مختلف Kadsura Coccinea کے عرقوں کی تصویری حفاظتی اور اینٹی میلانوجینک خصوصیات

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

شمسی الٹرا وائلٹ (UV) تابکاری، جس کی خصوصیت UVA (320–400 nm)، UVB (280–320 nm)، اور UVC (100–280 nm) ہے، سب سے اہم ماحولیاتی عنصر ہے جو جلد کے کینسر اور فوٹو گرافی کا باعث بنتا ہے جس کے نتیجے میں سائٹوٹوکسٹی، جینوٹوکسٹی ، اور phototoxicity. خاص طور پر، UVA اور UVB تابکاری بالترتیب یومیہ UV شعاعوں کا 95 فیصد اور 3 فیصد سے زیادہ پر مشتمل ہے [8]۔ UVA اور UVB شعاع ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کو بالواسطہ یا براہ راست جلد کی ایپیڈرمل اور/یا جلد کی تہوں میں گھس کر آکسیڈیٹیو نقصان اور سیل کی موت کا باعث بن سکتی ہے۔ حالیہ دہائیوں میں، UV تابکاری جلد کی صحت کے لیے ایک سنگین تشویش بن گئی ہے اور اب بھی پوری دنیا میں خطرناک طور پر پھیل رہی ہے [9-11]۔ UV شعاع ریزی keratinocytes کا براہ راست اور مستقل محرک ہے، جو جلد کے ایپیڈرمل سیل ماس کا تقریباً 95 فیصد ہے۔ Keratinocytes مائکروبیل، کیمیائی، اور جسمانی خطرات کے خلاف پہلی رکاوٹ کے طور پر کام کرتے ہیں، اور UVA اور UVB تابکاری کے خلاف دفاع میں مدد کرتے ہیں۔ جب keratinocytes UVA اور UVB کے سامنے آتے ہیں تو، انٹرا سیلولر ROS پیدا ہوتے ہیں، اس طرح apoptosis [12-14] کو متحرک کرتے ہیں۔

میلانوسائٹس میلانین روغن کی پیداوار اور مقدار کے لیے ذمہ دار ہیں، جو جلد کے ایپیڈرمس کے حیاتیاتی دفاع میں اہم کھلاڑی ہیں۔ ان کی بے ضابطگی ہائپر پگمنٹیشن یا ہائپو پیگمنٹیشن کی خرابی کا سبب بن سکتی ہے [15,16]۔ میلانوسائٹس جلد کے ایپیڈرمس کے اسٹریٹم بیسل میں تقسیم کیے جاتے ہیں، جو سورج کی روشنی کی نمائش، رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS)، اور میلانوسائٹ محرک ہارمونز (-MSH) [17,18] سے بھی متاثر ہوتے ہیں۔ ٹائروسینیز، قسم-3 کاپر پروٹین فیملی کا ایک رکن، ایک ارتقائی لحاظ سے محفوظ میٹالوپروٹین ہے جو میلانوجینیسیس اور مونوفینول مونو آکسیجن، کیٹیکولاز اور ڈیفینول کی سرگرمیوں میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ tyrosinase، tyrosinase-related protein-1 (TRP-1)، اور tyrosinase-related protein-2 (TRP-2) کی کمی کے الگ الگ اتپریرک اثرات ہوتے ہیں۔ TRP-1 ایک 5،6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase ہے، اور TRP-2 ایک DOPachrome tautomerase [19,20] ہے۔ اس کے علاوہ، myophthalmosis سے متعلق ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) اور CAMP-responsive element-binding protein (CREB) ٹرانسکرپشن عوامل ہیں جو بنیادی طور پر میلانوجینیسیس کو منظم کرتے ہیں اور محرک کے موڈ اور شدت کے بارے میں معلومات کو انکوڈ کرتے ہیں [17,21]۔ متعدد مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ MITF اور CREB راستے میلانوجینس کو منظم کرتے ہیں۔ MITF melanogenesis سے متعلق انزائمز اور melanogenesis کے مرکزی ریگولیٹر کی نقل میں ایک اہم عنصر ہے۔ ایم ایس ایچ ایم آئی ٹی ایف کے اظہار کی طرف لے جاتا ہے سگنلنگ میکانزم کے ذریعے جس میں سی اے ایم پی سے متعلق بائنڈنگ پروٹین (CREB) شامل ہوتا ہے۔ پھر، MITF مخصوص میلانوجینک جینز اور انزائمز کی نقل کو فروغ دینے کے لیے M-box sequence (AGTCATGTGCT) کے ساتھ نیوکلئس میں داخل ہوتا ہے۔ یہ بھی جانا جاتا ہے کہ فاسفوریلیٹڈ CREB کو -MSH کے ذریعے محرک کیا جاتا ہے، جو Mitf ٹرانسکرپشن کو اپ گریڈ کرنے کے لیے Mitf پروموٹر میں CRE اتفاق رائے کے عنصر سے منسلک ہوتا ہے [21–24]۔

اس مطالعہ میں، KC جڑ (KCR)، خلیہ (KCS)، پتی (KCL)، اور پھل (KCF) کے نچوڑ کا جامع موازنہ کیا گیا اور ان کی فوٹو پروٹیکٹو اور اینٹی میلانوجینک خصوصیات کے متعدد جائزے کیے گئے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 کے سی نچوڑ کی تیاری

پوسن نیشنل یونیورسٹی کے میریانگ کیمپس میں 9 L کے پلاسٹک کے برتن میں تین سال پرانا KC 15 پودا اگایا گیا تھا۔ KC کی شناخت اس تحقیق کے مصنف پروفیسر ینگ وان چوئی نے کی تھی۔ یہ نمونے واؤچر نمونوں کے طور پر جمع کیے گئے تھے (الحاق نمبر KC- PDRL-1) باغبانی بایو سائنس، کالج آف نیچرل ریسورسز اینڈ لائف سائنس، پوسن نیشنل یونیورسٹی کے ہربیریم میں۔ پودوں کو 1۔{7}} mS·cm−1 کی چالکتا کی سطح کے ساتھ مکمل غذائیت کے محلول کا استعمال کرتے ہوئے کافی مقدار میں پانی پلایا گیا اور درج ذیل عناصر (me·L−1 میں): NO3-N, 16; NH4-N, 1.34; ص، 4; ک، 8; Ca, 8; اور S, 4. بندرگاہ میں KC گاؤن کی کٹائی دسمبر 2020 میں جڑوں، تنوں، پتوں اور پھلوں کی درجہ بندی کرکے کی گئی تھی (شکل 1A)۔ کٹے ہوئے نمونوں کو فوری طور پر فریز ڈرائر میں لائفائلائز کیا گیا اور تجزیہ تک 20 ◦C پر ونائل بیگز میں محفوظ کر لیا گیا۔ KC (20 گرام) کی خشک جڑوں، تنوں، پتے اور پھلوں کو باریک پاؤڈر میں پیس کر کمرے کے درجہ حرارت پر ایتھائل الکحل کے ساتھ نکالا گیا۔ مختصراً، KC کے EtOH نچوڑ کی فلٹریشن اور بخارات کم دباؤ کے تحت 45 ◦C پر انجام دیے گئے جس کے بعد لائو فلائزیشن ہوئی۔ آخر میں، ٹھوس عرق (50 mg/mL) کو مزید تجربات کے لیے dimethyl سلفوکسائیڈ (DMSO) میں تحلیل کر دیا گیا۔

cistancheherba epimedium sagittatumنکالنا

2.2 KC نچوڑ کے کل پولی فینولک اور فلاوونائڈ مواد

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [25]، KC جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے نچوڑ کے کل پولی فینولک اور فلیوونائڈ مواد کی پیمائش Folin–Ciocalteu (کل پولیفینول) اور ایلومینیم کلورائد (flavonoid) رنگی میٹرک طریقوں سے کی گئی۔ جاذبیت کو الٹراسپیک 6300 پرو (جی ای ہیلتھ کیئر لائف سائنسز، بکنگھم شائر، یوکے) کا استعمال کرتے ہوئے 700 nm (کل پولیفینول) اور VICTOR ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر (Perkin-Elmer، Waltham, MA, US) کا استعمال کرتے ہوئے 510 nm (flavonoid) پر ماپا گیا۔ .

معیاری منحنی خطوط گیلک ایسڈ (کل پولیفینول) اور کوئرسیٹن (فلیونائڈ) کو بطور معیار استعمال کرتے ہوئے بنائے گئے تھے، اور نتائج کو کے سی جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے نچوڑ کے فی گرام (GAE/g) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا اور quercetin کے مساوی فی گرام (QE/g) بالترتیب KC جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے عرق کے۔

2.3۔ ڈی پی پی ایچ اور اے بی ٹی ایس پرکھ

KC جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے نچوڑ ({{0}}.5 mg/mL) کی DPPH اور ABTS ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمیاں معمولی ترمیم کے ساتھ پہلے بیان کردہ طریقہ [25] کے مطابق ماپی گئیں۔ KC جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے عرق (0.5 mg/mL) کو مائکرو پلیٹس میں DPPH محلول (60 µM) کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ نمونوں کو بھرپور طریقے سے ہلانے کے بعد، انہیں 25 ◦C پر 0.5 گھنٹے کے لیے اندھیرے میں رکھا گیا۔ 7 ایم ایم اے بی ٹی ایس اور 2.6 پوٹاشیم پرسلفیٹ کے سٹاک سلوشنز کو 18 گھنٹے تک اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر آست پانی میں تیار کیا گیا۔ KC جڑ، تنے، پتی، اور پھلوں کے عرق (0.5 ملی گرام/ملی لیٹر) کو کام کرنے والے محلول کے ساتھ ملایا گیا اور پھر اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر 0.5 گھنٹے تک کھڑا رہنے دیا گیا۔ نمونے کے مرکب کے جذب کی نگرانی 510 nm (DPPH) یا 734 nm (ABTS) پر کی گئی۔

2.4 سیل کلچر

DMEM (انویٹروجن کارپوریشن، کارلسباد، سی اے، یو ایس اے) کے کلچر سلوشن میں 10 فیصد ایف بی ایس (انویٹروجن کارپوریشن، کارلسباد، سی اے، یو ایس اے) اور 1 فیصد پینسلن/اسٹ ریپٹومیجن (اسٹریٹروجن) پر مشتمل کیراٹینوسائٹس (HaCaT) اور پیروی شدہ میلانوسائٹس (B16F10) کو ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ کارپوریشن، کارلسباد، CA، USA) اور 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ◦C پر مہذب۔ منسلک HaCaT اور B16F10 سیل کی نمو کو باقاعدگی سے دیکھا گیا، اور میڈیم کو ہر دو سے تین دن بعد تبدیل کیا گیا۔ لوگاریتھمک نمو کے مرحلے کے خلیات کو بعد کے تجربات کے لیے استعمال کیا گیا۔

2.5 UVA اور UVB شعاع ریزی

Keratinocytes کو UVA یا UVB شعاع ریزی (Bio-Link BLX-365, Villber- Lourmat, Eberhardzell, Germany) 5 8 W ٹیوبوں کے ساتھ بے نقاب کیا گیا تھا جو اپنی زیادہ تر توانائی اخراج کی چوٹی پر یا تو 365 nm ( UVA) یا 312 nm (UVB)۔ UVA شعاع ریزی کی خوراکیں 20 J/cm2 تھیں اور UVB شعاع ریزی کی خوراکیں 50 mJ/cm2 تھیں۔

2.6۔ CCK-8 اور LDH تجزیہ کے ذریعے سیل کی قابل عملیت اور سائٹوٹوکسیٹی کی پیمائش

سیل کے قابل عمل تجزیہ کے لیے، CCK-8 Assay Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) سے سیل کاؤنٹنگ کٹ-8 (CCK-8) حل کو HaCaT کیراٹینوسائٹس میں شامل کیا گیا تھا۔ اور B16F10 میلانوما سیل معطلی مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق اور 4 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کی جاتی ہے۔ مختصراً، 2 104 خلیات کو کنویں کی پلیٹ کے ہر کنویں میں بیج دیا گیا اور 5 فیصد CO کے ساتھ 37 ◦C پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ مختصراً، 2 104 خلیوں کو کنویں کی پلیٹ کے ہر کنویں میں بیج دیا گیا اور 5 فیصد CO کے ساتھ 37 ◦C پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے 24 گھنٹے کے بعد، ہر کنویں میں CCK-8 ریجنٹ شامل کیا گیا، اور خلیات کو مزید 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ HaCaT keratinocyte کلچر میڈیم میں extracellular lactate dehydrogenase (LDH) کی رہائی کا تعین کرنے کے لیے ایک cytotoxicity detection kit (Roche Applied Science, Switzerland) کا استعمال کیا گیا تھا۔ VICTOR ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے جذب کا تجزیہ 450 nm (CCK-8) اور 490 nm (LDH) پر کیا گیا۔

2.7۔ کیراٹینوسائٹس میں انٹرا سیلولر آر او ایس پروڈکشن کا اندازہ

انٹرا سیلولر ROS کی سطحوں کا تجزیہ {{0}}(اور-6)-chloromethyl-2′,7′-dichloride- hydrofluorescein diacetate acetyl ester (CM-H2DCFDA؛ تھرمو فشر سائنسی، والتھم، ایم اے، امریکہ)۔ تمام طریقہ کار کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ مختصراً، KC دیگر جزوی عرقوں (0.5 mg/mL) کے علاج کے بعد، Keratinocytes (HaCaT) کو فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) سے دھویا گیا اور CM-H2DCFDA (5 µM) کے ساتھ 0.5 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اندھیرا. اس کے بعد، کارل زیس فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے انٹرا سیلولر آر او ایس کی نسل کو تصور کیا گیا۔ فلوروسینس کی شدت کو فلوروسینٹ ڈائی (CM-H2DCFDA) کی بنیاد پر فلو سائٹو میٹر (Fit NXT Flow Cyto, Thermo Fisher Scientific, Pasadena, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

2.8۔ اپوپٹوسس کا تجزیہ

نمائش اور علاج کے بعد، HaCaT keratinocytes کو ٹرپسنائز اور سینٹرفیوج کیا گیا۔ اس کے بعد، کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق فلوروسین آئسوتھیوسائنیٹ (FITC) Annexin V/Dead CellApoptosis Kit (Invitrogen Life Technologies، Carls-bad، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کردہ خلیوں کے apoptosis کا جائزہ لیا گیا۔ مختصرا،، کیراٹینوسائٹس کو پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھویا گیا، اور اینیکسن بائنڈنگ بفر میں کیراٹینوسائٹس کو FITC/Annexin V (جزو A) اور propidium iodide (PI) ورکنگ سلوشن کے ساتھ ملایا گیا۔ اندھیرے میں 15 منٹ تک کمرے کے درجہ حرارت پر انکیوبیشن کے بعد، کیراٹینوسائٹ اپوپٹوسس کی پیمائش کی گئی اور اپوپٹوٹک خلیوں کی فیصد کا حساب فلو سائٹو میٹر (فٹ این ایکس ٹی فلو سائٹو، تھرمو فشر سائنٹیفک، پاساڈینا، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ FL1 (FITC/Nexin V) اور FL3 (PI) چینلز کے لیے سگنلز کا پتہ چلا، اور داغ والے خلیوں کے کواڈرینٹ مارکر سٹیننگ اور ڈاٹ پلاٹ قائم کیے گئے۔

2.9 انٹرا سیلولر میلانین مواد اور ٹائروسینیز سرگرمی کا تجزیہ

انٹرا سیلولر میلانین مواد اور ٹائروسینیز ایکٹیویٹی اسسیس کو یہ بتا کر ماپا گیا کہ جہاں قدرے ترمیم شدہ طریقہ کار میں فرق ہے [24]۔ میلانوسائٹس کا علاج 48 گھنٹے کے لیے 0.5 µM -MSH اور 0.5 mg/mL KC دوسرے جزوی نچوڑ کے ساتھ کیا گیا۔ میلانوسائٹ کے چھرے 10 فیصد DMSO میں 1 N NaOH کے ساتھ 80 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے لگائے گئے۔ رشتہ دار میلانین مواد کا تعین VICTORMultibel Plate Reader کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm پر جاذبیت کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا۔ انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی کا تعین L-DOPA کا استعمال کرتے ہوئے ڈوپاکروم کی پیداوار کی شرح کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا۔ میلانوسائٹس کو برف کے ٹھنڈے PBS سے دھویا گیا اور PBS میں لیس کیا گیا جس میں 1 فیصد (w/v) Triton X-100 تھا۔ ٹائروسینیز سبسٹریٹ L-DOPA (2 mg/mL) اسی فاسفیٹ لیسس بفر میں تیار کیا گیا تھا۔ ہر ایک نچوڑ کو ایک 96-کنویں پلیٹ میں رکھا گیا تھا، اور L-DOPA محلول شامل کرکے انزائم کا تجزیہ شروع کیا گیا تھا۔ 1 گھنٹہ تک انکیوبیشن کے بعد، ڈوپاکروم پروڈکشن کا تجزیہ کرنے کے لیے وکٹر ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 475 nm پر ماپا گیا۔ ہر پیمائش کی قدر کو کنٹرول کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ Arbutin (A, 0.5 mg/mL) کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

Cistancheechinacosideایک ٹائروسیناز روکنے والا ہے۔

2.10 مقداری ریئل ٹائم پی سی آر

RNeasy Mini Kit (QIAGEN، Hilden، Germany) کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA میلانوسائٹس کے ہر گروپ سے الگ تھلگ تھا۔ سی ڈی این اے کا پہلا اسٹرینڈ حاصل کرنے کے لیے، کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق، اعلیٰ صلاحیت والی سی ڈی این اے ریورس ٹرانسکرپشن کٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، میامی، اوکے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ریورس ٹرانسکرپشن کی گئی۔ اس کے بعد اسٹرینڈز کو مقداری ریئل ٹائم PCR (qRT-PCR) کے لیے ایک Bio-Rad Chromo4TM انسٹرومنٹ اور SYBR گرین qPCR ماسٹر مکس (تھرمو فشر سائنٹیفک، میامی، اوکے، USA) کا استعمال کرتے ہوئے ٹیمپلیٹس کے طور پر استعمال کیا گیا۔ پی سی آر کو 5 منٹ کے لیے 95 ◦C پر پری ڈینیچریشن کے تحت، 15 s کے لیے 95 ◦C پر ڈینیچریشن، اور 30 ​​s کے لیے 55–58 ◦C پر اینیلنگ کی گئی تھی۔ GAPDH mRNA کو ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 mRNA کے اندرونی حوالہ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ہدف جین اظہار کی متعلقہ قدر=2−∆∆CT۔ پرائمر کی ترتیب حسب ذیل تھی: Tyrosinase-sense (5′-ggccagctttcaggcagaggt-3′)، Tyrosinase-anti-sense (5′-tggtgcttcatgggc aaaatc-3′)، TRP{{25} ′-agccccaactctgtctttc-3′)، TRP-1-اینٹی سینس (5′-ggtctccctctacatttccagc-3′)، TRP-2-سنس (5′- tccagaagtttgacagcc}{37} ′)، TRP-2-اینٹی سینس (5′-ggaggagtgagccaagttatg-3′)، GAPDH-sense (5′-aggtggtctcctgacttc-3′)، اور GAPDH-اینٹی سینس (5′-ggaggagtgagccaagttatg-3′) -3′)۔

2.11۔ ویسٹرن بلاٹنگ

میلانوسائٹس کو ایک ممالیہ پروٹین نکالنے والے ریجنٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے کاٹا گیا اور لیس کیا گیا۔ تمام طریقہ کار کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ تمام پروٹین کی تعداد کا تعین بائیو ریڈ پروٹین پرکھ کٹ (بائیو ریڈ، ہرکیولس، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ پھر، لوڈنگ بفر کو پروٹین سپرنٹنٹ میں شامل کیا گیا اور ملایا گیا۔ اس مرکب کو 10 منٹ کے لیے ابالا گیا تھا، اور پروٹین کو Mini-PROTEAN Precast Gels (Bio-Rad، Hercules، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا گیا تھا اور ایک Hybond polyvinylidene difluoride membrane (Amersham Biosciences، Piscataway، NJ، USA) میں منتقل کیا گیا تھا۔ امیونو ڈیٹیکشن ٹائروسینیز (1:1000)، TRP-1 (1:1000)، TRP-2 (1:1000)، MITF (1:1000)، فاسفوریلیٹڈ CREB (p-CREB 1:) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ 1000)، CREB(1:1000)، اور -tubulin (1:1000) (سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، بیورلی، MA، USA) SignalBoost Immunoreaction Enhancer Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) کا استعمال کرتے ہوئے۔ جھلی کو 4 ◦C پر بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ راتوں رات انکیوبیٹ کیا جاتا تھا۔ بکری مخالف خرگوش (IgG) سیکنڈری اینٹی باڈی (1:5000، سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی) کو جھلی میں شامل کیا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پروٹین بینڈز کو ایک بہتر پیئرس ای سی ایل ویسٹرن بلوٹنگ سبسٹریٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے دیکھا گیا اور ٹارگٹ پروٹین بینڈ کی شدت اور ٹیوبلین بینڈ کی شدت کے تناسب کے طور پر مقدار درست کی گئی۔

2.12۔ شماریاتی تجزیہ

تمام اسیس کو آزادانہ طور پر کم از کم تین بار دہرایا گیا۔ تمام شماریاتی پیرامیٹرز اوسط (SEM) کی اوسط معیاری غلطی کے طور پر پیش کیے جاتے ہیں۔ اعداد و شمار کے تجزیے تغیرات کے یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے، اس کے بعد ڈن کا پوسٹ ہاک ٹیسٹ۔ p < 0="" کی="" قدر۔{4}}1="" یا="" p=""><0.05 کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

flavonoids کے لئے ٹیسٹ

3. نتائج

3.1 کے سی کے کئی جزوی عرقوں کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کا موازنہ

The total polyphenol and flavonoid contents and ABTS and DPPH scavenging activities were compared to determine the potential effects of KCR, KCS, KCL, and KCF extracts on antioxidant capacity. As shown in Figure 1B, the KCR extract(197.6 27.2 mg GAE/g) exhibited the highest phenol content, followed by KCL (153.7 6.7 mg GAE/g) and KCS (88.1 7.8 mg GAE/g); the KCF (21.8 4.8 mg GAE/g) extract had the lowest phenol content. Moreover, the results of flavonoid content analyses showed that KCL (94.5 6.3 mg QE/g) had the highest flavonoid content followed by KCR (79.6 4.2 mg QE/g); the KCS (14.9 1.3 mg QE/g) and KCF (6.4 2.0 mg QE/g) extracts had the lowest flavonoid content (Figure 1C). To further investigate the antioxidant properties of KCR, KCS, KCL, and KCF, ABTS and DPPHradical scavenging assays were performed. As shown in Figure 1D, KCL (94.7 ± 2.9%) and KCR (82.8 ± 5.9%) exhibited the highest ABTS radical scavenging activity, followed by the KCS (29.7 ± 2.0%) and KCF extract (15.9 ± 2.0%). DPPH radical scavenging activity was also shown in the order of KCL (99.9 ± 0.1%) > KCR (95.5 ± 3.6%) >KCS (25.7 ± 2.1 فیصد) > KCF (8.7 ± 1.1 فیصد) (شکل 1E)۔

3.2 UVA، UVB، یا غیر شعاع ریزی کی موجودگی میں KC کے کئی جزوی عرقوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے قابل عمل اور خراب شدہ کیراٹینوسائٹس کا موازنہ

ہم نے KCR، KCS، KCL، اور KCF onkeratinocytes کے اثرات کو دریافت کرنے کے لیے درج ذیل تجربات کیے ہیں۔ سب سے پہلے، تمام نچوڑ کو UVA، UVB، یا غیر شعاع ریزی کی موجودگی میں HaCaT keratinocytes پر لاگو کیا گیا تھا۔ CCK-8 تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ نچوڑ نے کیراٹینوسائٹ کی قابل عملیت کو 0.5 ملی گرام/ملی لیٹر کے ارتکاز میں نمایاں طور پر تبدیل نہیں کیا۔ بعد میں، UVA یا UVB شعاع ریزی کی موجودگی میں keratinocytes کا علاج KCR، KCS، KCL، اور KCF سے کیا گیا۔ UVA اور UVB شعاع ریزی نے keratinocyte viability کو نمایاں طور پر روکا، جیسا کہ شکل 2A میں CCK-8 تجزیہ سے دکھایا گیا ہے۔ تاہم، ہم نے پایا کہ UVA- اور UVB- شعاع شدہ keratinocytes کی عملداری مندرجہ ذیل ترتیب میں بڑھی ہے: KCL، KCR، KCS، اور KCF (شکل 2A)۔ ہم نے ایکسٹرا سیلولر LDH ریلیز کی پیمائش کرکے خراب شدہ کیراٹینوسائٹس کی بھی نگرانی کی۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UVA یا UVB شعاع ریزی نے نمایاں طور پر LDH کی رہائی میں سہولت فراہم کی۔ تاہم، KCL، KCR، KCS، اور KCF نے اس ترتیب میں UVA یا UVB کی نمائش کے ساتھ LDH ریلیز کو نمایاں طور پر کم کیا (شکل 2B)۔ مندرجہ بالا تجرباتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کیراٹینوسائٹس پر UVA یا UVB شعاع ریزی کے انسداد پھیلاؤ اور سائٹوٹوکسک اثرات کو KCL، KCR، KCS، اور KCF کی ترتیب میں کم کیا گیا تھا۔ خاص طور پر، KCL سطح کو کنٹرول کرنے کے لیے سیل کی عملداری کو بحال کر سکتا ہے۔

شکل 2. UVA، UVB، یا غیر شعاع ریزی کی موجودگی میں KCR، KCS، KCL، اور KCF ایکسٹریکٹ کے keratinocytes کی عملداری اور cytotoxicity اثرات۔

3.3 UVA اور UVB شعاع ریزی کی موجودگی یا غیر موجودگی میں KC کے کئی جزوی عرقوں کے ساتھ علاج شدہ Keratinocytes میں انٹرا سیلولر ROS پیداوار کا موازنہ

چونکہ ROS کی انٹرا سیلولر پروڈکشن کیراٹینوسائٹ کو شدید نقصان پہنچاتی ہے، اس لیے انہیں UVA یا UVB تابکاری سے متاثر ہونے والے نقصان کا ممکنہ ثالث سمجھا جاتا ہے۔ کئی مطالعات نے یہ تجویز کیا ہے کہ UVA یا UVB شعاع ریزی سے endogenous ROS کی پیداوار ہوتی ہے [12,14]۔ ہمارا مقصد یہ طے کرنا تھا کہ آیا UVA-یا UVB- شعاع شدہ کیراٹینوسائٹس میں endogenous ROS کی سطح میں اضافہ ہوا ہے۔ اسی مناسبت سے، ہم نے فلوروسینس مائیکروسکوپی اور فلو سائٹوومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے تحقیقات CM-H2DCFDA کی انٹرا سیلولر فلوروسینس شدت کا تجزیہ کیا۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی کے نتیجے میں، CM-H2DCFDA کی داغدار تصاویر نے کنٹرول میں ہلکا سا داغ دکھایا، KCR، KCS، KCL، اور KCF سے علاج شدہ کیراٹینوسائٹس اور UVA- یا UVB- شعاع شدہ کیراٹینوسائٹس (شکل 3A) میں نمایاں داغ داغ۔ بہاؤ سائٹومیٹری کے مقداری نتائج کے مطابق، UVA اور UVB شعاع ریزی نے keratinocytes میں انٹرا سیلولر ROS کی سطح میں بالترتیب 27.2 ± 4.5 فیصد اور 34.1 ± 4.2 فیصد اضافہ کیا، اس کے مقابلے میں کنٹرول میں (5.7) ±0.2 فیصد)۔ اس کے علاوہ، فلوروسینس مائیکروسکوپی کے نتائج کی طرح، اس بات کی تصدیق کی گئی کہ انٹرا سیلولر آر او ایس کی سطح کو KCL> KCR> KCS> KCF کی ترتیب میں UVA یا UVB شعاع ریزی (شکل 3B) کی موجودگی میں KC نچوڑ کے ذریعے دبایا گیا تھا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ KC کے کئی جزوی نچوڑ نے endogenous ROS کی سطح کو کم کرکے کیراٹینوسائٹ کے نقصان کو نمایاں طور پر روکا۔

شکل 3. UVA، UVB، یا غیر شعاعی کیراٹینوسائٹس میں انٹرا سیلولر ROS کی پیداوار پر KCR، KCS، KCL، اور KCF نچوڑ کا اثر

3.4 UVA اور UVB شعاع ریزی کی موجودگی یا غیر موجودگی میں KC کے کئی جزوی عرقوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے کیراٹینوسائٹس کے اپوپٹوسس کا موازنہ

اپوپٹوس کا پتہ لگانے کے لیے، جو کیراٹینوسائٹ کو پہنچنے والے نقصان کا ایک قابل اعتماد اشارہ ہے، کیراٹینوسائٹس کو پروپیڈیم آئوڈائڈ کے ساتھ مل کر Annexin V کے ساتھ داغ دیا گیا تھا۔ fluorescein isothiocyanate (FITC) Annexin V/Dead Cell Apoptosis Kit کا استعمال keratinocytes میں apoptosis کی شرح کو جانچنے کے لیے کیا گیا تھا۔ UVA اور UVB شعاع ریزی نے Annexin V سٹیننگ سرگرمی میں سہولت فراہم کی، جبکہ KCR, KCS, KCL, اور KCF نے UVA اور UVB شعاع ریزی کی موجودگی میں Annexin V سٹیننگ سرگرمی کی شرح کو کم کیا۔ KCR، KCS، KCL، اور KCF اکیلے (0.5 mg/mL) نے Annexin V سٹیننگ کی سرگرمی کو متاثر نہیں کیا۔ بہاؤ سائٹومیٹری کے مقداری اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ UVA اور UVB شعاع ریزی نے keratinocytes کے apoptosis کی سطح کو 46.3 تک بڑھا دیا ہے۔± 1.5 فیصد اور 48.7 ± 10 فیصد، بالترتیب، کنٹرول کے مقابلے میں (50 فیصد) ± 0.7 فیصد)۔ اہم بات یہ ہے کہ اس بات کی تصدیق ہوئی کہ اپوپٹوس کی سطح کو KCL > KCR > KCS > KCF کی ترتیب میں UVA یا UVB شعاع ریزی کی موجودگی میں KC نچوڑ کے ذریعے دبایا گیا تھا (شکل 4A, B)۔ مجموعی طور پر، UVA اور UVB شعاع ریزی نے keratinocyte کو نقصان پہنچایا اور UV شعاع ریزی کی وجہ سے KC کو کم کرنے والے keratinocyte کو پہنچنے والے نقصان کے کئی جزوی نچوڑ ہوئے۔

شکل 4. UVA، UVB، یا غیر شعاع نہ ہونے والے کیراٹینوسائٹس میں اپوپٹوس پر KCR، KCS، KCL، اور KCF نچوڑ کا اثر۔

3.5 انٹرا سیلولر میلانین مواد کا موازنہ اور میلانوسائٹس کی ٹائروسینیز سرگرمی -MSH علاج کی موجودگی یا غیر موجودگی میں KC کے کئی جزوی عرقوں کے ساتھ علاج

KCR، KCS، KCL، اور KCF کی حیاتیاتی صلاحیت کی تحقیقات کرنے سے پہلے - MSH- حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس، KCR، KCS، KCL، اور KCF (0.5 mg/mL) علاج کے بعد سیل کی قابل عملیت کا اندازہ لگایا گیا تھا۔ میلانوسائٹس B16F10 کے ساتھ یا اس کے بغیر -MSH میں CCK-8 پرکھ۔ KCR، KCS، KCL، اور KCF (0.5 mg/mL) نے -MSH (شکل 5A) کی موجودگی یا غیر موجودگی میں سیل کی عملداری کو تبدیل نہیں کیا۔ -ایم ایس ایچ ایک اہم میلانجینک ایجنٹ ہے جو میلانوکارٹن 1 ریسیپٹر سے منسلک ہو کر اور اڈینیلیٹ سائکلیز کو چالو کر کے انٹرا سیلولر میلانین مواد کو بڑھا سکتا ہے۔ melanocytes میں melanogenesis پر KCR، KCS، KCL، اور KCF کے اثر کی چھان بین کے لیے، انٹرا سیلولر میلانین مواد کا تعین بصری مشاہدے اور بائیو کیمیکل پیمائش سے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ شکل 5B میں دکھایا گیا ہے، انٹرا سیلولر میلانین مواد میں -MSH کے ذریعہ نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ تاہم، KCR، KCS، KCL، اور KCF کے ساتھ مشترکہ علاج سے -MSH علاج کے مقابلے انٹرا سیلولر میلانین مواد میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ بایو کیمیکل پیمائش کی ترتیب جو کہ انٹرا سیلولر میلانین مواد کی روک تھام کو ظاہر کرتی ہے اس طرح تھی: KCL > KCR > KCS > KCF (شکل 5B)۔ انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی پرکھ انٹرا سیلولر میلانین مواد پرکھ کے مطابق کی گئی تھی۔ -MSH- محرک میلانوسائٹس کی انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی میں اضافہ ہوا، جبکہ KCR، KCS، KCL، اور KCF کے ساتھ علاج کیے جانے والے -MSH- محرک میلانوسائٹس کی سرگرمی میں کمی واقع ہوئی۔ بائیو کیمیکل پیمائش کی ترتیب جو کہ انٹرا سیلولر ٹائروسینا ایکٹیویٹی کی روک تھام کو ظاہر کرتی ہے اس طرح تھی: KCL > KCR > KCS > KCF (شکل 5C)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ KC کے کئی جزوی نچوڑ نے انٹرا سیلولر میلانین کے مواد کو نمایاں طور پر کم کیا اور سیل کی عملداری کو تبدیل کیے بغیر ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک دیا۔

3.6۔ میلانوسائٹس میں Tyrosinase، TRP-1، اور TRP-2 کے ٹرانسکرپشن اور ترجمے کی سطحوں کا موازنہ KC کی موجودگی یا غیر موجودگی میں کئی جزوی عرقوں کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے۔-ایم ایس ایچ کا علاج

میلانوجینیسیس مارکر (ٹائروسینیز، ٹی آر پی-1، اور ٹی آر پی-2) کے پروٹین اور ایم آر این اے اظہار کی سطح کو کم کرنے پر کے سی آر، کے سی ایس، کے سی ایل، اور کے سی ایف کے اثر کو دریافت کرنے کے لیے، میلانوسائٹس کا علاج KCR کے ساتھ کیا گیا۔ ، KCS، KCL، اور KCF -MSH کی موجودگی یا غیر موجودگی میں۔ جیسا کہ شکل 6A–C میں دکھایا گیا ہے، tyrosinase، TRP-1، اور TRP-2 کی mRNA سطحوں میں -MSH علاج سے نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ اس کے برعکس، -MSH علاج کے مقابلے میں، KCR، KCS، KCL، اور KCF نے ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 کے mRNA اظہار کو کم کیا۔ اس کے علاوہ، صرف KCR، KCS، KCL، اور KCF کا ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 mRNA کی سطحوں پر کوئی خاص اثر نہیں پڑا۔ ویسٹرن بلٹ تجزیہ ریئل ٹائم پی سی آر کے تعاون سے کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ایم ایس ایچ کے علاج نے ٹائروسینیز، ٹی آر پی-1، اور ٹی آر پی-2 کے پروٹین ایکسپریشن کی سطح میں اضافہ کیا اور یہ سطحیں KCR، KCS، KCL، اور KCF (شکل 6D) کے ساتھ مشترکہ علاج سے کم ہوئیں۔ )۔ مقداری ریئل ٹائم پی سی آر اور ٹائروسینیز، ٹی آر پی-1، اور ٹی آر پی-2 ایم آر این اے اور پروٹین ایکسپریشن کی ویسٹرن بلوٹینڈیکیٹنگ انحبیشن کی ترتیب اس طرح تھی: KCL > KCR=KCS > KCF (شکل 6)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ KC کے کئی جزوی نچوڑوں میں اینٹی میلانوجینیسیس کو فروغ دینے کی صلاحیت ہے، جو میلانوجینیسیس مارکروں کی کمی سے ظاہر ہوا ہے۔

3.7 MITF اظہار کا موازنہ اور میلانوسائٹس کے CREB فاسفوریلیشن کا علاج KC کے کئی جزوی عرقوں کے ساتھ کیا جاتا ہے -MSH علاج کی موجودگی یا غیر موجودگی میں

ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 میلانوجینیسیس میں ضروری ہیں۔ ان کے اظہار کو MITFexpression اور CREB فاسفوریلیشن [17,21] کے ذریعہ منظم کیا جاتا ہے۔ مغربی دھبے کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ KCR، KCS، KCL، اور KC مؤثر طریقے سے MITF کے پروٹین کی سطح میں اضافہ کو روکتا ہے جس کی وجہ سے -MSH علاج ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، KCR، KCS، KCL، اور KCF نے مشکل سے MITF پروٹین ایکسپریشن کا پتہ لگایا۔ MITF پروٹین ایکسپریشن لیول کی روک تھام کی نشاندہی کرنے والے مغربی دھبے کے نتائج کی ترتیب درج ذیل تھی: KCL > KCR > KCS > KCF (Figure7A)۔ مزید برآں، KCR، KCS، KCL، اور KCF نے CREB فاسفوریلیشن پر -MSH علاج کے اثرات کو الٹ دیا۔ صرف KCR، KCS، KCL، اور KCF کا CREB فاسفوریلیشن پر بہت کم اثر پڑا۔ CREB فاسفوریلیشن کی سطحوں کی روک تھام کی نشاندہی کرنے والے مغربی دھبے کے نتائج کی ترتیب درج ذیل تھی: KCL > KCR > KCS > KCF (شکل 7B)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ KC کے کئی جزوی نچوڑوں نے میلانوجینیسیس انمیلانوسائٹس کو دبایا، کم از کم جزوی طور پر، MITF اظہار اور CREB فاسفوریلیشن کے ذریعے۔

4. بحث

UV شعاع ریزی میں اضافے کی وجہ سے دنیا بھر میں جلد کو سفید کرنے کی مقبولیت میں اضافہ ہو رہا ہے، اور امکان ہے کہ آنے والی دہائیوں میں یہ جمالیاتی مقاصد کے لیے بہت زیادہ ہو جائے گا [8]۔ بلیچ کی متعدد اقسام، جیسے کوجک ایسڈ اور اربوٹین، کاسمیٹک اور فارماسیوٹیکل مارکیٹوں میں استعمال ہوتی رہی ہیں۔ مزید برآں، قدرتی عرق ان کے ممکنہ اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی سوزش، اینٹی ٹیومر، اینٹی بیکٹیریل، اور دیگر سرگرمیوں کی وجہ سے بڑھتی ہوئی توجہ حاصل کر رہے ہیں [26,27]۔ اینٹی آکسیڈینٹس اور فوٹو پروٹیکٹو اور اینٹی میلانوجینیسیس کی خصوصیات کی بنیاد پر، کئی کاسمیٹک اور فارماسیوٹیکل امیدوار تیار کیے گئے ہیں۔ یہ بات مشہور ہے کہ سفید کرنے والے امیدواروں کی یہ خصوصیات کاسمیٹک اور دواسازی کی تحقیق اور ترقی میں ناگزیر معاون ہیں [28]۔ TDM میں کثیر اجزاء اور کثیر ہدف خصوصیات ہیں اور یہ انسانی حیاتیاتی تاثیر اور معیار زندگی کو بہت بہتر بناتا ہے [29]۔ جدید فائٹو کیمیکل تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ KC مختلف قسم کے اجزاء پر مشتمل ہے، جس میں lignans اور terpenoids اہم اجزاء ہیں [30]۔ 202 سے زیادہ مرکبات کی نشاندہی کی گئی ہے، بشمول dibenzocy-clooctadiene lignans، Spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene lignans، Arylnaphthalene lignans، Kadlongilactone triterpenoids، اور sesquiterpenoids [31,32]۔ KC کی خشک جڑیں، تنوں اور پتوں کو TDM میں ریمیٹائڈ گٹھیا، گرہنی کے السر، معدے کے امراض، اور امراض نسواں کے مسائل کے علاج کے لیے استعمال کرنے کی ایک وسیع روایت ہے۔ KC کی خشک جڑیں، گرمی کو صاف کرنے اور زہریلے مادوں کو ختم کرنے کے عمل کے ساتھ، ورم کو دور کرنے کے لیے diuresis کو دلاتی ہے۔ KC کے پھل زیادہ تر تازہ پھلوں، جوسز اور فروٹ وائن کی شکل میں کھائے جاتے ہیں، جو اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ یہ انسانی صحت کے لیے فائدہ مند ہیں [7,33,34]۔ پچھلے مطالعات میں یہ بھی دکھایا گیا ہے کہ یہ بایو ایکٹیو اجزاء جیسے کہ لگنان، ٹریٹرپینائڈز، فلیوونائڈز، فینولک ایسڈز، سٹیرائڈز، اور امینو ایسڈز سے بھرپور ہے، جن میں اعلیٰ غذائیت اور دواؤں کی قدر ہے [3,35]۔ اس تحقیق میں KC کے مختلف حصوں کو نکالا گیا۔ خاص طور پر، KC کے پتوں اور جڑوں میں کل پولی فینول اور فلاوونائڈ مواد تنوں اور پھلوں سے بہت زیادہ تھے۔ پتیوں اور جڑوں میں تنے اور پھلوں کی نسبت دو گنا سے زیادہ پولیفینول اور فلیوونائڈز ہوتے ہیں۔ نتیجے کے طور پر، ہم سمجھتے ہیں کہ کل پولی فینول اور فلیوونائڈز KC کے فوٹو پروٹیکٹو اور اینٹی میلانوجینک اثرات میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔

UV تابکاری کی وجہ سے ہونے والی جلد کی فوٹوٹوکسائٹی بنیادی طور پر سیل سائٹوٹوکسٹی، انٹرا سیلولر ROS جمع، اور کیراٹینوسائٹس میں اپوپٹوس کی وجہ سے ہوتی ہے۔ لہذا، سیل سائٹوٹوکسائٹی، انٹرا سیلولر آر او ایس جمع، اور UVA- اور UVB- شعاع شدہ keratinocytes [36,37] میں apoptosis کی روک تھام پر توجہ مرکوز کرنا زیادہ معقول ہے۔ جیسا کہ اس مطالعہ میں بیان کیا گیا ہے [10,38]، فوٹو سائٹوٹوکسائٹی (UVA: 20 J/cm2، UVB: 50 mJ/cm2) پر KC نچوڑ کے ساتھ مداخلت کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ KC کے نچوڑ نے سیل کی سائٹوٹوکسائٹی، انٹرا سیلولر ROS جمع اور apoptosis. پچھلے نتائج سے ہم آہنگ، KC پتوں اور جڑوں کے تصویری حفاظتی اثرات تنے اور پھلوں کے مقابلے بہت زیادہ تھے۔ مزید برآں، ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ KC نچوڑ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو فروغ دے کر مذکورہ بالا اثرات دکھاتے ہیں۔ میلانوجینیسیس اکثر یووی شعاع ریزی کے بعد دیکھا جاتا ہے اور بنیادی طور پر پگمنٹیشن یا ہائپر پگمنٹیشن [39] سے وابستہ ہوتا ہے۔ پچھلے مطالعات کے مطابق، -MSH کا استعمال کرتے ہوئے میلانوجینیسیس کو دلانے کا طریقہ بڑے پیمانے پر تسلیم اور لاگو کیا گیا ہے۔ لہذا، یہ مطالعہ ایک میلانوسائٹ ماڈل کی تعمیر پر مبنی تھا جو -MSH [24,39] کے ساتھ حوصلہ افزائی کرتا ہے. ہم نے پایا کہ KC نچوڑ کو دبایا جاتا ہے -MSH- محرک انٹرا سیلولر میلانین مواد اور ٹائروسینیز سرگرمی۔ اس کے علاوہ، KC نے میلانوجینیسیس مارکروں کی نقل اور ترجمے کو گھٹا دیا جیسے کہ ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 -MSH- محرک میلانوسائٹس میں۔ مزید برآں، ہم نے MITF پروٹین ایکسپریشن اور CREB فاسفوریلیشن کی -MSH- محرک میلانوسائٹس میں تحقیقات کی۔ اسی طرح، اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ KC نے میلانوسائٹس میں دبائے ہوئے -MSH- ثالثی MITF پروٹین ایکسپریشن اور CREB فاسفوریلیشن کو نکالا۔ فوٹو پروٹیکٹو نتائج سے ہم آہنگ، KC پتوں اور جڑوں کے اینٹی میلانوجینک اثرات تنے اور پھلوں کے مقابلے بہت زیادہ تھے۔

cistanche سلائسس

مزید معلومات کے لیے، براہ کرم یہاں کلک کریں۔

5. نتائج

مجموعی طور پر، اس تحقیق میں KC ایکسٹریکٹ کے ممکنہ فوٹو پروٹیکٹو اور اینٹی میلانوجینک اثرات پائے گئے۔ ہائی پولی فینول اور فلیوونائڈ مواد کے ساتھ KC نچوڑ کیراٹینوسائٹس اور میلانوسائٹس پر تصویری حفاظتی اور اینٹی میلانوجینک اثرات مرتب کر سکتا ہے۔ یہ مطالعہ قدرتی سفیدی اور فوٹو پروٹیکٹو ایجنٹوں کے لیے کاسمیٹک اور فارماسیوٹیکل مداخلت کے لیے عقلی اور تحقیقی حکمت عملی فراہم کرتا ہے۔