حصہ 1: آسٹیوپوروسس کے متوازی تجرباتی ماڈل کا قیام چوہے میں الزائمر کی بیماری اور سیستانچے ٹبلوسا سے ایچینکوسائڈ اور ایکٹیوسائڈ کے دوہرے اثرات کے ساتھ مل کر
Mar 24, 2022
رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791
یی چن، ینگ کیو لی، جیا یی فانگ، پنگ لی، فی لی
اخذ کرنا
ایتھنوفارماکولوجیکل مناسبت: سیستانچے ٹبلوساایک قیمتی روایتی چینی دوا ہے جو آسٹیوپوروسس کے علاج میں وسیع پیمانے پر استعمال کی گئی ہے اورالزائمر کی بیماری.ایچینکوسائڈاور ایکٹیوسائڈ سیستانچے ٹبلوسا میں اہم فعال اجزاء ہیں جن کی تحقیقی قدر کے ساتھ فارماکولوجیکل سرگرمیاں ہیں۔ بتایا گیا ہے کہ ایچینکوسائڈ اورایکٹیوسائیڈسیکھنے اور یادداشت کی صلاحیت کو بہتر بنا سکتا ہے، اوسٹیوبلاسٹ کے پھیلاؤ اور تفریق کو فروغ دے سکتا ہے۔ مطالعے کا مقصد: ایچینکوسائڈ اور ایکٹیوسائڈ سےسیستانچے ٹبلوسانے اینٹی آسٹیوپوروسس اور الزائمر کے خلاف بیماری کی اہم سرگرمیوں کو ظاہر کیا ہے، جبکہ ان اثرات کا چوہے کے ماڈل میں ساتھ ساتھ مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ اس مطالعے کا مقصد آسٹیوپوروسس کے ماڈل کو قائم کرنا اور اس کی تصدیق کرنا تھا۔الزائمر کی بیماریچوہوں میں اور اس کے دوہرے اثرات کی تحقیقات کے لئےاچینکوسائیڈاور اس متوازی ماڈل پر ایکٹیوسائڈ۔
مواد اور طریقے:ایک ہی وقت میں ڈی گالاکٹوس اور السیایل 3 (ڈی) کے ساتھ شیم سرجری، ڈی گالاکٹوز اور السیایل 3 (او وی ایکس+ڈی) کے ساتھ اوویریکٹمی کے تین ماڈل گروپ سیٹ کیے گئے تھے۔ منشیات کے علاج کے گروپوں میں چوہوں کو مختلف کیا گیا تھا۔ منشیات کے علاج کے گروپوں کے چوہوں میں السی ایل 3 کے ڈی گالاکٹوس اور انٹرا گیسٹرک انتظامیہ کا انٹراپیریٹونیئل انجکشن لگاتے ہوئے چوہوں کو اوریلی طور پر دیا گیااچینکوسائیڈ(90 ملی گرام/کلوگرام/ڈی)،ایکٹیوسائیڈ(90 ملی گرام/کلوگرام/ڈی)، اور ایسٹریڈیول ویلیریٹ (0.6 ملی گرام/کلوگرام/ڈی)، ڈونیپیزیل ایچ سی ایل (0.8 ملی گرام/کلوگرام/ڈی) کی مثبت کنٹرول ادویات۔ 8 ہفتوں کے ڈرگ ٹریٹمنٹ کے بعد 6 دن تک مورس واٹر میز (ایم ڈبلیو ایم) کا ٹیسٹ سب سے پہلے کیا گیا۔ اس کے بعد چوہوں کو خون، یوٹری، فیمورا، ٹبیا اور دماغ کے ٹشوز کی کٹائی کے لئے قربان کیا گیا۔ سیرم کو حیاتیاتی کیمیائی جانچ کے لئے استعمال کیا جاتا تھا۔ یوٹری کو ہسٹومورفومیٹری کے لئے استعمال کیا جاتا تھا۔ دائیں فیمورا مائیکرو کے لیے استعمال کیا جاتا تھا-سی ٹیاور بالترتیب ہسٹومورفومیٹری۔ بائیو مکینیکل ٹیسٹ کے لئے صحیح ٹبیا کا استعمال کیا گیا تھا۔ آئس باکس پر جمع کردہ ہیپوکیمپس کو حیاتیاتی کیمیائی جانچ کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ پرفیوژن کے ذریعہ جمع کردہ دماغ ٤١ ہسٹومورفومیٹری کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔
نتائج:شام گروپ کے مقابلے میں، او وی ایکس+ڈی گروپ تکسیدی نقصان پہنچا کر، ہیپوکیمپس میں نیورونز کو خراب کرکے اور ایسیٹائلکولین کی ہائیڈرولیسس اور سنتھیسس کو متاثر کرکے سیکھنے اور یادداشت کی صلاحیت کو نمایاں طور پر کم کرسکتا ہے۔ دریں اثنا او وی ایکس+ڈی گروپ میں بی اے ایل پی اور ٹریپ کی سرگرمیوں میں نمایاں اضافہ ہوا (پی<0.001) as="" compared="" to="" the="" sham="" group.="" in="" addition,="" compared="" with="" the="" sham="" group,="" the="" mean="" bone="" mineral="" density="" obviously="" decreased=""><0.05), the="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" were="" also="" destroyed="" significantly="" in="" the="" ovx+d="" group.="" furthermore,="" the="" maximum="" load="" and="" maximum="" stress="" significantly="" reduced=""><0.01) and="" the="" energy="" 50="" absorption="" also="" decreased="" greatly="" as="" compared="" to="" the="" sham="" group.="" after="" being="" administrated="" with="">اچینکوسائیڈاورایکٹیوسائیڈ، آسٹیوپوروسس کی مخصوص پیتھالوجیکل خصوصیات اورالزائمر کی بیماریکو بہتر کیا گیا تھا۔
نتیجہ:آسٹیوپوروسس کا ماڈل مل کرالزائمر کی بیماریچوہوں میں قابل عمل اور کامیابی سے قائم کیا گیا تھا.ایچینکوسائڈاور ایکٹیوسائیڈ نے بھی اس متوازی ماڈل پر کچھ اہم اثرات ظاہر کیے اور وہ ممکنہ 56 امیدوار ہو سکتے ہیں جن میں سےسیستانچے ٹبلوسامزید مطالعے کے لئے دوہرے اثرات کے ساتھ.
کلیدی الفاظ:آسٹیوپوروسس؛ الزائمر کی بیماری؛ دوہرے اثرات؛ اچینکوسائڈ؛ ایکٹیوسائیڈ؛ سیستانچے ٹبلوسا
Cاستنچے کھوئی ہوئی سلطنت کی جڑی بوٹیاں الزائمر کی بیماری کو بہتر بناتی ہیں
1۔ تعارف
آسٹیوپوروسس ہڈیوں کی ایک کمزور بیماری ہے جس کی خصوصیت ہڈیوں کی کمیت کا ترقی پذیر نقصان اور مائیکرو آرکیٹیکچر کی تباہی ہے، جو کمزوری فریکچر کے خطرے کو بڑھا سکتی ہے (راچنر ایٹ ال،2011)۔الزائمر کی بیماری(عیسوی) بوڑھوں میں ایک عام نیوروڈیجنریٹیو بیماری ہے جس کی خصوصیت مسلسل ذہنی زوال، ادراک کی کمزوری اور طبی (ریٹز 76 ایٹ ال، 2011) میں آزاد انہ زندگی کی صلاحیت کا نقصان ہے۔ β ایمیلوئیڈ ڈیپوزیشن، ٹاو ہائپر فاسفورسلیشن کی وجہ سے نیوروفیبریلیری الجھنوں اور دماغ میں نیورونل انحطاط کی وجہ سے سینائل پلاک کی تشکیل اے ڈی کی مخصوص پیتھالوجیکل خصوصیات ہیں (سیرانو پوزو ایٹ ال،2011)۔ سطحی طور پر، او پی اور اے ڈی مختلف پیتھالوجی اور کلینیکل خصوصیات کے ساتھ مکمل طور پر آزاد بیماریاں ہیں۔ تاہم، او پی اور اے ڈی اکثر کلینیکل پریکٹس میں مشترکہ طور پر ہوتے ہیں (ژانگ ایٹ ال، 2001؛ لوئی ایٹ ال، 2003؛ لکہوس ایٹ ال، 2009). عمر کے ساتھ ساتھ دونوں بیماریوں کے پھیلاؤ میں اضافہ ہوا، خاص طور پر رجعت کے بعد کی خواتین میں (لی ایٹ ال، 2017؛ اسٹرن، 2012). زیادہ سے زیادہ شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ اے ڈی کی تشخیص ہونے والے افراد میں او پی (ژاؤ ایٹ ال، 2014) کا خطرہ بڑھ جاتا ہے۔
آسٹیوپوروسس اور اس کے درمیان تعلقات کا مطالعہ اور وضاحت کرنا ضروری ہےالزائمر کی بیماریان ویٹرو اور ان ویوو۔ ویوو میں مطالعے کرنے سے پہلے، آسٹیوپوروسس یا الزائمر کی بیماری کے قابل اطلاق جانوروں کے ماڈلز کا انتخاب کرنا ضروری ہے۔ آسٹیوپوروسس ماڈل کئی اقسام کے طریقوں سے قائم کیا جاسکتا ہے جیسے ریٹینوئک ایسڈ کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ، اوویریکٹمی سرجری، اور گلوکوکورٹیکوئڈز کا انٹرا مسکولر انجکشن (وی ایٹ ال، 2007؛ کوموری، 2015). خاص طور پر، چوہوں میں اوویریکٹمی کی وجہ سے رجعت کے بعد آسٹیوپوروسس ماڈل کلاسیکی تھا اورزیادہ تر مطالعات میں وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے (میاو ایٹ ال، 2012؛ لیو ایٹ ال،2017).چھوٹ چھوٹ الزائمر کی بیماری الزائمر کی بیماری کی اہم قسم ہے۔ جانورچھوٹ چھوٹ کے نمونےالزائمر کی بیماریمختلف طریقوں سے متاثر کیا جاسکتا ہے جیسےڈی گالاکٹوس یاβ-ایمیلوئیڈ، السیایل کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ3,وغیرہ(بگھیری ایٹ ال، 2011؛ گاؤ ایٹ ال، 2015؛ جسٹن تھنموزی ایٹ ال،2017). اس کے علاوہ،الزائمر کی بیماری کا امتزاج ماڈل طویل مدتی انٹراپیریٹونیئل کی وجہ سے پیدا ہوتا ہےڈی گالاکٹوس کے انجکشن اورویریکٹومی کے ساتھ مل کر بھی بہت مطالعہ کیا گیا ہے (لیوایٹ ال، 2010؛ ژاؤ ایٹ ال، 2012). تاکہ آسٹیوپوروسس کی مناسبت کو ظاہر کیا جاسکے اورالزائمر کی بیماری، آسٹیوپوروسس کا ماڈل ملا کر قائم کرنا ضروری ہےالزائمر کی بیماری کے ساتھ ادویات کے عام طریقہ کار کا مطالعہ کرنے کے لئےآسٹیوپوروسس اورالزائمر کا مرضناپ.
سیستانچے ٹبلوسا(شینک) وائٹ ایک پرجیوی پودا ہے، جو بنیادی طور پر شمال مغربی چین کے صحراؤں میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ خشک رسدار تنےسیستانچے ٹبلوسا(سی ٹی) چینی فارماکوپیا (2015) میں اپنے چینی نام روکانگرونگ کے ساتھ سیسٹائنچس ہربا نامی ایک مشہور ٹانک دوا کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ اسے "صحراؤں کا جن سینگ" کے طور پر اعزاز دیا گیا ہے اور روایتی چینی دوا (جیانگ اور ٹو، 2009) میں کمر اور گھٹنے کے درد، خواتین کی نسبندی اور قبض کے علاج کے لئے وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔ سی ٹی کے اہم فعال اجزاء فینیلیتھانوئیڈ گلیکوسائڈز (پی ایچ جیز)، ایچینکوسائڈ (ای سی ایچ) اورایکٹیوسائیڈ(اے سی ٹی) پی ایچ جی (موریکاوا ایٹ ال، 2014) میں نمائندہ مرکبات ہیں۔ خاص طور پر، ای سی ایچ اور اے سی ٹی کو عام طور پر سی ٹی میں کوالٹی کنٹرول کے لئے مارکر کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے کیونکہ ان کے اعلی مواد اور مختلف فارماکولوجیکل سرگرمیاں جیسے نیورو پروٹیکشن، ہڈیوں کے تحفظ کے اثرات،
اینٹی آکسیڈنٹس، اینٹی ایجنگ، اور سیکھنے اور یادداشت کی صلاحیت کو بہتر بنانا (وانگ ایٹ ال.2012; لی ایٹ ال، 2016). تاہم ای سی ایچ اور اے سی ٹی کے آسٹیوپوروسس پر اثراتملاکرالزائمر کی بیماریابھی تک چوہوں کے ماڈل میں ایک ساتھ مطالعہ نہیں کیا گیا تھا۔اس طرح، اس مطالعے کا مقصد آسٹیوپوروسس کا ایک چوہا ماڈل قائم کرنا تھا۔الزائمر کی بیماری کے ساتھ اور اس کے اثرات کی تلاشاچینکوسائیڈاور اس پر عمل کرناساتھ ساتھ ماڈل، تاکہ مزید مطالعہ کے لئے تجرباتی ثبوت فراہم کیا جاسکےمندرجہ ذیل تحقیق میں ایچینکوسائڈ یا ایکٹیوسائڈ کا سالماتی طریقہ کار۔
سیستانچے فارما خاصکے لئےاشتہار
2۔ مواد اور طریقے
2.1. جانور
8 ہفتوں کی 8 سالہ مادہ وسٹار چوہے (سرٹیفکیٹ نمبر: ایس سی ایکس کے 2018-0006) جن کا وزن 180~200 گرام ہے، سینو برٹش ایس آئی پی پی آر/بی کے لیب اینیمل لمیٹڈ (شنگھائی، چین) سے حاصل کی گئیں اور ان کی پرورش چائنا فارماسیوٹیکل یونیورسٹی میں ایکسپریمنٹل سینٹر آف فارماسیوٹیکل اینیملز میں ہوئی۔
2.2. کیمیکلز اور ری ایجنٹس
کلوریل ہائیڈریٹ، پینسلین جی سوڈیم، ڈی گالاکٹوس، ایلومینیم کلورائڈ ہیکساہائیڈریٹ، ایسٹریڈیول ویلیریٹ، ڈونیپیزیل ایچ سی ایل الدن انڈسٹریل کارپوریشن (شنگھائی، چین) سے خریدے گئے تھے۔ایچینکوسائڈ(ایچ پی ایل سی 94 فیصد) چینگدو ویسیستانچے بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ (چینگدو، چین) سے حاصل کی گئی۔ایکٹیوسائیڈ(ایچ پی ایل سی 98 فیصد) باؤجی ہربیسٹ بائیو ٹیک کمپنی لمیٹڈ (باؤجی، چین) سے خریدی گئی۔ ہڈیوں کے مخصوص الکلائن فاسفیٹاسے (بی اے ایل پی)، ٹارٹریٹ مزاحم ایسڈ فاسفیٹاسے (ٹریپ)، سپر آکسائیڈ ڈسموٹاسے (ایس او ڈی)، مالونالڈیہائیڈ (ایم ڈی اے)، ایسیٹائلکولینسٹیرس (اے سی ایچ ای) اور کولین ایسیٹائلٹرانسفرسے (چاے ٹی) انزائم سے منسلک ایمیونوسوربینٹ ایسسے (ایل یسا) کٹس شنگھائی انزائم سے منسلک بائیو ٹیکنالوجی کمپنی، سے خریدی گئیں۔ لمیٹڈ (شنگھائی، چین) . آفاقی ٹشو فکسٹیو سے حاصل کیا گیا تھاچینگدو ویسیستانچے بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ (چینگدو، چین)۔
اچینکوسائیڈ
2.3. جانوروں کے نمونے اور علاج
جانوروں کے تمام تجربات کو چائنا فارماسیوٹیکل یونیورسٹی کی اینیمل ایتھکس کمیٹی نے مجاز اور نگرانی کی۔ چوہوں کو درجہ حرارت پر قابو پانے والے کمرے (22±2°سینٹی سینٹی گرام) میں 12 گھنٹہ ہلکے/تاریک چکر کے ساتھ برقرار رکھا گیا تھا اور معیاری پیلٹ والے فورج اور نل کے پانی سے کھلایا گیا تھا۔
ایک ہفتے کی موافقت کے بعد، آسٹیوپوروسس ماڈل کو اوریورکٹمی سرجری (فرانسیسی ایٹ ال، 2008) کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ آپریشن ختم ہونے کے بعد، پینسلین جی سوڈیم کو انفیکشن سے بچنے کے لئے ایک بار کے لئے زخم کے سیون پر چھڑکا گیا تھا۔ اس کے بعد چوہوں کو عام طور پر تین ہفتوں تک کھلایا جاتا تھا۔ حوالہ کے مطابق (ہوا ایٹ ال، 2007؛ الاودی ایٹ ال، 2017)، کا ماڈلالزائمر کی بیماریڈی گالاکٹوس کے طویل مدتی انٹراپیریٹونیل انجکشن کے ذریعے متاثر کیا جاسکتا ہے جو السیایل 3 کی اوویریکٹومی یا طویل مدتی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ کے ساتھ مل کر کیا جاسکتا ہے۔ الزائمر کی بیماری کے ساتھ مل کر آسٹیوپوروسس کے ماڈل کی فزیبلٹی کا مطالعہ کرنے کے لئے، اوویریکٹمی (او وی ایکس گروپ) کے تین ماڈل گروپ، 150 ملی گرام/کلوگرام/ڈی ڈی گالاکٹوز کے انٹراپیریٹونیل انجکشن کے ساتھ شیم سرجری اور 30 ملی گرام/کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ اس مطالعے میں 150 ملی گرام/کلوگرام/ڈی گالاکٹوز کے انٹراپیریٹونیل انجکشن کے ساتھ اوریورکٹومی اور 30 ملی گرام/کلوگرام/ڈی السی ایل 3 (او وی ایکس+ڈی گروپ) کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ قائم کی گئی تھی۔
اس لیے چوہوں کو 3 ہفتوں کے بعد بے ترتیب طور پر آٹھ گروہوں (ہر گروہ کے لیے این=9) میں تقسیم کیا گیا اور 8 ہفتوں تک دواؤں سے ان کا بغور علاج کیا گیا: شام گروپ؛ او وی ایکس گروپ؛ ڈی گروپ؛ او وی ایکس+ڈی گروپ؛ ایسٹراڈیول ویلیریٹ ٹریٹمنٹ گروپ (ای وی گروپ، او وی ایکس+ڈی+0.6 ملی گرام/کلوگرام/ڈی ایسٹریڈیول ویلیریٹ)؛ ڈونیپیزیل ایچ سی ایل ٹریٹمنٹ گروپ (ڈی پی زیڈ گروپ، او وی ایکس+ڈی+0.8 ملی گرام/کلوگرام/ڈی ڈونیپیزیل ایچ سی ایل)؛اچینکوسائیڈعلاج گروپ (ای سی ایچ گروپ، او وی ایکس+ڈی+90 ملی گرام/کلوگرام/ڈی ایچینکوسائڈ)؛ایکٹیوسائیڈعلاج گروپ (اے سی ٹی گروپ، او وی ایکس+ڈی+90 ملی گرام/کلوگرام/ڈی ایکٹیوسائڈ)۔ انسانی چوہے کے مساوی خوراک تبدیلی کے اصول اور متعلقہ حوالہ سے خوراک کے مطابق (لی ایٹ ال، 2013؛ گاؤ ایٹ ال، 2014)، اس مطالعے میں منشیات کے علاج کے گروپوں کی خوراک کو اپنایا گیا تھا۔
ہر چوہے کے جسم کے وزن کی پیمائش ہر ہفتے کی جاتی تھی۔ 8 ہفتوں تک جاری رہنے والی ادویات کے ساتھ پورے علاج کے بعد، 6 دن تک مورس واٹر میز (ایم ڈبلیو ایم) ٹیسٹ سب سے پہلے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ہر گروہ کے 6 چوہوں کو سامان کی کٹائی کے لیے قربان کر دیا گیا۔ چوہوں کو 3.0 میٹر فی کلوگرام 10 فیصد کلورل ہائیڈریٹ کے انٹراپیریٹونیئل انجکشن سے بے ہوشی کا شکار کیا گیا اور عورتا پیٹ سے خون اکٹھا کیا گیا۔ خون کو کمرے کے درجہ حرارت پر جمنے کے لئے رکھا گیا تھا اور ١٠ منٹ کے لئے ٣٥٠٠ آر/منٹ پر سنٹرفیوز کیا گیا تھا۔ سیرم کو 1.5 ایم ایل سنٹرفیوز ٹیوب (این ای ایس ٹی بائیو ٹیکنالوجی) میں کاٹا گیا تھا اور بائیو کیمیکل ٹیسٹ کے لئے استعمال ہونے تک -80° سی پر ذخیرہ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد یوٹری، فیمورا، ٹبیا اور دماغی ٹشوز جمع کیے گئے۔ یوٹری کو ہسٹومورفومیٹری کے لئے استعمال کیا جاتا تھا۔ دائیں فیمورا بالترتیب مائیکرو سی ٹی اور ہسٹومورفومیٹری کے لئے استعمال کیا جاتا تھا۔ بائیو مکینیکل ٹیسٹ کے لئے صحیح ٹبیا کا استعمال کیا گیا تھا۔ آئس باکس پر جمع کردہ ہیپوکیمپس کو حیاتیاتی کیمیائی جانچ کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہر گروپ کے دیگر تین چوہوں کو دل سے نمکین اور آفاقی ٹشو فکسٹیو کے ساتھ فیوژ کیا گیا تاکہ ہسٹومورفومیٹری کے لئے دماغ کی کٹائی کی جاسکے۔
2.4. مورس واٹر میز (ایم ڈبلیو ایم) ٹیسٹ
چوہوں کو ٨ ہفتوں کی مداخلت کے بعد ایم ڈبلیو ایم ٹیسٹ میں مقامی حوالہ سیکھنے اور یادداشت کی جانچ کا نشانہ بنایا گیا۔ ایم ڈبلیو ایم ٹیسٹ پہلے رپورٹ کیے گئے طریقوں پر عمل کرتے ہوئے کیا گیا تھا (مورس، 1984؛ گاؤ ایٹ ال، 2016). مختصرا، روزانہ چار آزمائشوں کے ساتھ مسلسل 5 دن، چوہوں کو پول کی دیوار پر واقع مختلف بصری اشاروں کا استعمال کرنے کی تربیت دی گئی تاکہ ایک گول تالاب (قطر 130 سینٹی میٹر، اونچائی 50 سینٹی میٹر) میں ایک پوشیدہ ڈوبا ہوا پلیٹ فارم (قطر 130 سینٹی میٹر، اونچائی 50 سینٹی میٹر) غیر زہریلے کاربن سیاہی والے پانی سے بھرا ہوا تلاش کیا جا سکے۔ تالاب کو خیالی طور پر چار کواڈرنٹس میں تقسیم کیا گیا تھا اور چار اسٹارٹ پوزیشنیں کواڈرنٹس کے چوراہوں پر واقع تھیں۔ پلیٹ فارم ایک کواڈرنٹ کے مرکز میں واقع تھا اور آزمائشوں کے دوران پوزیشن مستقل تھی۔ ہر آزمائش میں چوہوں کو منتخب مقامات پر بے ترتیب رکھا جاتا تھا، جو تالاب کی دیوار کی طرف رخ کرتے تھے۔ ہر آزمائش اس وقت ختم کر دی گئی جب چوہا پلیٹ فارم پر پہنچا یا 60 کی دہائی کے بعد، اور گزرے ہوئے وقت کو فرار کی تاخیر کے طور پر ریکارڈ کیا گیا۔ پلیٹ فارم تک پہنچنے میں ناکام چوہے کو اس کی رہنمائی کی گئی۔ ہر پوشیدہ پلیٹ فارم ٹرائل کے بعد چوہا 10 کی دہائی تک پلیٹ فارم پر رہا۔ روزانہ چار آزمائشوں کے اوسط تاخیری وقت کا حساب تربیتی نتائج کے طور پر لگایا گیا تھا۔ 6 دن تمام چوہوں پر تحقیقاتی ٹرائل کیا گیا جس میں انہوں نے بغیر پلیٹ فارم کے تالاب میں 60 کی دہائی تک تیراکی کی۔ پلیٹ فارم کے مقام پر کراسنگ کے اوقات اور ہدف کواڈرنٹ میں سفر کے وقت کو حتمی نتائج کے طور پر ریکارڈ کیا گیا تھا۔ چوہوں کی نگرانی تالاب کے براہ راست اوپر چھت میں نصب کیمرے کے ذریعے کی گئی اور تمام آزمائشوں کو ریکارڈ کیا گیا اور مورس میز پروگرام کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا جو بیجنگ ژونگشیڈیچوانگ سائنس اینڈ ٹیکنالوجی ڈویلپمنٹ کمپنی، لمیٹڈ (بیجنگ، چین) کی طرف سے فراہم کیا گیا تھا۔
2.5. حیاتیاتی کیمیائی ٹیسٹ از ایلیسا
ایلیسا کٹس کی مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق ہڈیوں کے مخصوص الکلائن فاسفیٹاسے (بی اے ایل پی) سرگرمی، ٹارٹریٹ مزاحم ایسڈ فاسفیٹس (ٹریپ) سرگرمی، سپر آکسائیڈ ڈسموٹاسے (ایس او ڈی) سرگرمی اور سیرم میں مالونڈیاڈیالڈیہائیڈ (ایم ڈی اے) مواد کی جانچ بائیو ٹیک سنرجی 2 ملٹی موڈ مائیکرو پلیٹ ریڈر (بائیو ٹیک، امریکہ) نے کی۔ ہر گروپ کے ہیپوکیمپس ٹشوز کو پی بی ایس (0.01 ایم، پی ایچ 7.4) سے دھویا گیا تاکہ ٹشو کی سطح پر باقی رہنے والے خون یا آلائشوں کو ہٹایا جا سکے۔ ایک طرف ہیپوکیمپس ٹشوز کو تولا گیا اور پھر ممکنہ حد تک چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹ دیا گیا۔ ہیپوکیمپس ٹشوز کو 1: 9 (ٹشو وزن: پی بی ایس حجم) کے تناسب کے مطابق ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ ہم جنس کو 4° سی، 3000 آر/منٹ پر 15 منٹ کے لئے سنٹرفیوز کیا گیا تھا۔ بی سی اے طریقہ کار کے ذریعہ پروٹین کے ارتکاز کی پیمائش کے لئے سپرناٹنٹ کو اکٹھا کیا گیا تھا اور پتلا کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ہیپوکیمپس ٹشو میں ایسیٹائلکولینسٹریز (اے سی ایچ ای) سرگرمی، کولین ایسیٹائلٹرانسفریز (سی اے ٹی) سرگرمی، سپر آکسائیڈ ڈسموٹاسے (ایس او ڈی) سرگرمی اور ہیپوکیمپس ٹشو میں مالونڈیاڈیالڈیہائیڈ (ایم ڈی اے) مواد کی جانچ کی گئی۔
2.6. ہیپوکیمپس ہسٹومورفومیٹری
دماغ کے ٹشوز (این=3/گروپ) کو آفاقی ٹشو فکسٹیو میں طے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد دماغ کے ٹشو کے نمونوں کو دھویا گیا، گریڈینٹ ایتھنول سے پانی کی کمی کی گئی، پیرافن موم کے ساتھ شامل کیا گیا، اور 5 μm کے کورونل حصوں میں کاٹ دیا گیا۔ ان حصوں پر ہیماٹوکسیلین اور ایوسن (ایچ ای) کے داغ تھے۔ اس کے بعد دماغ کے ٹشوز کے کورونل حصوں کی تصویر ایک الٹی فلوریسینس مائیکرواسکوپ (نکون، جاپان) نے لی۔ ہیپوکیمپس میں سی اے 1، سی اے 2، سی اے 3 اور ڈی جی کی شکلی تبدیلیوں کا خاص طور پر مشاہدہ کیا گیا۔
2.7۔ یوٹرن ہسٹومورفومیٹری اور مورفومیٹری
منتخب یوٹری (این=3/گروپ) کو آفاقی ٹشو فکسٹیو میں طے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد رحم کے ٹشو کے نمونوں کو دھویا گیا، گریڈینٹ ایتھنول کے ساتھ پانی کی کمی کی گئی، پیرافن موم کے ساتھ شامل کیا گیا، اور 5 μm کے ٹرانسورس حصوں میں کاٹ دیا گیا۔ ان حصوں پر ہیماٹوکسیلین اور ایوسن (ایچ ای) کے داغ تھے۔ یوٹری کے ٹرانسورس حصوں کا مشاہدہ کیا گیا اور ان کی تصویر کھینچی گئی۔ منظر کے پانچ شعبوں کو بے ترتیب طور پر منتخب کیا گیا تھا، یوٹرن ٹرانسورس سیکشن اور یوٹرن مکوسل ایپیتھیلیئل موٹائی کا قطر پھر امیج پرو پلس 6.0 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ناپا گیا تھا۔ لیمینا پروپریا میں یوٹرن غدود کی تعداد بھی شمار کی گئی۔
2.8. مائیکرو سی ٹی
منتخب دائیں فیمورا (این=3/گروپ) کو اس پوزیشن میں اسکین کیا گیا جس میں شے کا فاصلہ 121 ملی میٹر کے ماخذ تک تھا اور اسکائی سکین 1176 مائیکرو ایکس رے کمپیوٹیڈ ٹوموگرافی (مائیکرو- کا استعمال کرتے ہوئے کیمرے کا فاصلہ 171 ملی میٹر کے ماخذ تک تھا۔سی ٹی) سکینر (بروکر، جرمنی) . ڈسٹل گروتھ پلیٹ کو حوالہ سطح کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔ حوالہ سطح سے 1 ملی میٹر نیچے کے فاصلے کے ساتھ، ایک 1.8 ملی میٹر موٹا علاقہ دلچسپی کے حجم کے طور پر منتخب کیا گیا تھا (وی او آئی, 100 پرتیں). اس کے نتیجے میں گرے اسکیل تصاویر کا پکسل سائز ہڈیوں کی تعمیر نو سے 17.76 μm (65 کے وی، 385 μA) تھا۔ کورٹیکل ہڈی سے ٹریبیکولا منتخب کرنے کے لئے ایک نیم خودکار کنٹورنگ طریقہ استعمال کیا گیا تھا۔ ہڈیوں کے حجم (بی وی/ ٹی وی)، ہڈیوں کی سطح کی کثافت (بی ایس/ ٹی وی)، ٹریبیکولر علیحدگی (ٹی بی ایس پی)، ٹریبیکولر نمبر (ٹی بی این)، ٹریبیکولر موٹائی (ٹی بی ٹی)، ڈھانچہ ماڈل انڈیکس (ایس ایم آئی)، ٹریبیکلر پیٹرن فیکٹر (ٹی بی پی ڈی) اور اسی وی او آئی کے لئے ہڈیوں کی معدنی کثافت (یعنی بی ایم ڈی) کا جائزہ لینے کے لئے براہ راست تھری ڈی پیمائش کے طریقے استعمال کیے گئے۔سی ٹیتجزیہ کار پروگرام (بروکر، جرمنی) . ایک موافق رینڈرنگ الگورتھم کا استعمال کرتے ہوئے وی او آئی کی تھری ڈی تصور سی ٹی ول سافٹ ویئر (بروکر، جرمنی) کے ساتھ کیا گیا تھا۔
سیستانچے پودے کا عرق
2.9. ہڈی ہسٹومورفومیٹری
منتخب دائیں فیمورا (این=3/گروپ) کو یونیورسل ٹشو فکسٹیو میں طے کیا گیا تھا اور پھر 3 ہفتوں کے لئے 10 فیصد ای ڈی ٹی اے-2این اے کے حل میں ڈیکلسیفائی کیا گیا تھا۔ ڈیکلسیفائیڈ نمونوں کو دھویا گیا، گریڈینٹ ایتھنول سے پانی کی کمی کی گئی، پیرافین موم کے ساتھ شامل کیا گیا، اور 5 μm کے لمبے حصوں میں کاٹ دیا گیا۔ ان حصوں پر ہیماٹوکسیلین اور ایوسن (ایچ ای) کے داغ تھے۔ فیمورا کے لمبے حصوں کی تصویر کھینچی گئی تھی۔ ہر گروپ کی ہڈیوں کے ٹشو کی ساخت، خاص طور پر ٹریبیکولر ہڈیوں کی ساخت کا مشاہدہ کیا گیا۔
2.10. بائیو مکینیکل ٹیسٹ
ایک یونیورسل ٹیسٹنگ مشین (شیماڈزو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے تین نکاتی جھکنے کے ٹیسٹ کے لئے بے ترتیب طور پر منتخب کردہ دائیں ٹبیا (این=4/گروپ) کا جائزہ لیا گیا تھا۔ ان نمونوں کے قطر کی پیمائش ورنیئر کیلیپر نے 2.16-2.38 ملی میٹر (ڈی) کی حد میں کی۔ اس کے بعد نمونہ دو معاون کراس باروں پر رکھا گیا جس میں دونوں ریلوں کے درمیان 25 ملی میٹر (ایل) کا فاصلہ تھا اور نمونے کا جسمانی خم اوپر کی طرف تھا۔ بوجھ کی لوڈنگ راڈ نمونے کے مرکز میں واقع تھی اور نمونہ ٹوٹنے تک 1.5 ملی میٹر/منٹ کی مستقل شرح سے گرا دیا گیا۔ فورس (ایف) اور ڈس پلیسمنٹ ڈیٹا خود بخود ایک کمپیوٹر میں ریکارڈ کیا گیا تھا جسے ٹیسٹنگ مشین سے انٹرفیس کیا گیا تھا اور لوڈ ڈیفارمیشن منحنی کو بیک وقت پلاٹ کیا گیا تھا۔ زیادہ سے زیادہ لوڈ (این) اور توانائی جذب (ایم جے) کی اقدار کو ایک ہی وقت میں سافٹ ویئر ٹریپیزیم ایکس کی جانچ کرنے والے مواد کے ذریعہ ریکارڈ کیا گیا تھا۔ زیادہ سے زیادہ تناؤ (ایم پی اے) کی اقدار کا حساب درج ذیل فارمولے کے مطابق لگایا گیا تھا: تناؤ (σ) = جھکنے کا لمحہ (ایم) / سیکشن عنصر (زیڈ) = (8×ایل×ایف) / (π×3)
2.11. شماریاتی تجزیہ
ماڈل گروپوں کے نتائج کا موازنہ شام گروپ سے کیا گیا اور منشیات کے علاج والے گروپوں کے نتائج کا موازنہ او وی ایکس+ڈی گروپ سے کیا گیا۔ ڈیٹا کا تجزیہ ون وے اے نووا کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جس کے بعد گراف پیڈ پرزم 5.0 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے بونفیرونی کا متعدد موازنہ ٹیسٹ کیا گیا۔ اعداد و شمار کا اظہار ایس ڈی ± مطلب کے طور پر کیا گیا تھا اور 0.05 سے کم کی پی اقدار کو اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔
ماورائیاورسستانچے
