Fengdan Peony Flavonoids کے اینٹی آکسیڈینٹ، سفیدی اور اینٹی بیکٹیریل اثرات
Mar 23, 2022
رابطہ: ali.ma@wecistanche.com
جی لو†، Zhiqiang ہوانگ†, Yusheng Liu, Huimin Wang, Min Qiu, Yinghui Qu اور Wenpeng Yuan *
خلاصہ: فلاوونائڈزاہم حیاتیاتی سرگرمیاں ہیں، جیسے کہ سوزش، اینٹی بیکٹیریل، اینٹی آکسیڈینٹ اور سفیدی، جو کہ ایک ممکنہ فعال خوراک کا خام مال ہے۔ تاہم، Fengdan peony کی حیاتیاتی سرگرمیflavonoidخاص طور پر واضح نہیں ہے. لہذا، اس مطالعہ میں، peonyflavonoidFengdan peony کے بیجوں کے کھانے سے نکالا گیا تھا، اور peony کی اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی بیکٹیریل اور سفیدی کی سرگرمیاںflavonoidدریافت کیا گیا. نکالنے کے بہترین حالات میتھانول کا ارتکاز 90 فیصد، ٹھوس سے مائع کا تناسب 1:35 g:mL، درجہ حرارت 55 ◦C اور وقت 80 منٹ؛ ان حالات کے تحت، Fengdan peony کی پیداوارflavonoid1.205 ± 0.019 فیصد تک پہنچ سکتا ہے (روٹین کے خشک ماس اور پیونی سیڈ میل کے خشک ماس کا تناسب)۔ Fengdan peony کل کی کلیئرنسflavonoids1 سے،1-ڈفینائل-2-پکریل ہائیڈرزائل (DPPH) فری ریڈیکل، ہائیڈروکسیل ریڈیکل اور 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-سلفونک ایسڈ) (ABTS) فری ریڈیکل بالترتیب 75 فیصد، 70 فیصد اور 97 فیصد تک پہنچ سکتے ہیں۔ فینگڈن پیونیflavonoidگرام مثبت بیکٹیریا کی نشوونما کو روک سکتا ہے۔ فینگڈان پیونی کی کم سے کم روک تھام کی تعداد (MICs)flavonoidS. Aureus، B. anthracis، B. subtilis اور C. perfringens پر {{0}} تھے۔{4}}293 mg/mL، 0.1172 mg/mL، 0.2344 mg/mL اور 7.500 mg/ ایم ایل، بالترتیب۔ ٹائروسینیز پر فینگڈان پیونی فلاوونائڈ کی روک تھام کی شرح 8.53–81.08 فیصد تھی۔ اس مطالعے نے شدت سے واضح کیا کہ فینگڈان پیونی کی کل اینٹی آکسیڈینٹ، سفیدی اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمیflavonoidsاہم تھے. Fengdan peony کلflavonoidsفنکشنل فوڈ میٹریل کے طور پر استعمال ہونے کا بہت زیادہ امکان ہے۔
مطلوبہ الفاظ:فینگڈن پیونیflavonoid; اینٹی آکسیڈینٹ; سفید کرنا; اینٹی بیکٹیریل سرگرمی؛ فعال کھانا
فلاوونائڈز، Cistanche کا بنیادی عنصر، عمر بڑھنے کے خلاف ہے۔
اینٹی ایجنگ کے لیے cistanche extract کے فوائد کے لیے کلک کریں۔
1. تعارف
Peony is one of the economic and ornamental crops, which has been cultivated for more than 1600 years in China [1]. Oil peony refers to the variety of peony that can be used as a raw material for edible oil [2]. As one of the most commonly used oil peonies, Fengdan peony contains dark oval seeds, which has abundant unsaturated fatty acids (>90 فیصد) [3]۔ پیونی کے بیجوں کے تیل کو چینی حکومت نے ایک نئے وسائل کی خوراک کے طور پر توثیق کیا ہے، کیونکہ 2011 میں اس میں لینولینک ایسڈ کا زیادہ تناسب تھا [4]۔ مزید برآں، پیونی کے بیجوں کو 2011 میں عوامی جمہوریہ چین کے قومی صحت اور خاندانی منصوبہ بندی کمیشن نے انسانی صحت کو بڑھانے کے لیے فعال خوراک کے ایک نئے وسیلے کے طور پر تصدیق کی ہے [5]۔ فینگڈان پیونی سیڈ میل پیونی سیڈ آئل کی تیاری میں سب سے اہم ضمنی مصنوعات میں سے ایک ہے، جو فینگڈان پیونی کے بیج کا تقریباً 60 فیصد سے 70 فیصد حصہ بناتا ہے، اور یہ فلیوونائڈز، پروٹین، پولی سیکرائڈز، پولیفینول، پیونی فلورین اور دیگر فعال اجزاء سے بھرپور ہے۔ اجزاء تاہم، فینگڈان پیونی کے بیجوں کے کھانے کی ایک بڑی مقدار فی الحال صرف فیڈ کے طور پر یا فضلے کے طور پر استعمال ہوتی ہے [6]، جس کے نتیجے میں قدرتی وسائل کا ضیاع اور ماحولیاتی آلودگی ہوتی ہے [2]۔
ادب کے مطابق، flavonoids میں اہم حیاتیاتی سرگرمیاں ہوتی ہیں، جیسے کہ سوزش، اینٹی بیکٹیریل، اینٹی آکسیڈینٹ اور سفیدی کے اثرات [7-10]، جنہیں سمجھا جاتا ہے۔ممکنہ فعال خوراک کا خام مال۔ مثال کے طور پر، سویا بین isoflavone خلیات کو آزاد ریڈیکلز کے نقصان سے بچا سکتا ہے کیونکہ اس کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات [11-13] ہیں۔ جِنکگو بلوبا ایکسٹریکٹ میں فلاوونائڈ مضبوط اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات رکھتا ہے اور یہ آزاد ریڈیکلز کو براہ راست روک سکتا ہے [14]۔ سفید امرود کا فلیوونائڈ ایک قدرتی اینٹی بیکٹیریل ایجنٹ ہے، جو E. coli اور S. aureus [15] کی خوردبینی شکل کو تبدیل کر سکتا ہے۔
بدقسمتی سے، ایک ممکنہ فعال خوراک کے خام مال کے طور پر، Fengdan peony flavonoid نہ صرف صنعتی پیداوار میں شامل رہا ہے، بلکہ اس کی حیاتیاتی سرگرمی بھی خاص طور پر واضح نہیں ہے۔ لہٰذا، خوراک کے میدان میں پیونی فلیوونائڈز کی اطلاق کی قدر کو زیادہ سے زیادہ بہتر بنانے اور وسائل کے ضیاع کو کم کرنے کے لیے، پیونی فلاوونائڈ کو فینگڈان پیونی سیڈ میل سے نکالا گیا، اور فینگڈان پیونی فلاوونائیڈ کی اینٹی آکسیڈینٹ، سفیدی اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمیاں۔ مطالعہ کیا گیا تھا. توقع ہے کہ فینگڈان پیونی سے نئے فنکشنل فوڈ خام مال کی ترقی کی بنیاد رکھے گی۔
2. نتائج اور بحث
2.1 فلاوونائڈز کی کل پیداوار پر چار عوامل کا اثر
فلیوونائڈز کی کل پیداوار پر میتھانول کے ارتکاز کا اثر شکل 1a میں دکھایا گیا تھا۔ فلاوونائڈ کی کل پیداوار میں پہلے تو اضافہ ہوا، اور پھر میتھانول کے ارتکاز میں اضافے کے ساتھ کمی واقع ہوئی، اور زیادہ سے زیادہ تک پہنچ گئی (1.016 فیصد، روٹین کے خشک ماس کا پیونی سیڈ میل کے خشک ماس سے تناسب) جب میتھانول کا ارتکاز 90 تھا۔ فیصد .وجہ میتھانول کی قطبیت اور peony بیج کے کھانے میں کل flavonoids کی حل پذیری سے متعلق ہو سکتی ہے [16]۔ اس طرح، میتھانول کی زیادہ سے زیادہ حراستی 90 فیصد تھی۔
جیسا کہ شکل 1c میں دکھایا گیا ہے، کل flavonoids کی پیداوار میں پہلے اضافہ ہوا اور پھر درجہ حرارت میں اضافے کے ساتھ اس میں کمی واقع ہوئی۔ فلیوونائڈز کی کل پیداوار 55 ◦C پر زیادہ سے زیادہ قیمت (1.141 فیصد، روٹین کے خشک ماس اور پیونی سیڈ میل کے خشک ماس کا تناسب) تک پہنچ گئی۔ بیجوں کے کھانے میں کل فلیوونائڈز کی تحلیل کی شرح کو مناسب طریقے سے درجہ حرارت کو بڑھا کر تیز کیا گیا تھا۔ تاہم، ایک جزوی کل فلیوونائڈ سڑ گیا تھا جب اسے اعلی درجہ حرارت پر بے نقاب کیا گیا تھا [18]، جو کل فلیوونائڈز کی پیداوار میں کمی کا باعث بنتا ہے۔ اس طرح، 55 ◦C بہترین درجہ حرارت تھا۔
فلیوونائڈز کی کل پیداوار پر نکالنے کے وقت کا اثر شکل 1d میں دکھایا گیا تھا۔ کل flavonoids کی پیداوار میں تیزی سے اضافہ ہوا 0.5 h سے 1.5 h۔ جب نکالنے کا وقت 1.5 گھنٹے سے زیادہ تھا، کل فلیوونائڈز کی پیداوار میں کوئی تبدیلی نہیں ہوئی۔ اس رجحان کی وجہ یہ ہو سکتی ہے کہ بیج کے کھانے میں کل فلیوونائڈز کو نکالنے کے وقت کی توسیع کے ساتھ مسلسل تحلیل کیا گیا تھا 0.5 گھنٹے سے 1.5 گھنٹے تک۔ مزید برآں، وقت 1.5 گھنٹے تک پہنچنے کے ساتھ، تمام کل فلیوونائڈز تحلیل ہو چکے ہوں گے۔ لہذا، وقت بڑھانے سے کل فلاوونائڈز کی پیداوار [4,19] پر تھوڑا سا اثر پڑا۔ اس طرح، نکالنے کا بہترین وقت 1.5 گھنٹے تھا۔
2.2 فلاوونائڈز کی کل پیداوار کے لیے اصلاح
2.2.1 RSM کا استعمال کرتے ہوئے ماڈل فٹنگ اور ڈیٹا کا تجزیہ
Fengdan peony seed meal کی کل flavonoids کی پیداوار میں مختلف عوامل کی متعلقہ اہمیت کو مزید جاننے کے لیے RSM تجربہ کیا گیا۔ RSM متعدد متغیرات کی نسبتی اہمیت کا اندازہ لگانے اور مثالی ردعمل کے لیے بہترین حالات تلاش کرنے کے لیے ملٹی فیکٹر تجربات کے شماریاتی ڈیزائن اور ڈیٹا کے تجزیے میں استعمال کیا جاتا ہے [20]۔ RSM کے ساتھ Box-Behnken ڈیزائن لکیری ریگریشن مساوات میں فٹ ہو سکتا ہے، لہذا اثر انداز ہونے والے عوامل کے درمیان قانون کو تلاش کرنے کے لیے تجربے کا زیادہ درست تجزیہ کیا جا سکتا ہے [21]۔
ٹیبل S1 نے فلیوونائڈز کی کل پیداوار اور ٹیسٹ متغیرات کے درمیان تعلق کو دکھایا۔ تجرباتی اعداد و شمار کا تجزیہ متعدد رجعت تجزیہ کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ کل فلاوونائڈز کی پیداوار (Y) سے ٹھوس سے مائع تناسب (A)، نکالنے کا درجہ حرارت (B) اور نکالنے کا وقت (C) کی چوکور کثیر الثانی رجعت مساوات تھی: y=1.19 جمع 0 {8}}1A − {{10}}۔{14}}2B − 0۔{18}}03C جمع 0.02AB − 0.02AC جمع 0.01BC − 0.03A2 − 0.04B20.02C2۔
چوکور کثیر الثانی ماڈل کے انووا کو ٹیبل 1 میں دکھایا گیا تھا۔ماڈل کی F- ویلیو 18.57 تھی، ماڈل کی p ویلیو 0 تھی۔{5}}004 (p <0.01)، ماڈل کی فٹنگ ڈگری 0.1202 تھی، اور تعین گتانک (آر2) تھا 0.9598، جس نے اشارہ کیا کہ ماڈل کی شماریاتی اہمیت انتہائی اہم ہے۔ پرائمری ٹرم (B) اور سیکنڈری ٹرم (A2, B2, C2) کے کل فلیوونائڈز کی پیداوار پر انتہائی اہم اثرات مرتب ہوئے (p < 0۔{8}}1)۔="" a،="" ab="" اور="" ac="" کے="" فلیوونائڈز="" کی="" کل="" پیداوار="" پر="" اہم="" اثرات="" مرتب="" ہوئے="" (p="">< 0.05)۔="" c="" اور="" bc="" کا="" کل="" flavonoids="" کی="" پیداوار="" (p=""> 0.05) پر کوئی خاص اثر نہیں ہوا۔ تین عوامل کی F- ویلیو کے مطابق، کل فلیوونائڈز کی پیداوار پر اثر نکالنے کا درجہ حرارت> ٹھوس سے مائع تناسب> نکالنے کا وقت تھا۔
جدول 1۔چوکور کثیر الثانی ماڈل کا انووا۔
تین جہتی (3D) ردعمل کی سطح کے خاکے شکل 2a، c، e میں دکھائے گئے تھے۔ 3D گراف کا سب سے اونچا نقطہ انٹرایکٹو عوامل کے لیے بہترین حالت تھا۔ A اور B (شکل 2b)، A اور C (شکل 2d) کے درمیان تعامل کی سموچ کی ڈھلوانیں زیادہ تیز تھیں، جب کہ A اور C (شکل 2f) کی ڈھلوانیں ہموار تھیں۔ اس نے واضح کیا کہ A اور B، A اور C کے درمیان تعامل کا فلیونائڈز کی کل پیداوار پر بہت زیادہ اثر پڑتا ہے، جبکہ B اور C کے درمیان تعامل کا کل flavonoids کی پیداوار پر کوئی خاص اثر نہیں ہوتا ہے۔ RSM تجربے اور رجعت تجزیہ کے درمیان مستقل مزاجی نے مزید ثابت کیا کہ قائم کردہ ماڈل زیادہ درست تھا۔
تصویر 2۔AB کے لیے 3D سطح کے خاکے (a)، اے سی (c) اور BC (e) فلیوونائڈز کی کل پیداوار تک۔
2.2.2 بہترین حالات کی تصدیق
ماڈل کے ذریعہ دیے گئے نظریاتی بہترین پیرامیٹرز میں ٹھوس سے مائع تناسب 1:36.11، نکالنے کا درجہ حرارت 53.52 ◦C، نکالنے کا وقت 82.65 منٹ، اور کل فلیوونائڈز کی پیداوار کی نظریاتی قدر 1.195 فیصد تھی۔ اصل آپریشن پر غور کرتے ہوئے، نظریاتی پیرامیٹرز کو 1:35 کے ٹھوس سے مائع تناسب، 55 ◦C کے نکالنے کا درجہ حرارت، اور نکالنے کا وقت 80 منٹ میں ایڈجسٹ کیا گیا۔ ان حالات کے تحت، فلیوونائڈز کی کل پیداوار 1.205 ± 0.019 فیصد تھی۔ نظریاتی پیشن گوئی کی قدر کے مقابلے میں، متعلقہ غلطی 0.8 فیصد تھی۔ نظریاتی قدر اصل نتیجہ کے ساتھ مطابقت رکھتی تھی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ اصلاح کے پیرامیٹرز دستیاب تھے۔ چن وغیرہ۔ 60 فیصد ایتھنول آبی محلول کا استعمال کرتے ہوئے پیونی سے فلیوونائڈز نکالے گئے اور پیداوار 1.34 فیصد تھی جو اس کاغذ کے مطابق تھی۔ آر ایس ایم کو پودوں سے فلیوونائڈز کے زیادہ سے زیادہ نکالنے کے عمل کو بہتر بنانے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا تھا، جیسے اورانٹی فریکٹس [22]، پویریا [23]، اور کرکوما زیڈوریا کے پتے [24]۔ آرتھوگونل ٹیسٹ کے مقابلے میں، RSM کے پاس درست پیشین گوئی، زیادہ درستگی، اور زیادہ آسانی سے اثر و رسوخ کے عوامل کا تجزیہ کرنے کے فوائد تھے [25]۔
2.3۔ Fengdan Peony Flavonoid کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی
Flavonoids قدرتی اینٹی آکسیڈینٹ ہیں جو جسم میں آزاد ریڈیکلز کو مؤثر طریقے سے صاف کرسکتے ہیں۔ flavonoids کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت اس حقیقت کی وجہ سے ہے کہ flavonoids ہائیڈروجن ایٹموں کو فری ریڈیکلز فراہم کر سکتے ہیں اور خود کو فینولک فری ریڈیکلز میں تبدیل کر سکتے ہیں۔ خودکار آکسیڈیشن چین ری ایکشن کی منتقلی کی شرح کو فینولک فری ریڈیکلز کے استحکام سے سست کیا جا سکتا ہے، اس طرح لپڈز کے مزید آکسیکرن کو روکا جا سکتا ہے [26]۔
DPPH فری ریڈیکل کو کل flavonoids کی کلیئرنس کو شکل 3a میں دکھایا گیا تھا۔ ارتکاز کی حد میں 0.1 سے 1.0 mg/mL، کل flavonoids اور VC سے DPPH فری ریڈیکلز کی کلیئرنس ان کے ارتکاز کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھی۔ 0.1 سے 0.5 mg/mL کی حد میں، VC کی کلیئرنس اس کے ارتکاز کے ساتھ بڑھا دی گئی۔ جب ارتکاز 0.5 mg/mL سے زیادہ تھا، VC کی کلیئرنس 98 فیصد تک پہنچ گئی اور اس کا رجحان مستحکم رہا۔ 0.1 سے 0.8 mg/mL کی حد میں، ارتکاز میں اضافے کے ساتھ کل flavonoids کی کلیئرنس میں اضافہ ہوا۔ جب ارتکاز 0.8 mg/mL سے زیادہ تھا، کل flavonoids کی کلیئرنس تقریباً 75 فیصد تک مستحکم ہو جاتی ہے۔ Oancea et al. [27] نے رپورٹ کیا کہ ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل کو پیونی کروڈ ایکسٹریکٹ کی کلیئرنس 81 فیصد تھی۔ کلیئرنس اس مطالعہ کے نتائج سے ملتی جلتی تھی۔ Fengdan peony کل flavonoids میں DPPH فری ریڈیکلز کو صاف کرنے کی ایک خاص صلاحیت تھی، لیکن صلاحیت VC سے قدرے کم تھی۔ اینٹی آکسیڈینٹ اور ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل کے درمیان رد عمل کا احساس ہائیڈروجن ایٹم اور الیکٹران کی منتقلی کے طریقہ کار سے ہوتا ہے [28]۔ DPPH فری ریڈیکل ایتھنول محلول میں جامنی رنگ کا ہوتا ہے۔ جب اینٹی آکسیڈینٹ ہائیڈروجن سپلائی کے ذریعے DPPH فری ریڈیکل کو مستحکم حالت میں لے جاتا ہے، تو اس کا رنگ پیلا ہو جاتا ہے اور 517 nm [29] پر مضبوط جذب ہوتا ہے۔ اس مقالے میں، DPPH پر peony flavonoids کے سکیوینگنگ اثر کو flavonoid کی حراستی میں اضافے کے ساتھ نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا، جس نے اشارہ کیا کہ peony flavonoids موثر اینٹی آکسیڈنٹس تھے۔
ہائیڈروکسیل ریڈیکل سے کل فلیوونائڈز کی کلیئرنس کو شکل 3b میں دکھایا گیا ہے۔ 0.1 سے 1.0 mg/mL کے ارتکاز میں، کل flavonoids سے hydroxyl radical کی کلیئرنس VC سے کم تھی۔ 0.4 mg/mL پر، VC کی کلیئرنس بنیادی طور پر زیادہ سے زیادہ، تقریباً 97 فیصد تک پہنچ گئی۔ ہائیڈروکسیل ریڈیکلز پر کل فلیوونائڈز کی صفائی کی شرح ارتکاز میں اضافے کے ساتھ بڑھ گئی، اور زیادہ سے زیادہ قدر (70 فیصد ) تک پہنچ گئی جب ارتکاز 0.8 ملی گرام/ملی لیٹر سے زیادہ تھا۔ ہائیڈروکسیل ریڈیکل کافی فعال ہے اور کسی بھی بائیو مالیکیول کے ساتھ تیزی سے رد عمل ظاہر کر سکتا ہے، جو اعضاء یا بافتوں کو بہت نقصان پہنچاتا ہے [30]۔ ہائیڈروکسیل ریڈیکل خلیات [31] کے لیے سب سے زیادہ زہریلا رد عمل آکسیجن پرجاتی ہے، جو جسم کے آکسیکرن کو بڑھا کر سیل اپوپٹوسس کو تیز کرتا ہے [32]۔ یانگ وغیرہ۔ [33] نے پایا کہ ہائیڈروکسیل ریڈیکل پر پیونی سیڈ آئل کا سکیوینگنگ اثر ارتکاز پر منحصر تھا، اور ہائیڈروکسیل ریڈیکل کی کلیئرنس 0.1–0.5 ملی گرام/ملی لیٹر کے ارتکاز کی حد میں 92 فیصد تک تھی۔ اس مقالے کے مقابلے میں پیونی سیڈ میل فلیوونائڈز کی کلیئرنس پیونی سیڈ آئل کی نسبت کم تھی، لیکن پیونی سیڈ آئل کی پیداوار میں ضمنی پروڈکٹ کے طور پر، پیونی سیڈ میل سے نکالے گئے فلیوونائڈز کا بھی ہائیڈروکسیل ریڈیکل پر واضح اثر تھا۔ کم حراستی میں. لہذا، peony flavonoids کو ایک فنکشنل فوڈ خام مال کے طور پر سمجھا جا سکتا ہے جس میں سکیوینگنگ ہائیڈروکسیل ریڈیکل کی صلاحیت ہے۔ ایک طرف، اس کا انسانی اینٹی آکسیڈینٹ دفاعی نظام پر بہتر حفاظتی اثر پڑا، اور دوسری طرف، یہ peony بیجوں کے جامع استعمال کو بھی بہتر بنا سکتا ہے۔
2.4 Fengdan Peony Flavonoid کی سفیدی کی سرگرمی
جیسا کہ شکل 4 میں دکھایا گیا ہے، Fengdan peony flavonoid (0.03–1.00 mg/mL) نے ٹائروسینیز کی 8.53–81.08 فیصد روک تھام پیدا کی، جس نے ٹائروسینیز کی روک تھام کی خوراک پر انحصار ظاہر کیا۔ . IC50 0.24 mg/mL تھا۔ لن وغیرہ۔ [36] نے پایا کہ ٹائروسینیز کی روک تھام کی شرح تقریباً 75 فیصد تھی جب پیونی سے ایتھنول کے عرق کا ارتکاز 1 ملی گرام/ملی لیٹر تھا۔ ٹائروسینیز کی روک تھام کی شرح اس مقالے کے نتائج کے قریب تھی۔ میلانین سفیدی کو روکنے کے لیے کلیدی مادہ ہے [37]۔ ٹائروسینیز میلانین کی ترکیب میں ایک اہم انزائم ہے، جو کاسمیٹک اور فنکشنل فوڈز کو سفید کرنے کے لیے انڈیکس کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے [38]۔ Tyrosinase inhibitors زیادہ تر کاسمیٹکس یا سفید کرنے والی کھانوں میں ضروری اجزاء ہوتے ہیں [39]۔ اس مطالعہ میں، peony flavonoid کا ٹائروسینیز کی سرگرمی پر واضح روک تھام کا اثر تھا۔ لہٰذا، کاسمیٹکس میں پیونی فلاوونائڈز کو سفید کرنے والے مواد کے طور پر یا سفید کرنے والی کھانوں میں شامل کرنا قابل عمل اور درست تھا۔
جدول 2۔روکنا زون کا قطر۔
3. مواد اور طریقے
3.1 مواد اور ری ایجنٹس
سکیمڈ Fengdan peony بیج کا کھانا Guyu Peony Biotechnology Co., Ltd. (Heze, China) سے خریدا گیا تھا۔ بیجوں کے کھانے کو پیس کر پاؤڈر بنایا جاتا تھا اور پھر ایک 40-جالی کی چھلنی سے گزر جاتا تھا [45]۔ بیجوں کے کھانے کا پاؤڈر اکٹھا کیا گیا اور مستقبل میں استعمال کے لیے 4 ◦C پر ذخیرہ کیا گیا۔ Rutin سٹینڈرڈ، وٹامن C (VC)، میتھانول، اینہائیڈروس ایتھنول سوڈیم نائٹریٹ (NaNO2)، ایلومینیم نائٹریٹ (Al(NO3)3) اور سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ (NaOH) چین کی طرف سے فراہم کیے گئے تھے۔فارماسیوٹیکل گروپ کمپنی لمیٹڈ (بیجنگ، چین)؛ ہائیڈروکسیل ریڈیکل، ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکلاور ABTS فری ریڈیکل سکیونگنگ کیپسٹی کٹ شنگھائی ٹونگ وی انڈسٹریل کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔
3.2 کل فلاوونائڈز کا اخراج
مزید یہ کہ، 1500 g سکیمڈ فینگڈان پیونی سیڈ میل کو 1000 ملی لیٹر بیکر میں شامل کیا گیا۔ پھر، اسے ڈیجیٹل ڈسپلے تھرموسٹیٹک واٹر باتھ (HH-S4، Jiangsu, China) میں الیکٹرک بلینڈر (OES-60M, Wenzhou, China, 220 r/min) کے ساتھ رکھا گیا اور درج ذیل شرائط کے تحت نکالا گیا: میتھانول کا ارتکاز 90 فیصد تھا، ٹھوس سے مائع کا تناسب 1:35 g:mL، نکالنے کا درجہ حرارت 55 ◦C تھا، اور نکالنے کا وقت 80 منٹ تھا۔ نکالنے پر، کل فالونائڈز کا فلٹریٹ ویکیوم فلٹر کے ذریعے جمع کیا گیا۔
3.3 سنگل فیکٹر تجربہ
فینگڈان پیونی سیڈ میل کی کل فلیوونائڈز کی پیداوار کو سنگل فیکٹر تجربہ استعمال کرکے بہتر بنایا گیا۔ یہ کل flavonoids کی پیداوار پر چار عوامل کے اثر کو ظاہر کر سکتا ہے۔ اس تجربے کی تفتیش واحد متغیر طریقہ سے کی گئی۔ تجربے کے عوامل اور متغیرات کو جدول 3 میں دکھایا گیا ہے۔
جدول 3۔واحد عنصر کے تجربے کے عوامل اور متغیرات
3.4 RSM تجربہ
سنگل فیکٹر تجربہ نے RSM تجربے کے لیے ہر فیکٹر کے تین متغیرات فراہم کیے ہیں۔ اس مطالعہ میں، واحد عنصر کے تجربے کی بنیاد پر، میتھانول کی حراستی کو 90 فیصد کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ ٹھوس سے مائع کا تناسب، نکالنے کا درجہ حرارت، اور نکالنے کا وقت بطور دلیل استعمال کیے گئے۔ peony کل flavonoids کی پیداوار کو جوابی قیمت کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیزائن-ماہر سافٹ ویئر 12.0 میں Box-Behnken ٹیسٹ کے اصول کی بنیاد پر، RSM کو تین عوامل اور تین سطحوں کے ساتھ peony seed meal سے کل flavonoids کے نکالنے کے حالات کو بہتر بنانے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا۔ پورا تجرباتی ڈیزائن 17 تجرباتی نکات (ٹیبل S1) پر مشتمل تھا۔ خالص غلطی کا اندازہ لگانے کے لیے ڈیزائن سینٹر میں پانچ نقلیں (13–17) کی گئیں۔ RSM کے عوامل اور سطحوں کو جدول 4 میں دکھایا گیا تھا۔
جدول 4۔RSM کے عوامل اور سطحیں۔
3.5 Fengdan Peony Total Flavonoids پاؤڈر کی تیاری
RSM کے ذریعے نکالنے کے بہترین عمل کا تعین کرنے کے بعد، Fengdan peony کل flavonoids کے فلٹریٹ کو بہترین نکالنے کے عمل کے ساتھ نکالا گیا، پھر peony کل flavonoids پاؤڈر اس وقت حاصل کیا گیا جب فلٹریٹ کو روٹری ایوپوریٹر (20 mL/min، 25 W, R) کے ذریعے مرتکز کیا گیا۔ -1001VN، Zhengzhou، China) اور منجمد ڈرائر (−80 ◦C, 24 h, SCIENTZ-12N, Ningbo, China) کے ذریعے خشک کیا جاتا ہے۔ اس پاؤڈر کو اینٹی آکسیڈنٹ، سفیدی اور اینٹی بیکٹیریل تجربات میں استعمال کیا جائے گا۔
3.6۔ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی تشخیص
Fengdan peony کل flavonoids محلول اور VC محلول مختلف بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ (0.1، 0.2، 0.3، 0.4، 0 }}.5، 0.6، 0.7، 0.8، 0.9، 10 mg/mL) تیار کیے گئے 80 فیصد ایتھنول کے ساتھ، جس کا استعمال تین فری ریڈیکلز کو کل فلیوونائڈز کی کلیئرنس کا تعین کرنے کے لیے کیا جائے گا۔
3.6.1 ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل پرکھ
ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل کو کل فلیوونائڈز کی کلیئرنس کا تعین کیا گیا جیسا کہ فام، ڈی سی نے معمولی ترمیم کے ساتھ بیان کیا ہے [48]۔ مختصراً، 150 μL of 0.2 mM DPPH کو مختلف ارتکاز (0.1–1.0 mg/mL) کے نمونے کے 150 μL میں اینہائیڈروس ایتھنول میں شامل کیا گیا۔ اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر مرکب کو ہلایا اور 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 200 μL مرکب کو ایک 96-کنویں پلیٹ میں شامل کیا گیا تھا، اور جذب کو 517 nm پر انزائم لیبل والے آلے (SpectraMax 190, Shanghai, China) کے ذریعے ماپا گیا تھا۔ VC کو کنٹرول مادہ کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ DPPH کی کلیئرنس کا حساب درج ذیل فارمولے سے کیا گیا تھا۔
ڈی پی پی ایچ کی کلیئرنس فیصد={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } فیصد (2)
جہاں Ai 150 μL نمونہ جمع 150 μL DPPH کا جذب تھا؛ Aj 150 μL نمونے کے علاوہ 150 μL اینہائیڈروس ایتھنول کا جذب تھا۔ A0 150 μL DPPH پلس 150 μL اینہائیڈروس ایتھنول کا جذب تھا۔
3.6.2 ہائیڈروکسیل ریڈیکل پرکھ
ہائیڈروکسیل ریڈیکل کو کل فلاوونائڈز کی کلیئرنس کا تعین کیا گیا تھا جیسا کہ Zhou, J. نے کچھ ترمیم کے ساتھ بیان کیا ہے [49]۔ مختصراً، مختلف ارتکاز کے 50 μL نمونے کے حل (0.1–1.0 mg/mL)، 50 μL 9.0 mM سیلیسیلک ایسڈ-ایتھانول محلول ، 9.0 mM FeSO4 محلول کا 50 μL اور 200 μL آست پانی کو ایک ٹیوب میں ملایا گیا تھا۔ پھر، 8.8 mM H2O2 کا 50 μL اوپر والے مرکب میں شامل کیا گیا، اور جاذبیت کو 510 nm پر ماپا گیا۔ ہائیڈروکسیل ریڈیکل کی کلیئرنس کا حساب درج ذیل فارمولے سے کیا گیا تھا۔
ہائیڈروکسیل ریڈیکل فیصد کی کلیئرنس={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } فیصد (3)
جہاں عی نمونے کی جاذبیت تھی؛ Aj H2O2 کی بجائے deionized پانی کا جذب ہے۔ A0 نمونے کی بجائے deionized پانی کا جذب تھا۔
3.6.3 ABTS فری ریڈیکل پرکھ
ABTS فری ریڈیکل کو کل flavonoids کی کلیئرنس کا تعین کیا گیا جیسا کہ Gong, J. نے کچھ ترمیم کے ساتھ بیان کیا ہے [5{{10}}]۔ مختصراً، 7 mM ABTS محلول کا 1 mL اور 2.45 mM پوٹاشیم پرسلفیٹ محلول کا 1 mL اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر 12 گھنٹے کے لیے ایک ٹیوب میں ملایا گیا۔ مرکب کو اینہائیڈروس ایتھنول کے ساتھ 40 بار پتلا کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 190 μL مرکب اور 10 μL نمونے مختلف ارتکاز (0.1–1.0 mg/mL) میں اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر 6 منٹ کے لیے ایک ٹیوب میں ملا دیے گئے۔ جاذب کی پیمائش 734 nm پر کی گئی۔ ABTS فری ریڈیکل کی کلیئرنس کا حساب درج ذیل فارمولے سے لگایا گیا تھا۔
ABTS فیصد کی کلیئرنس={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } فیصد (4)
جہاں Ai 10 μL نمونہ جمع 190 μL مرکب کا جذب تھا؛ Aj 10 μL نمونے کے علاوہ 190 μL اینہائیڈروس ایتھنول کا جذب تھا۔ A0 10 μL اینہائیڈروس ایتھنول کے علاوہ 190 μL مرکب کا جذب تھا۔
Cistanche واضح فری ریڈیکلز۔
3.7 سفید کرنے کی سرگرمی کی تشخیص
ٹائروسیناس روکنا پرکھ کا تعین کیا گیا تھا جیسا کہ چن کیو نے معمولی ترمیم کے ساتھ بیان کیا ہے [38]۔ مختصراً، 1/15 فاسفیٹ بفرز (pH 6.8) کے 80 μL میں تحلیل شدہ 5 mmol/L ٹائروسین کے 40 μL کو 40 μL Fengdan peony کل flavonoids کے محلول کے ساتھ 37 ◦C پر 15 منٹ تک ملایا گیا۔ اگلا، رد عمل شروع کرنے کے لیے 40 μL ٹائروسینیز (300 IU/mL) شامل کیا گیا۔ پرکھ کا مرکب 10 منٹ کے لئے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ جذب کو ایک انزائم لیبل والے آلے (سپیکٹرا میکس 190، شنگھائی، چین) کے ذریعے 482 nm پر ماپا گیا۔ ایک ہی وقت میں، خالی گروپ اور کنٹرول گروپ قائم کیا گیا تھا. خالی گروپ میں، ٹائروسینیز شامل نہیں کیا گیا تھا اور فاسفیٹ بفر کو حجم بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ میں، flavonoid حل شامل نہیں کیا گیا تھا، اور فاسفیٹ بفر حجم بنانے کے لئے استعمال کیا گیا تھا. ٹائروسینیز سرگرمی کی روک تھام کا فیصد درج ذیل فارمولے سے شمار کیا گیا تھا۔
روک تھام کی شرح (فیصد)= [1−(As − Ab) / (Ac − Ab)]×100 فیصد (5)
جہاں AB 482 nm پر خالی گروپ کا جاذب تھا، AC 482 nm پر کنٹرول گروپ کا جاذب تھا، اور AS 482 nm پر نمونے کا جاذب تھا۔
3.8۔ اینٹی بیکٹیریل سرگرمی کا تجربہ
پھر، 400 μL جراثیم سے پاک پانی کو بیکٹیریل فریز ڈرائی ٹیوب میں شامل کیا گیا۔ مکمل طور پر مکس ہونے کے بعد، 200 μL بیکٹیریا مائع آگر پلیٹ میں یکساں طور پر پھیلا ہوا تھا۔ اسے ایک بائیو کیمیکل انکیوبیٹر (LRH-250, 650 W, Changzhou, China) میں 37 ◦C پر 24 گھنٹے کے لیے بیکٹیریا کو فعال کرنے کے لیے لگایا گیا تھا۔ پھر، سنگل کالونی کو ڈسپوزایبل انوکیشن لوپ (65-0001، شیڈونگ، چین) کے ساتھ آگر پلیٹ میں اٹھایا گیا اور مائع میڈیم میں ٹیکہ لگایا گیا۔ میڈیم کو ایک ذہین مستقل درجہ حرارت کلچر آسکیلیٹر (HNYC-202T, 1800W, Tianjin, China) میں 37 ◦C، 120 r/min پر 24 گھنٹے کے لیے رکھا گیا تھا۔ بیکٹیریل معطلی کے ارتکاز کو ہیمو سائیٹومیٹر (Q401، شنگھائی، چین) کے ذریعے دیکھا اور شمار کیا گیا، اور پھر 106 CFU/mL [51] میں ایڈجسٹ کیا گیا۔
ممنوعہ زون کا تجربہ چھدرن کے طریقہ سے چلایا گیا تھا۔ سب سے پہلے، Fengdan peony کل flavonoids کے مختلف ارتکاز (30 mg/mL اور 500 mg/mL) 80 فیصد میتھانول کے ساتھ تیار کیے گئے تھے۔ پھر، بیکٹیریا کی معطلی کا 80 μL جراثیم سے پاک آگر میڈیم پر یکساں طور پر پھیلا ہوا تھا۔ اس کے بعد، 7 ملی میٹر (A0358، گوانگزو، چین) کے قطر کے ساتھ ایک پنچر کے ذریعے درمیانے درجے میں 4 سوراخ کیے گئے۔ تین سوراخوں کو کل flavonoids کے 100 μL حل میں شامل کیا گیا تھا، اور دوسرے کو کنٹرول کے طور پر 80 فیصد میتھانول کے 100 μL میں شامل کیا گیا تھا۔ آخر میں، اسے بائیو کیمیکل انکیوبیٹر میں 24 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر کلچر کیا گیا تھا۔ ہر سوراخ کے ارد گرد واضح ممنوعہ زون کا قطر ورنیئر کیلیپر (SWB-227-150، گوانگزو، چین) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔
MIC تجربہ مندرجہ ذیل مراحل کے مطابق کیا گیا تھا۔ بیکٹیریل نمو کا نظام جس میں کل فلیوونائڈز کے محلول کی مختلف تعداد ہوتی ہے (0۔{3}}037، 0۔{9}}073، 0۔ ایک ڈبل گراڈینٹ کم کرنے کے طریقہ کار کے ذریعے [52]۔ اس کے علاوہ، مکمل فلیوونائڈز کے حل کے بغیر بیکٹیریل محلول کو شامل کرنے کو گروتھ کنٹرول گروپ کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا، اور بیکٹیریل محلول کے بغیر کل فلیوونائڈز کا محلول خالی کنٹرول گروپ کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ان کو ذہین مستقل درجہ حرارت کلچر آسکیلیٹر (HNYC- 202T, 1800 W, Tianjin, China) میں 37 ◦C، 120 rpm/min پر 24 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا تھا۔ بیکٹیریا کی نشوونما کے بغیر کل flavonoids کی زیادہ سے زیادہ پتلی ارتکاز بیکٹیریا پر کل flavonoids کا MIC تھا [53]۔
3.9 شماریاتی تجزیہ
ڈیزائن-ماہر V12۔{2}}.3۔{4}} (Stat-Ease Inc., Minneapolis, MN, USA) کو کواڈراٹک پولینومیئل ماڈل کے گتانکوں اور آپٹیمائزیشن کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ F-values اور p-values کا استعمال کثیر الثانی ماڈل کی مساوات کی درستگی کو جانچنے کے لیے کیا گیا تھا، اور {{10}}.05 (p <0.05) سے="" کم="" p-values="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" تمام="" تجربات="" کی="" تین="" بار="" پیمائش="" کی="" گئی،="" اور="" ڈیٹا="" کی="" قدروں="" کا="" اظہار="" بطور="" مطلب="" ±="" معیاری="" انحراف="" (sd)="" کیا="">
4. نتائج
اس مطالعہ میں، فینگڈان پیونی کل فلیوونائڈز کے نکالنے کے بہترین حالات 90 فیصد، ٹھوس سے مائع تناسب 1:35، نکالنے کا درجہ حرارت 55 ◦C، نکالنے کا وقت 80 منٹ، اور میتھانول کا ارتکاز تھا۔ فلیوونائڈز کی کل پیداوار 1.204 فیصد تھی۔ ہمیں یقین ہے کہ نکالنے کا عمل صنعتی پیداوار کے لیے موزوں ہے۔ Fengdan peony flavonoids نے بہترین اینٹی آکسیڈنٹ اثرات کا مظاہرہ کیا، DPPH فری ریڈیکل کے لیے کل flavonoids کی کلیئرنس 75 فیصد، ہائیڈروکسیل ریڈیکل کے لیے 70 فیصد، اور ABTS فری ریڈیکل کے لیے 97 فیصد تھی۔ اس کے علاوہ، Fengdan peony flavonoids کا ایک خاص سفیدی کا اثر تھا، Fengdan peony flavonoids کی tyrosinase کی روک تھام کی شرح خوراک پر منحصر ہے اور IC50 0.24 mg/mL تک پہنچ سکتی ہے۔ مزید یہ کہ فینگڈان پیونی کل فلیوونائڈز گرام پازیٹو بیکٹیریا کی نشوونما کو روک سکتے ہیں۔ تمام نتائج نے صحت کی مصنوعات اور فعال کھانے کے خام مال میں Fengdan peony کل flavonoids کے استعمال کے لیے ایک قابل اعتماد ڈیٹا سپورٹ فراہم کیا، اور Fengdan peony کل flavonoids کی صنعتی پیداوار کی بنیاد رکھی۔
cistanche گولیاں جس میں flavonoids ہوتے ہیں۔
تصویر پر کلک کریں اور مزید تفصیلات حاصل کریں۔