فائٹو کیمیکل تجزیہ، ان وٹرو اینٹی پرولیفیریٹو، اینٹی آکسیڈینٹ حصہ 1

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

پس منظر:Rumex rothschildianus خاندان Polygonaceae میں Rumex جینس کے ایک منفرد حصے کا واحد رکن ہے۔ یہ پرجاتی ایک بہت ہی نایاب چھوٹی ڈائیویشئس سالانہ ہے، جو فلسطین کے لیے مقامی ہے جو روایتی طور پر خوراک اور مختلف بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ لہذا، موجودہ تحقیقات کا مقصد R. rothschildianus کے پتوں کے چار سالوینٹس کے حصوں کے کیمیائی اجزاء، اینٹی آکسیڈنٹس، اینٹی a-amylase، anti-a-glucosidase، anticipate اور cytotoxic اثرات کی جانچ کرنا ہے۔

طریقے:R. rothschildianus پتوں کے خشک پاؤڈر کو مختلف قطبین کے ساتھ چار سالوینٹس میں نکالا گیا تھا۔ نچوڑ کے اجزاء کا تعین کرنے کے لیے کئی کوالیٹیٹیو اور مقداری فائٹو کیمیکل ٹیسٹ کیے گئے۔ رنگین تجزیہ کا استعمال فینول، فلیوونائڈز اور ٹیننز کے مقداری تعین کے لیے کیا گیا تھا۔ اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی اے ایمیلیز، اینٹی اے گلوکوسیڈیس، اور روک تھام کی سرگرمیوں کے ساتھ ساتھ سروائیکل کارسنوما سیل لائن (HeLa) اور بریسٹ کینسر سیل لائن کے خلاف MTS پرکھ کے ذریعہ سائٹوٹوکسائٹی کے لئے نچوڑ کا جائزہ لینے کے لئے ان وٹرو اسیس کئے گئے تھے۔ (MCF7)۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

نتائج:R. rothschildianus کے پتوں کے acetone کے حصے نے سب سے زیادہ نمایاں دکھایااینٹی آکسیڈینٹسرگرمی، flavonoids اور phenolics کے اعلیٰ ترین مواد کی وجہ سے، جس کی ICso قدر 6.3±0.4 ug/ml ہے، اس کے مقابلے میں Trolox کے لیے 3.1±0.9 ug/ml، اور اس کے متعلق لپیس روکنے کی سرگرمی اورلسٹیٹ مثبت کنٹرول ICso 12.3 ug/ml کے مقابلے میں ایسٹون فریکشن نے 26.3±{{10}.6 ug/ml کی ICso قدر کے ساتھ سب سے زیادہ طاقتور سرگرمی دکھائی۔ ایک ہی اقتباس a-amylase اور a-glucosidase کا سب سے زیادہ قوی روک تھام کرنے والا تھا، جس کے مقابلے میں بالترتیب 19.1±0.7 ug/ml اور 54.9±0.3 ug/ml کی ICso قدریں تھیں۔ بالترتیب 28.8، 37.1±0.3 ug/اور acarbose سے۔ ہیکسین فریکشن نے HeLa سیلز کی 99.9 فیصد روک تھام اور MCF7 سیلز کے لیے 97.4 فیصد روکنا ظاہر کیا۔

نتیجہ:R. rothschildianus پتوں کا ایسٹون حصہ آکسیڈیٹیو تناؤ کے علاج کے لیے بایو ایکٹیو مرکبات کا ذریعہ فراہم کر سکتا ہے۔ اسی طرح، ہیکسین کا حصہ R. rothschildianus کی امید افزا اینٹیٹیمر صلاحیت کی نشاندہی کرتا ہے۔ واضح طور پر، ان ابتدائی اشارے کے لیے ممکنہ طور پر فعال مرکبات کی مزید تطہیر کی ضرورت ہے، اور بالآخر، ان کی تاثیر کا تعین کرنے کے لیے ان ویوو مطالعات کی ضرورت ہے۔

مطلوبہ الفاظ:Rumex rothschildianus، Antioxidant، Lipase، Amylase، Trolox، Phytochemistry، Anti-proliferative سرگرمی

پس منظر

پودے قدیم زمانے سے ہی علاج کے طور پر استعمال ہوتے رہے ہیں۔ جڑیں، بیج، چھال، پتے اور پھول سب کو علاج کے مقاصد کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔ موجودہ دور میں، مصنوعی ادویات دستیاب ہیں اور وسیع پیمانے پر بیماریوں کے علاج میں موثر ہیں۔ تاہم، کچھ لوگ اب بھی جڑی بوٹیوں کی ادویات کو ترجیح دیتے ہیں کیونکہ انہیں انسانی جسم کے لیے کم نقصان دہ سمجھا جاتا ہے [1,2]۔ دواؤں کے پودے تعریف کے مطابق فائٹو کیمیکل مرکبات کا ذریعہ ہیں جو علاج کی سرگرمیاں رکھتے ہیں۔ یہ خصوصیات مختلف ثانوی میٹابولائٹس کی موجودگی پر انحصار کرتی ہیں، جیسے فینولکس، ٹیرپینائڈز، اور الکلائڈز [3]۔ رومیکس روتھسچلڈینس آرونس۔ Polygonaceae خاندان میں رومیکس جینس کے منفرد حصے کا واحد رکن ہے۔ یہ پرجاتی فلسطین میں ایک بہت ہی نایاب چھوٹی نسلی طور پر سالانہ، مقامی ہے۔ اس کی اوسط اونچائی 45 سینٹی میٹر ہوتی ہے اور اس کی خصوصیت سیدھا تنوں سے ہوتی ہے جس میں ریڈیکل پیٹیولیٹ پتے ہوتے ہیں، جو بنیاد پر مختصر جلد ہوتے ہیں اور اوپری حصے میں مختصر ہوتے ہیں۔ پھولوں کا قطر 3-4 ملی میٹر ہوتا ہے، جب کہ پستول پھولوں کا قطر تقریباً 2 ملی میٹر ہوتا ہے جس میں ایک coriaceous membranous تہہ ہوتا ہے [4]۔ رومیکس ایس پی پی ترکی کے مختلف علاقوں میں بڑے پیمانے پر پائے جاتے ہیں، اور 22 پرجاتیوں کی طرف سے نمائندگی کی جاتی ہے۔ کچھ سب سے زیادہ عام انواع ہیں R.patiia L, R. Crispus L, R. acetosa LR caucasicus rech, R. alpinus LR alpinus, اور R. caucasicus بارہماسی پودے ہیں جو درمیانی اور مشرقی اناطولیہ میں {{10 کی اونچائی پر تقسیم کیے جاتے ہیں سطح سمندر سے }} میٹر بلند رومیکس جینس کو ترکی میں روایتی ادویات میں بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے تاکہ قبض، اسہال، اور ایگزیما [5، 6] جیسے امراض کا علاج کیا جا سکے۔ جینس میں کچھ جلاب، موتروردک، جراثیم کش، زخم کی شفا یابی، اور سوزش کے اثرات بھی ہیں۔ ترکی کے مشرقی حصے میں بہت سے لوگ Rumex spp کے جوان پتوں کا استعمال کرتے ہیں۔ پنیر میں ایک محافظ کے طور پر، ساتھ ساتھ کھانے کی خوشبو [7]۔

Rumex پرجاتیوں پر مختلف قسم کی تحقیق کی گئی ہے، جیسے کہ کچھ پرجاتیوں کے لیے antimicrobial سرگرمیاں رپورٹ کی جا رہی ہیں۔ کچھ بایو ایکٹیو فائٹو کیمیکلز اس سے قبل رومیکس ویکیریئس ایل میں پائے گئے ہیں، جیسے کیروٹینائڈز، ٹوکوفیرولز، پولیفینول، فلیوونائڈز، اور ایسکوربک ایسڈ، جو کہ اینٹی آکسیڈنٹس اور قدرتی detoxifying ایجنٹوں کا کردار رکھتے ہیں۔ اینٹی آکسیڈینٹ فائٹو کیمیکلز کی غذائی مقدار، جیسے کیروٹینائڈز،فینولکس، اورflavonoidsانسانوں میں غیر متعدی بیماریوں جیسے کینسر، قلبی عوارض، اور آکسیڈیٹیو تناؤ سے متعلق دیگر صحت کے مسائل سے حفاظت کر سکتے ہیں [5، 8]۔ نقصان دہ فری ریڈیکلز صحت کے بہت سے بڑے مسائل میں اہم کردار ادا کرنے کے لیے جانا جاتا ہے، جیسے کینسر، دل کی بیماری، رمیٹی سندشوت، موتیا بند،ایک دماغی مرض کا نام ہے، اور عمر بڑھنے سے متعلق دیگر انحطاطی بیماریاں۔ اینٹی آکسیڈنٹس فائدہ مند اجزاء ہیں جو ان آزاد ریڈیکلز کو بے اثر کردیتے ہیں اس سے پہلے کہ وہ خلیات پر حملہ کرسکیں، اور اس وجہ سے وہ سیل پروٹینز، لپڈز اور کو پہنچنے والے نقصان کو روکتے ہیں۔کاربوہائیڈریٹس. انسانی بیماریوں کے علاج کے لیے قدرتی اور مصنوعی دونوں قسم کے اینٹی آکسیڈینٹ تجویز کیے گئے ہیں۔ انسانی صحت میں اینٹی آکسیڈنٹس کے کردار میں اس طرح کی دلچسپی نے فوڈ سائنس اور دواؤں کی جڑی بوٹیوں کے شعبوں میں تحقیق کا آغاز کیا ہے، جس میں جڑی بوٹیوں کے بطور اینٹی آکسیڈینٹس کام کا اندازہ لگایا گیا ہے۔ اینٹی آکسیڈینٹ ایکشن میں آزاد ریڈیکل اسکیوینگنگ کی صلاحیت، لپڈ پیرو آکسیڈیشن کی روک تھام، دھاتی آئن چیلیٹنگ کی صلاحیت اور صلاحیت کو کم کرنا بھی شامل ہے [9,10]۔

کینسر صحت کی دیکھ بھال کے عالمی مسائل میں سے ایک ہے۔ مختلف عوامل کی وجہ سے کینسر مخالف ادویات کی ترقی اور دریافت انتہائی اہم ہے۔ ان عوامل میں وہ علاج شامل ہیں جو بڑے ضمنی اثرات کا سبب بن سکتے ہیں یا بہت مہنگے ہو سکتے ہیں۔ متبادلات جو حیاتیاتی اعتبار سے زیادہ محفوظ اور زیادہ سستی ہیں وہ اب بھی انتہائی مطلوب ہیں [11-14]۔

کئی پودوں کی انواع کو حیاتیاتی انووں کے ممکنہ ذرائع سمجھا جاتا ہے جیسے بیلاڈونا کے پتوں سے ایٹروپین، کوکا کے پتوں سے کوکین، ونکا پلانٹ سے ونکرسٹین، اور بہت سی دوسری جو جدید طب میں اب بھی اہم کردار ادا کرتی ہیں [15,16]۔

مفید علاج کے اثرات دواؤں کے پودوں میں موجود ثانوی مصنوعات کو ملانے سے حاصل ہو سکتے ہیں۔ یہ مرکبات زیادہ تر ثانوی میٹابولائٹس ہیں، جیسے الکلائڈز، سٹیرائڈز، ٹینن، فلاوونائڈز، اور فینولک، جو ان پودوں کے مخصوص حصوں میں ترکیب اور جمع ہوتے ہیں [17,18]۔ موجودہ مطالعہ R. rothschildianus کے پتوں سے نکالے گئے مختلف حصوں کی ان-وٹرو اینٹی a-amylase، anti- -glucosidase، anti-lipase، anti-proliferative اور antioxidant سرگرمیوں کی تحقیقات کرتا ہے۔

طریقے

پلانٹ مواد، کیمیکل، اور آلات

R. rothschildianus کے پتے فروری اور مارچ 2018 کے درمیان فلسطین کے مغربی علاقوں سے کاٹے گئے تھے۔ ان کی شناخت ڈاکٹر ندال جرادات نے کی تھی، ان کی شناخت ان نجاہ نیشنل یونیورسٹی کی فارماکگنوسی لیبارٹری سے، واؤچر نمونہ کوڈ Pharm-PCT کے تحت کی گئی تھی{{3} } تمام کیمیکل سگما الڈرچ سے خریدے گئے تھے۔ ایک سپیکٹرو فوٹومیٹر-UV/Visible(Jenway degree 7135, Stafford-shire, UK)، فلٹر پیپرز (وائٹ مین نمبر 1، واشنگٹن، USA)، شیکر ڈیوائس (میمرٹ 531-25-1، اسٹاک ہوم، سویڈن)، روٹاواپ اپریٹس (ہائیڈولف) -VV 2000، Schwa-bach، جرمنی)، گرائنڈر (ایرو پلس 500 ڈبلیو مکسر گرائنڈر، I01، وان چائی، چین)، الیکٹرانک بیلنس (Radwag، AS 220/c/2، Torunska، Poland)، فریز ڈرائر-BT85 (Millrock Technology, China) اور cryo-desiccator (Mill-rock Technology, BT85, Kingston, USA) استعمال کیے گئے۔

نچوڑ اور فریکشن کی تیاری

R. rothschildianus پتوں کے خشک پاؤڈر کو ان کی قطبییت کی بنیاد پر ترتیب وار سالوینٹس شامل کرکے نکالا جاتا تھا، جس کی شروعات غیر قطبی سالوینٹ ہیکسین سے ہوتی تھی، اور پھر ایسیٹون (ایک پولر اپروٹک نامیاتی سالوینٹ)، میتھانول (پولر الکوحل) اور آخر میں ڈسٹل واٹر (a) پولر پروٹک سالوینٹ)۔ ہر ایک نکالنے کے لیے، تقریباً 25 گرام زمینی خشک پتے 0.51 ہیکسین میں 72 گھنٹے کے لیے شیکر ڈیوائس میں 25 ڈگری پر 100 گردش فی منٹ پر رکھے گئے تھے۔ سب سے پہلے، ہیکسین کو 0.5L ایسیٹون سے تبدیل کیا گیا، اور پھر اس کے بعد میتھانول اور پانی کی مساوی مقداریں تبدیل کی گئیں۔ سالوینٹس میں انکیوبیشن تھے جیسا کہ ہیکسین کے لئے اوپر بیان کیا گیا ہے۔ ہر نامیاتی حصہ کو فلٹر کیا گیا تھا اور روٹری ایوپوریٹر پر ویکیوم کے نیچے مرتکز کیا گیا تھا، جبکہ پانی کے حصے کو فریز ڈرائر کا استعمال کرتے ہوئے خشک کیا گیا تھا۔ آخر میں، تمام خام حصوں کو 4 ڈگری [19,20] پر ذخیرہ کیا گیا تھا۔

مندرجہ ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے ہر ایک حصہ کی پیداوار کا حساب لگایا گیا تھا:

ابتدائی فائٹو کیمیکل تشخیص

فعال ثانوی میٹابولائٹس کی شناخت کے لیے R. rothschildianus کے پتوں کے چار حصوں میں Phytochemical اسکریننگ ٹیسٹ کیے گئے۔ قابلیت کے نتائج کا اظہار ( جمع ) موجودگی کے لیے اور (-) بائیو ایکٹیو فائٹو کیمیکلز کی غیر موجودگی کے لیے کیا گیا[10,21]۔

کل فینولک مواد کا تعین (TPC)

ٹی پی سی کا تعین کرنے کا طریقہ کار چیونگ ایٹ ال کے طریقہ کار پر مبنی تھا۔ TPC کا اظہار ملی گرام گیلک ایسڈ کے مساوی پتوں کے خشک وزن (ملی گرام GA/g خشک وزن) میں کیا گیا تھا۔ تازہ طور پر تیار کردہ 7.5 فیصد سوڈیم کاربونیٹ محلول 7.5g Na2CO3 کو والیومیٹرک فلاسک میں رکھ کر اور حجم کو 100ml پر آست پانی کے ساتھ ایڈجسٹ کر کے بنایا گیا تھا۔ ایک معیاری حوالہ حل (گیلک ایسڈ محلول) 100 ملی گرام آست پانی میں 100 ملی لیٹر کے آخری حجم میں گھل کر تیار کیا گیا تھا۔ اس سے، 100,70,50,40، اور 10ug/ml） پر گیلک ایسڈ کا محلول حاصل کرنے کے لیے ایک سیریل ڈائلیشن کی گئی۔ پتوں سے حاصل ہونے والے حصوں کے سٹاک سلوشنز کو 100mg پودوں کے عرق کو آست پانی میں تحلیل کرکے تیار کیا گیا تھا، اور اسے 100ml کے کل حجم میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ رد عمل کا مرکب 0.5 ملی لیٹر ہر کسر حل کے 2.5 ملی لیٹر 10 فیصد فولین-سیوکالٹیو کے ری ایجنٹ کے ساتھ ملا کر تیار کیا گیا تھا، جو 7.5 فیصد سوڈیم بائی کاربونیٹ کے 2.5 ملی لیٹر کے ساتھ پانی میں تحلیل ہو گیا تھا۔ سیمپل ٹیوبوں کو 45 منٹ کے لیے 45 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہر ایک کے جذب کو 765 nm کی طول موج پر سپیکٹرو فوٹومیٹر میں ماپا گیا۔ کام کرنے والے نمونے ہر تجزیاتی آزمائش کے لیے سہ رخی میں تیار کیے گئے تھے، جہاں سے اوسط اور معیاری انحراف کی قدروں کا حساب لگایا گیا تھا [21]۔

کل flavonoid مواد کا تعین (TFC)

چار R. rothschildianus پتی کے حصوں میں TFC کا اندازہ روٹن (معیاری حوالہ کمپاؤنڈ) کے انشانکن وکر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ نتائج کا اظہار پتے کے عرق کے فی گرام خشک وزن (mg RU/g خشک وزن) کے برابر روٹین کے ملی گرام کے طور پر کیا گیا۔ 1{{1{13}}}}0 ug/ml کے اسٹاک سلوشن سے تیار کردہ سیریل ڈیلیوشن کا استعمال کرتے ہوئے روٹین کے لیے ایک انشانکن وکر قائم کیا گیا تھا۔ سٹاک سلوشن بنانے کے لیے، 10 ملی گرام روٹین کو 10 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر میں تحلیل کیا گیا اور پھر اسے 100 ملی لیٹر تک پتلا کر دیا گیا۔ اس کے بعد، 10، 30، 40،50،70، اور 100 ug/ml کی ارتکاز پر روٹین فراہم کرنے کے لیے اسٹاک محلول کو پتلا کر دیا گیا۔ ورکنگ سلوشن کی تیاری کے لیے، ہر ایک فریکشن سلوشن کے 0.5 ملی لیٹر کو 3 ملی لیٹر میتھانول، 0.2 ملی لیٹر 10 فیصد AlCl3,0.2 ملی لیٹر 1M پوٹاشیم ایسیٹیٹ، اور 5 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر کے ساتھ ملایا گیا، اور پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پچھلے مراحل میں سے ہر ایک کے لئے دہرایا گیا تھا، جس کے بعد، 415 nm کی طول موج پر جاذب کی پیمائش کی گئی تھی۔ خالی کنٹرول کے لیے، نمونے کے عرق کی جگہ آست پانی کے ساتھ ایک ورکنگ سلوشن ترتیب دیا گیا تھا۔ نمونے ہر تجزیاتی آزمائش کے لیے سہ رخی میں تیار کیے گئے تھے، جہاں سے اوسط اور معیاری انحراف کی قدروں کا حساب لگایا گیا تھا [22]۔

کل ٹینن مواد کا تعین (TTC) سن ایٹ ال کا پروٹوکول۔ TTC کا تعین کرنے کے لیے چار R. rothschildianus leaf fractions میں استعمال کیا جاتا تھا، جو کہ سب سے زیادہ استعمال ہونے والا طریقہ کار ہے۔ کیٹیچن کو انشانکن وکر بنانے کے لیے ایک ریفرنس کمپاؤنڈ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ میتھانول میں ایک 100ug/ml اسٹاک تیار کیا گیا تھا، جس سے 10، 30، 50,70، اور 100 ug/ml کی کیٹیچن ارتکاز دینے کے لیے ایک ڈائلیشن سیریز تیار کی گئی تھی۔ میتھانول میں وینلن کا 4 فیصد محلول تازہ تیار کیا گیا تھا۔ 100 ug/ml پر فریکشن کے اسٹاک سلوشنز میتھانول کو بطور سالوینٹ استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے تھے۔ ورکنگ سلوشن کے لیے، ہر ایک فریکشن سلوشن کے 0.5 ملی لیٹر کو 3 ملی لیٹر وینلن سلوشن اور 1.5 ملی لیٹر مرتکز ایچ سی ایل کے ساتھ ملایا گیا۔ مرکب کو 15 منٹ تک کھڑے رہنے کی اجازت دی گئی، اور پھر 500 nm پر جاذبیت کی پیمائش کی گئی، نمونے کے عرق کی جگہ میتھانول کے ساتھ سیٹ اپ ورکنگ سلوشن کو خالی کے طور پر استعمال کیا۔ تمام کام کرنے والے نمونوں کا سہ رخی میں تجزیہ کیا گیا، جس سے اوسط اور معیاری انحراف کی قدروں کا حساب لگایا گیا۔ ہر ایک حصے میں کل ٹینن کا اظہار کیٹیچن کے مساوی (ملی گرام CAE/g پتیوں کا خشک وزن) کے لحاظ سے کیا گیا تھا[23]۔

اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا طریقہ

مفت 2,2-diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH) ریڈیکل سکیوینگنگ پرکھ کا استعمال R. rothschildianus کے پتوں کے مختلف حصوں میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی پیمائش کے لیے کیا گیا تھا۔ میتھانول میں پلانٹ کے ہر حصے کا 1000ug/ml اسٹاک حل تیار کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، Trolox کا 1000 ug/ml حل بھی تیار کیا گیا تھا (حوالہ کا معیار)۔ 2، 5، 10،20، 50، اور 100 ug/ml پر چھ سیریل ڈائلیشنز دیتے ہوئے، ہر ایک حصے کے لیے اسٹاک سلوشنز سے ایک ڈائلیشن سیریز تیار کی گئی۔ میتھانول میں 1 ملی لیٹر 0.002 جی/ملی ڈی پی پی ایچ کے ساتھ ہر ایک نچوڑ کی کمزوری کا ایک ملی لیٹر ملایا گیا تھا۔ 3 ملی لیٹر کا حتمی ورکنگ حجم دینے کے لیے ایک ملی لیٹر میتھانول شامل کیا گیا۔ DPPH محلول تازہ طور پر تیار کیا گیا تھا، کیونکہ یہ روشنی کے لیے بہت حساس تھا۔ سیریز کے ارتکاز کا خالی کنٹرول DPPH میتھانول میں 1:2 کے تناسب میں تھا، بغیر کسی نچوڑ کے۔ تمام کام کرنے والے حل کمرے کے درجہ حرارت (25 ڈگری) پر اندھیرے میں تقریباً 30 منٹ تک لگائے گئے تھے۔ اس کے بعد آپٹیکل کثافت کو 517 nm کی طول موج پر سپیکٹرو فوٹومیٹر سے ماپا گیا۔ مندرجہ ذیل مساوات کا استعمال ہر پودے کے حصے کے لیے فیصد ڈی پی پی ایچ کی روک تھام کے لیے کیا گیا تھا، جس میں ٹرالوکس معیاری مرکب کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

جہاں، Ag خالی محلول کا ریکارڈ شدہ جذب ہے، اور Ats ٹیسٹ شدہ نمونے کے حل کا ریکارڈ شدہ جذب ہے [21]۔

پورسائن لبلبے کی لپیس روکنا پرکھ

500 ug/ml کے اسٹاک سلوشنز 10 فیصد DMSO میں ہر پودے کے حصے سے بنائے گئے تھے۔ ان سے، 50,100,200، 300، اور 400 ug/ml کی پانچ ارتکاز کی ایک کمزور سیریز بنائی گئی۔ Tris-HCl بفر میں پورسائن لبلبے کی لپیس کا 1 mg/ml سٹاک حل استعمال سے ٹھیک پہلے تازہ تیار کیا گیا تھا۔ سبسٹریٹ، p-nitrophenyl butyrate (PNPB) 2ml acetonitrile میں 20.9mg کو تحلیل کرکے تیار کیا گیا تھا۔ ہر کام کرنے والے حل کے لیے، 0.1 ملی لیٹر پورسین لبلبے کی لپیس کو 0.2 ملی لیٹر پلانٹ فریکشن کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ Tris-HCl کو کام کرنے والے حل کے حتمی حجم کو 1ml بنانے کے لیے شامل کیا گیا تھا، اور انہیں 15 منٹ کے لیے 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے بعد، ہر ٹیسٹ ٹیوب میں 0.1 ملی لیٹر p-nitrophenyl butyrate محلول شامل کیا گیا۔ اس کے بعد مرکب کو مزید 30 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ لبلبے کی لپیس سرگرمی کا تعین PNPB کے ہائیڈولیسس کو P-nitrophenolate میں 410 nm پر، UV سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ اسی طریقہ کار کو orlistat کو معیاری حوالہ مرکب کے طور پر استعمال کرتے ہوئے دہرایا گیا تھا۔ پودوں کے حصوں کے ذریعہ لیپیس کی روک تھام کا فیصد درج ذیل مساوات کے ساتھ شمار کیا گیا تھا۔

جہاں، Ap خالی محلول کا ریکارڈ شدہ جذب ہے، اور Ats ٹیسٹ شدہ نمونے کے حل کا ریکارڈ شدہ جذب ہے [24]۔ a-Amylase روکنے والا پرکھ

A100 ملی گرام ہر ایک حصہ کو 10 فیصد DMSO کے چند ملی میٹر میں تحلیل کیا گیا، اور پھر مزید 0.02 M Na HPOq/ میں 100ml تک تحلیل کیا گیا۔ NaH-PO4,0.006M NaCl, pH 6.9 آخر کار 1000 ug/ml کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک سلوشن دینے کے لیے۔ ان میں سے، 10 فیصد DMSO کا استعمال کرتے ہوئے، 10,50,70,100، اور 500 ug/ml کے درج ذیل ڈائیوشن تیار کیے گئے۔ 0.2 ملی لیٹر والیوم 2 یونٹس/ ملی لیٹر پورسین لبلبے کی امائلیز کو 0.2 ملی لیٹر کے ساتھ ملایا گیا تھا۔

پودے کا حصہ اور اسے 30 ڈگری پر 10منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، پانی میں تازہ تیار کردہ 1 فیصد نشاستے کے محلول کا 0.2 ملی لیٹر ملایا گیا، اور پھر ٹیوبوں کو کم از کم مزید تین منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس مقام پر، رد عمل کو 0.2ml 3،5-dinitro salicylic acid (DNSA) کلر ری ایجنٹ کے اضافے سے روک دیا گیا تھا اور اسے 5ml آست پانی سے پتلا کر دیا گیا تھا، اس سے پہلے کہ پانی میں 90 ڈگری پر 10 منٹ تک گرم کیا جائے۔ غسل اس کے بعد مرکب کو کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کیا گیا، اور جذب کو 540 nm پر ناپا گیا۔ خالی کنٹرول اوپر بیان کی گئی اسی مقدار کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا، لیکن پلانٹ کے حصے کو 0.2 ملی لیٹر بفر سے تبدیل کیا گیا تھا۔ Acarbose اوپر بیان کردہ طریقہ کار کے بعد ایک معیاری حوالہ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ a-amylase روکنے والی سرگرمی کا حساب درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

جہاں، Ag: خالی نمونے کی جاذبیت ہے، اور Ar ٹیسٹ کے نمونے کی جاذبیت ہے [25]۔

یہ مضمون جرادات وغیرہ سے ماخوذ ہے۔ BMC تکمیلی دوا اور علاج (2021) 21:107