حصہ 1 ہربا سیستانچے کے آبی عرقوں نے کاجل کے بیچوالے خلیوں کو بہتر بنا کر لوپیرامائیڈ سے متاثر قبض چوہوں میں آنتوں کی حرکت پذیری کو فروغ دیا۔

شوائی یان، 1،2 ین زی یو، 1 ژاؤ پینگ وانگ، 1 ہانگ لی ڈونگ، 1 شو گوانگ جین، 1 بین شینگ وو، 1 اور ہائی ہوا کیان3

1 سوزو ہسپتال کےروایتی چینی طب،سوزو، جیانگسو 215009، چین

2 نانجنگ یونیورسٹی آفروایتی چینی طب، نانجنگ، جیانگسو 210023، چین

3Department of Anorectal Surgery, Jiangsu Provincial Hospital ofروایتی چینی طب، نانجنگ، جیانگسو 210029، چین

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

24 مئی 2017 کو موصول ہوا؛ نظر ثانی شدہ 5 اکتوبر 2017; 25 اکتوبر 2017 کو قبول کیا گیا۔ 28 دسمبر 2017 کو شائع ہوا۔

اکیڈمک ایڈیٹر: ثمرہ بشیر

کاپی رائٹ © 2017 Shuai Yan et al. یہ تخلیقی العام انتساب لائسنس کے تحت تقسیم کیا گیا ایک کھلا رسائی مضمون ہے، جو کسی بھی میڈیم میں غیر محدود استعمال، تقسیم اور تولید کی اجازت دیتا ہے، بشرطیکہ اصل کام کا صحیح حوالہ دیا گیا ہو۔

روایتی چینی ادویاتفنکشنل قبض کے علاج میں اچھے اثرات کے بارے میں بتایا گیا تھا۔ اس کام نے ایس ٹی سی کے علاج پر ہربا سیستانچے (AEHC) کے پانی کے عرق کے اثرات کو ثابت کرنے اور لوپیرامائیڈ سے متاثرہ سست ٹرانزٹ کبج (STC) ماڈل کے ذریعہ ممکنہ طریقہ کار کا تعین کرنے کی کوشش کی۔ HPLC AEHC میں بائیو ایکٹیو اجزاء کی شناخت اور تصدیق کے لیے انجام دیا گیا تھا۔ یہ پایا گیا کہ AEHC نے اعضاء کی بڑھتی ہوئی مقدار، نمی کے مواد، اور آنتوں کی نقل و حمل کی شرح کے ساتھ ساتھ GAS، MTL، SS، اور CGRP کے سیرم کی سطح کی بنیاد پر STC ردعمل کو کم کیا۔ سی کٹ کے پروٹین اور ایم آر این اے کی سطح، کیجل (آئی سی سی) کے بیچوالے خلیوں کی لیبلنگ بھی بڑھ گئی۔ دریں اثنا، صرف SCF کی پروٹین کی سطح، ایک ligand ofc-kit میں اضافہ ہوا۔ ہمارے اعداد و شمار کے تجزیے نے تجویز کیا کہ AEHC واضح طور پر PI3K، SCF، اور c-کٹ پر مشتمل سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے ICC کے کام کو بہتر بنا سکتا ہے اور GAS، MTL، SS، اور CGRP جیسے کالونک موٹیلٹی انڈیکس کو بڑھا سکتا ہے۔ یہ نوٹ کرنا دلچسپ ہے کہ AEHC قبض پر موثر دکھائی دیتا ہے، لہذا اس میں شامل عین طریقہ کار کو واضح کرنے کے لیے مزید تجربات ضروری ہیں۔

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

قبض ایک عام معدے کی بیماری اور صحت عامہ کا مسئلہ ہے، جس کی خصوصیت مسلسل مشکل، کبھی کبھار، یا نامکمل شوچ ہے [1]۔ دنیا بھر میں قبض کا پھیلاؤ 0.7 فیصد سے 81 فیصد تک مختلف ہوتا ہے، خاص طور پر بوڑھوں میں [2, 3]۔ سست ٹرانزٹ قبض (ایس ٹی سی) دائمی علاج سے مزاحم قبض کے 13-37 فیصد مریضوں میں معدے کی ایک عام شکایت ہے [4، 5]۔ وبائی امراض کے اعداد و شمار زیادہ واقعات کی نشاندہی کرتے ہیں۔ایس ٹی سیمردوں کے مقابلے نوجوان خواتین میں [6]۔ایس ٹی سیناقابل تسخیر قبض کا سبب بنتا ہے، جو قدامت پسندانہ علاج کے لیے بہت کم ردعمل اور نیوروڈیجینریٹو ڈس آرڈر کا رجحان دکھاتا ہے۔ ایک فعال بیماری کی طرح آسان نہیں، یہ ناگوار اور جارحانہ علاج کا مطالبہ کرتا ہے [7]۔

موجودہ کیمیائی ادویات کی ایک بڑی تعداد جیسے آسموٹک یا خفیہ جلاب اور بلکنگ ایجنٹس کو عالمی طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔

قبض کا علاج [8]، اگرچہ ان کی درخواستیں زیادہ اخراجات اور پیٹ کے ضمنی اثرات جیسے درد، درد، اور اپھارہ کی وجہ سے محدود ہیں [9]۔ اس وقت، معدے کی نالی کا ضابطہ قبض کے علاج کا بنیادی مرکز ہے۔ سیساپرائیڈ کو پہلے گیسٹرک بیماری کے علاج کے لیے فروغ دینے والے ایجنٹ کے طور پر تیار کیا گیا تھا لیکن بعد میں کارڈیک اریتھمیا کے خطرے کی وجہ سے اسے واپس لے لیا گیا تھا [10]۔

Tegaserod ایک منتخب 5-ہائیڈروکسائٹریپٹامائن ریسیپٹر مخالف ہے جو آنتوں کے پرسٹالسس اور رطوبت کو متحرک کر سکتا ہے [11, 12]۔ پروکالوپرائڈ ایک ناول ڈائی ہائیڈرو بینزوفوران کاربوکسامائڈ مشتق اور 5- ایچ ٹی ریسیپٹر ایگونسٹ ہے جس میں اعلی انتخاب اور خصوصیت ہے، جو گیسٹرک، چھوٹی آنت، اور بڑی آنت کی حرکت کو بڑھا سکتی ہے اور حرکیات میں تیزی سے کام کرتی ہے [13–15]۔ پروسٹگینڈن E1 مشتق کے طور پر، لبپروسٹون معدے کی رطوبت کو فروغ دینے اور آنتوں کی منتقلی کے اثرات کو بڑھانے کے لیے CIC چینل کو منتخب طور پر فعال کر سکتا ہے [16]۔

Cistancheٹونیفائینگ کا اثر ہےگردہاور علاج بھی کر سکتے ہیںقبض

قبض میں حرکت پذیری ایک وسیع مسئلہ ہے، لیکن اس کی ایٹولوجی ابھی تک واضح نہیں ہے۔ بہر حال، قائل کرنے والے شواہد نے کبج کے روگجنن میں Cajal (ICC) کے بیچوالا خلیات کی شراکت کو ظاہر کیا ہے [17]۔ آئی سی سی معدے کی نالی میں اعصابی سروں اور ہموار پٹھوں کے خلیوں کے درمیان پایا جاتا ہے۔ آئی سی سی کو عام طور پر معدے کی سرگرمیوں کے لیے پیس میکر سیلز اور نیورو مسکولر ٹرانسمیشن ثالث کے طور پر تسلیم کیا جاتا ہے [18]۔ مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ سست ٹرانزٹ قبض کے مریضوں کی بڑی آنت میں ICC کثافت عام مریضوں کے مقابلے میں غیر معمولی طور پر کم ہے [19]۔ اس کے مطابق، آئی سی سی کی گرتی ہوئی تعداد سست لہر کی سرگرمی کی کمی کا باعث بن سکتی ہے، اس طرح سکڑاؤ کے ردعمل کو متاثر کرتا ہے اور سست ٹرانزٹ قبض کے مریضوں میں تاخیر سے ٹرانزٹ کا باعث بنتا ہے۔ اس نقطہ کے لیے، سست ٹرانزٹ قبض کے علاج کے لیے دواسازی کا استعمال کرتے ہوئے آئی سی سی کی اصلاح بہت اہم ہو سکتی ہے۔

مختلف جڑی بوٹیوں کی دوائیں اور روایتی چینی برائے مولا نے حال ہی میں پاخانہ کی پیداوار میں بہتری کے نتیجے میں دائمی قبض کے علاج کے لیے نئے فینگی علاج کے طور پر توجہ مبذول کرائی ہے [20، 21]۔ Herba Cistanche ایک روایتی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے جو گردوں کی دائمی بیماری، خواتین کی بانجھ پن، بہت زیادہ مینورجیا، اور نامردی کے علاج میں استعمال ہوتی ہے [22، 23]۔ Herba Cistanche MES23.5 خلیات [24] میں apoptosis سے متعلق عوامل اور neurotrophic عوامل کا اظہار کرکے دماغ کے نیورون apoptosis کو روکتا ہے۔ Herba Cistanche نے Yang-Qi کڈنی-Yang Deficiency Syndrome کے علاج میں دواسازی کی صلاحیت کا بھی مظاہرہ کیا ہے۔ ایک حالیہ تحقیق نے یہ ثابت کیا ہے کہ ہربا سیستانچے H9c2 کارڈیو مایوسائٹس میں مائٹوکونڈریل سانس اور گلوٹاتھیون اینٹی آکسیڈینٹ کی حیثیت کو بڑھاتا ہے [25]۔

TCM کا خیال ہے کہ قبض کا گردوں کے ساتھ گہرا تعلق ہے۔ بیرونی جننانگ اور مقعد میں کھلنے والا، گردہ پیشاب اور شوچ کو کنٹرول کرتا ہے۔ فضلہ کی نقل و حمل گردے کیوئ کے فروغ اور گردے ین کی پرورش پر منحصر ہے۔ اگر کڈنی یانگ کی کمی ہو یا لائف گیٹ کی آگ بجھ جائے تو بڑی آنت میں ٹھنڈا ہونے سے فضلہ جم جائے گا۔ قبض خشک آنتوں کی حرکت کی وجہ سے بھی ہوتی ہے کیونکہ گردے کے جوہر کی کمی کافی سیال پیدا کرنے میں ناکام رہتی ہے [26]۔

ہرباCistancheایک مشترکہ جڑی بوٹی ہے، جو ذائقہ میں میٹھی اور نمکین اور فطرت میں گرم ہے۔ بڑی آنت اور گردے کے مریڈیئنز سے منسوب، یہ گردے یانگ کو ٹنائی کر سکتا ہے اور قبض کو دور کرنے کے لیے آنت کو گیلا کر سکتا ہے۔ یہ واحد جڑی بوٹی اور اس کاچینیدواسازی کی تیاریوں کو قابل ذکر افادیت کے ساتھ قبض کے علاج کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے [27]۔

چین میں ہربا کے اثراتCistancheقبض کی جڑیں ریکارڈ کی گئی ہیں [28, 29] اور شین نونگ کی چائنیز میٹیریا میڈیکا میں اسے "Cistanche انواع کے خشک رسیلی تنوں" کے طور پر کہا گیا ہے [30]؛ تاہم، قبض پر Herba Cistanche جڑوں کے اثر کا سائنسی ثبوت اب تک موجود نہیں ہے، طبی لحاظ سے مؤثر خوراک 20 گرام فی دن ہےچینی فارماکوپیا، اور طبی اثر خوراک کے ساتھ مزید نہیں بڑھتا ہے۔

چونکہ Herba Cistanche بہت کم ہے [31]، اس کے علاج کے لیے اس کی طبی خوراک کو معیاری بناناایس ٹی سیتجرباتی مطالعہ کے ذریعے نہ صرف ناکافی خوراک کی وجہ سے ناکام ہونے والے علاج کو روکتا ہے بلکہ مریضوں کو معاشی نقصان سے بھی بچاتا ہے اور یہاں تک کہ ادویات کے زیادہ استعمال سے ہونے والی غلطیاں بھی۔ ہمیں امید ہے

نتائج قبض کے لیے نئی ادویات کے لیے سائنسی بنیاد رکھ سکتے ہیں۔ لہذا، موجودہ مطالعہ میں پانی کے ہربا سیستانچے کے آنتوں کے فروغ کے کام اور آئی سی سی پر اس کے عمل کی تحقیقات کرنا ضروری ہے۔

Cistancheعلاج کر سکتے ہیںقبض

2. مواد اور طریقہ

2.1 Herba Cistanche کے آبی عرق کی تیاری۔

تمام Herba Cistanche Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, China) سے خریدے گئے تھے، جنہیں چین کے سنکیانگ علاقے میں باغات سے معیاری نسلی بوٹینیکل طریقوں کے بعد کاٹا گیا، اکٹھا کیا گیا اور اس پر عملدرآمد کیا گیا۔ پودے کی شناخت نانجنگ یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، نانجنگ، چین کے پروفیسر ٹو لن لو نے مورفولوجیکل طور پر کی تھی۔ واؤچر کا نمونہ (NUCMCHS-2015628) کالج آف ہیلتھ سائنسز، نانجنگ یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، نانجنگ، چین میں جمع کرایا گیا تھا۔

ہربا سیستانچے کے ٹکڑوں کو، جس کا وزن 500 گرام تھا، کو الیکٹرک بلینڈر کا استعمال کرتے ہوئے پلورائز کیا گیا اور 5000 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر میں نکالا گیا، جس کے بعد پانی کے عرق کو 100 سینٹی گریڈ پر 2 گھنٹے کے لیے گردش کرنے والے نکالنے کے آلات کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا گیا۔

جھلی کا تاکنا (ملی پور، بلریکا، ایم اے، یو ایس اے)، اور نچوڑ سے حاصل ہونے والی باقیات کو 4000 ملی لیٹر پانی میں تحلیل کر دیا گیا۔ ریفلوکس نکالنے کے بعد، نچوڑ کو جمع کیا گیا اور حتمی نمونہ کی مصنوعات کو حاصل کرنے کے لئے بخارات بنایا گیا۔ ایک کا استعمال کرتے ہوئے پانی کے عرق کو خشک چھروں (1 گرام/ملی) پر مرکوز کیا گیا تھا۔

بعد کے استعمال کے لیے۔ تجربے کے لیے 10، 20، اور 40 mg/kg جسمانی وزن کی مطلوبہ خوراک دینے کے لیے ٹھوس نمونوں کو کشید پانی میں دوبارہ تشکیل دیا گیا۔

2.2 جانور۔

اس مطالعے میں استعمال ہونے والے تجرباتی پروٹوکول کا جائزہ لیا گیا اور اسے اخلاقی طریقہ کار اور سائنسی نگہداشت کی بنیاد پر سوزو ہسپتال کے ذریعے منظور کیا گیا۔روایتی چینی طب-انسٹی ٹیوشنل اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی، سوزو، چین (SHTCM-IACUC؛ منظوری نمبر: PNU- 2016-0003)۔ تمام نر چوہے (Sprague Dawley strain) ag کے ساتھ شنگھائی لیبارٹری اینیمل ریسرچ سنٹر سے نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ کی ہدایات کے مطابق خریدے گئے تھے۔ جانوروں کو معیاری خوراک (AIN-93 M) اور نلکے کے پانی کے اشتہار تک مفت رسائی حاصل تھی اور انہیں انفرادی طور پر سٹینلیس سٹیل فیصد رشتہ دار نمی میں رکھا گیا تھا، اور روزانہ 12 گھنٹے قدرتی روشنی اور 12 گھنٹے اندھیرے کے سامنے رہتے تھے۔

2.3 تجرباتی ڈیزائن۔

لوپیرامائڈ کو پچھلے مطالعات کے مطابق چوہوں میں قبض پیدا کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا [32، 33]۔ کل 60 چوہوں کو تصادفی طور پر 5 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا (فی گروپ): A: نارمل گروپ (NG)، B: ماڈل گروپ (لوپ پلس گاڑیوں سے علاج شدہ گروپ)، C: قبض والے چوہوں کا ایک گروپ جس کا علاج کم پانی کے عرق سے کیا جاتا ہے۔ Herba Cistanche (Lop plus LAEHC-علاج شدہ گروپ)، D: قبض چوہوں کا ایک گروپ جس کا علاج Herba Cistanche کے درمیانے پانی والے عرق سے کیا جاتا ہے (Lop plus MAEHC-علاج شدہ گروپ)، اور E: قبض چوہوں کا ایک گروپ جس کا علاج ہربا کے زیادہ پانی والے عرق سے کیا جاتا ہے۔ Cistanche (لوپ پلس HAEHC سے علاج شدہ گروپ)۔ گروپ A کا علاج نارمل نمکین (10 ملی لیٹر/کلوگرام) سے کیا گیا؛ گروپ بی کا علاج لوپیرامائیڈ سے کیا گیا۔

(4 ملی گرام/کلوگرام)؛ گروپ سی کا علاج لوپیرامائیڈ (4 ملی گرام/کلوگرام) اور ہربا سیستانچے (1 گرام/کلوگرام) کے کم پانی کے عرق سے کیا گیا تھا۔ گروپ ڈی کا علاج لوپیرامائڈ (4 ملی گرام/کلوگرام) اور ہربا سیستانچے (2 جی/کلوگرام) کے درمیانے پانی کے عرق سے کیا گیا، اور گروپ ای کا علاج لوپیرامائڈ (4 ملی گرام/کلوگرام) اور ہربا سیستانچے (4 جی/کلوگرام) کے اعلی آبی عرق سے کیا گیا۔ کلو). عام گروپ کے تمام چوہوں کو 0.9 فیصد سوڈیم کلورائیڈ کے ساتھ انجکشن لگایا گیا تھا، جب کہ دیگر کو قبض پیدا کرنے کے لیے لگاتار 3 دن تک دن میں دو بار 0.9 فیصد سوڈیم کلورائیڈ میں لوپیرامائیڈ کا انجکشن لگایا گیا تھا۔ Herba Cistanche کے آبی عرق کو پانی میں معطل کر دیا گیا تھا اور اسے روزانہ 4 دن سے لے کر 18 ویں دن تک گروپ C، گروپ D، اور گروپ E میں زبانی طور پر دیا جاتا تھا، جبکہ گروپ A اور B کو گیویج کے ذریعے پانی کی مستقل مقدار ملتی تھی۔

2.4 کرومیٹوگرافک حالت۔

HPLC پروفائلنگ شیمدزو مائع کرومیٹوگرافک سسٹم (ٹوکیو، جاپان) میں کی گئی تھی، جس میں LC-20AT پمپ اور ایک

330 nm پر 30 C پر نگرانی کی گئی۔ isocratic موبائل مرحلہ میتھانول 0.1 فیصد فارمک ایسڈ (80 : 20, v/v) پر مشتمل تھا اور 1.0 ملی لیٹر فی منٹ کی بہاؤ کی شرح سے چلتا تھا۔ . کرومیٹوگرافک علیحدگی تھی۔

پارٹیکل سائز 5 میٹر، بیجنگ ڈکما سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ، بیجنگ، چین)۔

2.5 ورزش، خوراک کی مقدار، پانی کی مقدار، جسم کا تجزیہ

ہر جانور کے 25 ملی لیٹر/کلوگرام کے حجم میں گم کاشت (20 فیصد چارکول اور 10 فیصد گم قابل کاشت) زبانی طور پر دیا گیا تھا۔ 30 منٹ کے بعد ، جانوروں کو گریوا کی سندچیوتی کے ذریعہ انسانی طور پر قربان کیا گیا اور ان کو الگ کردیا گیا۔ pylorus سے cecum تک چھوٹی آنتوں کو عبور کیا گیا اور چارکول کے کھانے سے طے شدہ فاصلہ اور چھوٹی آنت کی کل لمبائی کی پیمائش کی گئی۔ ایک انفرادی چوہے کے لیے، آنتوں کی آمدورفت کا فیصد چھوٹی آنت کی کل لمبائی کے مقابلے میں چارکول کھانے کے ذریعے طے کیے گئے فاصلے کے فیصد کے طور پر شمار کیا جاتا تھا۔ مندرجہ ذیل مساوات آنتوں کی نقل و حمل کی شرح (فیصد) کا حساب لگاتی ہے: چارکول سے طے شدہ فاصلہ/پائلورس سے سیکم تک کا فاصلہ 100 فیصد۔

2.6۔ خون کا نمونہ اور ٹشو جمع کرنا۔ تجرباتی مدت کے اختتام پر، چوہوں کو 12 گھنٹے کا روزہ رکھا گیا لیکن انہیں پانی تک مفت رسائی کی اجازت تھی۔ اس کے بعد تمام چوہوں کو 30 منٹ بعد سوڈیم پینٹوباربیٹل (50 ملی گرام/کلوگرام) کے انٹراپریٹونیل انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی اور درجہ حرارت سے متعلق میز پر رکھا گیا۔ خون کے نمونے جمع کیے گئے اور سیرم حاصل کرنے کے لیے 15 منٹ کے لیے 3500 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ بڑی آنت کو فوری طور پر تقسیم کیا گیا اور 4C پر عام نمکین کے ساتھ فلش کیا گیا اور پھر اسے دو ٹکڑوں میں تقسیم کر دیا گیا۔ ایک ٹکڑا 10 فیصد فارملین میں طے کیا گیا تھا اور بعد میں امیونو ہسٹو کیمیکل (IHC) تجزیہ کے لیے اسپلٹ پیرافین میں پروسیس کیا گیا تھا، جبکہ دوسرا وزن اور بال تھا۔ ورزش، کھانے کی مقدار، پانی میں تبدیلی

80 سینٹی گریڈ پر ذخیرہ کیا جاتا ہے جب تک کہ ان کا جائزہ نہ لیا جائے۔ انٹیک، جسمانی وزن، اور بالوں کو تجرباتی مدت کے دوران روزانہ دیکھا اور ریکارڈ کیا گیا۔ ہم نے مخصوص مراحل پر عمل کرتے ہوئے "ورزش میں تبدیلیاں" کا مشاہدہ کیا: خود ساختہ باکس (60 سینٹی میٹر اونچا، 50 سینٹی میٹر لمبا، اور 80 سینٹی میٹر چوڑا گہرا پردیی دیوار) کھلے میدان کے ٹیسٹ کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ ایک تاریک اور پرسکون کمرے میں سیاہ لکیر سے سفید زمین کو ہیروں (12 سینٹی میٹر) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ ایک 100 W کا بلب باکس کے مرکز سے 1 میٹر اوپر لٹکا ہوا ہے۔ چوہوں کو ماڈلنگ کے 4، 6، 12 اور 18 ویں دن باکس کے بیچ میں رکھا گیا تھا۔ 5 منٹ کے اندر چوہوں کے گزرنے والے چوکوں کی تعداد کو افقی تحریک کے اسکور کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا اور 5 منٹ کے اندر چوہوں کا سیدھا وقت عمودی تحریک کے اسکور کے طور پر استعمال ہوتا تھا۔ افقی اور حرکت کے اسکور کے علاوہ عمودی حرکت کے اسکور چوہوں کی ورزش کی مقدار کی نشاندہی کرتے ہیں۔ ہر چوہے کو ایک بار ناپا گیا [34، 35]۔

Cistancheآرام کر سکتے ہیںقبض

2.7۔ فیکل پیرامیٹر کی پیمائش۔

زبانی انتظامیہ کے آخری دن، ہر SD چوہے سے پاخانے کی تازہ چھریاں 6 گھنٹے کے لیے گول نیچے والی سٹاپڈ ٹیوبوں میں جمع کی گئیں، اور ہر گروپ کے کل وزن ریکارڈ کیے گئے۔ آنتوں کی نمی کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے پاخانے کے چھروں کو خشک کرنے کے لیے برقی توازن کا استعمال کیا جب تک کہ مستقل وزن حاصل نہ ہو جائے اور خشک وزن کی پیمائش نہ کی جائے۔ نمی کا مواد

2.8۔ GAS، MTL، SS، اور CGRP کا اندازہ۔

سیرم میں gastrin (GAS)، motilin (MTL)، somatostatin (SS)، اور calcitonin gene-related peptide (CGRP) کی تعداد کا اندازہ ELISA نے تجارتی طور پر دستیاب کٹس کا استعمال کرتے ہوئے لگایا تھا۔

2.9 ہسٹولوجیکل تجزیہ۔

ایس ڈی چوہوں سے جمع کیے گئے ٹرانسورس کالون کو 12 گھنٹے کے لیے 10 فیصد فارملین کے ساتھ طے کیا گیا تھا، ایمبیڈڈ

m موٹی سلائسیں جو ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA) سے داغدار تھیں۔ لائیکا ایپلیکیشن سویٹ (لائیکا مائیکرو سسٹم، سوئٹزرلینڈ) کا استعمال کرتے ہوئے ان حصوں کی مورفولوجیکل خصوصیات کو ہلکی مائکروسکوپی کے تحت دیکھا گیا، جس کے بعد ویلس کی لمبائی، کرپٹ موٹائی اور پٹھوں کی موٹائی کی پیمائش کی گئی۔

2.10 امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ۔

ہم نے Zhu et al کے طریقوں پر عمل کیا۔ (2016) [36]; غیر داغدار 5 میٹر حصے تھے۔

رات بھر 4 سینٹی گریڈ پر خرگوش اینٹی سی کٹ (1:100) سے داغدار۔ ثانوی اینٹی باڈی اور avidin-biotin-peroxidase پیچیدہ طریقہ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق استعمال کیا گیا۔ غیر مخصوص بائنڈنگ کو ختم کرنے کے لیے ایک امیونوگلوبلین منفی کنٹرول استعمال کیا گیا تھا۔ سی کٹ کے اظہار کی سطح

2.11۔ آنتوں کی نقل و حمل کی شرح کا تجزیہ۔

آنتوں کی نقل و حمل کا تناسب پہلے رپورٹ شدہ پروٹوکول کے مطابق کیا گیا تھا [36]؛ مختصراً، 14 دن کے علاج کے بعد، تمام SD چوہوں کو 12 گھنٹے کے روزے کے تابع تھے لیکن انہیں پانی تک مفت رسائی کی اجازت تھی۔

ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن۔ بڑی آنت میں c-kit، SCF، اور PI3K mRNAs کے جین کے اظہار کی سطحوں کا تعین کل RNA ایکسٹرکشن کٹ (TIANGEN Biotech،

بیجنگ، چین) کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق۔ ریئل ٹائم پی سی آر کو ABI StepOnePlus Real-Time PCR سسٹم (ABI) کے ساتھ انجام دیا گیا تھا۔ SYBR گرین I ریئل ٹائم PCR ماسٹر مکس (QPK201, Toyobo, Japan) PCR مصنوعات کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ رد عمل سہ رخی رنز میں کیے گئے۔ اس کے بعد، تازہ چوہے کی بڑی آنت کے ٹشو جس کا وزن 0.5 گرام تھا

l) TRIzol Reagent (Invitrogen, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق نکالا گیا تھا۔ ایک ریورس ٹرانسکرپشن-PCR کٹ (Takara Biotechnology Co., Inc.) کو کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق cDNA کے پہلے اسٹرینڈ کی ترکیب کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تمام ٹارگٹڈ پیرامیٹرز ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔ سائیکلنگ پروٹوکول درج ذیل شرائط کے تحت تھا: 5 منٹ کے لیے 95 C (DNA denaturation)، اس کے بعد 15 s کے لیے 95 C کے 40 سائیکل، 20 s کے لیے 60 C، اور 72 C کے لیے 40 سیکنڈ ایمپلیفیکیشن سائیکل کے اختتام پر پگھلنے والے وکر کا تجزیہ کیا گیا تھا۔

2.12۔ ویسٹرن بلاٹ تجزیہ۔

بڑی آنت کے نمونے ہوموجنیٹس میں سی کٹ اور ایس سی ایف کے پروٹین کے مواد کی جانچ مغربی بلاٹ کے ذریعے کی گئی۔ مختصراً، ہوموجنیٹس کے کل پروٹینوں کا تعین بائیسنچونک ایسڈ پرکھ (پیئرس بائیوٹیکنالوجی، راک فورڈ، IL، USA) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ پولی کریلامائڈ جیل (SDS-PAGE) بائیو راڈ الیکٹروفورسس سسٹم (بائیو راڈ لیبارٹریز، ہرکیولس، CA، USA) میں پروٹینز کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد پروٹین کو پولی وینیلائیڈین ڈائی فلورائیڈ (PVDF) جھلیوں میں منتقل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 5 فیصد غیر چکنائی والے دودھ والے ٹی بی ایس میں بلاکنگ بفر کے ساتھ 2 گھنٹے کے علاج کے بعد، پی وی ڈی ایف جھلیوں کو راتوں رات 1: 1000 پتلی اینٹی سی کٹ (سانتا کروز، CA، USA) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا، 1: 500 پتلا اینٹی۔ ایس سی ایف (سگما، ایم او،

امریکہ)، اور بالترتیب 1:8000 پتلا اینٹی ایکٹین (کانگچین، شنگھائی، چین) اینٹی باڈیز۔ پرائمری اینٹی باڈی کے پابند ہونے کا پتہ اسی HRP سے منسلک سیکنڈری اینٹی باڈی (بیو ٹائم، جیانگسو، چین) کا استعمال کرتے ہوئے پایا گیا۔ ایک بہتر کیمیلومینیسینس کٹ (پیئرس بائیوٹیکنالوجی انکارپوریٹڈ، راک فورڈ، آئی ایل، یو ایس اے) اور اوڈیسی انفراریڈ امیجنگ سسٹم (جین کمپنی لمیٹڈ، ہانگ کانگ) کیمیلومینیسینس کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ہاؤس کیپنگ پرولیکٹن کو لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ پروٹین ایکسپریشن کی مقدار ایکٹین کی سطح کے مقابلے میں پیش کی جاتی ہے۔

2.13۔ شماریاتی تجزیہ.

پیمائش کے اعداد و شمار کو اوسط (SEM) کی اوسط معیاری غلطی کے طور پر رپورٹ کیا گیا تھا اور SPSS کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا تھا۔

16۔{1}} سافٹ ویئر (SPSS، شکاگو، IL، USA)۔ تمام پیرامیٹرز میں اہم فرق کا تعین کرنے کے لیے ڈنکن کے متعدد رینج ٹیسٹوں کے بعد تغیر (ANOVA) کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا۔ میں قدروں کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔

Cistancheکاڑھی علاج کے لیے اچھی دوا ہے۔قبض

3. نتائج

3.1 Herba Cistanche کی ساخت اور فنکشنل اجزاء۔

جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے، Herba Cistanche کی جڑوں میں جلاب اثرات سے متعلق کئی بایو ایکٹیو اجزاء کی زیادہ مقدار ہوتی ہے۔ کل echinacoside اور کل verbascoside کے ارتکاز بالترتیب 0.64 mg/g اور 0.16 mg/g تھے۔ اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعہ مناسب برقرار رکھنے کے وقت ایل پی میں اعلی ایکناکوسائڈ اور ورباسکوسائیڈ کی سطح کی نشاندہی کرنے والی دو چوٹیوں کا پتہ چلا۔

3.2 عمومی مشاہدہ۔

ایس پی چوہے پورے تجربے کے دوران نہیں مرے، جو جانوروں کے ماڈل کی بہتر حفاظت اور آپریٹنگ صلاحیت کی نشاندہی کرتا ہے۔ گروپ اے کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں چوہوں نے کھال، سستی، خشک پاخانہ اور

ماڈلنگ کے وقت کی توسیع کے ساتھ خراب ہو گیا۔

3.3 AEHC کا اثر پاخانہ کی تعداد اور لوپیرامائیڈ سے متاثرہ قبض چوہوں میں نمی کی مقدار پر۔

عام پاخانے کے مقابلے میں، گروپ B، C، D، اور E میں پاخانے خشک، چھوٹے اور سخت تھے اور علاج سے پہلے جلنے والے نہیں تھے۔

سب کے بعد، چوہوں کو لوپیرامائڈ کے ساتھ انجکشن لگایا گیا تھا (دوائی کے ساتھ علاج سے جسم اور 3 (b) کے طور پر علامات کو کم کر دیا گیا ہے).

وزن تمام تجرباتی گروپوں میں نمایاں طور پر مختلف نہیں تھا، حالانکہ گروپ ای نے دوسرے گروپوں کے مقابلے میں جسمانی وزن قدرے کم ظاہر کیا تھا (شکل 2(a))۔ اس کے علاوہ، قبض کے ساتھ SD چوہوں نے گروپ A ( ) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم کھانا کھایا، جبکہ گروپ B، C، D، اور E (شکل 2 (b)) کے درمیان فرق اہم نہیں تھا۔ گروپ اے اور گروپ بی کے درمیان پانی کی کھپت میں بھی کوئی تبدیلی نہیں آئی۔ مزید یہ کہ پانی کی کھپت میں کوئی خاص اضافہ نہیں ہوا۔

کہ AEHC کے ساتھ سلوک نے کوئی تبدیلی نہیں کی۔. اگرچہ گروپ C، D میں آنتوں کی آمدورفت کی شرح بھی نمایاں طور پر زیادہ تھی۔گروپس سی، ڈی، اور ای میں گروپ اے کے مقابلے نمایاں طور پر کم تناسب تھا۔

3.4 لوپیرامائڈ سے متاثرہ قبض چوہوں میں چھوٹی آنتوں کی نقل و حمل کی شرح پر AEHC کا اثر۔

جیسا کہ شکل 4 سے دیکھا گیا ہے، پانچ گروپوں کے درمیان چھوٹے آنتوں کے ٹرانزٹ ٹائم میں کوئی فرق نہیں پایا گیا۔ گروپ A (𝑃 < 0۔{3}}1)="" کے="" مقابلے="" میں="" گروپ="" b="" میں="" چارکول="" پاؤڈر="" پروپیلنگ="" کا="" تناسب="" واضح="" طور="" پر="" کم="" ہے۔="" اگرچہ="" گروپس="" سی،="" ڈی،="" اور="" ای="" میں="" آنتوں="" کی="" آمدورفت="" کی="" شرح="" بھی="" گروپ="" بی="" (𝑃=""><0.05) کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھی،="" گروپ="" c،="" d،="" اور="" e="" گروپ="" a="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="">

3.5 AEHC کے ساتھ مداخلت جزوی طور پر کالونک موٹیلٹی انڈیکس فنکشن کو بڑھاتی ہے۔

گروپ B کے چوہوں سے حاصل کردہ GAS اور MTL کے سیرم کی سطح گروپ A (𝑃 < {{0}}="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" ہوئی۔{4}}1،="" resp.)۔="" دوسری="" طرف،="" گروپس="" c،="" d،="" اور="" e="" (𝑃="">< 0="" 05,="" resp.)="" میں="" gas="" اور="" mtl="" کی="" مؤثر="" طریقے="" سے="" gas="" اور="" mtl="" کی="" سطح="" گروپ="" b="" کے="" مقابلے="" میں="" herba="" cistanche="" extracts="" کی="" انتظامیہ="" سے="" زیادہ="" ہوتی="" ہے۔="" گروپ="" b="" کے="" چوہوں="" میں="" ss="" کی="" قدریں="" گروپ="" a="" (𝑃="">< 0.01)="" کے="" مقابلے="" میں="" زیادہ="" تھیں۔="" گروپ="" c،="" d،="" اور="" e="" میں="" ss="" (𝑃=""><0.05) (شکل="" 5)="" کی="" سطح="" کم="" ہے۔="" قبض="" والے="" چوہوں="" کے="" مقابلے="" میں،="" گروپ="" a="" کے="" عام="" چوہوں="" (𝑃=""><0.01) میں="" cgrp="" کی="" سطح="" اور="" herba="" cistanche="" کے="" زیر="" انتظام="" گروپ="" c,="" d,="" اور="" e="" میں="" مستقل="" (𝑃=""> 0.05) تھے۔

3.6۔ بڑی آنت کی ہسٹولوجیکل تبدیلی۔

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا AEHC کا علاج بڑی آنت کے بافتوں کی ساختی تبدیلی کو آمادہ کر سکتا ہے، H&E داغ لگنے کے بعد پانچ گروپوں میں چوہوں کے ٹرانسورس کالون میں villus کی لمبائی، کریپٹ پرت کی موٹائی اور پٹھوں کی موٹائی کی پیمائش کی گئی۔ ہر گروپ میں چوہوں کی بڑی آنت کی پیتھالوجی کا موازنہ کرتے ہوئے، colonic mucosa ہموار تھا اور submucosa میں چھوٹی شریانیں اور چھوٹی رگیں اور بڑی تعداد میں adipose خلیات ہوتے ہیں۔ اس کے علاوہ، پٹھوں کی پرت ہموار پٹھوں کے خلیوں پر مشتمل تھی اور سبسیروسا مکمل تھا۔ ویلس کی اوسط لمبائی گروپ اے کے مقابلے گروپ بی میں نمایاں طور پر کم تھی (𝑃 < {{0}}۔{9}}1)۔="" تاہم،="" گروپ="" بی="" (اعداد="" و="" شمار="" 6="" اور="" 7)="" (𝑃=""><0.05) کے="" مقابلے="" میں="" گروپ="" c="" میں="" ولس="" کی="" اوسط="" لمبائی="" میں="" 30="" فیصد="" سے="" زیادہ="" اضافہ="" ہوا="" ہے۔="" دریں="" اثنا،="" گروپ="" b="" (اعداد="" و="" شمار="" 6(a)="" اور="" 6(b))="" (𝑃=""><0.01) کے="" مقابلے="" میں="" گروپ="" d="" اور="" e="" میں="" ویلس="" کی="" اوسط="" لمبائی="" بہت="" بڑھ="" جاتی="" ہے۔="" مزید="" برآں،="" پٹھوں="" کی="" موٹائی="" میں="" تبدیلی="" villus="" کی="" لمبائی="" سے="" بہت="" ملتی="" جلتی="" تھی۔="" گروپ="" بی="" میں،="" پٹھوں="" کی="">

گروپ اے کے مقابلے میں ڈرامائی طور پر پتلا تھا۔ تاہم، گروپس سی، ڈی، اور ای میں پٹھوں کی موٹائی کی سطح گروپ بی کی نسبت 30-35 فیصد بڑھ گئی (اعداد و شمار 6 اور 7)۔ مجموعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ AEHC قبض زدہ چوہوں کی بڑی آنت میں ولس کی لمبائی اور پٹھوں کی موٹائی کو بڑھا سکتا ہے۔

3.7 اے ایچ ای سی ٹریٹمنٹ کی انتظامیہ نے سی کٹ اور ایس سی ایف کے پروٹین ایکسپریشن میں اضافہ کیا۔

بڑی آنت میں اس کی مدافعتی سرگرمی کا پتہ چلا کیونکہ تمام گروپوں کے خلیوں نے سی کٹ کے لیے مثبت تجربہ کیا۔ جیسا کہ شکل 8 میں دکھایا گیا ہے، گروپ بی میں سی کٹ کی ایکسپریشن لیول گروپ A (𝑃 < 0="" سے="" کم="" تھی۔{6}}5)۔="" گروپ="" سی="" میں="" سی="" کٹ="" کی="" ایکسپریشن="" لیول="" گروپ="" بی="" کی="" نسبت="" زیادہ="" تھی="" (𝑃="">< 0۔{20}}5)،="" جبکہ="" زیادہ="" سی="" کٹ="" گروپ="" ڈی="" میں="" موجود="" تھی="" اور="" گروپ="" b="" کے="" مقابلے="" e="" (𝑃="">< 0.05)۔="" 2="" ہفتوں="" تک="" ہربا="" سیستانچے="" کے="" پانی="" کے="" عرق="" کے="" مختلف="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" علاج="" کے="" بعد،="" سی="" کٹ="" اور="" ایس="" سی="" ایف="" کے="" پروٹین="" ایکسپریشن="" لیول="" کا="" مغربی="" دھبے="" کے="" تجزیہ="" سے="" پتہ="" چلا۔="" مغربی="" دھبے="" کے="" تجزیے="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" چوہوں="" کی="" بڑی="" آنت="" (شکل="" 9)="" میں="" لوپیرامائڈ="" کے="" علاج="" کے="" بعد="" سی="" کٹ="" اور="" ایس="" سی="" ایف="" اظہار="" کی="" سطح="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" تھی۔="" شکل="" 8(e)="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃=""><0.05) کے="" ساتھ="" چوہوں="" کا="" علاج="" کرنے="" کے="" بعد="" قبض="" والے="" چوہوں="" میں="" سی="" کٹ="" میں="" کمی="" میں="" 31.2="" فیصد="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" ہے۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" 100="" اور="" 200="" g/ml="" aehc="" ایلیویٹڈ="" سی-کٹ="" پروٹین="" ایکسپریشن="" لیول="" کے="" ساتھ="" علاج۔="" scf="" پروٹین="" ایکسپریشن="" میں="" بالترتیب="" 100،="" 200،="" اور="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" کے="" ساتھ="" علاج="" میں="" 20.1،="" 24.7،="" اور="" 8.4="" فیصد="" اضافہ="" ہوا="" (شکل="" 9)۔="" 3.8۔="" c-kit،="" scf،="" اور="" pi3k="" کے="" mrna="" اظہار="" پر="" aehc="" کا="" اثر۔="" اس="" بات="" کی="" جانچ="" کرنے="" کے="" لیے="" کہ="" آیا="" aehc="" کا="" علاج="" پٹھوں="" کے="" سنکچن="" سے="" متعلق="" mrna="" کے="" ضابطے="" کو="" متاثر="" کر="" سکتا="" ہے،="" مخصوص="" پرائمر="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" قبض="" کے="" چوہوں="" کے="" کالونوں="" میں="" c-kit،="" scf،="" اور="" pi3k="" اظہار="" کی="" سطح="" میں="" ردوبدل="" دیکھے="" گئے۔="" نتائج="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" گروپ="" بی="" میں="" سی="" کٹ="" کی="" ایم="" آر="" این="" اے="" کی="" سطح="" گروپ="" اے="" (𝑃=""><0.05) کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" تھی،="" جب="" کہ="" گروپس="" سی،="" ڈی،="" اور="" ای="" میں="" ایم="" آر="" این="" اے="" کی="" سطح="" گروپ="" بی="" (𝑃=""><0.05) سے="" زیادہ="" تھی۔="" (شکل="" 10)۔="" ہم="" نے="" ایم="" آر="" این="" اے="" کی="" بھی="" جانچ="">

SCF کا اظہار، کٹ کا ایک ligand. گروپ بی چوہوں میں SCF کا mRNA اظہار گروپ A کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا، جبکہ گروپ C، D، اور E میں AEHC کے ساتھ علاج نے SCF mRNA اظہار میں اضافہ کیا (شکل 10)۔ اس کے علاوہ، ہم نے PI3K جین کے اظہار پر AEHC کے اثر کی جانچ کی۔ 14 ویں دن، PI3K جین کے اظہار کی سطح گروپ B کے مقابلے گروپ C، D، اور E میں نمایاں طور پر زیادہ تھی (𝑃 <>