رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

براہ کرم حصہ 1 کے لیے یہاں کلک کریں۔

براہ کرم حصہ 3 کے لیے یہاں کلک کریں۔

Cistanche یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

ان نتائج کو دیکھتے ہوئے، ہم نے اگلی بار جانچ کی کہ آیا مقامی سیکھنے پر چوہوں میں ہپپوکیمپل miR-466f-3p اظہار کو اپ گریڈ کیا گیا ہے اوریاداشتتشکیل نے Vivo میں نیورونل مورفولوجی کو بھی متاثر کیا۔ نمایاں طور پر، ہم نے پایا کہ GLN چوہوں کے ہپپوکیمپل نیورون کی ریڑھ کی ہڈی کی اوسط کثافت PLN چوہوں کی نسبت زیادہ تھی، جیسا کہ اہرام کے گولگی کے امپریگنیشن سے ظاہر ہوا ہے۔

شکل 3. ماؤس MWM کارکردگی پر ہپپوکیمپل miR-466f-3p اظہار کی سطح کی تبدیلی کے اثرات

(A) MWM ٹاسک کی تجرباتی ٹائم لائن، اظہار کا تجزیہ، یا lentivirus انجیکشن کے بعد ماؤس دماغ کی الیکٹرو فزیالوجی پیمائش۔

(بی) بائیں پینل: ماؤس ہپپوکیمپس میں ڈی ایس ریڈ کا اظہار۔ ریکومبینینٹ لینٹیو وائرس سے متاثرہ چوہوں سے ہپپوکیمپس کی نمائندہ کم اور زیادہ میگنیفیکیشن IF تصاویر جو صرف dsRed کو بطور کنٹرول (تصاویر کا بایاں کالم) یا miR-466f-3p پلس dsRed (دائیں تصاویر کا کالم)۔ اوپر کی دو تصویروں کے باکس والے حصے بڑے کیے گئے ہیں اور نیچے دکھائے گئے ہیں۔ اسکیل بارز، 100 ملی میٹر۔ نقطے والی لکیریں ڈی جی کی حدود کی نشاندہی کرتی ہیں۔ نیوکلی DAPI کے ساتھ داغے ہوئے تھے۔ جی سی ایل، گرینول سیل پرت؛ ایم ایل، سالماتی پرت۔ دائیں ہسٹوگرام، ماؤس ہپپوکیمپس میں miR-466f-3p کے متعلقہ اظہار کی سطح لینٹیو وائرس ایکسپریسنگ کنٹرول یا miR-466f-3p سے متاثر ہے، جیسا کہ RT-qPCR ( n=16 فی گروپ)۔

(C) مختلف ریکومبیننٹ لینٹیو وائرس سے متاثر چوہوں کی MWM کارکردگی، پانچ مختلف پلازمیڈ کے استعمال کے ساتھ پیک کیا گیا ہے جس میں dsRed-only، miR-466f-3p، mut-miR-466f{ {5}}p، اور miR/SCR-سپنج بالترتیب، اپنے ہپپوکیمپس میں (n=13، 26، 16، 19، اور 11 فی گروپ، بالترتیب)۔ بائیں پینل: تربیت کے دوران تاخیر سے فرار۔ دائیں پینل: چھٹے سیشن پر انفرادی فرار میں تاخیر۔

(B) میں دکھائے گئے ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر پیش کیا گیا ہے، اور (C) میں دکھایا گیا ڈیٹا اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔ شماریاتی اہمیت کا اندازہ بغیر جوڑ والے ٹی ٹیسٹ (B)، بونفیرونی پوسٹ ہاک موازنہ (C، بائیں پینل) کے ساتھ دو طرفہ انووا، یا ٹوکی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ (C، دائیں پینل) کے ساتھ ایک انووا سے کیا گیا۔ شماریاتی فرق: #p < 0۔{5}}5,="" **/##p="">< 0.01="" اور="" ****p=""><0.0001; *mir-466f-3p="" بمقابلہ="" دیگر؛="" #mir-سپنج="" بمقابلہ="">

GLN اور PLN ماؤس ہپپوکیمپس (شکل S3) میں نیوران۔ یہ نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ ہپپوکیمپل miR-466f-3p کی اپ گریجولیشن نیورائٹ آؤٹ گروتھ اور ڈینڈریٹک ریڑھ کی ہڈی کی تشکیل کو فروغ دیتی ہے، جو کہ PLN چوہوں کے نسبت GLN چوہوں کے ہپپوکیمپس میں ریڑھ کی ہڈی کی کثافت کو شامل کرنے کے مترادف ہے۔

miR-466f-3p مثبت طور پر ماؤس مقامی سیکھنے کو ماڈیول کرتا ہے اوریاداشتکارکردگی، ساتھ ساتھ synaptic plasticity

اس بات کی تحقیقات کرنے کے لیے کہ آیا miR-466f-3p مثبت طور پر ماؤس کی مقامی تعلیم کو منظم کرتا ہے اوریاداشتتشکیل میں، ہم نے ماؤس ہپپوکیمپس میں ایم آر این اے کو اوور ایکسپریس کرنے کے لیے ریکومبیننٹ لینٹیو وائرس انفیکشن اپروچ کا استعمال کیا۔ ڈی جی (شکل 3A) میں لینٹیو وائرس انجیکشن کے 7 دن بعد چوہوں کا تجزیہ کیا گیا۔ کنٹرول گروپ (دائیں ہسٹوگرام شکل 3B میں)۔ ہم نے پایا کہ miR-466f- 3p کے ہپپوکیمپل اوور ایکسپریشن والے چوہوں نے اور MWM ٹاسک کا نشانہ بننے والے پہلے سیشن میں 88 ± 5 s اور 6 ویں سیشن میں 19 ± 1 s کی فرار کی تاخیر کی نمائش کی (سرخ ڈاٹ لائن، شکل 3C)، جو ویکٹر کنٹرول چوہوں (بلیک لائن) یا اتپریورتی کنٹرول چوہوں (سرخ دائرے کی لکیر) کے مقابلے میں بہتر تھیں اور شکل 1A میں بیان کردہ GLN چوہوں کے فرار کی تاخیر سے ملتی جلتی تھیں۔ متوازی طور پر، ہم نے مقامی سیکھنے اوریاداشتmiR-spong کا استعمال کرتے ہوئے miR-466f-3p کو روک کر۔ خاص طور پر، چوہوں کی MWM کارکردگی جس میں miR-spong کے ذریعے hippocampal miR-466f-3p پھنس گیا تھا، PLN چوہوں سے ملتا جلتا تھا، یعنی انہوں نے پلیٹ فارم کو تلاش کرنا نہیں سیکھا۔ آخری سیشن (ٹھوس سبز مربع لائن،

شکل 3C)۔ مزید برآں، لینٹیو وائرس کے ذریعے لگائے گئے چوہوں نے ہومیوسٹیٹک پلاسٹکٹی میں خلل پیدا نہیں کیا، کیونکہ ہر گروپ میں کچھ چوہوں نے آخری سیشن کے دوران سیکھ لیا تھا یا کم از کم سیکھنے کے عمل میں تھے (شکل 3C، دائیں ہسٹوگرام)۔

یہ دیکھتے ہوئے کہ ماؤس ہپپوکیمپس میں miR-466f-3p کے زیادہ اظہار نے ان کے سیکھنے میں اضافہ کیا اوریاداشتقابلیت، ہم نے کلچرڈ ہپپوکیمپل نیورون کی تقابلی الیکٹرو فزیالوجی کا تجزیہ کیا جو miR-466f-3p کی مختلف سطحوں کا اظہار کرتے ہیں۔ DIV14 ہپپوکیمپل نیورونز سے چھوٹا حوصلہ افزائی پوسٹ سینیپٹک کرنٹ (mEPSC) miR-466f-3p یا mut-miR-466f-3p، miR-spong، یا کنٹرول تھا پورے سیل پیچ کلیمپ کا استعمال کرتے ہوئے ریکارڈ کیا گیا۔ جبکہ نمونوں کے چار سیٹوں کے درمیان ایم ای پی ایس سی طول و عرض، عروج ٹاؤ، یا ڈے ٹاؤ میں کوئی خاص فرق نہیں تھا، ایم ای پی ایس سی فریکوئنسی زیادہ اظہار کرنے والے نیورونز کی ایم ای پی ایس سی فریکوئنسی miR-466f-3p کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ دوسرے گروپس (شکل 4A)، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ پوسٹ سینیپٹک گلوٹامینرجک ریسیپٹرز miR-466f- 3p اوور ایکسپریشن پر زیادہ مضبوطی سے چالو ہوئے تھے۔

اس کے بعد ہم نے vivo میں synaptic plasticity میں miR-466f-3p کے کردار کا براہ راست تعین کرنے کے لیے طویل مدتی پوٹینشن (LTP) کی پیمائش کی۔ شیفر کولیٹرل پاتھ وے کے ٹیٹینک محرک (تین ٹرینیں ہائی فریکوئینسی محرک [3xHFS]) کے ذریعہ وائنجیکٹڈ ہپپوکیمپس کے ساتھ مل کر کامبیننٹ لینٹیوائرس کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔ ہم نے پایا کہ ہمارے پروٹوکول نے تمام گروپوں میں ایل ٹی پی کی حوصلہ افزائی کی، جیسا کہ کورنو امونیس 1 (CA1) خطے (شکل 4B، بائیں پینل) میں فیلڈ ایکسائٹیٹری پوسٹ سینیپٹک پوٹینشل (fEPSPs) میں مسلسل اضافے سے ظاہر ہوتا ہے۔ LTP miR-466f-3p-overexpressing سلائسس (188 فیصد ± 2 فیصد بیس لائن کا 40-50 منٹ پر محرک کے بعد، مطلب ± SEM) میں اتپریورتی (169 فیصد ± 1 فیصد) میں زیادہ مضبوط تھا۔ بیس لائن کا)، SCR- سپنج (173 فیصد ± 3 فیصد بیس لائن)، اور کنٹرول وائرس سے متاثرہ سلائسس (159 فیصد ± 2 فیصد بیس لائن)، بطور miR-466f-3p روکنا miR-sponge نے LTP (128 فیصد ± 1 فیصد بیس لائن) کو کنٹرولز کی نسبت کم کر دیا (شکل 4B، دائیں پینل)۔ ہم نے تربیت کے بعد GLN اور PLN گروپوں کے LTP کی پیمائش بھی کی۔ متعلقہ اعداد و شمار نے GLN اور PLN گروپس (شکل 4C) کے درمیان CA1 خطے میں fEPSP ڈھلوان میں نمایاں فرق بھی ظاہر کیا۔ اس طرح، miR-466f-3p کی بلند سطح LTP اور Synaptic plasticity کو بڑھاتی ہے جو کہ بدلے میں، سیکھنے کو فروغ دے سکتی ہے اوریاداشتچوہوں کی صلاحیت. ایک ساتھ، اعداد و شمار 2، 3، اور 4 میں پیش کردہ اعداد و شمار یہ ظاہر کرتے ہیں کہ miR-466f-3p مقامی سیکھنے میں اہم مثبت کردار ادا کرتا ہے اوریاداشتتشکیل، ممکنہ طور پر ریڑھ کی ہڈی کی تشکیل، LTP، اور Synaptic plasticity کی طاقت کو بڑھا کر۔

Mef2a mRNA miR-466f-3p کا ایک ریگولیٹری ہدف ہے

ہم نے ایک بائیو انفارمیٹکس تجزیہ کیا تاکہ ممکنہ ہدف mRNAs کی شناخت کی جا سکے جو miR-466f-3p کو ان کے 30 UTRs سے منسلک کرکے ریگولیٹ کیا جاتا ہے۔ ہم نے جن امیدواروں کی شناخت کی ان میں Mef2a mRNA انکوڈنگ MEF2A تھا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ، MEF2A اظہار کو پہلے ایم ڈبلیو ایم کی تربیت کے بعد کم کیا گیا تھا، اور اس عنصر کے زیادہ اظہار نے چوہوں کی کارکردگی پر منفی اثر ڈالا (کول ایٹ ال۔، 2012)۔ لہذا، ہم نے یہ جانچنے کے لیے ایک لوسیفریز رپورٹر پرکھ کا استعمال کیا کہ آیا miR-466f-3p Mef2a mRNA کے ترجمے کو اس کے 30 UTR کا پابند بنا کر ریگولیٹ کرتا ہے۔ ہم نے SV40-پروموٹر سے چلنے والے luciferase cDNA (Luc) کے نیچے کی طرف وائلڈ قسم یا اتپریورتی Mef2a 30 UTR تسلسل داخل کیا، جس کے نتیجے میں رپورٹر پلاسمڈ psiCHECK2-MEF2A 30 UTR یا psiCHECK{{19} mut-MEF2A 30 UTR (شکل 5A)۔ جیسا کہ شکل 5B کے بائیں ہسٹوگرام میں دکھایا گیا ہے، miR-466f-3p کے مشترکہ اظہار نے Mef2a 30 UTR کے ذریعے ہدایت کردہ لوسیفریس کے اظہار کو کم کیا۔ یہ اثر miR-466f-3p اور Mef2a 30 UTR کے درمیان تعامل پر منحصر دکھائی دیتا ہے کیونکہ miR-466f-3p کی پیش گوئی شدہ بائنڈنگ سائٹ میں سے کسی ایک کی تبدیلی Mef2a 30 UTR (50-UGU- GUAU-30) یا miR-466f-3p (50-AUACACA-30) کا بیج کا علاقہ Mef2a 30 UTR کو تسلیم کرنے سے luciferase سرگرمی پر miR-466f-3p کے روکے ہوئے اثر کو منسوخ کر دیا گیا (شکل 5B، درمیانی ہسٹوگرام)۔ مزید برآں، miR-spong کے مشترکہ اظہار نے، لیکن CR سپنج کے نہیں، نے luciferase سرگرمی پر miR-466f-3p کے جابرانہ اثر کو بھی ختم کر دیا (شکل 5B، دائیں ہسٹوگرام)۔ خاص طور پر، نہ تو miR-466f-3p کے اوور ایکسپریشن کا اور نہ ہی miR-spong کا پرائمری ہپپوکیمپل نیوران (شکل 5C) میں Mef2a mRNA کی سطح پر کوئی اثر نہیں پڑا، لیکن انہوں نے بالترتیب کم یا بڑھایا۔ MEF2A پروٹین کی سطح (شکل 5D)۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ miR-466f-3p یا miR-spong کے بالترتیب، پرائمری ہپپوکیمپل نیوران (شکل 5C) میں سرگرمی سے ریگولیٹڈ سائٹوسکیلیٹل وابستہ پروٹین (آرک) کے ایم آر این اے کی سطح کو کم یا اپ ریگولیٹ کیا گیا ہے۔ ، جو کہ MEF2A (Flavell et al.، 2006) کے ذریعہ مثبت طور پر ریگولیٹ کرنے والا ایک معروف بہاؤ ہدف تھا۔

ہم نے miR-466f-3p کا پتہ لگانے کے لیے سیٹو ہائبرڈائزیشن (FISH) میں فلوروسینس بھی انجام دیا اور اسے DIV14 پرائمری ہپپوکیمپل نیورونز میں MEF2A کے IF لیبلنگ کے ساتھ جوڑ دیا بغیر یا forskolin علاج کے۔ Forskolin کیمیکل LTP پیدا کرنے اور ایڈنائل سائکلیز کو چالو کرنے کے لیے جانا جاتا ہے، اس طرح انٹرا سیلولر سی اے ایم پی کی سطح میں اضافہ ہوتا ہے۔ ہم نے miR-466f- 3p کے ساتھ MEF2A کے جوہری اجتماع کا مشاہدہ کیا، جیسا کہ شکل 5E میں نمائندہ تصویروں سے واضح کیا گیا ہے۔ فارسکولن محرک کے بعد، تاہم، سوما اور ڈینڈرائٹس دونوں میں miR-466f-3p سگنل میں اضافہ ہوا، جبکہ MEF2A سگنل

نیوکلئس کم ہوا، جیسا کہ بالترتیب MEF2A اور فاسٹ ریڈ سگنلز کی شدت کی باہمی تبدیلیوں سے ظاہر ہوتا ہے، انفرادی نیورونل سیلز (شکل 5E)۔ مجموعی طور پر، اعداد و شمار 5A–5E میں اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ miR-466f-3p منفی طور پر MEF2A پروٹین کے اظہار کو Mef2a mRNA کے 30 UTR سے منسلک کرکے اور نتیجتاً اس کے ترجمہ کو دبا کر کنٹرول کرتا ہے۔

اوپر بیان کردہ نتائج سے ہم آہنگ، ہم نے پایا کہ MEF2A پروٹین کی ہپپوکیمپل لیول کو MWM ٹریننگ کے بعد GLN چوہوں میں کم کیا گیا تھا، لیکن PLN چوہوں میں نہیں (شکل 5F)۔ مزید برآں، انفرادی GLN چوہوں (ڈاٹس) اور PLN چوہوں (مربع) میں MEF2A کی متعلقہ سطحیں miR-466f-3p (R=0.60) کی سطحوں کے ساتھ الٹا تعلق رکھتی تھیں۔ شکل 5G)۔ اس طرح، مقامی سیکھنے کے متضاد پیٹرن اوریاداشتانفرادی چوہوں میں ہپپوکیمپل miR- 466f-3p کے اسٹاکسٹک اضافے اور اعصابی سرگرمی کے محرک پر MEF2A کے نتیجے میں کمی کے ذریعہ صلاحیت کو ماڈیول کیا جاتا ہے۔

MWM ٹریننگ کے دوران ہپپوکیمپل CREB کی سٹوچسٹک ایکٹیویشن اور اس کے نتیجے میں miR- 466-669 کلسٹر کی ٹرانسکرپشن اپ گریجولیشن

ہم نے ماؤس ہپپوکیمپس میں کون سے میکانزم کی تحقیقات کی ہیں جو MWM ٹاسک کے ذریعے سٹاکسٹک طور پر اپ ریگولیٹ کی جا سکتی ہیں۔ miR-466f-3p کو انکوڈنگ کرنے والے تین miRNA پیشگی ہیں، جن میں سے سبھی چوہا کے مخصوص miR-466-669 کلسٹر سے تعلق رکھتے ہیں جو اس کے میزبان جین کے intron 10 میں واقع ہے، mSfmbt2 (Inoue et al .، 2017) (شکل 6A)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ miR-466f-3p کے برعکس، GLNandPLNgroups(Figure6B) کے درمیان mSfmbt2 کے اظہار کی سطح میں کوئی خاص فرق نہیں تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ miR-466-669 کلسٹر ایک الگ ٹرانسکرپٹ کو انکوڈ کر سکتا ہے۔ mSfmbt2 کے بنیادی ٹرانسکرپٹ کا حصہ بننے کے بجائے۔ اسی مناسبت سے، ہم نے RT-qPCR کے ذریعے miR-466-669 کلسٹر کے پوٹیٹیو پرائمری ٹرانسکرپٹ کی شناخت کے لیے پرائمر کے کئی سیٹ ڈیزائن کیے ہیں۔ جیسا کہ شکل 6A میں دکھایا گیا ہے، ایک لمبا پی سی آر ٹکڑا ( جمع 282 سے 2،381)، ایک ساتھ اوورلیپنگ کیو پی سی آر بینڈز کی ایک سیریز کے ساتھ، یعنی A ( جمع 282 سے 115)، B ( 131 سے 406)، C ( 388 سے 686)، D (662 سے 1,028)، E (1,004 سے 1,299)، F (1,242 سے 1,629)، G (1,605 سے 2,029)، اور H (2,005 سے 2,381)، کو ماؤس ہپپوکیمپس میں دریافت کیا جا سکتا ہے، لیکن حصہ 270 سے نہیں، 270 سے ) (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ یہ اعداد و شمار اس بات کی تائید کرتے ہیں کہ miR-466-669 کلسٹر نے پہلے miRNA پیشگی (یعنی پری میر-466m، denoted plus 1inFigure6A) کے تقریباً 2,388 bp اپ اسٹریم کے قریب ایک طویل ٹرانسکرپٹ کو انکوڈ کیا ہے۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ جیسا کہ ہم نے miR-466f-3p کے لیے پایا، GLN چوہوں کے ہپپوکیمپس میں اس ٹرانسکرپٹ کی اوسط سطح PLN چوہوں (شکل 6C) سے زیادہ تھی۔ اس طرح، بہتر سیکھنے اوریاداشتGLN چوہوں کی صلاحیت miR-466-669 کلسٹر کے ٹرانسکرپشنی ایکٹیویشن کی وجہ سے ہے۔

MWM کے کاموں کے دوران یا سیکھنے کی دوسری شکلوں میں فاسفوریلیشن کے ذریعے نیوکلیئر CREB کو چالو کرنا مختصر مدت کو طویل مدتی میں تبدیل کرنے کے لیے ایک اہم قدم ہے۔یاداشت(Lisman et al.، 2018؛ Rogerson et al.، 2014)۔ لہذا، ہم نے تحقیق کی کہ آیا انفرادی چوہوں کے درمیان miR-466f{-3p کی مختلف سطحیں جو MWM ٹاسک سے گزری ہیں CREB کی ایکٹیویشن سٹیٹس سے منسلک ہو سکتی ہیں۔ اس خیال کو دریافت کرنے کے لیے، سب سے پہلے ہم نے انفرادی چوہوں میں ہپپوکیمپل CREB کی فاسفوریلیشن لیول کا جائزہ لیا۔ جیسا کہ شکل 6D میں دکھایا گیا ہے، PLN اور HC چوہوں کی نسبت GLN چوہوں میں CREB ایکٹیویشن (فاسفوریلیشن کے ذریعہ باقی S-133) کو بڑھایا گیا تھا۔ ہم نے اس بات کی بھی تصدیق کی کہ miR-466f-3p واقعی میں pCREB کے ساتھ نیورانز میں miRNA ISH کو پرائمری ہپپوکیمپل نیورونز (Figure S2A) میں pCREB اور MAP2 کے IF سٹیننگ کے ساتھ مل کر ظاہر کیا گیا تھا۔ مزید برآں، miR- 466-669 کلسٹر کی پرائمری ٹرانسکرپٹ لیولز مثبت طور پر GLN چوہوں (R=0.52) میں pCREB کے ساتھ منسلک تھیں، جبکہ یہ PLN چوہوں (R=0) میں pCREB کے ساتھ منفی طور پر منسلک تھا۔ .71) (شکل 6E)۔ ہم نے ایک اور فعال عنصر، فاسفو-ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کناز (perK)، اور miR-466-669 کلسٹر کی بنیادی ٹرانسکرپٹ لیولز کے درمیان ارتباط کی جانچ کی۔ ہم نے پایا کہ دونوں قسم کے MWM سے تربیت یافتہ چوہوں نے miR-466-669 کلسٹر سگنل اور perK (R=0.59 اور 0.48، بالترتیب؛ Figure S4A) کے درمیان مثبت ارتباط پیش کیے، اور pERK/ میں کوئی فرق نہیں تھا۔ ان دو گروہوں کے درمیان TERK اظہار (شکل S4B)۔ CREB ایکٹیویشن کے اثر کو مزید واضح کرنے کے لیے ٹرانسکرپشنی اپریگولیشن آف تھیمِر-466-669کلسٹر اور اس کے نتیجے میں،

inductionofmiR-466f-3p,weusedaspeciCREBinhibitor,666- 15 (Xie et al., 2015), DIV14 پرائمری ہپپوکیمپل نیوران کے forskolin علاج کے ساتھ مل کر۔ Forskolin CREB فاسفوریلیشن کو چالو کرنے کے لیے جانا جاتا ہے (Malhotra et al.، 2015)۔ ہم نے پایا کہ پرائمری ہپپوکیمپل نیورونز کی پری ٹریٹمنٹ نے 666-15 بلاکڈ فارسکولین انڈسڈ CREB ایکٹیویشن (شکل 6F) اور miR-466f-3p اور miR-466-669 کلسٹر کی سطح کو کم کیا۔ نقل (اعداد و شمار 6G اور 6H)۔ اس کے ساتھ ساتھ، معلوم pCREB ٹارگٹ جینز nurr1 اور homer1a (Bridi et al., 2017; Jensen et al., 2017) کے mRNA کی سطح بھی 666-15 علاج (شکل 6H) پر کم کردی گئی تھی۔ ایک ساتھ لیا گیا، شکل 6 سے پتہ چلتا ہے کہ MWM ٹاسک سے گزرنے والے انبریڈ چوہوں کی ذیلی آبادی کے ہپپو کیمپس میں CREB کی سٹاکسٹک ایکٹیویشن miR-466-669 کلسٹر کی ٹرانسکرپشن کو آمادہ کرتی ہے اور اس کے نتیجے میں، miR-466f{{23} کی شمولیت }}p، اس طرح ان کی مقامی سیکھنے میں اضافہ ہوتا ہے اوریاداشتکام میں بہتر کارکردگی کا مظاہرہ کرنے کی صلاحیت۔

بحث

ہم نے مقامی سیکھنے کی مختلف صلاحیتوں کو تبدیل کرنے میں miRNAs کے ممکنہ کردار کی کھوج کی ہے اوریاداشتنسلی C57BL/6J چوہوں میں۔ ہم تجویز کرتے ہیں کہ CREB کی اسٹاکسٹک ایکٹیویشن اور اس کے نتیجے میں ہپپوکیمپل miR-466f-3p کی اپ گریجشن زیادہ مقامی سیکھنے اوریاداشتہمارے ٹیسٹ چوہوں کے ذیلی گروپ کی صلاحیت، ممکنہ طور پر میف2a mRNA کی miR-466f-3پی ثالثی ترجمہی روکنا کی وجہ سے جویاداشتمنفی ریگولیٹر MEF2A۔ ہمارے نتائج ماحولیاتی محرکات کے ذریعہ CREB-pCREB-miR-466f-3p-MEF2A محور کے سٹاکسٹک انڈکشن کے ذریعے ادراک کو منظم کرنے میں ایک مخصوص miRNA کے فعال اور ارتقائی کردار کو ظاہر کرنے والا منظر پیش کرتے ہیں۔

MWM کام کو وسیع پیمانے پر مقامی سیکھنے کی مختلف صلاحیتوں کو جانچنے کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔یاداشتچوہوں کے لیے عام حالات میں، چوہا اپنے آپ کو سمت دینے کے لیے دور دراز کے اشارے استعمال کرتے ہیں، جس سے وہ ٹاسک میں پوشیدہ پلیٹ فارم کے مقام کو سیکھنے اور یاد رکھنے کی اجازت دیتے ہیں۔ ہمارے زیادہ تر ٹیسٹ C57BL/6J چوہوں (62 فیصد) نے فرار ہونے میں تاخیر کے معمول کے نمونے کی نمائش کی، سیشن 3-6ویں (شکل 1A، GLN) کے ذریعے 30 سیکنڈ کے اندر پلیٹ فارم کو تلاش کیا۔ اس کے برعکس، چوہوں کے ایک گروپ (38 فیصد) نے 6ویں سیشن (PLN) تک بھی یہ کام نہیں سیکھا۔ خاص طور پر، ہم نے چوہوں کو دو دیگر شناختی ٹیسٹوں کا بھی نشانہ بنایا ہے۔ پہلا ناول آبجیکٹ ریکگنیشن (NOR) ٹیسٹ تھا، جو کہ رویے کی حوصلہ افزائی کے لیے کمک یا دباؤ کے بغیر فطری تلاش پر مبنی ایک واحد آزمائش ہے (لیجر وغیرہ، 2013)۔ ماؤس کی کارکردگی کے لحاظ سے NOR اور MWM کاموں کے درمیان ارتباط خراب ہے (R {{1{{20}}}.13)، جو NOR کی کارکردگی اور ہپپوکیمپل اظہار کی سطحوں کے درمیان ارتباط کی طرح ہے۔ miR-466f-3p (R=0.01؛ ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ NOR ٹیسٹ نے MWM GLN اور PLN گروپس (0.36 ± 0.25 بمقابلہ 0.29 ± 0.18؛ شکل S1B) کے درمیان امتیازی اشاریہ میں کوئی فرق بھی ظاہر نہیں کیا۔ دیگر مقامی سیکھنے اوریاداشت- منحصر کام جو ہم نے لاگو کیا ہے وہ ہے Barnes maze (BM)، جو MWM سے ملتا جلتا ہے۔ یہ اس مفروضے پر مبنی ہے کہ گھناؤنے ماحول میں رکھے ہوئے چوہوں کو پلیٹ فارم کی سطح کے نیچے واقع ایک فرار باکس کا مقام سیکھنا اور یاد رکھنا چاہیے۔ جیسا کہ شکل S1C میں دکھایا گیا ہے، ہم نے پایا ہے کہ BM پروب ٹرائلز میں ماؤس کی کارکردگی بھی miR-466f-3p کے ہپپوکیمپل اظہار کی سطح کے ساتھ مثبت طور پر منسلک ہے۔ اس طرح، سیکھنے کے دوران ہپپوکیمپس میں CREB-pCREB-miR-466f-3p-MEF2A محور کی شمولیت اوریاداشتتشکیل مقامی طور پر سیاق و سباق پر منحصر ہے۔