خوف سے پہلے کی تعلیم نئی خوف کی یادوں کو براہ راست کارٹیکل نیٹ ورکس میں تیزی سے جذب کرنے کے قابل بناتی ہے حصہ 3

تجرباتی نمونہ

ڈیٹا کی تولیدی صلاحیت کا اندازہ مختلف نقلوں (S1 ٹیبل) سے کیا گیا۔ Te2 (تصویر 1A–1C) میں پہلے CNQX کے غیر فعال ہونے کے تجربات نقل کی زیادہ تعداد میں کیے گئے تھے کیونکہ یہ وہ پہلے تجربات تھے جو ہم نے کیے تھے اور اپنے مطالعے کے بڑے مفروضے کو جانچنے کے لیے پیش کیے تھے۔ جانوروں کو وزن کے متوازن انداز میں مختلف طرز عمل گروپوں کو تفویض کردہ ترجیحات تھیں۔ ایک ہی بچے کے نر جانور تصادفی طور پر ہر تجرباتی گروپ کو تفویض کیے گئے تھے۔ ہم نے سب سے پہلے اپنے مطالعے کے مرکزی مفروضے پر توجہ دی، یعنی کارٹیکل غیر فعال ہونا تجرباتی طور پر بے ہودہ چوہوں اور جانوروں میں خوف کی نئی یادداشت کے استحکام کو مختلف طریقے سے متاثر کر سکتا ہے جنہوں نے پہلے سے خوف کا واقعہ سیکھا تھا۔

نر جانوروں کی یادیں بہت مضبوط ہوتی ہیں کیونکہ ان میں زندہ رہنے کی مضبوط جبلت اور دوبارہ پیدا کرنے کی خواہش ہوتی ہے۔ جنگل میں زندہ رہنے والے جانوروں کو بہت ساری جغرافیائی معلومات، خوراک کی اقسام، شکاری ٹریکس اور گروپ کے اراکین کے مقامات کو یاد رکھنے کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ وہ ماحول سے بہتر طور پر موافقت حاصل کر سکیں اور زندگی کی حفاظت کریں۔

مثال کے طور پر، نر شیروں کو علاقے اور ان کی حیثیت کی حفاظت کے لیے پورے علاقے کی حیثیت، رکنیت کے تعلقات، اور حریفوں کے مقامات کو یاد رکھنے کی ضرورت ہے۔ نر زیبرا کو زندہ رہنے اور دوبارہ پیدا کرنے کے لیے گھاس کے میدان پر پانی کے ذرائع اور خوراک کے مقام کو یاد رکھنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایک سوڈا کمپنی نے ایک بار ایک اشتہار چلایا جس میں دکھایا گیا تھا کہ ایک نر قطبی ریچھ ایک غوطہ خور اور اس کی انوکھی خوشبو کو یاد رکھ سکتا ہے تاکہ اگلی بار جب وہ اسے دیکھے تو وہ اسے پہچان سکے۔

لہذا، نر جانوروں کو اپنے علاقے کی حفاظت، کافی خوراک فراہم کرنے، اور اولاد پیدا کرنے کے حوالے سے مضبوط یادیں رکھنے کی ضرورت ہے۔ یہ انہیں انسانی تحقیق میں بھی اہم مضامین بناتا ہے، مثال کے طور پر، یادداشت کی خرابی اور الزائمر کی بیماری جیسی بیماریوں کا پتہ لگانا۔

انسانی دنیا میں، ہم نر جانوروں کی یاد سے بھی تحریک لے سکتے ہیں۔ نئی چیزوں سے مسلسل نمائش، مسلسل سیکھنے، اور سوچنا ہماری یادداشت اور موافقت کو بڑھا سکتا ہے، اور ہمارے معیار زندگی اور کام کی کارکردگی کو بہتر بنا سکتا ہے۔ لہٰذا، آئیے ہم نر جانوروں سے سیکھیں، علم اور تجربے کو جمع کرتے رہیں، زندہ رہنے کی مضبوط جبلت اور تولیدی خواہشات رکھیں، اور ایک بہتر مستقبل بنائیں۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche deserticola نمایاں طور پر یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے کیونکہ Cistanche deserticola ایک روایتی چینی ادویاتی مواد ہے جس میں بہت سے منفرد اثرات ہیں، جن میں سے ایک یادداشت کو بہتر بنانا ہے۔ کیما بنایا ہوا گوشت کی افادیت اس میں شامل مختلف فعال اجزاء سے آتی ہے، بشمول ایسڈ، پولی سیکرائڈز، فلیوونائڈز وغیرہ۔ یہ اجزاء مختلف طریقوں سے دماغی صحت کو فروغ دے سکتے ہیں۔

دماغی افعال کو بہتر بنانے کے طریقے جاننے پر کلک کریں۔

ان گروپوں کے درمیان شماریاتی اختلافات کی صورت میں، ہم نے آخر کار نمکین کے انجیکشن کے ذریعے اضافی کنٹرول گروپس کی کارکردگی کا مظاہرہ کیا۔ اسی طرح کا نقطہ نظر آپٹوجینیٹک تجربات پر بھی لاگو کیا گیا تھا، جہاں AAV-کنٹرول گروپ صرف اس وقت انجام دیا گیا تھا جب بولی اور پہلے سے تربیت یافتہ چوہوں کے درمیان شماریاتی اختلافات کا پتہ چلا تھا۔ ان تجرباتی نظام الاوقات نے ہمیں غیر ضروری کنٹرول گروپس اور غیر ضروری جانوروں کے استعمال سے بچنے کی اجازت دی، جو جانوروں کے تجربات سے متعلق یورپی اور اطالوی قانون سازی میں ایک اہم مسئلہ ہے (3 روپے کا اصول)۔

سلوک کے طریقہ کار

تمام تجربات دن کے ہلکے مرحلے (8 AM سے 4 PM) کے دوران کیے گئے تھے۔ تجرباتی مطالبات کے مطابق جانوروں کو سہولت سے تجرباتی کمروں تک مختلف چھوٹی شفاف بالٹیوں کے اندر لے جایا جاتا تھا۔

سمعی تربیت: پہلا طرز عمل سیشن۔ سمعی خوف کی حالت والے جانور (CS1-CS2)۔ اس گروپ میں چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے سے نرمی سے لے جایا گیا اور ہاؤسنگ روم سے ساؤنڈ پروف کمرے میں لے جایا گیا۔ ایک بار وہاں جانے کے بعد، جانوروں کو کنڈیشنگ اپریٹس کے اندر رکھا گیا تھا جس میں ایک مستطیل سیاہ پنجرے (35 × 40 سینٹی میٹر) پر مشتمل ایک سٹینلیس سٹیل کی سلاخوں کے گرڈ (1 سینٹی میٹر قطر، 1.5 سینٹی میٹر کے فاصلے پر) شاک ڈیلیوری سیٹ اپ سے منسلک تھا۔

چوہوں کو 1 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا۔ اس وقت کے بعد، 7 مشروط محرکات (CSs) جن میں 15 kHz فریکوئنسی کا خالص ٹون ہوتا ہے (ہر ایک کا دورانیہ 15 s، 80 dB، 36 s ٹرائل وقفہ)۔ ہر ٹون کے آخری 1 s کو دردناک US (0.5 mA، 1 s) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ کنڈیشنگ سیشن کے اختتام پر، چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس لایا گیا۔

صرف جھٹکا دینے والے جانور (Shock-CS2)۔ اس گروپ میں، چوہوں کو اسی طرح ایک ہی کنڈیشنگ اپریٹس کے اندر رکھا گیا تھا۔ اس کے فوراً بعد، ہر چوہے کو ایک کے بعد ایک فوراً 7-پاؤں کے جھٹکے (1 s, 0.5 mA) لگے۔ محرک کے اختتام پر، جانوروں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس لایا گیا۔ کنڈیشنگ کیج میں وقت کی مستقلیت 9 سیکنڈ سے کم تھی۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ طریقہ کار تکلیف دہ محرکات اور حسی محرکات [29,30] کے مابین ایسوسی ایٹیو عمل سے بچنے کی اجازت دیتا ہے۔

گند سے خوف زدہ جانور (odor-CS2)۔ اس گروپ میں، چوہوں کو اسی مستطیل سیاہ پنجرے کے اندر رکھا گیا تھا جو مندرجہ بالا تجرباتی گروپوں میں لگائے گئے تھے اور جھٹکے کی ترسیل کے سیٹ اپ سے منسلک تھے۔ چوہوں کو 2 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا۔ اس وقت کے بعد، ونیلا کی بدبو پر مشتمل 7 CSs کا انتظام کیا گیا (ہر ایک کا 10 دورانیہ، 24 s ٹرائل وقفہ)۔ ہر بدبو کے آخری 1 سیکنڈ کو دردناک US (0.5 mA، 1 s) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ کنڈیشنگ ماڈیول کو وینٹیلیشن کے ذریعہ کے قریب رکھا گیا تھا تاکہ ان کے آفسیٹ کے بعد ڈیلیور شدہ محرکات کی استقامت سے بچا جا سکے۔ پنجرے کو اوپری گرڈ کے ساتھ یقینی بنایا گیا تھا۔ بہاؤ کو کم کرنے والے اولفیکٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے بدبو پیش کی گئی۔ صاف ہوا (1.5 L/min) کو ایک سولینائڈ والو کی طرف ہدایت کی گئی تھی، جسے چلانے کے بعد، ہوا کو 15 ملی لیٹر کی بوتل میں منتقل کیا گیا جس میں 10 ملی لیٹر وینیلا کی بو تھی۔

صرف ٹون والے جانور (Tone-CS2)۔ اس گروپ میں چوہوں کو اسی کالے پنجرے کے اندر رکھا گیا تھا اور انہیں 15-kHz ٹون (7 محرکات، 15 s دورانیہ، 36 s ITI) کے ساتھ پیش کیا گیا تھا جو امریکہ کی غیر موجودگی میں فراہم کیا گیا تھا۔

پہلے سے بے نقاب جانور (Tone-CS1-CS2)۔ چوہوں کو کنڈیشنگ کیج کے اندر رکھا گیا اور، 1 منٹ بعد، انہیں 20 بار اکیلے 15-kHz ٹون کے ساتھ پیش کیا گیا، اور 24 گھنٹے بعد اسی ٹون کو US کے CS1 کے ساتھ جوڑا گیا۔

سفید شور سے ڈرنے والے جانور (WN-CS2)۔ اس گروپ میں، چوہوں کو مستطیل سیاہ پنجرے کے اندر رکھا گیا اور 1 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا۔ اس وقت کے بعد، WN پر مشتمل 7 CSs (ہر ​​ایک میں 15 s مدت، 75 dB، 36 s انٹر ٹرائل وقفہ) کا انتظام کیا گیا۔ ہر ٹون کے آخری 1 s کو دردناک US (0.5 mA, 1 s) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ کنڈیشنگ سیشن کے اختتام پر، چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس لایا گیا۔

سمعی خوف کی تعلیم: دوسری طرز عمل کی تربیت۔ مندرجہ بالا پیراگراف میں بیان کردہ طریقہ کار کے دو ہفتے بعد، جانوروں کو ایک اور مختلف سمعی ڈر کنڈیشنگ کے کام میں تربیت دی گئی۔ چوہوں کو ایک معیاری سکنر باکس میں رکھا گیا تھا، جیسا کہ ہمارے پچھلے کام [10] میں تھا، اور 2 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا تھا۔ اس وقت کے بعد، 3 kHz فریکوئنسی کے خالص ٹونز پر مشتمل 7 CSs (ہر ​​ایک کی مدت کے 8 s، 80 dB، 22 s انٹر ٹرائل وقفہ) فراہم کیے گئے۔ ہر ٹون کے آخری 1 s کو دردناک US (0.5 mA، 1 s) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ کنڈیشنگ سیشن کے اختتام پر، چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس لایا گیا۔

یادداشت برقرار رکھنے سے ڈریں۔ CS2 (3 kHz) کو حال ہی میں حاصل کی گئی سمعی خوف کی یادداشت کی برقراری کا تجربہ 4 دن بعد کیا گیا۔ آپٹوجینیٹکس کے تجربات کے لیے، حالیہ میموری کا ٹیسٹ لیزر ڈیلیوری کے ساتھ 24 گھنٹے بعد CS2-امریکی سیکھنے کے وقت کے وقفے کے مطابق کیا گیا جس پر ہم نے CNQX کی انتظامیہ کے ذریعے کارٹیکل غیر فعال ہونے کا مظاہرہ کیا (یعنی، 24 گھنٹے بعد تربیت). چوہوں کو کنڈیشنگ کے لیے استعمال کیے جانے والے آلات سے مختلف اور ایک مختلف کمرے میں رکھا گیا تھا تاکہ متعلقہ اشارے [10,62] سے مشروط خوف کے رویے سے بچ سکیں۔

نیا اپریٹس ایک شفاف پلاسٹک کے پنجرے پر مشتمل تھا جس میں ایک سیاہ پینٹ کی طرف ایک آواز کو کم کرنے والے باکس کے اندر بند کیا گیا تھا جس میں ایک ایگزاسٹ پنکھے سے لیس تھا، جو دیوار سے بدبودار ہوا کو ختم کرتا تھا اور 60 ڈی بی کا پس منظر کا شور فراہم کرتا تھا۔ رہائش کے سیشن کے دوران جانوروں کو ایک دن میں 5 منٹ کے لئے پنجرے کو تلاش کرنے کی اجازت تھی۔ خوف کی یادداشت برقرار رکھنے کے ٹیسٹ کے دن، 2 منٹ کی مفت تلاش کے بعد، ہم نے 3 kHz (8 s—22 ITI) میں سے 4 CS2 ڈیلیور کیے جس کے بعد کوئی US نہیں ہے۔

اگر تجرباتی مطالبہ کی ضرورت ہو تو، چوہوں کو پھر ریموٹ ڈر میموری کو برقرار رکھنے کے لیے ٹیسٹ کیا گیا، جو دوسرے آڈیٹری ڈر کنڈیشنگ ٹرائل سے 2 ہفتے پہلے حاصل کیا گیا تھا۔ اس مقصد کے لیے، خوف کی یادداشت برقرار رکھنے کے ٹیسٹ کے 7 دن بعد 3-kHz ٹون، جانوروں کو ایک نئے ماحول میں رکھا گیا (ایک سیاہ اور سفید دھاری والا پنجرا) اور پھر 15-kHz ٹون کے ساتھ پیش کیا گیا۔ 36s کے وقفوں پر چار ٹونز پیش کیے گئے۔

سیاق و سباق کی تربیت: پہلا طرز عمل سیشن۔ متعلقہ خوف کنڈیشنگ گروپ (CtxA-CtxB)۔ اس گروپ میں، چوہوں کو ان کے گھر کے پنجرے سے نرمی سے لے جایا گیا، بالٹی میں رکھا گیا، اور ہاؤسنگ روم سے ساؤنڈ پروف کمرے میں لے جایا گیا۔ ایک بار وہاں پہنچنے کے بعد، جانوروں کو کنڈیشنگ اپریٹس کے اندر رکھا گیا تھا جس میں مذکورہ بالا مستطیل سیاہ پنجرے پر مشتمل تھا، جو ایک شاک ڈیلیوری سیٹ اپ سے منسلک سٹینلیس سٹیل کی سلاخوں کے گرڈ سے لیس تھا۔ چوہوں کو 1 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا۔ اس وقت کے بعد، 5 US (0.5 mA, 1 s) کا انتظام 51 s وقت کے وقفوں کے ساتھ کیا گیا۔ سیشن کے اختتام پر جانوروں کو ان کے گھر کے پنجرے میں واپس لایا گیا۔

صرف شاک گروپ (شاک-CtxB)۔ چوہوں کو، ایک بار کنڈیشنگ اپریٹس کے اندر رکھ دیا گیا، فوراً ایک کے بعد ایک کے فوراً بعد 5-پاؤں کے جھٹکے (1 s, 0.5 mA) لگے۔ کنڈیشنگ کیج میں وقت کی مستقلیت 7 سیکنڈ سے کم تھی۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ طریقہ کار تکلیف دہ محرکات اور حسی محرکات [29,30] کے مابین ایسوسی ایٹیو عمل سے بچنے کی اجازت دیتا ہے۔

صرف شاک گروپ (شاک-CtxB)۔ چوہوں کو، ایک بار کنڈیشنگ اپریٹس کے اندر رکھ دیا گیا، فوراً ایک کے بعد ایک کے فوراً بعد 5-پاؤں کے جھٹکے (1 s, 0.5 mA) لگے۔ کنڈیشنگ کیج میں وقت کی مستقلیت 7 سیکنڈ سے کم تھی۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ طریقہ کار تکلیف دہ محرکات اور حسی محرکات [29,30] کے مابین ایسوسی ایٹیو عمل سے بچنے کی اجازت دیتا ہے۔

نئی متعلقہ خوف کنڈیشنگ اور حالیہ خوف میموری برقرار رکھنے. مندرجہ بالا پیراگراف میں بیان کردہ طریقہ کار کے دو ہفتے بعد، تمام گروپوں کو ایک نئے سیاق و سباق کے ماحول (اسکنر باکس ماڈیول، ایک مختلف کمرے میں رکھا گیا) کو ایک تکلیف دہ US (0.5 mA، 1 s) کے ساتھ منسلک کرنے کی تربیت دی گئی۔ . ہر جانور کو نئے چیمبر کے اندر رکھا گیا تھا اور 2 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا گیا تھا۔ پھر، یہ 30 سیکنڈ کے وقفوں سے الگ ہونے والے 5 US کے سامنے آیا۔

ڈر کنڈیشنگ کے طریقہ کار کے 4 دن بعد سکینر باکس چیمبر میں چوہوں کو دوبارہ 3 منٹ تک رکھ کر متعلقہ خوف کی یادداشت کو برقرار رکھنے کا تجربہ کیا گیا۔ آپٹوجینیٹکس کے تجربات کے لیے، حالیہ میموری کا ٹیسٹ لیزر ڈیلیوری کے ساتھ 24 گھنٹے بعد CtxB-US سیکھنے کے وقت کے وقفہ سے مشابہت کے ساتھ کیا گیا جس پر ہم نے CNQX کی انتظامیہ کے ذریعے کارٹیکل غیر فعال ہونے کا مظاہرہ کیا (یعنی تربیت کے بعد 24 گھنٹے)۔ اگر تجرباتی مطالبہ کی ضرورت ہو تو، چوہوں کو پھر نئے ایسوسی ایشن سے 2 ہفتے پہلے امریکہ کے سیاق و سباق میں جانوروں کو ڈال کر ریموٹ ڈر میموری کو برقرار رکھنے کے لیے ٹیسٹ کیا گیا۔

مختلف سیاق و سباق کے طریقہ کار کے مطابق جانوروں کو 2 مختلف بالٹیوں میں کنڈیشنگ چیمبر میں لے جایا گیا۔

منجمد کرنے کی پیمائش۔ تمام تجرباتی طریقہ کار میں، خوف کی یادداشت کو برقرار رکھنے کا اندازہ ایک منجمد ردعمل کے طور پر طے کیا گیا تھا [10]، جس کا تجزیہ سانس کی نقل و حرکت کے علاوہ صوماتی نقل و حرکت کی مکمل عدم موجودگی کے طور پر کیا گیا تھا۔ ہر جانور کے لیے، منجمد ہونے میں گزارے گئے وقت کی مقدار (سیکنڈوں میں) کو 2 آزاد مبصرین کے ذریعے آف لائن ماپا گیا جو جانوروں کے گروہوں سے نابینا تھے۔

جراحی کے طریقہ کار

ٹارگٹ سائٹس میں منتخب مادوں کا انتظام کرنے کے لیے، چوہوں کو isoflurane کے ساتھ اینستھیٹائز کیا گیا: انڈکشن 2 L/min طبی ہوا میں 4% [vol/vol] پر انجام دیا گیا اور 2% [vol/vol] پر مسلسل نمائش تک بڑھایا گیا۔ جب چوہوں کو سٹیریوٹیکسک اپریٹس میں نصب کیا گیا تھا۔

کھوپڑی کا ایک چیرا بنایا گیا تھا، اور گڑ کے چھوٹے سوراخ کیے گئے تھے تاکہ ایک 28- گیج انفیوژن سوئی کے اندر داخل ہو سکے۔ ایک انفیوژن پمپ پر نصب ایک 10-ال ہیملٹن سرنج مادہ پہنچانے کے لیے استعمال کی جاتی تھی۔ انفیوژن کے بعد، سوئی کو اضافی 3 منٹ کے لیے جگہ پر چھوڑ دیا گیا۔ اس کے بعد چیرا کو سٹینلیس سٹیل کے زخم کے کلپس کے ساتھ بند کر دیا گیا، اور جانور کو ینالجیسک/اینٹی انفلیمیٹری کیٹوپروفین (2 ملی گرام/کلوگرام جسمانی وزن) کا ایک ذیلی انجکشن دیا گیا، اور جانور کو اینستھیزیا سے صحت یاب ہونے تک گرم اور نگرانی میں رکھا گیا۔

جیسا کہ پچھلے مطالعات میں [10,32–34]، جانوروں کی کینولیشن غیر ضروری تھی، فعال مرکبات کو براہ راست دقیانوسی طور پر زیر انتظام کیا جاتا تھا۔ یہ طریقہ کار فائدہ مند ہے کیونکہ مستقل کینولٹنگ کے طریقہ کار میں شامل جراحی کے صدمے سے گریز کیا جاتا ہے، اس طرح صدمے کو ایک ہی سوئی کے دخول تک محدود کر دیا جاتا ہے [10,32–34]۔ درحقیقت، جنرل اینستھیزیا یادداشت کے استحکام کو نمایاں طور پر متاثر نہیں کرتا ہے [10,32–34]۔ اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ سیکھنے کی آزمائش سے متعلق مرکبات کی انتظامیہ کا وقت درست تھا تاکہ چوہوں کو 1 گھنٹہ کے قریب اور تربیت کے تقریباً 1 دن بعد منتخب مرکبات حاصل کیے جائیں، منصوبہ بند انجیکشن کے وقت سے 5 منٹ پہلے isoflurane اینستھیزیا لگائی گئی، مثال کے طور پر، 55 بجے چوہوں میں منٹ کا علاج تربیت کے بعد 60 منٹ اور جانوروں میں 23 گھنٹے اور 55 منٹ تربیت کے بعد 24 گھنٹے میں انجکشن لگایا گیا۔ ہر چوہے کو کنڈیشنڈ کیا گیا اور پھر الگ الگ آپریشن کیا گیا۔ مختلف طرز عمل گروپوں سے تعلق رکھنے والے جانوروں کو ایک دوسرے سے جڑے ہوئے طریقے سے جوڑ دیا گیا۔

AMPA/kainate گلوٹامیٹ ریسیپٹرز CNQX ({{0}Cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione) (Tocris, 10 ng کا انتخابی روکنا /ul) [20,21] کو جراثیم سے پاک نمکین محلول (NaCl, 0.9%) میں تحلیل کیا گیا اور HCl کے ساتھ pH 7.4 میں ایڈجسٹ کیا گیا۔ پروٹین کی ترکیب کو روکنے والا انیسومائسن (Merck, 125 ug/ul) کو مساوی HCl میں تحلیل کیا گیا تھا، اسے جراثیم سے پاک نمکین سے پتلا کیا گیا تھا، اور NaOH کے ساتھ pH 7.4 میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ جراثیم سے پاک نمکین (0.9% NaCl) کو گاڑی کے کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ان مادوں کو دو طرفہ طور پر 0.1 ul/min کی شرح سے اور 0.5 ul فی سائٹ کے حجم پر Paxinos اور Watson atlas [26] سے لیے گئے درج ذیل سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹس پر لگایا گیا تھا، جس میں Te2 cortical فیلڈ کو Zilles atlas [25] کے حوالے کیا گیا تھا:

سیکنڈری آڈیٹری کورٹیکس (Te2): 1) AP: −5,8 L: ±7,2 DV: −6۔ 2) AP: -6,8 L: ±7,2 DV: −6۔

Anterior cingulate cortex (ACC): 1) AP: +2,5 L: ±0,6 DV: −2,2. 2) AP: +3,7 L: ±0,6 DV: −2,2.

انجیکشن کا حجم (0.5 ul فی سائٹ) پچھلے مطالعات کی بنیاد پر منتخب کیا گیا تھا جہاں بالغ چوہوں میں Te2 [10,34] اور ACC [55,63] میں فعال مرکبات لگائے گئے تھے۔

ڈورسل ہپپوکیمپس کو غیر فعال کرنے کے لیے، درج ذیل سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹس پر فی سائٹ 0.6 ul کے حجم میں فعال مرکبات لگائے گئے تھے۔

ڈورسل ہپپوکیمپس: 1) اے پی: −2,8 L: ±1,6 DV: −3,3۔ 2) AP: −4,2 L: ±2,6 DV: −3۔

ڈورسل ہپپوکیمپل کے ناقابل واپسی گھاووں کو NMDA (Tocris, 18 ug/ul، جراثیم سے پاک نمکین محلول میں تحلیل کیا گیا، 0,4 ul فی سائٹ) کی شرح سے 0.1 ul/ کا انتظام کرنے سے ہوا مذکورہ بالا نقاط پر پوائنٹس پر منٹ۔ وہی کوآرڈینیٹ نمکین انجیکشن والے کنٹرول اور شیم سے چلنے والے جانوروں کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔

سرخ ریٹروبیڈس (Lumafluor, 1:2 dilution in saline, 0.6 ul) مندرجہ ذیل نقاط کے مطابق BLA میں لگائے گئے تھے: AP: −2.8; L: ±5.4; DV: −8.3۔

تجربات کے اختتام پر، CNQX، anisomycin، یا نمکین انجیکشن کے معاملے میں سوئی کی پٹریوں یا NMDA انجیکشن کے معاملے میں گھاووں کی توسیع کی ہسٹولوجیکل طور پر تصدیق کی گئی۔ چوہوں کو گہرائی سے بے ہوشی کی گئی اور 4٪ فارملڈہائڈ کے ساتھ انٹرا کارڈی طور پر پرفیوز کیا گیا۔ ان کے دماغوں کو کریوسٹیٹ پر 30 μm پر سیکشن کیا گیا تھا۔ نسل سے داغے ہوئے سیریل سیکشنز کو روایتی طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا اور سیکشنز کو 2.5× پر بڑھا ہوا مائکروسکوپ کے تحت ہسٹولوجیکل طور پر تصدیق کیا گیا تھا۔

اوپٹوجنیٹک تجربات

وائرس کا انجیکشن۔ اڈینو سے وابستہ وائرس AAV5:CaMKII ::eNpHR3۔{3}}چیری اور کنٹرول ویکٹر AAV5:CaMKII -cherry یونیورسٹی آف نارتھ کیرولینا ویکٹر کور (چیپل ہل، شمالی کیرولائنا، ریاستہائے متحدہ امریکہ) سے حاصل کیے گئے تھے۔ TheentenceViraltiterwas5:8 دونوں وائرس کے لیے وائرل ٹائٹر 5.8 × 10^12 vg/ml تھا۔ CaMKII پروموٹر کا استعمال پرامڈل نیوران کے حق میں ٹرانسجن اظہار کو قابل بناتا ہے۔ وائرس کو −80˚C فریزر میں رکھا گیا تھا۔ Te2 یا ACC کو نشانہ بنانے والے وائرل انفیوژن ہر سوراخ کے لیے 0.5 ul کے حجم پر مذکورہ سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹس پر کیے گئے تھے۔ وائرس کو 0.1 ul/min کی شرح سے انجکشن لگایا گیا تھا، اور سوئی کو اضافی 5 منٹ کے لیے جگہ پر چھوڑ دیا گیا تھا۔ وائرل انجیکشن optogenetics تجربات سے 4 ہفتے پہلے لگائے گئے تھے۔

روشنی

آپٹک فائبرز (Plexon, 200/230 μm core; 10 mm length) BLA (AP=−2.8, L=± 5.4, V=−8.2 mm) میں دو طرفہ طور پر لگائے گئے تھے۔ بریگما سے)۔ BLA کے لیے Te2 تخمینوں کی Optogenetic inhibition یا BLA کے لیے ACC تخمینوں کی PlexBright Optogenetic Stimulation System کو ایک لیزر ڈایڈڈ (Laserglow Technologies) کے ساتھ استعمال کرکے حاصل کیا گیا تھا۔ پیلی روشنی (589 nm) آپٹیکل فائبر سے پیدا ہوتی ہے اور گزرتی ہے۔ پروجیکشن سائٹس کی روشنی کے لیے آپٹک فائبر کی نوک پر بجلی کی کثافت کا تخمینہ 10 سے 15 میگاواٹ تھا۔ خوف کی یادداشت برقرار رکھنے کے دوران، روشنی کا اخراج ٹون شروع ہونے سے 4 سیکنڈ پہلے شروع کیا گیا تھا، پورے ٹون میں برقرار رہا، اور ٹون آفسیٹ کے 4 سیکنڈ بعد روک دیا گیا۔ سیاق و سباق سے متعلق خوف کنڈیشنگ گروپوں سے تعلق رکھنے والے جانوروں نے پورے سیاق و سباق کی تلاش کے دوران ہلکی محرک حاصل کی (3 منٹ)۔ میموری برقرار رکھنے کے مقدمے کی سماعت سے پہلے چوہوں کو 2 دن تک پیچ کی ہڈی سے واقف کیا گیا تھا۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری۔ آپٹوجنیٹکس کے تجربات کی تکمیل پر، چوہوں کو گہرائی سے بے ہوشی کی گئی اور وائرس کے پھیلاؤ کی جانچ کرنے کے لیے 4% PAF کے ساتھ انٹرا کارڈی طور پر پرفیوز کیا گیا۔ دماغوں کو الگ کیا گیا، راتوں رات 4˚C پر ذخیرہ کیا گیا، اور آخر کار 30% سوکروز میں منتقل کر دیا گیا۔ کورونل حصوں (30 μm) کو کریوسٹیٹ پر کاٹا گیا تھا اور پی بی ایس میں جمع کیا گیا تھا۔ فری فلوٹنگ سیکشنز کو RT پر 1 گھنٹہ کے لیے بلاکنگ سلوشن میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، وہ RT پر راتوں رات بلاکنگ سلوشن میں پرائمری مونوکلونل ماؤس اینٹی باڈی اینٹی mCherry (1:500 dilution، Abcam) میں لگائے گئے۔ اس کے بعد، حصوں کو پی بی ایس سے دھویا گیا اور پی بی ایس میں گھٹا ہوا ایک سیکنڈری فلوروسینٹ AlexaFluor-568 اینٹی ماؤس اینٹی باڈی (1:600، Invitrogen) کے ساتھ RT میں 1 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔ پی بی ایس میں حصوں کو دھویا گیا، DAPI (ویکٹر) پر مشتمل ماونٹنگ میڈیا کے ساتھ نصب کیا گیا، اور کور سلپ ہو گیا۔

NMDA انجیکشن لگانے والے چوہوں کے دماغ بھی اسی طرح جمع کیے گئے تھے۔ فری فلوٹنگ سیکشنز، کئی کلیوں کے بعد، کمرے کے درجہ حرارت پر راتوں رات بلاک کرنے والے محلول میں پرائمری مونوکلونل ماؤس اینٹی نیون (1:1،000 ڈائلیشن، مرک) اینٹی باڈی کے ساتھ لگائے گئے تھے۔ اس کے بعد، حصوں کو پی بی ایس سے دھویا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر بایوٹینیلیٹڈ ہارس اینٹی ماؤس اینٹی باڈی (1:200 کم کرنے، ویکٹر) کے ساتھ 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نیون کو داغدار کرنے کے لیے ایوڈن بایوٹین کمپلیکس (اے بی سی کمپلیکس 1:100، ویکٹر، 2 گھنٹے اور انکیوبیشن کا نصف) کو ڈائمینوبینزائڈائن (0.03%، مرک) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ اس کے بعد حصوں کو پی بی ایس میں دھویا گیا اور جلیٹن لیپت سلائیڈوں میں منتقل کیا گیا، پانی کی کمی ہوئی، اور کور سلپ سے ڈھانپ دیا گیا۔

ریٹرو موتیوں کے انجیکشن والے چوہوں کے Te2 حصے RT پر راتوں رات بلاک کرنے والے محلول میں بنیادی پولی کلونل خرگوش اینٹی فوس اینٹی باڈی (1:2،000، سیل سگنلنگ) کے ساتھ انکیوبیشن سے گزرے۔ اس کے بعد، سلائسوں کو پی بی ایس کے ساتھ دھویا گیا اور اینٹی خرگوش الیکسا 488 (1:1،000، انویٹروجن، پی بی ایس میں) کے ساتھ RT میں 1 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔ آخر میں، امیونو لیبل والے حصوں کو پی بی ایس میں دھویا گیا، جیلیٹن لیپت سلائیڈوں پر نصب کیا گیا، اور ڈی اے پی آئی کے اضافی ماونٹنگ میڈیم سے ڈھانپ دیا گیا۔

مائکروسکوپی

ایم چیری لیبلنگ کی جانچ Zeiss Airyscan confocal microscope کے ذریعے کی گئی: دو لیزر استعمال کیے گئے (405 اور 561 nm)، ہر ایک DAPI کے لیے چوٹی کے اخراج کے اسپیکٹرم (خلیہ کے مرکزے کے لیے Nissl داغ) اور Alexa 568 (mCherry) )، بالترتیب۔ انجیکشن سائٹس پر وائرس کے پھیلاؤ کا تجزیہ کرنے کے لیے، Te2 اور ACC کے مائیکروگرافس کو موزیک امیجز کے طور پر حاصل کیا گیا تھا (ہر ایک کو 10× مقصد کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا تھا)۔ بی ایل اے میں ایکسن ٹرمینلز کا تجزیہ 40× مقصد کو 10 سیکشنز کے زیڈ اسٹیک کے طور پر استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، 1 μm کے فاصلے پر (159 μm مربع؛ زوم فریکشن، 1.0)۔

retrobeads انجیکشن والے جانوروں کے لیے جو cFos امیونولابلنگ سے گزرے تھے، تصاویر کو 40× میگنیفیکیشن (159 μm مربع؛ زوم فریکشن، 10) پر 3 مختلف لیزرز کے ساتھ حاصل کیا گیا تھا، جو چوٹی کے اخراج کے سپیکٹرم کے مطابق تھا۔ بالترتیب DAPI (Nissl stain for cell nuclei)، AlexaFluor 488 (cFos) اور Texas Red (Retrobeads) کے لیے۔ 0.7 μm کے حصے ایک 10-μm z-stack کے ساتھ حاصل کیے گئے تھے۔ CFos، موتیوں کے لیبل والے، اور ڈبل پازیٹو (cFos + موتیوں کا لیبل لگا ہوا) نیوکلی کی تعداد کو Te2 کے علاقے میں ہر جانور کے لیے 6.7 سے 7.3 ملی میٹر تک بریگما سے 6.7 سے 7.3 ملی میٹر تک درست کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ہر جانور کا اوسط پیدا کرنے کے لیے ڈیٹا کا اوسط لیا گیا اور نتائج کا شماریاتی طور پر موازنہ کیا گیا۔ نیون کے ڈی اے بی داغ والے حصوں کی تصاویر کا رنگین سی سی ڈی کیمرے کے ذریعے مائکروسکوپ سے منسلک نیورولوسیڈا سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا [10]۔

ڈیٹا کا تجزیہ اور اخراج کا معیار

ہمارے پچھلے مطالعات [10,16,17] کے مطابق ہر گروپ کے لیے n کو ترجیح دی گئی تھی، اس سے قبل فیلڈ میں شائع شدہ کام (اے سی سی [6,22,55] اور Te2 [10,59] کے حوالہ جات کے طور پر دیکھیں)، اور جی پاور تخمینہ کے ذریعے، درج ذیل جدول کے مطابق (ٹیبل 1):

ہر تجزیہ کے لیے، ہم نے ہر گروپ کے لیے 8 سے 10 جانوروں کی حتمی اوسط تعداد کا تخمینہ لگایا۔ گروپس کو اسی تجرباتی سیشن (S1 ٹیبل) میں اندرونی کنٹرول کے ساتھ چلایا گیا تھا۔ جراحی اور رویے کے طریقہ کار کی تغیر کو دیکھتے ہوئے، ہم نے ترجیحی طور پر تجرباتی مضامین کی ایک بڑی تعداد (15% تک زیادہ) شامل کی جو بعض صورتوں میں تجرباتی معیار پر پورا اترتے تھے اور شامل کیے گئے تھے، اس طرح صوابدیدی اخراج سے گریز کیا گیا۔ ہپپوکیمپل اسٹڈیز کے معاملے میں، مخصوص وقت کے وقفوں پر NMDA اور CNQX انجیکشن کے اثرات کا اندازہ لگانے کے لیے، ہم نے مختلف گروپوں کے درمیان گاڑیوں اور شیم سے چلنے والے چوہوں کے درمیان کنٹرول جانوروں کی کل تعداد کو متوازن کیا۔

رویے کا تجزیہ، ہسٹولوجیکل معائنہ، اور سیل شمار آنکھ بند کر کے کئے گئے تھے۔ این ایم ڈی اے - ناقابل واپسی گھاووں کے معاملے میں سوئی ٹریک کی ناکافی لوکلائزیشن یا گھاووں والے جانوروں کو ڈیٹا تجزیہ (S1 ٹیبل) سے خارج کردیا گیا تھا۔ فارماسولوجیکل اسٹڈیز میں، ہم نے سوئی کی غلط جگہ کا تعین کرنے کی وجہ سے کل 465 جانوروں میں سے 57 جانوروں کو خارج کر دیا (22/255 Te2 کے لیے، 31/179 ACC کے لیے، اور 4/31 ہپپوکیمپس کے لیے)۔ ٹریسنگ اسٹڈیز میں، 21 جانوروں پر، ہم نے 3 مضامین کو ختم کیا جن میں ریٹروبیڈز کا انجیکشن BLA سے محروم رہا۔ Te2 optogenetics کے مطالعے میں، مجموعی طور پر 30 سے ​​زیادہ جانوروں میں، ہم نے 1 چوہا کو خارج کر دیا کیونکہ آپٹک ریشوں کی جگہ کا تعین ہدف کے علاقے، 1 چوہا سے اوپر نہیں تھا۔ سب کے بعد، وائرس Te2 اور 2 چوہوں میں غائب تھا کیونکہ وائرس کا پھیلاؤ انجیکشن سائٹس پر Te2 کے علاقے کے بالترتیب 4.7% اور 5.3% سے کم تھا۔ شماریاتی تجزیے میں شامل چوہوں میں، کم سے کم وائرس کا پھیلاؤ زیادہ پچھلے سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹ پر 39.6% اور زیادہ پچھلے سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹ پر 50.2% تھا۔

اسی طرح، ACC optogenetics تجربات میں، مجموعی طور پر 32 سے زیادہ جانوروں، 2 چوہوں کو ختم کیا گیا کیونکہ آپٹک ریشوں کی جگہ ہدف کے علاقے سے زیادہ نہیں تھی۔ دو چوہوں کو خارج کر دیا گیا تھا کیونکہ ACC میں وائرس غائب تھا، 1 جانور کیونکہ وائرس ملحقہ سیکنڈری موٹر کارٹیکس میں تھا، اور 1 چوہا اس لیے کہ وائرس کا پھیلاؤ انجیکشن سائٹس پر ACC کے 2.3 فیصد سے کم تھا۔ باقی چوہوں میں، کم سے کم وائرس کا پھیلاؤ زیادہ پچھلے سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹ پر 33.3% اور زیادہ پچھلے کوآرڈینیٹ پر 42.2% تھا۔

NMDA گھاووں کے مطالعے میں، گھاووں نے زیادہ تر ڈورسل ہپپوکیمپس کے CA1 خطے کو نشانہ بنایا۔ ڈورسل ہپپوکیمپس کے پورے علاقے پر ہپپوکیمپل گھاووں کی کم سے کم (سرخ) اور زیادہ سے زیادہ توسیع (گلابی) بالترتیب 23.2% اور 53,5% زیادہ پچھلے سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹ پر اور 28.3% اور 62.3% زیادہ پچھلے کوآرڈینیٹ پر تھی۔ کل 73 سے زیادہ جانوروں میں، 4 چوہوں کو ختم کر دیا گیا کیونکہ زخم غائب تھا، جب کہ مزید 3 جانوروں کو ضائع کر دیا گیا تھا کیونکہ گھاووں کی توسیع 5 سے کم تھی۔{13}}% (یعنی 4.8%, 4.3%, 3.1 %) 2 نقاط پر ہپپوکیمپل ایریا سے متعلق۔

ZEN 3{2}} سافٹ ویئر کے ریجن کنٹور ٹول کا استعمال کرتے ہوئے بصری معائنہ اور دستی کوانٹیفیکیشن کے ذریعے ایریا کونٹور تجزیہ کیا گیا۔ اس کے بعد علاقے کے کل رقبے پر رقبے کی اقدار کو معمول بنایا گیا۔ Te2، ACC، اور ہپپوکیمپس کے سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹس Paxinos atlas [26] پر مبنی تھے اور، Te2 کے معاملے میں، cortical فیلڈ کے ساتھ Zilles atlas [25] کے حوالے کیے گئے تھے۔

شماریاتی تجزیہ

تمام ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔ تمام اعداد و شمار نے تغیرات کی مساوات کے لیے لیون کے ٹیسٹ کو پاس کیا۔ اس طرح، تمام تجربات میں پیرامیٹرک اعدادوشمار کا استعمال کیا گیا۔ 2 گروپوں کے ڈیٹا کا موازنہ 2-ٹیلڈ غیر جوڑا اسٹوڈنٹ ٹی ٹیسٹس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ٹوکی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے ساتھ ایک سے زیادہ گروپوں کے موازنہ کا اندازہ 1-طریقہ ANOVA ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ گروپوں کے درمیان اور ان کے درمیان فرق کو دور کرنے کے لیے، ہم نے 3 × 2 مخلوط ڈیزائن کے ANOVA ماڈل کو ایک گروپ (CS1-CS2، Tone-CS1-CS2، WN-CS2) کے ساتھ شمار کیا۔ مضامین متغیر اور حالت (حالیہ کنڈیشنگ + انجیکشن سے پہلے اور بعد میں) مضامین کے اندر کے متغیر کے طور پر۔ جہاں گروپ × کنڈیشن کا تعامل اہم تھا، ہم نے ایک سادہ مین ایفیکٹس کا تجزیہ کیا اور ہم نے ہر پی ویلیو کو بونفرونی تصحیح کے ساتھ ایڈجسٹ کیا۔ ہر ایک مخلوط ANOVA ماڈل کے لیے، ہم نے ماؤچلی کے ٹیسٹ آف اسپریسیٹی کے ذریعے اسپریسیٹی مفروضے کا اندازہ کیا۔

اعداد و شمار کے پیرامیٹرز (یعنی، ہر گروپ کے لیے n کی صحیح قدر، SEM، شماریاتی ٹیسٹ، اثر کا سائز، اور عین p-value) لیجنڈز میں رپورٹ کیے گئے ہیں۔ مساوی نمونے کے سائز کے لیے، جوڑا نہ بنائے گئے ٹی ٹیسٹ کے لیے اثر کے سائز کا تعین SDs کی مماثلت کے مطابق Cohen's d یا Glass's d کا حساب لگا کر کیا گیا جبکہ مختلف نمونوں کے سائز کے لیے، Hedges'g۔ سیل کی گنتی اور منجمد ہونے کے درمیان ارتباط کا حساب پیئرسن کے گتانک کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا ڈیٹا شماریاتی نقطہ نظر کے مفروضوں پر پورا اترتا ہے، ہم نے P < 0.05 کی سطح پر کالعدم مفروضے کو مسترد کر دیا۔ تمام شماریاتی تجزیے SPSS شماریات 22 (IBM) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے۔

امدادی معلومات

S1 انجیر۔ Te2 (A) اور ACC کارٹیکس (B) کی سوئی کی پٹریوں کی میگنیفیکیشن CNQX کے ساتھ انجیکشن، مثال کے طور پر منتخب کی گئی ہے۔ (C) جب طریقہ کار کے 2 ہفتوں بعد اسی سیاق و سباق کے ساتھ نمائندگی کی گئی تو، صرف جھٹکا دینے والے جانوروں نے خوف کا کم ردعمل ظاہر کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ اس طریقہ کار نے اس تناظر میں کنڈیشنڈ منجمد نہیں کیا جہاں جھٹکا پہنچا تھا۔ (D) اسی طرح کے نتائج جیسا کہ تصویر 1 میں ہے CSs (CS1, 3 kHz اور CS2, 15 kHz) (طالب علم t ٹیسٹ، t(14)=3.44, p {{ 13}}۔{20}}040، گلاس کا ڈی=4.14)۔ (E) بدبو میں CS کنڈیشنڈ چوہوں کی بدبو جم جاتی ہے، کنڈیشنگ کے 2 ہفتوں بعد، اگر کنڈیشنگ سیاق و سباق سے متعلق کسی مختلف ماحول میں تجربہ کیا گیا تو بھی زیادہ تھا، اس طرح یہ ظاہر ہوتا ہے کہ خوف خاص طور پر اس کیو ڈیلیوری سے وابستہ تھا۔ اسکیل بارز، 300 μm۔ ��P <0.01۔ تمام ڈیٹا اوسط اور SEM ہیں۔ S1 Fig کا خلاصہ ڈیٹا S1 سپورٹنگ فگر ڈیٹا نام کی فائل میں معاون معلومات میں پایا جا سکتا ہے۔ (TIF)

S2 تصویر۔ CNQX انجیکشن نے چوہوں میں حالیہ سمعی خوف کی یادوں کو برقرار رکھنے میں رکاوٹ پیدا کی جہاں خوف کو عام کرنے کو صرف ایک لہجے سے پہلے کی نمائش سے یا CS1 کے طور پر سفید شور والے ٹون کو استعمال کرنے سے کم کیا گیا تھا۔ A 3 × 2 مخلوط ڈیزائن انووا (گروپ کا بنیادی اثر: F(2,42)=6.478، p {{10}}۔{62}}0 4، η2=0۔ 236، شرط کا بنیادی اثر: F(1,42)=0.161, p=0.691, η2=0.004, گروپ × حالت کا تعامل F(2,42)=3.942, p=0.027, η2=0.158) نے ظاہر کیا کہ 3 کلو ہرٹز ٹون پر جم جانا اس سے پہلے کہ اس کا امریکہ سے تعلق کم ہو ان جانوروں میں جنہوں نے 15 kHz-US جوڑی سے پہلے 15 kHz ٹون پری ایکسپوزر حاصل کیا تھا (n=10, p=0.001) یا سفید شور (n=13) سے مشروط چوہوں میں , p=0.008) CS1-CS2 جانوروں (n=22) کے مقابلے میں جس نے متغیر خوف کو عام کرنے کا ردعمل ظاہر کیا۔ تاہم، Te2 کارٹیکس میں CS-US سیکھنے اور cnqx انجیکشن کے بعد، تمام گروپس (p > 0.05) میں حالیہ خوف کی یادداشت خراب ہو گئی تھی۔ گروپوں کے اندر سادہ بنیادی اثر (CS-US سیکھنے سے پہلے اور بعد میں cnqx انجیکشن کے بعد): CS1-CS2, p=0.025; Tone-CS1-CS2، p=0.189; WN-CS2، p=0.347) �P <0.05، ��P <0.01۔ تمام ڈیٹا اوسط اور SEM ہیں۔ S2 Fig کا خلاصہ ڈیٹا S1 Supporting Figure Data نام کی فائل میں معاون معلومات میں پایا جا سکتا ہے۔ (TIF)

S3 تصویر۔ (A) بی ایل اے کو نشانہ بنانے والے ریٹروبیڈز انجیکشن کی بے ترتیب مثال۔ (B اور C) Te2 (B) اور ACC cortex (C) میں AAV ویکٹر کے ساتھ انجکشن لگائے گئے جانوروں کے BLA کے اوپر آپٹیکل فائبر کی جگہوں کی مثالیں۔ اسکیل بارز، 500 μm۔

اعترافات

ہم ڈاکٹر ای ماناسیرو کے مسلسل تعاون اور مشورے کے لیے ان کا شکریہ ادا کرتے ہیں۔

مصنف کی شراکتیں۔

تصوراتی: Giulia Concina، Annamaria Renna، Benedetto Sacchetti.

ڈیٹا کیوریشن: Giulia Concina، Luisella Milano، Benedetto Sacchetti.

رسمی تجزیہ: Giulia Concina، Annamaria Renna، Luisella Milano۔

فنڈنگ ​​کا حصول: Giulia Concina، Benedetto Sacchetti.

انویسٹی گیشن: جیولیا کونسینا، اناماریہ رینا، لوئیزیلا میلانو۔

طریقہ کار: Giulia Concina، Annamaria Renna، Luisella Milano.

نگرانی: بینڈیٹو ساکیٹی۔

توثیق: Benedetto Sacchetti.

تحریر - اصل مسودہ: جیولیا کونسینا، بینڈیٹو ساکیٹی۔

تحریر - جائزہ اور ترمیم: اناماریہ رینا، لوئسیلا میلانو۔

حوالہ جات
1. فرینک لینڈ PW، Bontempi B. حالیہ اور دور دراز کی یادوں کی تنظیم۔ نیٹ ریو نیوروسکی۔ 2005; 6:119-130۔ https://doi.org/10.1038/nrn1607 PMID: 15685217

2. Dudai Y. دی نیورو بائیولوجی آف کنسولیڈیشنز، یا، اینگرام کتنا مستحکم ہے؟ انو ریو سائیکول۔ 2004; 55:51–86۔ https://doi.org/10.1146/annurev.psych.55.090902.142050 PMID: 14744210

3. اسکوائر LR، Genzel L، Wixted JT، Morris RG۔ یادداشت کا استحکام۔ کولڈ اسپرنگ ہارب پرسپیکٹ بائیول۔ 2015; 3:7۔ https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021766 PMID: 26238360

4. Alvarez P، Squire LR. یادداشت کا استحکام اور میڈل ٹیمپورل لاب: ایک سادہ نیٹ ورک ماڈل۔ Proc Natl Acad Sci US A. 1994; 91:7041–7045۔ https://doi.org/10.1073/pnas.91.15.7041 PMID: 8041742

5. McClelland JL، McNaughton BL، O'Reilly RC۔ ہپپوکیمپس اور نیوکورٹیکس میں تکمیلی سیکھنے کے نظام کیوں ہیں: سیکھنے اور یادداشت کے کنکشنسٹ ماڈلز کی کامیابیوں اور ناکامیوں سے بصیرت۔ سائیکول Rev. 1995; 102:419–457۔

For more information:1950477648nn@gmail.com