دوہری یاد کے بعد چوہے کے دماغ میں آرک ایم آر این اے اظہار کے نمونے خوف اور انعام پر مبنی سماجی طور پر حاصل کردہ معلومات (2)

براہ راست اور سماجی طور پر حاصل کردہ خوف کی انجمنوں کی یاد میں آرک۔

براہ راست سیکھنے کے ذریعے حاصل کیے گئے خوف کی یاد سے گزرنے والے ہمارے چوہوں کے بارے میں ہمارے نتائج کی تشریح کرنے کی ہماری صلاحیت کو نمایاں طور پر مدد ملتی ہے کہ خوف سیکھنے اور یاد کرنے کے بنیادی نظام کی خصوصیات کتنی اچھی ہے۔ ہم نے جن شعبوں کا جائزہ لیا ان میں سے بہت سے خوف یا معدومیت کی تعلیم میں شامل ہیں (جن میں سے بعد میں ہم یہ فرض کریں گے کہ ڈیمنسٹریٹرز میں شروع کیا جائے گا، کیونکہ انہوں نے FCbP کے دوران غیر مضبوط CS پریزنٹیشن سے گزرا تھا) خاص طور پر ACC، PLC، اور ILC30–32 ,37. اگرچہ سماجی خوف کے اعصابی میکانزم کے بارے میں تحقیق کا تھوڑا سا چھوٹا سا تالاب دستیاب ہے، لیکن سماجی خوف سیکھنے کے مجوزہ ماڈل اس بات کی تصدیق کرتے ہیں کہ اسی طرح کے نظام سماجی اور براہ راست خوف کی تعلیم کو متاثر کرتے ہیں۔ ہماری تلاشیں سماجی طور پر حاصل کردہ خوف ایسوسی ایشن یا براہ راست حاصل کردہ خوف ایسوسی ایشن کو یاد کرنے میں ACC، PLC، یا ILC کے کوئی مجموعی کردار کی نشاندہی نہیں کرتی ہیں (حالانکہ ذیل میں PLC سرگرمی میں جنسی اختلافات کی "تبادلہ خیال" بھی دیکھیں)۔ تاہم، جیسا کہ پچھلے حصے میں احاطہ کیا گیا ہے، یہ ممکنہ طور پر صرف اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ آرک اس معاملے میں سرگرمی کے قابل اعتماد اشارے کے طور پر کام نہیں کرتا ہے۔ خوف کے حصول کے بعد ان علاقوں کی جانچ شاید ایک مختلف کہانی سنائے گی۔ خوف کی یاد کے بعد آرک سرگرمی میں سخت واضح تحقیق محدود ہے، اس سے حاصل کرنے کے لیے کچھ ماضی کی تحقیق ہے۔ Chia اور Otto35 نے پایا کہ ٹریس ڈر کنڈیشنگ چوہوں میں غیر مشروط کنٹرول کے مقابلے میں ڈورسل اور وینٹرل ہپپوکیمپس دونوں میں آرک پروٹین کا اظہار نمایاں طور پر زیادہ ہے۔ خاص طور پر، اس تجربے میں ہوموجنائزڈ وینٹرل اور ڈورسل ہپپوکیمپس کے ویسٹرن بلاٹ کے تجزیے کے ذریعے آرک کی مقدار درست کی گئی تھی، اس لیے ہپپوکیمپل سرگرمی کا درست لوکلائزیشن دستیاب نہیں تھا۔ یہ نتائج ممکنہ طور پر اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ جیسا کہ STFP میں ہے، آرک ٹرانسکرپشن کو ہپپوکیمپس کے مخصوص علاقوں میں 48- گھنٹے کے ریکال ٹائم پوائنٹ پر خوف کی یادداشت کے لیے آمادہ کیا جا سکتا ہے۔ ہمارے کالعدم نتائج بھی ممکنہ طور پر مبصرین کی طرف سے ناکام یاد کرنے کی وجہ سے ہوسکتے ہیں، جیسا کہ ہماری لیب 12–14,26 میں پچھلے مطالعات کے برعکس ہم نے کنٹرول کے مقابلے میں مبصرین میں CS کو زیادہ منجمد نہیں دیکھا۔ آیا یہ اصل میں مبصرین میں ناکامی کی وجہ سے ہے یا ہمارے واحد CS واپس بلانے کے طریقہ کار کی وجہ سے ہے اور CS کو کنٹرولز کی پیشگی نمائش واضح نہیں ہے۔

cistanche یادداشت کو بہتر بنانے میں کیا کرتا ہے۔

سماجی طور پر حاصل کردہ معلومات کو یاد کرنے میں وینٹرل آربیفرنٹل کورٹیکس کا ممکنہ کردار۔

ایک تاریخی مطالعہ میں، Lesburguères et al.24. یہ ظاہر کرنے کے قابل تھے کہ اگرچہ ڈورسل ہپپوکیمپل (dHPC) سرگرمی ایک حاصل شدہ STFP کے حصول اور قلیل مدتی واپسی کے لیے ضروری تھی، STFP میموری کو آخر کار طویل مدتی اسٹوریج کے لیے OFC پر آف لوڈ کر دیا گیا۔ مزید برآں، Lesburguères et al. یہ ظاہر کرنے کے قابل تھے کہ STFP کے حصول کے دوران orbitofrontal cortex میں نیوران کی ٹیگنگ سماجی طور پر منتقل ہونے والی خوراک کی ترجیحات کے طویل مدتی ذخیرہ کرنے کے لیے ضروری ہے اور حصول کے بعد OFC کی سرگرمی میں مداخلت یادداشت کو 30 دن کے حصول کے بعد یاد کرتی ہے (حالانکہ یہ بھی دیکھیں 38)۔ یہ نتائج STFP کے حصول اور OFC کی جاری تنظیم نو کے بعد پہلے دنوں یا ہفتوں میں dHPC اور OFC کے درمیان رابطے کی تجویز کریں گے تاکہ STFP میموری کے طویل مدتی اسٹوریج کو ایڈجسٹ کیا جا سکے۔ اگرچہ اس مطالعے میں مظاہرین، کنٹرولز اور مبصرین کے درمیان وینٹرل یا لیٹرل OFC آرک اظہار میں مجموعی فرق کی کمی اس تشریح کو چیلنج کرے گی، ہم نے مجموعی سماجی سیکھنے کی کارکردگی اور دوہری آرک اظہار کرنے والے خلیوں کے اپنے مشترکہ پیمائش کے درمیان ایک اہم منفی تعلق کا پتہ لگایا۔ VOC میں مزید برآں، انتخابی ٹیسٹ کی کارکردگی اور CS کو منجمد کرنے کی بنیاد پر مظاہرین کے لیے بنائے گئے اسی طرح کے میٹرک کے درمیان یہ ارتباط نہیں دیکھا گیا۔ چونکہ سماجی طور پر حاصل کردہ معلومات پر انحصار کو ممکنہ طور پر ناقابل اعتبار سماجی معلومات اور براہ راست تجربے کے ذریعے سیکھنے کے خطرات کے درمیان انتخاب کرنے کے بارے میں سوچا جا سکتا ہے، سماجی طور پر حاصل کردہ معلومات کے اظہار میں آواز کا یہ ظاہری روکنے والا کردار قدر میں OFC کے وسیع تر کردار سے منسلک ہو سکتا ہے۔ -بنیاد فیصلہ سازی39-42۔

Cistanche deserticola تجربہ

آرک ٹرانسکرپشن میں جنسی اختلافات۔

کئی شماریاتی اور طریقہ کار وجوہات۔ سب سے پہلے، خواتین کے لیے ہمارا کبھی کبھار کم نمونہ سائز، جس میں جنس/حالات کے مجموعے کے لیے گروپ کا سائز n=2 سے n=9 تک ہوتا ہے جس کے بعد کافی قابل عمل حصوں کے بغیر چوہوں کو ہٹا دیا جاتا ہے (اگرچہ قابل ذکر طور پر، ایک n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

اگرچہ قوس کے اظہار میں جنسی اختلافات کے بارے میں بہت کم تحقیقات کی گئی ہیں، لیکن کچھ نتائج یہ بتاتے ہیں کہ مادہ چوہے ڈورسل ہپپوکیمپس کے بعض علاقوں میں نسبتاً افزودہ ماحول کے بار بار نمائش کے بعد زیادہ آرک کا اظہار کرتے ہیں، حالانکہ مخالف سمت میں بھی رجحان رہا ہے۔ پیشگی رویے کی مداخلت کے بغیر جانچے گئے چوہوں میں مشاہدہ کیا گیا۔ ہمارے نتائج اس بات کی نشاندہی کر سکتے ہیں کہ آرک ٹرانسکرپشن میں جنسی اختلافات کچھ عمومی طرز عمل کے کاموں یا تجربات کے بعد موجود ہیں۔ ACC کے CG1 ریجن میں، ہم نے پایا کہ مردوں کے مجموعی طور پر دونوں ٹائم پوائنٹس پر زیادہ سیلز فعال ہوتے ہیں، ممکنہ طور پر مردوں کے ACC میں زیادہ بیس لائن آرکٹرانکرپشن یا سیاق و سباق کی تبدیلیوں/دوبارہ نمائش کے بعد ٹرانسکرپشن میں اضافہ (ہوم ​​کیج → STFP) ٹیسٹنگ روم → کنڈیشنگ چیمبر) جیسا کہ سیاق و سباق کی یادوں کو طویل مدتی یاد کرنے میں ACC کے کردار کے لیے کچھ ثبوت موجود ہیں—اگرچہ محدود ہیں—44۔ نر چوہوں نے بھی ILC میں اعلی جوہری اور دوہری آرک شمار ظاہر کیا۔ اس کی وضاحت ناپید ہونے اور خوف کی روک تھام میں ILC کے کردار سے کی جا سکتی ہے 31,45,46 اور خواتین میں سیکھے ہوئے خوف کی روک تھام اور معدومیت میں مشاہدہ شدہ خرابیاں47–49۔ اگر ایسا ہے تو، اس سے یہ سوال اٹھتا ہے کہ ہمارے کنٹرول، مبصر، اور ڈیمانسٹریٹر چوہوں کے درمیان کوئی مجموعی فرق کیوں نہیں دیکھا گیا اگر آرک ایکسپریشن کو CS سے حاصل شدہ انفرالیمبک سرگرمی سے متحرک کیا جا رہا تھا۔

خواتین نے vCA3 میں تمام شماروں کے لئے آرک اظہار کی اعلی سطح دکھائی۔ جوہری شمار میں فرق ممکنہ طور پر CS کے سامنے آنے کے بعد زیادہ ایکٹیویشن یا خواتین میں کنڈیشنگ چیمبر کے دوبارہ نمائش کا نتیجہ ہو سکتا ہے، جبکہ کھانے کے کام کے بعد vCA3 میں سائٹوپلاسمک آرک اظہار کی اعلی سطح جنسی فرق کی نشاندہی کر سکتی ہے۔ وی سی اے 3 میں آرک کا کردار یا تو "آشنا" کھانے کی پہچان (یہاں تک کہ مبصرین کے لیے بھی ڈیمنسٹریٹر کے ساتھ ان کے پہلے سے تعامل کی وجہ سے خوشبو واقف ہو گی) یا انعام/عام تکمیلی عمل۔ اس خاتون نے بھی وی سی اے 3 میں نمایاں طور پر زیادہ ڈوئل لیبلنگ ظاہر کی — حالانکہ یہ اثر چھوٹا تھا — یہ خواتین میں وی سی اے 3 آرک ٹرانسکرپشن میں عمومی اضافہ کی نشاندہی بھی کر سکتا ہے۔ مادہ چوہوں نے وی او ایف سی میں اعلی جوہری آرک ٹرانسکرپشن اور ایل او ایف سی میں آرک ایم آر این اے کے اعلی دوہرے درجے بھی دکھائے، حالانکہ ان نتائج کی تشریح کرنا زیادہ مشکل ہے کیونکہ ان مادہ کنٹرول چوہوں کی تعداد کم تھی جن کے دماغ کے ٹشو او ایف سی شمار لینے کے لیے کافی برقرار تھے۔ (n=2 اور 3 بالترتیب لیٹرل اور وینٹرل OFC کے لیے)۔ دستیاب کنٹرول چوہوں کا ڈیٹا OFC آرک ایم آر این اے کی پیداوار میں ممکنہ جنسی ثالثی میں اضافے کی نشاندہی کرتا ہے، لیکن یہ اتنا ہی ممکن ہے کہ یہ اثر زیادہ این کے ساتھ برقرار نہ رہے۔ خاص طور پر، ماضی کی کچھ تحقیقوں نے OFC میں ساختی فرق اور خواتین اور مرد چوہوں کے درمیان OFC کی ثالثی کے طرز عمل میں فعال فرق کی نشاندہی کی ہے50-52۔

Cistanche نچوڑ پاؤڈر

ممکنہ طور پر آرک ایم آر این اے میں ہمارے سب سے دلچسپ جنسی فرق PLC میں پائے گئے۔ تاہم، مردوں نے خواتین کے مقابلے میں مجموعی طور پر زیادہ تعداد میں خلیات ظاہر کیے جو سائٹوپلازم میں آرک کا اظہار کرتے ہیں اور سائٹوپلازم اور نیوکلئس (دوہری اظہار) دونوں میں۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ جبکہ مرد مظاہرین اور مبصرین نے خوف سے یاد کرنے والے وقت پر کنٹرولز پر آرک ٹرانسکرپشن میں اضافہ نہیں دکھایا، خواتین مظاہرین نے کنٹرولز کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ نیوکلیئر آرک ٹرانسکرپشن دکھایا جبکہ خواتین مبصرین دونوں کے درمیان میں گر گئیں۔ یہ جنسی اثر سیکھے ہوئے خوف کی روک تھام اور معدومیت میں مشاہدہ کیے گئے مذکورہ بالا خسارے کے ذریعہ کارفرما ہوسکتا ہے جو 47-49 کی خواتین میں مشاہدہ کیا جاتا ہے، جیسا کہ ماضی کی تحقیق نے بتایا ہے کہ PLC خوف کے رویے کو متحرک کرنے میں تنقیدی طور پر ملوث ہے۔ مزید برآں، متعدد مطالعات نے PLC سگنلنگ اور ساخت میں فرق کو خوف کی روک تھام اور معدومیت میں ان جنسی مخصوص خرابیوں کے لیے ممکنہ ڈرائیونگ عوامل کے طور پر ملوث کیا ہے۔ اگرچہ ہمیں عورت اور مرد کے منجمد کرنے والے رویے میں کوئی خاص فرق نہیں ملا، خاص طور پر خواتین مظاہرین میں CS سے منسلک غیر تقویت یافتہ خوف کے جواب میں آرک ایم آر این اے کی اپ گریجشن PLC میں تفریق اعصابی تنظیم نو کا اشارہ ہو سکتی ہے جو بالآخر اس کا باعث بن سکتی ہے۔ خوف کے اظہار میں جنسی اختلافات۔

نتائج

اگرچہ اس مطالعے کے نتائج نے سماجی طور پر حاصل شدہ یادوں کی بازیافت میں شامل دماغی میکانزم کے بارے میں ہماری سمجھ کو اتنا وسیع نہیں کیا جتنا کہ ہم نے امید کی تھی، ہمارے نتائج آرک اظہار میں جنسی اختلافات کے ساتھ ساتھ کردار (یا طویل مدتی یادداشت میں آرک کی کمی۔ ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ کم از کم پریفرنٹل کارٹیکس اور وی سی اے 3 میں سماجی طور پر حاصل کردہ معلومات کو یاد کرنے کے ذریعے دماغی سرگرمی کو شامل کرنا صرف جانچ کے طریقہ کار کی وجہ سے آرک اظہار میں اضافہ کرنے کے لیے کافی نہیں لگتا ہے۔ تاہم، اس ٹیک وے کی صداقت کو یقینی طور پر ہمارے طرز عمل کے ٹیسٹوں کے غیر حتمی نتائج سے سوالیہ نشان بنا دیا گیا ہے، کیونکہ سماجی طور پر حاصل کی گئی معلومات کی ناقص برقراری اس اثر کی کمی کی وجہ سے ہو سکتی ہے۔ ہم نظریہ رکھتے ہیں کہ اس کی وجہ یہ ہو سکتی ہے کہ کم سے کم نیورل ری سٹرکچرنگ اس وقت شروع ہو جاتی ہے جب سسٹمز کے استحکام سے پہلے یاد دہانی ہوتی ہے۔ سماجی سیکھنے کو یاد کرنے کے عمل میں آرک پروٹین کے کردار کے بارے میں مزید تحقیق کی اب بھی تصدیق کی جاتی ہے کیونکہ ہمارے طرز عمل کے نتائج مبصر چوہوں میں سماجی سیکھنے کا مظاہرہ نہیں کرتے ہیں۔ سماجی سیکھنے کی مختلف شکلوں پر حکمرانی کرنے والے عصبی میکانزم میں اوورلیپ کی جانچ کرنے والی مستقبل کی تحقیق حصول کے طریقہ کار سے گزرنے والے جانوروں اور دور دراز سے یاد کرنے کے طریقہ کار سے گزرنے والے جانوروں کی شمولیت سے بھی فائدہ اٹھا سکتی ہے، کیونکہ یہ ٹائم پوائنٹ پلاسٹکٹی میں تبدیلیاں لانے کا زیادہ امکان رکھتے ہیں اور اس طرح آرک اظہار میں تبدیلیاں آتی ہیں۔ .

میرے نزدیک Cistanche ضمیمہ - یادداشت کو بہتر بنانے والا

Cistanche Improve Memory مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

طریقے

مضامین۔ مضامین نر اور مادہ تھے Sprague – Dawley چوہے جو آسٹن میں یونیورسٹی آف ٹیکساس کے اینیمل ریسورس سینٹر میں گھر میں پالے گئے تھے۔ سات افزائش کے جوڑوں نے کوہورٹ 1 (n=27 خواتین، n=36 نر) کے لیے مضامین تیار کیے، اور افزائش کے آٹھ جوڑوں نے کوہورٹ 2 (n=27 مرد، کوئی خواتین نہیں) کے لیے مضامین تیار کیے ہیں۔ مادہ پالنے والے Sprague – Dawley چوہے (215 اور 260 g کے درمیان آمد پر) چارلس ریورز (Wilmington, MA, USA) سے حاصل کیے گئے تھے جب کہ نر پالنے والے Sprague-Dawley چوہے تھے (230 اور 300 g کے درمیان آمد پر) Envigo) (ہیوسٹن، TX، USA)۔ تمام چوہوں کو مخالف جنس کے پنجرے کے ساتھی کے ساتھ رکھا گیا تھا جب تک کہ مادہ حمل کی واضح علامات ظاہر نہ کرے، اس مقام پر خواتین کو اکیلے رکھا جاتا تھا۔ سماجی خوف سے متعلق سیکھنے کو یقینی بنانے میں مدد کرنے کے لیے بچوں کو بعد از پیدائش کے دن 21 (P21) میں ہم جنس کے بہن بھائیوں کے تینوں میں دودھ چھڑایا گیا۔ اسپیئر پپلوں کو غیر متعلقہ چوہوں کے ساتھ ٹرائیڈز یا ڈائڈز میں دودھ چھڑایا گیا تھا اور آسٹن کی یونیورسٹی آف ٹیکساس میں دوسرے تجربات میں استعمال کیا گیا تھا۔ ہمارے دوسرے کوہورٹ لیٹر کے مادہ پپلوں کو دوسرے تجربات میں استعمال کیا گیا تھا۔ پالتو جانوروں کو پالنے کے معمول کے طریقہ کار (مثلاً پنجرے میں تبدیلی) کو چھوڑ کر کم سے کم خلل کے ساتھ بالغ ہونے کی اجازت دی گئی جب تک کہ عادت کے طریقہ کار (فیمیلز ٹرائیڈز) یا ڈومیننس اسسمنٹ کے طریقہ کار (مرد ٹرائیڈز) شروع ہو جائیں (غلبہ کے طریقہ کار اور نتائج کی تفصیل ضمنی مواد میں)۔ کوہورٹ 1 چوہوں نے P106–P112 دن کی عمر کے درمیان طریقہ کار شروع کیا اور کوہورٹ 2 چوہوں نے P99–P118 دنوں کی عمر کے درمیان شروع کیا۔ تمام مضامین کو ایک 12-گھنٹہ ریورس ڈارک – لائٹ سائیکل پر رکھا گیا تھا جس میں 3 PM پر لائٹس بند تھیں۔ تمام تجرباتی طریقہ کار سرخ روشنی کے تحت مضامین کے تاریک چکر کے دوران مکمل کیے گئے تھے۔ اس تجربے کے تمام حصے تجرباتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ گائیڈ کی تعمیل میں کیے گئے تھے اور انہیں آسٹن اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی میں یونیورسٹی آف ٹیکساس کے استعمال کے لیے منظور کیا گیا تھا۔

آلات اور محرکات۔ خوف کنڈیشنگ. تمام ڈر کنڈیشنگ اور ڈر کنڈیشنگ بائی پراکسی طریقہ کار کو معیاری کنڈیشنگ چیمبرز (30.48 سینٹی میٹر × 25.4 سینٹی میٹر × 30.48 سینٹی میٹر) میں مکمل کیا گیا تھا جو سامنے اور پیچھے واضح plexiglass کی دیواروں سے تعمیر کیا گیا تھا، دو اسٹیل کی دیواریں، اور ایک plexiglass چھت کے ساتھ۔ مرکز میں سوراخ. چیمبر کا فرش ایک شاک جنریٹر (کولبورن انسٹرومنٹس، ایلنٹاؤن، PA) سے جڑی سٹینلیس سٹیل کی سلاخوں کی ایک قطار تھی۔ تمام چیمبرز صوتی تنہائی خانوں (کولبورن آلات) میں بند تھے اور اندرونی سرخ روشنی سے روشن تھے۔ رویے کو بند سرکٹ کیمروں (Panasonic™ WV-BP334) کے ذریعے ریکارڈ کیا گیا تھا جو کنڈیشنگ چیمبرز کے اوپر نصب کیا گیا تھا جس میں plexiglass چھت میں سوراخ کے ذریعے لینس داخل کیا گیا تھا۔ ہر مضمون کے درمیان 70 فیصد الکحل کے محلول کے ساتھ چیمبروں کو مکمل طور پر مٹا دیا گیا۔ تمام محرک کی ترسیل کو فریز فریم سافٹ ویئر (کولبورن انسٹرومینٹس) کا استعمال کرتے ہوئے کنٹرول کیا گیا تھا۔ CS ایک 20 پتھر تھا (5 kHz، 80 dB) اور، ایک سے زیادہ CS پریزنٹیشنز کے طریقہ کار میں، ایک متغیر انٹر ٹرائل وقفہ (ITI) اوسطاً 180 s ہے۔ غیر مشروط محرک (یو ایس) 1 ایم اے کا جھٹکا تھا جو 500 ایم ایس دورانیہ کا تھا اور مشروط محرک کے ساتھ ختم ہوا۔

کھانے کی ترجیحات کی سماجی ترسیل۔ تمام STFP طریقہ کار کمرے سے ملحقہ کمرے میں ہوا جس میں کنڈیشنگ چیمبر تھے۔ 100 گرام پاؤڈر 5LL2 Purina rodent chow کے ساتھ یا تو 1 g McCormick گراؤنڈ دار چینی (ڈائیٹ Cin) یا 2 جی ہرشے کوکو پاؤڈر (ڈائیٹ کو) ملا کر نوول ڈائیٹس تیار کی گئیں۔ سادہ غذا، جو کھانے کی پابندی کی مدت کے دوران تمام چوہوں کو دی گئی تھی اور تجرباتی طریقہ کار کے آخری دن چوہوں کو کنٹرول کرنے کے لیے دی گئی تھی، غیر ملاوٹ شدہ پاؤڈر 5LL2 Purina rodent chow تھی۔ کھانے کی پابندی اور تجرباتی طریقہ کار کے دوران تمام پاؤڈر چاؤز کو لٹکائے ہوئے فوڈ کپ میں پیش کیا گیا تھا جو 4 اوز سے بنائے گئے تھے۔ شیشے کے برتن اور 12-گیج اسٹیل یوٹیلیٹی وائر۔ ہر استعمال کے درمیان صابن اور پانی سے اچھی طرح دھونے سے پہلے کھانے کے کپوں کو دھویا گیا اور پھر 70 فیصد ایتھانول محلول سے صاف کیا گیا۔ STFP تجرباتی طریقہ کار کے تمام تکمیلی مراحل معیاری چوہے کے پنجرے (26.7 سینٹی میٹر × 48.3 سینٹی میٹر × 20.3 سینٹی میٹر) میں ہوئے، ہر چوہے کو تازہ پنجرا ملتا ہے۔ تعامل کا مرحلہ (STFP حصول کا مرحلہ) ایک بڑے پلاسٹک بن (50.5 سینٹی میٹر × 39.4 سینٹی میٹر × 37.5 سینٹی میٹر) میں لکڑی کے چپ فرش کے بستر کے ساتھ ہوا جسے ہر گروپ کے درمیان تبدیل کیا گیا تھا۔ ہر سیشن کے درمیان ونڈیکس کے ساتھ پلاسٹک کے ڈبوں کو اچھی طرح صاف کیا گیا۔

تجرباتی ڈیزائن اور سماجی سیکھنے کے طریقہ کار کا جائزہ۔

(تصویر 2 تصویری جائزہ کے لیے دیکھیں)۔

تمام چوہوں پر پانچ دن تک خوراک پر پابندی تھی اور اسے سنبھالنے کے عادی تھے اور اس کمرے میں جہاں STFP کے طریقہ کار تجرباتی طریقہ کار کے پہلے دن سے پہلے چار دن تک ہوتے تھے۔ جبکہ عادت کے طریقہ کار تجرباتی طریقہ کار کے پہلے دن سے پہلے ختم ہو گئے، کھانے کی پابندی تجربے کے اختتام تک جاری رہی۔ ہر ٹرائیڈ میں سے ایک چوہا تین شرائط میں سے کسی ایک کے لیے تفویض کیا گیا تھا: مظاہرہ کرنے والا، مبصر، یا کنٹرول۔ کوہورٹ 2 نر ٹرائیڈز کا غلبہ کے لیے جائزہ لیا گیا تھا اور سب نے ایک واضح درجہ بندی ظاہر کی تھی اور انہیں اس طرح تفویض کیا گیا تھا کہ غالب چوہا مظاہرہ کرنے والا تھا اور ایک ماتحت مبصر تھا تاکہ خوف کی سماجی ترسیل کو بڑھایا جا سکے۔ انفرادی ٹرائیڈز کو مزید تصادفی طور پر گروپوں میں تقسیم کیا گیا جہاں ڈیمانسٹریٹر اور مبصر کو STFP ریکال (چوائس) اور گروپس میں انتخابی امتحان ملے گا جہاں انہیں صرف ظاہر شدہ خوراک (Cin) ملے گی۔

تجرباتی طریقہ کار کے پہلے دن، مظاہروں کی حالت کے لیے تفویض کردہ چوہوں کو ڈر کنڈیشننگ چیمبرز میں منتقل کر دیا گیا اور 10 منٹ کے لیے عادت بننے کی اجازت دی گئی اس سے پہلے کہ وہ 3 CS کے سامنے آئیں جو ایک دردناک جھٹکے کے ساتھ ساتھ ختم ہو گئے (دیکھیں "اپریٹس اور محرک" تفصیلات)۔ ڈر کنڈیشنگ کے طریقہ کار کے بعد، Demdemonstrators کو ان کے اصل گھر کے پنجرے میں واپس لے جایا گیا۔ تجرباتی طریقہ کار کے 2 ویں دن، ڈر کنڈیشنگ کے 24 گھنٹے بعد، مظاہرین کو ان کے پنجرے کے ساتھی کے ساتھ کنڈیشنگ چیمبر میں واپس کر دیا گیا اور انہیں FCbP طریقہ کار (تصویر 2) سے گزارا گیا۔ ایف سی بی پی کے طریقہ کار کے فوراً بعد، مبصر چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس کر دیا گیا جبکہ مظاہرین کو ایک ملحقہ کمرے میں منتقل کر دیا گیا اور انہیں دار چینی کے ذائقے والے پاؤڈر چاؤ کھانے کے لیے 1 گھنٹہ دیا گیا۔ ایک گھنٹہ گزر جانے کے بعد، مبصرین کو ان کے مظاہرین کے ساتھ ایک تعامل خانے میں منتقل کر دیا گیا اور انہیں 30 منٹ تک ان کے ساتھ بات چیت کرنے کی اجازت دی گئی تاکہ سماجی طور پر منتقل ہونے والے کھانے کی ترجیحات کے حصول کی اجازت دی جا سکے۔ ہماری لیب کی پچھلی تحقیق نے ان ٹائم پوائنٹس کو STFP ٹرانسمیشن33 کے لیے کافی ہونے کی توثیق کی ہے۔ اس کے بعد، آبزرور چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس کر دیا گیا جب کہ ڈیمنسٹریٹر چوہوں کو سنگل ہاؤسنگ میں منتقل کر دیا گیا تاکہ مبصر یا کنٹرول میں مزید STFP کی منتقلی کو روکا جا سکے۔ تجرباتی طریقہ کار کے 3 دن پر، کنٹرول چوہوں کو اکیلے کنڈیشنگ چیمبروں میں منتقل کیا گیا اور، چیمبر میں 10 منٹ کی عادت کے بعد تین 20 s CS کے ساتھ پیش کیا گیا جس میں کوئی جھٹکا نہیں تھا۔ یہ ایک الگ دن پر کیا گیا تھا تا کہ خطرے کی گھنٹی کے فیرومونز کے امکان کو کم سے کم کیا جا سکے — جنہیں چوہوں کے ذریعے دھمکی آمیز محرکات کے جواب میں چھوڑا جاتا ہے اور مخصوص سیکھنے پر اثر انداز ہوتا ہے59 — اب بھی چیمبر میں موجود ہیں۔

تجربے کے آخری دن، 4 دن، سماجی طور پر منتقل ہونے والی خوراک کی ترجیح اور ڈر کنڈیشنگ/فیئر کنڈیشنگ بذریعہ پراکسی یادوں دونوں کے لیے واپسی کا آغاز کیا گیا۔ چوائس کنڈیشن کے لیے تفویض کردہ ٹرائیڈز کے تمام مبصرین اور مظاہرین کو دار چینی اور کوکو کی پسند کی خوراک تک 10 منٹ تک رسائی کی اجازت دی گئی، جب کہ سن کنڈیشن کے لیے تفویض کردہ ٹرائیڈز کے مبصرین اور مظاہرین کو دار چینی کی خوراک تک 10 منٹ کی ایڈ لیبٹم رسائی دی گئی۔ صرف تمام ٹرائیڈز میں، کنٹرول چوہوں کو سادہ پاؤڈر چاؤ تک 10 منٹ تک رسائی دی گئی۔ اس کے فوراً بعد، چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس کر دیا گیا اور لیبارٹری کی جگہ پر واپس لے جانے اور کنڈیشنگ چیمبرز میں رکھنے سے پہلے ایک 10- منٹ کے لیے بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا۔ اس کے بعد تمام چوہوں کو ایک 20 s CS پیش کرنے سے پہلے چیمبر کو ایک 3- منٹ کی رہائش کی مدت دی گئی۔ CS کے اختتام کے 5 منٹ بعد، تمام چوہوں کو پینٹوباربیٹل اور فینیٹوئن محلول (Euthasol؛ Virbac Animal Health) کے انجیکشن کے ذریعے euthanized کیا گیا اور پرفیوز کیا گیا۔ ان کے دماغوں پر بعد میں آرک ایم آر این اے اظہار کے لیے کارروائی کی گئی۔ ہمارے ٹرمینل طریقہ کار کے ٹائم کورس اور آرک ایم آر این اے 28 کے معلوم مائیگریشن ٹائم فریم کو دیکھتے ہوئے، آرک ایم آر این اے کے سائٹوپلاسمک اظہار میں اضافہ STFP یاد کرنے کے طریقہ کار کی وجہ سے ہوگا، جب کہ جوہری اظہار FC/FCbP یاد کرنے کے طریقہ کار کی وجہ سے ہوگا، جس میں خلیات دوہری ایکٹیویشن دکھا رہے ہیں۔ دونوں ٹائم فریموں پر چالو کیا گیا ہے (تصویر 1 دیکھیں؛ ٹشو ٹریٹمنٹ اور پروسیسنگ کے بارے میں تفصیلات کے لیے "ٹشو اینالیسس" بھی دیکھیں)۔

صحرائی رہنے والا cistanche

طریقہ کار

عادت اور کھانے کی پابندی۔ تمام عادت تجرباتی طریقہ کار کے پہلے دن سے ٹھیک پہلے ہوئی تھی۔ عادت میں چوہوں کے ہر پنجرے کو کمرے میں منتقل کیا جانا شامل تھا جس میں تمام STFP تجرباتی طریقہ کار انجام پائے گا اور 15 منٹ تک کمرے میں رہنے کی اجازت دی جائے گی۔ اس مدت کے دوران، ہر ایک چوہے کو تجربہ کار نے اٹھایا اور سنبھالا جو 2 منٹ تک رویے کو چلاتا رہے گا تاکہ انہیں اور اس فرد کو سنبھالنے کی عادت ڈال سکے۔ رہائش کے تمام طریقہ کار سرخ روشنی کے نیچے ایک تاریک کمرے میں ہوئے، اور تمام چوہوں کو 4 دن کی عادت ملی۔ کھانے کی پابندی عادت شروع ہونے سے ایک دن پہلے شروع ہوئی اور تجربے کے اختتام تک برقرار رہی۔ کھانے کی پابندی کے آغاز پر، کھانے کی گولیاں جو تمام مضامین کھا رہے تھے پنجرے سے ہٹا دیے گئے تھے۔ اس کے بعد، تمام پنجروں کو ان کے گھر کے پنجرے میں 1 گھنٹے کے لیے سادہ، پاؤڈرڈ Purina 5LL2 ڈائیٹ سے بھرے لٹکنے والے جار تک روزانہ اشتہاری اجازت دی گئی۔ کھانے کی پابندی کے آغاز سے چوہوں کا وزن روزانہ کیا جاتا تھا جب تک کہ تجربہ ختم نہ ہو جائے تاکہ وزن میں غیر معمولی کمی کو یقینی بنایا جا سکے۔

طرز عمل اسکورنگ۔

اس تجربے کے لیے تمام رویے کی اسکورنگ Behavioral Observation Research Interactive Software (BORIS)60 کا استعمال کرتے ہوئے مکمل کی گئی۔

خوف کنڈیشنگ بذریعہ پراکسی سماجی رابطہ اسکورنگ۔ ہماری لیب کی ماضی کی تحقیق نے اشارہ کیا ہے کہ طویل مدتی میموری ٹیسٹ میں مبصرین کی طرف سے ظاہر کیے جانے والے خوف کی مقدار اور مردوں میں CS13 کے دوران اور 14,26 خواتین میں CS کے بعد اپنے ڈیمانسٹریٹر کے ساتھ بات چیت میں گزارے گئے وقت کے درمیان ایک مضبوط تعلق ہے۔ اس طرح، CS پریزنٹیشن کے دوران ہر 20- کی مدت اور ہر ایک کے فوراً بعد 20- کی مدت کے لیے پراکسی کے ذریعے خوف کی حالت کے سماجی حصول کے مرحلے کی ویڈیوز کو مبصر اور مظاہرہ کرنے والے کے درمیان سماجی تعامل کے لیے اسکور کیا گیا تھا۔ خوف کے حصول کا ثانوی اشاریہ فراہم کرنے کے لیے CS پریزنٹیشن۔ سماجی رابطہ اس وقت اسکور کیا گیا جب آبزرور اور ڈیمنسٹریٹر چوہوں نے کیو پیریڈ (CS رابطے کے دوران) یا CS (پوسٹ CS رابطہ) کے بعد 20 سیکنڈ میں گزرنے کے علاوہ رابطہ کیا۔ ڈیمنسٹریٹر کے ساتھ رابطے میں گزارے گئے ہر اسکورنگ پیریڈ کے فیصد کا حساب لگایا گیا۔ مردوں کے لیے کیو پیریڈ کے دوران فیصد رابطے کے لیے ڈیٹا اور خواتین کے لیے کیو پیریڈ کے فوراً بعد فیصد رابطے کے لیے ڈیٹا کو کھینچ کر ایک واحد "متعلقہ رابطہ" پیمائش میں جوڑا گیا تاکہ تمام حتمی شماریاتی تجزیوں میں استعمال کیا جا سکے۔

چوائس ٹیسٹ اسکورنگ۔ سماجی طور پر منتقل شدہ کھانے کی ترجیح کو یاد کرنے کے لیے انتخابی امتحان کے ویڈیوز کو اس وقت کے لیے اسکور کیا گیا تھا جو ایک چوہے نے کھانے کے کپ کے ساتھ بات چیت کرنے میں صرف کیا تھا اس بنیاد پر کہ آیا اس میں ظاہر شدہ/پہلے سے استعمال شدہ غذا (ڈائیٹ Cin) یا ناول ہے۔ غذا (ڈائٹ کمپنی) یہ کھانے کی ترجیح کے ایک ممکنہ ثانوی اقدام کے طور پر کیا گیا تھا، جیسا کہ ہم نے اندازہ لگایا تھا کہ انتخابی امتحان غیر معمولی طور پر مختصر ہونے کی وجہ سے (10 منٹ) ضرورت کے مطابق ہم اکیلے کھائی جانے والی مقدار کی بنیاد پر ترجیحات کا پتہ لگانے سے قاصر ہو سکتے ہیں۔ فوڈ کپ کے ساتھ تعامل اس کے لیے اسکور کیا گیا جب بھی چوہا جسمانی طور پر رابطے میں تھا اور فعال طور پر کپ سے دور نہیں جاتا تھا (یعنی، جار کے ساتھ رابطے میں سامنے کے پنجے، جار کے اندر سر، جار کے اوپر چڑھنا، یا فعال طور پر کھانا کھا رہا تھا۔ جار سے)۔ شماریاتی تجزیہ کے لیے، ہم نے کسی بھی کپ کے ساتھ تعامل کرنے میں صرف کیے گئے وقت کی کل مقدار کی بنیاد پر دی گئی خوراک پر مشتمل کپ کے ساتھ تعامل کرنے میں صرف کیے گئے وقت کا حساب لگایا (مثال کے طور پر، خوراک Cin کے لیے، فیصد وقت= TimeDiet Cin/ (TimeDiet) Co plus TimeDiet Cin))۔ مکمل 10- منٹ چوائس ٹیسٹ سیشن ان تمام چوہوں کے لیے اسکور کیا گیا جو اس سے گزرے تھے۔

ٹشو کا تجزیہ۔

ribonuclease (RNase) کے ذریعے mRNA کے انحطاط کو کم کرنے کے لیے، دماغ کی تیاری اور پروسیسنگ کے دوران استعمال ہونے والے تمام آلات اور سطحوں کو باقاعدگی سے RNase AWAY™ (Termo Scientity؛ Waltham, MA, USA) یا RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY) سے صاف کیا گیا تھا۔ ، امریکا).

دماغ کی تیاری۔ یوتھناسیا کے فوراً بعد، مضامین کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ (PFA) محلول کا استعمال کرتے ہوئے انٹرا کارڈی طور پر پرفیوز کیا گیا۔ اس کے بعد دماغوں کو ہٹا دیا گیا اور 4 فیصد PFA میں ڈوبا گیا تاکہ 24-48 گھنٹے تک پوسٹ فکسیشن کی اجازت دی جا سکے۔ پوسٹ فکسیشن مکمل ہونے کے بعد، دماغوں کو کریو پروٹیکشن کے لیے فاسفیٹ بفرڈ نمکین میں 30 فیصد سوکروز کے محلول میں منتقل کیا گیا۔ ایک بار جب دماغ شیشی کے نچلے حصے میں دھنس گیا تھا، جو کریو پروٹیکشن کے لیے کافی سوکروز کی مقدار کی نشاندہی کرتا تھا، انہیں پاؤڈر خشک برف میں فلیش سے منجمد کر دیا گیا تھا اور سیکشن کرنے تک اسٹوریج کے لیے 80 ڈگری فریزر میں منتقل کر دیا گیا تھا۔ اس کے بعد دماغوں کو 30 µm موٹائی پر سلائیڈنگ مائیکروٹوم پر کورونلی طور پر چھ سیریزوں میں تقسیم کیا گیا تھا (لہذا ایک سیریز کے بعد کے حصے 180 µm کے فاصلے پر تھے) اور اسے فوری طور پر نصب کیا گیا تھا اور اسے نمی والے سپنج کے ساتھ ویکیوم چیمبر میں رکھنے سے پہلے خشک ہونے دیا گیا تھا جہاں وہ تھے۔ 24 گھنٹے کے لیے مکمل طور پر خشک ہونے کے لیے چھوڑ دیں۔ صرف ہپپوکیمپل سیکشنز (تقریباً −3.2 سے −5.2 بریگما سے) یا پریفرنٹل ریجنز (بریگما سے تقریباً پلس 3.7 سے پلس 1.4) جن میں دلچسپی کے شعبوں کو شامل کیا گیا تھا اور ان پر کارروائی کی گئی تھی۔ اس کے بعد نصب شدہ حصوں کو سیل بند RNase فری سلائیڈ باکس میں رکھا گیا اور پروسیسنگ تک – 80 ڈگری پر محفوظ کیا گیا۔

ٹشو پروسیسنگ. Lee et al.61 اور Petrovich et al.62 میں استعمال ہونے والے پروٹوکولز سے تمام طریقہ کار میں ترمیم کی گئی تھی۔ ٹشو پروسیسنگ سے پہلے، آرک ایم آر این اے کے لیے ایک سی آر این اے پروب کی تعمیر کی گئی تھی جس کا آغاز پلاسمڈ سے کیا گیا تھا جس میں آرک ٹرانسکرپٹ کی پوری لمبائی والا سی ڈی این اے (~30 kbp) تھا۔ تحقیقات بنانے کے لیے، ڈی این اے کو سب سے پہلے پلازمڈ کو 10×ہضم کرنے والے بفر (NEBufer؛ Biolabs؛ Ipswich، MA، USA)، ایک 10×EcoRI پابندی والے انزائم (Biolabs) کے ساتھ ملا کر کاٹا گیا، اور نیوکلیز سے پاک پانی کو صاف کیا گیا۔ 2 گھنٹے کے لئے 37 ڈگری پر incubated. الیکٹروفورسس کا استعمال کرتے ہوئے ڈی این اے کی درست کٹنگ کی تصدیق کی گئی، جس کے بعد ڈی این اے کو راتوں رات ایتھنول میں صاف کیا گیا۔ تطہیر کے بعد، ڈی این اے گولی کو سینٹری فیوج میں نکالا گیا، EtOH میں دھویا گیا، مکمل طور پر خشک کیا گیا، اور TE بفر میں دوبارہ معطل کر دیا گیا۔ اس بات کی توثیق کرنے کے لیے کہ ڈی این اے درست طریقے سے لکیری کیا گیا تھا، قوس کے ارتکاز کا حساب لگائیں، اور چیک کریں کہ کوئی آلودگی موجود نہیں تھی، ڈی این اے کا نمونہ سپیکٹرو فوٹومیٹری (نانوڈراپ لائٹ؛ تھرمو سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کے ذریعے ٹیسٹ کیا گیا۔ Digoxigenin (DIG) لیبل والی تحقیقات کو RNase فری پانی، 10×ٹرانسکرپشن بفر (Ambion)، RNAse بلاک (Ambion)، DIG RNA لیبلنگ مکس (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) کے ساتھ لکیری DNA کو ملا کر نقل کیا گیا تھا۔ ، اور ایک T7 RNA پولیمریز (Ambion) محلول کو 37 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کرنے سے پہلے۔ آخر میں، تحقیقات کو نیوکلیز سے پاک پانی میں پتلا کر کے ایک منی کوئیک اسپن کالم (روچے) میں صاف کیا گیا۔

سی آر این اے پروب کی تعمیر کے بعد، نر چوہوں کے ٹشووں پر مشتمل سلائیڈوں کو 4 فیصد PFA محلول میں 40 منٹ تک ڈبو دیا گیا تاکہ پورے سیٹو پروسیسنگ میں ٹشو کی سالمیت کو بڑھایا جا سکے۔ اس پی ایف اے واش کے بغیر مادہ چوہوں کے ٹشو پر کارروائی کی گئی۔ اس کے بعد سلائیڈوں کو 37 ڈگری پر پروٹینیز K (PK) بفر میں 0.5 فیصد ایسیٹک اینہائیڈرائیڈ/1.5 فیصد ٹرائیتھانولامین محلول جس میں گلیشیل ایسٹک ایسڈ شامل ہے کے ساتھ علاج کرنے سے پہلے دھویا اور انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد سلائیڈوں کو نمکین سوڈیم سائٹریٹ (SSC) بفر میں دھویا جاتا تھا، اس سے پہلے کہ وہ ایتھنول اور ہوا سے خشک ہونے والے بڑھتے ہوئے ارتکاز میں ڈوبنے سے پانی کی کمی کا شکار ہو جائیں۔ آخر میں، ہر سلائیڈ کو ہائبرڈائزیشن بفر کے 300 µL میں احاطہ کیا گیا جس میں خمیر tRNA (انویٹروجن؛ کارلسباد، CA، USA)، سالمن سپرم DNA (Ambion)، dithiothreitol (Sigma؛ St. Louis، MO، USA)، اور cRNA پروب شامل تھے۔ (1:100)۔ اس کے بعد ہر سلائیڈ کو DPX ماؤنٹنٹ (الیکٹران مائیکروسکوپی سائنسز؛ ہیٹ فیلڈ، PA، USA) کے ساتھ کناروں کے ارد گرد ڈھک کر 60 ڈگری پر 20 گھنٹے کے لیے ہائبرڈائزیشن سلوشن میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ خاص طور پر، کور سلپ نے ٹشو کو DPX ماؤنٹنٹ کے ساتھ کسی بھی براہ راست رابطے سے محفوظ رکھا، لہذا بعد میں سخت DPX کو ہٹانے سے ٹشو کو کوئی نقصان نہیں ہوا۔

ایک بار ہائبرڈائزیشن مکمل ہونے کے بعد، کور سلپس کو احتیاط سے ہٹا دیا گیا، اور سلائیڈز کو 4xSSC بفر میں سوڈیم تھیوسلفیٹ (ST) کے ساتھ ملا کر ایک گھنٹہ تک 60 ڈگری پر 37ºC پر RNAse کی سرگرمی کو روکنے کے لیے ethylenediaminetetraacetic ایسڈ پر مبنی محلول کے ساتھ علاج کیا گیا۔ اس کے بعد، سلائیڈوں کو 60 ڈگری پر دوبارہ ST کے ساتھ ملا کر SSC محلول کی نزولی ارتکاز میں دھویا گیا۔ اس کے بعد ٹشو کو ڈٹرجنٹ محلول (Tween20) میں پرکن ایلمر TSA فلوروسین سسٹم (NEL701001KT؛ PerkinElmer, Waltham, MA, USA) سے داغدار ہونے سے پہلے دھویا گیا۔ سلائیڈوں کو ایک مرطوب چیمبر میں رکھا گیا تھا اور اسے بلاک کرنے والے بفر کے ساتھ علاج کیا گیا تھا جس کے بعد اینٹی DIG-HRP کنجوگیٹ 2 گھنٹے کے لیے تھا۔ اس کے بعد سلائیڈوں کو ڈٹرجنٹ کے محلول میں مختصر طور پر دھویا گیا اور اسے ایک گہرے مرطوب چیمبر میں واپس جانے سے پہلے اور فلوروسین ٹائرامائیڈ ریجنٹ (FITC) پر مشتمل محلول کے ساتھ لیپت کیا گیا اور 30 ​​منٹ تک بیٹھنے کی اجازت دی گئی۔ آخر میں، سلائیڈوں کو دھویا گیا، ہوا میں خشک ہونے کی اجازت دی گئی، اور جوہری داغ 4′،6-diamidino-2-phenylinodole (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, USA) پر مشتمل ایک ماؤنٹنٹ سے ڈھانپ دیا گیا۔ . سلائیڈوں کو امیجنگ تک - 20 ڈگری پر اندھیرے میں محفوظ کیا گیا تھا۔

امیجنگ تمام امیجنگ Axio Scope A1 مائکروسکوپ (Zeiss؛ Tornwood, NY, USA) کا استعمال کرتے ہوئے مکمل کی گئی تھی۔ Paxinos اور Watson Brain atlas63 کی مدد سے DAPI سٹیننگ کے ذریعے دلچسپی کے علاقوں کی نشاندہی کی گئی اور پھر 40×مقصد (حقیقی میگنیفکیشن~900×) کے تحت 10×مقصد کا استعمال کیا گیا۔ DAPI اور FITC دونوں داغوں کے لیے تصاویر لی گئیں اور بعد میں FIJI (NIH, Bethesda, MD) کے ساتھ ImageJ سافٹ ویئر میں ایک کسٹم میکرو کا استعمال کرتے ہوئے رنگین اور خود بخود ضم ہو گئیں۔ پوری صورتحال میں ٹشو کے انحطاط کی وجہ سے، تمام حصے یا ممکنہ دلچسپی کے شعبے قابل عمل نہیں تھے۔ اس طرح، تصاویر کو قابل اعتماد طریقے سے زیڈ اسٹیک نہیں کیا جا سکتا تھا اور اس کے بجائے، ایک ہی جہاز میں لیا گیا تھا۔ درج ذیل خطوں کی تصویر کشی اور گنتی کی گئی: پریلمبک کورٹیکس (بریگما سے جمع 3.72 سے جمع 2.52)، انفرالیمبک کارٹیکس (بریگما سے جمع 3.52 سے جمع 2.2)، پس منظر (بریگما سے جمع 3.72 سے جمع 3.2) اور وینٹرل (بریگما سے جمع 3.72 سے جمع 3.2) بریگما سے پلس 3.0 تک) orbitofrontal cortex، anterior cingulate cortex کا CG1 خطہ (بریگما سے جمع 3.72 سے جمع 2.52)، اور وینٹرل ہپپوکیمپس کا CA3 خطہ (− 4.3 سے −4.8 bregma سے) (Figma) (Figma)۔ سخت امیگڈلر نیوکلی خوف کے بارے میں سیکھنے میں ان کے اچھی طرح سے قائم کردار کے لئے بھی خاص دلچسپی رکھتے تھے، مذکورہ بالا بافتوں کو نقصان اس علاقے میں خاص طور پر شدید تھا۔ اس طرح، ہم اس علاقے کو شامل کرنے کے لیے اتنا بڑا نمونہ حاصل کرنے کے قابل نہیں تھے (کسی مخصوص علاقے کے شماریاتی تجزیے میں چوہے کو شامل کرنے کے لیے کم از کم 6 قابل عمل تصاویر/خطے کی ضرورت تھی)۔

گنتی کو علاقے کے لحاظ سے مکمل کیا گیا تھا اور تمام تصویری فائلوں کو ایک بے ترتیب عددی کوڈ تفویض کیا گیا تھا تاکہ گنتی کے وقت تصویر سے متعلق کسی بھی تفصیلات سے شمار مکمل کرنے والے تجربہ کار کو اندھا کر دیا جائے۔ تمام سیل شمار امیج جے میں FIJI پیکیج کے ساتھ لیے گئے تھے اور سیل گنتی کے آلے کا استعمال کرتے ہوئے بنائے گئے تھے۔ خلیات کو جوہری اور سائٹوپلاسمک آرک ایم آر این اے اظہار کے لیے الگ الگ شمار کیا گیا تھا اور اوورلیپنگ اظہار کو ظاہر کرنے والے خلیوں کو دوہری اظہار کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔ نیوکلیئر آرک-اظہار کرنے والے اور سائٹوپلاسمک آرک-اظہار کرنے والے خلیوں کی حتمی گنتی میں صرف وہی خلیے شامل ہیں جو صرف اس خطے میں اظہار کرتے ہیں (یعنی دوہری اظہار کرنے والے خلیات شامل نہیں تھے)۔ DAPI داغ والے خلیوں کی مکمل گنتی کی گئی اور ہر دیئے گئے علاقے میں اظہار ظاہر کرنے والے خلیوں کا فیصد شمار کیا گیا جس کے بعد خلیوں کا اوسط فیصد انفرادی چوہوں میں ہر قسم کی ایکٹیویشن کو ظاہر کرتا ہے۔ بڑی تعداد میں تصاویر والے چوہوں کے اسکور کو ہمارے اعدادوشمار پر غیر متناسب اثر ڈالنے سے روکنے کے لیے اور نمونے کے سائز کی افراط زر کو روکنے کے لیے صرف یہ اوسط ہمارے حتمی تجزیے میں استعمال کیے گئے تھے۔

شماریاتی تجزیہ کا جائزہ۔ تمام شماریاتی تجزیے R کوڈنگ سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے مکمل کیے گئے تھے۔ مکمل کوڈ ہمارے ڈیٹا ریپوزٹری https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab پر دیکھنے کے لیے آزادانہ طور پر دستیاب ہے۔ جب تک کہ دوسری صورت میں بیان نہ کیا جائے، شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھے جانے والے ٹیسٹ کے لیے کٹ آف کو p پر سیٹ کیا گیا تھا۔<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

مبصر اور مظاہرہ کرنے والے چوہوں کے لیے بایوریٹی ارتباط کا حساب لگایا گیا تاکہ مناسب وقت پر ہونے والے اظہار کے لیے طرز عمل کے اقدامات اور آرک سیل شمار کے درمیان ممکنہ تعلقات کا اندازہ لگایا جا سکے (مثال کے طور پر، سائٹوپلاسمک آرک کی گنتی دار چینی کے فیصد کے لیے)۔ پیئرسن کے ارتباطی گتانک کا استعمال کیا جاتا تھا اگر کسی بھی ڈیٹاسیٹ میں گربس ٹیسٹ کے ساتھ کوئی آؤٹ لیئر نہیں پایا جاتا تھا۔ اگر آؤٹ لیرز کا پتہ چلا تو، اس کی بجائے اسپیئر مین کا ارتباط کا گتانک استعمال کیا جاتا تھا۔ یہ اندازہ لگانے کے لیے کہ آیا مبصرین میں دوہری اظہار کرنے والے خلیوں میں سماجی سیکھنے اور آرک کے درمیان تعلق ہے، سماجی سیکھنے کا ایک مجموعی میٹرک — جسے یہاں سے سوشل لرننگ میٹرک (SLM) کہا جاتا ہے — کا حساب معیاری اسکور کے اوسط کو لے کر کیا گیا تھا۔ z-score) CS پریزنٹیشن (مردوں) کے دوران یا CS پریزنٹیشن (خواتین) کے بعد FCbP سماجی سیکھنے کے مرحلے کے دوران مظاہرہ کرنے والے کے ساتھ رابطے میں گزارے گئے کھانے کے کل کھانے کے فیصد کے لیے اور وقت کا فیصد۔ خاص طور پر، مبصر چوہوں کے لیے آخری دن کیو پر فیصد منجمد ہونا استعمال نہیں کیا گیا تھا کیونکہ ہمارے نتائج اور ہمارے فالو اپ تجربے کے نتائج (ضمنی مواد دیکھیں) نے اشارہ کیا کہ ہمارے طرز عمل کی جانچ کے طریقہ کار کی شرائط کے نتیجے میں کچھ انجماد رویے میں بھی چوہوں کو کنٹرول کریں — کم از کم مردوں میں — اور اس طرح، سماجی طور پر حاصل کردہ خوف کے ردعمل کی طاقت کا بہترین اندازہ نہیں ہو سکتا۔ اس طرح، ہمارے ماضی کے نتائج کو دیکھتے ہوئے کہ CS (جنس پر منحصر) کے دوران یا اس کے بعد مظاہرے کرنے والے کے ساتھ تعاملات کی بہت زیادہ پیش گوئی کی گئی تھی جو بعد میں cue12-14 تک منجمد ہو جائے گی، جنس کے لیے موزوں وقت پر مظاہرین کے ساتھ تعامل کو جوہری قوس کی سرگرمی کے خلاف ارتباط کے لیے جانچا گیا تھا۔ مبصر چوہوں کے لئے آخری دن کیو کو منجمد کرنے کے بجائے۔ مظاہرین کے لیے، اسی طرح کے میٹرک کا حساب آخری دن کیو کو معیاری منجمد کرنے اور کل کھائے جانے والے فیصد کا جو مانوس غذا (Diet Cin) تھا اور دوہری آرک سرگرمی کے خلاف جانچا گیا تھا۔ ہر رویے کے ڈیٹاسیٹ پر چلنے والے متعدد ٹیسٹوں کو درست کرنے کے لیے (6، ہر دماغی علاقے کے لیے)، ارتباط کے لیے اہم p-value کو بونفرونی کو 0.0083 میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔

حوالہ جات

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. آٹزم کے شکار بچے قدرتی طور پر پائے جانے والے سماجی محرکات کی طرف راغب ہونے میں ناکام رہتے ہیں۔ J. آٹزم دیو۔ خرابی 28، 479–485 (1998)۔

2. Zeeland, AAS-V., Dapretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Reward Processing in Autism. آٹزم ریس

3، 53–67 (2010)۔ 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Te سوشل موٹیویشن تھیوری آف آٹزم۔ رجحانات کوگن۔ سائنس 16، 231–239 (2012)۔

4. Öst, L.-G. فوبیا کے حصول کے طریقے اور رویے کے علاج کے نتائج۔ برتاؤ۔ Res. ٹیر 23، 683–689 (1985)۔

5. اولینڈک، ٹی ایچ اور کنگ، این جے بچپن کے خوف کی ابتدا: رچمن کے خوف کے حصول کے نظریہ کی تشخیص۔ برتاؤ۔ Res. ٹیر 29، 117–123 (1991)۔

6. مرکل باخ، ایچ، آرنٹز، اے اور ڈی جونگ، پی. مکڑی کے فوبکس میں کنڈیشنگ کے تجربات۔ برتاؤ۔ Res. ٹیر 29، 333–335 (1991)۔

7. جیون، ڈی وغیرہ۔ مشاہداتی خوف سیکھنے میں خراب درد کا نظام اور ACC میں Cav1.2 Ca2 پلس چینلز شامل ہیں۔ نیٹ نیوروسکی 13، 482–488 (2010)۔

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA دودھ چھڑانے کے بعد سماجی تنہائی مشاہداتی خوف کی کیفیت کو متاثر کرتی ہے۔ برتاؤ۔ دماغ Res. 242، 142–149 (2013)۔

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD کاٹنے والی مکھیوں سے نمٹنے کے لیے دوسروں سے سیکھنا: خوف سے متاثر کنڈیشنڈ اینالجیزیا اور فعال اجتناب کی سماجی تعلیم۔ برتاؤ۔ نیوروسکی 115، 661–674 (2001)۔

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. ڈرنا سیکھنا اور قدرتی تناؤ سے نمٹنا: انفرادی اور سماجی طور پر حاصل شدہ کورٹیکوسٹیرون اور مکھیوں کے کاٹنے سے بچنے کے ردعمل۔ ہرم برتاؤ۔ 43، 99–107 (2003)۔

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Kinship، واقفیت، اور سماجی حیثیت ہرن چوہوں میں "مائیکرو پریڈیٹر" (کاٹنے والی مکھیوں) کے بارے میں سماجی تعلیم کو تبدیل کرتی ہے۔ برتاؤ۔ ایکول Sociobiol. 58، 60–71 (2005)۔

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. پراکسی کے ذریعہ خوف کنڈیشنگ: میموری کی بازیافت کے دوران خوف کی سماجی ترسیل۔ برتاؤ۔ دماغ Res. 214، 80–84 (2010)۔

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. غلبہ کی حیثیت لیبارٹری چوہوں میں سماجی خوف کی منتقلی کی پیش گوئی کرتی ہے۔ انیم کوگن 19، 1051–1069 (2016)۔

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. چوہوں میں خوف کی انجمنوں اور کھانے کی ترجیحات کی سماجی ترسیل میں واقفیت/رشتہ داری کے مختلف اثرات۔ انیم کوگن 22، 1013–1026 (2019)۔

15. مچل، CJ، Heyes، CM، Gardner، MR اور Dawson، GR چوہوں میں تقلید کی تحقیقات کے لیے دو طرفہ کنٹرول کے طریقہ کار کی حدود: مینیپولنڈم پر بدبو کے اشارے۔ QJ Exp. نفسیاتی. بی 52، 193–202 (1999)۔

16. گالیف، بی جی اور وِگمور، ایس ڈبلیو ڈیسٹنٹ فوڈز سے متعلق معلومات کی منتقلی: 'انفارمیشن سینٹر' مفروضے کی لیبارٹری تحقیقات۔ انیم برتاؤ۔ 31، 748–758 (1983)۔

17. گیلیف، بی جی، میسن، جے آر، پریٹی، جی اینڈ بین، این جے کاربن ڈسلفائیڈ: چوہوں میں ایک نیم کیمیکل ثالثی سماجی طور پر حوصلہ افزائی غذا کا انتخاب۔ فزیول برتاؤ۔ 42، 119–124 (1988)۔

18. گالیف، بی جی طرز عمل کے تجزیہ، ترکیب اور تفصیل پر توجہ میں ایک کیس اسٹڈی: کھانے کی ترجیحات کی سماجی تعلیم۔ برتاؤ۔ دماغ Res. 231، 266–271 (2012)۔

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ بالغ چوہوں میں کھانے کی ترجیحات کی سماجی ترسیل۔ انیم برتاؤ۔ 31، 265–271 (1983)۔

20. کنٹری مین، RA، Orlowski، JD، Brightwell، JJ، Oskowitz، AZ & Colombo، PJ CREB فاسفوریلیشن اور c-Fos اظہار کے دوران چوہوں کے ہپپو کیمپس میں سماجی طور پر منتقل ہونے والی خوراک کی ترجیح کے حصول اور یاد کرنا۔ ہپپوکیمپس 15، 56–67 (2005)۔

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. سماجی طور پر منتقل ہونے والی خوراک کی ترجیح پر نیوکلئس بیسالیس میگنوسیلولیس محرک کے اثرات اور c - فوس اظہار۔ سیکھیں۔ میم 13، 783–793 (2006)۔

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. غیر مقامی میموری کے استحکام کے دوران ہپپوکیمپل اور کارٹیکل ایکٹیویشن کی ڈائنامکس۔ J. Neurosci. 26، 4852–4859 (2006)۔

23. سمتھ، CA، کنٹری مین، RA، Sahuque، LL & Colombo، PJ ٹائم کورسز آف فوس ایکسپریشن ان چوہوں کے ہپپوکیمپس اور نیوکورٹیکس کے بعد سماجی طور پر منتقل شدہ خوراک کی ترجیح کے حصول اور یاد کرنے کے بعد۔ نیوروبیول۔ سیکھیں۔ میم 88، 65–74 (2007)۔

24. Lesburguères, E. et al. کارٹیکل نیٹ ورکس کی ابتدائی ٹیگنگ پائیدار ایسوسی ایٹیو میموری کی تشکیل کے لیے ضروری ہے۔ سائنس 331، 924–928 (2011)۔

25. Knapska، E. et al. جذباتی معلومات کی موضوع کے درمیان منتقلی امیگدالا ایکٹیویشن کے مخصوص نمونوں کو جنم دیتی ہے۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس 103، 3858–3862 (2006)۔

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. پاولووین خوف کی سماجی ترسیل: متعلقہ مادہ چوہوں میں خوف سے متعلق کنڈیشنگ بائی پراکسی۔ انیم کوگن 17، 827–834 (2014)۔ 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA ایک انٹرا امیگڈالا سرکٹ خاص طور پر سماجی خوف کی تعلیم کو منظم کرتا ہے۔ نیٹ نیوروسکی 20، 459–469 (2017)۔

28. اولسن، اے، نیپسکا، ای اور لنڈسٹروم، بی ٹی نیورل اینڈ کمپیوٹیشنل سسٹم آف سوشل لرننگ۔ نیٹ Rev. Neurosci. 21، 197–212 (2020)۔

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF ہپپوکیمپل نیورونل ensembles میں فوری طور پر ابتدائی جین آرک کا ماحولیات سے متعلق مخصوص اظہار۔ نیٹ نیوروسکی 2، 1120–1124 (1999)۔

30. کم، جے جے اور جنگ، میگاواٹ نیورل سرکٹس اور میکانزم جو پاولووین ڈر کنڈیشنگ میں شامل ہیں: ایک تنقیدی جائزہ۔ نیوروسکی بائیو بیوہ Rev. 30, 188–202 (2006)۔

31. Laurent, V. & Westbrook, RF infralimbic کا غیر فعال ہونا لیکن prelimbic cortex نہیں خوف کے خاتمے کے استحکام اور بازیافت کو متاثر کرتا ہے۔ سیکھیں۔ میم 16، 520–529 (2009)۔

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. خوف اور اضطراب کے لیے نیورونل سرکٹس۔ نیٹ Rev. Neurosci. 16، 317–331 (2015)۔

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. سماجی طور پر منتقل شدہ کھانے کی ترجیح کے حصول پر آخری مظاہرے کے مظاہرے کی وشوسنییتا اور تجدید کا اثر۔ R. Soc اوپن سائنس۔ 5، 172391 (2018)۔

34. نیکولائینکو، او، پاٹل، ایس، ایرکسن، ایم ایس اور برہم، سی آر آرک پروٹین: ایک لچکدار مرکز برائے synaptic پلاسٹکٹی اور کوگنیشن۔ سیمین سیل دیو۔ بائول 77، 33–42 (2018)۔

35. Chia, C. & Otto, T. Hippocampal Arc (Arg3.1) اظہار میموری کی یاد سے متاثر ہوتا ہے اور ٹریس ڈر کنڈیشنگ میں میموری کی بحالی کے لیے ضروری ہے۔ نیوروبیول۔ سیکھیں۔ میم 106، 48–55 (2013)۔

36. Pilarzyk، K. et al. phosphodiesterase 11A4 کے فنکشن کا نقصان یہ ظاہر کرتا ہے کہ حالیہ اور دور دراز طویل مدتی یادوں کو جوڑا جا سکتا ہے۔ کرر بائول 29، 2307-2321.e5 (2019)۔

37. جونز، عیسوی چوہوں میں ایسوسی ایٹیو فیر کی سماجی ترسیل — پراکسی والیوم کے ذریعے خوف کی حالت میں انفرادی اختلافات۔ 17 (اسپرنگر، 2021)۔

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Te orbitofrontal cortex سماجی طور پر منتقل شدہ کھانے کی ترجیحات کے حصول یا دور سے یاد کرنے کے لیے ضروری نہیں ہے۔ برتاؤ۔ دماغ Res. 208، 243–249 (2010)۔

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS الگ الگ نیورل پاتھ ویز مختلف فیصلے کے اخراجات پر عملدرآمد کرتے ہیں۔ نیٹ نیوروسکی 9، 1161–1168 (2006)۔

40. رولز، ای ٹی اور گرابین ہورسٹ، ایف ٹی آربیفرنٹل کورٹیکس اور اس سے آگے: اثر سے فیصلہ سازی تک۔ پروگرام نیوروبیول۔ 86، 216–244 (2008)۔

41. والس، جے ڈی کراس اسپیسز آف آربیفرنٹل کورٹیکس اور ویلیو بیسڈ فیصلہ سازی کا مطالعہ۔ نیٹ نیوروسکی 15، 13–19 (2012)۔

42. Izquierdo، A. ریوارڈ لرننگ اور فیصلہ سازی میں چوہے کے مدار کے فرنٹل کورٹیکس کے اندر فنکشنل ہیٹروجنیٹی۔ J. Neurosci. 37، 10529–10540 (2017)۔

43. رندیسی، ایم وغیرہ۔ چوہے کے ہپپوکیمپس میں اوپیئڈ-، تناؤ- اور نیوروپلاسٹیٹی سے متعلق جین کے اظہار میں دائمی تناؤ کے بعد جنسی اختلافات۔ نیوروبیول۔ تناؤ 8، 33–41 (2018)۔

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Te سیاق و سباق کا دماغ: خوف کنڈیشنگ، معدومیت، اور سائیکوپیتھولوجی کے مضمرات۔ نیٹ Rev. Neurosci. 14، 417–428 (2013)۔

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Microstimulation مشروط خوف کے اظہار پر prelimbic اور infralimbic cortex کے مخالف اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔ سیکھیں۔ میم 13، 728–733 (2006)۔

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ prelimbic and infralimbic cortices، ventral hippocampus، اور basolateral amygdala کے اظہار اور مشروط خوف کے ختم ہونے میں الگ الگ کردار۔ Neuropsychopharmacology 36, 529–538 (2011)۔

47. Baran, SE, Armstrong, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD دائمی تناؤ اور خوف کی حالت اور ختم ہونے کی یاد پر جنسی اختلافات۔ نیوروبیول۔ سیکھیں۔ میم 91، 323–332 (2009)۔

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. خوف کے ضابطے میں جنسی فرق اور خوف سے تحفظ انعام کے امتیازی کام میں انعام کے متلاشی طرز عمل۔ برتاؤ۔ دماغ Res. 368، 111903 (2019)۔

49. ڈے، ایچ ایل ایل اور سٹیونسن، سیکھے ہوئے خوف اور اس کی روک تھام میں جنسی اختلافات کی سی ڈبلیو ٹی نیورو بائیولوجیکل بنیاد۔ یور J. Neurosci. 52، 2466–2486 (2020)۔

50. وین ہیسلٹ، ایف این وغیرہ۔ ابتدائی زندگی میں زچگی کی دیکھ بھال میں انفرادی تغیرات چوہوں کے پیشگی ذیلی علاقوں میں بعد کی زندگی کے فیصلہ سازی اور c-fos اظہار کے ساتھ منسلک ہوتے ہیں۔ PLOS ONE 7, e37820 (2012)۔

51. بے لیس، ڈی ڈبلیو اور ڈینیئل، جے ایم مائلین سے وابستہ پروٹین کی سطح کے اندر اور بالغ چوہوں کے مداری فرنٹل پرانتستا اور ڈورسل سٹرائٹم کے درمیان تخمینوں کی کثافت میں جنسی فرق: روک تھام کے لیے مضمرات۔ نیورو سائنس 300، 286–296 (2015)۔

52. Orsini, CA & Setlow, B. فیصلہ سازی کے جانوروں کے ماڈلز میں جنس کے فرق۔ J. Neurosci. Res. 95، 260–269 (2017)۔

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ ابتدائی پرانتستا میں سرگرمی سیکھنے کے اظہار کے لیے ضروری ہے، لیکن پیدائشی نہیں۔ خوف۔ J. Neurosci. 27، 840–844 (2007)۔

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ پریلمبک پریفرنٹل نیورونز میں مستقل کنڈیشنڈ ردعمل خوف کے اظہار اور ختم ہونے کی ناکامی سے منسلک ہیں۔ J. Neurosci. 29، 8474–8482 (2009)۔

55. فینٹن، جی ای وغیرہ۔ مستقل ابتدائی پرانتستا کی سرگرمی خواتین میں سیکھے ہوئے خوف کے اظہار میں اضافہ کرتی ہے۔ سیکھیں۔ میم 21، 55–60 (2014)۔

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW سیکھے ہوئے خوف کے اظہار اور معدومیت میں جنس کے فرق میں میڈل پریفرنٹل کورٹیکس میں تبدیل شدہ گاما oscillations شامل ہیں۔ نیوروبیول۔ سیکھیں۔ میم 135، 66–72 (2016)۔

57. کیری، اے جے وغیرہ۔ پریفرنٹل کارٹیکس میں پٹیوٹری ایڈینیلیٹ سائکلیز ایکٹیوٹنگ پولی پیپٹائڈ (PACAP) سگنلنگ مادہ چوہوں میں خوف کے سیکھنے کو موڈیول کرتا ہے، لیکن مقامی ورکنگ میموری کو نہیں۔ نیوروفرماکولوجی 133، 145–154 (2018)۔

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW سمعی خوف کے امتیاز میں جنسی فرق تبدیل شدہ میڈل پریفرنٹل کورٹیکس فنکشن سے وابستہ ہیں۔ سائنس Rep. 10, 6300 (2020)۔

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. الارم فیرومون چوہوں میں تناؤ سے متاثرہ ہائپر تھرمیا کو بڑھاتا ہے۔ فزیول برتاؤ۔ 72، 45–50 (2001)۔

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: ویڈیو/آڈیو کوڈنگ اور لائیو مشاہدات کے لیے ایک مفت، ورسٹائل اوپن سورس ایونٹ لاگنگ سافٹ ویئر۔ طریقے Ecol. ارتقاء 7، 1325–1330 (2016)۔ 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. معدومیت اور بازیافت کے علاوہ مشروط خوف کا ناپید ہونا چوہوں میں میڈل پریفرنٹل کورٹیکس اور امیگڈالا کو مختلف طور پر متحرک کرتا ہے۔ سامنے والا۔ برتاؤ۔ نیوروسکی 9، 1–10 (2016)۔

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar اور prefrontal pathways to the lateral hypothalamus ایک سیکھے ہوئے اشارے سے چالو ہوتے ہیں جو کھانے کو تحریک دیتا ہے۔ J. Neurosci. 25، 8295–8302 (2005)۔

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te Rat Brain in Stereotaxic Coordinates: Hard Cover. (ایلسیور، 2006)۔