حصہ 1 گٹ مائکروبیوٹا ہومیوسٹاسس کی بحالی کے ذریعے دائمی غیر متوقع تناؤ والے چوہوں پر Cistanche Tubulosa Extract کے اینٹی ڈپریسنٹ جیسے اثرات

Yang Li1، Ying Peng1، Ping Ma1، Hanlin Yang1، Haiyan Xiong1، Mengyue Wang1، Chongsheng Peng1، Pengfei Tu2 اور Xiaobo Li1*

1 سکول آف فارمیسی، شنگھائی جیاؤ ٹونگ یونیورسٹی، شنگھائی، چین، 2 ریاستی کلیدی لیبارٹری آف نیچرل اینڈ بائیومیٹک ڈرگز، سکول آف فارماسیوٹیکل سائنسز، پیکنگ یونیورسٹی، بیجنگ، چین

بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ اعصابی نفسیاتی امراض، جیسے ڈپریشن، گٹ کے دماغ کے محور کے ذریعے گٹ مائکرو بایوم سے منسلک ہوتے ہیں۔Cistanches Herbaروایتی چینی ادویات (TCM) میں "کڈنی یانگ" کی کمی کے علاج کے لیے مشہور ہے اور حالیہ برسوں میں اسے نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔ اس مطالعے میں، دائمی غیر متوقع تناؤ (CUS) سے متاثرہ ڈپریشن ماڈل قائم کیا گیا تھا تاکہ اس کے اثرات کو تلاش کیا جا سکے۔Cistanche tubulosaرویے کے ٹیسٹ، مونوامین نیورو ٹرانسمیٹر، اور ہپپوکیمپس اور بڑی آنت میں نیوروٹروفک عوامل، گٹ مائکرو بائیوٹا کمپوزیشن، اور شارٹ چین فیٹی ایسڈز (SCFAs) کی پیداوار پر ایکسٹریکٹ (CTE)۔ مزید یہ کہ، ارتباط کے تجزیے کو تبدیل شدہ گٹ مائیکرو بائیوٹا، ہپپوکیمپس اور بڑی آنت میں بدلے ہوئے نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفنز، اور SCFAs کے پریشان کن ارتکاز کے درمیان فعال تعلقات کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ CTE نے CUS کے تحت چوہوں میں افسردگی جیسے طرز عمل کو نمایاں طور پر بہتر کیا۔ CUS چوہوں میں دماغ کی سطح 5-hydroxytryptamine (5-HT) اور دماغ سے ماخوذ نیوروٹروفک عنصر (BDNF) اظہار کو CTE کے ذریعے بحال کیا گیا۔ گٹ مائکرو بائیوٹا کی نسبتا کثرت اور ایسیٹیٹ اور ہیکسانوک ایسڈ کی تعداد کو بھی CTE علاج کے ذریعہ ماڈیول کیا جاسکتا ہے۔ ہم نے مزید دکھایا کہ CUS چوہوں میں CTE کے اطلاق سے گٹ مائکرو بائیوٹا کی ساخت، ہپپوکیمپس نیورو ٹرانسمیٹر کی سطح، اور نیورو ایکٹیو میٹابولائٹ SCFAs کی پیداوار کے درمیان مضبوط تعلق پیدا ہوا۔ مجموعی طور پر، یہ نتائج CTE کو ڈپریشن کی علامات کے لیے ممکنہ علاج کے طور پر شناخت کرتے ہیں، مائکرو بائیوٹا-گٹ-دماغ کے محور کی خرابیوں کے لیے گٹ مائیکرو بائیوٹا کے ہومیوسٹاسس کو بحال کرکے، نیورو سائیکوفراماکولوجی کے شعبے میں نئی ​​راہیں کھولتے ہیں۔

مطلوبہ الفاظ: Cistanche tubulosa, antidepressant، دائمی غیر متوقع تناؤ، گٹ مائکروبیوٹا، مائیکرو بائیوٹا-گٹ-دماغ کا محور

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

تعارف

Cistanches Herba(چینی میں Rou Cong-Rong) سرکاری طور پر اس کے خشک رسیلی تنوں کے طور پر ریکارڈ کیا جاتا ہے۔Cistanche deserticola(وائی سی ما) اورCistanche tubulosa(Schrenk) چینی فارماکوپیا کمیشن (2015) میں۔ یہ گردوں کی کمی، نامردی، خواتین میں بانجھ پن، مربیڈ لیکوریا، بہت زیادہ میٹروریاجیا، کے علاج کے لیے ایک مشہور روایتی چینی دوا (TCM) ہے۔

اور بزرگ قبض (چینی فارماکوپیا کمیشن، 2015)۔ پچھلے مطالعات میں کئی اہم کیمیائی اجزاء کا انکشاف ہوا ہے۔Cistanches Herba، بشمول phenylethanoid glycosides (PhGs)، iridoids اور iridoid glycosides، lignans، alditols، oligosaccharides، اور polysaccharides۔ فارماسولوجیکل تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanches Herba نیورو پروٹیکٹو، امیونوموڈولیٹری، اینٹی سوزش، اور hepatoprotective سرگرمیوں کی ایک وسیع رینج کی نمائش کرتا ہے (Jiang and Tu, 2009; Fu et al., 2017)۔ PhGs کو Cistanches Herba کے اہم فعال اجزاء کے طور پر شمار کیا جاتا ہے جس میں مختلف فارماسولوجیکل سرگرمیاں ہوتی ہیں، جیسے نیورو پروٹیکٹو، امیونوموڈولیٹری، اینٹی انفلامیٹری، ہیپاٹوپروٹیکٹو، اینٹی آکسیڈیٹیو، وغیرہ۔ (جیانگ اور ٹو، 2009؛ فو ایٹ ال۔Cistanches Herbaاصل میں کلاسک آف ہربل میڈیسن (چینی میں "شینونگ بینکاو جینگ") میں درج کیا گیا تھا، جو تقریباً 200 اور 250 عیسوی کے درمیان لکھی گئی دواؤں کے پودوں پر ایک مشہور کتاب ہے، جو ایک "اعلی جڑی بوٹی" کے طور پر ہے جو "پانچ (viscera) تناؤ کو کنٹرول کر سکتی ہے۔ اور سات (زیادہ کھانا، غصہ، نمی، سردی، فکر، ہوا اور بارش، اور خوف) خرابیاں" (ہوانگ، 1982)۔ آج کل Cistanches Herba کو عام کمزوری کے لیے جڑی بوٹیوں کے ٹانک کے طور پر بڑے پیمانے پر قبول کیا جاتا ہے (Fu et al., 2017)۔C. tubulosaگلائکوسائیڈ کیپسول (Memoregain®) الزائمر کی بیماری کے علاج کے لیے استعمال میں ہیں (Guo et al., 2013)۔ ایک غیر فعال ڈوپامینرجک نظام ڈپریشن کے مونوامین مفروضے کے کلیدی روگجنن میں سے ایک ہے (Duman et al.، 1997; کرشنن اور نیسلر، 2008)۔ Echinacoside (PhGs میں سے ایک) اور PhGs سےCistanche سالساڈوپامینرجک نیورونز کو ڈوپامائن (DA) نیوروٹوکسائٹی سے بچانے کے لیے پایا گیا ہے جو کہ 1-میتھائل-4-فینائل-1،2,3،6-ٹیٹراہائیڈروپائرڈائن (MPTP) کے ذریعے پیدا ہوتا ہے جو DA کو بڑھا سکتا ہے۔ C57 چوہوں کے سٹرائٹم میں سطح (ٹیان اور پ، 2005؛ گینگ ایٹ ال۔، 2007)۔ مزید برآں، Cistanches Herba میں Catalpol اور geniposide دو نمائندہ iridoids ہیں، اور وہ ہائپوتھلامک-پٹیوٹری-ایڈرینل (HPA) محور کی خرابیوں کو بحال کرنے کے ذریعے دائمی غیر متوقع تناؤ (CUS) سے متاثر ڈپریشن جیسے رویے کو کم کرتے ہوئے پائے گئے ہیں اخذ کردہ نیوروٹروفک فیکٹر (BDNF) اظہار (Cai et al.، 2015؛ Wang et al.، 2015)۔ مزید برآں، تازہ ترین اشاعت سے ایک تازہ ثبوت ملتا ہے کہ Cistanches Herba decoction نے ماؤس ٹیل کے معطلی ٹیسٹ میں عدم استحکام کی مدت کو نمایاں طور پر کم کر دیا ہے، جو کہ سختی سے تجویز کرتا ہے کہ Cistanches Herba میں اینٹی ڈپریسنٹ جیسی خصوصیات موجود ہیں (WangD. et al.، 2017)۔

روایتی چینی ادویات اس کے نسبتاً معتدل ضمنی اثرات کی وجہ سے ڈپریشن کے علاج کے طور پر بڑھتی ہوئی توجہ اپنی طرف مبذول کراتی ہیں (ساریس ایٹ ال۔، 2011؛ ​​فینگ ایٹ ال۔، 2016)۔ TCMs کی مختلف اقسام، جیسے کہ خام دوائی سے انفرادی مرکبات (ginsenoside Rb1، ginsenoside Rg3، اور Yuanzhi-1) (جن ایٹ ال۔، 2015؛ کانگ ایٹ ال۔، 2017؛ وانگ جی ایل ایٹ ال۔، 2017) )، واحد چینی ادویاتی مواد (Panax ginseng root، Acorus tatarinowii rhizome، اور Morinda officinalis) (Dang et al., 2009; Han et al., 2013; Xu et al., 2016)، اور TCM کاڑھیاں (Kai-Xin- San, Chaihu-Shu-Gan-San, Xiaoyaosan, and Xiaochaihutang) (Dai et al., 2010; Su et al., 2011; Su et al., 2014; Yan et al., 2016) کا گہرا مطالعہ اور دکھایا گیا ہے۔ ڈپریشن جیسی علامات کو ریورس یا کم کرنے کے لیے۔ مثال کے طور پر، Kai-Xin-San کو نیورو ٹرانسمیٹر، نیوروٹروفک عوامل، اور ان کے متعلقہ ریسیپٹرز کی مقدار میں اضافہ، اور Synaptotagmin اور dendritic spine density (Yan et al) کے اظہار کو فروغ دینے کے ذریعے CUS کی حوصلہ افزائی ڈپریشن چوہوں کی علامات کو واضح طور پر کم کرنے کے لیے پایا گیا تھا۔ .، 2016)۔

اس کے باوجود، TCM کے پچھلے مطالعات ڈپریشن جیسے طرز عمل کے ٹیسٹ کے نتائج پر انحصار کرتے ہیں اور عمل کے روایتی فارماسولوجیکل میکانزم پر توجہ مرکوز کرتے ہیں۔ زبانی طور پر زیر انتظام TCM اور گٹ مائکروبیوٹا کی اینٹی ڈپریسنٹ افادیت کے درمیان تعلق کو اچھی طرح سے سمجھا نہیں گیا ہے۔ بڑھتے ہوئے شواہد اس بات کی تائید کرتے ہیں کہ گٹ مائکرو بائیوٹا دماغی افعال کو منظم کرنے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے، خاص طور پر ڈپریشن اور تناؤ سے متعلق دیگر عوارض (فوسٹر اینڈ نیوفیلڈ، 2013؛ شیرون ایٹ ال۔، 2017)۔ مثال کے طور پر، دائمی تناؤ کے نتیجے میں چوہے کے گٹ مائکروبیل ڈھانچے کی بے ضابطگی ہوتی ہے، جس میں Firmicutes/Bacteroidetes کے تناسب میں کمی واقع ہوتی ہے، اور خاص طور پر، Lactobacillus کی نسبتا کثرت میں کمی اور Oscillibacter میں اضافہ ہوتا ہے (Meng et al.، 2017)۔ مزید برآں، افسردہ مریضوں سے جراثیم سے پاک چوہوں میں غیر منظم مائیکرو بائیوٹا کی فیکل ٹرانسپلانٹیشن نے ان جانوروں میں ڈپریشن جیسا فینوٹائپ عطا کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ غیر منظم گٹ مائکرو بائیوٹا ڈپریشن اور اضطراب کے رویے اور جسمانی علامات کا سبب بنتا ہے (کیلی ایٹ ال۔ .، 2016)۔ جانوروں کے تجربات میں، کچھ مائیکرو بائیوٹا ماڈیولٹرز جیسے پروبائیوٹکس اور پری بائیوٹکس گٹ مائکرو بائیوٹا (براوو ایٹ ال۔، 2011؛ ​​بھروانی ایٹ ال۔، 2017؛ بروکاس ایٹ ال۔ )۔

گٹ مائکرو بائیوٹا اور بیماری کی نشوونما کے ساتھ ساتھ گٹ مائکرو بائیوٹا کے ڈھانچے کی پلاسٹکٹی کے درمیان وابستگی کو دیکھتے ہوئے، ہم نے ڈپریشن میں ثالثی کے لیے ان گٹ مائکرو بائیوٹا کے اثرات کی تحقیقات کرنے کا فیصلہ کیا اور اس کی تحقیقات کی گئیں (چانگ ایٹ ال۔، 2017؛ سو ایٹ ال۔ .، 2017)۔ اس کو حاصل کرنے کے لیے، 16S rRNA جین کی ترتیب مشترکہ میٹا سٹیٹس کا تجزیہ (وائٹ ایٹ ال۔، 2009) گٹ مائکرو بائیوٹا کمپوزیشن کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا۔ موجودہ مطالعہ میں،C. tubulosaکو اس کے اینٹی ڈپریسنٹ جیسے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے منتخب کیا گیا تھا کیونکہ اس کے مقابلے میں پی ایچ جی کی سطح زیادہ ہے۔C. deserticola. کے اثرات کو تلاش کرنے کے لیے ایک چوہا CUS-حوصلہ افزائی ڈپریشن ماڈل قائم کیا گیا تھا۔C. tubulosaنچوڑ (CTE، جس میں 48.6 فیصد PhGs، 6.9 فیصد iridoid glycosides، اور 20.0 فیصد کل saccharides) رویے کے ٹیسٹ، مونوامین نیورو ٹرانسمیٹر، اور ہپپوکیمپس اور بڑی آنت میں نیوروٹروفک عوامل، گٹ مائیکرو بائیوٹا مرکب، مختصر چین فیٹی ایسڈ (SCFA) کی پیداوار مزید یہ کہ، تبدیل شدہ گٹ مائکروبیوٹا کے درمیان فعال تعلقات نے ہپپوکیمپس اور بڑی آنت دونوں میں نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفنز کو تبدیل کیا، اور SCFAs کی پریشان کن حراستی کا مطالعہ کیا گیا۔ ارتباط کا تجزیہ ثبوت ثابت کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا کہ CTE گٹ مائکروبیٹا کو مائیکرو بائیوٹا-گٹ-دماغ کے محور کو ماڈیول کرکے افسردگی کے علاج کے لئے نشانہ بناتا ہے۔

Cistancheقوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے۔

مواد اور طریقے

مواد

Fluoxetine (FLX) علاء الدین انڈسٹریل انکارپوریشن (شنگھائی، چین) سے خریدی گئی تھی۔ 5-hydroxytryptamine (5-HT)، norepinephrine (NE)، اور BDNF ELISA کٹس نانجنگ جیانچینگ بائیو انجینیئرنگ انسٹی ٹیوٹ (نانجنگ، چین) سے خریدی گئیں۔ HPLC گریڈ acetonitrile مرک (Darmstadt، جرمنی) سے خریدا گیا تھا۔ ڈیونائزڈ پانی کو ملی-کیو واٹر پیوریفیکیشن سسٹم (ملی پور، بیڈفورڈ، ایم اے، ریاستہائے متحدہ) کا استعمال کرتے ہوئے آست پانی سے تیار کیا گیا تھا۔ استعمال ہونے والے دیگر تمام ریجنٹس اور کیمیکل تجزیاتی گریڈ کے تھے۔

کے خشک تنوںC. tubulosaہیٹیان کاؤنٹی (سنکیانگ، چین) سے جمع کیے گئے تھے۔ واؤچر کے نمونے کے نمونوں کی توثیق پروفیسر ژاؤبو لی نے کی تھی اور انہیں سکول آف فارمیسی، شنگھائی جیاؤ ٹونگ یونیورسٹی (شنگھائی، چین) کے ہربیریم میں جمع کیا گیا تھا۔ یکساں پاوڈرC. tubulosaتنوں کو 70 فیصد ایتھنول کے دس گنا میں معطل کیا گیا تھا، اور تین بار گرمی سے ریفلکس کیا گیا تھا، ہر ایک 100 ڈگری پر 1 گھنٹے کے لیے۔ نچوڑ کو گوج کا استعمال کرتے ہوئے فلٹر کیا گیا، 65 ڈگری پر ویکیوم کے نیچے بخارات بنا کر لائفائلائز کیا گیا۔ نمونے کو دوبارہ تحلیل کیا گیا اور پھر میکروپورس رال D101 سے الگ کر دیا گیا۔ جذب کرنے کے بعد، پانی سے خارج ہونے والے حصے کو ضائع کر دیا گیا۔ سی ٹی ای کو 40 فیصد ایتھنول کے ساتھ خارج کرنے کے بعد حاصل کیا گیا تھا، پھر 65 ڈگری پر ویکیوم کے نیچے بخارات بن کر لائفائلائز کیا گیا تھا۔

CTE کی کیمیائی ساخت کا تجزیہ

سی ٹی ای میں پی ایچ جی کے متعلقہ مواد کا تعین یووی سپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعے 330 nm پر ایچیناکوسائیڈ کو بطور معیار استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ iridoids اور iridoid glycosides کے متعلقہ مواد کو UV spectrophotometry کے ذریعے دوہری طول موج کے طریقہ کار سے ماپا گیا تھا تاکہ PhGs سے سپیکٹرل مداخلت سے بچا جا سکے (237 nm سپیکٹروسکوپک کوانٹیفیکیشن کے لیے استعمال کیا گیا تھا، ایک isosbestic point 280 nm استعمال کیا گیا تھا، حوالہ طول موج کے لیے استعمال کیا گیا تھا) معیار کے طور پر. سی ٹی ای کے کل کاربوہائیڈریٹ مواد کا تعین فینول-سلفورک ایسڈ کلومیٹرک طریقہ سے گلوکوز کے ساتھ معیار کے طور پر کیا گیا تھا (چاؤ اور لینڈہاؤسر، 2004)۔

CTE کے اہم کیمیائی اجزاء کی خصوصیات UPLC-Q-TOF-MS تھے۔ UPLC-Q-TOF-MS تجزیہ واٹر ایکویٹی UPLC سسٹم (واٹرس کارپوریشن، ملفورڈ، ایم اے، یونائیٹڈ اسٹیٹس) پر ایک ایکوئٹی UPLC BEH C18 کالم (100 mm x 2.1) کے ساتھ کیا گیا تھا۔ mm id، 1.7 段m، Waters Corp., United States) بذریعہ تدریجی اخراج 0.1 فیصد فارمک ایسڈ ایسٹونائٹرائل (A) اور 0.1 فیصد فارمک ایسڈ پانی میں (B) ایک پر بہاؤ کی شرح 0.4 ملی لیٹر فی منٹ۔ گریڈینٹ پروفائل یہ تھا: 0-5 منٹ (A: 5-20 فیصد)، 5-7.5 منٹ (A: 20-30 فیصد)، 7{24}} منٹ ( A: 30-70 فیصد، 10-11 منٹ (A: 70-100 فیصد)، اور 1.5 منٹ کے لیے روکا گیا۔ گریڈینٹ کو 0.5 منٹ میں 5 فیصد پر دوبارہ ری سائیکل کیا گیا اور اگلی دوڑ کے لیے 2.5 منٹ تک رکھا گیا۔ انجیکشن کا حجم 3 تھا۔ کالم اوون کا درجہ حرارت 35 ڈگری پر سیٹ کیا گیا تھا۔

ماس اسپیکٹومیٹری واٹرس ویون آئی ایم ایس ماس اسپیکٹومیٹر (واٹرس کارپوریشن، ملفورڈ، ایم اے، ریاستہائے متحدہ) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ آئنائزیشن منفی الیکٹرو سپرے (ESI) موڈ میں کی گئی تھی۔ MS پیرامیٹرز حسب ذیل تھے: کیپلیری وولٹیج، 20 kV; شنک وولٹیج، 20 V؛ ماخذ درجہ حرارت، 120 ڈگری؛ حل کرنے کا درجہ حرارت، 500 ڈگری ; شنک اور ڈیسولیشن کے گیس کے بہاؤ، بالترتیب 50 اور 1،000 L/h، بڑے پیمانے پر درست پیمائش کے لیے، لیوسین-اینکیفالن کو ایک [MH]- آئن (m/z 554.2615) پیدا کرنے کے لیے لاک ماس کے طور پر استعمال کیا گیا۔ دو اسکین فنکشنز میں ایک MSE (Mass SpectrometryElevatedEnergy) تجربہ اس طرح کیا گیا: فنکشن 1 (کم توانائی): m/z 50-1,000, 0.25 s اسکین ٹائم، 0.02 s انٹر اسکین تاخیر , 6 eV تصادم توانائی؛ فنکشن 2 (اعلی توانائی): m/z 50-1,000, 0.25 s اسکین ٹائم، 0.02 s انٹر اسکین تاخیر، 20-45 eV کا تصادم توانائی ریمپ۔ ڈیٹا پر UNIFI 1.8.1 سافٹ ویئر (Waters Corp., Milford, MA, United States) کا استعمال کرتے ہوئے کارروائی کی گئی۔

جانوروں کے تجربات

نر Sprague-Dawley چوہے (200 土 20 g) بیجنگ وائٹل ریور لیبارٹری اینیمل ٹیکنالوجی کمپنی (بیجنگ، چین) سے منگوائے گئے تھے، اور شنگھائی جیاؤ ٹونگ یونیورسٹی (شنگھائی، چین) کے لیبارٹری اینیمل سینٹر میں رکھے گئے تھے۔ جانوروں کو 12:12 گھنٹے کے ہلکے سیاہ چکر کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت (25 土 2 ڈگری، 55 土 10 فیصد رشتہ دار نمی) کے تحت گروپوں میں رکھا گیا تھا۔ چوہوں کو 1 ہفتے کے لیے باقاعدہ لیبارٹری چوہوں کے چاؤ اور پانی تک مفت رسائی کی اجازت تھی۔ جانوروں کی سہولیات اور پروٹوکول کو شنگھائی جیاؤ ٹونگ یونیورسٹی (شنگھائی، چین) کی اینیمل ایتھکس کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

1 ہفتہ کے موافقت کے بعد، 40 بولی چوہوں کو 72 گھنٹے کی سوکروز ٹریننگ اور سوکروز بیس لائن ٹیسٹنگ کا نشانہ بنایا گیا۔ چوہوں کو سوکروز بیس لائن ٹیسٹ (ضمنی اعداد و شمار S1) میں ان کی سوکروز ترجیح کی بنیاد پر پانچ گروپوں (n=8) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ اور CUS گروپ کو نمکین (10 ملی لیٹر فی کلوگرام) دیا گیا۔ دیگر تین گروہوں کے لیے، زیادہ خوراک پر CTE (CTEH) (400 mg/kg)، کم خوراک (CTEL) (200 mg/kg)، اور FLX (10 mg/kg) 4 ہفتوں کے دوران CUS طریقہ کار سے 1 گھنٹہ پہلے (صبح 8:00 سے 9:00 بجے تک) intragastrically کا انتظام کیا گیا تھا۔

دائمی غیر متوقع تناؤ تیار کیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (ولنر، 1997؛ زیو ایٹ ال۔، 2013)، کنٹرول غیر تناؤ والے گروپ کے علاوہ، چوہوں پر تناؤ کا ایک سلسلہ لگایا گیا تھا: راتوں رات کم شدت والی اسٹروبوسکوپک الیومینیشن (120 چمکیں/ منٹ)، سفید شور (100 ڈی بی) 1 گھنٹے کے لیے، 24 گھنٹے کے لیے پانی کی کمی، 1 گھنٹے کے لیے پانی کی خالی بوتلیں (پانی کی کمی کے بعد)، 24 گھنٹے تک کھانے کی کمی، جبری تیراکی (5 منٹ)، جسمانی پابندی ({{11) }} h)، 24 گھنٹے کے لیے گندا پنجرا (100 گرام چورا بستر میں 200 ملی لیٹر پانی)، دم کی چٹکی (1 منٹ)، 24 گھنٹے کے لیے 45 ڈگری کیج جھکاؤ، 30 منٹ کے لیے جھٹکا، اور رات بھر کی روشنی (12 گھنٹے)۔ تناؤ کا اطلاق 4 ہفتوں تک مسلسل اور تصادفی طور پر کیا گیا تھا، جس کی تفصیلات ضمنی جدول S1 میں بیان کی گئی ہیں۔ غیر تناؤ والے چوہوں پر قابو پانے کے لیے خوراک اور پانی آزادانہ طور پر دستیاب تھے، جو کسی دوسرے کمرے میں بلا روک ٹوک رہے، سوکروز ٹیسٹ سے پہلے 14 گھنٹے کی محرومی کے۔ CUS طریقہ کار کے دوران ایک چوہا مر گیا۔ اس کے بعد جبری سوئمنگ ٹیسٹ (FST) کیا گیا۔

4 دن کی شدید انتظامیہ اور 28 دن کے تناؤ کے بعد، سوکروز ترجیحی ٹیسٹ (SPT) (دن 29)، اوپن فیلڈ ٹیسٹ (OFT) (31 دن)، اور نوولٹی-دبی ہوئی فیڈنگ ٹیسٹ (NSFT) (33 دن) کئے گئے۔ CUS اور طرز عمل کے ٹیسٹ کے لیے ڈیزائن کا خاکہ ضمنی شکل S2 میں دکھایا گیا ہے۔

ایک زبردستی تیراکی کا ٹیسٹ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (Porsolt et al.، 1978)۔ طریقہ کار ایک ہی اپریٹس اور شرائط کا استعمال کرتے ہوئے پریٹسٹ اور ٹیسٹ سیشنز پر مشتمل تھا (قطر 20 سینٹی میٹر، اونچائی 45 سینٹی میٹر، جس میں 25 سینٹی میٹر پانی 26 ڈگری پر برقرار ہے)۔ پریٹیسٹ سیشن کے دوران، چوہوں کو 15 منٹ تک تیرنے پر مجبور کیا گیا۔ 24 گھنٹے بعد، چوہوں کو 5 منٹ تیراکی کے ٹیسٹ سیشن کے لیے اسی اپریٹس میں رکھا گیا۔ اندر تیراکی کا رویہ

ویڈیو کیمرے کے ساتھ 5 منٹ کا مشاہدہ کیا گیا ، اور عدم استحکام کی مدت کی پیمائش اور تجزیہ کیا گیا۔

SPT کے لیے، چوہوں کو SPT سے پہلے 72 گھنٹے کے لیے 1 فیصد (v/v) سوکروز حل استعمال کرنے کی تربیت دی گئی تھی۔ CUS طریقہ کار سے پہلے سوکروز بیس لائن ٹیسٹ اور CUS کے آخر میں SPT انجام دیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (Xue et al.، 2013)۔

اوپن فیلڈ ٹیسٹ CUS طریقہ کار کے اختتام پر کیا گیا تھا، اپریٹس اور طریقہ وہی تھا جیسا کہ پہلے تفصیل سے بتایا گیا تھا (Xue et al.، 2013)۔ ایک ویڈیو ٹریکنگ سسٹم (شنگھائی موبائل ڈیٹم انفارمیشن ٹیکنالوجی کمپنی، لمیٹڈ) کا استعمال کیا گیا تاکہ سفر کیے گئے کل فاصلے کو ریکارڈ کیا جا سکے۔

نوولٹی سے دبائے گئے فیڈنگ ٹیسٹ کا اندازہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (Xue et al.، 2013) اور 5 منٹ کے اندر کھانا شروع کرنے میں تاخیر ریکارڈ کی گئی اور تجزیہ کیا گیا۔

نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفک عوامل کی پیمائش

رویے کے ٹیسٹ کے بعد، ہر چوہے سے کم از کم چار فیکل چھرے حاصل کیے گئے، جنہیں جراثیم سے پاک مخروطی ٹیوبوں میں رکھا گیا، اور مائکروبیل کمیونٹی اور SCFAs کے تجزیہ کے لیے فوری طور پر —80OC پر منجمد کر دیا گیا۔ اس کے بعد چوہوں کی قربانی دی گئی۔ ہپپوکیمپس اور بڑی آنت کو الگ تھلگ کیا گیا اور فوری طور پر ان کا وزن کیا گیا۔ ٹشو کے نمونے نمکین سے دھوئے گئے، مائع نائٹروجن میں اسنیپ فریز کیے گئے، اور ذخیرہ کرنے کے لیے —80OC میں رکھے گئے۔ -20OC اور 4OC پر ترتیب وار پگھلنے کے بعد، ٹشو کے نمونوں کو نمکین میں ہم آہنگ کیا گیا اور 2500 rpm/4OC پر 25 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ نتیجے میں سپرنٹنٹ کو جمع کیا گیا تھا اور استعمال تک 4OC پر محفوظ کیا گیا تھا۔ ہپپوکیمپس اور بڑی آنت میں 5-HT کی سطح، ہپپوکیمپس میں NE، اور ہپپوکیمپس میں BDNF کا تعین کارخانہ دار کے پروٹوکول (Hou et al.، 2017) کے مطابق تجارتی ELISA کٹس کے ذریعے کیا گیا تھا۔

Cistancheآرام کر سکتے ہیںگردہبیماری

گٹ مائکروبیوٹا کا ساختی پروفائل تجزیہ

آنتوں کے نمونوں سے گٹ مائکرو بائیوٹا کا کل ڈی این اے نکالا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (وی ایٹ ال۔، 20{{20}}4)۔ ہر فیکل نمونہ (0.2 جی) کو 1 ملی لیٹر پی بی ایس میں ملایا گیا، اور دو بار مکمل طور پر ہم آہنگ کیا گیا، پھر 6 منٹ کے لیے 200 جی پر سینٹرفیوگریشن کیا گیا۔ سپرنیٹنٹ کو 20 以 20 فیصد PVP کے ساتھ شامل کیا گیا اور 6 منٹ کے لئے 300 g پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ اس کے بعد نتیجے میں آنے والے سپرنیٹنٹ کو 12،{11}} گرام پر 6 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا اور سیل کے چھرے کاٹے گئے۔ سیل کے چھرے PBS کے ذریعے دھوئے گئے اور پھر 300 段l lysates I (150 mM NaCl، 100 mM EDTA・Na2・2H2.، pH 8.0) میں دوبارہ معطل کردیئے گئے۔ معطلی کو 100 以 لائسوزیم محلول (100 mg/ml) اور 20 以 1 فیصد RNase کے ساتھ ملایا گیا، 37OC کو 30 منٹ کے لیے گرم غسل دیا گیا، پھر 300 段l lysate II (100 mM NaCl، 500 mM، 800 mM بیس) شامل کیا گیا۔ . سیل معطلی کو 50 فیصد 20 فیصد SDS کے ساتھ آہستہ سے ملایا گیا، 5 منٹ تک برف سے نہایا گیا۔ اس کے بعد ڈی این اے کو 1 فیصد PVP، Tris-equilibrated phenol اور chloroform-isoamyl الکحل (vol/vol/vol/vol, 3.125:25:24:1)، اور chloroform-isoamyl الکحل (vol/vol, 24) کے ساتھ ترتیب وار نکالنے سے پاک کیا گیا۔ :1) اس کے بعد ایتھنول کی دو جلدوں اور 50 [il 3 M NaAc کے ساتھ 2 گھنٹے کے لیے —20OC پر بارش ہوتی ہے۔ ڈی این اے سینٹرفیوگریشن کے ذریعے اکٹھا کیا گیا، ہوا سے خشک کیا گیا اور 100 فیصد جراثیم سے پاک ڈیونائزڈ پانی میں تحلیل کیا گیا۔ نیوکلک ایسڈ کی پاکیزگی کا ٹیسٹ NanoDrop 2000c سپیکٹرو فوٹومیٹر (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، ریاستہائے متحدہ) کے ذریعے کیا گیا۔ اس کے بعد کل جینومک ڈی این اے کو 16S rRNA جین کے V3-V4 علاقوں کے لیے مخصوص پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے PCR ایمپلیفیکیشن کا نشانہ بنایا گیا: فارورڈ پرائمر 338F (5'-ACTCCTACGGGGGGCAGCA-3') اور ریورس پرائمر 806R (5) '-GGACTACHVGGGTWTCTAAT- 3')۔ PCR amplicons Agencourt AMPure موتیوں (Beckman Coulter, Indianapolis, IN, United States) سے پاک کیے گئے تھے اور PicoGreen dsDNA Assay Kit (Invitrogen، Carlsbad، CA، United States) کا استعمال کرتے ہوئے مقدار درست کی گئی تھی۔ انفرادی کوانٹیفیکیشن مرحلے کے بعد، ایمپلیونز کو برابر مقدار میں جمع کیا گیا، اور شنگھائی پرسنل بائیوٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ (شنگھائی، چین) میں ایلومینا MiSeq پلیٹ فارم کو MiSeq Reagent Kit v3 کے ساتھ استعمال کرتے ہوئے پیئر اینڈ 2 x 300 bp کی ترتیب کو انجام دیا گیا۔ پیئرڈ اینڈ ریڈز کو FLASH سافٹ ویئر (ورژن 1.2.7) کا استعمال کرتے ہوئے جمع کیا گیا تھا، خام ترتیب پڑھنے کو QIIME سافٹ ویئر (ورژن 1.8.0) کا استعمال کرتے ہوئے کوالٹی تراشی گئی تھی تاکہ مماثل بارکوڈز اور طوالت کی حد سے نیچے کی ترتیب کو ہٹایا جا سکے۔ اس کے بعد، فلٹر شدہ ترتیب کو UCLUST کے ساتھ QIIME کا استعمال کرتے ہوئے 97 فیصد تسلسل مماثلت کی حد کے ساتھ آپریشنل ٹیکونومک یونٹس (OTUs) میں کلسٹر کیا گیا۔ بیٹا تنوع کو QIIME پر وزنی UniFrac پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ (PCoA) کے لیے انجام دیا گیا۔ آخر میں، میٹا سٹیٹس سافٹ ویئر کا استعمال مختلف گروپوں کے درمیان گٹ مائکروبیل ٹیکنومک کمپوزیشن میں فرق کا موازنہ کرنے کے لیے کیا گیا۔

SCFAs حراستی تجزیہ

چوہوں کے آنتوں کے نمونوں میں SCFAs (بشمول ایسیٹیٹ، پروپیونیٹ، بٹائریٹ، آئسوبیوٹیریٹ، والیرک ایسڈ، آئسووالریک ایسڈ، اور ہیکسانوک ایسڈ) کی حراستی کا تعین GC{{0}} گیس کرومیٹوگراف (Shimadzu, Japan) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ DB-FFAP کالم کے ساتھ (30 mx 0.25 mm x {{10}}.25 cm, Agilent, United States)۔ ایسیٹیٹ، پروپیونیٹ، بٹائریٹ، آئسوبیوٹیریٹ، والیرک ایسڈ، آئسووالریک ایسڈ، اور ہیکسانوک ایسڈ کے معیاری حل 1، 0.4، 0.2، 0.1، {{ پر تیار کیے گئے تھے۔ 21}}۔ ہر فیکل نمونہ (0.2 جی) کو 5،000 rpm پر 4OC پر 20 منٹ کے لیے بھنور اور سینٹرفیوگنگ کے ذریعے 0.8 ملی لیٹر ڈیونائزڈ پانی میں ملایا گیا، 50 il 50 فیصد H2SO4 اور 500 il اندرونی معیار کے ذریعے 450 il سپرناٹینٹ شامل کیا گیا۔ حل، 1 منٹ کے لیے بھنور ڈالا اور 12،000 rpm پر 10 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا، پھر مرکب کو 30 منٹ کے لیے 4OC میں رکھا گیا۔ سپرنٹنٹ کو جی سی تجزیہ کے لیے لیا گیا تھا۔ SCFAs کا تجزیہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (Wang et al.، 2016)۔

شماریاتی تجزیہ

تمام ڈیٹا کو بطور ذریعہ پیش کیا گیا 土 SEM۔ اعداد و شمار کا تجزیہ SPSS 21 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ اگر وسط سے دو معیاری انحرافات سے زیادہ ہوں تو ڈیٹا کو تجزیوں سے خارج کر دیا گیا تھا۔ p < 0.05="" کی="" قدروں="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" گٹ="" مائیکرو="" بائیوٹا،="" scfas،="" ہپپوکیمپس="" 5-ht،="" ne،="" اور="" bdnf="" لیولز،="" اور="" بڑی="" آنت="" 5-ht="" کی="" نسبتہ="" کثرت="" کے="" درمیان="" تعلق="" کا="" اندازہ="" لگانے="" کے="" لیے="" پیئرسن="" کا="" ارتباطی="" تجزیہ="" استعمال="" کیا="" گیا="">

Cistancheقوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے اور بلڈ پریشر کو کم کر سکتا ہے۔

نتائج

CTE کی کیمیائی ساخت کا تجزیہ

CTE کی کیمیائی ساخت کا سب سے پہلے جامع تجزیہ کیا گیا۔ جیسا کہ جدول 1 میں دکھایا گیا ہے، PhGs CTE کا بنیادی جزو تھے، جس کا تناسب 48.6 فیصد تھا، iridoids اور iridoid glycosides 6.9 فیصد تھے، اور کل saccharides 20.0 فیصد تھے۔ یہ

CTE کے اجزاء کو پھر UPLC-Q-TOF-MS کا استعمال کرتے ہوئے خصوصیت دی گئی۔ کل 27 اجزاء کا پتہ چلا اور ان کی شناخت کی گئی، بشمول PhGs کے 20 اجزاء، پانچ iridoids اور iridoid glycosides، اور دو oligosaccharides۔ تفصیلی معلومات بشمول برقرار رکھنے کا وقت، درست MS، اور MS/MS فریگمنٹ آئن معاون معلومات (ضمنی جدول S2) میں درج ہیں۔ CTE کا UPLC-Q-TOF-MS کل آئن کرومیٹوگرام (TIC) کو ضمنی شکل S3 میں دکھایا گیا ہے۔

CTE نے CUS چوہوں میں افسردہ رویوں کو بہتر کیا۔

CUS چوہوں میں، FST میں مکمل عدم استحکام کا وقت اور NSFT میں کھانے میں تاخیر CTE علاج سے نمایاں طور پر کم ہوئی، اور SPT میں سوکروز کی ترجیح اور OFT میں طے شدہ کل فاصلہ بڑھا دیا گیا۔

شکل 1A CUS چوہوں میں FST میں عدم استحکام کے وقت پر CTE کے شدید اثرات کی وضاحت کرتا ہے۔ CUS ماڈل گروپ کے مقابلے میں، CTE کی 3- دن کی شدید زبانی انتظامیہ نے FST [ایک طرفہ ANOVA, F(3,26)=4.983, p {{7} میں کل عدم استحکام کے وقت کو نمایاں طور پر کم کیا }.007]۔ مزید پوسٹہاک تجزیہ نے انکشاف کیا کہ انتظامیہ

جدول 1|C. tubulosa extract.of CTE کی ہائی ڈوز گروپ کے ساتھ کیمیائی ساخت (Dunnett's test, p < 0.05)="" اور="" کم="" خوراک="" والے="" گروپ="" (dunnett's="" test,="" p=""><0.05) میں="" واضح="" کمی="" ظاہر="" ہوئی۔="" fst="" میں="" مکمل="" عدم="" استحکام="" کا="">

CUS چوہوں میں SPT میں سوکروز کی ترجیح پر CTE کے اثرات شکل 1B میں دکھائے گئے ہیں۔ اٹھائیس دنوں کے تناؤ کے طریقہ کار کی وجہ سے CUS ماڈل گروپ میں سوکروز کی ترجیح میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے جو کنٹرول غیر تناؤ والے چوہوں کے مقابلے میں ہے [ایک طرفہ ANOVA, F(4,34)=3.993, p {{8 }}۔{10}}09; ڈنیٹ کا ٹیسٹ، پی <0.05]، اس="" بات="" کی="" نشاندہی="" کرتا="" ہے="" کہ="" cus="" ماڈل="" کامیابی="" کے="" ساتھ="" تیار="" کیا="" گیا="" تھا۔="" مثبت="" کنٹرول="" کے="" طور="" پر،="" flx="" گروپ="" نے="" cus="" چوہوں="" میں="" سوکروز="" کی="" ترجیح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" کیا="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="3.993," p="0.009;" ڈنیٹ="" کا="" ٹیسٹ،="" پی=""><0.05]، cus="" ماڈل="" کی="" پیشن="" گوئی="" کی="" درستگی="" کو="" ظاہر="" کرتا="" ہے۔="" زیادہ="" خوراک="" والے="" گروپ="" میں="" cte="" کی="" دائمی="" زبانی="" انتظامیہ="" نے="" سوکروز="" کی="" ترجیح="" پر="" کلیدی="" اثرات="" دکھائے="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="3.993,p=0.009;" ڈنیٹ="" کا="" ٹیسٹ،="" پی=""><0.01]، جس="" نے="" اسے="" cus="" چوہوں="" میں="" معمول="" کی="" سطح="" پر="" بحال="" کیا۔="" کم="" خوراک="" والے="" گروپ="" کے="" ساتھ="" cte="" نے="" بڑھتے="" ہوئے="" رجحان="" کو="" دکھایا="" لیکن="" اثر="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" نہیں="" تھا="" (dunnett's="" test,="" p="">

جیسا کہ شکل 1C میں دکھایا گیا ہے، CUS چوہوں پر CTE کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے OFT میں طے شدہ کل فاصلہ بھی استعمال کیا گیا تھا۔ غیر تناؤ والے چوہوں کے مقابلے میں، CUS ماڈل گروپ نے بہت کم کل فاصلہ ظاہر کیا [ایک طرفہ ANOVA, F(4,34)=7.845, p=0۔{9}}{{ 19}01; Dunnett's test, p < 0.001]="" cus="" میں="" 4-ہفتے="" کی="" نمائش="" کے="" بعد،="" اور="" مثبت="" کنٹرول="" flx="" علاج="" نے="" cus="" چوہوں="" میں="" کل="" فاصلہ="" بڑھا="" دیا="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="7.845،" صفحہ="0.0001;" ڈنیٹ="" کا="" ٹیسٹ،="" پی=""><0.05]۔ زیادہ="" خوراک="" اور="" کم="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" کی="" روزانہ="" زبانی="" انتظامیہ="" نے="" cus="" چوہوں="" میں="" کل="" فاصلے="" پر="" واضح="" اثر="" دکھایا="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="7.845," p="0.0001" ;="" ڈنیٹ="" کا="" ٹیسٹ،="" اعلی="" خوراک="" والے="" گروپ="" کے="" لیے="" p=""><0.01، کم="" خوراک="" والے="" گروپ="" کے="" لیے="" بالترتیب="" p=""><0.001]۔ ضمنی="" شکل="" s4="" oft="" میں="" سرگرمی="" ٹریک="" کا="" نقشہ="" دکھاتا="">

شکل 1D CUS چوہوں میں NSFT میں کھانے میں تاخیر پر CTE کے اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔ اٹھائیس دن کے تناؤ کے طریقہ کار کی وجہ سے CUS ماڈل گروپ میں غیر تناؤ والے چوہوں کے مقابلے میں کھانا شروع کرنے میں تاخیر میں نمایاں اضافہ ہوا [ایک طرفہ ANOVA, F(4,33)=3.434, p { {8}}۔{10}19; ڈنیٹ کا ٹیسٹ، پی <0.05]، اس="" بات="" کی="" نشاندہی="" کرتا="" ہے="" کہ="" cus="" ماڈل="" کامیابی="" کے="" ساتھ="" تیار="" کیا="" گیا="" تھا۔="" زیادہ="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" کی="" طویل="" مدتی="" زبانی="" انتظامیہ="" نے="" cus="" گروپ="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ،="" t="2.759،" p=""><0.05) کے="" مقابلے="" میں="" کھانا="" شروع="" کرنے="" میں="" تاخیر="" پر="" واضح="" اثرات="" ظاہر="" کیے،="" جبکہ="" cte="" کی="" کم="" خوراک="" ظاہر="" ہوئی۔="" کوئی="" اثر="">

CTE نے CUS چوہوں میں نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفک عوامل کی سطح کو بحال کیا

CUS چوہوں کے ہپپوکیمپس میں {{{{10}}}} HT اور NE کی سطح پر CTE کے اثرات کو اعداد و شمار 2A,B میں دکھایا گیا ہے۔ چار ہفتوں کے تناؤ کے طریقہ کار سے 5-HT [ایک طرفہ ANOVA, F(4,34)=17.13, p=0 میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔{29}}001; Dunnett's test, p <0.001] اور="" ne="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="6.376,p=0.0006;" dunnett's="" test,="" p=""><0.001] cus="" چوہوں="" کے="" ہپپوکیمپس="" میں="" ارتکاز="" کنٹرول="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" اور="" antidepressant="" flx="" نے="" ہپپوکیمپس="" میں="" ht="" کی="" سطح="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" بحال="" کیا="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,34)="" 5-="" {25}}.13،="" صفحہ="0.0001;" ڈنیٹ="" کا="" ٹیسٹ،="" پی=""><0.001]۔ زیادہ="" خوراک="" والے="" گروپ="" میں="" cte="" کی="" زبانی="" انتظامیہ="" کے="" بعد،="" 5-ht="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" دیکھا="" گیا="" [ایک="">

ANOVA, F(4,34)=17.13, p=0۔{6}}001; Dunnett's test, p < 0.001]="" جب="" کہ="" ne="" کی="" ارتکاز="" کو="" تبدیل="" نہیں="" کیا="" گیا="" تھا۔="" اسی="" طرح،="" غیر="" تناؤ="" والے="" چوہوں="" کے="" مقابلے="" cus="" ماڈل="" گروپ="" میں="" bdnf="" اظہار="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کیا="" گیا="" تھا="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ،="" t="4.171،" p=""><0.01) (شکل="" 2c)۔="" سی="" ٹی="" ای="" کی="" دونوں="" طویل="" مدتی="" زبانی="" انتظامیہ="" زیادہ="" خوراک="" کے="" ساتھ="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ،="" ٹی="2.548،" p=""><0.05) اور="" flx="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی-ٹیسٹ،="" t="2.263،" p=""><0.05) )="" cus="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" bdnf="" اظہار="" میں="" اضافہ="" ہوا۔="" کم="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" نے="" bdnf="" اظہار="" پر="" کوئی="" خاص="" اثر="" نہیں="">

CUS چوہوں کی بڑی آنت میں {{0}}HT کی سطح ہپپوکیمپس سے مختلف تھی، اور 4-ہفتے کے تناؤ کے طریقہ کار کا بڑی آنت پر کوئی اثر نہیں ہوا 5-HT (شکل 2D )۔ اس کے برعکس، CUS ماڈل گروپ (طالب علم کا ٹی-ٹیسٹ، t=2.173، p <0.05) کے="" مقابلے="" میں="" بڑی="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" کی="" زبانی="" انتظامیہ="" نے="" بڑی="" آنت="" میں="" 5-ht="" کی="" سطح="" کو="" متحرک="" کیا۔="" کم="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" نے="" بڑی="" آنت="" 5-ht="" کی="" سطح="" پر="" کوئی="" اثر="" نہیں="">

CTE نے CUS چوہوں کی گٹ مائکروبیل ساخت کو منظم کیا۔

CUS چوہوں کے گٹ مائکروبیل کمپوزیشن پر CTE کے اثر کا اندازہ 16S rRNA جین کی ترتیب پر مبنی طریقہ سے کیا گیا۔ یہ پایا گیا کہ CTE کی زبانی انتظامیہ کے 28 دنوں نے CUS چوہوں کے گٹ مائکروبیل ساخت کو تبدیل کر دیا اور مختلف بیماریوں کو متاثر کیا۔

چوہوں کے گروپوں میں مائکروبیل ٹیکنومک لیول (کلاس لیول 1، آرڈر لیول 1، فیملی لیول 1، جینس لیول 8، اور پرجاتیوں کی سطح 2)۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ گٹ مائکروبیل کمیونٹی CTE کے اینٹی ڈپریسنٹ اثرات میں کردار ادا کر سکتی ہے۔ مختلف ٹیکونومک سطحوں پر نمایاں طور پر تبدیل شدہ گٹ مائکروبیل ٹیکسا کی تفصیلی معلومات ٹیبل 2 میں دکھائی گئی ہیں۔

کوالٹی کنٹرول، ڈینوائزنگ، اور chimera ہٹانے کے عمل کے بعد، MiSeq کی ترتیب سے مجموعی طور پر 2,132,980 خام پڑھے گئے۔ اس کے بعد، ریڈز کو OTUs میں کلسٹر کیا گیا، جنہیں فیلم سے پرجاتی سطح تک ٹیکسا کو تفویض کیا گیا تھا۔ چوہوں کے پانچ گروپوں میں بیکٹیریل کمیونٹی کے نمونوں کی مماثلت کو تلاش کرنے کے لیے بیٹا تنوع کے تجزیہ کا مطالعہ کیا گیا۔ مطالعہ کے پانچ چوہا گروپوں سے گٹ مائکرو بائیوٹا کے وزنی UniFrac فاصلوں پر مبنی PCoA کو شکل 3A میں دکھایا گیا ہے۔ پی سی او اے کے بیٹا تنوع کے تجزیے نے مائکروبیل کمیونٹی کی کنٹرول گروپ اور سی یو ایس ماڈل گروپ سے واضح علیحدگی ظاہر کی، جبکہ سی یو ایس گروپ کے مقابلے میں زیادہ خوراک والے گروپ کے ساتھ سی ٹی ای کا رجحان کنٹرول گروپ کے قریب تھا۔

Metastatic analysis was used to investigate the differences in gut microbial taxonomic composition among different groups. At the phylum level, the most dominant microbial taxa in the five rat groups were Firmicutes and Bacteroidetes (Figure 3B). Lactobacillus, Ruminococcus, Blautia, Bacteroides, and Prevotella were the most highly abundant microbial taxa at the genus level (Figure 3C). The two dominant phyla, Firmicutes and Bacteroidetes, accounted for a combined relative abundance of >90 فیصد جیسا کہ ضمنی اعداد و شمار S5A, B میں دکھایا گیا ہے، 4 ہفتوں کے تناؤ کے طریقہ کار نے Firmicutes کی بڑھتی ہوئی سطح کی طرف غیر اہم رجحان اور CUS ماڈل گروپ میں Bacteroidetes میں کنٹرول گروپ کے مقابلے میں غیر اہم کمی کا باعث بنا۔ زیادہ خوراک اور کم خوراک کے ساتھ CTE کی روزانہ انتظامیہ کے بعد، Firmicutes اور Bacteroidetes کی نسبتا کثرت کنٹرول گروپ کی اسی سطح پر واپس آگئی، حالانکہ کوئی شماریاتی اہمیت نہیں تھی۔ اور اگرچہ چوہوں کے گروپوں کے درمیان Firmicutes/Bacteroidetes کے تناسب کے لیے اسی طرح کی تبدیلیاں دیکھی گئیں، کوئی شماریاتی فرق نہیں دکھایا گیا (ضمنی اعداد و شمار S5C)۔ CUS ماڈل گروپ میں غیر دباؤ والے چوہوں کے مقابلے میں فائیلا سیانوبیکٹیریا کی سطح میں کمی کی طرف ایک غیر اہم رجحان پایا گیا۔ جبکہ اعلی خوراک کے ساتھ CTE کی انتظامیہ کے نتیجے میں CUS گروپ (ضمنی اعداد و شمار S5D) کے مقابلے میں Cyanobacteria کی نسبتا کثرت میں نمایاں اضافہ ہوا۔

جینس کی سطح پر، Bacteroides اور Ruminococcus سب سے زیادہ پائے جانے والے مائکروبیل ٹیکس میں سے دو تھے جو چوہوں کے پانچوں گروپوں میں تقریباً 30 فیصد نسبتاً زیادہ تھے۔ چار ہفتوں کے تناؤ کے طریقہ کار کی وجہ سے بیکٹیرائڈز کی نسبتا کثرت میں نمایاں کمی اور CUS ماڈل گروپ میں رومینوکوکس میں نمایاں اضافہ ہوا جیسا کہ کنٹرول غیر تناؤ والے چوہوں (اعداد و شمار 4A، B) کے مقابلے میں۔ CTE کی طویل مدتی انتظامیہ کے نتیجے میں CUS چوہوں کے مقابلے میں Bacteroides کی کثرت کے ساتھ ساتھ Ruminococcus میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ مزید برآں، پیرا بیکٹیرائڈز کی چھ نسلیں، بٹیریسیموناس، ڈیینوکوکس، ویسیلا، ٹرائیکوکوکس، اور بریچی بیکٹیریم نے CUS ماڈل گروپ اور کنٹرول گروپ (اعداد و شمار 4C-H) کے درمیان اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم فرق ظاہر کیا۔ CTE کے 28 دن کے علاج کے بعد، مذکورہ بالا چھ نسلوں کی نسبتا کثرت کو بالترتیب کنٹرول گروپ کی طرح کی سطح پر تبدیل کر دیا گیا۔

کلاس لیول (Deinococci)، آرڈر لیول (Deinococcales)، فیملی لیول (Deinococcaceae)، اور جینس لیول (Deinococcus) سمیت مختلف ٹیکونومک لیولز میں ڈیینوکوکس کی کم کثرت CUS چوہا گروپ میں پائی گئی، جب کہ کنٹرول میں اس کا پتہ نہیں چل سکا۔ گروپ اور انتظامیہ گروپس (اعداد و شمار 5A-D)۔

پرجاتیوں کی سطح پر، کنٹرول گروپ کے مقابلے CUS گروپ میں Weissella beninensis بہت کم تھا، اور CTE کی اعلی خوراک (شکل 5E) کی انتظامیہ کے بعد نسبتا کثرت میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا۔ اس کے برعکس، CTE انتظامیہ نے CUS چوہوں (شکل 5F) میں مشاہدہ کردہ Brachybacterium conglomerate کی نسبتا کثرت میں نمایاں اضافہ کو الٹ دیا۔

CUS چوہوں میں CTE ماڈیولڈ SCFAs

چوہوں کے فیکل کے نمونوں میں SCFAs کی ارتکاز (بشمول ایسیٹیٹ، پروپیونیٹ، بوٹیریٹ، آئسوبیوٹیریٹ، والیرک ایسڈ، آئسووالریک ایسڈ، اور ہیکسانوک ایسڈ) کا تجزیہ جی سی نے کیا اور تصویر 6 میں دکھایا گیا ہے۔ ایسیٹیٹ کی سطحیں [ایک طرفہ ANOVA، F( 4,32)=2.721، ص=0۔{8}}467; ڈنیٹ کا ٹیسٹ، p < 0۔{22}}5]="" اور="" ہیکسانوک="" ایسڈ="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,30)="3.028," p="" {{15="" }}.0328;="" کنٹرول="" گروپ="" کے="" مقابلے="" cus="" ماڈل="" گروپ="" کے="" چوہوں="" میں="" dunnett="" کے="" ٹیسٹ،="" p=""><0.05] میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا۔="" زیادہ="" خوراک="" کے="" ساتھ="" cte="" کی="" طویل="" مدتی="" انتظامیہ="" کے="" بعد،="" ایسیٹیٹ="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی-ٹیسٹ،="" t="2.182،" p=""><0.05) اور="" ہیکسانوک="" ایسڈ="" [ایک="" طرفہ="" anova,="" f(4,30)="3" .028،="" ص="0.0328;" dunnett's="" test,="" p=""><0.05] cus="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" ارتکاز="" میں="" بنیادی="" طور="" پر="" کمی="" واقع="" ہوئی="" تھی،="" جس="" سے="" یہ="" ظاہر="" ہوتا="" ہے="" کہ="" cte="" اپنی="" اینٹی="" ڈپریسنٹ="" سرگرمی="" کو="" بے="" ترتیب="" نیورو="" ایکٹیو="" میٹابولائٹ="" scfas="" کو="" ماڈیول="" کرنے="" کے="" ذریعے="" استعمال="" کر="" سکتا="" ہے۔="" کم="" خوراک="" والے="" گروپ="" کے="" ساتھ="" cte="" کی="" انتظامیہ="" میں="" کمی="" کا="" رجحان="" ظاہر="" ہوا="" لیکن="" ایسیٹیٹ="" اور="" ہیکسانوک="" ایسڈ="" کی="" تعداد="" پر="" کوئی="" قابل="" ذکر="" اثر="" نہیں="">

گٹ مائیکرو بائیوٹا، ہپپوکیمپس میں نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفینز، 5- بڑی آنت میں ایچ ٹی، اور ایس سی ایف اے کا ارتباطی تجزیہ

جینس کی سطح میں تبدیل شدہ گٹ مائکرو بائیوٹا کے فعال تعلقات کو دریافت کرنے کے لیے، ہپپوکیمپس اور بڑی آنت میں بدلے ہوئے نیورو ٹرانسمیٹر اور نیوروٹروفنز، اور SCFAs کی پریشان کن ارتکاز، پیئرسن کے ارتباطی گتانک تیار کیے گئے تھے (Meng et al., 2017)۔ ان کے درمیان ارتباط (r > 0.4 یا r < -0.4,="" p=""><0.05) شکل="" 7="" میں="" دکھایا="" گیا="" ہے۔="" گتانکوں="" نے="" جینس="" کی="" سطح="" میں="" تبدیل="" شدہ="" گٹ="" مائکروبیوٹا="" مرکب="" کے="" درمیان="" مضبوط="" ارتباط="" کی="" نشاندہی="" کی،="" حراستی="" سات="" قسم="" کے="" scfas،="" اور="" ڈپریشن="" سے="" متعلق="" مونوامین="" نیورو="" ٹرانسمیٹر="" (5-ht="" اور="" ne)۔="" رومینوکوکس="" کی="" کثرت="" نے="" ہپپوکیمپس="" میں="" ایک="" 5-ht="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" ایک="" اہم="" منفی="" تعلق="" ظاہر="" کیا،="" جس="" کا="" مطلب="" ہے="" کہ="" cus="" طریقہ="" کار="" رومینوکوکس="" کی="" نسبتہ="" کثرت="" میں="" اضافے="" اور="" 5-ht="" ارتکاز="" میں="" کمی="" کا="" باعث="" بنتا="" ہے۔="" cte="" کے="" ساتھ="" علاج="" کے="" بعد،="" ruminococcus="" کی="" نسبتا="" کثرت="" کو="" کنٹرول="" گروپ="" کی="" سطح="" تک="" کم="" کر="" دیا="" گیا،="" اور="" 5-ht="" کی="" سطح="" میں="" بہتری="" پائی="" گئی۔="" مزید،="" بیکٹیرائڈز="" کی="" نسبتا="" کثرت="" کو="" ہپپوکیمپس="" میں="" ایک="" 5-ht="" سطح="" کے="" ساتھ="" مثبت="" طور="" پر="" منسلک="" کیا="" گیا="" تھا،="" اور="" منفی="" طور="" پر="" بائٹریٹ،="" آئسوبیوٹیریٹ،="" ویلیرک="" ایسڈ،="" آئسووالریک="" ایسڈ،="" اور="" ہیکسانوک="" ایسڈ="" کے="" ارتکاز="" سے="" منسلک="" تھا۔="" پیرا="" بیکٹیرائڈز="" کی="" کثرت="" نے="" ہپپوکیمپس="" اور="" پروپیونیٹ="" ارتکاز="" میں="" 5-ht="" کی="" سطح="" کے="" ساتھ="" ایک="" اہم="" مثبت="" ارتباط="" ظاہر="" کیا،="" جبکہ="" اس="" نے="" isobutyrate="" اور="" isovaleric="" acid="" کی="" تعداد="" کے="" ساتھ="" منفی="" تعلق="" ظاہر="" کیا۔="" ہپپوکیمپس="" میں="" butyricimonas="" اور="" ne="" سطح="" کی="" نسبتا="" کثرت="" کے="" درمیان="" ایک="" نمایاں="" طور="" پر="" مثبت="" تعلق="" بھی="" دیکھا="" گیا،="" اور="" deinococcus="" کی="" نسبتا="" کثرت="" کو="" ایسیٹیٹ="" کے="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" مثبت="" طور="" پر="" منسلک="" کیا="" گیا۔="" اس="" نے="" یہ="" ظاہر="" کیا="" کہ="" cte="" گٹ="" مائکرو="" بائیوٹا="" کی="" ساخت="" کو="" تبدیل="" کرکے،="" ہپپوکیمپس="" نیورو="" ٹرانسمیٹر="" کی="" سطح="" کو="" پریشان="" کرکے،="" اور="" نیورو="" ایکٹیو="" میٹابولائٹس="" scfas="" کو="" بحال="" کرکے="" اپنی="" اینٹی="" ڈپریسنٹ="" سرگرمی="" کو="" بروئے="" کار="" لا="" سکتا="" ہے۔="" ارتباطی="" تجزیہ="" کا="" تفصیلی="" ڈیٹا="" ضمنی="" جدول="" s3="" میں="" دکھایا="" گیا="">