حصہ Ⅱ: Cistanche Salsa سے نئے Phenylpropanoid-Substituted Diglycosides کی ڈیریپلیکیشن گائیڈڈ آئسولیشن اور میکروفیج میں کوئی پیداوار نہ ہونے پر ان کی روک تھام کی سرگرمی
Mar 04, 2022
رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com
ایک 3-میتھل بیوٹینائل گروپ، ایک ایگلائیکون سبسٹرکچر، H-2 کے H-1a اور H-1b کے ساتھ COZY ارتباط اور H{{ کے درمیان HMBC کے ارتباط سے تجویز کیا گیا تھا۔ 4}} اور H-5 اور اولیفنک کاربن، kC 120.7 (C-2) اور 136.4 (C-3) پر۔ ایم ایس فریگمنٹ پیٹرن کے ساتھ، ایسڈ ہائیڈرولیسیٹ کے NMR سپیکٹرا تجزیہ اور HPLC سپیکٹرا تجزیہ کے ذریعہ دو شوگر موئیٹیز قائم کی گئیں۔ ایسڈ ہائیڈولائزیٹ [17] کے HPLC تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے ان کی مطلق ترتیب D-گلوکوز اور L-rhamnose ہونے کا تعین کیا گیا تھا۔ انومرک پروٹون کے مستقل جوڑے کے ذریعے شوگر کے ان حصوں کی تعریف -گلوکوز اور a-rhamnose کی گئی تھی۔ 1H-1H COZY سپیکٹرم نے H-13 سے H-63 اور H-133 سے H-633 (شکل 4) سے ترتیب وار ارتباط ظاہر کیا۔
kH 4.70 (H-43) پر ایک نیچے شفٹ شدہ گلوکوز پروٹون نے گلوکوز پر ایک acyl-substituent تجویز کیا۔ HMBC سپیکٹرم سے، H-43 اور C-9333 کے درمیان ارتباط نے کیفیوئل متبادل کی پوزیشن کی تصدیق کی۔ H-13 اور C-1 (kC 64.5) اور H-33 (kH 3.68) اور C-133 (kC 101.2) کے درمیان HMBC ارتباط نے ہر متبادل کی پوزیشن تجویز کی۔ . اس کے مطابق، 6 کی ساخت کا تعین 3-میتھائلبوٹینائل-او- -L-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D- کے طور پر کیا گیا تھا۔ گلوکوز پائرانوسائیڈ اور نام cistansalside B۔
Cistansalside C (12)، ایک بھورا بے رنگ پاؤڈر، C26H38O13 کا مالیکیولر فارمولہ بذریعہ ( جمع)HR-ESI-QTOF-MS رکھنے کے لیے پرعزم تھا، جس نے m/z 581.2213 [M plus Na] plus (calcd) کی چوٹی ظاہر کی۔ C26H38O13Na، 581.2205 کے لیے۔ m/z 163 پر ایک خصوصیت والے آئن نے تجویز کیا کہ ڈھانچے میں ایک کیفیوئل متبادل موجود ہے۔ m/z 325 اور m/z 471 پر ٹکڑا آئنوں نے rhamnose یونٹ اور گلوکوز یونٹ کے وجود کا مشورہ دیا۔
12 کے NMR سپیکٹرا کا 6 کے ساتھ موازنہ ظاہر کرتا ہے کہ وہ ایک جیسے تھے سوائے اگلیکون کے ڈھانچے کے۔ 12 کے NMR سپیکٹرا میں، kC 38 پر دو پیرافینک کاربن۔ }}.7 (C-2) اور 136.4 (C-3) 6 کے ایگلائی کون میں۔ 12 کے ایگلائی کون میں جراثیمی میتھائل گروپس (kH 0.88) اوپر کی طرف منتقل کیے گئے تھے۔ H-4 اور H-5 (kH 1.71 اور 1.63) کے 6 کے ایگلائکون (ٹیبل 2) میں نسبت۔ 12 کے aglycone کو ایک 3-میتھائل بائٹل گروپ بنانے کی تجویز دی گئی تھی، جس کی تصدیق 1H اور COZY NMR سپیکٹرا نے کی تھی۔ 3-میتھائل بوٹیل گروپ کی چوٹیوں کو 3.81 (1H, m, H-1a), 3.48 (1H, m, H-1b), 1.71 (1H, m) پر دیکھا گیا۔ , H-3), 1.44 (2H, m, H-2), اور 0.88 (H-4, 5)۔
ایسڈ ہائیڈولائزیٹ کے HPLC تجزیہ اور NMR سپیکٹرا تجزیہ کے ساتھ ساتھ MS فریگمنٹ پیٹرن کے ذریعہ شوگر کے دو حصوں کی تصدیق کی گئی۔ ایسڈ ہائیڈرولائزیٹ [17] کے HPLC تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے شکر کی مطلق ترتیب کو D-گلوکوز اور L-rhamnose کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ A - گلوکوز moiety اور a - rhamnose moiety کی تصدیق anomeric پروٹون کے مستقل استحکام کے ذریعے کی گئی تھی۔ 1H-1H COZY سپیکٹرم نے H-13 سے H-53، H-133 سے H-333، اور H{{11} سے ترتیب وار ارتباط ظاہر کیے } سے H-433 (شکل 4)۔
HMBC تجزیہ کے ذریعہ متبادل کی پوزیشن کی تصدیق کی گئی تھی۔ HMBC سپیکٹرم میں، H-13 اور C-1 (kC 67.2) کے درمیان ارتباط، H-33 (kH 3.68) اور C-133 (kC 101.2) اور درمیان H-43 (kH 4.70) اور C-9333 (kC 165.7) کا پتہ چلا۔ نتیجتاً، 12 کا ڈھانچہ 3-میتھائل بیوٹیل-OaL-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D-گلوکوز-pyranoside اور cistansalside C کا نام دیا گیا ہے۔
Cistansalside D (17)، ایک بے ساختہ بھورا پاؤڈر، مثبت موڈ ہائی ریزولوشن ESI-QTOF-MS کے ذریعے C31H38O14 کا مالیکیولر فارمولہ رکھنے کے لیے پرعزم تھا، جس نے m/z 657.2147 [M plus Na] plus پر ایک اضافی آئن کی چوٹی ظاہر کی۔ (calcd. for C31H38O14Na، 657.2154)۔ فریگمنٹ آئن بشمول ایک [M پلس H x Aglycone x Rha x Acetyl Glc] پلس آئن m/z 147 پر، a [M plus H x Aglycone x Rha] جمع آئن m/z 351 پر اور ایک [M جمع H x Aglycone] m/z 497 پر پلس آئن کا بھی پتہ چلا۔ m/z 147 پر ایک خصوصیت والے آئن نے تجویز کیا کہ اس کی ساخت میں coumaroyl کا متبادل موجود تھا۔ m/z 351 اور m/z 497 پر ٹکڑے کے آئنوں نے rhamnose یونٹ اور ایک ایسیٹیل کے متبادل گلوکوز یونٹ کے وجود کی تجویز پیش کی۔
سے Cistansalsidecistanche جڑی بوٹی
13C-NMR سپیکٹرم نے 31 کاربن ایٹموں کی موجودگی کا انکشاف کیا۔ 1H اور HSQC سپیکٹرا میں kH 4.61 (1H, m, H-13) اور 4.60 (1H, s, H{{10}) پر دو انومرک پروٹون دیکھے گئے۔ . 1H-NMR سپیکٹرم نے 1.97 (3H, s, acetyl-CH3) پر میتھائل گروپ کی موجودگی کی نشاندہی کی، kH 7.55 (1H, d, J=15.9 Hz, H{{) پر ایک ٹرانس اولیفن 25}}) اور 6.34 (1H, d, J=15.9 Hz, H-8333) اور kH 7.53 (2H, d, J=6 پر دو پیرا متبادل بینزین رِنگز۔ 9 Hz, H-3333, 5333) اور 6.79 (2H, d, J=6.9 Hz, H-2333, 6333)/ kH 6.98 (2H, d, J {{5) 0}.0 Hz, H-2, 6) اور 6.65 (2H, d, J=8.0 Hz, H-3, 5) (ٹیبل 2) . HMBC NMR سپیکٹرم سے، kc 165.5 (C-9333) اور H-8333 اور H-2333, 6333، اور C-7333 (kc) پر کاربونیل کاربن کے درمیان ارتباط 145.4) نے ایک (E) coumaroyl گروپ تجویز کیا۔ Kc 169.0 پر میتھائل پروٹون چوٹی اور کاربونیل کاربن کے درمیان HMBC کے ارتباط نے ایسٹیل گروپ کی موجودگی کی تصدیق کی۔
KC 155.6 (C-4) اور 128.6 (C-1) پر H-3، 5، اور کواٹرنری آرومیٹک کاربن کے درمیان HMBC کے ارتباط کی بنیاد پر ایک 4-ہائیڈرو آکسیفینائل گروپ تجویز کیا گیا تھا۔ . ایک ہائیڈرو آکسیلیٹڈ ایتھائل گروپ کی تصدیق COZY NMR سگنلز کے ذریعے kH 2.66 (2H, t, J=6.1 Hz, H-7), 3.90 (1H, m, H-8a پر ہوئی تھی۔ ) اور 3.54 (1H, m, H-8b)۔ H-7 اور C-1 (kC 128.6) اور C-2, 6 (kC 129.7) کے درمیان HMBC کے ارتباط نے ایک 4-ہائیڈرو آکسی فینائلتھائل گروپ تجویز کیا، بطور ایگلی کون سبسٹرکچر۔
ایم ایس فریگمنٹ پیٹرن سے تجویز کردہ دو شوگر موئیٹیز، ایسڈ ہائیڈرولائزیٹ اور این ایم آر سپیکٹرا کے HPLC تجزیہ سے دوبارہ تصدیق کی گئیں۔ ایسڈ ہائیڈولائزیٹ کے HPLC تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے D-گلوکوز اور L-rhamnose کو واضح کیا گیا تھا [17]۔ A - گلوکوز moiety اور a - rhamnose moiety anomeric پروٹون کے مستقل کو جوڑنے سے قائم کیا گیا تھا۔ 1H-1H COZY سپیکٹرم نے H-13 سے H-53 اور H-133 سے H-633 (شکل 4) تک ترتیب وار ارتباط ظاہر کیا۔
1H-NMR سپیکٹرم سے، H-23 (kH 4.69) اور H-43 (kH 4.80) کی ڈاون فیلڈ شفٹ نے گلوکوز پر acyl سے متبادل پوزیشن تجویز کی۔ گلوکوز اور دو ایسیل گروپوں کے درمیان رابطوں کی تصدیق H-43 (kH 4.80) اور C-9333 کے درمیان اور H-23 اور ایک ایسیٹیل گروپ (kC 169.0) کے کاربونیل کاربن کے درمیان HMBC کے ارتباط سے ہوئی۔ )۔ aglycone اور rhamnose کی پوزیشن H-33 (kH 3.95) اور C-1333 اور H-8 اور C-13 کے درمیان HMBC ارتباط کے ذریعہ دی گئی تھی۔ اس کے مطابق، 17 کا ڈھانچہ 4-ہائیڈروکسیفینیلتھیل-2-O-acetyl-O- -L-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)- کے طور پر تفویض کیا گیا تھا۔ coumaroyl- -D-glucopyranoside اور نام cistansalside D.
Cistansalside E (18) ایک بے ساختہ براؤن پاؤڈر کے طور پر الگ تھلگ تھا۔ اس کا مالیکیولر فارمولہ 13C-NMR ڈیٹا اور مثبت موڈ ہائی ریزولوشن ESI-QTOF-MS چوٹی m/z 657.2166 [M plus Na] plus (calcd. for C31H38O14Na, 657.2154) کے ذریعے C31H38O14 ہونے کا تعین کیا گیا تھا۔ مزید برآں، m/z 163 پر ایک caffeoyl ion، m/z 367 پر ایک [M plus H x Aglycone x Rha] پلس آئن اور m/z 513 پر ایک [M plus H x Aglycone] آئن سمیت ٹکڑے کے آئنوں کا بھی پتہ چلا۔ ٹکڑوں کے آئنوں نے ایک rhamnose یونٹ اور ایک ایسیٹیل کے متبادل گلوکوز یونٹ کے وجود کا مشورہ دیا۔
1H-NMR سپیکٹرم نے kH 4.63 (1H, d, J=8.2 Hz, H-13) اور 4.60 (1H, s, H-133) پر دو انومرک پروٹونوں کی موجودگی کا مشورہ دیا۔ ) اور دو acyl کے متبادل گلوکوز پروٹونز kH 4.71 (1H, dd, J=8.9, 8.2 Hz, H-23) اور 4.81 (1H, dd, J=9.7 پر ، 9.5 Hz، H-43)۔ 1H اور HMBC سپیکٹرا نے kH 1.94 (3H, s, acetyl-CH3) پر ایک ایسیٹیل گروپ کے وجود کی تجویز پیش کی، kH 7.48 (1H, d, J=15.9 Hz) پر ایک (E)-caffeoyl moiety، H-7333), 7.02 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2333), 6.98 (1H, dd, J=8.1, 1.6 Hz, H-6333), 6.76 (1H,d, J=8.1 Hz, H-5333) اور 6.21 (1H, d, J=15.9 Hz, H{ {67}}) اور kH 7.29 (2H, m, H-3, 5), 7.21 (2H, m, H-2, 6) اور 7.20 (1H,) پر ایک مونو متبادل بینزین رنگ m، H-4) (ٹیبل 2)۔ ایک فینیل میتھائل گروپ، ایک ایگلائکون سبسٹرکچر، H-7 (2H, kH 2.80, m) اور C-1 (kC 138.8) اور H-7 اور C کے درمیان HMBC کے ارتباط کے ذریعہ تجویز کیا گیا تھا۔ -2, 6 (kC 128.9) اور H-7 کے COZY NMR سگنلز H-8a (1H, kH 3.99, m) اور H-8b (1H kH 3.63، m)۔
ایسڈ ہائیڈولائزیٹ اور NMR سپیکٹرا تجزیہ کے HPLC تجزیہ کے ذریعہ شوگر کے دو حصوں کی دوبارہ تصدیق کی گئی۔ شکر کی مطلق ترتیب کو ایسڈ ہائیڈولائسیٹ کے HPLC تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے واضح کیا گیا تھا، جو D-گلوکوز اور L-rhamnose ہونے کی تصدیق کی گئی تھی [17]۔ A - گلوکوز moiety اور an -rhamnose moiety anomeric پروٹون کے مستقل کو جوڑنے سے قائم کیا گیا تھا۔ 1H-1H COZY سپیکٹرم نے H-13 سے H-53، H-133 سے H-233، اور H{{11} سے ترتیب وار ارتباط ظاہر کیے } سے H-333 (شکل 4)۔
HMBC سپیکٹرم سے، H{{0}} اور C-8 (kC 69.4) کے درمیان ارتباط، H-23 اور ایک ایسیٹیل گروپ (kC 169.1) کے کاربونیل کاربن کے درمیان H-33 (kH 3.95) اور C-133 (kC 102.0) اور H-43 (kH 4.81) اور C-9333 (kC 165.6) کے درمیان متبادل کی پوزیشن کی تصدیق کی۔ ڈھانچہ. لہذا، 18 کی ساخت کا تعین کیا گیا تھا کہ وہ فینائلتھائل-2-O-acetyl-OaL-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D-glucopyranoside اور cistansalside E کا نام دیا گیا۔
زیادہ تر ٹرانس سیناموئل کے متبادل کو وٹرو میں cis-isoform میں isomerized کیا گیا تھا۔ روشنی کو ٹرانس سنامک ایسڈ ڈیریویٹوز کو cis-isoforms [18,19] میں تبدیل کرنے کی اطلاع دی گئی ہے۔ ٹرانس آئسوفارم میں تقریباً 70 فیصد الگ تھلگوں کو برقرار رکھنے کے لیے دار چینی کے متبادل کے ٹرانس-سیس کی تبدیلی کا توازن دیکھا گیا۔ cis فارم کے اولفن پروٹونز کے لیے، تقریباً 6.90 ppm(d, J=12~13 Hz, H-7333) اور 5.80 ppm (d, J=12~13 Hz، پر چوٹی ہوتی ہے۔ H-8333) 1H-NMR سپیکٹرا میں قابل تفویض تھے، جبکہ چوٹی تقریباً 7.55 ppm (d, J=15.8 Hz, H-7333) اور 6.40 ppm (d, J { {28}}.8 Hz, H-8333) تبدیلی کے لیے مشاہدہ کیا گیا [20]۔ ٹرانس-سس مکسچر کے 1H-NMR سپیکٹرم میں، دو اولیفینک پروٹون (H-7333 اور H-8333) کی چوٹیوں کو 7:3 (trans:cis) کے تناسب سے دیکھا گیا۔ cis فارم کی 13C-NMR چوٹیاں ٹرانسفارم کی طرح تھیں۔
cistanche سے موثر اجزاء: ایکٹیوسائیڈز
تمام الگ تھلگوں کو RAW میں LPS کی حوصلہ افزائی NO پیداوار پر ان کے روکنے والے اثرات کے لئے جانچا گیا تھا۔
تمام الگ تھلگوں کو RAW 264.7 خلیوں میں LPS کی حوصلہ افزائی NO پیداوار پر ان کے روکنے والے اثرات کے لئے جانچا گیا تھا۔ Dexamethasone کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور اس کا IC50 70 uM تھا۔ ٹیسٹ شدہ مرکبات میں سے، مرکبات 5 (IC50 42.7 o 6.6 uM)، 11 (IC50 37.3 o 2.2 uM)، 13 (IC50 40۔{2{{ 4. اقدار > 100 uM)۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا ان مرکبات میں سائٹوٹوکسیٹی ہے، سیل کی عملداری کی پیمائش MTT پرکھ کے ذریعے کی گئی۔ نتیجے کے طور پر، ان میں سے کسی نے بھی اہم سائٹوٹوکسائٹی ظاہر نہیں کی (ضمنی شکل S6-1)۔ ان چار مرکبات کو ایل پی ایس محرک RAW 264.7 خلیوں میں NF-λB راستے کے خلاف ان کی روک تھام کی سرگرمی کا جائزہ لینے کے لئے منتخب کیا گیا تھا۔ LPS کے ساتھ RAW 264.7 خلیات کی حوصلہ افزائی نے 0.5 h انکیوبیشن کے بعد I入B اور NF-入B (p65) کے فاسفوریلیشن کو آمادہ کیا۔ NF- 入 B (p65) کے فاسفوریلیشن کو 11، 13 اور 18 مرکبات کے ساتھ پریٹریٹمنٹ کے ذریعے نمایاں طور پر کم کیا گیا جیسا کہ ویسٹرن بلاٹ تجزیہ (شکل 5) سے دکھایا گیا ہے۔ لہذا، مرکبات 11، 13 اور 18 میکروفیجز میں NF-入B کی روک تھام کے ذریعے سوزش کے خلاف اثرات مرتب کر سکتے ہیں۔
تصویر 5۔LPS محرک RAW 264.7 خلیوں میں I入B اور NF-入B (p65) کے فاسفوریلیشن پر چار مرکبات کا اثر۔ (A) مغربی دھبے ایل پی ایس اور نمونے سے علاج شدہ RAW 264.7 خلیوں میں کیے گئے تھے۔ (B, C) مالیکیولر اینالسٹ/PC ڈینسٹومیٹری سافٹ ویئر (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے امیونو بلوٹ سگنلز کی مقدار درست کی گئی۔ فاسفوریلیٹڈ آئسفارمز کا کثافت میٹرک تجزیہ رپورٹ کیا گیا ہے۔ RAW 264.7 سیل میں NF- 入 B کو ایکٹین کے مواد پر معمول بنایا گیا تھا۔
3. مواد اور طریقے
3.1. عام تجربہ طریقہ کار
آپٹیکل گردشوں کی پیمائش Jasco P-2000 ڈیجیٹل پولی میٹر (Jasco, Tokyo, Japan) سے کی گئی۔ UV سپیکٹرا کو Chirascan پلس سرکلر Dichroism سپیکٹرومیٹر (Chirascan، APL، UK) پر ریکارڈ کیا گیا تھا۔ IR سپیکٹرا کو Jasco FT/IR-4200 سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے ریکارڈ کیا گیا۔ ہائی ریزولوشن الیکٹرو سپرے آئنائزیشن کواڈروپول-ٹائم-آف-فائٹ ماس سپیکٹرو میٹری (HR-ESI-qTOF-MS) Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS پر کیا گیا تھا جس میں Agilent 1260 Infinity سیریز (Agilent Inc. , Palo Alto, CA, USA)، اور استعمال شدہ کالم Jasco SFCpak Crest C18T-5 کالم (id 150 4.6 mm, 5 um) تھا۔ ماس ہنٹر ورک سٹیشن سافٹ ویئر ڈیٹا کے حصول کے لیے استعمال کیا گیا۔
1D (1H اور 13C) اور 2D (1H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY) NMR سپیکٹرا ایک Jeol LA 300 (Jeol, Tokyo, Japan)، Bruker AVANCE-400، Bruker کے ساتھ حاصل کیا گیا تھا۔ AVANCE-500، Bruker AVANCE-600 اور Bruker AVANCE 800 HD اسپیکٹومیٹر ایک کریوپروب کے ساتھ مل کر (Bruker، Ettlingen، Germany)۔ DMSO-d6 (کیمبرج آاسوٹوپ لیبارٹریز، Cistanche Andover، MA، USA) کو NMR سالوینٹس اور ریفرنس چوٹیوں (kH 2.50 اور kC 39.5) کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ کالم کرومیٹوگرافی (CC) Sephadex LH-20 (25–100 um; Pharmacia, Uppsala, Sweden) یا Kieselgel 60 silica gel (40–63 um, 230–400 mesh, Art. 9385; Merck, Darmstadt) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ ، جرمنی)۔ پتلی پرت کی کرومیٹوگرافی (TLC) پری لیپت Kieselgel 60 سلیکا جیل F254 پلیٹس (آرٹ 5715؛ مرک) پر کی گئی تھی۔ TLC پر دھبے 254 nm اور 365 nm (VL-4.LC, 365/254؛ ولبر لورمیٹ، ٹورسی، فرانس) پر UV لیمپ کا استعمال کرتے ہوئے پائے گئے۔ میڈیم پریشر مائع کرومیٹوگرافی (MPLC) ریڈی سیپ 120 جی سلیکا فلیش کالم (اسکو، لنکن، این ای، یو ایس اے) اور کیسیگل 60 سلیکا جیل (40–63 um، 230–400 میش، آرٹ. 9385؛ مرک) پر کی گئی تھی۔ کومبی فلاش ساتھی (Isco)۔ ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) نظام ایک Gilson HPLC تھا جو ایک Gilson 321 پمپ اور UV.VIS 151 ڈیٹیکٹر (Gilson, Middleton, WI, USA) سے لیس تھا، نیم تیاری والے ODS کالموں کا استعمال کرتے ہوئے (Luna 5 um C18 (2) 100 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Phenomenex Inc., Torrance, CA, USA؛ Hypersil GOLD™ aQ 175 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Thermo Scientic™, Hennigsndorf, CG201 جرمن; Å, id 250: 10 mm, 5 um, Young Jin Biochrom Co., Ltd., Seongnam, Korea)۔ تجزیاتی RP-HPLC سسٹم ایک واٹرس 2695 الائنس سسٹم تھا جس میں a996 Photodiode Array (PDA) ڈیٹیکٹر (Waters Corp, Milford, MA, USA) تھا، اور استعمال شدہ کالم Hypersil™ BDS C18 کالم (130 Å، id 150: 4.6) تھا۔ mm, 5 um, Thermo Scientific™)۔ فارمک ایسڈ ڈائیجنگ کیمیکلز اینڈ میٹلز کمپنی لمیٹڈ (سیول، کوریا) سے خریدا گیا تھا۔ HPLC گریڈ سالوینٹس فشر سائنٹیفک کوریا لمیٹڈ (سیول، کوریا) سے خریدے گئے تھے۔ H2SO4، Na2CO3، اور نکالنے، فریکشن، اور الگ تھلگ کرنے کے لیے پہلے درجے کے سالوینٹس ڈائیجنگ کیمیکل اینڈ میٹلز کمپنی لمیٹڈ (سیول، کوریا) سے خریدے گئے تھے۔ L- اور D-cysteine methyl ester hydrochloride اور o-tolylisothiocyanate ٹوکیو کیمیکل انڈسٹری (ٹوکیو، جاپان) سے خریدے گئے تھے۔
3.2. پودا مواد
کے پورے پودےCistanche سالسا، جو شنجانگ ایغور سے جمع کیے گئے تھے، ڈیریم فارماسیوٹیکل ہول سیل کمپنی (چیونگجو، کوریا) کے ذریعے درآمد کیے گئے تھے۔ ان کی شناخت پروفیسر ڈاکٹر جیہیون لی (ڈونگ گوک یونیورسٹی، سیول، کوریا) نے کی۔ واؤچر کا نمونہ (SNUPH2016-03) ہربیریم آف میڈیسنل پلانٹ گارڈن، کالج آف فارمیسی، سیول نیشنل یونیورسٹی میں جمع کیا گیا تھا۔
3.3. نکالنے اور علیحدگی
کے خشک پورے پودےCistanche سالسا(5.7 کلوگرام) کو کاٹا گیا اور MeOH (20 L) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 99 منٹ تک سونیکیشن کے ساتھ تین بار نکالا گیا۔ ویکیو میں سالوینٹس کو ہٹانے کے بعد، خام نچوڑ (1.35 کلوگرام) کو H2O (5 L) میں معطل کر دیا گیا، پھر EtOAc (5 L) کے ساتھ تقسیم کر دیا گیا۔ EtOAc باقیات (55.3 g) کو CHCl3/MeOH (50:1–0:1، مرحلہ وار نظام) کے ساتھ سلیکا جیل کرومیٹوگرافی پر 16 حصوں (E01-16) میں الگ کیا گیا تھا۔
E08 (611.7 mg) کو سلیکا جیل میڈیم پریشر مائع کرومیٹوگرافی (25 جی) کا نشانہ بنایا گیا اور CHCl3/MeOH (18:1–0:1، مرحلہ وار نظام) اور 11 کسر دیا (E08a-k)۔ E08g سے، مرکبات 13 (0.7 mg) اور 18 (0.6 mg) کو Luna 5 um HPLC کالم اور 28 فیصد aq کے ساتھ isocratic elution کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا گیا۔ MeCN E08h (138.5 mg) فرنشڈ مرکبات 7 (10.6 mg)، 8 (17.2 mg)، 14 (13.4 mg) اور 17 (4.9 mg) کا HPLC پیوریفیکیشن (Hypersil GOLD، 25 فیصد aq. MeCN)۔
E09 (1.15 g) کو مزید صاف کیا گیا سیلیکا-MPLC کالم (20 g) پر CHCl3/MeOH (10:1–0:1، قدم- گریڈینٹ سسٹم) 11 ذیلی فریکشن (E09a-k) دینے کے لیے۔ E09e (398.7 mg) کو Sephadex LH-20 (MeOH) کا نشانہ بنایا گیا اور آٹھ ذیلی حصے (E09e1-8) حاصل ہوئے۔ E09e6 کو بعد ازاں ایک Hypersil GOLD HPLC کالم (22 فیصد aq. MeCN) کا استعمال کرتے ہوئے کمپاؤنڈ 11 (0.4 ملی گرام) کو برداشت کرنے کے لیے صاف کیا گیا۔ E09e7 سے، کمپاؤنڈ 5 (0.6 mg) کو 40 فیصد aq کے ساتھ Luna 5 um HPLC کالم سے isocratic eluction سے پاک کیا گیا تھا۔ MeOH
E10 (1.20 g) Sephadex LH-20 کالم پر MeOH کے ساتھ نو فریکشن (E10ai) میں الگ کیا گیا تھا۔ E10g (147.5 mg) سے، مرکبات 4 (13.4 mg)، 9 (8.0 mg) اور 15 (5.0 mg) HPLC علیحدگی (Inno، 23 فیصد aq. MeCN) کے ذریعے الگ تھلگ کیے گئے تھے۔ فریکشن E10h (470.0 mg) کو Hypersil GOLD کالم پر isocratic elution (40 فیصد aq. MeOH) کے ذریعے 1 (3.8 mg)، 10 (42.1 mg) اور 16 (3.0 mg) مرکبات حاصل کرنے کے لیے صاف کیا گیا تھا۔
E11 (2.96 g) کو Sephadex LH-20 کا نشانہ بنایا گیا جس میں MeOH کے ساتھ نو فریکشن (E11a-i) دیا گیا۔ E11e کو Sep-Pak C18 کارٹریج کے ذریعے 10 فیصد، 20 فیصد، 30 فیصد، 50 فیصد اور 100 فیصد aq کے ساتھ الگ کیا گیا۔ MeOH سات فریکشنز (E11e1-7) حاصل کرنے کے لیے، اس کے بعد Luna 5 um HPLC (28 فیصد aq. MeCN) مرکبات 3 (3.4 mg)، 6 (1.4 mg) اور 12 (1.2 mg) دینے کے لیے۔
E12 (19.0 g) کو CHCl3/MeOH سٹیپ-گریڈینٹ سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے سلیکا MPLC (120 g) کا نشانہ بنایا گیا تاکہ چھ فریکشن (18:1–0:1) ، E12a-f)۔ E12f کو ایک Sephadex LH-20 کالم (MeOH) پر کرومیٹوگراف کیا گیا تھا، جس سے سات حصے (E12f1-7) نکلتے ہیں۔ E12f7 فرنشڈ کمپاؤنڈ 2 (3.3 ملی گرام) کا HPLC پیوریفیکیشن (Hypersil GOLD، 25 فیصد aq. MeCN)۔ HPLC کے لیے استعمال ہونے والے تمام سالوینٹس 0.05 فیصد فارمک ایسڈ بفر تھے۔ HPLC اور MPLC کرومیٹوگرافی کے لیے عام بہاؤ کی شرح بالترتیب 3 اور 40 mL/min تھی۔
3.4.خصوصیت
Cistansalside A (5): بھورا بے رنگ پاؤڈر؛ [ |20 x33.7 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 332 (3.18)؛ IR (صاف) vmax 3359, 1748, 1705, 1602, 1516 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) اور 13C-NMR (200 MHz) ڈیٹا، جدول 2 دیکھیں؛ HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] plus 645.2146 (calcd. for C30H38O14Na, 645.2154)۔
Cistansalside B (6): بھورا بے رنگ پاؤڈر؛ [ |20 x72.9 (c 0.1, MeOH)؛ UV(MeOH) Amax nm (log e) 333 (3.32)؛ IR (صاف) vmax 3400, 1705, 1603, 1516 cmx1; 1H-NMR (500 MHz) اور 13C-NMR (125 MHz) ڈیٹا، جدول 2 دیکھیں؛ HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] plus 579.2054 (calcd. for C26H36O13Na, 579.2048)۔
Cistansalside C (12): بھورا بے رنگ پاؤڈر؛ [ |20 x61.6 (c 0.1, MeOH)؛ UV(MeOH) Amax nm (log e) 337 (3.25)؛ IR (صاف) vmax 3359, 1704, 1602, 1508 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) اور 13C-NMR (200 MHz) ڈیٹا، جدول 2 دیکھیں؛ HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] plus 581.2213 (calcd. for C26H38O13Na, 581.2205)۔
Cistansalside D (17): بھورا بے رنگ پاؤڈر؛ [ |20 x51.1 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 221 (3.53)، 315 (3.52)؛ IR (صاف) vmax 3358, 1746, 1722, 1603, 1516, 1232, 1157, 1039 cmx1; 1H-NMR (400 MHz) اور 13C-NMR (75 MHz) ڈیٹا، جدول 2 دیکھیں؛ HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] plus 657.2147 (calcd. for C31H38O14Na, 657.2154)۔
Cistansalside E (18): بھورا بے رنگ پاؤڈر؛ [ |20 x59.2 (c 0.1, MeOH)؛ UV(MeOH) Amax nm (log e) 336 (3.22)؛ IR (صاف) vmax 3370, 1741, 1712, 1602, 1231, 1157 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) اور 13C-NMR (200 MHz) ڈیٹا، جدول 2 دیکھیں؛ HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] جمع 657.2166 (calcd. for C31H38O14Na, 657.2154)
3.5.HPLC-QTOF-MS تجزیہ
Chromatographic-mass spectrometry analysis ایک Agilent 1260 Infinity series LC سسٹم (Agilent Technologies, Inc., USA) پر کیا گیا تھا۔ تجزیاتی کالم ایک SFCpak Crest C18T-5 کالم تھا (id 15{{10} : 4.6 mm, 5 um, Jasco, Japan)۔ موبائل فیز میں MeCN (A) میں 0.1 فیصد (v/v) فارمک ایسڈ اور پانی (B) میں 0–35 منٹ (23 فیصد A)، 35–45 منٹ ( 23–28 فیصد A)، 45–75 منٹ (28 فیصد A) اور 75–80 منٹ (90 فیصد A)۔ بہاؤ کی شرح 0.3 ملی لیٹر فی منٹ رکھی گئی۔ جذب 320 nm پر ماپا گیا۔ ESI ماخذ کی شرائط درج ذیل تھیں: خشک کرنے والی گیس (N2) بہاؤ کی شرح، 10 L/min؛ خشک کرنے والی گیس کا درجہ حرارت، 350 ڈگری؛ نیبولائزر، 30 پی ایس آئی جی؛ میان گیس کے بہاؤ کی شرح، 12.0 L/منٹ؛ میان گیس کا درجہ حرارت، 350 ڈگری؛ کیپلیری، 4000 وی؛ سکیمر، 60 وی؛ آکٹپول آر ایف، 750 وی؛ فریگمینٹر وولٹیج، 180 V؛ مثبت موڈ. یہ نظام Masshunter ورک سٹیشن سافٹ ویئر کے تحت چلایا جاتا تھا۔ بڑے پیمانے پر رینج m/z 50-1000 پر سیٹ کی گئی تھی۔
3.6.تیزاب ہائیڈرولیسس
مرکبات کو 1 N H2SO4 (100 uL) کا استعمال کرتے ہوئے 90 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے پانی کے غسل کے ساتھ گرم کیا گیا، پھر سیر شدہ آبی Na2CO3 محلول کے ساتھ غیر جانبدار کیا گیا۔ حلوں کو N2 کی ندی کے نیچے خشک ہونے کے بعد، مصنوعات اور معیاری شکر (D-Glc, L-Glc, L-Rha) کو پائریڈائن (100 uL) میں تحلیل کر دیا گیا جس میں L-cysteine methyl ester hydrochloride (0.5 mg) تھا۔ ایک L-rhamnose نمونہ pyridine (100 uL) میں تحلیل کیا گیا تھا جس میں D-cysteine methyl ester hydrochloride (0.5 mg) تھا۔ اس کے بعد، انہیں 1 گھنٹے کے لیے 60 ڈگری پر گرم کیا گیا۔ حلوں کا علاج 1 uL (1.11 mg) o-tolylisothiocyanate سے کیا گیا، جسے 1 گھنٹے کے لیے 60 ڈگری پر دوبارہ گرم کیا گیا۔ ہر حتمی مرکب کا براہ راست تجزیہ تجزیاتی RP-HPLC (Hypersil™ BDS C18 کالم، 17 فیصد aq. MeCN، 0.8 ملی لیٹر/منٹ، 40 منٹ، 35 ڈگری) کے ذریعے کیا گیا۔ 21.9 اور 40.4 منٹ پر چوٹی کا ٹی آر بالترتیب D-گلوکوز اور L-rhamnose کے thiocarbamoyl thiazolidine کے مشتق تھا۔
3.7. سیل ثقافت
مورین میکروفیجز، RAW 264.7، کورین ریسرچ انسٹی ٹیوٹ آف بایو سائنس اینڈ بائیو ٹیکنالوجی (Daejeon, Korea) سے حاصل کیے گئے تھے، اور RPMI میڈیم میں اگائے گئے تھے جس میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم اور 100 U/mL پینسلن/سٹریپٹومائسن سلفیٹ ہوتا ہے۔ خلیوں کو 37 ڈگری پر نمی والے 5 فیصد CO2 ماحول میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔
3.8.منشیات اور کیمیکل
RPMI، پینسلن اور سٹریپٹومائسن HyClone (لوگن، UT، USA) سے خریدے گئے تھے۔ بووائن سیرم البومین اور ایل پی ایس سگما (سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) سے خریدے گئے تھے۔
3.9. NO پیداوار کی پیمائش
کلچر میڈیم میں نائٹریٹ کا ارتکاز گریس ردعمل کے مطابق NO پیداوار کے اشارے کے طور پر ماپا گیا۔ سیلز کو 2: 105 سیل/کنواں 96-کنویں کلچر پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ 18 گھنٹے کے لیے RAW 264.7 خلیات کے پہلے سے انکیوبیشن کے بعد، خلیات کو مرکبات (50 uM، 10 uM، 5 uM، یا 1 uM) کے ساتھ تیار کیا گیا اور 24 کے لیے LPS (500 ng/mL) کے ساتھ متحرک کیا گیا۔ h DMSO میں تحلیل شدہ ٹیسٹ مرکبات۔ سیلوں کو گاڑیوں کے کنٹرول کے طور پر 0.05 فیصد DMSO کے ساتھ بھی علاج کیا گیا۔ RAW 264.7 خلیات (2: 105 خلیات/کنویں) کو RPMI کا استعمال کرتے ہوئے فینول ریڈ کے بغیر 96-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا اور نمونوں کے ساتھ 0.5 گھنٹے تک پہلے سے علاج کیا گیا تھا۔ سیلولر NO کی پیداوار 500 ng/mL حتمی حراستی LPS اور 24 گھنٹے انکیوبیشن کے اضافے سے ہوئی تھی۔ انکیوبیشن کے بعد ، 100 یو ایل کنڈیشنڈ میڈیا کو اسی حجم کے ساتھ گریسس ری ایجنٹ کے ساتھ ملایا گیا اور 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 540 nm پر مرکب کی جاذبیت کو ELISA مائکروپلیٹ ریڈر (بینچ مارک، بائیو ریڈ لیبارٹریز، رچمنڈ، CA، USA) سے ماپا گیا۔ حاصل کردہ اقدار کا موازنہ RPMI میں تحلیل شدہ سوڈیم نائٹریٹ کے معیاری ارتکاز کے ساتھ کیا گیا، اور نمونے کے علاج شدہ خلیوں کے کنڈیشنڈ میڈیا میں نائٹریٹ کے ارتکاز کا حساب لگایا گیا۔
3.10۔
سیلز کو 5:104 سیلز/کنواں کی کثافت پر {{0}}کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا اور نمونوں کی موجودگی میں سیرم فری میڈیا کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ DMSO میں تحلیل شدہ ٹیسٹ مرکبات۔ سیلوں کو گاڑیوں کے کنٹرول کے طور پر 0.05 فیصد DMSO کے ساتھ بھی علاج کیا گیا۔ 24 گھنٹے تک انکیوبیشن کے بعد، 10 uL MTT (5 mg/mL نمکین میں) شامل کیا گیا اور مزید 4 گھنٹے تک انکیوبیشن جاری رکھا گیا۔ زندہ خلیوں میں Mitochondrial succinate dehydrogenase MTT کو انکیوبیشن کے دوران مرئی فارمازان کرسٹل میں تبدیل کرتا ہے۔ اس کے بعد فارمازان کرسٹل کو ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ میں گھلنشیل کیا گیا اور انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) مائکروپلیٹ ریڈر (بینچ مارک، بائیو ریڈ لیبارٹریز) کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 540 nm پر ماپا گیا۔ غیر علاج شدہ کنٹرول گروپ کے جذب کے مقابلے میں رشتہ دار سیل کی عملداری کا حساب لگایا گیا تھا۔ تمام تجربات سہ رخی میں کیے گئے تھے۔
3.11.Immunoblot Analysis
معیاری طریقہ کار کے مطابق مغربی بلاٹنگ کے ذریعہ پروٹین کے اظہار کا اندازہ کیا گیا۔ مختصراً، RAW264.7 خلیات کو 6{{20} ملی میٹر کلچر ڈشز (2: 106/mL) میں کلچر کیا گیا تھا، جس کے بعد 50 uM مرکبات کی پری ٹریٹمنٹ کی گئی تھی۔ . سیلوں کو برف سے سرد پی بی ایس (پی ایچ 7.4) میں دو بار دھویا گیا تھا، سیل کے چھروں کو 15 منٹ کے لیے برف پر لیسز بفر میں دوبارہ روک دیا گیا تھا، اور اس کے بعد سیل کے ملبے کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے ہٹا دیا گیا تھا۔ پروٹین کے ارتکاز کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق Bio-Rad پروٹین پرکھ کے ری ایجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ پروٹین (20–30 ug) کو 1:1 کے ساتھ 2: نمونہ بفر (20 فیصد گلیسرول، 4 فیصد SDS، 10 فیصد 2- ملایا گیا تھا۔ ME، 0.05 فیصد بروموفینول بلیو، اور 1.25 M Tris [pH 6.8])، 8 یا 15 فیصد SDS-PAGE جیلوں پر لوڈ کیا جاتا ہے، اور 150 V پر 90 منٹ تک چلتا ہے۔ سیلولر پروٹین کو مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق بائیو ریڈ سیمی ڈرائی ٹرانسفر سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے امیونو بلوٹ پولی وینیلائیڈین ڈیفلورائیڈ جھلیوں (بائیو ریڈ) میں منتقل کیا گیا۔ اس کے بعد جھلیوں کو راتوں رات متعلقہ p-NF-入B, NF-入B, pI入B اور ایکٹین پرائمری اینٹی باڈیز (Abcam, Cambridge, UK) کے ساتھ Tris-buffered saline میں 5 فیصد سکمڈ دودھ اور 0.1 فیصد ٹوئن کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 20. اگلے دن، دھبوں کو تین بار Tris-buffered saline (0.1 فیصد Tween 20) کے ساتھ دھویا گیا اور HRP-conjugated سیکنڈری اینٹی IgG اینٹی باڈی کے ساتھ 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا (1:2000–1 :20,000)۔ دھبوں کو ٹریس بفرڈ نمکین (0.1 فیصد ٹوین 20) کے ساتھ تین بار دوبارہ دھویا گیا، اور کیمیلومینیسینٹ سبسٹریٹ ای سی ایل پلس (ایمرشام بایوسینسز، پسکاٹاوے، این جے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے امیونو ایکٹو بینڈ تیار کیے گئے۔
3.12 شماریاتی تجزیہ
تجرباتی ڈیٹا کو اوسط o SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ شماریاتی اہمیت کی سطح کا تعین تغیرات (ANOVA) کے تجزیہ سے کیا گیا جس کے بعد متعدد موازنہوں کے لیے Dunnett کا t-ٹیسٹ۔ 0.05 سے کم قدروں کو اہم سمجھا گیا۔
Cistanche سالسا اقتباس
4. نتائج
اس مطالعہ میں، ہم نے 13 معروف مرکبات کو الگ تھلگ کرنے اور شناخت کرنے کے علاوہ، ڈیریپلیکیشن کی حکمت عملی کا استعمال کرتے ہوئے، پانچ نئے فینیلپروپینائڈ-متبادل گلائکوسائیڈز کے ڈھانچے کو الگ تھلگ اور واضح کیا، جن کا نام cistansalside AE (5, 6, 12, 17, اور 18) ہے۔ معلوم مرکبات کا تعین کیا گیا تھا کہ وہ lipedoside AI (1) [21]، 23-acetylacteoside (2) [22]، isocistanoside C (3) [15]، osmanthuside B (4) [21]، epimeridinoside A ( 7) [15]، cistanoside D (8) [23]، salsaside B (9) [6]، tubuloside E (10) [16]، cistanoside M (11) [15]، isomartynoside (13) [24]، salsaside C (14) [6]، jionoside C (15) [25] اور salsaside F (16) [6]۔ ان کے ڈھانچے کو وسیع سپیکٹروسکوپک ڈیٹا کے تجزیہ اور لٹریچر میں رپورٹ کردہ ڈیٹا کے مقابلے کے ذریعے قائم کیا گیا تھا۔ اس بات کی توثیق کی گئی تھی کہ فینیلپروپینائڈ-متبادل گلائکوسائیڈز کی عارضی طور پر پیش گوئی کی گئی ساختیں ان کے حقیقی ڈھانچے سے صحیح طور پر مماثل تھیں۔
Cistanche سالسا کے عرق کا فائدہ
حوالہ جات
1. شیمامورا، ایچ. میازاوا، ایم. Enomoto, K.; ناکامورا، S.-I.؛ کامیوکا، H. سلمونیلا ٹائفیموریئم TA1535/pSK1002 umu ٹیسٹ میں Cistanche salsa سے فیٹی ایسڈز کے ذریعے Trp-P-1 کی SOS-دلانے والی سرگرمی کو دبانا۔ نیٹ پیداوار لیٹ 1997، 10، 261–265۔ [کراس ریف]
2. جیون، ای. چنگ، K.-S.؛ این، ایچ-جے سومی پروسٹیٹک ہائپرپلاسیا کی ترقی پر سیستانچ سالسا کے انسداد پھیلاؤ کے اثرات۔ کر سکتے ہیں۔ جے فزیول۔ فارماکول۔ 2016، 94، 104-111۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
3. Xu, C.; جیا، ایکس۔ Xu, R.; وانگ، وائی؛ چاؤ، Q. سن، ایس. ہربا سیستانچ کا تیز تر امتیاز ملٹی سٹیپ انفراریڈ میکرو فنگر پرنٹنگ کے ساتھ مل کر کلاس قیاس کی نرم آزاد ماڈلنگ (SIMCA)۔ سپیکٹروکیم۔ ایکٹا پارٹ اے مول۔ بائیومول۔ SpectrosCistanche2013, 114, 421–431۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
4. جیانگ، Y.؛ لی، ایس پی؛ وانگ، وائی ٹی؛ چن، ایکس جے؛ ٹی یو، اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی-ڈائیوڈ سرنی کا پتہ لگانے-ماس اسپیکٹومیٹری کے ساتھ فنگر پرنٹ کے ذریعے ہربا سیستانچ کا PF تفریق۔ J. Chromatogr 2009، 1216، 2156–2162۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
5. کوبایشی، ایچ. کارساوا، ایچ. Miyase، T. فوکوشیما، S. Cistanchis Herba کے اجزاء پر مطالعہ۔ V. دو نئے Phenylpropanoid Glycosides، Cistanosides E اور F. Chem کی تنہائی اور ساخت۔ فارم۔ بیل. 1985، 33، 1452–1457۔ [کراس ریف]
6.Lei, L.; جیانگ، وائی؛ لیو، ایکس ایم؛ Tu, P.-F.; وو، ایل-جے؛ چن، F.-K. Cistanche سالسا سے نئے Glycosides. ہیلو۔ چم ایکٹا 2007، 90، 79-85۔ [کراس ریف]
7. Kartbaeva, EB; ساکیپووا، زیڈ بی؛ Ibragimova، LN؛ Kapsalyamova, EN; Ternynko, II جمہوریہ قازقستان میں بڑھتے ہوئے Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck کے فینولک مرکبات کا ساختی مطالعہ۔ جے کیم فارم۔ Res. 2015، 7، 120–122۔
8. Liu, J.-Y.; گو، زیڈ جی؛ زینگ، Z.-L. Cistanche سالسا کے معطلی کلچر کو پیشگی کھانا کھلانے سے phenylethanoid glycosides کا بہتر جمع ہونا۔ بائیو کیم۔ انج. J. 2007، 33، 88-93. [کراس ریف]
9. Maruyama, S.; اکاساکا، ٹی. یامادا، K.؛ Tachibana، H. Cistanche سالسا اقتباس اسی طرح پروٹین کے پابند ہیں۔
پولی سیکرائڈ-K (PSK) سیل لائنوں کی مختلف اقسام پر۔ جے ٹریڈ۔ میڈ. 2008، 25، 166–169۔
10. Tian, X.-F.; Pu, X.-P. Cistanches salsa سے phenylethanoid glycosides neurons میں 1-methyl-4-phenylpyridinium ion کی طرف سے حوصلہ افزائی apoptosis کو روکتا ہے۔ J. Ethnopharmacol 2005، 97، 59-63۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
11. مشیل، ٹی. حلابلاکی، ایم. Skaltsounis، AL نئے تصورات، تجرباتی نقطہ نظر، اور قدرتی ذرائع سے ناول Phytoestrogens کی دریافت کے لیے ڈیریپلیکیشن کی حکمت عملی۔ پلانٹا میڈ۔ 2013، 79، 514–532۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
12. ڈی میڈیروس، ایل ایس؛ ابریو، ایل ایم؛ نیلسن، اے. انگمار، ایچ. لارسن، TO؛ نیلسن، KF؛ Rodrigues-Filho، E. اینڈو فیٹک فنگس سیٹوفوما sp سے depsides theaflavins ST اور lecanora DF کی ڈی ریپلیکیشن گائیڈڈ آئسولیشن۔ فائٹو کیمسٹری 2015، 111، 154–162۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
13. Rakotondraibe، LH؛ Rasolomampianina, R.; پارک، H.-Y.؛ لی، جے؛ سلیبوڈنک، سی. بروڈی، پی جے؛ بلاسیاک، ایل سی؛ ہل، آر. TenDyke, K.; شین، وائی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. منتخب Streptomyces پرجاتیوں سے اینٹی پرولیفیریٹو اور اینٹی پلاسموڈیل مرکبات۔ بائیو آرگ۔ میڈ. کیم لیٹ 2015، 25، 5646–5649۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
14۔جیانگ، وائی۔ لیو، ایف جے؛ وانگ، Y.-M.؛ لی، H.-J. الیکٹرو سپرے آئنائزیشن ٹینڈم کواڈروپول – ٹائم آف فلائٹ ماس سپیکٹرومیٹری کے ساتھ اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعہ سیلوسی سیمین سے ناول ہیپاٹوپروٹیکٹو ٹرائٹرپینائڈ سیپوننز کی ڈیریپلیکیشن گائیڈڈ آئسولیشن۔ جے فارم۔ بایومیڈ مقعد 2017، 132، 148–155۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
15. Zhang، J.؛ لی، سی. Che, Y.; وو، جے؛ وانگ، زیڈ؛ Cai، W. لی، وائی۔ ما، ز. Tu, P. LTQ-Orbitrap پر مبنی حکمت عملی برائے روایتی چینی طب ٹارگٹڈ کلاس دریافت، شناخت اور اس کی اومکس تحقیق: ہربا سیستانچس کی تین مختلف انواع میں phenylethanoid glycosides پر ایک کیس اسٹڈی۔ RSC Adv. 2015، 5، 80816–80828۔ [کراس ریف]
16. یوشیزاوا، ایف۔ دیاما، ٹی. تاکیزاوا، این. عثمان غنی، کے. احمد، ایم. دی کنسٹیٹیوئنٹس آف سیستانچے ٹیوبولوسا (شرینک) ہک۔ f II ایک نئے فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈ اور ایک نئے نیولیگنان گلائکوسائیڈ کی تنہائی اور ساخت۔ کیم فارم۔ بیل. 1990، 38، 1927–1930۔ [کراس ریف]
17. تاناکا، ٹی. ناکاشیما، ٹی. Ueda, T.; Tomii, K.; کوونو، I. الڈوز اینانٹیومرز کا الٹ فیز HPLCistancheChem کے ذریعے امتیازی سلوک۔ فارم۔ بیل. 2007، 55، 899-901۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
18. وونگ، ڈبلیو ایس؛ گو، ڈی؛ وانگ، ایکس ایل؛ ین، زیڈ کیو؛ زیا، بی؛ لی، این عربیڈوپسس تھالیانا میں cis-cinnamic ایسڈ کا مطالعہ۔ پلانٹ فزیول۔ بائیو کیم۔ 2005، 43، 929-937۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
19.Kahnt, G. مختلف pH پر آبی محلول کی شعاع ریزی کے دوران ہائیڈروکسی سینامک ایسڈز کا ٹرانس-سیس-ایکویلیبریم۔ فائٹو کیمسٹری 1967، 6، 755–758۔ [کراس ریف]
