پارٹی 1: انگلی کے باجرے کی سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) سری لنکا میں کاشت کی جانے والی اقسام

مزید معلومات کے لیے۔ رابطہtina.xiang@wecistanche.com

سوزش کی ثالثی اور آکسیڈیٹیو تناؤ سے وابستہ بیماریوں کا پھیلاؤ دنیا بھر میں بڑھتا جا رہا ہے، جس سے نئے ذرائع کی بڑھتی ہوئی مانگ پیدا ہو رہی ہے۔غیر سوزشیایجنٹوں اوراینٹی آکسیڈینٹ. یہ مطالعہ ان وٹرو arachidonate {{0}} lipoxygenase (A5-LOX), xanthine oxidase (XO), hyaluronidase, oxidative burst inhibitory activity, and antioxidant خصوصیات کا تعین کرنے پر مرکوز تھا راوی، Rawana ، اور اوشادھا انگلی باجرا کی قسمیں ایتھانولک اور میتھانولک نچوڑ کا استعمال کرتی ہیں۔ تمام نچوڑ کے درمیان، اوشادھا کے میتھانولک نچوڑ نے سب سے زیادہ A5-LOX （ICsvalue∶ 484.42ug/ml） اور XO （ICsvalue∶764.34ug/ml) روکنے والی سرگرمیوں کی نمائش کی۔ تمام عرقوں نے 50 فیصد سے کم hyaluronidase کی روک تھام کی سرگرمی 1 mg/ml ارتکاز پر ظاہر کی، میتھانولک نچوڑ نے پورے خون کے phagocytes سے پیدا ہونے والی ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) پر معتدل روک تھام کی صلاحیت ظاہر کی، ICs0 اقدار کے ساتھ 26.9 اور 27.7 ug/ml کے درمیان، جب ibuprofen (IC.value:11.18ug/ml) کے مقابلے میں۔ تمام نچوڑ نے انسانی خون سے الگ تھلگ پولیمورفونوکلیئر نیوٹروفیلز سے تیار کردہ ROS کی قوی روک تھام ظاہر کی جب ibuprofen (ICsvalue: 2.47 ug/ml) اور میتھانولک اور ایتھانولک نچوڑ کے ICsvalues ​​0.29 سے 0.47 ug/3ml، 41ug/3ml. بالترتیب تمام نچوڑ میں نمایاں طور پر زیادہ مقدار میں فینولک مرکبات شامل تھے۔flavonoidsاور 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic) acid (ABTS)cation,2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl( ڈی پی پی ایچ)، اور آکسیجن ریڈیکلز۔ اس کے علاوہ، وہ دھاتی آئنوں اور چیلیٹ دھاتی آئنوں کو کم کرنے کے قابل تھے جو ریڈیکل پیدا کرنے والے رد عمل کو ختم کرتے ہیں۔ سری لنکا میں کاشت کی جانے والی انگلی باجرے کی کسی بھی قسم کے کسی بھی نچوڑ کی A{10}LOX، XO، hyaluronidase، اور oxidative burst inhibitory خصوصیات کی یہ پہلی رپورٹ ہے۔ نتائج نے ان انگلیوں کے جوار کے عرق کو اینٹی سوزش والی دوائیوں کے امیدواروں کے قدرتی ذرائع کے طور پر استعمال کرنے کی صلاحیت کا انکشاف کیا۔ مزید برآں، نتائج نے اشارہ کیا کہ راوی، راوانہ اور اوشادھا قسمیں اینٹی آکسیڈنٹس کے اچھے ذرائع ہیں۔ لہذا، انگلی کے باجرے کی ان اقسام کا مستقل طور پر استعمال آکسیڈیٹیو تناؤ سے وابستہ بیماریوں کی روک تھام اور غذائی انتظام میں اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔

مزید مصنوعات جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

سوزشکا ایک دفاعی ردعمل ہے۔مدافعتینقصان دہ محرکات جیسے پیتھوجینز، خراب خلیات، اور الرجک یا کیمیائی جلن کو ختم کرنے کے ساتھ ساتھ شفا یابی کے عمل کو شروع کرنے کا نظام۔ اگرچہ سوزش ایک عام ردعمل ہے اگر بے قابو ہو، ضرورت سے زیادہ سوزش بہت سی شدید اور دائمی بیماریوں کا باعث بنتی ہے۔ فی الحال، دنیا بھر میں سوزش کی ثالثی کی بیماریوں کا پھیلاؤ بڑھ رہا ہے، جس سے نئے اور موثر انسداد سوزش ایجنٹوں کی بڑھتی ہوئی مانگ پیدا ہو رہی ہے [1، 2]۔

Arachidonate 5-lipoxygenase(A5-LOX) ایک کلیدی انزائم ہے جو سوزش کے عوارض اور الرجک رد عمل کے قوی ثالثوں کے بایو سنتھیسز میں شامل ہے۔ یہ arachidonic ایسڈ سے leukotrienes کی تشکیل کو متحرک کرتا ہے [3]۔ Leukotrienes دمہ، الرجک rhinitis، دائمی برونکائٹس، رمیٹی سندشوت، سوزش آنتوں کی بیماری، اور الرجک رد عمل [3,4] سمیت کئی سوزش کی بیماریوں کے روگجنن میں endogenous ثالث ہیں۔ لہذا، A5-LOX کی روک تھام مختلف سوزشی عوارض کی روک تھام اور علاج میں اہم ہے۔

Xanthine oxidase (XO) hypo-xanthine to xanthine اور xanthine to uric acid[5] کے آکسیکرن کو متحرک کرتا ہے۔ XO inhibitors یورک ایسڈ کی حیاتیاتی ترکیب کو روکتے ہیں اور اس کے نتیجے میں یورک ایسڈ کی سطح کے ساتھ ساتھ عروقی آکسیڈیٹیو تناؤ کو بھی کم کرتے ہیں۔ XO کے اتپریرک عمل کے دوران، رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی تشکیل ہوتی ہے، اور اس وجہ سے، XO دیگر سوزشی عوارض میں بھی روگجنیاتی کردار ادا کرتا ہے۔ نتیجتاً، XO inhibitors مختلف سوزشی عوارض کے علاج میں اہم ہیں جن کے ساتھ XO کی کیٹلیٹک عمل بھی ہوتا ہے [2,5]۔

Hyaluronidase ایک lysosomal enzyme ہے جو mucopolysaccharides جیسے hyaluronic ایسڈ کے ہائیڈرولیسس کو اتپریرک کرتا ہے۔ رمیٹی سندشوت میں، hyaluronidase ضرورت سے زیادہ ہائیلورونک ایسڈ کو کم کرتا ہے اور اس کی مقدار اور سالماتی وزن کو کم کرتا ہے، جو گٹھیا کی علامات پیدا کرتا ہے [6]۔ hyaluronic ایسڈ کے انحطاط کو روکنا hyaluronidase-mediated پیتھولوجیکل حالات کو کنٹرول کرنے کے لیے اہم اور ضروری ہے[7]۔

سوزش والی حالتوں میں، مدافعتی خلیات سوزش کی جگہ کی طرف متوجہ ہوتے ہیں۔ دفاعی اور امیونولوجیکل رد عمل کے دوران، مدافعتی خلیوں میں رہنے والے NADPH آکسیڈیز کو چالو کیا جاتا ہے اور بڑی مقدار میں ROS پیدا کرتا ہے جس سے آکسیڈیٹیو برسٹ ہوتا ہے [1، 8]۔ ROS کی کم اور معتدل مقدار مختلف جسمانی عملوں میں فائدہ مند ہے۔ تاہم، ROS کی زیادہ پیداوار سیلولر افعال کو غیر منظم کرتی ہے جس کے نتیجے میں سوزش کی حالت میں اضافہ ہوتا ہے [8,9]۔ لہذا، ROS-حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو برسٹ کی روک تھام سوزش کی ثالثی کی بیماریوں کو روکنے اور ان کا انتظام کرنے کا ایک ممکنہ علاج ہے۔

آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن کے دوران،آزاد ذراتبشمول ROS ضمنی مصنوعات کے طور پر تشکیل پاتے ہیں [10]۔ عام سیلولر میٹابولزم کے علاوہ، بہت سے دوسرے عوامل ہیں جو آزاد ریڈیکلز کی تشکیل کا باعث بنتے ہیں، اور اگر آزاد ریڈیکلز کے پیدا ہونے کی شرح نیوٹرلائزیشن کی شرح سے زیادہ ہو جائے تو، آکسیڈیٹیو تناؤ۔ پیدا ہوتا ہے، اور یہ تمام اشتعال انگیز بیماریوں میں نمایاں طور پر حصہ ڈالتا ہے۔ چونکہ اینٹی آکسیڈنٹس آزاد ریڈیکلز کی تشکیل کو روکنے اور آزاد ریڈیکلز کو بجھانے کی صلاحیت رکھتے ہیں، اس لیے جسمانی افعال کو درست طریقے سے برقرار رکھنے کے لیے اینٹی آکسیڈینٹس اور فری ریڈیکلز کے درمیان توازن ضروری ہے [8,11,12]۔

انگلی باجرا(Eleusine coracana(L.)Gaertn.) اشنکٹبندیی علاقوں میں سب سے اہم چھوٹا باجرا ہے، اور انگلی باجرے کی کئی علاجاتی خصوصیات پہلے بھی بتائی جا چکی ہیں [13-17]۔ تاہم، انگلی باجرے کی اقسام جو اس وقت سری لنکا میں کاشت اور استعمال کی جاتی ہیں، علاج کی خصوصیات کے بارے میں سائنسی ثبوت کا فقدان ہے۔

اور صارفین کے لیے ممکنہ صحت کے فوائد۔ نتیجتاً، سری لنکا کی انگلی باجرے کی اقسام کی سوزش اور اینٹی آکسیڈنٹ خصوصیات کا مطالعہ کرنا اور صارفین کی غذائیت اور صحت کی حالت کو بہتر بنانے کی ان کی صلاحیت کو پہچاننا ضروری ہے۔ سوزش کی ثالثی اور آکسیڈیٹیو تناؤ سے وابستہ بیماریوں کا پھیلاؤ دنیا بھر میں بڑھتا جا رہا ہے، جس سے اینٹی سوزش ایجنٹوں اور اینٹی آکسیڈینٹس کے نئے ذرائع کی ابھرتی ہوئی مانگ پیدا ہو رہی ہے[1, 2]۔ اس پس منظر کے ساتھ، موجودہ مطالعہ A5-LOX، XO، hyaluronidase، oxidative burst inhibitory activitys، اور antioxidant خصوصیات کے لحاظ سے وٹرو اینٹی سوزش خصوصیات کے لیے سری لنکا کی انگلی باجرا کی اقسام کا جائزہ لینے پر مرکوز تھا۔ .

2. مواد اور طریقہ

2.1. نمونہ جمع کرنا اور تیاری. انگلی باجرے کی اقسام جو سری لنکا میں محکمہ زراعت کی طرف سے کاشت کے لیے تجویز کی گئی ہیں، یعنی راوی، راوانہ اور اوشادھا، کو فیلڈ کراپس ریسرچ اینڈ ڈیولپمنٹ انسٹی ٹیوٹ (FCRDI)، مہیلوپلاما، سری لنکا سے جمع کیا گیا تھا۔ ان اقسام کی کاشت لو کنٹری ڈرائی زون میں ایف سی آر ڈی آئی مہائیلوپلاما میں تجرباتی پلاٹوں میں کی گئی تھی اور ان بیجوں کو محکمہ زراعت، سری لنکا کی سیڈ سرٹیفیکیشن سروس سے تصدیق شدہ کیا گیا تھا۔

انگلیوں کے باجرے کے بیجوں کو نکال دیا گیا تھا (TM 05C، Satake Cor-poration، Japan)، اور پورے اناج سے آٹے کو مل کر (Pulverisette 14، Fritsch، Germany) اور 0.5 ملی میٹر کی چھلنی سے گزر کر حاصل کیا گیا تھا۔ پورے اناج کے آٹے کو الگ الگ ایتھنول اور میتھانول کے ساتھ نکالا گیا۔ سارا اناج کا آٹا (100 گرام) سالوینٹس (400 ملی لیٹر) کے ساتھ رات بھر کمرے کے درجہ حرارت (28±2 ڈگری) پر مقناطیسی اسٹرر کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا اور 20 منٹ کے لیے 4000 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو الگ سے جمع کیا گیا تھا، اور باقیات کو ایک ہی شرائط کا استعمال کرتے ہوئے دو بار دوبارہ نکالا گیا تھا۔ ایک روٹری ایوپوریٹر (R-114، Büchi Labortechnik AG، سوئٹزرلینڈ) کا استعمال کرتے ہوئے 40 ڈگری پر کم دباؤ میں سپرنٹینٹس کو جوڑ کر خشک کرنے کے لیے بخارات بنا دیا گیا۔ سالوینٹس سے پاک عرقوں کو ایئر ٹائٹ شیشے کے کنٹینرز میں-20 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا جب تک کہ تجزیہ کے لیے استعمال نہ کیا جائے۔

2.2۔انزائمز، کیمیکلز اور آلات. Folin-Ciocalteu فینول ریجنٹ، ایلومینیم کلورائیڈ، 2,4،6-Tri(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ)، 2,2'-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)،2،2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)، quercetin،6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman{{19} }کاربو آکسیلک ایسڈ (ٹرولوکس)، ایتھیلینیڈیامینیٹیٹراسیٹک ایسڈ (EDTA)، 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt(ABTS), فلوروسین،3-( 2-پیریڈیل)-5،6-ڈفینائل-1،2،4-ٹرائزین پی، پیڈی سلفونک ایسڈ مونوسوڈیم نمک

ہائیڈریٹ(فیروزین)، آراچیڈونیٹ 5-لیپوکسیجن، لینولک ایسڈ، بائیکلین، زانتھائن آکسیڈیز، زانتھائن، ایلوپورینول، ہائیلورونیڈیز، ہائیلورونک ایسڈ سوڈیم نمک، پی-ڈائیمیتھائیلامینوبینزالڈہائیڈ، گیلک ایسڈ، ٹینک ایسڈ، ٹینک ایسڈ، ٹینک ایسڈ اور سوڈیم سے خریدے گئے تھے۔ سگما الڈرچ، MO، USA۔ HBSs* plus اور HBSS کو Thermo Fisher Sci-entific Inc.، Massachusetts، USA سے خریدا گیا تھا۔ Zymosan Wako Pure Chemical Industries Ltd.، Osaka، Japan سے خریدا گیا تھا۔

Luminol (3-aminophthalhydrazide) Alfa Aesar GmbH & Co KG، Karlsruhe، جرمنی سے خریدا گیا تھا۔ لیمفوسائٹ علیحدگی کا میڈیم MP Biomedicals, Inc.، Ohio، USA سے خریدا گیا تھا۔ تجربات میں استعمال ہونے والے دیگر تمام کیمیکلز اور ری ایجنٹس ACS، HPLC، اور تجزیاتی درجات کے تھے۔ آکسیجن ریڈیکل جذب کرنے کی صلاحیت کا تعین کرنے کے لیے، فلوروسینس مائکروپلیٹ ریڈر (SpectraMax-Gemini EM، Molec-ular Devices Inc., USA) استعمال کیا گیا تھا۔ chemiluminescence assays کے لیے، ایک luminometer (Luminoskan RS، Labsystems، Finland) استعمال کیا گیا تھا۔ دیگر تمام بایواسیز کے لیے، ایک مائکروپلیٹ ریڈر (اسپیکٹرا میکس پلس 384، مالیکیولر ڈیوائسز انک، USA) استعمال کیا گیا تھا۔

2.3. کل فینولک مواد کا تعین. ٹوٹل فینولک مواد (TPC) کا تعین Folin-Ciocalteu طریقہ 【18】 کے مطابق کیا گیا تھا۔ انگلی باجرے کے عرق （20ul） کو 110ul تازہ تیار 10 بار پتلا شدہ Folin-Ciocalteu reagent اور 70ul سوڈیم کاربونیٹ محلول (10 فیصد w/v) کے ساتھ ملایا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت (RT) پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ جذب 765 nm پر ماپا گیا۔ گیلک ایسڈ کا استعمال معیاری منحنی خطوط (y=0.0532x جمع 0.0339;r=0.9992) کو پلاٹ کرنے کے لیے کیا گیا تھا، اور TPC کا حساب ایک سوکھے پر فی 100 گرام آٹے کے mg گیلک ایسڈ کے مساوی (GAE) کے طور پر کیا گیا تھا۔ وزن کی بنیاد.

2.4 کل فلاوونائڈ مواد کا تعین. کل فلاوونائڈ مواد (TFC) کا تعین ایلومینیم کلورائد کلوریمیٹرک طریقہ [19] کے مطابق کیا گیا تھا۔ انگلی باجرے کے عرق (100ul) کو ایلومینیم کلورائد محلول （2 فیصد w/v,100ul） کے ساتھ ملایا گیا، RT پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، اور جذب 415nm پر ناپا گیا۔ Quercetin کا ​​استعمال معیاری وکر (y=0.0349x-0.2091; r²=0.9974）، اور TFC کا حساب خشک وزن کی بنیاد پر فی 100 گرام آٹے کے mg quercetin کے مساوی کے طور پر کیا گیا۔

2.5.DPPH ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کا تعین. DPPH ریڈیکلز کو نکالنے کی صلاحیت کا تعین بلوس [20] کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ فنگر مل لیٹ ایکسٹریکٹ （50 ul） کو 90ul میتھانول اور 60ul DPPH محلول（0.02 فیصد w/v） کے ساتھ ملایا گیا اور RT پر اندھیرے میں 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نمونے (As) اور کنٹرول (Ac) کی جاذبیت کی قدریں 517nm پر ناپی گئیں۔ Trolox کو معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ DPPH ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی بطور فیصد روکنا مساوات (1) کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔ ICs کی قدر کا حساب خوراک جوابی گراف کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

2.6۔ ABTS کیٹیشن ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی کا تعین. ABTS کیٹیشن ریڈیکلز کو ختم کرنے کی صلاحیت کا تعین Re et al کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ [21] کچھ ترامیم کے ساتھ۔ ABTS کیٹیشن ریڈیکل محلول 10mg ABTS کو 2.5 ملی لیٹر پوٹاشیم پرسلفیٹ میں 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر 16 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرکے اور 50 ایم ایم فاسفیٹ بفر نمکین (پی ایچ 7.4) کے ساتھ 7 بار گھٹا کر تیار کیا گیا۔ انگلی باجرے کے عرق (12.5ul）) کو فاسفیٹ بفر نمکین（147.5ul） اور تازہ طور پر تیار کردہ ABTS cation ریڈیکل محلول（40ul） کے ساتھ ملایا گیا اور RT پر اندھیرے میں 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نمونے (As) اور کنٹرول (Ac) کی جاذبیت کی قدریں 734nm پر ناپی گئیں۔ Trolox کو معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ABTS کیٹیشن ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی بطور فیصد روکنا مساوات (2) کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔ خوراک کے جواب کے گراف کا استعمال کرتے ہوئے ICs کی قدر کا حساب لگایا گیا تھا۔

2.7. آکسیجن ریڈیکل جذب کرنے کی صلاحیت (ORAC) کا تعین. ORAC کا اندازہ Ou et al کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔[22] کچھ ترمیم کے ساتھ۔ فلوروسین (4.8uM) اور AAPH (40mg/ml) محلول 75mM فاسفیٹ بفر (pH 7.4) میں تیار کیے گئے تھے۔ انگلی باجرے کے عرق (10ul) کو 40ul فاسفیٹ بفر اور 100ul فلوروسین کے ساتھ ملایا گیا اور 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ AAPH(50ul) کو شامل کیا گیا تھا، اور فلوروسینس مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے بالترتیب 494nm اور 535nm کی اتیجیت اور اخراج طول موج پر 37 ڈگری پر I منٹ کے وقفوں پر فلوروسین کے زوال کی پیمائش کی گئی۔ Tro-lox کو معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ نمونے (AUCs)، کنٹرول (AUC)، اور Trolox (AUC-) کی منحنی خطوط (AUC) اقدار کے نیچے کا علاقہ ریکارڈ کیا گیا تھا۔ ORAC قدر کا حساب مساوات (3) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جہاں conc۔ حراستی کے لئے کھڑا ہے. نتائج کو خشک وزن کی بنیاد پر فی 100 گرام آٹے کے مساوی mg Trolox کے طور پر ظاہر کیا گیا۔

2.8۔ فیرس آئن چیلیٹنگ (ایف آئی سی) سرگرمی کا تعین. فیرس آئنوں کو چیلیٹ کرنے کی صلاحیت کارٹر [23] کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق طے کی گئی تھی۔ انگلی جوار کے عرق (100ul) کو 1 ملی میٹر فیرس سلفیٹ محلول (20ul) اور 40ul آست پانی کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ اس کے بعد، 1 ایم ایم فیروزین محلول (40ul) شامل کیا گیا اور RT پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نمونے (As) اور کنٹرول (Ac) کی جاذبیت کی قدریں 562nm پر ریکارڈ کی گئیں۔ EDTA کو معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ فی صد کیلیشن کے بطور FIC سرگرمی کا حساب مساوات (4) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

2.9. فیرک کو کم کرنے والی اینٹی آکسیڈینٹ پاور (FRAP) کا تعین. FRAP کا تعین کچھ ترمیم کے ساتھ بینزائن اور زیٹو [24] کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ FRAP ریجنٹ کو 300mM ایسیٹیٹ بفر (pH 3.6)، 20mM فیرک کلورائیڈ، اور 10mM TPTZ کو 10:1:1 کے تناسب میں ملا کر اور 37 ڈگری C پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کر کے تیار کیا گیا تھا۔ انگلی باجرے کے عرق (20ul) کو 30ul acetate بفر اور 150ul تازہ تیار کردہ FRAP ری ایجنٹ کے ساتھ ملایا گیا، RT پر 8 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، اور جاذبیت 600nm ریکارڈ کی گئی۔ Trolox کا استعمال معیاری وکر (y=0.17x جمع 0.15;产=1.00）) کے لیے کیا گیا تھا، اور FRAP نے خشک وزن کی بنیاد پر فی 100 گرام آٹے کے mg Trolox کے مساوی کے طور پر شمار کیا ہے۔

2.10.A5-LOX کی روک تھام کی سرگرمی کا تعین. A{{0}}LOX کی روک تھام کی سرگرمی کا اندازہ ٹیپل [25] کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کچھ ترمیم کے ساتھ کیا گیا۔ انگلی کے باجرے کے عرق (10ul) کو 115ul 100mM سوڈیم فاسفیٹ بفر（pH 8.0） اور 50ul A5-LOX محلول (5000U/ml) کے ساتھ ملایا گیا اور RT پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ رد عمل 0.08mM linoleic ایسڈ کے 25ul کے اضافے کے ساتھ شروع کیا گیا تھا۔ جذب کی تبدیلی RT پر 10 منٹ کے وقفوں پر 234nm پر ریکارڈ کی گئی، اور نمونے (Vmaxs) اور کنٹرول (Vmaxc) کی زیادہ سے زیادہ رفتار (Vmxk) اقدار ریکارڈ کی گئیں۔ Baicalein معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا. ایک

2.11.XO روکنے والی سرگرمی کا تعین. XO روکنے والی سرگرمی کا تعین لی ایٹ ال کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ [26] کچھ ترامیم کے ساتھ۔ انگلی کے باجرے کے عرق (10ul) کو 150ul of 50 mM سوڈیم فاسفیٹ بفر（pH 7.4） اور 20ul of XO（0.15U/ml） کے ساتھ ملایا گیا اور RT پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ رد عمل کا آغاز 0.1 mM xanthine کے 20ul کے اضافے کے ساتھ کیا گیا تھا۔ جاذب کی تبدیلی RT پر 15 منٹ کے لیے کم سے کم وقفوں پر 295nm پر ریکارڈ کی گئی، اور نمونے (Vmaxs) اور کنٹرول (Vmaxc) کی Vmax قدریں ریکارڈ کی گئیں۔ ایلوپورینول کو معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ XO کی روک تھام کی سرگرمی کو بطور فیصد روکنا مساوات(6) کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔

2.12. Hyaluronidase روکنے والی سرگرمی کا تعین. Hyaluronidase inhibitory activity کا اندازہ اس طریقہ کار کے مطابق کیا گیا تھا جو سہاسرابدھے اور Dedhar [27] نے کچھ ترمیم کے ساتھ بیان کیا تھا۔ انگلی کے باجرے کے عرق (50ul) کو 10ul hyaluronidase （8400U/ml） کے ساتھ ملایا گیا اور 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انزائم کو 20ul کیلشیم کلورائیڈ (12.5mM) شامل کرکے اور 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کرکے چالو کیا گیا۔ رد عمل کا آغاز سوڈیم ہائیلورونیٹ （50ul） کے اضافے کے ساتھ کیا گیا تھا اور 40 منٹ کے لئے 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، 0.9 M سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ کا 10ul اور 0.2M سوڈیم بوریٹ کا 20ul شامل کیا گیا اور 3 منٹ کے لئے 100 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ RT پر ٹھنڈا ہونے کے بعد، 67mM p-dimethylaminobenzaldehyde کے 50ul کو شامل کیا گیا اور 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نمونہ (As) اور کنٹرول (Ac) کی جاذبیت کی قدریں 585nm پر ناپی گئیں۔ ٹینک ایسڈ کو معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ Hyaluronidase روکنے والی سرگرمی بطور فیصد روکنا مساوات (7) کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔

2.13. آکسیڈیٹیو برسٹ انحیبیٹری سرگرمیوں کا تعین. پورے انسانی خون میں آکسیڈیٹیو برسٹ روکنے والی سرگرمیوں اور الگ تھلگ پولیمورفونوکلیئر نیوٹروفیلز کے لحاظ سے سوزش کی صلاحیتوں کا تعین کچھ ترمیم کے ساتھ luminol enhanced chemiluminescence assay [28, 29] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ تجربات ڈاکٹر پنجوانی کے سینٹر فار مالیکیولر میڈیسن اینڈ ڈرگ ریسرچ، انٹرنیشنل سینٹر فار کیمیکل اینڈ بائیولوجیکل سائنسز، جامعہ کراچی، پاکستان میں کیے گئے، اور انسٹی ٹیوٹ کو انسانی خون پر مطالعہ کے لیے آزاد اخلاقیات کمیٹی، ICCBS، UoK سے اخلاقی منظوری حاصل ہے۔ . نمبر:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/پروٹوکول/1۔{7}}۔

2.13.1 پورے انسانی خون میں آکسیڈیٹیو برسٹ انحیبیٹری سرگرمی کا تعین. انسانی خون (1 ملی لیٹر) کو رگوں کے پنکچر کے ذریعے ایک صحت مند غیر تمباکو نوشی رضاکار سے ہیپرینائزڈ ٹیوب میں جمع کیا گیا تھا، جس نے ایک ہفتے سے زائد عرصے تک کوئی دوا یا سپلیمنٹ نہیں لیا، اور HBSs پلس * (ہینکس بیلنسڈ) سے پتلا (1:20) نمک کا حل، کیلشیم اور میگنیشیم پر مشتمل)۔ انگلی کے باجرے کے عرق (25ul) کو پتلے ہوئے پورے خون (25ul) کے ساتھ ملایا گیا اور 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر 15 منٹ تک سینکایا گیا۔ پھر، 25ul سیرم آپسونائزڈ زیموسان اور 25ul luminol شامل کیے گئے۔ آکسیڈیٹیو برسٹ ROS پروڈکشن کی 50 منٹ تک 30s کے وقفوں اور 1 s پوائنٹس کی پیمائش کے وقت پر بار بار اسکین کے ساتھ ایک luminometer کا استعمال کرتے ہوئے نگرانی کی گئی۔ Ibuprofen معیاری دوا کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا. روکنا فیصد کا حساب مساوات (8) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

جہاں RLU کنٹرول کے لیے رشتہ دار لائٹ یونٹس (RLU) کے لحاظ سے luminometer ریڈنگ ہے اور RLU نمونے کے لیے RLU میں luminometer ریڈنگ ہے۔ ICs کی قدر کا حساب خوراک جوابی گراف کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

2.13.2. الگ تھلگ پولیمورفونوکلیئر نیوٹروفیلز میں آکسیڈیٹیو برسٹ انحیبیٹری سرگرمی کا تعین. پورے انسانی خون (10 ملی لیٹر) کو HBSS (ہینکس بیلنسڈ سالٹ سلوشن، کیلشیم اور میگنیشیم کے بغیر) اور لیمفوسائٹ سیپریشن میڈیم (LSM) کی مساوی مقدار میں ملایا گیا اور RT پر 30 منٹ تک erythrocytes کو آباد ہونے دیا۔ پھر، پلازما کو احتیاط سے LSM پر رکھا گیا اور RT پر 20 منٹ کے لیے 400 ×g پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو ہٹا دیا گیا تھا۔ نتیجے میں گولی میں خون کے سرخ خلیات کو ٹھنڈے ڈیونائزڈ پانی کے ساتھ ملا کر، ٹھنڈے HBSS7 کے ساتھ ملا کر، اور 4 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے 300×g پر سینٹری فیوج کیا گیا۔ گولی کو دو بار دھویا گیا تھا، اور نتیجے میں پولیمورفونوکلیئر نیوٹروفیلز کی قابل عملیت کو ٹریپین بلیو خارج کرنے کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے چیک کیا گیا تھا۔ خلیوں کی حراستی کو 1 × 10 ڈگری سیل / ملی لیٹر میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ الگ تھلگ پولیمورفونوکلیئر نیوٹروفیل (25 山l) کو انگلی باجرا کے عرق (25ul) کے ساتھ ملایا گیا اور 37 ڈگری پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، 25ul سیرم آپسونائزڈ زیموسان اور 25ul luminol کو شامل کیا گیا، اور 30s کے وقفوں اور ls پوائنٹس کی پیمائش کے وقت پر بار بار اسکین کے ساتھ luminometer کا استعمال کرتے ہوئے oxidative burst ROS کی پیداوار کو 50 منٹ تک مانیٹر کیا گیا۔ Ibuprofen معیاری دوا کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا. روکنا فیصد کا حساب مساوات (8) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

2.14 شماریاتی تجزیہ. IBM SPSS شماریات (ورژن 20) سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ہر تجربے کے ڈیٹا کا شماریاتی طور پر تجزیہ کیا گیا، اور نتائج کو اوسط ±معیاری خرابی (SE) کے طور پر ظاہر کیا گیا۔ شماریاتی اہمیت 95 فیصد اعتماد کی سطح پر رکھی گئی تھی۔ مختلف قسموں اور نچوڑ کے درمیان فرق کا تعین کرنے کے لیے تغیر (ANOVA) اور Tukey کے ٹیسٹ کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا۔ پیئرسن کے ارتباط کے گتانک کو ارتباط کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

سوزش کی درجہ بندی

شدید سوزش: بنیادی طور پر لالی، سوجن، درد وغیرہ کی خصوصیت، یعنی سوزش بنیادی طور پر عروقی نظام کے رد عمل پر مشتمل ہوتی ہے۔

دائمی سوزش: بنیادی طور پر کچھ دائمی سوزش کی بیماریاں، جیسے دائمی معدے، دائمی ہیپاٹائٹس، بار بار ہونے والی امراض نسواں کی سوزش اور دیگر بیماریاں۔

سوزش کی وجہ

کوئی بھی عنصر جو ٹشو کو نقصان پہنچا سکتا ہے وہ سوزش کا سبب بن سکتا ہے، یعنی سوزش کے عوامل کو درج ذیل زمروں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔

(1) حیاتیاتی عوامل

بیکٹیریا، وائرس، مائکوپلاسما، فنگس، اسپیروکیٹس اور پرجیوی سوزش کی سب سے عام وجوہات ہیں۔ حیاتیاتی پیتھوجینز کی وجہ سے ہونے والی سوزش کو انفیکشن بھی کہا جاتا ہے۔ بیکٹیریا کے ذریعہ تیار کردہ Exotoxins اور endotoxins براہ راست ٹشوز کو نقصان پہنچا سکتے ہیں۔ متاثرہ خلیات میں وائرل نقل سیل نیکروسس کی طرف جاتا ہے؛ بعض اینٹی جینک پیتھوجینز انفیکشن کے بعد مدافعتی ردعمل کے ذریعے ٹشوز کو نقصان پہنچاتے ہیں، جیسے پرجیوی انفیکشن اور تپ دق۔

2) جسمانی عوامل

زیادہ درجہ حرارت، کم درجہ حرارت، تابکار مادے، بالائے بنفشی شعاعیں، وغیرہ، اور مکینیکل نقصان۔

(3) کیمیائی عوامل

خارجی کیمیکل جیسے مضبوط تیزاب، مضبوط الکلی، اور تارپین۔ endogenous زہریلے مادے جیسے necrotic tissue کی گلنے والی مصنوعات اور metabolites جیسے کہ یوریا جسم میں مخصوص پیتھولوجیکل حالات میں جمع ہوتا ہے۔

(4) غیر ملکی جسم

مختلف ذرائع سے انسانی جسم میں داخل ہونے والے اجنبی اجسام، جیسے کہ مختلف دھاتیں، لکڑی کا ملبہ، ہوا میں دھول، جراحی کے سیون وغیرہ، اپنی مختلف اینٹی جینسیٹی کی وجہ سے مختلف درجے کے سوزشی ردعمل کا سبب بن سکتے ہیں۔

(5) نیکروٹک ٹشو

اسکیمیا یا ہائپوکسیا جیسی وجوہات ٹشو نیکروسس کا سبب بن سکتی ہیں، جو ایک ممکنہ سوزش کا عنصر ہے۔ کنجسٹیو ہیمرج بینڈ اور تازہ انفارکٹ کے کناروں پر سوزش کے خلیوں کی دراندازی دونوں سوزش کے مظہر ہیں۔

(6) الرجی

جب جسم کا مدافعتی ردعمل غیر معمولی ہوتا ہے، تو یہ نامناسب یا ضرورت سے زیادہ مدافعتی ردعمل کا سبب بن سکتا ہے، جس سے ٹشو اور سیل کو نقصان پہنچتا ہے اور سوزش ہوتی ہے۔ جیسے الرجک ناک کی سوزش، کولائٹس، چھپاکی، تپ دق، گلوومیرولونفرائٹس، اور دیگر بیماریاں۔

اینٹی بائیوٹکس جراثیم کش اور سوزش کش ہیں، طویل مدتی استعمال انسانی جسم کے نارمل نباتات کو تباہ کر دے گا، اچھے بیکٹیریا کو ہلاک کر دے گا، آنتوں کے نباتاتی عدم توازن کا باعث بنیں گے، آنتوں کے مختلف افعال اور منفی ردعمل کا باعث بنیں گے، اور ثانوی انفیکشن کا سبب بنیں گے، جسم میں کمزوری کا باعث بنیں گے۔ مزاحمت اس کے علاوہ، اینٹی بائیوٹکس زیادہ تر جگر اور گردے کے ذریعے میٹابولائز ہوتے ہیں، اور اینٹی بائیوٹکس کے غلط استعمال سے جگر اور گردے کے کام کو نقصان پہنچنے کا زیادہ امکان ہوتا ہے۔ آپ تمام اینٹی سوزش ادویات کی ہدایات پر "خراب جگر اور گردے کے کام کے مریضوں میں احتیاط کے ساتھ استعمال کریں" کے الفاظ پر توجہ دے سکتے ہیں۔ اس کے علاوہ، اینٹی بائیوٹک ادویات سے الرجک ردعمل کو بھی بڑھا سکتا ہے۔ حالیہ برسوں میں، الرجک ناک کی سوزش اور الرجک دمہ کے زیادہ واقعات کا تعلق اینٹی بائیوٹکس کے غلط استعمال سے ہے۔

تجربات سے ثابت ہوا ہے کہ ایکناکوسائیڈ سے بھرپور Cistanche pipiensis کے عرق کا کولائٹس پر اچھا اثر پڑتا ہے۔ Cistanche glycoside K اور piposide B خلیات میں نائٹرک آکسائیڈ کے اخراج پر ایک اچھا روک تھام کا اثر رکھتے ہیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ اس کا اچھا سوزش اثر ہے۔Cistancheایک چینی دواؤں کا مواد ہے جس کی اصل دوا اور خوراک ہے۔ یہ میرے ملک میں سب سے اوپر دس چینی ہربل ادویات میں سے ایک ہے۔ یہ صحرا کی گہرائیوں سے ایک خزانہ اور قدرتی ٹانک ہے۔ Cistanche Cistanche کی دواؤں کی تاریخ تقریباً 2,000 سال ہے۔ یہ سب سے پہلے "شین نونگز میٹیریا میڈیکا" میں ریکارڈ کیا گیا تھا۔ 2005 میں، Cistanche کو "Pharmacopoeia of the People's Republic of China" میں ایک حقیقی دواؤں کے مواد کے طور پر شامل کیا گیا تھا۔ Cistanche قدیم زمانے سے ایک اچھا ٹانک رہا ہے، بغیر کسی زہریلے ریکارڈ کے، جو اس کی حفاظت کو مکمل طور پر ثابت کرتا ہے۔