Quercetin Rheumatoid Arthritis Fibroblast-like Synoviocytes میں سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار کو دباتا ہے۔

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہرمیٹی سندشوت (RA) ایک دائمی، ترقی پسند اور نظامی خود کار قوت مدافعت کی بیماری ہے جو بنیادی طور پر ہم آہنگ ملٹی جوائنٹ سائنوائٹس کی خصوصیت ہے۔ Quercetin میں سوزش، اینٹی آکسیڈیشن، اور مدافعتی ضابطے کی سرگرمیاں ہیں، اور اس وجہ سے یہ اعلی دواؤں کی قدر کو ظاہر کرتا ہے۔ موجودہ مطالعہ کا مقصد RA میں fibroblast-like synoviocytes (FLSs) پر quercetin کے اثر کا مشاہدہ کرنا ہے۔ ریمیٹائڈ آرتھرائٹس فبروبلاسٹ نما سائنو سائیٹس (RAFLSs) کو 2 گھنٹے کے لیے 50 nmol/l quercetin کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا اور پھر بعد کے تجربات کے لیے 24 گھنٹے کے لیے TNF-a کا استعمال کرتے ہوئے حوصلہ افزائی کی گئی۔ RAFLSs کو مختصر مداخلت (si)-X-غیر فعال مخصوص tran سے منتقل کیا گیا۔ (XIST)، microRNA (miR)-485mimic,miR-485inhibitor, or si-PSMB8 یا combination.ELISA, PCR، اور ویسٹرن بلاٹنگ کو TNF کے ساتھ علاج کیے جانے والے RAFLSs پر quercetin کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ -a یہ انکشاف ہوا کہ quercetin سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار اور TNF-a کے ذریعے RAFLS میں XIST کے اظہار کو روکتا ہے۔ بایو انفارمیٹکس تجزیہ نے اشارہ کیا کہ XIST miR-485 کے لیے سپنج کے طور پر کام کرتا ہے اور یہ کہ پروٹیزوم سبونائٹ ٹائپ-8 (PSMB8) miR-485 کا براہ راست ہدف تھا۔ مزید یہ کہ، PSMB8 نے TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs کی سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار میں دبانے والے کے طور پر کام کیا۔ مجموعی طور پر، quercetin کو TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار اور XIST کے اظہار کو روکنے کے لیے دیکھا گیا تھا۔ مزید برآں، XIST-خاموش ہونا TNF-a کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں miR-485 کو سپنج کرکے اشتعال انگیز ردعمل کو دبا سکتا ہے۔ مجموعی طور پر، quercetin وٹرو میں RA کی ترقی کو دبا سکتا ہے۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

تعارف

ریمیٹائڈ گٹھیا (RA) ایک عام سوزش کی بیماری ہے جس کی خصوصیت سوزش کے خلیوں کی دراندازی سے ہوتی ہے جو synovium، articular cartilage، اور ہڈی (1) کے انحطاط کا باعث بنتی ہے۔ RA کی موجودگی اور ترقی میں بڑی تعداد میں سوزش کی رہائی شامل ہے۔سائٹوکائنزاور ثالث، جو جوڑوں میں کارٹلیج اور ہڈی کی ناقابل واپسی تباہی کا سبب بنتا ہے (2)۔ انسانی معاشرے میں عمر رسیدہ آبادی میں اضافے کے ساتھ، RA کے واقعات نے ترقی یافتہ ممالک میں 1995 سے 2001 تک بڑھتے ہوئے رجحان کو دکھایا ہے (3,4)۔ فی الحال، RA کا علاج غیر سٹیرایڈیل اینٹی سوزش والی دوائیوں، گلوکوکورٹیکائیڈز، میتھو ٹریکسٹیٹ، اور بیماری کو کنٹرول کرنے کے دیگر علامتی طریقوں پر انحصار کرتا ہے۔ یہ منشیات RA کے علامات کو بہتر بنا سکتے ہیں، لیکن طویل مدتی استعمال میں مضبوط زہریلا ضمنی اثرات ہیں، جیسے جسم کے مدافعتی کام کو روکنا (5). لہذا، RA کے علاج کے لئے محفوظ اور مؤثر ادویات کی تلاش بہت اہمیت کا حامل ہے.

Quercetin انسانی خوراک میں سب سے اہم بایو فلاوونائڈ ہے اور بڑے پیمانے پر پودوں کے پھولوں، پتوں اور پھلوں میں پایا جاتا ہے (6,7)۔ Quercetin میں سوزش، اینٹی آکسیڈیشن، اور مدافعتی ضابطے کی سرگرمیاں ہیں (8,9)، اور اس وجہ سے یہ اعلی دواؤں کی قدر کو ظاہر کرتا ہے۔ طبی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ quercetin گھٹنوں کے اوسٹیو ارتھرائٹس کے ساتھ ساتھ ورزش کے بعد ریمیٹائڈ جوڑوں اور جسم کے درد (10-12) کو دور کرنے میں اچھا اثر ڈالتا ہے۔ Fibroblast-like synoviocytes (FLSs) اہم اثر کرنے والے خلیات ہیں اور RA (13,14) کے بڑھنے کو بڑھاتے ہوئے مختلف قسم کے سوزش والی سائٹوکائنز کو جاری کر سکتے ہیں۔ دیگر اشتعال انگیز عوامل، آسنجن مالیکیولز، اور ہڈیوں اور کارٹلیج سے وابستہ پروٹیز کے اظہار کو دلانا؛ اس طرح، synovial استر کی تہہ کو گاڑھا کرنے کا سبب بنتا ہے اور جوڑوں کے اشتعال انگیز ردعمل کو مزید بڑھاتا ہے (15)۔ لہذا موجودہ مطالعہ کا مقصد RA میں FLSs پر quercetin کے اثر کا مشاہدہ کرنا اور اس کے ممکنہ طریقہ کار کو تلاش کرنا ہے۔quercetinRA کے علاج میں.

مواد اور طریقے

سیل کلچر۔ بنیادی سیل RAFLSs چینی اکیڈمی آف سائنسز کے سیل بینک آف دی ٹائپ کلچر کلیکشن سے حاصل کیے گئے تھے۔ تمام خلیوں کو DMEM (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific, Inc.) میں برقرار رکھا گیا تھا جس میں 10 فیصد FBS (HyClone؛ Cytiva) 100 U/ml penicillin اور 100 ug/ml streptomycin ایک انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر ہوتا ہے۔ 24 گھنٹے تک کلچر کرنے کے بعد، RAFLS کو 37 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے 50 nmol/l quercetin (MilliporSigma) کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا اور پھر مندرجہ ذیل تجربات کے لیے 37 ڈگری پر 24 گھنٹے کے لیے 50 ng/ml TNF-a کا استعمال کرتے ہوئے حوصلہ افزائی کی گئی۔

Cistanche قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

سیل ٹرانسفیکشن۔ XIST (si-XIST؛ حتمی حراستی، 20 nM) کو نشانہ بنانے والے چھوٹے مداخلت کرنے والے (si)-RNAs اور اس کا سکیمبلڈ منفی کنٹرول (NC) siRNA (حتمی ارتکاز، 20 nM)، miR-485 روکنے والا (حتمی ارتکاز، 30nM) اور سکیمبلڈ انحیبیٹر کنٹرول (miR-NC؛ حتمی ارتکاز، 30 nM) اور miR-485 mimics (حتمی ارتکاز، 15 nM) اور scrambled mimic کنٹرول (miR-NC mimics؛ حتمی ارتکاز، 15 nM) شنگھائی سے حاصل کیے گئے تھے۔ GenePharma Co., Ltd. کل lx10 ڈگری RAFLS کو 12 گھنٹے کے لیے چھ کنویں والی پلیٹوں میں چڑھایا گیا، پھر مینوفیکچرر کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے 37 ڈگری پر Lipofectamine*2000 reagent (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific, Inc.) کے ساتھ ملا کر تعمیرات کو RAFLSs میں تبدیل کر دیا گیا۔ . منتقلی کے بعد کل 24-72 گھنٹے بعد کے تجربات کے لیے منتقلی شدہ خلیات جمع کیے گئے۔ منتقلی مالیکیولز کی ترتیب حسب ذیل تھی:si-XIST, 5'-GCAAAUGAAAAGCUACCAAU-3'; si-NC, 5'-AAUUCUCCGAACGUGUCACGU-3'; miR-485 inhibitor, 5'-UCACGCGAGCCGAACGAACAA-3'; اینٹی miR-NC، 5'-CAGUACUUUUUGUGUACAAA-3';miR-485 mimic, 5'-GUCAUACACGGCUCUCUCUCUCU-3'; miR-NC، 5'-UUC UCCGAACGUGUCACGUTT-3!

انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA)۔ منتقلی اور غیر منتقلی RAFLSs (IL-1، IL-6، اور IL-8) میں سوزش والی سائٹوکائنز کی حراستی کا تعین ELISA کٹس (cat. nos. KE00021, KE00139، اور KE00006؛ Proteintech Group, Inc.) مینوفیکچرر کے پروٹوکول کی پیروی کرتے ہوئے ایک مائکروپلیٹ ریڈر 450 nm پر جاذبیت کو پڑھنے کے لئے استعمال کیا جاتا تھا۔

ریورس ٹرانسکرپشن مقداری (RT-q) PCR تجزیہ۔ کل سیلولر RNAs کو TRIzol" ری ایجنٹ (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسفیکٹڈ اور غیر منتقلی RAFLSs سے نکالا گیا۔ مینوفیکچرر کی ہدایات۔ XIST اور PSMB8 اظہار کا مقداری تجزیہ SYBROPremix Ex Taqm reagent (Takara Bio, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا اور GAPDH کو اینڈوجینس کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ تھرمو سائیکلنگ کے حالات درج ذیل تھے: 94 ڈگری کے لیے 3 منٹ؛ 94 ڈگری کے 40 سائیکل 30 سیکنڈ کے لیے 30 سیکنڈ، 55 ڈگری اور 1 منٹ کے لیے 72 ڈگری؛ اور 10 منٹ کے لیے 72 ڈگری۔ miR-485 کے اظہار کی سطح کا تجزیہ SYBRO PrimeScript"M miRNA RT-PCR کٹ (Takara Biotechnology Co., Ltd. ) اور U6 چھوٹے ایٹمی RNA کو اندرونی حوالہ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ تھرمو سائیکلنگ کے حالات حسب ذیل تھے: 10 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری پر ڈینیچریشن؛ 5 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری کے 40 سائیکل اور 20 سیکنڈ کے لیے 60 ڈگری؛ اس کے بعد 60 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری، 30 سیکنڈ کے لیے 55 ڈگری، اور 30 ​​سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری پر منحنی خطوط کا تجزیہ۔ پرائمر سنگون بائیوٹیک کمپنی لمیٹڈ سے خریدے گئے تھے، اور پرائمر کی ترتیب درج ذیل تھی: GAPDH فارورڈ، 5-CTTGGTATCGTGGA AGGACTC-3' اور ریورس، 5'-GTAGAGCAGGGGGATGATGATG TTCT-3'; U6 آگے، 5'-GCTTCGGCAGCACATATACTA AAAT-3' اور ریورس، 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTC AT-3'; IncRNA XIST فارورڈ، 5'-AATGGAACGGCTGA GTTTTAC-3' اور ریورس، 5'-TCATCCGCTTGCGTTCAT AG-3'; miR-485 آگے، 5'-CAGAGCTGGCCGTGAT-3 اور ریورس، 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGTCCGAGGTA TTCGCACTGGATACGACGAATTC-3'; PSMB8 فارورڈ، 5'-GCTGCCTTCAACATACATCA-3' اور ریورس، 5'-CTG CCACCACCACCATTA-3! 2-AACq(16) کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ اظہار کا تجزیہ کیا گیا۔

مغربی دھبہ۔ کل پروٹین کو پری کولڈ RIPA lysis بفر (Beyotime Institute of Biotechnology) کا استعمال کرتے ہوئے RAFLSs سے الگ تھلگ کیا گیا تھا جس میں ایک پروٹیز روکنے والا بھی شامل تھا۔ BCA پروٹین پرکھ کٹ (Pierce; Thermo Fisher Scientific, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے کل پروٹین کی مقدار درست کی گئی تھی۔ فی لین میں کل 30 ug پروٹین کے نمونے 10 فیصد SDS-PAGE سے الگ کیے گئے تھے اور بعد میں نائٹروسیلوز جھلی (ملی پور سگما) میں منتقل کیے گئے تھے۔ جھلیوں کو 5 فیصد غیر چکنائی والے دودھ کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ تک روک دیا گیا تھا۔ اس کے بعد، جھلیوں کو PSMB8 (1:1،000؛ بلی نمبر abl80606) اور GAPDH (1:1،000؛ cat.no. کے خلاف نشانہ بنایا گیا بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ abl81602) (سب ابکم سے)۔ جھلیوں کو ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز کے لیبل والے اینٹی خرگوش IgG سیکنڈری اینٹی باڈی (1:1,000;sc-2027; سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی, انکارپوریٹڈ) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لئے سینک دیا گیا تھا۔ ECL ڈیٹیکشن کٹ (پیئرس؛ تھرمو فشر سائنٹیفک، انکارپوریٹڈ) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین بینڈ کا تصور کیا گیا اور کوانٹی ون v4.6.2 سافٹ ویئر (Bio-Rad Laboratories, Inc.) کے ساتھ تجزیہ کیا گیا۔ GAPDH لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال ہوتا تھا۔

لوسیفریز رپورٹر پرکھ۔ XIST کے ٹکڑے اور PSMB8 3'-غیر ترجمہ شدہ علاقے جن میں جنگلی قسم (WT) یا اتپریورتی (MUT)miR-485 بائنڈنگ سائٹس شنگھائی جین فارما کمپنی لمیٹڈ سے حاصل کی گئی تھیں۔ انہیں فائر فلائی میں کلون کیا گیا تھا۔ لوسیفریز جین رپورٹر ویکٹر pmiRGLO (پرومیگا کارپوریشن)۔ پلازمیڈ کو انویٹروجن کے ذریعہ ترکیب کیا گیا تھا۔ Thermo Fisher Scientific, Inc. پھر 48 گھنٹے بعد LipofectamineD 2000 reagent (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے 37 ڈگری پر 5 فیصد CO کے ساتھ، luciferase پرکھ کو dual-luciferase رپورٹر پرکھ سسٹم کٹ (Promega) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ ) کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق۔ رینیلا لوسیفریز سرگرمی کے مقابلے میں ماڈیولس سنگل ٹیوب ملٹی موڈ ریڈر (پرومیگا کارپوریشن) کا استعمال کرتے ہوئے لوسیفریز سرگرمی کا تجزیہ کیا گیا۔ درج ذیل سلسلے استعمال کیے گئے تھے: XIST-WT Forward، 5'-CGCCAGCTTCGACAATTCGAC-3، اور ریورس، 5'-ACT TGAAGCGGCCATACGTTGACAA-3';XIST-MUT آگے، 5'-TCAAAACCCAACTAGGTAGACGAT2{}} '، اور ریورس، 5'-AACCCAGAAAACCGTACGGCAATCGT-3';

PSMB8-WT فارورڈ، 5'-CCGCTAAGTCCGAGTAGTCA-3'، اور ریورس، 5'-ATAAGAATGCGGCCGAATTCATGG GAA-3'; اور PSMB8-MUT فارورڈ، 5-TTAGGACACGCA TCGGATTACGCTATTAT-3'، اور ریورس، 5'-GACACCTGT TTACGGCTACCCGCAAATATGCCAA-3'۔

بایو انفارمیٹکس تجزیہ۔ miR{{0}} اور XIST، نیز miR-485 اور PSMB8 کے درمیان بائنڈنگ سائٹس کی پیشین گوئی StarBase v2.0 (http://www.microrna.gr/lncBase) یا TargetScan سافٹ ویئر v7.1 (http://www.targetscan.org/vert_71/) بالترتیب۔

شماریاتی تجزیہ. تمام ناپے گئے ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ اختلافات کا حساب دو گروپوں یا یک طرفہ ANOVA کے درمیان موازنہ کے لیے جوڑی والے طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ساتھ کیا گیا جس کے بعد متعدد موازنہوں کے لیے Dunnett's یا Tukey کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ۔ تمام شماریاتی تجزیے GraphPad Prism 5 کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے۔{3}} (GraphPad Software, Inc.) اور SPSS 14۔{5}} (SPSS, Inc.).P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="" difference.="" experiments="" were="" repeated="" three="">

نتائج

Quercetin TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار اور XIST کے اظہار کو روکتا ہے۔ TNF-a محرک کے تحت، سوزش والی سائٹوکائنز کا ارتکاز (IL-1، IL-6، اور IL-8) اور XIST کے اظہار کی سطح کو RAFLSs میں نمایاں طور پر ان کے مقابلے میں بڑھا دیا گیا تھا۔ NC (تصویر IA اور B)۔ تاہم، quercetin کے ساتھ علاج سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار میں TNF-a کے فروغ کو نمایاں طور پر دبا سکتا ہے، اور FLSs (تصویر IA اور B) میں XIST کے اظہار کی سطح میں واضح کمی واقع ہوئی ہے۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ quercetin TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش کے رد عمل کو دبا سکتا ہے۔

XIST miR{{0}} کے لیے سپنج کے طور پر کام کرتا ہے۔ اس کے بعد، ممکنہ مالیکیولر میکانزم کی کھوج کی گئی اور XIST کے ممکنہ اہداف کی StarBase ڈیٹا بیس v2.0 کا استعمال کرتے ہوئے پیش گوئی کی گئی۔

بایو انفارمیٹکس تجزیہ نے اشارہ کیا کہ miR-485 کے پاس XIST ترتیب (تصویر 2A) کے ساتھ ایک ممکنہ پابند سائٹ ہے۔ RAFLSs (تصویر 2B) میں miR-485 کے اظہار کو اپ گریڈ کرنے کے لئے miR-485 mimic کے ساتھ منتقلی کا مظاہرہ کیا گیا تھا۔ دریں اثنا، miR-485 XIST جنگلی قسم میں NC(Fig.2C) کے مقابلے میں واضح طور پر دبائی ہوئی لوسیفریس سرگرمی کی نقل کرتا ہے۔ TNF-a RAFLSs میں miR-485 کے اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے، جسے quercetin (Fig.2D) نے بچایا تھا۔ si-XIST (Fig.2E) کے ساتھ منتقلی کے بعد RAFLSs میں XIST کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔ ، XIST-خاموش ہونے نے miR-485 کے اظہار کو نمایاں طور پر فروغ دیا، جسے TNF-a(Fig.2F) کے ساتھ RAFLS میں miR-485 روکنے والے نے الٹ دیا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ XIST نے miR-485 کے ساتھ تعامل کیا۔

PSMB8-485 کا براہ راست ہدف ہے۔ TargetScan تجزیہ کے مطابق، miR-485 کے ساتھ ایک انتہائی محفوظ پوٹیٹیو بائنڈنگ سائٹ کی شناخت PSMB8 3'-غیر ترجمہ شدہ خطے (تصویر 3A) میں کی گئی تھی۔ miR-485 کی نقل نے PSMB8 جنگلی قسم میں NC (تصویر 3B) کے مقابلے میں فلوروسینس کو نمایاں طور پر دبایا۔ TNF-a RAFLSs میں PSMB8 کے اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر اپ گریڈ کر سکتا ہے، جسے quercetin (تصویر 3C) نے تبدیل کر دیا تھا۔ miR-485 inhibitor RAFLSs (تصویر 3D) میں miR-485 کے اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، PSMB8 کے اظہار میں si-PSMB8 کے ساتھ منتقلی کے بعد RAFLSs میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی تھی۔ تصویر 3E) miR-485 inhibitor mRNA اور پروٹین کی سطح پر PSMB8 کے اظہار کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے، جسے TNF-a (تصویر 3F) کے ساتھ علاج کیے جانے والے RAFLSs میں si-PSMB8 نے ختم کر دیا تھا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ miR-485 نے براہ راست PSMB8 کو نشانہ بنایا۔

PSMB8 TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار میں دبانے والے کے طور پر کام کرتا ہے۔ si-PSMB8 کے ساتھ منتقلی کے بعد، سوزش والی سائٹوکائنز (IL-1، IL-6، اور IL-8) کے ارتکاز میں TNF-a کے ساتھ علاج کیے جانے والے ٹرانسفیکٹڈ RAFLSs میں غیر منتقلی کے مقابلے میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔ TNF-a (Fig.4A) کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیات۔ مزید برآں، quercetin نے TNF-a محرک کے تحت RAFLSs میں اشتعال انگیز ردعمل کو دبایا، جو

si-PSMB8 (تصویر 4B) کے ذریعے منتقلی کے ذریعے بچایا گیا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ PSMB8 TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش کے رد عمل کو دبا سکتا ہے۔

بحث

پودوں سے قدرتی فعال مصنوعات کے طور پر، quercetin ایک ثانوی میٹابولائٹ ہے جسے قدرتی دواؤں کی کیمسٹری (17) کے ذریعہ Fagaceae پودوں سے الگ کیا جاتا ہے (17)۔ پچھلے سالوں میں، quercetin کئی بیماریوں میں سوزش کے ردعمل کو روکنے کے لئے تصدیق کی گئی ہے، بشمول مہلک ٹیومر ( 18)، ذیابیطس میلیتس (19)، اور ایتھروسکلروسیس (20)۔ موجودہ مطالعہ نے RA کی ترقی پر quercetin کے کردار کا اندازہ کیا۔ یہ قیاس کیا جاتا ہے کہ ایک بار جب RA کے روگجنن میں فبرو بلوسٹس چالو ہو جاتے ہیں، سوزش کے ردعمل میں ثالثی کے لیے سوزش کے عوامل اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس-ڈیگریڈنگ انزائمز کا ایک سلسلہ تیار کیا جائے گا، جس سے ہڈیوں اور کارٹلیج کی ترقی پذیر تباہی ہوتی ہے، اور معیار پر اثر پڑتا ہے۔

زندگی کی شدید (21,22)۔ موجودہ مطالعہ نے مشاہدہ کیا کہ quercetin نے TNF-a کے ذریعہ FLSs کی سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار کو دبایا۔

As a class of non-coding transcripts, IncRNAs are >200 نیوکلیوٹائڈز لمبائی میں اور جین کے اظہار کو ایپی جینیٹک، ٹرانسکرپشن اور پوسٹ ٹرانسکرپشن لیولز (23,24) پر ریگولیٹ کرتے ہیں۔ پچھلی تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ XIST کا بے ضابطہ اظہار کچھ بیماریوں کے اشتعال انگیز رد عمل میں شامل ہے جس میں سوزش نیورلجیا اور شدید نمونیا (26,27) شامل ہیں۔ پچھلی تحقیق سے ہم آہنگ، موجودہ مطالعہ نے پایا کہ XIST کے اظہار کی سطح کو FLSs میں TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی کی گئی تھی، جسے quercetin نے ختم کر دیا تھا۔ ncRNAs miRNAs (28) کو سپنج کرکے جین کے اظہار کو منظم کرسکتے ہیں۔ بایو انفارمیٹکس کے تجزیے نے اشارہ کیا کہ miR-485 کے پاس XIST تسلسل کے ساتھ ممکنہ پابند سائٹ ہے۔cistanche deserticola maاس کے علاوہ، TNF-a کے ساتھ علاج کیے جانے والے FLSs میں miR-485 اظہار کی سطح کو کم کیا گیا تھا۔ مزید برآں، XIST کی خاموشی نے مؤثر طریقے سے منتقلی کے بعد خلیوں میں miR-485 اظہار کو فروغ دیا۔

miRNAs جین کے اظہار کو کنٹرول کرنے کے لئے mRNAs کے 3'-غیر ترجمہ شدہ خطے کو نشانہ بنا سکتے ہیں (29)۔cistanche اثراتموجودہ مطالعہ نے انکشاف کیا ہے کہ PSMB8 miR-485 کا براہ راست ہدف ہے۔ PSMB8 مندرجہ ذیل طور پر اشتعال انگیز ردعمل پیدا کرنے کے لیے امیونو پروٹیزوم کے ذیلی یونٹ کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ یاماگیشی (30) نے رپورٹ کیا کہ PSMB8 کی مخصوص روک تھام سوزش کے عوامل کے سراو کو کم کر سکتی ہے، اس طرح ذیابیطس mellitus کے سوزش کے ردعمل میں تاخیر ہوتی ہے۔ Koerner et al (31) نے انکشاف کیا کہ اشتعال انگیز ردعمل میں PSMB8 کی شمولیت بڑی آنت کے کینسر کی نشوونما کے ساتھ منسلک ہے۔ موجودہ مطالعے سے انکشاف ہوا ہے کہ TNF-a RAFLSs میں PSMB8 کے اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے۔ مزید برآں، si-PSMB8 TNF-a کے ساتھ علاج کیے جانے والے RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز کے ارتکاز کو روک سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، quercetin TNF-a محرک کے تحت si-PSMB8 کے ساتھ علاج کیے جانے والے RAFLSs میں اشتعال انگیز ردعمل کو دبا نہیں سکتا تھا۔ ان اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ PSMB8 TNF-a کے ذریعہ حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز کی تیاری میں دبانے والے کے طور پر کام کرتا ہے۔

موجودہ مطالعہ نے مشاہدہ کیا ہے کہ TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی FLSs میں quercetin کے ذریعہ سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار کو دبانا وٹرو میں امید افزا ہے۔ تاہم، ویوو میں اثر اور دواسازی کے اثر اور quercetin پر synovial کی جھلی کے دخول کی تحقیقات ابھی باقی ہیں۔ اس طرح، Vivo میں RA پر quercetin کے اثر کا مطالعہ کرنے کے لیے مزید مطالعات کا منصوبہ بنایا گیا ہے۔

آخر میں،cistanche deserticolaموجودہ مطالعہ نے TNF-a کی طرف سے حوصلہ افزائی RAFLSs میں سوزش والی سائٹوکائنز اور XIST اظہار کی quercetin کی روک تھام کا مشاہدہ کیا۔ مزید برآں، XIST-خاموش ہونا TNF-a کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں miR-485 کو سپنج کرکے اشتعال انگیز ردعمل کو دبا سکتا ہے۔ مجموعی طور پر، quercetin وٹرو میں RA کی ترقی کو دبا سکتا ہے۔

یہ مضمون 17 جون 2020 کو موصولہ سے ماخوذ ہے۔ قبول شدہ جون 11، 2021DOI: 10.3892/etm.2021.10695