سنیسینس مائیکرو اینوائرمنٹ سینسنگ کو دوبارہ تیار کرتا ہے تاکہ اینٹیٹیمر استثنیٰ کو آسان بنایا جاسکے

خلاصہ

سیلولر سنسنی میں ایک مستحکم سیل سائیکل گرفتاری شامل ہوتی ہے جس کے ساتھ ایک خفیہ پروگرام ہوتا ہے جو کہ بعض صورتوں میں سنسنی خلیوں کے مدافعتی کلیئرنس کو متحرک کرتا ہے۔ ایک مدافعتی صلاحیت والے جگر کے کینسر کے ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے جس میں سنسنی CD8 T سیل – ثالثی ٹیومر کے رد کو متحرک کرتی ہے، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ سنسنی سیل سطح پروٹوم کو بھی تبدیل کرتی ہے تاکہ ٹیومر کے خلیات ماحولیاتی عوامل کو کیسے محسوس کرتے ہیں، جیسا کہ ٹائپ II انٹرفیرون (IFN) کی مثال ہے۔ پھیلنے والے خلیوں کے مقابلے میں، سینسنٹ سیلز IFN ریسیپٹر کو اپ گریڈ کرتے ہیں، مائیکرو ماحولیاتی IFN کے لیے انتہائی حساسیت کا شکار ہو جاتے ہیں، اور زیادہ مضبوطی سے اینٹیجن پیش کرنے والی مشینری کے اثرات کو بھی متاثر کرتے ہیں جو انسانی ٹیومر کے خلیات میں علاج کے ذریعے سنسنی سے گزر رہے ہیں۔ حواس باختہ خلیوں میں IFN سینسنگ میں خلل ان کی مدافعتی ثالثی کلیئرنس کو سنسنی کی حالت یا اس کے خصوصیت کے خفیہ پروگرام کو غیر فعال کیے بغیر ختم کر دیتا ہے۔ ہمارے نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ سنسنی خیز خلیوں میں ماحولیاتی سگنل بھیجنے اور وصول کرنے کی بہتر صلاحیت ہوتی ہے اور یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ہر عمل کو ان کی مؤثر مدافعتی نگرانی کے لیے ضروری ہے۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

اہمیت:

ہمارا کام ٹشو کو دوبارہ بنانے اور ٹشو سینسنگ پروگراموں کے درمیان ایک باہمی تعامل کا پردہ فاش کرتا ہے جو کہ اعلیٰ درجے کے کینسروں میں سنسنی کے ذریعے ٹیومر کے خلیات کو انکولی مدافعتی نظام کے لیے زیادہ دکھائی دے سکتا ہے۔ سنسنی کا یہ نیا پہلو باہمی ہیٹروٹائپک سگنلنگ تعاملات کو قائم کرتا ہے جو اینٹیٹیمر استثنیٰ کو بڑھانے کے لئے علاج معالجے کی طرف راغب کیا جاسکتا ہے۔

تعارف

سیلولر سنسنی ایک تناؤ رسپانس پروگرام ہے جس کی خصوصیت ایک مستحکم سیل سائیکل گرفتاری اور ایک خفیہ پروگرام ہے جو ٹشو ماحول کو دوبارہ تشکیل دینے کے قابل ہے (1)۔ نارمل ٹشوز میں، سنسنی زخم بھرنے کے دوران ٹشو ہومیوسٹاسس میں حصہ ڈالتی ہے۔ تاہم، بوڑھے یا خراب ٹشوز میں، سینسنٹ سیلز کا غیر معمولی جمع ہونا دائمی سوزش اور بافتوں کی تخلیق نو کی صلاحیت کو کم کر سکتا ہے (2–4)۔ کینسر میں، سنسنی کو بافتوں کی حیاتیات پر فائدہ مند اور نقصان دہ اثرات دونوں میں ثالثی کے لیے دکھایا گیا ہے۔ ایک طرف، سنسنی آنکوجین سے شروع ہونے والے ٹیومرجینیسیس میں رکاوٹ فراہم کرتی ہے اور کینسر کے کچھ علاج (5، 6) کی اینٹیٹیمر سرگرمی میں حصہ ڈالتی ہے۔ دوسری طرف، تھراپی کے بعد سینسنٹ ٹیومر خلیوں کی استقامت ایک ٹشو ماحول پیدا کر سکتی ہے جو دوبارہ لگنے اور میٹاسٹیسیس کو فروغ دیتا ہے (7، 8). ان مخالف حیاتیاتی نتائج کے مالیکیولر انڈرپننگس کو اچھی طرح سے سمجھا نہیں جاتا ہے۔ سنسنی پروگرام کا ایک پہلو جو اس طرح کے متنوع حیاتیات میں حصہ ڈالنے کا امکان ہے وہ ہے سنسنی سے وابستہ سیکرٹری فینوٹائپ (SASP؛ ref. 9)۔ SASP ایک عالمی کرومیٹن کو دوبارہ بنانے کے عمل کے ذریعے چالو کیا جاتا ہے جو تیار ہوتا ہے اور کلیدی ایپی جینیٹک ریگولیٹرز جیسے BRD4 اور proinflammatory ٹرانسکرپشن عوامل جیسے NF-κB اور C/EBP- (10-12) کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے۔ یہ، بدلے میں، ایسے جینوں کی شمولیت کا باعث بنتا ہے جو ٹشو کو دوبارہ بنانے والے پروٹین کو انکوڈ کرتے ہیں جیسے کہ میٹرکس میٹالوپروٹینیسز، نمو کے عوامل، اور فبرینولیٹک عوامل جو زخم بھرنے کے عمل میں اہم کردار ادا کرتے ہیں (3، 13، 14)۔ ایس اے ایس پی کے دیگر اجزاء میں کیموکائنز اور سائٹوکائنز شامل ہیں جو ٹشو کے اندر مدافعتی خلیوں کی ساخت اور حالت کو تبدیل کر سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں مدافعتی ثالثی کو نشانہ بنایا جاتا ہے اور خود سنسنی خیز خلیوں کی صفائی ہوتی ہے (15، 16)۔ بہر حال، بہت سے پیتھولوجک سیاق و سباق میں سینسنٹ سیلز کے غیر معمولی جمع ہونے کا مطلب یہ ہے کہ مدافعتی ثالثی کلیئرنس سنسنی یا ایس اے ایس پی کا آفاقی نتیجہ نہیں ہے اور اس امکان کو بڑھاتا ہے کہ اضافی میکانزم سینسیسیبیلوجی میں متضاد طور پر فائدہ مند اور نقصان دہ اثرات کا حکم دیتے ہیں۔ (17-19)۔

یقینی طور پر، سنسنی سے وابستہ مدافعتی نگرانی کے قوی انسداد کینسر اثرات ہو سکتے ہیں، حالانکہ درست اثر کرنے والے میکانزم ٹشو اور سیل کی قسم (10, 15, 16, 20) کے ساتھ مختلف ہوتے ہیں۔ ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (ایچ سی سی) کے ماؤس ماڈلز میں، جگر کے ٹیومر کے خلیات جو حواس میں آتے ہیں، جنگلی قسم (WT) p53 (15) کے ذریعے مدافعتی منحصر میکانزم کے ذریعے ختم ہو جاتے ہیں۔ معاہدے میں، TP53 اکثر انسانی ایچ سی سی میں تبدیل ہوتا ہے، خاص طور پر "پھیلاؤ کلاس" ٹیومر میں جو بدترین تشخیص (21، 22) کو ظاہر کرتا ہے۔ اگرچہ امیونو تھراپی اور ٹی پی53-ہدف بنانے والی دوائیں بیماری کے نتائج کو بہتر بنانے کے لیے امید افزا حکمت عملی کے طور پر ابھر رہی ہیں، لیکن ردعمل اور مزاحمت کی مالیکیولر بنیاد نامعلوم ہے (23–25)۔ لہذا، ان طریقہ کار کو سمجھنا جن کے ذریعے جگر کے ٹیومر کے خلیے مدافعتی نظام کے لیے نظر آتے ہیں، ٹی پی53-میوٹیٹڈ ایچ سی سی میں اینٹی ٹیومر استثنیٰ حاصل کرنے کے لیے حکمت عملیوں کو آسان بنا سکتے ہیں جو ٹیومر کی دیگر اقسام تک پھیل سکتے ہیں۔

یہاں، ہم ایسے اصولوں کو قائم کرنے کے لیے نکلے ہیں جو سینسنٹ سیلز کی مدافعتی شناخت اور کلیئرنس کو ماڈیول کرتے ہیں تاکہ قابل عمل سنسنی میکانزم کی نشاندہی کی جا سکے جن کا کینسر کے مدافعتی کنٹرول کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اس مقصد کے لیے، ہم نے ایک ناول "سینیسینس-انڈیکیبل" ماڈل تیار کیا جس میں جگر کے کینسر کے خلیات کو اینڈوجینس p53 کے جینیاتی ماڈلن کے ذریعے منتخب طور پر سنسنی خیز حالت میں تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ ہم نے استدلال کیا کہ یہ ان علاجوں کے اثرات کی نقل کرے گا جو سنسنی (26، 27) کو متحرک کرتے ہیں جبکہ مدافعتی خلیوں یا بافتوں کے ماحول کے دیگر اجزاء پر سنسنی پیدا کرنے والے علاج کے الجھنے والے اثرات سے گریز کرتے ہیں۔ اس ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے اور پھر اسے دوسرے سسٹمز تک بڑھاتے ہوئے، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ، SASP کے علاوہ، سنسنی سیل کی سطح کے پروٹوم اور سگنلنگ پروگراموں کی ایک بڑی دوبارہ تشکیل کو اس انداز میں چلاتا ہے جس کی پیش گوئی کی گئی ہے کہ خلیات کے احساس اور ماحولیاتی ردعمل کو بنیادی طور پر تبدیل کر سکتے ہیں۔ سگنلز، مائیکرو ماحولیاتی قسم II IFN (IFN) کے لیے انتہائی حساسیت کے ذریعے یہاں مثال دی گئی ہے۔ یہ عمل سینسنٹ ٹیومر سیلز میں اینٹیجن پروسیسنگ اور پیش کرنے والی مشینری کی زیادہ مضبوط اپ گریجشن کو قابل بناتا ہے جو انہیں ویوو میں مدافعتی نگرانی کے لیے حساس بناتا ہے۔ اس طرح، ہمارے نتائج سنسنی خلیوں میں ایک نئے سرے سے ٹشو سینسنگ پروگرام کو ظاہر کرتے ہیں جو SASP کے ساتھ مل کر ان کی مدافعتی صلاحیت کو بڑھانے کے لیے کام کرتا ہے، اس طرح مدافعتی ثالثی ٹیومر کو مسترد کرنے میں سہولت فراہم کرتا ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

نتائج

سنیسینس سرویلنس کا مطالعہ کرنے کے لیے ایک پی53-ریسٹور ایبل امیونوکمپیٹنٹ ٹیومر ماڈل

اس بات کا مطالعہ کرنے کے لیے کہ سنسنی کس طرح سیلولر اور بافتوں کی حالتوں کو دوبارہ پروگرام کرتی ہے، ہم نے ایک ہائیڈروڈینامک ٹیل-وین انجیکشن (HTVI) تکنیک (28) کا استعمال کرتے ہوئے ایک حواس باختہ جگر کے کینسر کا ماڈل تیار کیا جس کو ٹیومر سے مخصوص، بحال کرنے والا p53 مختصر ہیئرپین RNA (shRNA) کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے۔ خاص طور پر، امیونوکمپیٹنٹ Bl/6 چوہوں کے بالغ جگر کے ہیپاٹوسائٹس کو Vivo میں سلیپنگ بیوٹی SB13 ٹرانسپوز ویکٹر اور دو ٹرانسپوسن کنسٹرکٹس (انکوڈنگ NrasG12D-IRES-rtTA اور TRE-tRFP-shp53، یا "NSP") کے ساتھ منتقل کیا گیا تھا جو کہ انضمام میں شامل ہوتے ہیں۔ . اس Tet-On نظام میں، endogenous p53 کو doxycycline (Dox) کی موجودگی میں RFP (تصویر 1A) سے منسلک inducible shRNA کی ایکٹیویشن کے ذریعے دبایا جاتا ہے، جس سے قائم ٹیومر میں سنسنی کے جینیاتی کنٹرول کو فعال کیا جاتا ہے۔ انسانی جگر کے ٹیومر میں TP53 کو غیر فعال کرنے اور سیل کے پھیلاؤ کے سگنلنگ راستوں (جیسے PI3K/AKT اور RAS/MAPK cascades) کو چالو کرنے والے تغیرات کے ہم آہنگی کے ساتھ، oncogenic RAS اور p53 کے دبانے کے درمیان تعاون زیادہ تر ہیپاٹوشن کا باعث بنتا ہے۔ HTVI کے 5 سے 8 ہفتوں کے بعد چوہوں میں ٹیومر کی نشوونما ناقص خصوصیات کے ساتھ۔ ٹرانسکرپشنل پروفائلنگ نے انکشاف کیا کہ یہ مورین ٹیومر انسانی HCC (ضمنی شکل S1A–S1F) کے "پھیلاؤ" طبقے سے ملتے جلتے ہیں، جو انسانی HCC کی مخصوص کلاس ہے جو TP53 اتپریورتنوں (21, 22, 29) کو پناہ دیتی ہے۔

پچھلے کام (15) کی بنیاد پر، ہم نے اندازہ لگایا کہ مندرجہ بالا نظام میں p53 دوبارہ متحرک ہونا سنسنی کو متحرک کرے گا اور اینٹیٹیمر استثنیٰ کو شامل کرے گا۔ اس کے مطابق، ڈوکس کی واپسی نے کئی ہفتوں کے دوران ٹیومر کے ڈرامائی طور پر رجعت کو جنم دیا، جس سے جانوروں کی طویل بقا (تصویر 1B اور C) ہو گئی۔ ڈوکس کے انخلا کے 14 دن بعد ٹیومر کے تجزیے سے p53 shRNA کی متوقع کمی کا انکشاف ہوا (جیسا کہ منسلک RFP رپورٹر نے تصور کیا ہے) اور سنسنی سے وابستہ -galactosidase (SA- -gal) کا جمع ہونا بغیر کسی قابل ذکر اثرات کے۔ RAS-efector p-ERK (تصویر 1D)۔ اسی طرح، SA- -گیل سرگرمی اور SASP سے وابستہ ٹرانسکرپشن پروفائلز میں اضافہ، ایک ساتھ مل کر ایک ساتھ ساتھ پھیلنے والی گرفتاری کے ساتھ، p53 کی بحالی کے 6 سے 8 دن بعد ٹیومر کے خلیات میں دیکھا گیا (ضمیمہ تصویر S2A– S2H)۔ قابل غور بات یہ ہے کہ ان ثقافتوں کو (p53 خاموشی کو برقرار رکھنے کے لیے Dox پر رکھا گیا) Dox-fed immunocompetent چوہوں میں ہم وقت ساز اور فوکل سیکنڈری ٹیومر تیار کیے گئے جو Dox کے انخلاء پر بنیادی ٹیومر کے طور پر اسی طرح کے حرکیات کے ساتھ پیچھے ہٹ گئے (تصویر 1B؛ سپلیمنٹری تصویر S3A– S3E)۔ ٹیٹ-آف سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے یا جزوی p53 shRNA کو شامل کرنے والے کنٹرول کے تجربات نے اس امکان کو مسترد کر دیا کہ ڈوکس نے خود ہمارے ماڈل میں ٹیومر کے رویے پر کوئی اثر ڈالا ہے (ضمنی شکل S3F اور S3G)۔ لہذا، یہ نظام ٹیومر کے خلیوں میں مؤثر طریقے سے حواس باختہ ہونے کی اجازت دیتا ہے بغیر علاج کا سہارا لیے جو میزبان کے مدافعتی نظام کو بھی بدل سکتا ہے۔ اس کی اضافی لچک کو دیکھتے ہوئے، ہم نے ذیل میں بیان کردہ بہت سے میکانکی مطالعات کے لیے آرتھوٹوپک ٹرانسپلانٹ ماڈل (اس کے بعد "NSP" کہا جاتا ہے) استعمال کیا۔ جیسا کہ متوقع ہے، اوپر بیان کردہ ٹیومر کے نشان زدہ رجعت مدافعتی ثالثی تھے۔ لہذا، این ایس پی ٹیومر جو امیونوکمپرومائزڈ نیوڈ اور Rag2−/−Il2rg−/− (R2G2) چوہوں میں ٹرانسپلانٹیشن کے بعد پیدا ہوئے تھے، ایک نمایاں سائٹوسٹیٹک ردعمل سے گزرے لیکن پیچھے ہٹنے میں ناکام رہے، R2G2 جانوروں کے ساتھ انتہائی گہرے نقائص دکھائے گئے (تصویر 1E–G؛ ضمیمہ تصویر S3H اور S3I)۔ چونکہ عریاں چوہے انکولی قوت مدافعت میں عیب دار ہیں اور R2G2 فطری قوت مدافعت کے پہلوؤں کے لیے بھی سمجھوتہ کیا جاتا ہے، ان نتائج سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ماڈل میں ٹیومر کے موثر رجعت کے لیے انکولی مدافعتی نظام ضروری ہے اور میکانکی بنیادوں کو تلاش کرنے کے لیے ایک اچھی طرح سے کنٹرول شدہ تجرباتی سیاق و سباق قائم کرتا ہے۔ ان اثرات.

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

سنیسینس ٹیومر کے مدافعتی چوری سے مدافعتی شناخت کی طرف ایک سوئچ کو متحرک کرتا ہے۔

حواس باختہ ہونے کے ٹیومر کو دبانے والے پیراکرائن اثرات کو نمایاں کرنے کے لیے، ہم نے اس کے بعد ٹیومر کے مدافعتی مائیکرو ماحولیات کی نشاندہی کی جو p53-دب گئے (جسے "پھولنے والا" کہا جاتا ہے) اور p53- بحال کیا گیا (جسے "سینسنٹ" کہا جاتا ہے۔ ) ڈوکس کے انخلا کے 1 ہفتہ کے بعد ٹیومر کے خلیات، ایک ایسا وقت جب حواس باختہ ہو جاتا ہے، لیکن ٹیومر ابھی تک واپس نہیں آئے ہیں (ضمیمہ انجیر S2، S3، اور S4A)۔ سینسنٹ ٹیومر سیلز کو پناہ دینے والے گھاووں میں ∼1۔{8}}کل CD45+ مدافعتی خلیوں میں پھیلنے والے کنٹرول کے مقابلے میں گنا اضافہ ہوا (تصویر 2A؛ refs. 15, 16)۔ امیونو فینوٹائپک اور ہسٹولوجک تجزیوں (ڈاکس کی دستبرداری کے بعد 9 دن) نے انکشاف کیا کہ اس میں لیمفوسائٹس کے فیصد میں نمایاں اضافہ (B خلیات، CD4 T خلیات، اور CD8 T خلیات) اور Gr1+ کے فیصد میں کمی شامل ہے۔ myeloid سے ماخوذ دبانے والے خلیات/نیوٹروفیلز (CD11b+Gr1+Ly6Clo؛ تصویر 2B؛ سپلیمنٹری انجیر۔ S4B)۔ اگرچہ کل CD45 آبادی کے فیصد کے طور پر میکروفیجز کا حصہ کوئی تبدیلی نہیں رہا، مطلق تعداد میں واضح طور پر اضافہ ہوا (تصویر 2A اور B؛ ضمنی شکل S4C–S4E)۔ T-cell کی آبادی کے اندر، CD8 T خلیات کے جمع ہونے سے اینٹیجن کے تجربے (CD44+, CD69+) کے مارکر دکھائے گئے اور انفیکٹر سیلز کی بڑھتی ہوئی آبادی کو پناہ دی گئی 2C؛ حوالہ 30)۔ مدافعتی ماحول کی اس مجموعی طور پر دوبارہ تشکیل کے نتیجے میں CD3 میں نمایاں اضافہ ہوا: ٹیومر کے لیے نیوٹروفیل تناسب جو کہ سینسنٹ سیلز (ضمنی شکل S4F) کو پناہ دیتے ہیں، CD3: نیوٹروفیل تناسب میں اسی طرح کے اضافے کے ساتھ ہم آہنگ اثرات جو انسان میں مدافعتی رد عمل سے وابستہ ہیں۔ جگر کے ٹیومر (31) ٹشو کلیئرنگ کے بعد 3D امیجنگ کا استعمال کرتے ہوئے دوبارہ ماڈلنگ کا تصور کیا جا سکتا ہے (تصویر 2D؛ ضمنی تصویر S4G اور S4H؛ ضمنی ویڈیو S1؛ ref 32)۔

شکل 1. سنسنی کے مدافعتی نگرانی کا مطالعہ کرنے کے لیے ایک پی53-بحال ٹیومر ماڈل۔ A، HTVI کے ذریعے ڈیلیور کردہ سلیپنگ بیوٹی ٹرانسپوسن سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے بحالی کے قابل، NRAS سے چلنے والے ماؤس لیور کینسر ماڈل کی جنریشن۔ (BioRender.com کے ساتھ تخلیق کیا گیا ہے۔) B، HTVI کا نمائندہ الٹراسونوگرام اور p53 بحالی کے بعد اشارہ کردہ وقت پر آرتھوٹوپک انجیکشن جگر کے کینسر کے ماڈل۔ C، HTVI ماڈل میں چوہوں کی بقا کا تجزیہ۔ D، نمائندہ ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E)، immunofluorescence (IF)، اور Senescence-associated -galactosidase (SA- -gal) p53- کے داغ دھبے (p53 بند) اور بحال ہوئے (p53 آن کے لیے 14 دن) HTVI ماڈل سے تیار کردہ ٹیومر کے حصے۔ اسکیل بارز، 5{{30}} μm۔ E–G، GFP-luciferase ویکٹر سے NSP ٹیومر سیلز کا امیونوکمپیٹنٹ اور امیونوڈیفیشینٹ ماؤس سٹرین کے جگر میں آرتھوٹوپک انجیکشن۔ ای، ٹیومر کے سائز میں تبدیلی p53 کی بحالی پر الٹراساؤنڈ کے ذریعے ماپا جاتا ہے۔ R2G2، Rag2-Il2rg ڈبل ناک آؤٹ ماؤس۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ n ہر تناؤ کے لیے 9 سے زیادہ یا اس کے برابر۔ F، نمائندہ میکروسکوپک تصویریں p53 کے 21 دن پر یا ٹیومر کے اختتامی نقطہ p53 پر۔ G، p53 کی بحالی پر دن 21 پر GFP کے لیبل والے ٹیومر سیلوں کا نمائندہ IHC داغ۔ اسکیل بارز، 100 μm۔ **، پی <0.01؛ ***، پی <0.001۔

سینسنٹ ٹیومر خلیوں کی مدافعتی نگرانی کے لئے ذمہ دار مخصوص مدافعتی خلیوں کی اقسام کی نشاندہی کرنے کے لئے، ہم نے آرتھوٹوپک این ایس پی ٹیومر کو پناہ دینے والے چوہوں کے متوازی گروہ تیار کیے اور ڈوکس کے انخلا کے بعد ٹیومر کے رجعت پر مختلف مدافعتی خلیوں کی آبادی کو ختم کرنے کے اثرات کا جائزہ لیا۔ جبکہ نیوٹروفیلز/مونوسائٹس (Gr1)، قدرتی قاتل (NK) خلیات (NK1.1)، اور CD4 T خلیات (GK1.5) کو نشانہ بنانے والے اینٹی باڈیز کو مسدود کرنے کا کوئی اثر نہیں ہوا، CD8 T خلیات (2.43) اور میکروفیجز (liposomal clodronate کا استعمال کرتے ہوئے) کی کمی۔ ، جو منتخب طور پر میکروفیجز (CD11b+F4/80+) کو نشانہ بناتا ہے لیکن کلاسیکی ڈینڈریٹک خلیات کو نہیں (CD11b−CD11c+MHC−II+CD103+؛ refs. 33, 34) نمایاں طور پر خراب ٹیومر ریگریشن (تصویر 1)۔ 2E؛ ضمنی شکل S4I)۔ اس بات کی نشاندہی کرنے کے لیے کہ کس طرح پی53- سے چلنے والے ٹیومر سنسنی کے نتیجے میں پیداواری اینٹیٹیمر قوت مدافعت پیدا ہوتی ہے، ہم نے تازہ الگ تھلگ CD45 خلیوں کا سنگل سیل RNA-seq (scRNA-seq) تجزیہ کیا۔ ڈوکس کی واپسی کے بعد ابتدائی ٹیومر (8 دن؛ ضمنی شکل S5A اور S5B) اور اس عمل میں ثالثی کرنے والے مدافعتی خلیوں کی اقسام کے اندر سیل کی حالت کی تبدیلیوں کو پکڑنے کے لیے ڈیفرینشل وافر ٹیسٹنگ الگورتھم میلو (35) کا استعمال کیا (ضمیمہ انجیر S5C–S5F)۔ ٹیومر ریگریشن میں ان کی شراکت کے مطابق، CD8 T-cell اور میکروفیج ذیلی آبادیوں نے مقدار اور حالت میں نمایاں تبدیلیاں ظاہر کیں۔ T خلیات کے بارے میں، پھیلنے والے (p53-دبے ہوئے) ٹیومر کو CD8 T ریاستوں میں نمایاں طور پر افزودہ کیا گیا تھا جو دونوں dysfunction مارکر (Tox, Tigit, Lag3, Ctla4, Pdcd1/PD1، اور Cd160) اور ایکٹیویشن مارکرز کے اعلی اظہار کی نمائش کرتے ہیں۔ تصویر 2F اور G؛ ضمنی تصویر S5G؛ ضمنی جدول S1)۔ ان CD8 T خلیوں نے Tnfrsf9 کی اعلی سطح کو بھی دکھایا، ایک مارکر T-cell ذیلی سیٹوں کو بیان کرنے کے لئے جانا جاتا ہے جو انسانی HCC اور دیگر کینسر کی اقسام میں دوبارہ متحرک ہونے کی صلاحیت رکھتے ہیں (36, 37)۔ اس کے بالکل برعکس، سنسنی خیز (p53-دوبارہ فعال) گھاووں میں، CD8 T کی آبادی بہت زیادہ متحرک دکھائی دیتی ہے، جس میں dysfunction مارکر کی کم سطح اور انفیکٹر سائٹوکائنز کا اعلی اظہار ظاہر ہوتا ہے (مثال کے طور پر، Ifng, Tnf؛ ضمنی جدول S1)۔ اس کے مطابق، بلک ٹیومر ٹشوز کی ٹرانسکرپشنل پروفائلنگ نے رجعت سے گزرنے والے سینسنٹ ٹیومر میں مدافعتی فعال اور سائٹوٹوکسک دستخط ظاہر کیے (ضمیمہ انجیر S5H؛ حوالہ 38)۔

شکل 2. سنسنی ایک مدافعتی چوری سے مدافعتی شناخت کے ٹیومر سوئچ کو متحرک کرتی ہے۔ A، CD45 اور GFP کی نمائندہ تصاویر جو بالترتیب p53-دبی ہوئی اور p53-بحال شدہ ٹیومر (p53 کی بحالی کے 7 دن بعد) میں مدافعتی خلیوں اور ٹیومر کے خلیوں کو نشان زد کرتی ہیں۔ ٹھیک ہے، CD45+ سٹیننگ کے علاقے کی مقدار کا حساب فی ماؤس 3 بے ترتیب فیلڈز سے کیا گیا تھا۔ ہر ڈاٹ ماؤس کی نمائندگی کرتا ہے۔ B، آرتھوٹوپک NSP جگر کے ٹیومر ماڈل میں عالمی مدافعتی منظر نامے کا فلو سائٹومیٹری تجزیہ۔ سینسنٹ ٹیومر کی امیونو فینوٹائپنگ ڈوکس کے انخلا کے 9 دن بعد کی جاتی ہے، یہ ایک ایسا وقت ہے جب سینسنٹ حالت مکمل طور پر قائم ہو جاتی ہے، پھر بھی بڑے پیمانے پر ٹیومر کے رجعت سے پہلے۔ G-MDSC، granulocytic myeloid-derived suppressor خلیات؛ M-MDSC، monocytic myeloid سے ماخوذ دبانے والے خلیات۔ ڈیٹا کو 2 آزاد تجربوں سے جمع کیا جاتا ہے، جس میں پھیلنے والے گروپ میں n=7 اور سینسنٹ گروپ میں n=9 ہوتے ہیں۔ نوٹ کریں کہ جیسا کہ سینسنٹ این ایس پی ٹیومر گھاووں (A) میں CD45+ خلیات کی مطلق تعداد بڑھ جاتی ہے، اسی طرح ظاہر کردہ سیل اقسام کی کل تعداد بھی بڑھ جاتی ہے۔ C، CD8 T خلیات کا فلو سائٹومیٹری تجزیہ۔ ڈیٹا کو 2 آزاد تجربوں سے جمع کیا جاتا ہے، جس میں n=11 پھیلاؤ میں اور n=10 سینسنٹ گروپس میں ہوتے ہیں۔ Dox کی واپسی کے 9 دن بعد تجربات کیے گئے۔ D، آرتھوٹوپک NSP جگر کے ٹیومر کی نمائندہ ٹشو صاف کرنے والی تصاویر۔ ٹی سیلز، نیوٹروفیلز، اور ویسکولیچر پر بالترتیب CD3، MPO، اور CD31 سٹیننگ کا لیبل لگا ہوا ہے۔ ڈوکس کی واپسی کے 9 دن بعد نمونے جمع کیے گئے۔ E، اینٹی باڈیز یا دوائیوں کا استعمال کرتے ہوئے مخصوص مدافعتی خلیوں کی اقسام کو ختم کرنے کے بعد چوہوں میں p53 کی بحالی پر الٹراساؤنڈ کے ذریعے ٹیومر کے سائز میں تبدیلی کی پیمائش کی جاتی ہے۔ ایف، لیفٹ، یونیفارم مینی فولڈ اپروکسیمیشن اینڈ پروجیکشن (UMAP) پلاٹ CD8 T سیلز کا p53-دبا ہوا پھیلاؤ (PRO) اور p{{30}}ری ایکٹیویٹڈ سینسنٹ (SEN) ٹیومر سے الگ تھلگ۔ دائیں، CD8+ T خلیات میں T-cell exhaustion marker genes کا جین سیٹ افزودگی کا تجزیہ پھیلا ہوا (p53-دبا ہوا) بمقابلہ سینسنٹ (p53-دوبارہ فعال) ٹیومر۔ NES، معمول کے مطابق افزودگی سکور؛ Pval، P قدر۔ G, UMAP پلاٹ منتخب جینز (Cd8a, Cd44, Tnfrsf9, Cd69, Tox, اور Fasl) کے درمیان CD8 T خلیات کے درمیان سینسنٹ سے الگ تھلگ (p{{40}}دوبارہ فعال) اور پھیلنے والے (p{ {41}}دبی ہوئی) ٹیومر۔ H، CD8 T خلیات اور F4/80-آرتھوٹوپک NSP جگر کے ٹیومر میں مثبت میکروفیج سٹیننگ کی نمائندہ امیونو فلوروسینس تصاویر۔ ڈوکس کی واپسی کے 9 دن بعد ٹیومر کے نمونے جمع کیے گئے تھے۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ تمام اسکیل بارز، 100 μm۔ ایک دو دم والا اسٹوڈنٹ ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا۔ *، پی <0.05؛ **، پی <0.01۔

میکروفیج ٹوکری میں تبدیلیوں نے مزید شواہد فراہم کیے کہ ٹیومر سیل کی سنسنی نے مدافعتی چوری سے نگرانی کے سوئچ کو متحرک کیا۔ لہذا، scRNA-seq، امیونو فینوٹائپنگ، اور ہسٹولوجی نے اشارہ کیا کہ ٹیومر سے منسلک میکروفیج فینوٹائپس F4/80lo; CD11chi اسٹیٹس (کلسٹر 8)، بشمول مدافعتی دبانے والی PD-L1+ آبادی (خراب تشخیص کے ساتھ انسانی HCC ٹیومر کی خصوصیت؛ refs. 39, 40) سے F4/80hi؛ CD11c− ریاستیں (کلسٹر 0)، جس کی تعریف ایک اینٹیجن پریزنٹیشن جین دستخط کے اعلی اظہار سے ہوتی ہے (ضمنی انجیر S5E–S5J اور S6A اور S6B؛ ضمنی جدول S1)۔ قابل غور، یہ سنسنی سے وابستہ F4/80hi؛ CD11c− macrophages خاص طور پر liposomal clodronate علاج (ضمنی شکل S6C–S6E) کے لیے حساس تھے، جس کے نتیجے میں فعال CD8 کے حصے میں بھی نمایاں کمی واقع ہوئی لیکن CD4 T خلیات (ضمنی شکل S6F اور S6G) میں نہیں، جو کہ CD8 کی نشاندہی کرتا ہے۔ ٹی پر منحصر مدافعتی ردعمل جس میں میکروفیجز کے ساتھ تعاون شامل ہے۔ اس کے مطابق، ہسٹولوجک تجزیوں نے اس بات کی تصدیق کی کہ جمع ہونے والے CD8 T خلیات اور F4/80+ میکروفیجز کو ٹیومر میں سنسنی انڈکشن کے بعد کثرت سے ہم آہنگ کیا گیا تھا (تصویر 2H؛ ضمنی شکل S4D)۔ اجتماعی طور پر، یہ حیاتیاتی اور سالماتی تجزیے ایک ایسے ماڈل کی حمایت کرتے ہیں جس میں ٹیومر سیل کی سنسنی میکروفیجز اور CD8 T-cell کی حالتوں میں تبدیلیوں کے ذریعے ثالثی سے مدافعتی چوری سے مدافعتی نگرانی کی طرف ایک اچانک سوئچ کو آمادہ کرتی ہے، جس سے نتیجہ خیز اینٹیٹیمر استثنیٰ ہوتا ہے اور بالآخر، ٹیومر کو رد کیا جاتا ہے۔

سنیسینس ٹشو سینسنگ پروگرامز اور سیل سرفیسوم لینڈ اسکیپ کو دوبارہ تیار کرتا ہے۔

اس کے بعد ہم مدافعتی نظام کو نظر آنے والے ٹیومر خلیوں کو پیش کرنے کے لئے ذمہ دار مالیکیولر میکانزم کو سمجھنے کے لئے مذکورہ ماڈل کا استحصال کرنے کے لئے نکلے۔ سینز سینس انڈکشن میں ایک کرومیٹن ریموڈلنگ پروگرام شامل ہوتا ہے جو پھیلنے والے جینز کو خاموش کر دیتا ہے اور SASP عوامل کو انکوڈنگ کرنے والے بہت سے جینز کو چالو کرتا ہے، بعد کا پروگرام زیادہ تر انحصار کرنے والے ریڈر BRD4 (10) پر ہوتا ہے۔ اس لیے ہم نے NSP سیلز پر ٹرانسکرپشنل پروفائلنگ کے تجربات کیے جو کہ JQ1 کی غیر موجودگی اور موجودگی میں پھیلنے والی (p53-دبائی ہوئی) بمقابلہ سنسنیٹی (p53- بحال شدہ) حالات کے تحت کیے، ایک ایسی دوا جو BRD4 فنکشن کو روکتی ہے (ضمنی جدول S2) )۔ توقعات کے مطابق، p53 کی بحالی نے ڈرامائی طور پر پھیلاؤ والے جینوں کے اظہار کو کم کیا اور معروف SASP عوامل (تصویر 3A؛ ضمنی شکل S7A؛ ref. 7) کے اظہار کو متاثر کیا، بشمول T خلیات کو متحرک کرنے کے لیے کئی سائٹوکائنز (Cxcl16, Il18) ) یا میکروفیج ایکٹیویشن اور بھرتی (Csf2، انکوڈنگ پروٹین GM-CSF) یا پہلے سنسنی سے منسلک (Igfbp7، Igfbp3، Pdgfa)۔ جیسا کہ پچھلے کام (10) سے متوقع تھا، بہت سے اپریگولیٹڈ SASP انکوڈنگ ٹرانسکرپٹس (∼65%) BRD4- پر منحصر تھے (ضمنی شکل S7B)۔ اسی طرح، نشوونما کے عوامل اور مدافعتی ماڈیولرز کی ایک رینج سنسینٹ سیلز سے چھپائی گئی تھی، جیسا کہ ملٹی پلیکسڈ سائٹوکائن اسسیس کے ذریعے اندازہ کیا گیا تھا، بشمول T-cell اور macrophage پرکشش CCL5، CXCL9، اور GMCSF، نیز ویسکولیچر ریموڈلنگ فیکٹر VEGF (Supplementary FIGF)۔ S7C)۔ لہذا، بحال شدہ NSP ٹیومر سیلز میں سنسنی ایک مضبوط SASP سے وابستہ ہے، جو اوپر بیان کردہ مدافعتی ماحولیاتی نظام کی نشان زد دوبارہ تشکیل کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔

حیرت انگیز طور پر، امتیازی طور پر اظہار شدہ جینز (DEG) کے لیے ذیلی خلیاتی لوکلائزیشن کے امتحان سے یہ بات سامنے آئی کہ سینسنٹ ٹیومر سیلز نے نہ صرف خفیہ ("ایکسٹرا سیلولر،" EC) SASP عوامل کے اظہار میں اضافہ کیا، بلکہ سطحی پروٹین کو انکوڈنگ کرنے والے ٹرانسکرپٹس کے اظہار کی سطح میں بھی بڑی تبدیلیاں ظاہر کیں۔ ("پلازما جھلی،" PM؛ تصویر 3B)۔ درحقیقت، کل اپ ریگولیٹڈ ڈی ای جیز میں سے 25% نے PM پروٹین کو انکوڈ کیا، ایک اہم افزودگی جو بے ترتیب تقسیم سے ہٹ گئی (15%؛ تصویر 3B)۔ متحرک PM-DEGs کو پروٹین ٹائروسین کناز سگنلنگ ٹرانزیکشن (Nrp1، Egfr)، سائٹوکائن ریسیپٹر ایکٹیویٹی (Ifngr1)، ایکسٹرا سیلولر میٹرکس ریسیپٹرز (Itgb3، Cd44)، اور آئن ٹرانسپورٹرز (Slc12a1، Slc24a1، Slc24/capturciedes) سے منسلک کیا گیا تھا۔ Cd44، Vcam1، اور Itgb3)، تجویز کرتے ہیں کہ سنسنی خیز خلیوں میں اپنے ماحول کے ساتھ تعامل کرنے اور اسے محسوس کرنے کی بہتر صلاحیت ہو سکتی ہے (تصویر 3C؛ ضمنی شکل S7D؛ refs. 41-43)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ان میں سے بہت سے پی ایم پروٹینز کے اظہار میں سنسنی سے وابستہ اضافے کو JQ1 نے ختم کر دیا، یہ تجویز کرتا ہے کہ ان کی شمولیت SASP کے ساتھ مل کر وسیع تر کرومیٹن ریموڈلنگ پروگرام کا حصہ ہو سکتی ہے (تصویر 3D؛ حوالہ 10)۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ PM پروٹین کو انکوڈنگ کرنے والے جینز کی نقل میں بھی گہری تبدیلیاں p53-کی کمی NSP ٹیومر سیلز میں ہوئیں جن کا علاج سنسنی پیدا کرنے والی دوائیوں کے امتزاج trametinib اور palbociclib (ضمنی شکل S7E، ٹاپ پینل؛ سپلیمنٹری ٹیبل S2; حوالہ 20) اور 13 جینیاتی طور پر متنوع TP53 WT اور TP53- اتپریورتی انسانی کینسر لائنوں کی ایک سیریز میں جو جگر، چھاتی، پھیپھڑوں، اور بڑی آنت کے کینسر سے حاصل ہوتے ہیں جو مختلف محرکات (تصویر 3E؛ ضمنی اعداد و شمار کے ذریعے پیدا ہوتے ہیں۔ S7F؛ حوالہ 44)۔ یہ خاص طور پر اپ ریگولیٹڈ (لیکن کم نہیں) PM-DEGs کے لیے مضبوط تھا، جو EC SASP عوامل (تصویر 3E؛ ضمنی شکل S7E، نیچے پینل) کے لیے مشاہدہ کیے گئے اثرات کی یاد دلاتا ہے۔ لہٰذا، ہم نے اپنے ماڈل میں سیل سطح کے پروٹین کا نمایاں طور پر تبدیل شدہ اظہار p53-حوصلہ افزائی سے آگے بڑھتا ہے اور ہو سکتا ہے کہ یہ سنسنی خیز حالت کا خاصہ ہو۔

تصویر 3. سنسنس ٹشو سینسنگ پروگراموں اور سیل سرفیسوم لینڈ اسکیپ کو دوبارہ تیار کرتا ہے۔ A، RNA-seq ڈیٹا کا جین سیٹ افزودگی تجزیہ (Reactome) proliferating (PRO, p53 off) بمقابلہ senescent (SEN, p53 on 8 دن) NSP جگر کے ٹیومر خلیات وٹرو میں۔ NES، نارملائزڈ افزودگی سکور۔ B، RNA-seq سے تمام دریافت شدہ جینوں [ٹرانسکرپٹس فی کلو بیس ملین (TPM) > 1] میں DEGs (P < 0.05؛ فولڈ چینج> 2) کا ذیلی سیلولر لوکلائزیشن۔ سی، جین آنٹولوجی (جی او) ڈی ای جیز کا تجزیہ جو پی ایم پروٹین کو سنسنی خیز خلیوں میں اپ گریگولیٹ کرتے ہیں۔ ٹی ایم، ٹرانس میمبرن۔ D، JQ1 علاج کی موجودگی یا غیر موجودگی میں تمام DEGs کا ٹرانسکرپٹومک تجزیہ C1 کلسٹر (سرخ رنگ میں) JQ1 کے لیے حساسیت کے لیے مخصوص جینز پر مشتمل ہے، اور C4 کلسٹر (نیلے رنگ میں) JQ1 کے لیے حساس پھیلاؤ کے لیے مخصوص جینز پر مشتمل ہے۔ E، DEGs کے ذیلی سیلولر لوکلائزیشن (تصویر 2D کے طور پر) اور فشر کے عین مطابق ٹیسٹ کے ذریعے SENESCOPedia سے RNA-seq ڈیٹاسیٹ کا میٹا تجزیہ بے ترتیب تقسیم سے منحرف EC/PM-DEGs کی نسبتاً افزودگی کا جائزہ لینے کے لیے۔ ضمنی شکل S7E اور S7F بھی دیکھیں۔ F، ماس اسپیکٹومیٹری (MS) پھیلنے والے اور سنسنی خلیوں میں PM سے افزودہ پروٹوم کا تجزیہ۔ پروٹین کی سطح کو تمام نمونوں کے پروٹین کے اوسط اظہار کے مطابق معمول بنایا جاتا ہے۔ کنٹرولز ایسے نمونے ہیں جو بائیوٹن لیبلنگ کے بغیر پس منظر کے طور پر کام کرتے ہیں۔ سرخ اور نیلے رنگ کے خانے بالترتیب سنسنی خیز اور پھیلنے والے خلیوں میں افزودہ پروٹین کی نمائندگی کرتے ہیں۔ n=6 دونوں سنسنی خیز اور پھیلنے والے تجرباتی گروپوں کے لیے، اور n=3 اور 4، بالترتیب، ان کے کنٹرول کے لیے۔ G، اپریگولیٹڈ اور ڈاون ریگولیٹڈ جین کارڈز کی تقسیم ایم ایس کے ذریعے پروفائل کردہ پی ایم پروٹین کی تشریح۔ NC، کوئی تبدیلی نہیں. H، MS کے ذریعے پروفائل کردہ GeneCards- تشریح شدہ PM پروٹین کا آتش فشاں پلاٹ۔

پروٹین کی سطح پر سنسنی میں PM عوامل کی عالمی دوبارہ تشکیل کی توثیق کرنے کے لئے، ہم نے بایوٹین لیبلنگ افزودگی کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے آئسوجینک پھیلاؤ اور سنسنی والے NSP ٹیومر خلیوں پر سطحی پروٹومکس کا مظاہرہ کیا، جس میں سیل کی سطح کے پروٹینوں کو جھلی سے ناقابل تسخیر بایوٹین کا لیبل لگایا گیا تھا۔ پاک، اور ماس اسپیکٹومیٹری کے تابع (تصویر 3F؛ ضمنی تصویر S7G؛ حوالہ 45)۔ ہر حالت کے تحت حیاتیاتی نقلوں کے درمیان ایک مضبوط ارتباط کا مشاہدہ کیا گیا (ضمنی شکل S7H)، جس کا پتہ لگایا گیا پروٹین پی53-حوصلہ افزائی کے بعد تشریح شدہ PM پروٹینز کے لیے 60% تک افزودہ کیا گیا۔ 887 پروٹینوں میں سے جن کا دوبارہ تولیدی طور پر پتہ لگایا گیا تھا، 50٪ سے زیادہ کا الگ الگ اظہار کیا گیا تھا۔ ہمارے ٹرانسکرپشنل پروفائلنگ ڈیٹا میں مشاہدہ کردہ سمت کے ساتھ زیادہ تر امتیازی طور پر اظہار شدہ پروٹین اچھی طرح سے منسلک ہیں، حالانکہ کچھ کو ٹرانسکرپٹ لیولز (ضمیمہ انجیر S7I) میں اسی تبدیلی کے بغیر مختلف طریقے سے ظاہر کیا گیا تھا۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

سنسنی انڈکشن پر ماس اسپیکٹومیٹری کے ذریعے پائے جانے والے تشریح شدہ سیل-سرفیس پروٹینز میں پہلے سے سنسنی سے منسلک کئی شامل ہیں (مثال کے طور پر، CD44 اور VCAM1)، مختلف گروتھ فیکٹر اور سائٹوکائن ریسیپٹرز (مثال کے طور پر، EGFR، ICAM1، اور IFNGR1)، اور دیگر کم خصوصیات والے عوامل (تصویر 1) 3F–H؛ ضمنی شکل S7J اور S7K)۔ قابل غور بات یہ ہے کہ ہمارے ماڈل میں شناخت شدہ سیل کی سطح سے افزودہ پروٹینوں کے سیٹ نے انسانی فبرو بلاسٹس میں شناخت شدہ ان کے ساتھ محدود اوورلیپ دکھایا جو آنکوجین سے متاثرہ سنسنی (46) سے گزر رہے ہیں، جو کہ خلیوں کی اقسام یا سنسنی کے محرکات کے درمیان متفاوت ہونے کی تجویز کرتے ہیں۔ قطع نظر، یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ ان کے خفیہ پروگرام میں دوبارہ کام کرنے کے علاوہ، سینسنٹ خلیات سیل سطح کے پروٹین کے مواد اور کثرت میں گہری تبدیلیوں سے گزرتے ہیں اور اس کا مطلب یہ ہے کہ سنسنی خیز خلیے مخصوص مائیکرو ماحولیات کو محسوس کرنے والی خصوصیات حاصل کرتے ہیں جو ان کی حالت اور قسمت کو متاثر کر سکتے ہیں۔ .

سینسنٹ سیلز IFNg کو محسوس کرنے اور IFNg سگنلنگ کو بڑھاوا دینے کے لیے پرائمڈ ہیں۔

ایسے راستوں کی نشاندہی کرنے کے لیے جو عملی طور پر اثر انداز ہو سکتے ہیں کہ سنسنی خیز خلیات اپنے ماحول کو کس طرح محسوس کرتے ہیں، ہم نے اینٹیٹیمر استثنیٰ سے منسلک سنسنی سے وابستہ تبدیلیوں کے لیے ٹرانسکرپشن اور پروٹومک ڈیٹاسیٹس کی کان کنی کی۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ جین آنٹولوجی (GO) کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ ٹائپ II انٹرفیرون گاما (IFN) رسپانس (47) سرفہرست 5 تشریح شدہ راستوں میں سے تھا جو سنسنی کے دوران افزودہ ہوتے ہیں اور سیل اسٹیٹ کے مخصوص بڑھانے والے پروگراموں (یعنی، JQ1-حساس ہوتے ہیں۔ ؛ یعنی، تصویر 3D کا "C1"؛ ضمنی تصویر S8A)۔ تبدیل شدہ ٹرانسکرپٹس میں، ہم نے IFN سگنلنگ کے متعدد مثبت ریگولیٹرز کو نوٹ کیا، بشمول IFN ریسیپٹر سبونائٹ IFNGR1 (ہمارے پروٹومک ڈیٹا سے سب سے نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ شدہ پروٹینز میں سے ایک) اور ایک سے زیادہ انٹرفیرون انفیکٹرز (Irf1, Irf7، اور Irf9؛ refs. 47, 48) ؛ تصویر 4A–C؛ ضمنی تصویر S8B اور S8C)۔ ان Brd4-حساس اپریگولیٹڈ جینز کے علاوہ، IFN سگنلنگ (Ptpn2، Socs1، اور Socs3) کے منفی ریگولیٹرز کو انکوڈنگ کرنے والے ٹرانسکرپٹس میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (تصویر 4C؛ refs. 49, 50)۔ اسی طرح کی تبدیلیاں NSP ٹیومر سیلوں میں نوٹ کی گئیں جن کا علاج مختلف سنسنی انڈیوسرز (تصویر 4C؛ ضمنی شکل S8D–S8G) کے ساتھ کیا گیا اور، زیادہ وسیع طور پر، 13 انسانی چھاتی، پھیپھڑوں-، جگر-، اور بڑی آنت سے حاصل ہونے والے کینسر کے پینل میں۔ سیل لائنیں جوش و خروش کے لیے متحرک ہوئیں (تصویر 4D؛ حوالہ 44)۔ لہذا، قسم II IFN سگنلنگ اجزاء کے اظہار میں تبدیلیاں سنسینٹ سیلز کی ایک عمومی خصوصیت ہیں، جو سیل کی قسم، سیل جین ٹائپ، پرجاتیوں اور سنسنی انڈیسر کی نوعیت سے آزاد ہیں۔ IFN سگنلنگ اثر کرنے والوں میں بیک وقت اضافہ اور منفی ریگولیٹرز میں کمی نے ہمیں یہ قیاس کرنے پر مجبور کیا کہ سینسنٹ سیلز اپنے ماحول میں IFN کو محسوس کرنے کے لیے پرائم ہو جاتے ہیں۔ اس مفروضے کو براہ راست جانچنے کے لیے، ہم نے دوبارہ پیدا ہونے والے IFN کے ساتھ پھیلنے والے اور سنسنی خیز NSP خلیات کا علاج کیا اور JAK – STAT سگنلنگ ایکٹیویشن کے امیونو بلوٹنگ تجزیہ کیا۔ اگرچہ IFN نے دونوں ریاستوں میں STAT1 کی بنیادی سطحوں میں ڈرامائی طور پر اضافہ کیا، لیکن سنسنی خلیوں نے زیادہ فاسفوریلیٹڈ STAT1 جمع کیا، قطع نظر اس کے کہ سنسنی کے محرک (تصویر 4E؛ ضمنی شکل S8H)۔ مزید برآں، ہمیں p53- بحال شدہ سینسنٹ سیلز میں فاسفوریلیٹڈ JAK1 کی بڑھتی ہوئی سطح بھی ملی، جو IFN (ضمیمہ انجیر S8I) کو سینس کرنے والے سینسنٹ سیلز میں زیادہ فعال JAK–STAT سگنلنگ پاتھ وے پر ہماری تلاش میں مزید معاون ہے۔ جیسا کہ نقلی تجزیوں سے پیشین گوئی کی گئی ہے، سنسنی نے PTPN2 پروٹین (51) میں کمی کو بھی متحرک کیا، قطع نظر کہ خارجی IFN کی موجودگی (تصویر 4E)۔ اس طرح، سینسنٹ سیلز ماحول میں IFN کے ارتکاز کو محدود کرنے کے جواب میں IFN سگنلنگ کو زیادہ مؤثر طریقے سے چالو کرتے ہیں۔

سنیسینس اور EC IFNg باہمی تعاون سے اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن مشینری کو اپ گریڈ کرتے ہیں۔

سنسنی پروگرام میں IFN سینسنگ کے فنکشنل شراکت کو بہتر طور پر سمجھنے کے لیے، ہم نے اگلی فینوٹائپک اور ٹرانسکرپشنی حالتوں کا موازنہ کیا جو پھیلنے اور p53-ریکومبینینٹ IFN کے ساتھ کم (50 pg/mL) پر علاج کیے جانے والے سینسنٹ NSP ٹیومر سیلز کو بحال کیا۔ زیادہ (1 این جی / ایم ایل) خوراک۔ اگرچہ پھیلنے والے یا سنسنی خیز ٹیومر خلیوں میں exogenous IFN کے اضافے نے جانچ کی گئی خوراکوں میں کسی بھی قسم کے خلیے کی عملداری، پھیلاؤ، یا SASP جین اظہار پر نہ ہونے کے برابر اثر ڈالا (تصویر 5A؛ ضمنی شکل S9A–S9D)، میں نمایاں تبدیلیاں سنسنی خیز حالت سے منسلک IFN پاتھ وے جین کا اظہار دیکھا گیا۔ خاص طور پر، پھیلتے اور سنسنی خیز خلیوں میں ہال مارک "IFN رسپانس دستخط" کے زیر نگرانی کلسٹرنگ نے تین DEG ماڈیولز کا انکشاف کیا: (i) جینز جو کہ IFN (بشمول مذکورہ منفی ریگولیٹرز) سے قطع نظر جوانی کے دوران کم ہوتے ہیں۔ (ii) وہ جین جو جوانی کے دوران IFN سے قطع نظر الگ ہوجاتے ہیں؛ اور، دلچسپ بات یہ ہے کہ، (iii) DEGs کا ایک بہت بڑا مجموعہ جو سنسنی اور IFN (تصویر 5B) کے امتزاج سے باہمی تعاون سے تیار کیا گیا ہے۔ لہذا، سنسنی IFN کے نقلی ردعمل میں مقداری اور معیاری تبدیلیوں کو متحرک کرتی ہے۔ انکولی مدافعتی نگرانی کے لیے خلیات کی حساسیت کو ریگولیٹ کرنے والے IFN سگنلنگ کی ایک اچھی طرح سے قائم شدہ پیداوار MHC کلاس I کے مالیکیولز (MHC-I؛ refs. 47, 52) کے ذریعے ثالثی اینٹیجن پریزنٹیشن کی بڑھتی ہوئی صلاحیت ہے۔ درحقیقت، بہت سے جین جو سنسنٹ سیلز (کلاس ii جینز) میں اپ ریگولیٹ ہوتے ہیں یا خارجی IFN (کلاس iii جینز) کی موجودگی میں سپر انڈس ہوتے ہیں ان میں اینٹیجن پریزنٹیشن مشینری کے اجزاء شامل ہوتے ہیں۔ سنسنی (کلاس II جین) کے دوران پیدا ہونے والے جینوں میں Tap1، اینٹیجن پروسیسنگ سے وابستہ ٹرانسپورٹرز، اور Psme1، اینٹیجن پروسیسنگ (53) سے وابستہ ایک پروٹیزوم عنصر تھے۔ خارجی IFN (کلاس iii جینز) کے لیے انتہائی حساسیت رکھنے والوں میں Nlrc5، MHC-I جینز (54) کا ٹرانسکرپشنل کوایکٹیویٹر شامل تھا۔ MHC-I اسمبلی فیکٹر Tapbp؛ اور MHC-I ذیلی یونٹ B2m۔ دو دوسرے طبقے کے جینز امیونوپروٹیزوم (Psmb8 اور Psmb9) کے اجزاء تھے جن کے اعمال پیش کردہ پیپٹائڈس کے ذخیرے کو تبدیل کر سکتے ہیں جب زیادہ اظہار کیا جاتا ہے اور یہ مدافعتی چوکی ناکہ بندی (55) کے ٹیومر کے بہتر ردعمل سے وابستہ ہیں۔ سینسنٹ سیلز میں IFN کے اس بڑھے ہوئے آؤٹ پٹ کی تصدیق RT-qPCR سے ہوئی تھی اور اسے خارجی IFN (تصویر 5C؛ سپلیمنٹری ٹیبل S3) کی اس سے بھی زیادہ سطح پر برقرار رکھا گیا تھا۔ اوپر بیان کیے گئے ملٹی فیکٹوریل عمل سے مطابقت رکھتے ہوئے، یہ اثر ٹیومر کے خلیوں کے پھیلاؤ میں نہیں دیکھا گیا، یہاں تک کہ وہ لوگ جو IFNGR1 cDNA سے زیادہ اظہار کرتے ہیں اور/یا IFN (ضمنی شکل S10A–S10D) کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے۔

پیکر 4. سنسنٹ سیلز IFN سگنلنگ کو سمجھنے اور بڑھانے کے لیے بنائے گئے ہیں۔ A اور B، بڑے پیمانے پر سپیکٹرو میٹری (A) کے ذریعے پروفائل کردہ اور بہاؤ سائٹومیٹری (B) کے ذریعے توثیق شدہ پھیلنے والے اور سنسنی خیز خلیوں پر IFNGR1 کی سطح۔ AU ایک صوابدیدی اکائی ہے۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ n=6 پھیلنے والے اور سنسنی دونوں گروپوں کے لیے۔ C، RNA-seq ڈیٹا سے IFN سگنلنگ کو ریگولیٹ کرنے والے منتخب جینوں کا ٹرانسکرپٹومک تجزیہ 3 آزاد p53-ریسٹوریبل سیل لائنز (NSP، NSM2، اور NSP5) کے ساتھ p53 کو بحال کرنے والے NSP سیل کے ساتھ دو دیگر سنسنی ٹرگرز کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے۔ SEN/PRO، سنسنی/پھیلانے والا؛ T + P، trametinib پلس palbociclib۔ ڈی، انسانی سیل لائنوں میں IFN سگنلنگ میں شامل منتخب جینوں کا mRNA اظہار حواس کو متحرک کرتا ہے۔ علاج: علی، alisertib؛ ایٹو، ایٹوپوسائیڈ؛ نمبر علاج کی لمبائی (دن) کی نشاندہی کرتا ہے۔ ڈیٹا پبلک ڈیٹاسیٹ SENESCOPEDIA (44) سے حاصل کیا جاتا ہے۔ IFN (1 ng/mL) کی موجودگی یا غیر موجودگی میں مختلف سینسنٹ ٹرگرز کے تحت NSP خلیات کا E، Top، امیونو بلوٹ تجزیہ۔ نیچے، امیونو بلوٹ سے سگنل کی شدت کی مقدار کا تعین۔ p-STAT1، phospho-STAT1 (Tyr701)۔

اوپر بیان کردہ جین کے اظہار کی تبدیلیوں کے ساتھ بھی مطابقت رکھتے ہوئے، سینسنٹ ٹیومر سیلز نے زیادہ مضبوطی سے MHC-I کو بڑھاوا دینے والے ہم منصبوں کے مقابلے میں exogenous IFN کی کم سطح کے جواب میں اپ گریڈ کیا۔ لہٰذا، جہاں پھیلنے والے اور سنسنٹ سیلز دونوں کے MHC-I کی سیل سطح کی سطح بیس لائن پر کم تھی اور exogenous IFN کی طرف سے حوصلہ افزائی کی گئی تھی، سنسینٹ سیلز نے MHC-I پروٹین ایکسپریشن (تصویر 5D) میں نمایاں اضافہ دکھایا۔ اسی طرح کی ہم آہنگی سیل کی سطح کے HLA اظہار (چوہوں میں MHC-I کی طرح) کے لیے انسانی کینسر کے خلیات میں دیکھی گئی اور دیگر کینسر کی اقسام بٹلن کے ساتھ جوانی کے لیے متحرک ہوئیں، جو کہ ap53- منحصر سنسنی پروگرام (56) میں شامل ہے۔ ، یا trametinib/palbociclib، جو ترجیحی طور پر ایک فعال MAPK پاتھ وے کے ساتھ ٹیومر کے خلیوں کو نشانہ بناتا ہے (ضمیمہ انجیر S11A–S11D؛ حوالہ 20)۔ قابل غور بات یہ ہے کہ HLA اظہار پر منشیات کے علاج اور IFN کے مشترکہ اثرات کو سنسنی انڈکشن کی ضرورت ہوتی ہے اور یہ جگر کے ٹیومر کے خلیوں میں نہیں ہوتا ہے جو اچانک یا انجینئرڈ p53 اتپریورتن (خارجہ کے لئے غیر ذمہ دار) یا غیر ہائپر ایکٹیویٹڈ MAPK پاتھ وے (غیر ذمہ دارانہ) کی وجہ سے پیدا ہونے میں ناکام ہوتا ہے۔ trametinib/palbociclib تک)۔ مزید برآں، اگرچہ قسم I اور II IFN رسپانس پاتھ ویز میں اوورلیپنگ اجزاء شامل ہیں، exogenous IFN ٹریٹمنٹ IFN کا متبادل نہیں ہو سکتا ہے تاکہ سینسنٹ سیلز میں مضبوط MHC-I انڈکشن پیدا ہو سکے اور نہ ہی ہمارے p53 ریسٹوریشن ماڈل میں پھیلنے والے اور سینسنٹ سیلز کے درمیان مضبوط تفریق شامل ہو ( ضمنی شکل S11E اور S11F)۔ ان اعداد و شمار سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ مورائن اور انسانی خلیے حواس باختہ ہونے کے لیے متحرک ہوتے ہیں IFN کی محدود مقدار کی موجودگی میں اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن کے لیے زیادہ صلاحیت حاصل کرتے ہیں۔

سینسنٹ ٹیومر سیلز Vivo میں IFNg سگنلنگ پاتھ وے کو زیادہ متحرک کرتے ہیں۔

سینسنٹ سیلز میں شناخت شدہ IFN سگنلنگ کی دوبارہ وائرنگ کے vivo نتائج کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے اگلے وقت میں انٹرا سیلولر IFN سگنلنگ ایکٹیویشن کو براہ راست تصور کرنے کے لیے IFN سینسنگ (IGS) رپورٹر سسٹم کو اپنایا (57)۔ یہ رپورٹر متفقہ IFN-فعال ترتیبوں کی ایک سیریز پر مشتمل ہے، جس میں دوسرے سگنلز (57) پر II IFN ٹائپ کرنے کی خصوصیت ہے، اس کے بعد ZsGreen1 فلوروسینٹ پروٹین کو انکوڈنگ کرنے والی سی ڈی این اے سیکوئنس ہوتی ہے اور ٹرانس ڈیوسڈ سیلز کو دیکھنے کے لیے آر ایف پی ٹرانسجن سے جڑی ہوتی ہے۔ تصویر 6A)۔ اس تعمیر کا اظہار کرنے والے NSP ٹیومر سیلز RFP مثبت تھے اور وٹرو میں IFN کے ساتھ علاج کے دوران ZsGreen1 سگنل میں خوراک پر منحصر اضافہ دکھایا گیا جس میں p53 شامل کرنے یا سنسنی پیدا کرنے والی دوائیوں کے ساتھ علاج کے بعد اضافہ ہوا (تصویر 6B؛ سپلیمنٹری تصویر S12A اور S12B) .

اس کے بعد ہم نے اس سسٹم کو ٹیومر میں سنسنی انڈکشن کے بعد سگنلنگ کی سرگرمی کی نگرانی کے لیے استعمال کیا۔ رپورٹر ٹرانسڈیوسڈ ٹیومر سیل (Dox پر) جو کہ RFP کا اظہار کرتے ہیں Dox-fed syngeneic وصول کنندگان کے جگر میں انجکشن لگائے گئے، اور، ٹیومر کے ظاہر ہونے پر، Dox کو p53 اظہار دلانے اور سنسنی کو متحرک کرنے کے لیے ہٹا دیا گیا جیسا کہ اوپر دیا گیا تھا (تصویر 1 اور 2 دیکھیں)۔ ریگریسنگ ٹیومر کو رپورٹر کی سرگرمی کی 3D امیجنگ اور پھیلنے والے کنٹرولز (Dox پر رکھے ہوئے چوہوں سے) کے مقابلے میں IFN سگنلنگ کے متوازی تشخیص کے لیے Dox کی واپسی کے 9 دن بعد الگ تھلگ کر دیا گیا تھا۔ جیسا کہ تصویر 6C میں واضح کیا گیا ہے، پھیلنے والے ٹیومر کے خلیات نے بہت کم، اگر کوئی ہے تو، رپورٹر اظہار دکھایا، جبکہ ٹیومر کے خلیات نے vivo میں حواس باختہ ہونے کے لیے متحرک ZsGreen1 سگنل (تصویر 6C اور D؛ ضمنی ویڈیو S2) ظاہر کیا۔ یہ اثر ٹیومر ٹشو کے نچوڑ میں IFN پروٹین (لیکن ٹائپ I IFN نہیں) کی سطح میں مخصوص اضافے کے ساتھ موافق ہے (تصویر 6E؛ ضمنی شکل S12C)۔

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا سینسنٹ ٹیومر میں مدافعتی خلیوں کی تبدیل شدہ ساخت (تصویر 2؛ سپلیمنٹری فگس۔ S5–S6) نے IGS رپورٹر کے بہتر سگنل میں حصہ ڈالا، ہم نے وٹرو کوکلچر اسسیس میں کارکردگی کا مظاہرہ کیا جس سے ٹیومر کے خلیات کو سینسنٹ یا پھیلنے والے خلیوں کی نمائش کی اجازت دی گئی۔ متحرک CD8 T خلیات کی مساوی تعداد، جس کی شناخت ہم نے scRNA-seq ڈیٹا کے ذریعے Vivo میں IFN کے اہم سیلولر ذریعہ کے طور پر کی ہے (تصویر 6F–H)۔ سنسنٹ سیلز نے اب بھی ZsGreen1 سگنل میں نمایاں اضافہ دکھایا ہے جیسا کہ پھیلنے والے کنٹرولز (تصویر 6I) کے مقابلے میں۔ غیر سیل خودمختار سگنلنگ ایکٹیویشن کے ساتھ ہم آہنگ، IFN کا پتہ NSP ٹیومر سیلز سے کنڈیشنڈ میڈیا میں پھیلنے والی یا سنسنی خیز حالات (ضمنی شکل S12D) میں نہیں پایا گیا، پھر بھی IFN کا آسانی سے CD8 T خلیات کے ساتھ coculture پر پتہ چلا، ایک ایسا اثر جو میکروفیجز کے اضافے سے مزید اضافہ ہوا اور سنسینٹ سیلز پر MHC کلاس I میں اضافہ کے ساتھ ساتھ CD8 T خلیات کی بڑھتی ہوئی ایکٹیویشن (ضمنی شکل S12E–S12J) سے منسلک ہے۔ اجتماعی طور پر، یہ اعداد و شمار ایک ایسے ماڈل کی حمایت کرتے ہیں جس کے تحت سینسنٹ ٹیومر کے خلیات اور مدافعتی خلیوں کے درمیان متضاد تعاملات ٹیومر کو خارجی IFN کے لیے حساس بناتے ہیں، جس کے نتیجے میں اینٹیجن پریزنٹیشن اور موثر مدافعتی نگرانی ہوتی ہے۔

تصویر 5. سنیسینس اور EC IFN اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن مشینری کو اپ گریڈ کرنے میں تعاون کرتے ہیں۔ A اور B، IFN (50 pg/mL) علاج کی موجودگی یا غیر موجودگی میں وٹرو میں پھیلنے والے اور سنسنی خیز NSP خلیوں میں جین کا mRNA اظہار۔ mRNA کی سطح کو تمام نمونوں میں جین کے اوسط اظہار کے مطابق معمول بنایا جاتا ہے۔ A، ہمارے ماڈل میں ڈی ای جی انکوڈنگ SASP عوامل۔ بی، ہال مارک دستخطی ڈیٹا بیس سے IFN جوابی جین۔ C, IFN کی کم (50 pg/mL) یا زیادہ (1 ng/mL) ارتکاز کے ساتھ علاج کیے جانے والے پھیلنے والے اور سنسنی خیز خلیوں میں منتخب اینٹیجن پریزنٹیشن پاتھ وے جینز کا RT-qPCR۔ نمونے 2 حیاتیاتی نقلوں سے ہیں۔ D, MHC-I کی سطح IFN کے ساتھ 24 گھنٹے تک پھیلنے والے اور سنسنی خیز خلیوں کا علاج کیا جاتا ہے جس کی پیمائش بہاؤ سائٹومیٹری سے ہوتی ہے۔ MFI، میڈین فلوروسینس کی شدت۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔

شکل 6. سنسنی IFN-ثالثی ہیٹروٹائپک سگنلنگ کو فعال مدافعتی خلیوں سے ٹیومر خلیوں تک بڑھاتا ہے۔ IGS رپورٹر کی ایک گرافک مثال۔ (BioRender.com کے ساتھ تخلیق کیا گیا ہے۔) 1 ng/mL IFN کے ساتھ علاج کیے جانے والے پھیلنے والے اور سنسنی خیز NSP خلیوں میں ZsGreen1 سگنلز کی پیمائش کرنے والے B، بائیں، نمائندہ بہاؤ سائٹومیٹری پلاٹ۔ ٹھیک ہے، IFN علاج پر ZsGreen1-مثبت خلیات کے فیصد کی مقدار کا تعین۔ MFI، میڈین فلوروسینس کی شدت۔ C اور D، IGS رپورٹر (C) کا اظہار کرنے والے آرتھوٹوٹیکلی انجیکشن جگر NSP سیل لائن سے ٹشو سے صاف شدہ ٹیومر کی نمائندہ 3D امیجنگ۔ ہر ماؤس (D) کے جگر کے ٹیومر سے 3 تصادفی طور پر منتخب فیلڈز کی مقدار۔ n=5 اور n=3 پھیلنے والے اور سنسنی گروپوں کے لیے (p53 بحالی کے 9 دن بعد) بالترتیب۔ اسکیل بارز، 100 μm۔ ویوو ٹیومر ٹشو لائسیٹ کے نمونے (p53 بحالی کے 7 دن بعد) سے IFN لیول کے لیے E، Top، cytometric bead ارے پرکھ۔ نیچے، HTVI (PRO، p53 بند؛ SEN، p53 بحالی 12 دنوں کے لیے) کے ذریعے تیار کردہ ٹیومر کے ان Vivo بلک نمونوں کے RNA-seq سے اشارہ شدہ جینوں کی نقل۔ TPM، ٹرانسکرپٹس فی کلو بیس ملین۔ نوٹ کیا گیا Ifna/b کلسٹر 14 Ifna ذیلی قسموں اور 1 Ifnb جین پر مشتمل ہے۔ F اور G، NSP ٹرانسپلانٹ ایبل ماڈل میں scRNA-seq کے ذریعے پروفائل کردہ ٹیومر میں دراندازی کرنے والے مدافعتی خلیوں میں Ifng کا اظہار (جیسا کہ تصویر 2 میں، p53 کی بحالی کے بعد 8 دن کو جمع کیا گیا نمونہ)۔ H، CD8 T خلیوں میں Havcr2 (انکوڈنگ TIM3) اور Ifng کے اظہار کا یکساں کئی گنا تخمینہ اور پروجیکشن پلاٹ پھیلنے والے (P) اور سینسنٹ (S) ٹیومر کے زخم سے حاصل کیا گیا ہے۔ اوپر والے پینل کو تصویر 2F (بائیں) سے نقل کیا گیا ہے تاکہ ہر حالت سے مطابقت رکھنے والے خلیوں کی نشاندہی کی جا سکے۔ I، OT-I T-سیل میں NSP ٹیومر سیلز کی ZsGreen1 شدت کی مقدار اور SIINFEKL-اظہار کرنے والے ٹیومر سیل کوکلچر تجربہ (اثر سے ہدف تناسب، 5:1) 20 گھنٹے کوکلچر کے بعد۔ فلو سائٹومیٹری کے ذریعے ماپا جانے والا سگنل۔ T + P، trametinib پلس palbociclib۔ ضمنی تصویر S12E میں تجرباتی تفصیلات دیکھیں۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ دو دم والے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا۔ *، پی <0.05؛ **، پی <0.01؛ ***، پی <0.001۔

سینسنٹ ٹیومر سیلز میں IFNg سگنلنگ مدافعتی نگرانی کے لیے ضروری ہے۔

ہمارے نتائج سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ سینسنٹ این ایس پی ٹیومر خلیوں کی مدافعتی ثالثی کلیئرنس میں SASP کے مشترکہ اثرات شامل ہیں، جو کہ مدافعتی خلیوں کی بھرتی (10, 20, 58) کو متحرک کرنے کے لیے جانا جاتا ہے، اس کے ساتھ ساتھ بہتر سینسنگ اور ردعمل کے لیے سینسنٹ سیلز کی پہلے سے کم قابل تعریف صلاحیت کے ساتھ۔ EC سگنلز، جیسا کہ یہاں IFN کے ساتھ دکھایا گیا ہے۔ سنسنیٹی سے وابستہ IFN سینسنگ پروگرام کی سینسینٹ ٹیومر سیلز کی مدافعتی نگرانی میں شراکت کو جانچنے کے لیے، ہم نے جانچا کہ ٹیومر سیلز میں IFNGR میں خلل، یا میزبان میں IFN کی کمی، NSP ٹیومر سیلز کی کلیئرنس کو کیسے متاثر کرتی ہے۔ . درحقیقت، ٹیومر ریگریشن (لیکن سنسنی فی سی نہیں؛ ضمنی شکل S13A–S13D) IFNGR1 (تصویر 7A اور B؛ ضمنی تصویر S14A–S14C) کے ناک آؤٹ (KO) پر خراب ہوا، ایک ایسا اثر جو اس کے لیے اور بھی واضح تھا۔ IFNGR- برقرار ٹیومر Ifng−/− چوہوں (تصویر 7C اور D) میں کندہ ہیں اور ٹیومر کے خلیوں میں سطح MHC-I کے متوقع نقصان سے وابستہ ہیں (ضمیمہ انجیر S14D اور S14E)۔

CD8+ مشغولیت (59) میں IFN سگنلنگ اور ٹیومر سیل MHC-I کی معروف شراکت سے مطابقت رکھتے ہوئے، ٹیومر جن میں IFNGR1 کی کمی تھی یا جو Ifng−/− وصول کنندگان میں تیار ہوئے تھے ان دونوں میں ان کے WT ہم منصبوں کے مقابلے میں کم CD8 T خلیے ہوتے ہیں۔ پھیلنے والی اور سنسنی خیز حالتیں (ضمنی شکل S14F) جبکہ اب بھی مضبوط مدافعتی دراندازی کو شامل کرتی ہے جس میں وافر میکروفیجز (تصویر 7E اور F؛ ضمنی شکل S14G) شامل ہیں۔ قطع نظر، حواس باختہ نگرانی کا فینوٹائپ صرف CD8 T خلیوں میں اس کمی کا نتیجہ نہیں تھا۔ CD8 T خلیات اور میکروفیجز کو IFNGR1 KO اور WT ٹیومر سیلز کی یکساں نمائش فراہم کرنے والے Coculture Assess نے پھر بھی IFNGR1-سینسنٹ ٹیومر سیلز (ضمنی شکل S15A–S15E) کے انحصار کو ظاہر کیا ہے جو کہ دونوں T کی موجودگی کی ضرورت تھی۔ خلیات اور میکروفیجز اور اس کا مشاہدہ انہی حالات میں ٹیومر خلیوں کو پھیلانے میں نہیں کیا گیا تھا۔ ایک ساتھ لیا گیا، یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ مائیکرو ماحولیاتی IFN کو محسوس کرنے کے لیے سنسینٹ سیلز کی بہتر صلاحیت SASP-حوصلہ افزائی مدافعتی سیل بھرتی کے ساتھ کام کرتی ہے تاکہ ٹیومر سیلز، میکروفیجز، اور ایکٹیویٹڈ T سیلز کے درمیان باہمی طور پر ہیٹروٹائپک تعاملات کو تقویت دے سکیں جو اینٹیجن پریزنٹیشن کو بہتر بناتے ہیں۔ , قوی ٹیومر regressions کی قیادت.

بحث

ایک مورین ٹیومر ماڈل کے ذریعہ فعال کیا گیا جس میں کینسر کے مدافعتی چوری بمقابلہ سنسنی کی نگرانی سخت جینیاتی کنٹرول کے تحت ہے، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ کس طرح سنسنی خیز خلیات ماحولیاتی سگنل بھیجنے اور وصول کرنے کی اپنی صلاحیت کو ڈرامائی طور پر تبدیل کرتے ہیں (ضمیمہ تصویر S16)۔ معلوم سنسنی پروگراموں کے ساتھ مطابقت رکھتے ہوئے، p53- سے چلنے والے سنسنی انڈکشن نے پھیلنے والے جینز کو خاموش کر دیا اور SASP کی حوصلہ افزائی کی۔ تاہم، ہم نے PM پروٹینز کے لیے جین کے اظہار پر گہرا اثر بھی دیکھا، جس میں گروتھ فیکٹر ریسیپٹرز اور سائٹوکائن ریسیپٹرز کی ایک رینج بھی شامل ہے جس کی پیش گوئی کی جاتی ہے کہ سنسنی خیز خلیے ماحولیاتی سگنلز کا جواب کیسے دیتے ہیں۔ اہم بات یہ ہے کہ اگرچہ ہم نے جگر کے کینسر کے ماڈل کو اپنے بنیادی تجرباتی نظام کے طور پر استعمال کیا، تاہم سیل سطح کے سینسرز اور ماحولیاتی سگنلز کو حساس کرنے والے جین پروگراموں کے اظہار میں اسی طرح کی بحالی کا مشاہدہ مورائن اور انسانی ٹیومر خلیوں کی ایک وسیع رینج میں کیا گیا جن کا علاج سنسنی پیدا کرنے کے ساتھ کیا گیا۔ ایجنٹس، جس کا مطلب یہ ہے کہ تبدیل شدہ سینسنگ پروگرام سنسنی خیز حالت کی ایک عام پہچان ہے۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

سینسنٹ سیلز میں تبدیل ہونے والے نمایاں سینسنگ راستوں میں سے ایک قسم II IFN سگنلنگ شامل ہے۔ ہمارے جگر کے کینسر کے ماڈل میں اور تمام سنسنی خیز ریاستوں میں جن کا ہم نے جائزہ لیا، سنسنی کے ساتھ سیل کے اندرونی ٹرانسکرپشن اور پروٹین ایکسپریشن تبدیلیاں ہوتی ہیں جن کی پیش گوئی خارجی IFN سے سگنلنگ میں اضافہ کرتی ہے۔ درحقیقت، سینسنٹ سیلز زیادہ مضبوطی سے IFN انفیکٹرز کو وٹرو اور Vivo میں IFN کے جواب میں متحرک کرتے ہیں، اور ماحول میں ایک برقرار IFN انفیکٹر پاتھ وے اور IFN دونوں موثر CD8 T سیل کے لیے ضروری ہیں۔ اگرچہ سینسنٹ سیل ٹرانسکرپٹومز کا پاتھ وے تجزیہ ہمیشہ قسم II IFN سگنلنگ کو ایک افزودہ خصوصیت کے طور پر شناخت کرتا ہے، قسم I اور II سگنلنگ اجزاء کے درمیان اوورلیپ اور حقیقت یہ ہے کہ IFN کو عام طور پر SASP عنصر کے طور پر نہیں پایا جاتا ہے، نے سینسینس میں قسم II IFN سگنلنگ سے متعلق میکانکی سوالات چھوڑے ہیں۔ بڑی حد تک غیر دریافت شدہ. ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ سینسنٹ سیلز کے IFN سگنلنگ دستخطوں میں اس طرح کی افزودگی IFN سینسنگ کی بہتر صلاحیت کی عکاسی کرتی ہے جس کا آؤٹ پٹ Vivo میں سب سے نمایاں ہے۔

شکل 7. سینسنٹ ٹیومر سیلز میں IFN سگنلنگ مدافعتی نگرانی کے لیے ضروری ہے۔ A، Fngr1 KO دونوں پھیلنے والے اور سنسنی والے NSP سیلز کے بہاؤ سائٹومیٹری کے ذریعے توثیق شدہ۔ B، Ifngr1 KO کا ٹیومر ریگریشن فینوٹائپ یا کنٹرول sgRNA – ٹرانسفیکٹڈ ٹیومر سیلز کو p53 کی بحالی پر Bl/6N چوہوں میں آرتھوٹوپی طور پر انجکشن لگایا جاتا ہے۔ Chr8 (Ctrl KO) پر واقع ایک جین صحرا کو نشانہ بنانے والا ایک کنٹرول sgRNA ایک کنٹرول کا کام کرتا ہے۔ سی، والدین کے این ایس پی ٹیومر سیلز کا ٹیومر ریگریشن فینوٹائپ پی 53 کی بحالی پر آرتھوٹوپیکل طور پر WT یا Ifng KO چوہوں میں انجکشن لگایا جاتا ہے۔ D، C. E سے p53 بحالی کے بعد 21 دن میں جمع کی گئی ٹیومر کی نمائندہ میکروسکوپک تصاویر، اشارہ شدہ گروپس سے ٹیومر میں CD45 کی کثرت کا فلو سائٹومیٹری تجزیہ۔ F، p{{10}} میں نمائندہ امیونو فلوروسینس دبایا گیا (پھیلنے والا) اور p53-بحال ہوا (سینیسنٹ، p53 بحالی کے 7 دن بعد) اشارہ شدہ میزبان سے ٹیومر۔ NSP ٹیومر خلیوں کو تصور کے لئے GFP- اظہار کرنے والے ویکٹر کے ساتھ منتقل کیا گیا تھا۔ اسکیل بارز، 50 μm۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ دو دم والے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا۔ **، پی <0.01؛ ***، پی <0.001۔

شاید قسم II IFN سگنلنگ کی سب سے اچھی طرح سے قائم شدہ آؤٹ پٹ میں اینٹیجن-پریزنٹیشن مشینری کو دلانے کی صلاحیت شامل ہے۔ درحقیقت، IFN نے ہمارے ماڈل میں MHC-I (یا انسانی خلیوں میں HLA) کے سیل سطح کے اظہار کو پھیلانے اور سنسنی دونوں حالات میں حوصلہ افزائی کی۔ تاہم، IFN - حوصلہ افزائی MHC-I اپ گریجولیشن سنسینٹ سیلز میں زیادہ واضح تھی، ایک ایسا اثر جو اینٹیجن پروسیسنگ، دیگر اینٹیجن پروسیسنگ عوامل، اور MHC-I کے ساختی اجزاء سے وابستہ ٹرانسپورٹر کے بڑھتے ہوئے اظہار سے منسلک ہے۔ MHC-I/HLA کو شامل کرنے میں IFN کے لیے اسی طرح کی انتہائی حساسیت انسانی جگر اور پھیپھڑوں کے کینسر کی سیل لائنوں میں دیکھی گئی جو کہ حواس کو متحرک کرتی ہیں۔ ان نتائج سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ سنسنی پروگرام غیر مدافعتی خلیوں میں اینٹیجن پریزنٹیشن کو بڑھا سکتا ہے، اس طرح ٹیومر کے امیونو سرویلنس کو سہولت فراہم کرتا ہے۔ ہمارے نتائج ایک ایسے ماڈل کی حمایت کرتے ہیں جس کے تحت بافتوں کی حیاتیات پر حواس باختہ خلیوں کا حتمی اثر ان مشترکہ اثرات سے طے ہوتا ہے کہ وہ کس طرح ماحولیاتی سگنل بھیجتے اور وصول کرتے ہیں۔ نہ صرف سنسنی خیز خلیے SASP کی حوصلہ افزائی کرتے ہیں، جو ٹشووں کی دوبارہ تشکیل کو متحرک کرتا ہے اور خلیے کی حالت اور ماحول میں مدافعتی خلیوں کی ساخت کو تبدیل کرتا ہے، بلکہ وہ اپنے سطحی سطح کو بھی ڈرامائی طور پر تبدیل کرتے ہیں، جس کی وجہ سے ماحولیاتی عوامل کو محسوس کرنے کی تفریق صلاحیت ہوتی ہے، جس کی مثال IFN نے دی ہے۔ اہم بات یہ ہے کہ IFN سگنلنگ میں خلل کا ہمارے سسٹم میں سنسنی انڈکشن یا SASP پر کوئی اثر نہیں پڑا، پھر بھی ٹیومر کے بعد میں ہونے والے ریگریشنز کو نقصان پہنچا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ SASP کے ساتھ مل کر تبدیل شدہ ماحولیاتی سینسنگ کام کرتی ہے تاکہ سنسنی پروگرام کی حتمی پیداوار کا تعین کیا جا سکے۔ مدافعتی نگرانی. یہ اثرات ایک مربوط ایپی جینیٹک پروگرام کا حصہ دکھائی دیتے ہیں، کیونکہ SASP اور سینسنگ پروگرام دونوں ہی کرومیٹن ریموڈلنگ فیکٹر BRD4 پر نمایاں انحصار ظاہر کرتے ہیں۔

اگرچہ ہمارے ماڈل میں مدافعتی نگرانی کا طریقہ کار CD8 T-cell اور macrophage آبادی کے تعاون پر مبنی اثرات پر منحصر ہے جو ایک "امیون سرد" سے "امیون گرم" ٹیومر مائیکرو ماحولیات میں منتقلی کی عکاسی کرتا ہے، دیگر پیدائشی یا موافق مدافعتی خلیوں کی قسمیں پہچان سکتی ہیں۔ اور مختلف سیاق و سباق میں سنسنی خیز خلیات کو صاف کریں، یا متبادل طور پر، مدافعتی نگرانی بالکل نہیں ہو سکتی ہے (18، 19)۔ بلاشبہ، ان میں سے کچھ امتیازات SASP عنصر کے سراو (13، 14) میں متفاوتیت کی عکاسی کرتے ہیں، حالانکہ ہمارے نتائج اس امکان کو بڑھاتے ہیں کہ تبدیل شدہ ماحولیاتی سینسنگ کی حد اور نوعیت اس بات پر بھی اثر انداز ہو سکتی ہے کہ سنسنی خیز خلیے ٹشو بائیولوجی کو کس طرح متاثر کرتے ہیں۔ اگرچہ IFN سینسنگ کے ناک آؤٹ (بذریعہ Ifngr1 KO) اور MHC-I (B2M KO) کو سینسنٹ ٹیومر سیلز میں ڈیلیٹ کرنے نے Vivo میں ان کی مدافعتی نگرانی کو نقصان پہنچایا، لیکن اس نے سینسنٹ انڈکشن کے بعد ٹیومر ریگریشن کو مکمل طور پر ختم نہیں کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ سینسنٹ سیلز میں IFN سینسنگ ہے۔ ٹیومر کے رجعت میں حصہ لینے والا واحد راستہ نہیں ہے۔ قطع نظر، حقیقت یہ ہے کہ سنسنی خیز خلیے ماحولیاتی سگنلز کے لیے مختلف طریقے سے جواب دے سکتے ہیں اس کا مطلب یہ ہے کہ بافتوں میں ان کی حتمی سالماتی حالت سیل کلچر سے مختلف ہوگی، جو Vivo میں اس عمل کو بہتر طور پر نمایاں کرنے کی ضرورت کو اجاگر کرتی ہے۔

ہمارے نتائج فزیالوجی اور بیماری میں سنسنی بائیولوجی کے متضاد اثرات کی وضاحت کرنے میں مدد کر سکتے ہیں اور سنسنی کو ماڈیول کرنے والے علاج کے مؤثر استعمال کے لیے مضمرات رکھتے ہیں۔ مثال کے طور پر، ہمارے ماڈل میں، ٹیومر سینسنٹ سیل کلیئرنس اور استقامت کے درمیان فرق کا تعین کیا گیا تھا، کم از کم جزوی طور پر، ماحولیاتی IFN کی موجودگی اور سینسینٹ سیلز میں ٹائپ II IFN سگنلنگ کی سالمیت سے۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ IFN - secreting مدافعتی خلیات یا دیگر مدافعتی خلیوں کی بھرتی کرنے اور محسوس کرنے کی سینسنٹ سیل کی صلاحیت میں فرق سینسنٹ سیل کلیئرنس کو گہرا اثر انداز کر سکتا ہے، جیسے کہ ماحولیاتی IFN میں کمی یا کم ہوتی ہوئی قسم II IFN سگنلنگ ٹشوز کے اندر سنسنی سیل کی استقامت کو قابل بنا سکتی ہے۔ کینسر کے تناظر میں، وہ علاج جو ٹیومر سیل سینسنس کو اکساتے ہیں- ایک سائٹوسٹیٹک پروگرام- مدافعتی ثالثی ٹیومر کے رجعت کو متحرک کر سکتا ہے یا ٹیومر کو مدافعتی چوکی کی ناکہ بندی کے لیے دوبارہ حساس بنا سکتا ہے، پھر بھی یہ آفاقی نتائج نہیں ہیں۔ اس طرح، SASP (جو کہ ٹیومر سیل کی اقسام اور سنسنی انڈیوسرز کے درمیان مختلف ہو سکتا ہے) یا IFN سینسنگ اور آؤٹ پٹ [شاید IFN پاتھ وے یا HLA اجزاء (60) کے حذف ہونے یا اتپریورتن سے متاثر ہو یا یہاں بے نقاب ہونے والے الٹ ٹرانسکرپشن میکانزم] متاثر ہو سکتے ہیں۔ مریضوں میں اس طرح کے علاج کی تاثیر. اس تصور سے ہم آہنگ، مخصوص SASP پروفائلز کی تھراپی سے چلنے والی شمولیت رحم کے کینسر (61) کے مریضوں کے ذیلی گروپ میں مریضوں کے نتائج کی پیش گوئی کرتی ہے۔ اس کے برعکس، IFN (مثال کے طور پر PTPN2 inhibitors کے ساتھ) کی حساسیت کو بڑھا کر سینسنٹ خلیوں کی مدافعتی نگرانی کو بڑھانے کے لیے حکمت عملی ٹیومر سیل کے رد کرنے کی طرف تعصب پروگرام کی پیداوار میں مدد کر سکتی ہے۔ ہم تصور کرتے ہیں کہ اس اور دیگر ٹشووں کو دوبارہ بنانے اور سینسنگ پروگراموں کی تحقیقات سے پہلے اور علاج کے بعد کے ٹیومر بایڈپسی (مثال کے طور پر، ٹرانسکرپٹومک یا پروٹومک پروفائلز کے ذریعے) کینسر کے طبی انتظام کو بہتر بنانے کے لیے نئے ردعمل کے بائیو مارکر اور/یا امتزاج کی حکمت عملیوں کو بے نقاب کر سکتے ہیں۔

حوالہ جات

1. Di Micco R، Krizhanovsky V، Baker D، d'Adda di Fagagna F. عمر بڑھنے میں سیلولر سنسنی: میکانزم سے علاج کے مواقع تک۔ Nat Rev Mol Cell Biol 2021؛ 22:75–95۔

2. Munoz-Espin D، Serrano M. سیلولر سنسنی: فزیالوجی سے پیتھالوجی تک۔ Nat Rev Mol Cell Biol 2014؛ 15:482–96۔

3. Demaria M, Ohtani N, Youssef SA, Rodier F, Toussaint W, Mitchell JR, et al. PDGF-AA کے سراو کے ذریعے زخم کی بہترین شفا یابی میں سنسنی خیز خلیوں کے لیے ایک ضروری کردار۔ ڈیو سیل 2014؛ 31:722–33۔

4. Xu M، Pirtskhalava T، Farr JN، Weigand BM، Palmer AK، Weivoda MM، et al. سینولیٹکس جسمانی افعال کو بہتر بناتے ہیں اور بڑھاپے میں عمر بڑھاتے ہیں۔ نیٹ میڈ 2018؛ 24:1246–56۔

5. Serrano M, Lin AW, McCurrach ME, Beach D, Lowe SW. Oncogenic Ras p53 اور p16INK4a کے جمع ہونے کے ساتھ منسلک قبل از وقت خلیے کے سنسنی کو بھڑکاتا ہے۔ سیل 1997؛ 88:593–602۔

6. Ewald JA, Desotelle JA, Wilding G, Jarrard DF. کینسر میں تھراپی کی حوصلہ افزائی کی سنسنی. J Natl Cancer Inst 2010؛ 102:1536–46۔

7. Coppe JP، Desprez PY، Krtolica A، Campisi J. سنسنی سے وابستہ سیکرٹری فینوٹائپ: ٹیومر دبانے کا تاریک پہلو۔ انو ریو پاتھول 2010؛ 5:99–118۔

8. Demaria M, O'Leary MN, Chang J, Shao L, Liu S, Alimirah F, et al. سیلولر سنسنی کیموتھراپی اور کینسر کے دوبارہ لگنے کے منفی اثرات کو فروغ دیتا ہے۔ کینسر ڈسکو 2017؛ 7:165–76۔

9. کوپے جے پی، پاٹل سی کے، روڈیر ایف، سن وائی، منوز ڈی پی، گولڈسٹین جے، وغیرہ۔ سنسنی سے وابستہ سکریٹری فینوٹائپس آنکوجینک RAS اور p53 ٹیومر دبانے والے سیل غیر خود مختار افعال کو ظاہر کرتی ہیں۔ PLOS Biol 2008؛ 6:2853–68۔

10. تسڈیمیر این، بنیٹو اے، رو جے ایس، الونسو-کربیلو ڈی، کیمیولو ایم، تسہارگنیہ ڈی ایف، وغیرہ۔ BRD4 حواس باختہ مدافعتی نگرانی سے بڑھانے والے کو دوبارہ تشکیل دیتا ہے۔ کینسر ڈسکو 2016؛ 6:612–29۔

11. Chien Y، Scuoppo C، Wang X، Fang X، Balgley B، Bolden JE، et al. NF-kappaB کے ذریعہ سنسنی سے وابستہ سیکرٹری فینوٹائپ کا کنٹرول سنسنی کو فروغ دیتا ہے اور کیمو حساسیت کو بڑھاتا ہے۔ جینز دیو 2011؛ ​​25:2125–36۔

12. Kuilman T, Michaloglou C, Vredeveld LC, Douma S, van Doorn R, Desmet CJ, et al. آنکوجین سے متاثرہ سنسنی ایک انٹلییوکن پر منحصر سوزشی نیٹ ورک کے ذریعہ جاری کی گئی ہے۔ سیل 2008؛ 133:1019–31۔

13. Basisty N، Kale A، Jeon OH، Kuehnemann C، Payne T، Rao C، et al. عمر بڑھنے والے بائیو مارکر کی نشوونما کے لئے سنسنی سے وابستہ سیکروم کا ایک پروٹومک اٹلس۔ PLOS Biol 2020؛ 18:e3000599۔

14. Hernandez-Segura A, de Jong TV, Melov S, Guryev V, Campisi J, Demaria M. حواس باختہ خلیات میں نقلی متفاوت کو بے نقاب کرنا۔ کرر بائیول 2017؛ 27:2652–60۔

15. Xue W, Zender L, Miething C, Dickins RA, Hernando E, Krizhanovsky V, et al. سنسنی اور ٹیومر کلیئرنس مورائن لیور کارسنوماس میں p53 بحالی سے شروع ہوتا ہے۔ فطرت 2007؛ 445:656-60۔

16. کانگ TW، Yevsa T، Woller N، Hoenicke L، Wuestefeld T، Dauch D، et al. پہلے سے مہلک ہیپاٹوسائٹس کی سنسنی کی نگرانی جگر کے کینسر کی نشوونما کو محدود کرتی ہے۔ فطرت 2011؛ ​​479:547-51۔

17. Ovadya Y، Landsberger T، Leins H، Vadai E، Gal H، Biran A، et al. کمزور مدافعتی نگرانی سنسنی خلیوں اور عمر بڑھنے کے جمع ہونے کو تیز کرتی ہے۔ نیٹ کمیون 2018؛ 9:5435۔

18. Lujambio A. صاف کرنا، یا صاف نہیں کرنا (حواس باختہ خلیات)؟ یہی سوال ہے۔ بائیو ایسز 2016؛ 38 ضمنی 1:S56–64۔ 19. Di Mitri D, Toso A, Chen JJ, Sarti M, Pinton S, Jost TR, et al. ٹیومر میں گھسنے والے Gr-1+ myeloid خلیات کینسر میں سنسنی کا مخالف ہیں۔ فطرت 2014؛ 515:134-7۔

20. Ruscetti M, Leibold J, Bott MJ, Fennell M, Kulick A, Salgado NR, et al. NK سیل میں ثالثی سائٹوٹوکسیٹی سائٹوسٹیٹک منشیات کے امتزاج کے ذریعہ ٹیومر کے کنٹرول میں معاون ہے۔ سائنس 2018؛ 362:1416-22۔

21. Llovet JM، Kelley RK، Villanueva A، Singal AG، Pikarsky E، Roayaie S، et al. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما۔ Nat Rev Dis Primers 2021؛ 7:6۔

22. Chiang DY، Villanueva A، Hoshida Y، Peix J، Newell P، Minguez B، et al. وی ای جی ایف اے کے فوکل فوائد اور ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کی سالماتی درجہ بندی۔ کینسر ریس 2008؛ 68:6779–88۔

23. Llovet JM، Castet F، Heikenwalder M، Maini MK، Mazzaferro V، Pinato DJ، et al. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لئے امیونو تھراپی۔ نیٹ ریو کلین آنکول 2022؛ 19:151–72۔

24. سانگرو بی، سروبی پی، ہیرواس اسٹبس ایس، میلرو I. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لیے امیونو تھراپی میں پیشرفت۔ Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2021؛ 18:525–43۔

25. لیون اے جے۔ کینسر کے علاج کے لئے P53 پروٹین کو نشانہ بنانا: P53 تحقیق کا ترجمہی اثر۔ کینسر ریس 2022؛ 82:362–4۔

26. Xiao Y، Chen J، Zhou H، Zeng X، Ruan Z، Pu Z، et al. مدافعتی چوکی ناکہ بندی کے ساتھ p53 mRNA مونو تھراپی کا امتزاج کینسر کے مؤثر علاج کے لیے مدافعتی مائیکرو ماحولیات کو دوبارہ پروگرام کرتا ہے۔ نیٹ کمیون 2022؛ 13:758۔

27. Demir O, Barros EP, Ofutt TL, Rosenfeld M, Amaro RE. p53 ڈائنامکس، فنکشن، اور ری ایکٹیویشن کا ایک مربوط منظر۔ Curr Opin Struct Biol 2021؛ 67:187–94۔

28. سوڈا ٹی، لیو ڈی ہائیڈروڈینامک جین کی ترسیل: اس کے اصول اور اطلاقات۔ Mol Ther 2007؛ 15:2063–9۔

29. Hoshida Y، Nijman SM، Kobayashi M، Chan JA، Brunet JP، Chiang DY، et al. انٹیگریٹیو ٹرانسکرپٹوم تجزیہ انسانی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے عام سالماتی ذیلی طبقات کو ظاہر کرتا ہے۔ کینسر ریس 2009؛ 69:7385–92۔

30. کیچ ایس ایم، ہیمبی ایس، کرش ای، احمد آر۔ میموری CD8 T سیل تفریق کی مالیکیولر اور فنکشنل پروفائلنگ۔ سیل 2002؛ 111:837-51۔

31. Bruix J, Cheng AL, Meinhardt G, Nakajima K, De Sanctis Y, Llovet J. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے مریضوں میں تشخیصی عوامل اور صرافینیب کے فائدے کے پیش گو: دو فیز III مطالعات کا تجزیہ۔ جے ہیپاٹول 2017؛ 67:999–1008۔

32. Adrover JM، Aroca-Crevillen A، Crainiciuc G، Ostos F، Rojas-Vega Y، Rubio-Ponce A، et al. نیوٹروفیل پروٹوم کا پروگرام شدہ 'غیر مسلح' سوزش کی شدت کو کم کرتا ہے۔ نیٹ امیونول 2020؛ 21: 135–44۔

33. Zeisberger SM, Odermatt B, Marty C, Zehnder-Fjallman AH, Ballmer-Hofer K, Schwendener RA. ٹیومر سے وابستہ میکروفیجز کی کلوڈرونیٹ-لیپوزوم ثالثی کی کمی: ایک نیا اور انتہائی موثر اینٹی اینجیوجینک تھراپی اپروچ۔ بی آر جے کینسر 2006؛ 95:272–81۔

34. De Simone G, Andreata F, Bleriot C, Fumagalli V, Laura C, Garcia-Manteiga JM, et al. کپفر سیل سبسیٹ کی شناخت جو ہیپاٹو سیلولر پرائمنگ کی وجہ سے ٹی سیل کی خرابی کو واپس کرنے کے قابل ہے۔ استثنیٰ 2021؛ 54:2089–100۔

35. Dann E, Henderson NC, Teichmann SA, Morgan MD, Marioni JC. K-قریب ترین پڑوسی گرافس کا استعمال کرتے ہوئے سنگل سیل ڈیٹا پر مختلف کثرت کی جانچ۔ نیٹ بائیو ٹیکنالوجی 2022؛ 40:245–53۔

36. Kim HD, Park S, Jeong S, Lee YJ, Lee H, Kim CG, et al. 4–1BB ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں ختم ہونے والے ٹیومر میں دراندازی کرنے والے CD8(+) T خلیوں کی الگ الگ ایکٹیویشن کی حیثیت کو بیان کرتا ہے۔ ہیپاٹولوجی 2020؛ 71:955–71۔

37. Li Y، Wang Z، Jiang W، Zeng H، Liu Z، Lin Z، et al. ٹیومر میں دراندازی کرنے والے TNFRSF9(+) CD8(+) T خلیے تشخیص اور مدافعتی ردعمل کے ساتھ واضح سیل رینل سیل کارسنوما کے مختلف ذیلی سیٹوں کی وضاحت کرتے ہیں۔ Oncoimmunology 2020؛ 9:1838141۔

38. Bindea G, Mlecnik B, Tosolini M, Kirilovsky A, Waldner M, Obenauf AC, et al. انٹراٹومورل مدافعتی خلیوں کی اسپیٹیوٹیمپورل حرکیات انسانی کینسر میں مدافعتی منظرنامے کو ظاہر کرتی ہیں۔ استثنیٰ 2013؛ 39:782–95۔

39. Kuang DM, Zhao Q, Peng C, Xu J, Zhang JP, Wu C, et al. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے پیریٹومورل اسٹروما میں متحرک مونوسائٹس PD-L1 کے ذریعے مدافعتی استحقاق اور بیماری کی ترقی کو فروغ دیتے ہیں۔ J Exp Med 2009؛ 206:1327–37۔

40. Lu LG، Zhou ZL، Wang XY، Liu BY، Lu JY، Liu S، et al. PD-L1 ناکہ بندی hepatocellular carcinoma میں glycolytic macrophages کی اندرونی antitumorigenic خصوصیات کو آزاد کرتی ہے۔ گٹ 2022؛ 71:2551–60۔

41. Milanovic M، Fan DNY، Belenki D، Dabritz JHM، Zhao Z، Yu Y، et al. سنسنی سے وابستہ ری پروگرامنگ کینسر کے تناؤ کو فروغ دیتی ہے۔ فطرت 2018؛ 553:96–100۔

42. Yousef H, Czupalla CJ, Lee D, Chen MB, Burke AN, Zera KA, et al. بوڑھا خون ہپپوکیمپل اعصابی پیشگی سرگرمی کو متاثر کرتا ہے اور دماغ کے اینڈوتھیلیل سیل VCAM1 کے ذریعے مائکروگلیہ کو متحرک کرتا ہے۔ نیٹ میڈ 2019؛ 25:988–1000۔

43. Rapisarda V، Borghesan M، Miguela V، Encheva V، Snijders AP، Lujambio A، et al. Integrin beta 3 TGF-beta پاتھ وے کو چالو کرکے سیلولر سنسنی کو منظم کرتا ہے۔ سیل ریپ 2017؛ 18:2480–93۔

44. Jochems F, Thijssen B, De Conti G, Jansen R, Pogacar Z, Groot K, et al. کینسر سینیسکوپیڈیا: کینسر کے خلیے کے سنسنی کا ایک خاکہ۔ سیل ریپ 2021؛ 36:109441۔

45. Perna F، Berman SH، Soni RK، Mansilla-Soto J، Eyquem J، Hamieh M، et al. AML کی منظم امتزاج کیمریک اینٹیجن ریسیپٹر تھراپی کے لئے پروٹومکس اور ٹرانسکرومکس کو مربوط کرنا۔ کینسر سیل 2017؛ 32:506–19۔

46. ​​Hoare M, Ito Y, Kang TW, Weekes MP, Matheson NJ, Patten DA, et al. NOTCH1 سنسنی کے دوران دو الگ الگ رازوں کے درمیان ایک سوئچ میں ثالثی کرتا ہے۔ نیٹ سیل بائیول 2016؛ 18:979–92۔

47. Castro F، Cardoso AP، Goncalves RM، Serre K، Oliveira MJ. ٹیومر کی مدافعتی نگرانی یا چوری کے سنگم پر انٹرفیرون گاما۔ فرنٹ امیونول 2018؛ 9:847۔

48. پلاٹانیاس ایل سی۔ قسم-I- اور قسم-II- انٹرفیرون ثالثی سگنلنگ کے طریقہ کار۔ Nat Rev Immunol 2005;5:375–86۔

49. Manguso RT، Pope HW، Zimmer MD، Brown FD، Yates KB، Miller BC، et al. Vivo میں CRISPR اسکریننگ Ptpn2 کو کینسر کے امیونو تھراپی کے ہدف کے طور پر شناخت کرتی ہے۔ فطرت 2017؛ 547:413–8۔

50. سونگ ایم ایم، شوائی کے۔ سائٹوکائن سگنلنگ (SOCS) 1 اور SOCS3 کو دبانے والا لیکن SOCS2 پروٹین نہیں انٹرفیرون کی ثالثی اینٹی وائرل اور antiproliferative سرگرمیوں کو روکتا ہے۔ جے بائیول کیم 1998؛ 273:35056–62۔

51. Kleppe M، Soulier J، Asnafi V، Mentens N، Hornakova T، Knoops L، et al. PTPN2 منفی طور پر T-cell ایکیوٹ لمفوبلاسٹک لیوکیمیا میں oncogenic JAK1 کو منظم کرتا ہے۔ خون 2011؛ ​​117:7090-8۔

52. Zhou F. MHC کلاس I اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن کو بہتر بنانے کے لیے IFN-gamma کے مالیکیولر میکانزم۔ Int Rev Immunol 2009؛ 28:239–60۔

53. McCarthy MK، Weinberg JB. امیونو پروٹیزوم اور وائرل انفیکشن: سوزش کا ایک پیچیدہ ریگولیٹر۔ فرنٹ مائکروبیول 2015; 6:21۔

54. یوشیہاما ایس، وجین ایس، صدیق ٹی، کوبیاشی کے ایس۔ NLRC5/CITA: کینسر کے مدافعتی نگرانی میں ایک اہم کھلاڑی۔ رجحانات کینسر 2017؛ 3:28–38۔

55. Kalaora S, Lee JS, Barnea E, Levy R, Greenberg P, Alon M, et al. امیونوپروٹیزوم اظہار میلانوما میں چیک پوائنٹ کے علاج کے بہتر تشخیص اور ردعمل سے وابستہ ہے۔ نیٹ کمیون 2020؛ 11:896.

56. Efeyan A، Ortega-Molina A، Velasco-Miguel S، Herranz D، Vassilev LT، Serrano M. Fbroblast کے ماؤس سیلز میں MDM2 مخالف نٹلن-3a کے ذریعے p53-منحصر سنسنی کی شمولیت اصل. کینسر ریس 2007؛ 67:7350–7۔

57. Hoekstra ME، Bornes L، Dijkgraaf FE، Philips D، Pardieck IN، Toebes M، et al. CD8(+) T سیل سے خفیہ IFNgamma کے ذریعے بائی اسٹینڈر ٹیومر سیلز کی لمبی دوری کی ترمیم۔ نیٹ کینسر 2020؛ 1:291–301۔

58. Ruscetti M, Morris JPt, Mezzadra R, Russell J, Leibold J, Romesser PB, et al. سنسنی سے حوصلہ افزائی عروقی دوبارہ تشکیل دینے سے لبلبے کے کینسر میں علاج کے خطرات پیدا ہوتے ہیں۔ سیل 2020؛ 181:424–41۔

59. دیگے اے ایس، رچرڈز ای، اولڈ ایل جے، شریبر آر ڈی۔ غالب منفی IFN گاما ریسیپٹرز کا اظہار کرنے والے ٹیومر خلیوں کو مسترد کرنے کے خلاف ویوو کی نشوونما اور مزاحمت میں اضافہ۔ استثنیٰ 1994؛ 1:447–56۔

60. گاو جے، شی ایل زیڈ، زاؤ ایچ، چن جے، ژیونگ ایل، ہی کیو، وغیرہ۔ اینٹی CTLA-4 تھراپی کے خلاف مزاحمت کے طریقہ کار کے طور پر ٹیومر خلیوں میں IFN گاما پاتھ وے جینز کا نقصان۔ سیل 2016؛ 167:397–404۔

61. Paffenholz SV، Salvagno C، Ho YJ، Limjoco M، Baslan T، Tian S، et al. سنسنی انڈکشن ڈمبگرنتی کینسر کے preclinical ماڈل میں کیمو- اور امیونو تھراپی کے ردعمل کا حکم دیتا ہے۔ Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2117754119۔

62. Shao DD, Xue W, Krall EB, Bhutkar A, Piccioni F, Wang X, et al. KRAS اور YAP1 EMT اور ٹیومر کی بقا کو منظم کرنے کے لیے اکٹھا ہو جاتے ہیں۔ سیل 2014؛ 158:171–84۔

63. Zhu C, Kim K, Wang X, Bartolome A, Salomao M, Dongiovanni P, et al. ہیپاٹوسائٹ نوچ ایکٹیویشن غیر الکوحل سٹیٹو ہیپاٹائٹس میں جگر کے فبروسس کو اکساتا ہے۔ سائنس ٹرانسل میڈ 2018؛ 10:eaat0344۔

64. Susaki EA، Tainaka K، Perrin D، Yukinaga H، Kuno A، Ueda HR. پورے دماغ اور پورے جسم کو صاف کرنے اور امیجنگ کے لیے اعلی درجے کی کیوبک پروٹوکول۔ نیٹ پروٹوک 2015؛ 10:1709–27۔

65. Bolger AM, Lohse M, Usadel B. Trimmomatic: Illumina sequence data کے لیے ایک لچکدار ٹرمر۔ بایو انفارمیٹکس 2014؛ 30:2114-20۔ 66. Dobin A, Davis CA, Schlesinger F, Drenkow J, Zaleski C, Jha S, et al. ستارہ: انتہائی فاسٹ یونیورسل RNA-seq الائنر۔ بایو انفارمیٹکس 2013؛ 29:15-21۔

67. Anders S, Pyl PT, Huber W. HTSeq- ایک ازگر کا فریم ورک جو ہائی تھرو پٹ سیکوینسنگ ڈیٹا کے ساتھ کام کرتا ہے۔ بایو انفارمیٹکس 2015؛ 31:166-9۔

68. Love MI, Huber W, Anders S. DESeq2 کے ساتھ RNA-seq ڈیٹا کے لیے تہہ کی تبدیلی اور بازی کا معتدل تخمینہ۔ جینوم بائیول 2014؛ 15:550۔

69. Chen EY، Tan CM، Kou Y، Duan Q، Wang Z، Meirelles GV، et al. افزودگی: انٹرایکٹو اور باہمی تعاون پر مبنی HTML5 جین فہرست افزودگی تجزیہ ٹول۔ BMC Bioinf 2013؛ 14:128۔

70. Foroutan M, Bhuva DD, Lyu R, Horan K, Cursons J, Davis MJ. سالماتی فینوٹائپس کا واحد نمونہ اسکورنگ۔ BMC Bioinf 2018؛ 19:404۔

71. Binder JX، Pletscher-Frankild S، Tsafou K، Stolte C، O'Donoghue SI، Schneider R، et al. کمپارٹمنٹس: پروٹین سب سیلولر لوکلائزیشن شواہد کا اتحاد اور تصور۔ ڈیٹا بیس (Oxford) 2014;2014:bau012۔

72. کینسر جینوم اٹلس ریسرچ نیٹ ورک۔ ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کی جامع اور انٹیگریٹو جینومک خصوصیات۔ سیل 2017; 169:1327–41۔

73. Colaprico A، Silva TC، Olsen C، Garofano L، Cava C، Garolini D، et al. TCGAbiolinks: TCGA ڈیٹا کے انٹیگریٹو تجزیہ کے لیے R/Bioconductor پیکیج۔ نیوکلک ایسڈ ریس 2016؛ 44:e71۔

74. ہینزلمن ایس، کاسٹیلو آر، گِنی جے جی ایس وی اے: مائیکرو رے اور آر این اے سیک ڈیٹا کے لیے جین سیٹ تغیرات کا تجزیہ۔ BMC Bioinf 2013؛ 14:7۔

75. Bankhead P, Loughrey MB, Fernandez JA, Dombrowski Y, McArt DG, Dunne PD, et al. QuPath: ڈیجیٹل پیتھولوجی امیج تجزیہ کے لیے اوپن سورس سافٹ ویئر۔ سائنس کا نمائندہ 2017؛ 7:16878۔

76. Bernstein NJ، Fong NL، Lam I، Roy MA، Hendrickson DG، Kelley DR. سولو: سنگل سیل RNA-Seq میں دوہری شناخت نیم زیر نگرانی گہری سیکھنے کے ذریعے۔ سیل سسٹم 2020؛ 11:95–101۔

77. ستیجا R، Farrell JA، Gennert D، Schier AF، Regev A. Spatial Reconstruction of single-cell gene expression data. نیٹ بائیو ٹیکنالوجی 2015؛ 33:495–502۔

78. McInnes L, Healy J, Melville J. UMAP: یکساں کئی گنا تخمینہ اور طول و عرض میں کمی کے لیے پروجیکشن۔ arXiv: 1802.03426 [پری پرنٹ]۔ 2018. دستیاب یہاں سے: https://doi.org/10.48550/arXiv.1802.03426۔

79. Traag VA، Waltman L، van Eck NJ. لووین سے لیڈن تک: اچھی طرح سے منسلک کمیونٹیز کی ضمانت۔ سائنس کا نمائندہ 2019؛ 9:5233۔

80. Korsunsky I، Millard N، Fan J، Slowikowski K، Zhang F، Wei K، et al. ہارمونی کے ساتھ سنگل سیل ڈیٹا کا تیز، حساس اور درست انضمام۔ نیٹ طریقے 2019؛ 16:1289–96۔