Cistanche Salsa میں امیونوموڈولیٹری عوامل

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

شنجیرو مارویاما،" کوجی یامادا، ہیروفومی تاچیبانا۔

Cistanche سالسا(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae ایک طفیلی پودا ہے جو جاپان میں مشرقی دواؤں کے ٹانک کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ C، سالسا ایکسٹریکٹ نے انسانی Ivmph نوڈ لیمفوسائٹس میں IgM اور IgG دونوں کی پیداوار کو بڑھایا ہے۔ مزید برآں، C، سالسا ڈائیلیسیٹ (CSD) a3 کے ساتھ ڈائیلاسز جھلی کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا ہے۔ اس کے علاوہ، یہ معمولی سیل پھیلاؤ کی حوصلہ افزائی. تاہم، اس کے برعکس، انسانی برکٹ کی لیمفوما سیل لائن نملوا میں اپوپٹوسس کے ساتھ سی ایس ڈی کی حوصلہ افزائی کی گئی نمو کی روک تھام۔ یہ نتائج CSD میں فعال اجزاء کی ممکنہ موجودگی کی نشاندہی کرتے ہیں جو لیمفوسائٹس کے لیے مخصوص ہیں، اس طرح اب تک ان اجزاء کی کیمیائی خصوصیات کو واضح نہیں کیا گیا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے CSD میں فعال اجزاء کی کیمیائی خصوصیات کی چھان بین کی۔ بی سیل لائنوں میں مذکورہ بالا دونوں سرگرمیاں CSD کے آٹوکلیو علاج کے ذریعہ غیر فعال نہیں کی گئیں۔ جیل فلٹریشن کالم کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے پایا کہ فعال حصوں کی چوٹیاں مختلف حصوں میں مرکوز تھیں۔ ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ CSD میں فعال اجزاء کی کم از کم 2 قسمیں ہیں، اور وہ پولی سیکرائڈز ہو سکتے ہیں کیونکہ وہ پانی میں گھلنشیل اعلی مالیکیولر ویٹ اجزاء اور تھرموسٹیبل ہیں۔

مطلوبہ الفاظ: Cistanche سالسا، اعلی سالماتی وزن، IgM، ترقی کی روک تھام۔

تعارف

Cistanche سالسا(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae ایک طفیلی پودا ہے جو جاپان میں مشرقی دواؤں کے ٹانک کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ چین میں، یہ پودا ایک اہم روایتی دوا ہے جو گردے کی کمی اور نیورسٹینیا کے علاج کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ وٹرو اسٹڈیز کے ذریعے، ہم پہلے ہی سی سالسا کے مدافعتی نظام پر اثرات کی اطلاع دے چکے ہیں۔ پہلا. ہم نے یہ ظاہر کیا کہ C. سالسا ایکسٹریکٹ نے انسانی لمف نوڈ لیمفوسائٹس میں IgM اور IgG کی پیداوار کو بڑھایا۔ دوسرا، ہم نے دکھایا کہ C. salsa dialysate (CSD) نے 3،500-Da مالیکیولر ویٹ کٹ آف ڈائلیسس میم-برین کا استعمال کرتے ہوئے انسانی بی سیل لائن BALL میں IgM کی پیداوار کو بڑھایا-1; اس کے علاوہ، اس نے خلیوں کے پھیلاؤ کو ایک چھوٹی سی حد تک متاثر کیا۔2 مزید برآں، CSD کا ایک مخالف اثر ہے جس کے تحت یہ انسانی برکٹ کے لیمفوما سیل لائن، نملوا میں apoptosis کے ساتھ بڑھنے میں رکاوٹ پیدا کرتا ہے۔ بی سیلز کا ایکٹیویشن، جبکہ اپوپٹوسس دوسرے سگنلز کی کمی کے نتیجے میں ہوا جو B-سیل کی تفریق کے لیے ضروری ہیں، جیسے سائٹوکائنز اور سیل سیل رابطہ؛ تاہم، CSD کی کیمیائی خصوصیات کو پچھلے کسی بھی مطالعے میں واضح نہیں کیا گیا تھا۔ لہذا، اس مطالعہ میں، ہم نے CSD میں فعال اجزاء کی کیمیائی خصوصیات کی چھان بین کی۔

مواد اور طریقے

ہمارے پچھلے مطالعہ میں سی ایس ڈی کو اسی طریقہ سے تیار کیا گیا تھا۔ CSD کو فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) میں 20 mg/ml پر تحلیل کیا گیا۔ تیار شدہ محلول (0.8 ملی لیٹر) کو درخواست سے پہلے ایک فلٹر (0.22 um) سے گزارا گیا تھا اور پھر اسی محلول کے ساتھ TOYOPEARL HW-40F پر مشتمل کالموں کے ذریعے تیار کیا گیا تھا۔ (1. ، اور Sephacryl S-400HR(10×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); اور پھر 1 ملی لیٹر (30 قطرے) کے حصے جمع کیے گئے۔ جیلوں کے باطل حجم اور جزوی اجزاء کے تخمینی مالیکیولر وزن (MW) کا تعین کرنے کے لیے، بلیو ڈیکسٹران (BD) (Sigma-Aldrich Japan KK، Japan)؛ اور Leuconostoc spp. (Sigma-Aldrich Japan KK, Japan) سے حاصل کردہ معلوم MW کا dextrans، ieof MW2,000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3)اور 6 kDa (D4)؛ اور cyanocobalamin (VB12, MW: 1355.4) (واکو پیور کیمیکل انڈسٹریز لمیٹڈ، جاپان) استعمال کیے گئے۔ فینول سلفورک ایسڈ کے طریقہ کار اور PIERCETM bicinchoninic acids (BCA) پروٹین پرکھ کٹ (Thermo Fisher Scientific Inc., USA) کے ساتھ بالترتیب ہر ایک حصے کے کل شوگر اور پروٹین کے مواد کا تعین کیا گیا۔ گلوکوز اور بوائین سیرم البومین کو متعلقہ معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ مزید، ہر ایک حصہ کے 320nm (A:2o) پر جاذبیت کی پیمائش کی گئی۔ بلیو ڈیکسٹران اور سائانوکوبالامین کے اخراج کی چوٹیوں کا تعین ان کی جاذبیت کی قدر 260 nm سے کیا گیا تھا، اور معلوم MW کے ڈیک ٹرانس کی چوٹیوں کا تعین فینول-سلفورک ایسڈ کے طریقہ کار سے کیا گیا تھا۔ اس کی تھرموسٹ ایبلٹی کا اندازہ لگانے کے لیے CSD کو 20 منٹ کے لیے 120 ڈگری پر آٹوکلیو کیا گیا تھا۔ بائیوسیز میں، سیل کلچر اور آئی جی ایم کی پیمائش ہمارے پچھلے مطالعے میں اسی طریقہ سے کی گئی تھی۔

Cistanche سالسا اقتباس

نتائج اور مباحثہ

شکل 1 HW-40F پر CSD کے جیل فلٹریشن کالم کرومیٹوگرامس کو دکھاتا ہے۔ فگر لا سے، ڈیکسٹران مارکر D4 کی بنیاد پر فعال اجزاء کی میگاواٹ کا تخمینہ 6 kDa سے زیادہ تھا۔ مزید برآں، دونوں سی ایس ڈی سرگرمیاں، یعنی آئی جی ایم کی پیداوار کو بڑھانا اور نمو کو روکنا، آٹوکلیو ٹریٹمنٹ (شکل 2) کے ذریعے غیر فعال نہیں کیا گیا تھا، حالانکہ کچھ اجزاء جمع ہو گئے تھے اور CSD کو 0 سے گزرنے کے بعد ضائع ہو گئے تھے۔{6} }um فلٹر۔ CSD اور autoclaved CSD کے اخراج کے نمونے تقریباً ایک جیسے تھے، تاہم، آٹوکلیوڈ CSD میں IgM کی پیداوار کو بڑھانے کی نسبتی سرگرمی غیر علاج شدہ CSD سے کم تھی۔ کچھ وجوہات یہ معلوم ہوتی ہیں کہ مجموعوں میں فعال اجزاء موجود تھے یا کچھ فعال اجزاء غیر فعال تھے۔ HW-55F پر کرومیٹوگرافی کے نتائج نے 2 قسم کے امیونوموڈولیٹری عوامل کی ممکنہ موجودگی ظاہر کی: پہلا، fr میں مرتکز۔ نمبر 32۔ ایک اعلی مالیکیولر ویٹ ایکٹو جزو (HCS) تھا جو IgM کی پیداوار کو بڑھا سکتا تھا، جبکہ دوسرا، fr میں مرتکز تھا۔ نمبر 50، ایک درمیانی مالیکیولر ویٹ ایکٹو جزو (MCS) تھا جو سیل کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے (شکل 3)۔ تاہم، HCS اور MCS (بالترتیب fr.no.32 اور 50) دونوں کے لیے حاصل کی گئی چوٹیاں اتنی تیز نہیں تھیں جتنی کہ معلوم MW کے dextrans کی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ یہ مشاہدات اس امکان کی نشاندہی کرتے ہیں کہ CSD کی تیاری کے دوران مصنوعی طور پر پیدا ہونے والے ضمنی مصنوعات، فعال اجزاء کے پولیمر جو آسانی سے تباہ ہو جاتے ہیں اور متعدد اکائیوں پر مشتمل ہوتے ہیں، یا مختلف فعال اجزاء جن کی اصل میگاواٹ مختلف ہوتی ہے۔ کرومیٹوگرامس پر اخراج کے نمونوں سے پتہ چلتا ہے کہ HCS اور MCS سے خالص اجزاء حاصل کرنا آسان نہیں ہے کیونکہ ایسا لگتا ہے کہ مختلف اجزاء ہیں جن میں قدرے مختلف MWs ہیں جیسا کہ اوپر بتایا گیا ہے۔ اگرچہ دونوں فعال اجزاء کا مرکب ہیں، ایسا معلوم ہوتا ہے کہ HCS 70 kDa سے زیادہ میگاواٹ کے اجزاء پر مشتمل ہے، جبکہ MCS 6 kDa سے زیادہ میگاواٹ کے اجزاء پر مشتمل ہے۔ HCS کو HW-55F پر ایک ایسے حصے میں ایلوٹ کیا گیا تھا جو علیحدگی کی حد سے باہر تھا۔ Sephacryl-S400.a پر HCS (fr.no.36) کا حصہ D1 مارکر کے اسی حصے میں ایلوٹ کیا گیا تھا، جو MW 2،000 kDa (شکل 4) کا ہے۔ عام طور پر، پولی سیکرائڈز اور پروٹین کو پودوں کے نچوڑ میں پانی میں گھلنشیل ہائی میگاواٹ اجزاء کے طور پر لیا جاتا ہے۔ چونکہ تقریباً تمام فعال پروٹین گرمی کے علاج سے غیر فعال ہوتے ہیں، اس لیے وہ پولی سیکرائڈز لگتے ہیں۔ تاہم، پارک ایٹ. al نے تھرموسٹیبل سائٹوٹوکسک چھوٹے پروٹین کی اطلاع دی ہے جسے viscotoxin کہتے ہیں، جو مسلیٹو (Viscum album L. Viscaceae) کے نچوڑ سے تیار کیا جاتا ہے۔ کم میگاواٹ ہے، پروٹین کے اعلی مواد کو ظاہر کرتا ہے. ان حقائق کو مدنظر رکھتے ہوئے، MCS پروٹین سے منسلک پولی سیکرائیڈ ہو سکتا ہے یا viscotoxins کی طرح تھرموسٹیبل پروٹین ہو سکتا ہے۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ 2 فعال اجزاء پولی سیکرائڈز ہوسکتے ہیں۔ دوسری صورت میں، MCS ترموسٹیبل پروٹین ہو سکتا ہے.

حوالہ جات

1) ڈینگ، ایم، ژاؤ، جے وائی، جو، ایکس ڈی، ٹو، پی ایف، جیانگ، وائی، لی، زیڈ بی: نیورونل سیلز میں ٹی این ایف الفا سے متاثرہ اپوپٹوس پر ٹیوبولوسائیڈ بی کا حفاظتی اثر۔ ایکٹا فارماکول۔ گناہ، 25، 1276-1284، 2004۔

2) مارویاما، ایس.، یامادا، کے، تاچیبانا، ایچ:Cistanche سالسا اقتباسانسانی B سیل لائن میں بہتر IgM پیداوار، BALL-1.J. ٹریڈ. میڈ، 24،209-211،2007۔

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche سالساانسانی برکٹ کے لیمفوما سیل لائن نملوا میں حوصلہ افزائی اپوپٹوس نکالیں۔ جے ٹریڈ میڈ، 25،24-27،2008۔

4) پارک۔ جے ایچ، ہیون، سی کے، شن ایچ کے: ہیٹ ٹریٹڈ مسلیٹو (وسکم البم) میں اجزاء کے سائٹوٹوکسک اثرات۔ کینسر لیٹ، 139، 207-213، 1999۔

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Mistletoe viscotoxins قدرتی قاتل سیل ثالثی cytotoxicity میں اضافہ کرتے ہیں۔ Eur.J بائیو کیم، 269، 2591-2600، 2002۔

6) فشر، ایم، یانگ، ایل ایکس: پولی سیکرائیڈ-کے (PSK) کے اینٹی کینسر اثرات اور میکانزم: کینسر کے امیونو تھراپی کے مضمرات۔ Anticancer Res.,22,1737-1754,2002۔

cistanche سپلیمنٹس