Oleanolic Acid Nanofibers Attenuated Particulate Matter-Induced Oxidative Stress in Keratinocytes

مزید معلومات کے لیے براہ کرم oscar.xiao@wecistanche.com سے رابطہ کریں۔

خلاصہ:ایئر بورن پارٹیکیولیٹ میٹر (PM) فضائی آلودگی کے اشارے میں سے ایسک ہے، اور یہ جلد میں آکسیڈیٹیو تناؤ کا باعث بننے والا اہم عنصر بھی ہے۔ Oleanolic ایسڈ (OA)، ایک قدرتی terpenoid مرکب، مؤثر طریقے سے PM-حوصلہ افزائی جلد کی عمر کو روکتا ہے؛ تاہم، OA میں پانی میں حل پذیری اور جلد جذب نہیں ہوتی، جو ادویات اور کاسمیٹکس میں اس کے استعمال کو محدود کرتی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد oleanolic ایسڈ nanofibers (OAnf) تیار کرنا اور PM سے علاج شدہ keratinocytes میں OA اور OAnf کے اثرات کا جائزہ لینا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ (OA dissolved in dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) نے PM-حوصلہ افزائی شدہ ری ایکٹو آکسیجر کی زیادہ پیداوار، تناؤ سے چلنے والی پروٹین کناز/Jun-amino-terminal kinase (SAPK/JNK) ایکٹیویشن، اور سوزش اور جلد کے تاثرات۔ اس کے علاوہ، OA کے نانوفائبر عمل نے OA کی پانی میں حل پذیری کو 99 سے زیادہ مؤثر طریقے سے بہتر بنایا،000-اس کی فزیکو کیمیکل خصوصیات کو تبدیل کرکے، جس میں سطح کے رقبے میں اضافہ، ذرات کے سائز میں کمی، بے ساختہ تبدیلی، اور ایکسپیئنٹس کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈنگ کی تشکیل۔ OAnf کی جلد میں داخل ہونے کی صلاحیت OA کے مقابلے میں مستقل طور پر 10-گنا زیادہ تھی۔ مزید یہ کہ جب PBS میں تحلیل کیا گیا تو OAnf نے PM میں اعلیٰ اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی سوزش، اور جلد کی عمر بڑھانے والی سرگرمیاں ظاہر کیں۔ OA کے مقابلے میں keratinocytes کا علاج کیا جاتا ہے۔ آخر میں، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ OAnf PM کی وجہ سے ہونے والی جلد کی پریشانیوں کو کم کرنے کے لیے ایک ٹاپیکل اینٹی آکسیڈینٹ فارمولیشن ہو سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:ذرات کے معاملات؛ oleanolic ایسڈ؛ nalnofiber؛ اینٹی آکسیڈینٹ غیر سوزشی؛ مخالف عمر

1. تعارف

فضائی آلودگی اب پوری دنیا میں صحت عامہ کا مسئلہ ہے۔ ٹیکنالوجی کی ترقی کے ساتھ، گیسوں، کیمیائی مادوں، حیاتیاتی آلودگیوں اور ذرات سمیت مختلف نقصان دہ مادے فضا میں جمع ہوتے ہیں اور لوگوں کی زندگیوں اور صحت کو بری طرح متاثر کرتے ہیں۔ ذرات (PM)، فضائی آلودگی کا ایک اشارے، مختلف نامیاتی مرکبات، حیاتیاتی طور پر اخذ کردہ مواد، اور ذرات کاربن مرکزے کا مجموعہ ہے[1]۔ پی ایم سانس کے ذریعے پھیپھڑوں میں داخل ہوتا ہے اور خون کی گردش میں داخل ہوتا ہے جس سے نظاماتی صحت کے خطرات جیسے کہ اعضاء کی سوزش اور قلبی اور سانس کی بیماریاں [2,3]۔ اس کے علاوہ، PM جلد کی رکاوٹ سے گزر سکتا ہے اور بالوں کے پٹکوں میں جمع ہو سکتا ہے اور بار بار رابطے سے ڈرمیس میں بھی گھس سکتا ہے۔ لہذا، PM کے لئے جلد کی زیادہ نمائش کا تعلق جلد کی عمر بڑھنے، رنگت میں تبدیلی، atopic dermatitis، ایکنی اور psoriasis [2,4] سے ہے۔ پی ایم کے ساتھ طویل رابطہ کیراٹینوسائٹس میں ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی زیادہ پیداوار کو کم کرتا ہے، جو اپوپٹوسس پاتھ وے، مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPKs) کے راستے، اور سوزش سمیت کئی سگنلنگ پاتھ ویز کو متحرک کرتا ہے۔ cycloxygenase-2 (COX-2)، ٹیومر نیکروسس فیکٹر- (TNF-a)، اور interleukin-1 (IL-1 ) کا بلند اظہار عام طور پر کیراٹینوسائٹس میں دیکھا جاتا ہے PM.اس کے علاوہ، PM میٹرکس میٹالوپروٹیناسز (MMPs) کو بھی چالو کرتا ہے اور اس کے نتیجے میں جلد کی لچک اور عمر بڑھ جاتی ہے [5]۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

قدرتی مصنوعات طویل عرصے سے مؤثر کاسمیوٹیکل اجزاء کے طور پر استعمال ہوتی رہی ہیں۔ Oleano-lic acid (OA, 3 -hydroxyolean-12-en-28-oicacid), ایک پانچ رنگوں والا triterpenoid مرکب، پودوں، پھلوں اور سبزیوں میں بڑے پیمانے پر موجود ہے [6]۔ OA اپنے ہیپاٹک حفاظتی اثرات کے لیے مشہور ہے جیسے کیمیکل سے متاثرہ شدید جگر کے نقصان کو کم کرنا اور جگر کی دائمی بیماریوں میں فائبروسس/سروسس [6,7]۔ اس کے علاوہ، پچھلے مطالعات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ OA اینٹی آکسیڈنٹ، اینٹی کینسر، اینٹی سوزش، اینٹی ذیابیطس، اینٹی مائکروبیل اثرات رکھتا ہے [8]Kim et al. انکشاف ہوا کہ OA PM- علاج شدہ کیراٹینوسائٹس [9] میں پرو سوزش والی سائٹوکائن (TNF-a,IL-6) اور جلد کی عمر بڑھنے والے پروٹین (MP-1) کے اظہار کو کم کر سکتا ہے۔ تاہم، OA کی فزیک کیمیکل خصوصیات پانی میں تحلیل ہونا مشکل بناتی ہیں، جو ادویات، خوراک اور کاسمیٹکس میں اس کے استعمال کو محدود کرتی ہے۔

منشیات کی ترسیل کے فارمولیشن ڈیزائن جیسے پولیمر پر مبنی نینو کیریئرز، li۔ پوزوم، اور نانوفائبر عام طور پر فعال اجزاء کی فزیکو کیمیکل خصوصیات کو بہتر بنانے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ ان فارماسیوٹیکل فارمولیشنز میں ایکسپیئنٹس کے ساتھ فعال اجزاء کو انکیپسولیشن ان کی پانی میں حل پذیری اور جلد کے جذب کو بڑھا سکتی ہے اور جلد میں زہریلے پن اور جلن کو کم کر سکتی ہے۔ ان میں سے، نانوفائبرز ایک ابھرتی ہوئی نانوائزڈ فارمولیشن ہیں، جس میں سطح کا ایک بڑا حصہ، کم کثافت، اور زیادہ تاکنا والیوم ہے، اور پہلے سے ہی بائیو میڈیسن میں بڑے پیمانے پر استعمال ہو رہے ہیں، جو زبانی ادویات کے حجم کو کم کر سکتے ہیں، فعال اجزاء کے استحکام کو بڑھا سکتے ہیں، کنٹرول کر سکتے ہیں۔ رہائی، حیاتیاتی دستیابی کو بہتر بنانا، اور مصنوعی ٹشوز بنانا [10]۔ الیکٹرو اسپننگ ایک عام ٹیکنالوجی ہے جو نانوفائبرز کی پیداوار کے لیے استعمال ہوتی ہے اور بڑے پیمانے پر پیداوار کے ساتھ انتہائی مطابقت رکھتی ہے [1]۔ لہذا، الیکٹرو اسپننگ کے عمل کا استعمال کرتے ہوئے نانوفائبر کی تیاری بیک وقت بائیویل کو بہتر بنا سکتی ہے۔ ناقص پانی میں حل پذیری کے ساتھ ایک فعال جزو کی ity اور پیداواری کارکردگی۔ Polyvinyl pyrrolidone (PVPK90) اور 2-hydroxypropyl- -cyclodextrin (HPBCD) انسانوں میں ہائیڈروفوبک فعال دواسازی اجزاء کو حل کرنے اور فراہم کرنے کے لیے FDA سے منظور شدہ مرکبات ہیں۔cistanche کولیسٹرولپچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ HPBCD اور PVPK90 کے ساتھ تیار کیے گئے نانوفائبرز نے پانی میں گھلنشیلتا ard جلد میں resveratrol [12] اور plai oil [13] میں نمایاں طور پر بہتری لائی ہے۔ اس طرح، اس مطالعے کا مقصد PVPK90 اور HPBCD کو ڈیلیوری کیریئر کے طور پر استعمال کرنا تھا تاکہ oleanolic ایسڈ nanofibers (OAnf) کو تیار کیا جا سکے اور PM سے علاج شدہ keratinocytes میں OA اور OAnf کے اثرات کا جائزہ لیا جا سکے۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

موجودہ مطالعے کا مقصد PM-حوصلہ افزائی keratinocytes کے نقصان میں DMSO میں تحلیل OA کے حیاتیاتی اثر کا جائزہ لینا تھا۔ OA کی ناقص پانی میں حل پذیری پر قابو پانے کے لیے، ہم نے PVPK90 اور HPBCD کو ڈیلیوری کیریئر کے طور پر oleanolic ایسڈ nanofibers (OAnf) کو الیکٹرو اسپننگ کے عمل کے ذریعے تیار کرنے کے لیے استعمال کیا اور پھر خام OA اور OAnf کے درمیان فزیکو کیمیکل خصوصیات کی تبدیلیوں کا تعین کیا تاکہ پانی کی گھلنشیلیت کی بہتری کو واضح کیا جا سکے۔ جلد کی دخول. OA کے nanofiber عمل کے بعد حیاتیاتی اثر کا موازنہ کرنے کے لیے، OAnf اور OA کی اینٹی آکسیڈیٹیو، اینٹی سوزش، اور عمر رسیدہ سرگرمی کا جائزہ لینے کے لیے PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان کا ماڈل استعمال کیا گیا۔

2. مواد اور طریقہ

2.1۔مواد

Oleanolic acid hydrate (OA) Tokyo Chemical Industry Co., Ltd سے خریدا گیا تھا۔ (ٹوکیو، جاپان)۔ Polyvinyl pyrrolidone (Luviskol" K90 پاؤڈر، PVP) Wei Ming Pharmaceutical Mfg. Co., Ltd. Taipei, Taiwan سے خریدا گیا تھا۔ Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) Zibo Qianhui (Zibo, Diethanolme) اور چائنا سے حاصل کیا گیا تھا۔ سلفوکسائیڈ (DMSO) کو اینکور کیمیکل (سرے ہلز، آسٹریلیا) سے خریدا گیا تھا۔ سیل کلچرز کے لیے تمام کیمیکلز یا ری ایجنٹس حیاتیاتی درجہ کے تھے، اور فزیوکیمیکل تعین کے دیگر کیمیکلز اعلیٰ کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) گریڈ کے تھے۔

2.2 سیل وائبلٹی پرکھ

ایک فعال اجزا کی خلیے کی قابل عملیت کا تعین ایک عام طریقہ ہے جو فعال اجزاء کے لیے ان کی حیاتیاتی سرگرمی کا جائزہ لینے کے لیے مناسب ارتکاز کی حدود کو منتخب کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ HaCaT keratinocytes Istituto Zooprofilattico Sperimen-tale della Lombardia edell'Emilia Romagna (Brescia, Italy) سے خریدے گئے تھے۔ HaCaT خلیات ڈی ایم ای ایم (ہیمیڈیا لیبارٹریز، ممبئی، انڈیا) میں کلچر کیے گئے تھے جن میں 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (ہیزلٹن پروڈکٹ، ڈینور، PA، USA) 1 فیصد پینسلین-اسٹریپٹومائسن (بائیولوجیکل انڈس-ٹریس، کنیکٹیکٹ، NE) پر مشتمل تھا۔ , USA) اور HaCaT خلیات کو انکیوبیٹر (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) میں 5 فیصد COz کے ساتھ 37 ڈگری پر سیٹ کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ کے نمونوں کی تیاری کے لیے، OA اور OAnf کو DMSO اور PBS میں تحلیل کر دیا گیا، اور پھر ہر نمونے کو DMEM میں خلیے کی قابل عملیت کے تعین کے لیے فیٹل بووائن سیرم کے بغیر پتلا کر دیا گیا۔ HaCaT خلیات کو 24 گھنٹے کے لیے 1 × 104 خلیات/100 μL/ کنویں کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد کلچر میڈیم کو ہٹا دیا گیا، اور خلیات کو OA اور OAnf کی مختلف ارتکاز کے ساتھ 5 سے 80 uM تک سیرم فری DMEM میں 24 گھنٹے کے لیے علاج کیا گیا۔ پرکھ کے وقت، علاج کا ذریعہ ہٹا دیا گیا تھا، اور ہر کنویں میں 150 μL 0.5 mg/mL MTT محلول شامل کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے 3 گھنٹے کے بعد، MTT محلول کو ہٹا دیا گیا، اور ہر کنویں کے جامنی رنگ کے فارمازان کرسٹل DMSO کے 100 uL میں تحلیل ہو گئے۔ ہر کنویں کے 550 nm پر جذب کو پھر مائکروپلیٹ سپیکٹرو فوٹومیٹر (BioTek uQuant، Winoski، VT، USA) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ سیل کی قابل عملیت کا حساب درج ذیل فارمولے سے کیا گیا تھا۔

2.3.ری ایکٹو آکسیجن اسپیسز (ROS) مواد کا تعین

پی ایم (اسٹینڈرڈ ریفرنس میٹریل، SRMB1649b) نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف اسٹینڈرڈز اینڈ ٹیکنالوجی سے خریدا گیا تھا۔ یہ پروڈکٹ 1976 اور 197 میں واشنگٹن ڈی سی میڈ میں جمع کی گئی تھی۔ PBS میں کل 10 mg/mL PM کو معطل کیا گیا تھا اور پھر استعمال سے پہلے 10 منٹ کے لیے سونیکیٹ کیا گیا تھا۔ کل 1 × 10 پلس HaCaT keratinocytes 96-کنویں پلیٹوں میں 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 حالات میں کلچر کیے گئے تھے۔ خلیوں کا علاج بالترتیب DMSO میں OA، PBS میں OA، اور PBS میں OAnf میں 24 گھنٹے کے لیے کیا گیا۔ پھر، انہیں 20 um dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA؛ سگما، ٹوکیو، جاپان) کے حل کے ساتھ 30 منٹ کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، ہر کنویں میں 50 ug/cm² PM ڈالا گیا اور 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کو دھویا گیا۔ PBS کے ساتھ دو بار، اور ہر نمونے کی فلوروسینس کی شدت کا تجزیہ thne fluorescent پلیٹ ریڈر (excitation: 485 nm؛ emission: 528 nm) (BioTek, Winooski, VI, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ROS پیداوار:

2.4 ویسٹرن بلاٹ تجزیہ

کل 4 × 105 HaCaT keratinocytes کو 24 گھنٹے کے لیے 6-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا۔ اس کے بعد خلیوں کا علاج OA یا OAnf سے 24 گھنٹے کے لیے سیرم فری میڈیم میں کیا گیا جس کے بعد PM کا اضافہ کیا گیا۔ مختلف ٹائم پوائنٹس کے بعد، سیلز کو RIPAlysis بفر (Merck Millipur, Burlington, MA,USA) کے ساتھ لیس کیا گیا، پھر 12،000 rpm پر 10 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ بی سی اے پروٹین پرکھ کٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کا استعمال پروٹین کی حراستی کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، پروٹین کو سوڈیم ڈوڈیسیل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس (SDS-PAGE) کے ذریعے الگ کیا گیا، اور پھر پولی وینیلائیڈین ڈائی فلوورائیڈ (PVDF) میم-برینس (مرک ملی پور) پر داغ دیا گیا۔ ٹی بی ایس) 1 فیصد ٹوین کے ساتھ اس مطالعے میں استعمال ہونے والی بنیادی اینٹی باڈیز میں سائکلو آکسیجنز-2 (COX-2)، میٹرکس میٹالوپروٹینیز-9 (MMP-9)، میٹالوپرو-ٹینیز کے ٹشو روکنے والے شامل تھے-1 (TIMP-1)، تناؤ سے چلنے والا پروٹین کناز/جون-امینو-ٹرمینل کناز (SAPK/JNK) (سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، ڈینورس، MA، USA)، GAPDH (سانتا کروز بائی ٹیکنالوجی، ڈلاس، TX، USA)، میٹرکس میٹالوپروٹینیز-1 (MMP-1) (Proteintech Group, Rosemont, IL, USA), p380، ایکسٹرا سیلولر ریگولیٹڈ پروٹین کنیز (ERK)، اور نیوکلیئر فیکٹر کپا لائٹ چین- ایکٹیویٹڈ بی سیلز (NF-kB) کو بڑھانے والا (مرک ملی پور، برلنگٹن، ایم اے، یو ایس اے)۔ اس کے بعد، ثانوی اینٹی باڈیز کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لیے شامل کیا گیا اور بہتر کیمیلو مائنسینس ریجنٹس (ECL؛ تھرمو فشر سائنٹیفک) کے ساتھ رد عمل ظاہر کیا گیا۔ GAPDH کے خلاف اینٹی باڈیز کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ہر پروٹین کے اظہار کا تجزیہ ٹچ امیجر (e-BLOT؛ شنگھائی، چین) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اور امیج جے کا استعمال کرتے ہوئے اظہار کی مقدار درست کی گئی۔

2.5.Oleanolic Acid Nanofibers (OAnf) کی تیاری

OAnfs OA:PVP:HBPCD (1:8:5،1:8:10، اور 1:8:20) کے مختلف تناسب کے ساتھ الیکٹرو اسپن تھے۔ الیکٹرو اسپن محلول اس طرح تیار کیا گیا تھا: 25 ملی گرام OA کو 5 ملی لیٹر میتھانول میں تحلیل کیا گیا تھا، اور HPBCD کو شامل کیا گیا تھا اور ایک واضح حل حاصل کرنے کے لیے مقناطیسی اسٹرر کے ساتھ ہلایا گیا تھا۔ پھر، PVPK90 کو فوری طور پر شامل کیا گیا، اور مرکب کو 1 گھنٹہ کے لیے ہلایا گیا۔cistanche deserticola کے ضمنی اثراتنانوفائبرز کو FES-COS الیکٹرو اسپننگ آلات (Falco Tech Enterprise Co., Taipei, Taiwan) کا استعمال کرتے ہوئے درج ذیل شرائط کے تحت بُنا گیا تھا: ایک 10 mL سرنج جس کی سوئی 0 کے اندرونی قطر کی تھی۔ الیکٹرو اسپننگ کے لیے 22 ملی میٹر کا استعمال کیا گیا تھا۔ بہاؤ کی شرح کو 0.2 ملی لیٹر فی گھنٹہ میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ لاگو وولٹیج 12 KV پر سیٹ کیا گیا تھا۔ ٹپ کلیکٹر کا فاصلہ 10 سینٹی میٹر تھا۔ الیکٹرو اسپننگ کے عمل کے بعد، نانوفائبرز کو ایلومینیم ورق کا استعمال کرتے ہوئے جمع کیا گیا۔ نئے ترکیب شدہ نانوفائبرز کو ایک مہر بند پلاسٹک کے تھیلے میں رکھا گیا تھا اور نمی پروف کنٹینر میں محفوظ کیا گیا تھا۔

2.6. اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) Oleanolic ایسڈ کا تجزیہ

HPLC تجزیہ نظام (LaChrom Elite L{{0}}, Hitachi, Tokyo, Japan) ایک L-2130 پمپ، ایک L-2200 آٹو سیمپلر، اور ایک L{{3} پر مشتمل تھا۔ } } الٹرا وائلٹ نظر آنے والا (UV-vis) ڈیٹیکٹر۔ تجزیہ کالم Mightysil RP-18 GP کالم (250×4.6 mm id.,5 um) تھا۔ موبائل فیز ایک مقررہ تناسب (95:5؛ w/v) میں میتھانول اور 0.1 فیصد گلیشیل ایسٹک ایسڈ محلول پر مشتمل تھا۔ موبائل فیز کی بہاؤ کی شرح 1 ملی لیٹر/منٹ تھی، اور UV ڈیٹیکٹر کی کھوج کی طول موج 215 nm پر سیٹ کی گئی تھی۔ اولیانولک ایسڈ کے جذب کی چوٹی 7.5 منٹ پر ظاہر ہوئی۔ oleanolic ایسڈ کے انشانکن وکر نے 001-100 ug/mL کی حد کے اندر ایک اچھا لکیری （r =0.999） ظاہر کیا۔

2.7. مورفولوجی، فائبر قطر، اور OAnf کی پارٹیکل سائز کی پیمائش

نانوفائبرز کے مختلف نمونوں پر ایک آئن کوٹر کے ساتھ پلاٹینم چڑھایا گیا تھا (E{{0}}, HITACH, Tokyo, Japan); شرط 10 ایم اے 120 سیکنڈ بعد مقرر کی گئی تھی۔ ہر نمونے کی شکل اور شکل کو اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ (Hitachi S4700 Hitachi, Tokyo, Japan) کے ذریعے دیکھا گیا۔ ہر نمونے کا قطر امیج جے سافٹ ویئر کے ذریعہ شمار کیا گیا تھا۔ ایک Zetasizer 3000HS تجزیہ کار (Malvern, Worcestershire, UK) OAnf کے ذرہ سائز کی پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ OA اور OAnf کے ذرہ کا سائز بالترتیب 1 mg/mL اور 0.1 mg/mL کے ارتکاز میں ماپا گیا۔cistanche dosage redditاس کے علاوہ، ہم نے ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (TEM,JEM{{0}}EXII آلہ، JEOL Co., Tokyo, Japan) کا استعمال کرتے ہوئے پانی میں تحلیل ہونے کے بعد OAnf کی شکل کی یکسانیت کا بھی مشاہدہ کیا۔ ٹیسٹ کے نمونے کو ڈیونائزڈ پانی میں OA کے 1 ug/mL میں ایڈجسٹ کیا گیا اور پھر تانبے کی جالی میں ٹپکایا گیا، اور پھر 0.5 فیصد (w/v) فاسفوٹونگسٹک ایسڈ کو فوری طور پر ٹپکایا گیا۔ خشک ہونے کے بعد، ہر نمونہ TEM پر مشاہدے کے لیے رکھا گیا تھا۔

2.8.OAnf کی ڈرگ لوڈنگ اور انکیپسولیشن کی کارکردگی

دوا سازی کے عمل کی کارکردگی کا جائزہ لینے کے لیے ڈلیوری سسٹم کی ڈرگ لوڈنگ اور انکیپسولیشن کی کارکردگی کا تعین کرنا انتہائی ضروری ہے۔ منشیات کی لوڈنگ کا شمار طے شدہ مواد کی فیصد اور OA nanofibers میں موجود OA کے نظریاتی مواد کے حساب سے کیا گیا تھا۔ منشیات کی لوڈنگ کے تعین کے لیے ہر نمونے کا 100 μL میتھانول کے 900 μL میں شامل کیا گیا تھا، اور OA کا ارتکاز تھا جہاں CoA OAnf سے OA کا ارتکاز ہے، WoA شامل کردہ OA کی نظریاتی مقدار ہے، VoAnf OAnf حل کا حجم ہے۔

انکیپسولیشن کی کارکردگی اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ آیا نانوفائبرز نے فعال مرکبات کو کامیابی سے انکیپسو لیٹ کیا ہے۔ OAnf کے نمونے deionized پانی میں تحلیل کیے گئے، اور سینٹرفیوگل فلٹر ڈیوائسز (Microcon YM-10,Millipore, Billerica,MA, USA) میں شامل کیے گئے، اور پھر 12،00 rpm پر 10 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ ریفریجریٹڈ سینٹری فیوج (سینٹری فیوج 5430R، ایپنڈورف، ہیمبرگ، جرمنی)۔ انکیپسیلیٹڈ حصہ کو اوپری ٹیوب میں برقرار رکھا گیا تھا، اور سالماتی وزن میں فرق کی وجہ سے غیر منسلک حصہ کو نچلی ٹیوب سے جمع کیا گیا تھا۔ مذکورہ بالا HPLC طریقہ سے غیر منقطع OA کی مقدار کا پتہ چلا۔ encapsulation کی کارکردگی کا حساب لگانے کے لیے درج ذیل مساوات کا استعمال کیا گیا:

جہاں AoA نانوفائبرز میں شامل OA (کھانے کی حالت سے حاصل کردہ) کی نظریاتی مقدار ہے، اور Aunentrapped OA غیر منسلک OA کی مقدار ہے۔

2.9.OAnf کی آبی حل پذیری

Raw OA (1 mg) اور OAnf کے مختلف تناسب والے فارمولیشنز (1 mg oleanolic ایسڈ کے مساوی پر مشتمل) کو بالترتیب 1 mL deionized پانی میں تحلیل کیا گیا، اور پھر الٹراسونیکیٹر (Branson 5510, Emerson Electric, سینٹ لوئس، MO، USA) 20 منٹ کے لیے۔ ہر نمونے کو 0.45 um جھلی (Pall Corporation, Washington, NY, USA) کے ذریعے فلٹر کیا گیا تھا، اور 10- گنا کو پتلا کیا گیا تھا۔ پتلے ہوئے حلوں کا HPLC کے ذریعے تجزیہ کیا گیا، اور ان کی پانی میں حل پذیری کے مقابلے میں oleanolic ایسڈ کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے معیاری وکر کا استعمال کیا گیا۔

2.10 کرسٹل سے بے شکل تبدیلی کا تعین

ایکس رے ڈفریکٹومیٹری (سیمنز D500، کارلسروہے، جرمنی) کا استعمال OA، excipients اور OAnf کی کرسٹل لائن شکل کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ یہ تجزیہ نکل فلٹر شدہ Cu-Ka ریڈی ایشن کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، 40 kV کا وولٹیج اور 25 mA کرنٹ استعمال کیا۔ اسکین کی شرح 1 ڈگری / منٹ تھی، اور اسکین کیے گئے زاویوں کی حد 5 ڈگری سے 50 ڈگری تک تھی۔ 2.11.OA اور Excipients کے درمیان بین مالیکیولر تعامل

فوئیر ٹرانسفارم انفراریڈ اسپیکٹروسکوپی (FTIR) اور 1HNuclear Magnetic Resonance (1H NMR) عام طور پر فعال اجزاء اور excipients کے درمیان بین سالماتی تعامل کی تصدیق کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ Oleanolic ایسڈ، PVP، HPBCD، اور OAnf کے مختلف تناسب والے فارمولیشنز کو بالترتیب پوٹاشیم برومائیڈ (KBr) کے ساتھ 1:9 کے حجم کے تناسب میں مارٹر کا استعمال کرتے ہوئے ملایا گیا اور گولیوں میں دبایا گیا۔ اس کے بعد ہر نمونے کا FTIR سپیکٹرو فوٹومیٹر (Perkin-Elmer 200 spectrophotometer, Perkin-Elmer, Norwalk, CT USA) کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ اسکیننگ کی حد 400-4000 سینٹی میٹر-4 تھی۔ اس کے علاوہ ، ہر نمونے کو 99.8 فیصد DMSO-dg (Merck, St. Louis, MO, USA) کے 0.8 mL میں تحلیل کیا گیا تھا اور JEOL Alpha 400 اسپیکٹومیٹر (Nihon Denshi Co., Tokyo, Japan) کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا تھا۔

2.12.Ex Vivo جلد میں Oleanolic ایسڈ اور اس کے Nanofiber کی دخول

یہ تجربہ یورپی کاسمیٹک ٹوائلٹری اینڈ پرفیومری ایسوسی ایشن (COLIPA) کے رہنما خطوط کے معیاری پروٹوکول کے مطابق کیا گیا تھا۔ فرانز ڈفیوژن سیل سسٹم کو اوپری ڈونر چیمبر اور لوئر ریسیپٹر چیمبر کے شیشے کے کنٹینرز میں تقسیم کیا جاسکتا ہے۔ کل 1.5 ملی لیٹر بفر محلول جس میں 0.14MNaCl,2mMK-HPO4, 0.4 mM KH2PO4 (pH7.4) شامل تھے رسیپٹر چیمبر میں رکھا گیا تھا اور اسے 600 rpm پر مقناطیسی بار کے ساتھ ہلایا گیا تھا۔ تجربہ. سور کی تازہ جلد مارکیٹ میں ایک مقامی قصاب سے حاصل کی گئی تھی اور تجربے کے دوران اسے فریج میں رکھا گیا تھا۔ جلد کے ہر نمونے کو 2 سینٹی میٹر × 2 سینٹی میٹر کے ٹکڑوں میں کاٹا گیا تھا اور اسے دو چیمبروں کے درمیان رکھا گیا تھا، جس میں سٹریٹم کورنیئم کا رخ اوپر کی طرف تھا۔ فرانز ڈفیوژن سیل کو گردش کرنے والے پانی کے غسل کے ساتھ 32 ڈگری پر برقرار رکھا گیا تھا۔cistanche اقتباس کے فوائدپھر، OA یا OAnf کے 1 mg/mL کا 200 μL ڈونر چیمبر میں 1,2، یا 4 h کے لیے شامل کیا گیا۔ اس کے بعد، سور کی جلد کو فرانز ڈفیوژن سیل سے ہٹا دیا گیا، اور سٹریٹم کورنیوم کو 15 بار ٹیپ اتار کر حاصل کیا گیا۔ ہر بقایا جلد کے نمونے کو ہیٹ پیڈ کے ساتھ 95 ڈگری تک گرم کیا گیا تھا، اور ایپیڈرمس اور ڈرمس کو اسکیلپل کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا گیا تھا۔ ہر نمونے کو میتھانول میں ڈوبا گیا تھا اور OA نکالنے کے لیے 1h کے لیے سونیکیٹ کیا گیا تھا، اور ہر نمونے میں oleanolic ایسڈ کے مواد کا تعین HPLC طریقہ سے کیا گیا تھا۔ 2.13۔ شماریاتی تجزیہ

تمام اعداد و شمار کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ مختلف گروپوں کے درمیان اعداد و شمار کے لحاظ سے اہمیت کا تجزیہ ٹکی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے ساتھ تغیر (ANOVA) کے تجزیہ سے کیا گیا تھا۔<0.05 indicated="" statistical="" significance.="">

3.1 Oleanolic ایسڈ سوزش، عمر بڑھنے، اور ROS/MAPKs کو PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان میں سگنلنگ پاتھ ویز کو دبا سکتا ہے۔

حیاتیاتی سرگرمی کی تشخیص کے لیے مناسب ارتکاز کی حد تلاش کرنے کے لیے، DMSO میں تحلیل شدہ OA کی cytotoxic-ity کا تعین MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے انسانی HaCaT keratinocytes خلیات میں کیا گیا تھا۔ جیسا کہ شکل 1A میں دکھایا گیا ہے، 40 اور OA کے 80 μM 32 سے 16 فیصد سیل کی عملداری سے وابستہ تھے۔ 20 μM سے کم OA میں ابھی بھی سیل کی بقا کی شرح 85 فیصد سے زیادہ تھی۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ 5-20 μM کے ارتکاز میں OA کا انسانی HaCaT keratinocytes (شکل 1A) پر کوئی سائٹوٹوکسک اثرات نہیں ہیں۔ اسی مناسبت سے، OA کا مطالعہ 5-20 uM کے ارتکاز پر کیا گیا تاکہ PM سے متاثر کیراٹینوسائٹس کو پہنچنے والے نقصان میں اس کے اینٹی آکسیڈینٹ اور انسداد آلودگی کی سرگرمی کی تفتیش کی جا سکے۔ حال ہی میں، بہت سے مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ PM ایک عام فضائی آلودگی ہے جس کی وجہ سے ROS کی زیادہ پیداوار ہوتی ہے اور اس کے نتیجے میں جلد کے نظام کو آکسیڈیٹیو تناؤ کی ایک سیریز کے ذریعے نقصان پہنچتا ہے، بشمول لپڈ پیرو آکسیڈیشن، پروٹین کاربونیلیشن، اور ڈی این اے میوٹیشن [14-16]جیسا کہ میں دکھایا گیا ہے۔ شکل 1B، PM علاج نے ROS کی پیداوار میں نمایاں اضافہ کیا جب علاج نہ کیے جانے والے گروپ (p<0.05).in contrast,="" pretreatment="" with="" oa="" effectively="" decreased="" pm-induced="" ros="" overproduction="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05).there-fore, these="" results="" suggested="" that="" oa="" possessed="" antioxidant="" activity="" to="" prevent="" pm-induced="" oxidative="" stress="" by="" reducing="" the="" ros="" overproduction.="" in="" addition,="" ros="" overproduction="" after="" pm="" exposure="" can="" activate="" the="" phosphorylation="" of="" mapks="" proteins,="" including="" p-erk,="" p-p38,="" and="" p-jnk,="" triggering="" the="" protein="" expressions="" of="" inflammation="" and="" aging[17,18]the="" present="" study="" also="" found="" that="" pm="" treatment="" can="" increase="" the="" expression="" of="" inflam-matory="" proteins="" (cox-2="" and="" nf-kb),skin="" aging-related="" proteins="" (mp-1,mmp-9="" and="" timp-1),and="" phosphorylation="" of="" erk,jnk,="" and="" p38=""><0.05). our="" present="" results="" also="" demonstrated="" that="" oa="" at="" 10="" and="" 20="" um="" significantly="" inhibited="" the="" protein="" expression="" of="" nf-kb="" and="" cox-2="" when="" compared="" with="" the="" pm="" treatment="" group="" (p=""><0.05)(figure 1c)furthermore,="" oa="" pretreatment="" also="" effectively="" reversed="" pm-induced="" alteration="" on="" mmp-1="" and="" timp-1="" expression=""><0.05) but="" had="" no="" effect="" on="" mmp-9(figure="" 1d).="" we="" further="" de-termined="" the="" effects="" of="" oa="" treatment="" on="" phosphorylation="" of="" mapks="" during="" pm="" exposure,="" and="" our="" results="" indicated="" that="" oa="" could="" inhibit="" the="" phosphorylation="" of="" jnk=""><05), but="" had="" no="" effect="" on="" erk="" or="" p38="" (figure="" 1e).="" according="" to="" the="" above="" results,="" when="" dissolved="" in="" dmso,="" oa="" displayed="" good="" skin-protective="" activity="" and="" could="" ameliorate="" pm-induced="" ros="" overproduction,="" jnk="" activation,="" and="" inflammatory="" and="" skin-aging="" protein="" expression="" in="">

3.2 Oleanolic Acid Nanofibers نے فزیک کیمیکل خصوصیات کو بہتر بنا کر پانی میں حل پذیری اور خام Oleanolic ایسڈ کی جلد میں داخل ہونے میں اضافہ کیا

3.2.1.Oleanolic ایسڈ اور اس کے نانوفائبرز کی سطحی شکل

SEM مشاہدے کے تحت، HPBCD کی ظاہری شکل نے ایک کروی اور غیر محفوظ ایکسپیئنٹ پیش کیا، اور اس کا سائز تقریباً 20 سے 50 μm（Figure2A） تھا۔ PVPK90 فاسد کثیر الاضلاع ذرات اور 60 um سے زیادہ کے ذرہ کا سائز (Figure2A) ہے .Raw oleanolic acid ایک بے ترتیب گول دانے دار پاؤڈر ہے جس کا سائز 3-60 um ہے۔ شکل 2D-F oleanolic ایسڈ کے مختلف وزن کے تناسب کا اوسط فائبر قطر دکھاتا ہے: HPBCD:PVPK90 174.83±19.53nm، 219.23±18.93nm، اور 403.17±32.99nm تھے، جو بالترتیب HP8±32.99nm تھا۔ :20) OAnf کی وجہ سے فائبر کا بڑا قطر (ٹیبل 1) ہے۔

3.2.2.پانی میں OAnf کی تشکیل نو کے ذرہ کا سائز اور شکل

پانی میں تحلیل شدہ OAnf (OA:PVP:HPBCD, 1:8:20) کے ذرہ کی شکل اور ذرہ سائز کا مشاہدہ کرنے کے لیے، ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکرو اسکوپ (TEM) کے تحت OAnf کی تصویر دکھائی گئی۔ کہ اولیانولک ایسڈ کے ذرات کروی تھے اور پانی میں یکساں طور پر پھیلے ہوئے تھے (شکل 3)۔ ذرہ کے سائز کی تصدیق لیزر پارٹیکل سائز اینالائزر (ٹیبل 2) سے بھی ہوئی۔ OA اور OAnf کے ذرہ سائز بالترتیب 5079.50±384.87 nm اور 302.37±11.91 nm تھے۔ OA اور OAnf کے پولی ڈسپرسٹی انڈیکس (PDI) بالترتیب 1.63 ± 0.21 اور 0.32 ± 0.02 تھے۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ الیکٹرو اسپننگ کے عمل نے یکساں ذرہ کی تقسیم کے ساتھ OA کے ذرہ کے سائز کو مؤثر طریقے سے کم کیا اور اس کے نتیجے میں سطح کے رقبے میں اضافہ ہوا۔

3.2.3.Oleanolic Acid Nanofibers کی منشیات کی لوڈنگ، انکیپسولیشن کی کارکردگی، اور پانی میں حل پذیری

جیسا کہ جدول 3 میں دکھایا گیا ہے، ایکسپیئنٹس کے مختلف تناسب میں OA کی لوڈنگ فیصد بالترتیب 72.36±10.45 فیصد، 84.23±3.62 فیصد، اور 98.19±4.82 فیصد تھی۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ HPBCD کا ایک اعلی تناسب منشیات کی لوڈنگ کا بہتر اثر ظاہر کرتا ہے۔ تمام فارمولیشنز کی انکیپسولیشن کی کارکردگی 95 فیصد سے زیادہ تھی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ PVPK90 اور HPBCD نے مؤثر طریقے سے OA کو سمیٹ لیا ہے۔ اس کے علاوہ، OAnf کی پانی میں حل پذیری مختلف تناسب کے ساتھ 296.14±57.75 ug/mL,3952mL±7ug/mL. اور بالترتیب 998.7±58.32 ug/mL۔چنگیز خانان نتائج سے ظاہر ہوا کہ فارمولیشن میں HPBCD میں اضافے نے خام OA کی پانی میں حل پذیری کو ڈرامائی طور پر بڑھا دیا۔ اس کے برعکس، خام OA کی پانی میں حل پذیری کا تعین نہیں کیا جا سکا کیونکہ یہ HPLC طریقہ میں پتہ لگانے کی حد (0.01 ug/mL) سے کم ہے۔ اس نتیجہ نے اشارہ کیا کہ خام OA کے مقابلے میں 1:8:20 OAnf میں پانی کی حل پذیری میں 1000- گنا سے زیادہ بہتری تھی۔ اس طرح، مندرجہ ذیل مطالعات میں، 18:20 OAnf کا استعمال PM-حوصلہ افزائی keratinocytes کے نقصان کے ماڈل میں حیاتیاتی سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔

3.2.4.Oleanolic ایسڈ اور اس کے نانوفائبرز کی کرسٹل لائن تبدیلی

خام OA، excipients، اور اس کے nanofibers کے X-ray diffraction (XRD) پیٹرن تصویر 4 میں دکھائے گئے ہیں۔ Raw OA نے 5 ڈگری -20 ڈگری کے اسکیننگ زاویہ پر متعدد اعلی شدت کی خصوصیت کے پھیلاؤ کی چوٹیوں کی نمائش کی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ خام OA ایک کرسٹل مرکب تھا۔ دوسری طرف، PVPK90 اور HPBCD کے تفاوت کے نمونوں میں کوئی واضح کرداری تفاوت کی چوٹیاں نہیں ہیں۔ اس کے علاوہ، الیکٹرو اسپننگ پروسیسنگ کے تحت خام OA کے لیے، خام OA کی تمام خصوصیت کے پھیلاؤ کی چوٹیاں مکمل طور پر غائب ہوگئیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ خام کی نوعیت OA کو کرسٹل لائن سے امورفوس میں تبدیل کیا گیا تھا (شکل 4)۔ ان نتائج کے مطابق، ہم یہ نتیجہ اخذ کر سکتے ہیں کہ خام اولیانولک ایسڈ کو کامیابی کے ساتھ HPBCD میں سمیٹ لیا گیا تھا اور نانوفائبر کے عمل کے بعد PVPK90 کے ذریعے سمیٹ لیا گیا تھا۔

3.2.5.Oleanolic ایسڈ اور Excipients کے درمیان انٹرمولیکیولر ہائیڈروجن بانڈ کی تشکیل

خام OA اور HPBCD کا PVPK90 کے ساتھ باہمی تعامل کا تعین FTIR سپیکٹروسکوپی کے ذریعے کیا گیا تھا، اور نتائج کو شکل 5 میں دکھایا گیا ہے۔ FTIR سپیکٹرم نے واضح طور پر خام OA کے کئی کیمیائی فنکشنل گروپس کے جذب کو ظاہر کیا، بشمول 3463 سینٹی میٹر پر ایک جذب بینڈ 3}} (——OH اسٹریچ وائبریشن)، 1696 سینٹی میٹر-1 (——C=O اسٹریچ وائبریشن)، اور 1462 cm-l (—CHz اسٹریچ وائبریشن) (شکل 5)۔ جب OA، PVPK90، اور HPBCD کو نانوفائبر بنانے کے لیے پیچیدہ کیا گیا تھا، تو ان کیمیائی فنکشنل گروپس کا جذب واضح طور پر کم جذب میں منتقل ہو گیا تھا۔ یہ نتائج PVPK90 کے ساتھ OA اور HPBCD کے درمیان بین سالماتی ہائیڈروجن بانڈ کے تعامل کی نشاندہی کرتے تھے۔ اس کے علاوہ، موجودہ مطالعہ نے OA اور excipients کے باہمی تعامل کی تصدیق کے لیے 'H NMR' کا بھی استعمال کیا۔ خام OA (شکل 6C) کے 1HNMR سپیکٹرم نے 812 ppm (H28) پر کاربوکسیل سگنل، 85.15 ppm (H12) پر ڈبل باؤنڈ پروٹون، 83.38 ppm (H3) پر ہائیڈروکسی پروٹون سگنل، اور میتھائل پروٹون (81 ppm) دکھایا۔ ، OA nanofibers کے HNMR سپیکٹرم نے ظاہر کیا کہ OA کا کاربوکسائل سگنل غائب ہو گیا، اور ڈبل باؤنڈ، ہائیڈروکسی، اور میتھائل پروٹون کی کیمیائی تبدیلیاں واضح طور پر اوپر کی طرف منتقل ہو گئی تھیں (شکل 6)۔ ان نتائج نے OA اور excipients کے درمیان انٹرمولیکولر ہائیڈروجن بانڈز کی تشکیل کا مظاہرہ کیا، جس نے HPBCD اور PVPK90 کے ذریعے OA کے کامیاب انکیپسولیشن کی حمایت کی۔

3.2.6. خام اولینولک ایسڈ اور اس کے نانوفائبرز کی وٹرو جلد میں دخول

حالات کی تشکیل کی حیاتیاتی سرگرمی زیادہ تر جلد کے جذب پر منحصر ہوتی ہے۔ خام OA اور اس کے nanofibers کی جلد کی دخول سابق ویوو سور کی جلد میں طے کی گئی تھی۔ جیسا کہ شکل 7 میں دکھایا گیا ہے، OA کا کم مواد（<5 μg/cm2）was="" detected="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" after="" 1,2,="" and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" and="" these="" results="" also="" indicated="" that="" raw="" oa="" could="" not="" penetrate="" the="" skin="" in="" a="" time-dependent="" manner.="" the="" result="" showed="" that="" the="" skin="" absorption="" of="" raw="" oa="" was="" extremely="" poor.="" by="" contrast,="" the="" nanofiber="" formulation="" dramatically="" increased="" the="" content="" of="" oa="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" with="" 19.63="" ug/cm2,31.56="" ug/cm2,and="" 45.27="" ug/cm2="" after="" 1,2,and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" respectively.="" these="" results="" demonstrated="" that="" the="" oanf="" formulation="" significantly="" increased="" skin="" absorption="" when="" compared="" with="" the="" raw="" oa="" topical="" administration=""><>

3.3.Oleanolic Acid Nanofibers غیر سائٹوٹوکسک ارتکاز میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی انفلامیٹری، اور اینٹی ایجنگ سرگرمی کو بہتر بنا کر بہتر انسداد آلودگی کی سرگرمی رکھتے ہیں۔

DMSO میں تحلیل شدہ OA کی طرح، PBS میں 40 uM اور 80 uM پر تحلیل ہونے والے OAnf نے HaCaT خلیات کی عملداری کو بالترتیب 14.1 فیصد اور 5.6 فیصد کر دیا (شکل 8A)۔ لہذا، OAnf کے 10 uM کو مزید اینٹی آکسیڈینٹ اور انسداد آلودگی کی سرگرمی کے لیے جانچا گیا تاکہ یہ سمجھا جا سکے کہ آیا OA اور اس کے nanofibers PM کی وجہ سے ROS کی ضرورت سے زیادہ پیداوار کو روکنے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔ شکل 8B سے پتہ چلتا ہے کہ 10 uM پر OAnf نے PM-حوصلہ افزائی ROS زیادہ پیداوار کو نمایاں طور پر کم کیا۔ ہم نے PBS میں تحلیل شدہ OA اور OAnf کے درمیان اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا موازنہ کرنے کے لیے ROS کی پیداوار کی روک تھام کی شرح کا بھی حساب لگایا۔ PBS میں دس مائکرومولر OA کے نتیجے میں ROS کی پیداوار میں 28.3 فیصد روک لگا، اور OAnf نے 97.6 فیصد روکنا (شکل 8B) حاصل کیا۔ ان نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ OAnf میں PM-حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو تناؤ میں PBS میں OA سے بہتر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی تھی۔ اس کے علاوہ، ہم نے PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان کی سوزش کی سرگرمی کا بھی موازنہ کیا۔ PBS میں خام OA کے ساتھ پہلے سے علاج NF-KB اور COX کے PM-حوصلہ افزائی پروٹین اظہار کو روک نہیں سکتا-2 اس کے برعکس، PBS میں OAnf کے ساتھ پہلے سے علاج نے NF کے اظہار کو نمایاں طور پر کم کر دیا۔ KB اور COX-2 PM سے علاج شدہ خلیوں میں (p<0.05).these results="" supported="" that="" oanf="" in="" pbs="" had="" better="" anti-inflammatory="" activity="" than="" raw="" oa="" in="" pbs="" (figure="" 8c).then,="" we="" also="" compared="" their="" anti-skin-aging="" activity.="" pretreatment="" with="" oa="" in="" pbs="" had="" no="" effects="" on="" pm-induced="" mmp-1="" or="" timp-1="" alteration.="" however,="" oanf="" in="" pbs="" could="" reduce="" the="" expression="" of="" mmp-1="" and="" rescue="" the="" expression="" of="" timp-1="" when="" compared="" with="" the="" pm-induced="" keratinocytes="" damage="" group=""><0.05)(figure 8d).these="" findings="" indicated="" that="" oanf="" possessed="" better="" anti-skin-aging="" properties="" than="" raw="" oa="" in="" pbs.="" finally,="" we="" analyzed="" the="" phosphorylation="" of="" erk,="" jnk,="" and="" p38="" to="" confirm="" the="" regulation="" of="" mapks="" signaling.="" figure="" 8e="" showed="" that="" the="" treatment="" of="" raw="" oa="" in="" pbs="" could="" not="" downregulate="" pm-induced="" phosphorylation="" of="" these="" mapks="" protein.="" however,="" pretreatment="" with="" oanf="" only="" reduced="" pm-induced="" phospho-jnk="" (p-jnk)="" expression="" but="" had="" no="" effect="" on="" p-erk="" and="" p-p38="" (figure="" 8e).the="" percentage="" changes="" of="" protein="" expression="" induced="" by="" oa="" in="" dmso,="" oa="" in="" pbs,and="" oanf="" in="" pbs="" are="" summarized="" at="" table="" 4.="" oanf="" in="" pbs="" markedly="" reversed="" pm-induced="" protein="" alterations,="" which="" was="" barely="" observed="" in="" oa="" in="" the="" pbs="" group.="" in="" addition,="" the="" effects="" of="" oanf="" in="" pbs="" were="" comparable="" to="" the="" equivalent="" amount="" of="" oa="" in="" dmso,="" which="" indicated="" that="" the="" electrospinning="" process="" increased="" the="" water="" solubility="" of="" oa="" without="" altering="" its="" bioactivities.="" accordingly,="" oanf="" effectively="" inhibited="" the="" expressions="" of="" inflammatory="" proteins="" and="" skin-aging="" proteins="" and="" downregulated="" the="" mapks="" signaling="" pathway="" in="" pm-induced="" keratinocytes="">

4. بحث

حال ہی میں، ہوا میں ذرات کے ارتکاز کی نگرانی ہوا کے معیار کے اشاریہ کی جانچ کے لیے استعمال ہونے والے سب سے اہم اشارے میں سے ایک بن گیا ہے۔ جلد انسانوں کا سب سے بڑا مدافعتی عضو ہے، اور PM کی زیادہ نمائش جلد کے افعال کو نقصان پہنچا سکتی ہے۔ جن وغیرہ۔ نے انکشاف کیا کہ PM کی مختلف اقسام نہ صرف epidermis کے بیرونی سٹریٹم کورنیئم میں رہتی ہیں بلکہ سٹریٹم اسپینوسم اور بالوں کے follicles میں بھی گھس جاتی ہیں [14]۔ اگر زیادہ دیر تک پی آئی اے کا سامنا کرنا پڑتا ہے، تو یہ جلد میں رکاوٹ پیدا کرنے کا سبب بنے گا اور اس کا تعلق جلد کی بہت سی بیماریوں سے ہے، جیسے کہ atopic dermatitis، psoriasis، ایکنی، اور عمر بڑھنا [19,20]۔ Dijkhoff et al. واضح طور پر واضح کیا گیا ہے کہ PM خارجی اور endogenous ROS کی تشکیل کو متحرک کر سکتا ہے، جس کے نتیجے میں آکسیڈیٹیو تناؤ بڑھتا ہے، بشمول لپڈ پیرو آکسیڈیشن، پروٹین آکسیڈیشن، مائٹوکونڈریل ڈیسفکشن، ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان، سوزش ایکٹیویشن، اور عمر بڑھنے کے عمل میں تیزی[15]۔ اس کے مطابق، PM-حوصلہ افزائی ROS زیادہ پیداوار کا مقابلہ کرنا ایک اچھی حکمت عملی ہے اور PM کے زیادہ نمائش کے دوران آکسیڈیٹیو تناؤ کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے کے لیے پہلا انتخاب ہے۔ پچھلے مطالعات نے یہ بھی ثابت کیا ہے کہ اینٹی آکسی ڈینٹ علاج، جیسے ڈیفلوریٹھوہائیڈروکسی کارمالول [21]، ڈائیکول [22]، اوپونٹیا ہیومیفوسا ایکسٹریکٹ [23]، اور ٹارٹ چیری ایکسٹریکٹ [24] PM سے متاثرہ کیراٹینوسائٹس کی خرابی کو مؤثر طریقے سے کم کر سکتے ہیں۔ ہمارے نتائج نے یہ بھی پایا کہ DMSO میں OA پیداوار سے زیادہ PM-حوصلہ افزائی ROS کو کم کر سکتا ہے اور PM سے ہونے والے نقصان کو روک سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، NF-kB ایک ہر جگہ اور ناقابل نقل نقل کا عنصر ہے جو پروانفلامیٹری پروٹینز کے اظہار کو منظم کرتا ہے، جیسے COX-2، جو جلد کی بہت سی بیماریوں میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ ہمارے نتائج میں بتایا گیا ہے کہ OA سوزش والی پروٹین COX کے اظہار کو روکنے کے لیے NF-kB کی PM-حوصلہ افزائی کو کم کر سکتا ہے اور ارکان پارلیمنٹ کے نقلی ضابطے کی طرف لے جاتا ہے[18]۔ اس مطالعہ میں، OA جلد کی عمر بڑھنے والے پروٹین MP-1 کے اظہار کو دبانے میں کامیاب رہا اور کیراٹینوسائٹس کی PM-حوصلہ افزائی بڑھاپے کو روکنے کے لیے جلد کی عمر بڑھانے والی پروٹین TIMP-1 کے اظہار کو بڑھاتا ہے۔ ہمارے دوبارہ نتائج نے یہ بھی ظاہر کیا کہ OA نے JNK کے فاسفوریلیشن کو مؤثر طریقے سے روکا تھا لہذا، OA PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان میں ROS/JNK سگنلنگ پاتھ وے کو کم کرکے PM سے متاثرہ جلد کی سوزش اور عمر بڑھنے کو روک سکتا ہے۔

ہمارے بہترین علم کے مطابق، فعال مرکبات کی ناقص پانی میں حل پذیری کا تعلق کم حیاتیاتی دستیابی سے ہے، جو ادویات، خوراک اور کاسمیٹک صنعتوں میں ان کے استعمال کو محدود کرتا ہے [26,27]۔ یہ بات مشہور ہے کہ پانی کی ناقص حل پذیری والے مرکبات میں کئی عام فزیکو کیمیکل خصوصیات ہوتی ہیں، جیسے ضرورت سے زیادہ بڑے ذرہ کا سائز نچلی سطح کا رقبہ، ایک لیپوفیلک ڈھانچہ، اور ایک کرسٹل شکل [28]۔ ہمارے نتائج نے یہ بھی اشارہ کیا کہ خام OA میں یہ فزیک کیمیکل خصوصیات ہیں، بشمول ایک بڑے ذرہ سائز (5079.50±384.87 nm)، ایک 3-60 um فاسد دانے دار پاؤڈر جس کی سطح زیریں ہے (شکل 2C)، اور ایک واضح کرسٹل شکل۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ OA کی واٹر سولیوبلٹی 0.01 ug/mL سے کم تھی اور اسے ریاستہائے متحدہ Phar-macopeia (USP) کی پانی میں حل پذیری کی درجہ بندی کے مطابق عملی طور پر ناقابل حل فعال مرکب کے طور پر درجہ بندی کیا جا سکتا ہے[29]۔ اگر ان خرابیوں کو حل نہیں کیا جاسکتا ہے تو، جلد پر OA کی سرگرمیاں بہت محدود ہوجائیں گی۔ موجودہ مطالعہ نے کامیابی کے ساتھ PVPK90 اور HPBCD کو OAnf تیار کرنے کے لیے الیکٹرو اسپننگ عمل کا استعمال کرتے ہوئے کیریئر کے طور پر استعمال کیا۔ پانی میں حل پذیری میں بہتری وہ اہم اشاریہ ہے جس کا استعمال بہترین فارماسیوٹیکل فارمولیشن کی تصدیق کرنے کے لیے کیا جاتا ہے، اور ہمارے نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ OA:PVPK90:HPBCD 1:8:20 پر بہترین پانی میں حل پذیری تھی اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ OAnf نے خام کی پانی کی حل پذیری کو مؤثر طریقے سے بڑھایا ہے۔ OA HPBCD تناسب پر منحصر ہے۔ اسی طرح، پچھلے مطالعات سے یہ بات بھی سامنے آئی ہے کہ cyclodextrin کا ​​زیادہ تناسب فارمولیشن کی انکیپسولیشن کی صلاحیت کو بڑھاتا ہے اور اس کے نتیجے میں پانی میں حل پذیری اور کرکیومین [30]، resvera-trol [12]، thymol [31] کی حیاتیاتی سرگرمی میں نمایاں اضافہ ہوتا ہے۔ اور ڈیفینوکونازول ذرہ سائز کے تجزیہ کے نتائج میں یہ بھی بتایا گیا ہے کہ پانی میں تشکیل نو OAnf نے نانوائزڈ ذرات کی اعلیٰ تقسیم یکسانیت کے ساتھ نمائش کی۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ OAnf کا سطحی رقبہ خام OA سے زیادہ ہے۔ اس کے علاوہ، فعال مرکبات اور کیریئرز کے درمیان بین مالیکیولر ہائیڈروجن بانڈنگ کی تشکیل بھی پانی میں حل پذیری کو بہتر بنانے میں معاون ثابت ہو سکتی ہے۔ OAnf کے FTIR اور HNMR کے سپیکٹرم نے یہ ظاہر کیا کہ خام OA کو مؤثر طریقے سے HPBCD میں شامل کیا گیا تھا اور OA اور HPBCD/PVPK90 کے درمیان انٹرمولیکولر ہائیڈروجن بانڈنگ کی تشکیل کے ذریعے PVPK90 کے ساتھ ایک مستحکم nanofiber ڈھانچہ تشکیل دیا گیا تھا۔ کرسٹل لائن کی شکل ایکٹو کمپاؤنڈ کی ایک بے ساختہ شکل میں تبدیل ہوئی پانی میں حل پذیری کی بہتری کا بھی اشارہ تھی۔ OAnf کے XRD پیٹرن سے پتہ چلتا ہے کہ خام OA کا کرسٹل ڈھانچہ نانوفائبرز کی تشکیل کے بعد ایک بے ساختہ ڈھانچے میں تبدیل ہو گیا تھا۔ اسی طرح کا نتیجہ نانوفائبرز [12,30] میں لدے کئی فعال مرکبات میں بھی دیکھا گیا۔ ایک ساتھ مل کر، نانوفائبر فارمولیشن نے فزیکو کیمیکل خصوصیات کو بہتر بنانے کے ذریعے خام OA کی پانی میں حل پذیری کو مؤثر طریقے سے بہتر بنایا، بشمول ذرہ کے سائز میں کمی، سطح کے رقبے میں اضافہ، کیریئرز کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈنگ کی تشکیل، اور بے ساختہ تبدیلی۔

اینٹی آکسیڈنٹس پر مشتمل ٹاپیکل فارمولیشنز ایپیڈرمس اور ڈرمیس تک پہنچانے کے لیے موثر ہیں تاکہ PM کی وجہ سے آکسیڈیٹیو تناؤ، سوزش اور جلد کی عمر بڑھنے کا مقابلہ کیا جا سکے [33]۔ جلد کے جذب کے علم کی بنیاد پر، سٹریٹم کورنیئم شرح کو محدود کرنے والا عنصر ہے جو جلد کی دخول اور فعال مرکبات کے جذب کو محدود کرتا ہے، جس کے نتیجے میں حیاتیاتی سرگرمی میں کمی واقع ہوتی ہے [34]۔ ان وٹرو جلد کی دخول کے نتیجے نے اشارہ کیا کہ OAnf خام OA کے مقابلے میں زیادہ آسانی اور تیزی سے اسٹریٹم کورنیئم سے گزرتا ہے اور بڑی مقدار میں ایپیڈرمس اور ڈرمس میں رہتا ہے۔ اس نتیجے نے اس بات کی تصدیق کی کہ OAnf خام OA کے جلد کے جذب کو مؤثر طریقے سے بہتر بنا سکتا ہے۔ اس کے بعد، اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا OAnf میں خام OA سے بہتر انسداد آلودگی کی سرگرمی تھی، اس تحقیق میں، ان کی حیاتیاتی سرگرمیوں کا موازنہ کرنے کے لیے PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان کا ماڈل استعمال کیا گیا۔ ہمارے نتائج نے ظاہر کیا کہ PBS میں OAnf کے خام OA کے مقابلے بہتر انسداد آلودگی اثرات تھے، بشمول ROS کی زیادہ پیداوار میں کمی، سوزش والی پروٹین اظہار (COX-2 اور NF-kB) اور جلد کی عمر بڑھنے والی پروٹین (MP-1)، اینٹی اسکن ایجنگ پروٹین ایکسپریشن (TIMP-1) میں اضافہ، اور JNK فاسفوریلیشن کو کم کر دیا۔ لہذا، OAnf PM-حوصلہ افزائی keratinocyte کے نقصان کو روکنے کے لئے ایک اینٹی آکسیڈینٹ ایجنٹ کے طور پر ایک ٹاپیکل فارمولیشن ہو سکتا ہے۔

خلاصہ طور پر، OAnf نے خام OA کی ناقص پانی کی حل پذیری کو حل کرنے کے لیے اپنی فزیکو کیمیکل خصوصیات کو بہتر بنایا اور خام OA کے جلد کے جذب کو بھی نمایاں طور پر بہتر کیا۔ OAnf میں بہتر اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی سوزش، اور عمر بڑھنے کے خلاف سرگرمیاں PM-حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس کے نقصان میں تھیں۔ اس کے نتیجے میں، ہم تجویز کرتے ہیں کہ OAnf کو جلد کی دیکھ بھال کی مصنوعات کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے یا مستقبل میں PM کی حوصلہ افزائی سے جلد کو ہونے والے نقصان کو روکنے کے لیے دوا سازی کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

یہ مضمون Antioxidants 2021, 10, 1411 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/antiox10091411 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants