF کی سرگرمی کو اس کے اعلی وابستگی والے رسیپٹر TrkAd کو کم وابستگی والے ریسیپٹر p75NTR کے پابند کرنے سے یقینی بنایا جاتا ہے [2]۔

اس طرح، ہم نے ابتدائی طور پر معلوم کیا کہ آیا U373 خلیات NGF ریسیپٹرز کا اظہار کرتے ہیں۔ خاص طور پر، U373 ایک ایسٹروسائٹوما سیل لائن ہے جو بڑے پیمانے پر ایک ایسٹروسائٹ سیل کلچر ماڈل کے طور پر استعمال ہوتی ہے، جیسا کہ کئی رپورٹس نے اشارہ کیا ہے کہ وہ آسٹرو سائیٹس [27–29] کی مورفولوجیکل، میٹابولک اور فنکشنل خصوصیات کا دوبارہ استعمال کرتے ہیں۔ شائع شدہ اعداد و شمار کے مطابق [30]، امیونو فلوروسینس تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ U373 خلیات TrkA اور p75NTR دونوں کو قابل تعریف سطح پر ظاہر کرتے ہیں (شکل S1A)۔ ان نتائج کی تصدیق مغربی دھبے کے تجزیے سے بھی ہوئی تھی، جس سے یہ تجویز کیا گیا تھا کہ U373 خلیات NGF کے لیے مکمل طور پر جوابدہ ہونے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔

چونکہ NGF کی انتظامیہ اس کے ریسیپٹرز کے اظہار کی سطح کو متاثر کر سکتی ہے، ممکنہ طور پر TrkA اور/یا p75NTR [31–33] کے ذریعے نکالے گئے سگنلنگ پاتھ ویز کے درمیان توازن کو تبدیل کر سکتا ہے، دونوں ریسیپٹرز کے اظہار کو بھی NGF کے علاج کے 48 گھنٹے پر چیک کیا گیا۔ تاہم، نیوروٹروفین (فگر S1B) کے ساتھ محرک کے بعد TrkA اور p75NTR دونوں کی پروٹین کی مقدار میں کوئی تبدیلی نہیں دیکھی گئی۔

2.3 NGF کولیسٹرول کے اخراج کو U373 کے ذریعے کلچر میڈیم میں بڑھاتا ہے۔

حاصل کردہ نتائج نے ہمیں یہ مطالعہ کرنے پر آمادہ کیا کہ آیا NGF کی طرف سے ثالثی کے اثرات کولیسٹرول کے مواد میں ترمیم کی عکاسی کر سکتے ہیں۔ آئل ریڈ او سٹیننگ غیر جانبدار لپڈس کو دیکھنے کے لیے کی گئی تھی، بشمول کولیسٹرل ایسٹرز۔ U373 خلیوں میں پائے جانے والے لپڈ بوندوں کی جسامت اور تعداد پرائمری ایسٹروسائٹس [34,35] کے لئے رپورٹ کردہ جیسی تھی۔

تاہم، NGF علاج (اعداد و شمار 2A اور S2A، B) پر کوئی تبدیلی نہیں دیکھی گئی۔ اسی طرح، مفت کولیسٹرول کی مقدار میں کوئی تبدیلی نہیں پائی گئی، جس کا اندازہ فلپائن سٹیننگ (اعداد و شمار 2B اور S2C) سے کیا گیا۔ انٹرا سیلولر کولیسٹرول کی سطح پر اہم اثرات کی کمی کو کولیسٹرول انزیمیٹک پرکھ کے ذریعے مزید برقرار رکھا گیا، جس نے اس بات پر روشنی ڈالی کہ NGF نے کل کولیسٹرول، فری کولیسٹرول، اور کولیسٹرول ایسٹرز (شکل 2C) کے مواد کو تبدیل نہیں کیا۔

اس کے برعکس، U{0}}علاج شدہ NGF (شکل 2D) کے کلچر میڈیم میں کولیسٹرول کی مقدار (مفت، ایسٹرز، اور کل) واضح طور پر بڑھی تھی۔ جب مجموعی طور پر جائزہ لیا جائے تو یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ NGF ApoE پر مشتمل ذرات کے ABCA1-ثالثی بہاؤ کو بڑھا کر کولیسٹرول کے اخراج کو فروغ دیتا ہے۔

شکل 1. NGF U373 خلیوں میں کولیسٹرول ہومیوسٹاسس میں شامل اہم پروٹین کے اظہار کو ماڈیول کرتا ہے اور U373 کلچر میڈیم میں ApoE سراو n کو بڑھاتا ہے۔ (A–G) گاڑی (Ctrl) اور NGF (100 ng) کے ساتھ علاج کیے جانے والے U373 خلیوں میں SREBP-1, SREBP-2, HMGCR, LDLr, NPC1, ABCA1 اور ApoE کا نمائندہ مغربی دھبہ اور کثافت کا تجزیہ /mL) 48 گھنٹے کے لیے۔ n=6 مختلف تجربات۔

ایکٹین اور ونکولن کو لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ (H) گاڑی اور NGF سے علاج شدہ U373 کلچر میڈیم میں ELISA پرکھ کے ذریعے ApoE لیولز (µg/mL) کی مقدار۔ n=3 مختلف تجربات۔ ڈیٹا کی نمائندگی کا مطلب ہے ± SD۔ شماریاتی تجزیہ کا اندازہ ایک واحد غیر جوڑا اسٹوڈیٹ ٹیسٹ ٹیسٹ کے ذریعے کیا گیا۔ * p < 0۔{7}}5, ** p < 0.01, *** p <0.001.

2.4 p75NTR کولیسٹرول پروٹین نیٹ ورک پر NGF-ثالثی اثرات میں جزوی طور پر ملوث ہے۔

تجرباتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ NGF جگر کے خلیوں میں کولیسٹرول میٹابولزم کو متاثر کرتا ہے اس کے کم وابستگی والے ریسیپٹر p75NTR کو چالو کرنے کے ذریعے [25]۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا اس سگنلنگ پاتھ وے کو ایسٹروسائٹک سیلز میں بھی محفوظ کیا جا سکتا ہے، ہم نے U373 کا علاج LM11A-31 کے ساتھ کیا، ایک چھوٹا سا لیگنڈ جو ایک مخصوص p75NTR ماڈیولیٹر کے طور پر کام کرتا ہے۔ یہ کمپاؤنڈ TrkA کو چالو نہیں کرتا ہے لیکن، اسی طرح NGF کی طرح، p75NTR بہاو سگنلنگ راستوں کو شامل کرتا ہے [36]۔ LM11A-31 نے HMGCR (شکل 3A) کے NGF کی ثالثی میں اضافے کی نقل کی۔

تاہم، کولیسٹرول میٹابولزم (شکل 3B–D) میں شامل دیگر پروٹینوں میں کوئی تبدیلی نہیں دیکھی گئی، اور نہ ہی ایکسٹرا سیلولر ApoE (Figure 3E) اور کولیسٹرول (کل، فری، اور ایسٹرز) کی کلچر میڈیم (شکل 3F) میں جاری ہونے والی مقدار میں۔ )۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ HMGCR کا NGF-حوصلہ افزائی اظہار p75NTR سرگرمی کے ذریعے ثالثی کرتا ہے، جبکہ NPC1، ABCA1، ApoE سراو، اور کولیسٹرول کے اخراج پر اثرات ممکنہ طور پر TrkA کو شامل کرنے والے دیگر نقل و حمل کے راستوں پر منحصر ہوتے ہیں۔

تصویر 2. غیر جانبدار لپڈس اور کولیسٹرول کے مواد پر این جی ایف کے اثرات۔ (A) U373 خلیوں کو گاڑی (Ctrl) یا NGF (100 ng/mL) کے ساتھ 48 گھنٹے تک علاج کیا گیا اور پھر غیر جانبدار لپڈس کے انٹرا سیلولر مواد کو دیکھنے کے لئے آئل ریڈ O سے داغ دیا گیا۔ n=3 مختلف تجربات۔ (B) گاڑی (Ctrl) اور NGF (100 ng/mL) کے ساتھ 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے U373 خلیوں پر فلپائنی داغ کی نمائندہ تصویر۔ n=3 مختلف تجربات۔ (C) گاڑی اور NGF سے علاج شدہ U373 خلیوں میں انٹرا سیلولر کولیسٹرول کی سطح (کل کولیسٹرول، فری کولیسٹرول، اور کولیسٹرول ایسٹرز) کی مقدار کا تعین۔ n=3 مختلف تجربات۔ (D) گاڑی (Ctrl) اور NGF (100 ng/mL) کے ساتھ 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے U373 خلیوں کے کلچر میڈیم میں کولیسٹرول کی مقدار (کل کولیسٹرول، مفت کولیسٹرول، اور کولیسٹرول ایسٹرز)۔ n=3 مختلف تجربات۔ ڈیٹا کی نمائندگی کا مطلب ہے ± SD۔ شماریاتی تجزیہ ایک غیر جوڑا طالب علم کا ٹی ٹیسٹ گا کر انجام دیا گیا۔ ** صفحہ<0.01.

شکل 3. کولیسٹرول میٹابولزم اور رطوبت پر LM11A-31 کے ذریعے p75NTR ماڈیولیشن کے اثرات۔ (A–D) گاڑی (Ctrl) اور LM11A-31 (0.1 µM) کے ساتھ 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے U373 خلیوں میں HMGCR، ABCA1، NPC1، اور ApoE کا نمائندہ مغربی دھبہ اور کثافت کا تجزیہ۔ n=4 مختلف تجربات۔

ونکولن نے پروٹین کی لوڈنگ کو معمول پر لانے کے لیے ہاؤس کیپنگ پروٹین کے طور پر کام کیا۔ (E) گاڑی سے کلچر میڈیم میں ELISA پرکھ کے ذریعے ApoE رقم (µg/mL) کی مقدار- اور LM11A-31-علاج شدہ U373 سیل۔ n=3 مختلف تجربات۔ (F) گاڑی (Ctrl) اور LM11A-31 (0.1 µM) کے ساتھ 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے U373 سیلز کے کلچر میڈیم میں کولیسٹرول کی مقدار (کل کولیسٹرول، مفت کولیسٹرول، اور کولیسٹرول ایسٹرز)۔ n=3 مختلف تجربات۔ ڈیٹا کی نمائندگی کا مطلب ہے ± SD۔ شماریاتی تجزیہ ایک واحد غیر جوڑا اسٹوڈیٹ ٹیسٹ ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ *** p < 0.001۔

For more information:1950477648nn@gmail.com