حصہ 1 RANKL/RANK/TRAF6- ثالثی سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے اوورییکٹومائزڈ چوہوں کے ہڈیوں کے تحول پر ایک خوردنی روایتی چینی طب کی اینٹی آسٹیو پورٹک سرگرمی Cistanche Deserticola

بو ژانگ 1†، لنگ-لنگ یانگ 1†، شو کن ڈنگ 1†، جینگ-جنگ لیو 1، یان ہانگ ڈونگ 1،

یان ٹنگ لی 1، نان لی 1، ژاؤ جون ژاؤ 1، چانگ لنگ ہو 2، یپنگ جیانگ 3* اور زو کن ما 1*

1 ہوئی نسلی طب کی جدید کاری کی کلیدی لیبارٹری، فارماسیوٹیکل تجزیہ کا شعبہ، وزارت تعلیم، سکول آف فارمیسی، ننگزیا میڈیکل یونیورسٹی، ینچوان، چین، 2 فنکشنل فوڈز اور انسانی صحت کے لیے لیبارٹری، پوسٹ ہارویسٹ ٹیکنالوجیز میں سنٹر فار ایکسی لینس، شمالی کیرولائنا ریسرچ کیمپس، نارتھ کیرولین اے اینڈ ٹی اسٹیٹ یونیورسٹی، گرینسبورو، این سی، ریاستہائے متحدہ، 3 شعبہ فارماکگنوسی، دوسری ملٹری میڈیکل یونیورسٹی، شنگھائی، چین

cistancheعلاج کر سکتے ہیںآسٹیوپوروسس

پوسٹ مینوپاسل آسٹیوپوروسس کے علاج کے لیے موجودہ علاج کے ایجنٹوں کی حدود کو دیکھتے ہوئے، ابھی بھی افادیت اور کم منفی اثرات کے ساتھ مزید اختیارات کی ضرورت باقی ہے۔Cistanche deserticolaYC Ma ایک مقبول ٹانک جڑی بوٹی کے طور پر جانا جاتا ہے جو روایتی طور پر ایشیائی ممالک کے اقلیتی علاقوں میں پٹھوں کی کمزوری سمیت گردے کی توانائی کی کمی کے علاج کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ "کڈنی ڈومینیٹ بون" کے نظریہ کی بنیاد پر، پوسٹ مینوپاسل آسٹیوپوروسس کا ایک ovariectomized (OVX) چوہا ماڈل کے علاج کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔C. deserticolaہڈی کے نقصان پر نچوڑ (سی ڈی ای)۔ اڑتالیس مادہ اسپراگ-ڈاولی چوہوں کو، جن کی عمر تقریباً 12 ہفتے تھی، کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تفویض کیا گیا تھا جس میں شم گروپ بھی شامل تھا جس میں زبانی طور پر 0.5 فیصد کاربوکسی میتھائل سیلولوز سوڈیم (CMC-Na) (شام)، مثبت گروپ تھا۔ 1 mg/kg estradiol valerate (EV) کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے، کم، اعتدال پسند اور زیادہ خوراک والے گروپوں کو زبانی طور پر 200، 400، اور 800 mg/kg/day CDE کے ساتھ دیا جاتا ہے۔ 3 مہینوں کی مسلسل مداخلت کے بعد، CDE نے ہڈیوں کے معدنی کثافت میں اضافہ، ہڈیوں کے مائیکرو آرکیٹیکچر کو بہتر بنانے کے ذریعہ نمایاں اینٹی آسٹیوپوروٹک سرگرمی کی نمائش کی۔ الکلائن فاسفیٹیس کی سرگرمی میں اضافہ؛ deoxypyridinoline، cathepsin K، tartrate-resistant acid phosphatase، اور malondialdehyde کی سطح میں کمی؛ جبکہ OVX چوہوں میں جسم، بچہ دانی اور اندام نہانی کا وزن CDE کی مداخلت سے متاثر نہیں ہوا تھا۔ اس کے علاوہ، OVX اور شمع چوہوں کے درمیان کیلشیم اور فاسفورس کی سطح پر ایک بظاہر متضاد رجحان دیکھا گیا اور اس کی وضاحت کی گئی۔ میکانکی طور پر، CDE نے TRAF6، RANKL، RANK، NF-κB، IKK، NFAT2 کی سطحوں کو نمایاں طور پر نیچے ریگولیٹ کیا، اور فاسفیٹائیڈلینوسیٹول 3-کناز (PI3K)، AKT، osteoprotegerin، اور c-Fos کے اظہار کو اپ ریگولیٹ کیا۔ جس کا مطلب یہ ہے کہ CDE RANKL/ RANK کی حوصلہ افزائی سے NF-κB اور PI3K/AKT راستوں کی ایکٹیویشن کو دبا سکتا ہے، اور بالآخر، کلیدی آسٹیو کلاسٹوجینک پروٹینز NFAT2 اور c-Fos کی سرگرمی کو روک سکتا ہے۔ تجویز کردہ تمام اعداد و شمار CDE کے پاس ممکنہ اینٹی آسٹیوپوروٹک سرگرمی تھی اور یہ اثر، کم از کم جزوی طور پر، RANKL/RANK/TRAF6-ثالثی NF-κB اور PI3K/AKT سگنلنگ کے ساتھ ساتھ c- Fos اور NFAT2 کی سطحیں۔ لہذا، CDE پوسٹ مینوپاسل آسٹیوپوروسس کے علاج کے لیے ایک مفید امید افزا علاج امیدوار کی نمائندگی کر سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:Cistanche deserticola, antiosteoporotic, TRAF6, RANKL, RANK

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

تعارف

چونکہ آسٹیوپوروسس کو عام عمر بڑھنے کا حصہ نہیں سمجھا جاتا ہے، اس لیے آسٹیوپوروسس کے شعبے میں وسیع ترقی حاصل کی گئی ہے۔ آج، آسٹیوپوروسس صحت کے لیے ایک بڑا خطرہ بن چکا ہے جو پوری دنیا کی 200 ملین سے زیادہ آبادی کو متاثر کرتا ہے اور ہر سال ان افراد پر 10 بلین ڈالر خرچ کیے جاتے ہیں (Ma et al., 2015)۔ آسٹیوپوروسس، بشمول پوسٹ مینوپاسل اور سینائل آسٹیوپوروسس، بالترتیب آسٹیو بلاسٹ ثالثی ہڈیوں کی تشکیل اور آسٹیو کلاس ثالثی ہڈیوں کی ریزورپشن کے درمیان عدم توازن کے نتیجے میں مائیکرو آرکیٹیکچرل بگاڑ اور کم ہڈیوں کے بڑے پیمانے پر کثافت (BMD) کی خصوصیت تھی (Kanis et al. )۔ موجودہ علاج کے اختیارات کی حدود اور آسٹیوپوروسس کی بیماری کے علاج کے لیے مصنوعی ایجنٹوں (Ye et al., 2015) کے کچھ ناپسندیدہ منفی اثرات کے پیش نظر، یہ افادیت اور کم سے کم ضمنی اثرات کے ساتھ متبادل کے لیے ضروری ہے (Tan et al., 2017)۔ پوسٹ مینوپاسل آسٹیوپوروسس سمیت مختلف بیماریوں کے علاج کے لیے ایک قابل ذکر تکمیلی اور متبادل طریقہ علاج کے طور پر، قدرتی دواؤں کی جڑی بوٹیوں خصوصاً روایتی چینی ادویات (TCM) کو بتدریج تسلیم کیا گیا اور ان کی بہت زیادہ تصدیق کی گئی (Czerwinska and Melzig, 2018; Ma et al., 2018)۔ دو ہزار سال پہلےCistanche deserticolaYC Ma کو انسانی صحت کے لیے فائدہ مند پایا گیا اور اسے چینی کلاسیکی ادویاتی کتاب میں درج کیا گیا جس کا نام شین نونگ ہربل (بے نامی، 1981) ہے۔ اب، یہ ایک اہم TCM ہے جسے سرکاری طور پر چینی فارماکوپیا (چینی اور فارماکوپیا، 2015) میں ریکارڈ کیا گیا ہے اور یہ ایک مشہور ٹانک جڑی بوٹی کے طور پر بھی ہے جو صدیوں سے چین اور جاپان سمیت ایشیائی ممالک میں استعمال ہو رہی ہے (ونگ ایٹ ال۔، 2006) .C. deserticolaایک سازگار حفاظتی پروفائل (Liao et al., 2018) اور وسیع پیمانے پر دواؤں کے افعال کے مالک پائے گئے: لوک میں، یہ گردے کی کمی، پٹھوں کی کمزوری، اور ریڑھ کی ہڈی کی کمزوری کے علاج کے لیے طرح طرح کے جڑی بوٹیوں کے کھانوں کے ساتھ کھانا پکانے کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ; آج کل، اس کے مختلف فارماسولوجیکل افعال پر توجہ دی جارہی ہے جن میں سوزش، اینٹی تھکاوٹ، اینٹی ٹیومر، اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی، قوت مدافعت کو بڑھانا، وغیرہ شامل ہیں (Gu et al., 2016; Fu et al., 2018)۔ اس کے بہترین طبی طبی علاج کے اثر کی وجہ سے اسے چین میں "صحرا کا ginseng" کے نام سے بھی جانا جاتا ہے۔ کی روایتی اور جدید درخواست دونوںC. deserticolaاس جڑی بوٹی کو دواؤں اور ہیلتھ فوڈ انڈسٹری دونوں میں مقبول بنا دیا، اس طرح ریاستی فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن کے ذریعہ منظور شدہ دواؤں اور غذائی مائع میں تیار کیا گیا ہے۔ دیاC. deserticolaعام طور پر چینی لوک طب میں گردے کی کمی سے نمٹنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ اس خوردنی دواؤں کی جڑی بوٹی کو "گردے کی ہڈی پر غالب" کے نظریہ کی بنیاد پر آسٹیوپوروسس میں مداخلت کرنے کے لیے ایک امید افزا متبادل ایجنٹ کے طور پر شمار کیا جا سکتا ہے (وانگ ایٹ ال۔، 2016)۔ شائع شدہ اعداد و شمار نے ویوو اور وٹرو دونوں میں C. deserticola extracts کے اینٹی آسٹیوپوروٹک اثر کو ثابت کیا تھا (Liang et al., 2011; Li et al., 2012; Liang et al., 2013; Xu et al., 2017; Song et al.، 2018)، اور متعدد الگ تھلگ مرکبات بشمول echinacoside (Li et al.، 2013)، acteoside (Lee et al.، 2013)، اور cistanoside A (Xu et al.، 2017) جن میں اینٹی پروسیسنگ کی بھی اطلاع دی گئی تھی۔ - آسٹیوپوروٹک سرگرمیاں؛ اور دیگر مرکبات جیسے کہ 2'-acetylacteoside میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی انفلامیٹری، نیورو پروٹیکٹو، ہیپاٹوپروٹیکٹو، قوت مدافعت بڑھانے والے (Li et al.، 2016)، اور اینٹی ایجنگ پوٹینشل (Peng et al.، 2016) کی تصدیق ہوئی تھی۔ آج تک، درجنوں بائیو ایکٹیو فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز کی شناخت کی گئی ہے۔Cistanche جڑی بوٹی(Wang et al.، 2012)، echinacoside، اور acteoside اہم مرکبات ہیں جو زیادہ تر Cistanche انواع میں موجود ہیں جن کے مواد 1.83–41.49 اور 0.27–8.28 mg/kg تھے۔ بالترتیب؛ جبکہ دیگر phenylethanoid glycosides بشمول 2'-acetylacteoside، 6'-acetylacteoside، cistanoside A، cistanoside C، اور isoacteoside 1.56–3.16 mg/g، 0.49–1.66 mg/kg، 1{1-4 29}}.11 mg/kg، 0.33–2.24 mg/kg، اور 0.08–5.{32}} mg/kg، بالترتیب (Dong et al.، 2018)۔ مندرجہ بالا شائع شدہ اعداد و شمار کی بنیاد پر، ہم نے پایا کہ آسٹیوپوروٹک مخالف مالیکیولر میکانزمC. deserticolaخاص طور پر اپ اسٹریم سگنلنگ غیر واضح تھا۔ اور مرکب بذات خود جڑی بوٹی کے اثر کی نمائندگی نہیں کر سکتا جس میں مختلف قسم کے اجزاء کے تعاون سے تعاون کی خاصیت ہوتی ہے۔ مزید برآں، سگنلنگ پاتھ ویز کے مخصوص اہداف مختلف اجزاء کے درمیان بالکل مختلف تھے۔ موجودہ کام کا مقصد ممکنہ حفاظتی اثر کی تحقیقات کرنا ہے۔C. deserticolaٹیومر نیکروسس فیکٹر ریسیپٹر سے وابستہ فیکٹر 6 (TRAF6)، نیوکلیئر فیکٹر کاپا بی لیگنڈ (RANKL) کے ریسیپٹر ایکٹیویٹر، RANK اظہار اور RANKL/RANK/TRAF{{3} } حوصلہ افزائی جوہری عنصر کپا بی (NF-κB)، اور فاسفینوسائٹائڈ 3-کناز (PI3K)/پروٹین کناز (AKT) سگنلنگ۔ ہڈیوں کی دوبارہ تشکیل، بشمول تعمیر نو اور مرمت، ایک پیچیدہ عمل ہے جو آسٹیو بلاسٹک ہڈیوں کی تشکیل اور آسٹیو کلاسٹک ہڈیوں کی بحالی کے درمیان توازن کے ذریعے چلایا جاتا ہے، اور ہڈیوں کی ریزورپشن میں اضافہ بنیادی طور پر بڑھا ہوا آسٹیو کلاسٹوجینیسیس کی وجہ سے ہوتا ہے جو عام طور پر آسٹیوپوروسس حتی ہڈیوں کے فریکچر کا باعث بنتا ہے۔ زیادہ تر سیل سگنلز، ہارمونز، اور نمو کے عوامل جو آسٹیو کلاس تفریق اور فنکشن کے لیے ضروری تھے کو RANK اور اس کے دو ligands، RANKL اور osteoprotegerin (OPG) (Lacey et al.، 1998) کے ذریعے کنٹرول کیا گیا تھا۔ اور حالیہ نتائج نے مزید دریافت کیا کہ TRAF6 RANKL/RANK کو متحرک کرنے والے سگنلنگ جھرنوں میں ایک اہم ریگولیٹری عنصر تھا (Tan et al., 2017)۔ TRAF6 کی بھرتی کے ذریعے، RANKL اپنے ریسیپٹر RANK کے ساتھ پابند ہوا، اور پھر NF-κB اور PI3K/AKT سمیت نیچے کی طرف سگنلنگ جھرنوں کو متحرک کیا گیا، پھر c-Fos کے کلیدی اوسٹیو کلاسٹوجینک پروٹینز اور فعال T خلیات c2 (NFAT2) کے نیوکلیئر فیکٹر۔ تاکیانگی، 2007) کو اپ ریگولیٹ کیا گیا، اور آخر کار، آسٹیو کلاس کی تفریق شروع کی گئی۔ موجودہ مطالعہ میں، RANKL/RANK/TRAF6-ثالثی ہڈیوں کی بحالی پر CDE کے بنیادی اینٹی آسٹیوپوروٹک میکانزم کی چھان بین اور بحث کی گئی ہے۔

مواد اور طریقے

جانور، خلیات، اینٹی باڈیز، اور ری ایجنٹس

مادہ بالغ سپراگ ڈولی چوہے (ننگشیا میڈیکل یونیورسٹی، ینچوان، چین)؛ RAW264.7 خلیات (Zhong Qiao Xin Zhou Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, China); میکروفیج کالونی محرک عنصر (M-CSF) اور RANKL (PerroTech, Inc. USA)؛ estradiol valerate [estradiol valerate (EV)، Delpharm Lille SAS، پیرس، فرانس]؛ cathepsin K (CK) ELISA کٹ (BioVision, American); deoxypyridinoline (DPD) اور bone gla-protein (BGP) کراس لنکس ELISA کٹس (Xinyu Biological Engineering Co., Ltd, Shanghai, China)؛ malondialdehyde (MDA)، glutathione (GSH)، اور superoxide dismutase (SOD) ریجنٹ کٹس (Jianchen Biological Engineering، Nanjing، China)؛ پینسلن اور اسٹریپٹومائسن (گبکو، امریکہ)؛ polyvinylidene fluoride (PVDF) جھلی (ملی پور لائف سائنسز، USA)؛ پرائمری اینٹی باڈیز بشمول GAPDH (18AF0401)، -actin (17AV0411)، IκB kinase (IKK) (AD01134589)، TRAF6 (2)، RANKL (GR3193842-5)، RANK (AA02113656)، NFκBIA (32113656)، NFκBIA (324656) AC09021266)، OPG (AG06292776)، c-Fos (AG12059411)، AKT (AF05173234)، NFAT2 (AO11015648)، اور ثانوی اینٹی باڈیز (horseradish peroxidase-conjugated goat anti-rabbite) کی طرف سے پیش کی گئی تھی ZB-B53G56-B50500000. ، چین) Dulbecco's modified eagle's media (DMEM)، bicinchonic acid protein quantization asay kit، fetal bovine serum (FBS)، اور Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS) Hylcone (Logan, UT, USA) سے خریدے گئے تھے۔ echinacoside [اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، 11167-200503، نیشنل انسٹی ٹیوٹ فار فوڈ اینڈ ڈرگ کنٹرول، چین]؛ ایکٹیوسائڈ (HPLC 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، AB0497، ALFA، چین)؛ isoacteoside (HPLC 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، AB17021202، ALFA، چین)؛ 2'-ایسٹیل ایکٹیوسائیڈ (HPLC 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، PRF7081243، Chengdu Pu Rui Fa Technology, Co., Ltd. China); cistanoside A، cistanoside C، اور 6'-acetyl acteoside (HPLC 95 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، ہماری لیب میں الگ تھلگ اور پاکیزہ) (Xu et al.، 2017)۔

پلانٹ کا مواد اور تیاری

کے خشک تنوںC. deserticolaYC Ma ستمبر 2015 میں Yongning County, Ningxia صوبے سے خریدا گیا تھا، پودوں کی چنائی کے مخصوص نقاط تھے (106.026597, 38.262816)۔ اس جڑی بوٹی کی شناخت پروفیسر لنگ ڈونگ (محکمہ فارماکگنوسی، ننگزیا میڈیکل یونیورسٹی) نے کی تھی، جس میں ایک واؤچر نمونہ (#20150901) فارماسیوٹیکل تجزیہ کے ہربیریم میں دستیاب تھا۔ کل 10.0 کلو خشک اور پاؤڈرC. deserticolaہیٹ ریفلکس طریقہ استعمال کرکے نکالا گیا تھا، تفصیلی طریقہ کار درج ذیل تھا: سالوینٹ 75 فیصد ایتھنول تھا، تناسبC. deserticolaسالوینٹ کے لیے مواد 1:8 تھا، ریفلوکس کا وقت 2 گھنٹے تک رہا، اور مواد تین بار ریفلکس تھے۔ اس کے بعد تمام فلٹریٹس کو آپس میں ملایا گیا اور کم دباؤ کی حالت میں 6.5 کلوگرام برداشت کرنے کے لیے مرتکز کیا گیا۔C. deserticolaایتھنول کے عرق (سی ڈی ای)۔ جانوروں کے تجربے کے لیے، CDE کو معطل کرنے کے لیے {{0}}.5 فیصد کاربوکسی میتھائل سیلولوز سوڈیم (CMC-Na) استعمال کیا گیا تھا، اور زبانی طور پر دی جانے والی خوراک کو 200، 400، اور 800 ملی گرام/کلوگرام/دن، ہر جانور کے 1 ملی لیٹر/100 گرام جسمانی وزن کے ساتھ؛ مغربی دھبے کے تجزیے کے لیے، سی ڈی ای کو تحلیل کرنے کے لیے ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ کا استعمال کیا گیا تھا اور پھر 0.01، 0 کی حتمی حراستی حاصل کرنے کے لیے ڈی ایم ای ایم کے ساتھ ملایا گیا تھا۔{11}} mg/ml; HPLC تجزیہ کے لیے، CDE کو تحلیل کرنے کے لیے میتھانول کا اطلاق کیا گیا، جس کے بعد مناسب ارتکاز حاصل کرنے کے لیے ابتدائی موبائل فیز کے ساتھ فلٹر اور پتلا کیا گیا۔

کی اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی تجزیہCistanche deserticola اقتباس

سی ڈی ای کے بڑے کیمیائی اجزاء کی شناخت متعلقہ حوالہ مادہ کے ساتھ HPLC استعمال کرکے کی گئی۔ کرومیٹوگرافی کی شرائط اس طرح ترتیب دی گئی تھیں: Agilent 1220 RP-HPLC آلہ C18 کالم کے ساتھ (4.6 id × 250 mm; 5 μm)، ایک گراڈینٹ ایلیوشن موبائل مرحلہ بنیادی طور پر پانی پر مشتمل تھا اور ایسیٹونیٹرائل کا استعمال کیا گیا تھا۔ اچھی طرح سے الگ شدہ چوٹیوں کو حاصل کرنے کے لیے: سالوینٹ A (پانی جس میں 0.5 فیصد ایسٹک ایسڈ ہوتا ہے) اور B (ایسیٹونیٹرائل): 0-4 منٹ، 85-83 فیصد A؛ 4–10 منٹ، 83–80 فیصد A؛ 10-30 منٹ، 80-75 فیصد A؛ 30–40 منٹ، 75–70 فیصد A. نمونے کے انجیکشن کا حجم 5 ul تھا، درجہ حرارت 30 ڈگری پر کنٹرول کیا گیا تھا، اور UV کا پتہ لگانا 333 nm پر کیا گیا تھا (ڈونگ ایٹ ال۔، 2018)۔ متعلقہ چوٹی کی نشاندہی کرنے کے لیے حوالہ مادہ بشمول echinacoside، acteoside، isoacteoside، cistanoside A، cistanoside C، 2'-acetyl acteoside، اور 6'-acetyl acteoside استعمال کیے گئے تھے۔

cistancheکر سکتے ہیںمخالف apoptosis

جانوروں کے تجربات

جانوروں کے تجربات کے لیے، تمام طریقہ کار Ningxia میڈیکل یونیورسٹی (NXMU{{0}}) کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی گائیڈ کے منظور کردہ پروٹوکول کے مطابق سختی سے انجام دیا گیا تھا۔ تقریباً 237 ± 25 جی وزنی اڑتالیس بالغ مادہ سپراگ ڈولی چوہوں کو حاصل کیا گیا تھا (ننگزیا میڈیکل یونیورسٹی، ینچوان، چین) اور 1 ہفتہ تک معیاری گولی کی خوراک اور نلکے کے پانی کے ساتھ ماحولیاتی طور پر کنٹرول شدہ حالت میں رکھا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہر چوہے کو یا تو صرف اینستھیزیا (کلورل ہائیڈریٹ، 100 ملی گرام/کلوگرام، آئی پی) سے گزرا، شیم اوورییکٹومائزڈ (شام)، یا دو بیضہ دانی دونوں کو ہٹا دیا گیا اور پھر تصادفی طور پر پانچ گروپوں میں تقسیم کیا گیا: ماڈل گروپ (OVX) کو زبانی طور پر 0.5 کے ساتھ زیر انتظام کیا گیا تھا۔ فیصد CMC-Na؛ مثبت گروپ (EV) 1 mg/kg/day estradiol valerate کے ساتھ؛ کم (CDEL)، اعتدال پسند (CDEM)، اور اعلی (CDEH) خوراک والے گروپس بالترتیب 200، 400، اور 800 mg/kg/day CDE کے ساتھ۔ تجربات 12 ہفتوں تک جاری رہے؛ ہر چوہے کے جسمانی وزن کو دو ہفتہ وار انتظامیہ کی خوراک کے مطابق ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ مداخلت کے آخری دن کے بعد، 24 گھنٹے پیشاب، سیرم، فیمورا، ٹیبیا، اور بچہ دانی کو جمع کیا گیا اور مزید مختلف تجزیہ کے لیے −80 ڈگری پر محفوظ کیا گیا۔

بائیو کیمیکل پیرامیٹرز

سیرم ایس او ڈی، جی ایس ایچ، ایم ڈی اے، کیتھیپسن کے، بی جی پی، اور یورینری ڈی پی ڈی کی سطحوں کا تعین متعلقہ ریجنٹ کٹس کے ذریعے کیا گیا تھا، جبکہ ٹارٹریٹ مزاحم ایسڈ فاسفیٹیس (TRAP) کی سرگرمی کا ایک حوالہ کے مطابق جائزہ لیا گیا تھا (Jiao et al. 2009)۔ الکلائن فاسفیٹیس (ALP) کی سرگرمی اور Ca اور P کی سطحوں کا اندازہ خودکار تجزیہ کار مشین (Ciba-Corning 550, USA) کے ذریعے لگایا گیا۔

ہڈیوں کی معدنی کثافت اور مائیکرو کمپیوٹیڈ ٹوموگرافی تجزیہ

اسکین موڈ کے ساتھ ہر چوہے کے دائیں فیمر کی ہڈیوں کی معدنی کثافت (BMD, g/cm2) کا اندازہ لگانے کے لیے ایک دوہری توانائی کی ایکسرے جذب کرنے والی مشین (Lunar, USA) کو ایک چھوٹے جانور کے طور پر سیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، اسی فیمر کو مائیکرو-CT سکینر اپریٹس (GE، American) لگا کر ٹریبیکولر بون مائیکرو آرکیٹیکچر کی 3D امیج کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیا گیا، دلچسپی کے علاقے (ROI) کو ترقی کی پلیٹ میں انہی نقاط کو ترتیب دے کر منتخب کیا گیا۔ ہر نمونے کا فیمر، مائیکرو آرکیٹیکچر کے پیرامیٹرز بشمول بون منرل مواد (BMC)، ٹشو منرل مواد (TMC)، ٹشو منرل ڈینسٹی (TMD)، ٹریبیکولر سیپریشن (Tb. Sp)، ٹریبیکولر نمبر (Tb. N)، اور ٹریبیکولر موٹائی ( Tb. Th) ROI کا تجزیہ کرکے حاصل کیا گیا تھا۔

مغربی دھبے کا تعین

Osteoclasts کو MCSF (25 ng/ml) اور RANKL (20 ng/ml) (Yang et al., 2019) کے ساتھ شامل کردہ RAW 264.7 خلیات کا استعمال کرکے حوصلہ افزائی کی گئی۔ 6 دن تک جاری رہنے والے محرک کے بعد، پختہ آسٹیوکلاسٹ خلیات جن کی شناخت TRAP سرگرمی کے لیے کی گئی تھی ان کا علاج CDE (بالترتیب 0.01، 0.1، اور 1 mg/ml) کے ساتھ 48 گھنٹے کے لیے کیا گیا، پھر خلیوں کو lysis بفر کے ذریعے لیس کیا گیا، اور سپرنٹنٹس کو سینٹرفیوج کیا گیا اور 10 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے الگ کیا گیا اور پی وی ڈی ایف جھلیوں پر منتقل کر دیا گیا۔ جھلی کو 5 فیصد غیر چکنائی والے دودھ کے ساتھ محیطی درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لیے بلاک کیا گیا تھا اور پھر TRAF6 (1:400)، RANKL (1:400)، RANK (1:400)، IKK (1:400) کے خلاف پرائمری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ )، NFκBIA (1:400)، OPG (1:400)، PI3K (1:400)، AKT (1:400)، c-Fos (1:400)، NFAT2 (1:400)، -actin، اور GAPDH (1:1، 000)۔ اسی جھلیوں کو چھین لیا گیا تھا اور اسی اینٹی باڈیز کے ساتھ دوبارہ جانچ پڑتال کی گئی تھی، آخر میں امیج لیب سافٹ ویئر کے ذریعہ پتہ چلا۔ ہر ایک تجربہ کو تین بار دہرایا گیا، ایکٹین یا GAPDH کے ساتھ اندرونی کنٹرول کے طور پر۔

شماریاتی تجزیہ

ہمارے تجربات کے اعداد و شمار، جس کو اوسط ± SD کے طور پر بیان کیا گیا ہے، ڈینٹ کے ٹیسٹ (SPSS 22.0 سافٹ ویئر، SPSS، USA)، p < {{3} }.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔

cistancheکے طور پر بھی جانا جاتا ہےصحراGinseng

کے بنیادی کیمیائی اجزاء کے نتائجCistanches deserticola

متعلقہ حوالہ مادہ کا استعمال کرتے ہوئے نکالیں، سات بنیادی طور پر فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈ مرکبات بشمول ایکینہکوسائیڈ،cistanosideA, ایکٹیوسائیڈ، isoacteoside،cistanosideسی، 2'-ایسٹیلایکٹیوسائیڈاور 6'-ایسٹیلایکٹیوسائیڈاس نچوڑ میں موجود شناخت کی گئی تھی، ان کی متعلقہ کرومیٹوگرافی چوٹیوں اور ڈھانچے کو شکل 1 میں دکھایا گیا تھا۔

کے اثراتCistanches deserticolaجسم، بچہ دانی اور اندام نہانی کے وزن پر نکالیں۔

سرجری سے پہلے ابتدائی اوسط جسمانی وزن میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ تاہم، اوورییکٹومائزڈ آپریشن کے 3 ماہ بعد، OVX ماڈل گروپ میں چوہوں کے جسمانی وزن میں نمایاں طور پر 35.7 فیصد اضافہ ہوا، جب کہ یوٹرن اور اندام نہانی کے گیلے وزن میں بالترتیب 91.2 اور 61.8 فیصد تیزی سے کمی واقع ہوئی۔ چوہے (p < 0.001)۔="" cde،="" 200-800="" mg/kg/day="" کی="" خوراک="" کے="" ساتھ،="" جسم="" کے="" ان="" نمایاں="" طور="" پر="" بڑھے="" ہوئے="" وزن="" اور="" رحم="" اور="" اندام="" نہانی="" کے="" گیلے="" وزن="" میں="" کمی="" پر="" کوئی="" اثر="" نہیں="" دکھایا،="" جیسا="" کہ="" شکل="" 2="" نے="" دکھایا="" ہے۔="" تاہم،="" cde="" سے="" بالکل="" مختلف،="" ev="" کے="" 1="" mg/kg/day="" نے="" ایک="" اہم="" ایسٹروجینک="" اثر="" ظاہر="" کیا،="" جس="" میں="" سے="" ovx="" چوہوں="" میں="" بڑھتا="" ہوا="" جسمانی="" وزن="" اور="" یوٹیرن="" اور="" اندام="" نہانی="" کا="" وزن="" نمایاں="" طور="" پر="" ev="" کی="" تکمیل="" سے="" الٹ="">

کے اثراتCistanches deserticolaہڈی معدنی کثافت اور ہڈی مائکرو آرکیٹیکچر پر اقتباس

BMD کے ساتھ OVX گروپ میں بدیہی طور پر گرنے کا رجحان دیکھا گیا تھا {{0}.158 ± 0۔ {{10}}.180 ± 0.010 g/cm2 (p <0.001)، جس="" سے="" ظاہر="" ہوتا="" ہے="" کہ="" ovx="" ماڈل="" گروپ="" میں="" چوہوں="" کا="" bmd="" تقریباً="" 12.2="" فیصد="" کم="" ہوا="" شیم="" چوہوں="" کے="" مقابلے="" میں="" اوورییکٹومائزڈ="" سرجری="" کے="" 12="" ہفتے۔="" جیسا="" کہ="" شکل="" 3="" نے="" دکھایا،="" تمام="" cde="" سے="" علاج="" شدہ="" چوہوں="" نے="" ovx="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" بالترتیب="" 15.1="" فیصد="" (p=""><0.001)، 8.1="" فیصد="" (p=""><0.05) اور="" 9.2="" فیصد="" (p=""><0.05) میں="" bmd="" میں="" اضافہ="" کیا۔="" چوہوں="" کی="" ٹریبیکولر="" ہڈی="" مائیکرو="" آرکیٹیکچر="" کے="" 3d="" امیج="" اور="" متعلقہ="" مقداری="" نتائج="" کو="" شکل="" 4="" میں="" دکھایا="" گیا="" ہے۔="" bmd="" کے="" نتائج="" سے="" مطابقت="" رکھتے="" ہوئے،="" ٹریبیکولر="" ایریا="" کی="" واضح="" کمی="" ovx="" ماڈل="" گروپ="" میں="" شیم="" چوہوں="" کے="" مقابلے="" میں="" حاصل="" کی="" گئی="" تھی۔="" تاہم،="" ٹی="" ایم="" ڈی="" اور="" ٹی="" بی="" کے="" علاوہ،="" سی="" ڈی="" ای="" کی="" مداخلت="" سے="" ٹریبیکولر="" ہڈی="" کی="" خرابی="" جزوی="" طور="" پر="" بہتر="" ہوئی="" تھی۔="" ویں،="" دیگر="" ٹریبیکولر="" ہڈی="" کے="" پیرامیٹرز="" میں="" bmc،="" tmc،="" اور="" tb="" شامل="" ہیں۔="" n="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" اور="" tb۔="" سی="" ڈی="" ای="" کے="" علاج="" کے="" بعد="" ایس="" پی="" میں="" نمایاں="" کمی="" واقع="" ہوئی="">

کے اثراتCistanches deserticolaپیشاب اور سیرم بائیو کیمیکل پیرامیٹرز پر نکالیں۔

اوورییکٹومائزڈ آپریشن کے بارہ ہفتوں بعد، OVX ماڈل گروپ میں Ca کے پیشاب کے اخراج کی سطح کا ایک گرتا ہوا لیکن غیر شماریاتی رجحان دیکھا گیا، جیسا کہ شکل 5 میں دکھایا گیا ہے، جبکہ OVX ماڈل گروپ کے چوہوں میں پیشاب P کی سطح میں تقریباً تین کی کمی واقع ہوئی تھی۔ شیم چوہوں سے گنا کم (p < 0۔{7}}01)۔="" cde="" (200–400="" mg/kg/day)="" کے="" ساتھ="" 12="" ہفتوں="" تک="" علاج="" کرنے="" کے="" بعد،="" سیرم="" ca="" اور="" p="" کی="" کمی="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" روکا="" گیا="" (p=""><0.05)، اور="" p="" کی="" کمی="" پیشاب="" کے="" اخراج="" کی="" سطح="" کو="" بھی="" تمام="" cde="" میں="" علاج="" سے="" روک="" دیا="" گیا="" تھا۔="" گروپس="" (پی=""><>

کے اثراتCistanches deserticolaہڈی کی تشکیل اور ریزورپشن مارکروں پر اقتباس

ALP اور BGP (شکل 6) کے ہڈیوں کی تشکیل کے نشانات کے بارے میں، ALP کی سرگرمی، BGP کی نہیں، CDE (200-800 mg/kg/day) کے علاج شدہ گروپوں کی تینوں خوراکوں میں شیم چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر بہتر ہوئی۔ TRAP، DPD، اور cathepsin K (شکل 7) کے ہڈیوں کی بحالی کے نشانات کے بارے میں، تینوں ہڈیوں کی بحالی کی سرگرمیاں

شرم چوہوں کے مقابلے OVX ماڈل گروپ کے چوہوں میں مارکروں میں تقریباً 20.9~74.8 فیصد اضافہ ہوا ہے۔ اور متوقع طور پر، CDE نے ان تمام اشاریوں کو دبانے میں بڑی صلاحیت کا مظاہرہ کیا، جن میں سے کیتھیپسن K کی سرگرمی میں 49.9~ 66.7 فیصد کمی واقع ہوئی تھی (p < 0۔{20}}01)،="" dpd="" کی="" سطح="" تھی۔="" ovx="" ماڈل="" گروپ="" کے="" چوہوں="" کے="" مقابلے="" میں="" بالترتیب="" 22.9~39.3="" فیصد="" (p=""><0.01) کی="" کمی="" ہوئی="" اور="" trap="" کی="" جائیداد="" کو="" بالترتیب="" 20.1~27.6="" فیصد="" (p=""><0.01) سے="" روکا="">

Glutathione اور Superoxide Dismutase کے ساتھ ساتھ Malondialdehyde مواد کی سرگرمیوں پر Cistanches deserticola Extract کے اثرات

OVX اور sham گروپوں کے درمیان ovariectomized آپریشن کے 3 ماہ بعد SOD اور GSH کی سرگرمیوں میں کوئی خاص فرق نہیں تھا، جیسا کہ شکل 8 میں دکھایا گیا ہے، جبکہ MDA کے مواد کو OVX کے چوہوں میں واضح طور پر بڑھایا گیا تھا۔

شیم چوہوں کے مقابلے میں ماڈل گروپ میں 68.2 فیصد اضافہ ہوا، اور ایم ڈی اے کی یہ بڑھتی ہوئی سطحیں نمایاں طور پر کم، اعتدال پسند، اور اعلی خوراک کی وجہ سے سی ڈی ای کے علاج شدہ گروپوں کی روک تھام کے فیصد 66.1، 44 تھے۔{5}}، اور 62.8 فیصد تھیں۔ بالترتیب، OVX ماڈل گروپ کے چوہوں کے مقابلے میں۔

کے اثراتCistanches deserticolaTRAF6، RANKL، RANK، NFκBIA، IKK، PI3K، AKT، OPG، c-Fos، اور NFAT2 کے پروٹین ایکسپریشن لیولز پر ایکسٹریکٹ

جیسا کہ شکل 9 میں دکھایا گیا ہے، TRAF6، RANKL، RANK، IKK، NFκBIA، اور NFAT2 کے تاثرات کو نمایاں طور پر نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا جبکہ PI3K، AKT، OPG، اور c-Fos کی سطح واضح طور پر CDE کے ساتھ علاج کے بعد ریگولیٹ کی گئی تھی۔ کنٹرول کرنے کے لئے. فرضی طریقہ کار (شکل 10) جس کے ذریعے سی ڈی ای RANKL، RANK، اور TRAF6 کی سطح کو نیچے کو منظم کر سکتا ہے اور OPG کے اظہار کو اپ-ریگولیٹ کر سکتا ہے، اس طرح RANK کے ساتھ RANKL کی پابند مقدار کو کم کر دیا گیا؛ نتیجتاً، NF-κB سگنل سمیت نیچے کی طرف جانے والے راستوں کو دبا دیا گیا اور PI3K/AKT کو متحرک کیا گیا، اور ان سگنلنگ جھرنوں نے مل کر c-Fos کی ایکٹیویشن کو فروغ دیا اور NFAT2 کو روک دیا گیا، اور آخر کار ہڈیوں کی آسٹیو کلاسٹک ریزورپشن کو روک دیا گیا۔ بحث