SIRT5-متعلقہ Desuccinylation ترمیم سے Quercetin-حوصلہ افزائی دل کی ناکامی اور ہائی گلوکوز سے متاثر کارڈیو مایوسائٹس کے خلاف مائیٹوکونڈریل کوالٹی سرویلنس حصہ 1 کے ضابطے کے ذریعے زخمی ہونے والے تحفظ میں تعاون کرتا ہے۔

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

مایوکارڈیل فائبروسس ذیابیطس سے وابستہ بنیادی پیتھولوجیکل تبدیلی کی نمائندگی کرتا ہے۔کارڈیو مایوپیتھیاور دل کی ناکامی، اور یہ خراب کارڈیک ڈائیسٹولک اور سسٹولک فنکشن کے ساتھ مایوکارڈیل تعمیل میں کمی کا باعث بنتی ہے۔ Quercetin، مختلف دواؤں کے پودوں میں ایک فعال جزو، دل کی بیماریوں کے خلاف علاج کے اثرات مرتب کرتا ہے۔ یہاں، ہم اس بات کی تحقیق کرتے ہیں کہ آیا SIRT5- اور IDH2-متعلقہ ڈیسوسینولیشن دل کی ناکامی میں مایوکارڈیل فبروسس کے بنیادی میکانزم میں شامل ہے جب کہ مائٹوکونڈریل کوالٹی کی نگرانی کے لیے متعلقہ علاج کی دوائیں تلاش کرتے ہیں۔ مایوکارڈیل فبروسس اور ہارٹ فیلیئر کے ماؤس ماڈل، جو ٹرانسورس ایورٹک کنسٹرکشن (TAC) کے ذریعے قائم کیے گئے تھے، کو 4 ہفتوں تک روزانہ quercetin (50 mg/kg) کے ساتھ دیا جاتا تھا۔ HL-1 خلیات کو quercetin کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا اور وٹرو میں ہائی گلوکوز (30 mM) کے ساتھ علاج کیا گیا۔ کارڈیک فنکشن، ویسٹرن بلوٹنگ، مقداری پی سی آر، انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ، اور امیونو فلوروسینس تجزیہ کو مائٹوکونڈریل کوالٹی سرویلنس، آکسیڈیٹیو تناؤ، اور مایوکارڈیل سیلوں میں سوزش کے ردعمل کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا، جبکہ IDH2 کا استعمال کرتے ہوئے امیونوسربینٹ لیول کا پتہ لگایا گیا تھا۔ غیر معمولی کارڈیک انجیکشن فنکشن کے ساتھ، TAC کے بعد مایوکارڈیل فبروسس اور دل کی ناکامی کے واقعات میں اضافہ ہوا۔ ہائی گلوکوز کے علاج کے بعد، HL-1 سیل کی سرگرمی روک دی گئی، جس کی وجہ سے ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں کی اضافی پیداوار اور مائٹوکونڈریل ریسیریٹری کمپلیکس I/II سرگرمی اور مائٹوکونڈریل کی روک تھام ہوئی۔اینٹی آکسیڈینٹ انزائمسرگرمی، نیز آکسیڈیٹیو تناؤ اور اشتعال انگیز ردعمل میں اضافہ، مائٹوکونڈریل کوالٹی کی غیر متوازن نگرانی اور ہومیوسٹاسس، اور اپوپٹوسس میں اضافہ۔ Quercetin نے مایوکارڈیل فائبروسس کو روکا اور مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کو بڑھا کر اور مائٹوکونڈریل فیوژن/فِشن اور مائٹوکونڈریل بائیو سنتھیسز کو ریگولیٹ کرکے سوزش کے ردعمل اور آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ کو روکا۔ مزید برآں، TAC نے SIRT5 اظہار کو مائٹوکونڈریل سطح پر روکا اور IDH2 succinylation میں اضافہ کیا۔ تاہم، quercetin نے SIRT5 اظہار میں اضافہ کرکے IDH2 کے desucinylation کو فروغ دیا۔ مزید برآں، si-SIRT5 کے ساتھ علاج نے سیل کی عملداری پر quercetin کے حفاظتی اثر کو ختم کر دیا۔ لہذا، quercetin SIRT5 کے ذریعے IDH2 کے desucinylation کو فروغ دے سکتا ہے، mitochondrial کو برقرار رکھتا ہے۔ہومیوسٹاسس، ماؤس کی حفاظت کریں۔cardiomyocytesسوزش کے حالات میں، اور مایوکارڈیل فائبروسس کو بہتر بناتا ہے، اس طرح دل کی ناکامی کے واقعات کو کم کرتا ہے۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

دل کی ناکامی ایک ایسی حالت ہے جو مختلف نامیاتی یا فعال دل کی بیماریوں کی وجہ سے وینٹریکولر فلنگ یا خراب خارج ہونے کے فنکشن کا باعث بنتی ہے، اور یہ دل کی مختلف بیماریوں کے آخری مرحلے کی نمائندگی کرتی ہے، خاص طور پر جو ذیابیطس کارڈیو مایوپیتھی سے وابستہ ہیں۔ اس طرح، دل کی ناکامی کو کلینکل پریکٹس میں "ذیابیطس کے قلبی امراض کا آخری میدان جنگ" کہا جاتا ہے [1]۔ پچھلی چند دہائیوں میں، زیادہ تر تحقیق نے ذیابیطس کے مایوکارڈیل انجری، کارڈیک ہیموڈینامکس، اور آئیلیٹ سسٹم کے ریگولیشن کی دیکھ بھال پر توجہ مرکوز کی ہے۔ دل کی ناکامی کے ساتھ مریضوں میں ذیابیطس کورونری دل کی بیماری، ہائی بلڈ پریشر، یا ذیابیطس کے بغیر مریضوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر پہلے ظاہر ہوتا ہے. مایوکارڈیل فبروسس آکسیڈیٹیو تناؤ، اشتعال انگیز ردعمل، مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم ڈس آرڈر، اور سیلولر عمر بڑھنے جیسے عوامل کے لیے خطرناک ہے [2]۔ وینٹریکولر ریموڈلنگ [3] کی بنیادی وجہ کے طور پر، مایوکارڈیل فائبروسس مایوکارڈیل تعمیل میں کمی اور کارڈیک سسٹولک اور ڈائیسٹولک فنکشن میں کمی کو فروغ دے سکتا ہے۔ بالآخر، طویل مدتی حجم یا دباؤ اوورلوڈ دل کی ناکامی کا باعث بن سکتا ہے۔ اس طرح، ذیابیطس کارڈیو مایوپیتھی سے دل کی ناکامی تک بڑھنے کے ساتھ شدید مایوکارڈیل فبروسس یا کارڈیک ہائپر ٹرافی [4,5] ہے۔ اس طرح، مایوکارڈیل فبروسس کو بہتر کرنے سے دل کی ناکامی میں تاخیر اور دل کے کام کو بہتر بنانے کے لیے دکھایا گیا ہے اور یہ ذیابیطس کارڈیو میوپیتھی اور دل کی ناکامی کے علاج کے لیے ایک نیا طریقہ بن گیا ہے [6]۔

مائٹوکونڈریا، خلیوں کے توانائی کے تحول کے مراکز، دل کی اعلی توانائی کی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن کے ذریعے توانائی پیدا کرتے ہیں [7,8]۔ دل میں ہونے والی بہت سی اہم جسمانی سرگرمیاں، جیسے مایوکارڈیل سکڑاؤ اور انٹرا سیلولر ہومیوسٹاسس کی دیکھ بھال، کے لیے ATP [9-11] کی ضرورت ہوتی ہے۔ مائٹوکونڈریا کا اپنا کوالٹی کنٹرول سسٹم ہے جو مائٹوکونڈریل فیوژن، فیوژن، بائیو جینیسس، اور مائٹوفیجی [12,13] کو منظم کرکے ساخت اور توانائی کے تحول کو برقرار رکھنے اور بحال کرتا ہے۔ یہ نگرانی کا نظام مائٹوکونڈریا اور کارڈیو مایوسائٹس کو تناؤ کے محرک سے بچا سکتا ہے [8,13]۔ مزید برآں، ذیابیطس کارڈیو مایوپیتھی کی وجہ سے مایوکارڈیل نقصان کا تعلق مائٹوکونڈریل کوالٹی کی نگرانی میں عدم توازن کی وجہ سے ہونے والے مائٹوکونڈریل dysfunction سے ہو سکتا ہے۔

Cistanche قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

لہذا، عام قلبی جسمانی کام کے لیے برقرار اور مکمل طور پر کام کرنے والے مائٹوکونڈریا کی ضرورت ہوتی ہے۔ درحقیقت، مائٹوکونڈریل ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (آر او ایس) کی ضرورت سے زیادہ پیداوار یا مایوکارڈیل اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم کو پہنچنے والے نقصان کا تعلق وینٹریکولر ہائپر ٹرافی اور دیوار کو دوبارہ بنانے سے ہے، جو مایوکارڈیل فبروسس اور دل کی ناکامی کا باعث بن سکتا ہے۔ مطالعہ نے دل کی ناکامی اور ذیابیطس کارڈیو مایوپیتھی کے ساتھ پیچیدہ ذیابیطس mellitus کے مریضوں میں مایوکارڈیل مائٹوکونڈریا کی شکل اور ساخت میں اسامانیتاوں کا انکشاف کیا ہے۔ مزید یہ کہ دل کی ناکامی کے کینائن ماڈلز میں مائٹوکونڈریل جھلی کو پہنچنے والے نقصان اور ساختی اسامانیتاوں کی اطلاع ملی ہے۔ مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں کمی، غیر معمولی مائٹوکونڈریل پارگمیٹی ٹرانزیشن پور (ایم پی ٹی پی) کھلنا، اے ٹی پی کی ترکیب میں کمی، اور ضرورت سے زیادہ ROS کی پیداوار کا بھی پتہ چلا ہے [14,15]۔ لہذا، مائٹوکونڈریل ماس اور ہومیوسٹاسس کو نشانہ بنا کر مائٹوکونڈریل معیار کی نگرانی کرنا آکسیڈیٹیو تناؤ اور اشتعال انگیز ردعمل کو روکنے کے لیے کارآمد ثابت ہو سکتا ہے، اس طرح فبروسس کو بہتر بناتا ہے [16]۔ آکسیڈیٹیو تناؤ اور اشتعال انگیز ردعمل اہم عوامل ہیں جو مایوکارڈیل فبروسس کو اکساتے ہیں اور اکثر دل کی مختلف بیماریوں [16,17] میں ایک ہی زخم کی جگہ پر رہتے ہیں۔ جب شدید یا دائمی مایوکارڈیل چوٹ کے ساتھ مختلف قسم کی قلبی پیچیدگیاں یا میٹابولک کارڈیو مایوپیتھی واقع ہوتی ہے تو، مدافعتی نظام کو چالو کیا جاتا ہے، متعدد سوزشی عوامل کو جاری کرتا ہے جو آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ کو متاثر کرتے ہیں، مایوکارڈیل فبرو بلاسٹس کو چالو کرتے ہیں، اور مائیوکارڈیل انجری کا سبب بنتے ہیں۔ تنزلی، اس طرح بالآخر مایوکارڈیل فبروسس اور دل کی ناکامی کا باعث بنتی ہے [18، 19]۔ Sirtuin 5 (SIRT5) بڑے پیمانے پر نیوکلئس، سائٹوپلازم اور مائٹوکونڈریا میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ اگرچہ SIRT5 deacetylase کی سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے، لیکن یہ lysine succinylation کو منظم کر سکتا ہے [20]۔ اپنے N-ٹرمینل پیروکسوم لوکلائزیشن سگنل PTS2 کے ذریعے، SIRT5 انٹرا سیلولر H, O، کی پیداوار کو کم کرنے کے لیے پیروکسیسم میں داخل ہو سکتا ہے، اس طرح سیل آکسیڈیشن میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ مزید برآں، SIRT5 مبینہ طور پر شدید مایوکارڈیل انفکشن [21-23] میں ایک حفاظتی طریقہ کار کے طور پر ڈیسوسینیلیشن کو فروغ دیتا ہے۔ خاص طور پر، شدید کارڈیک اسکیمیا اور ہائپوکسیا PGC-l /PPAR-y راستے کے ذریعے SIRT5 کے اظہار کو بڑھا سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں کارڈیو مایوسائٹ انرجی میٹابولزم میں شامل کلیدی پروٹینوں کی ڈیسوسینیلیشن ہوتی ہے، اس طرح ان خلیوں پر حفاظتی اثر پڑتا ہے [24]۔ SIRT5 کی پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم بنیادی طور پر مائٹوکونڈریا میں ہوتی ہے۔ مائٹوکونڈریا کے اندر بھی، NADP plus-dependent isocitrate dehydrogenase 2(IDH2) glutathione-(GSH-) سے متعلق مائٹوکونڈریل اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم کے معمول کے عمل کو متاثر کر سکتا ہے، بشمول glutathione peroxidase (GPX)[25] کی سرگرمیاں۔ مزید یہ کہ، IDH2 NADPH کو glutathione reductase اور thioredoxin reductase فراہم کرتا ہے، اس طرح مائٹوکونڈریا کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچانے کے لیے ایک ریگولیٹری اثر پیدا کرتا ہے [26]۔ تاہم، چند مطالعات نے دل کی ناکامی میں SIRT5 اور IDH2 succinylation کے ضابطے کا جائزہ لیا ہے۔

Quercetin ایک flavonoid ہے جو فطرت میں وسیع پیمانے پر موجود ہے۔ فارماسولوجیکل اسٹڈیز نے اطلاع دی ہے کہ کوئرسیٹن عروقی اینڈوتھیلیل فنکشنل نقصان اور کارڈیک ٹرمینل کو پہنچنے والے نقصان میں تاخیر کر سکتا ہے [27]۔ Quercetin myocardial fibrosis کی روک تھام میں بھی ایک ریگولیٹری کردار رکھتا ہے [28] اور آئلیٹ فنکشن کو مزید منظم کر سکتا ہے۔ مزید برآں، ہم نے پہلے پایا تھا کہ کوئرسیٹن SIRT1/TMBIM6 کے ذریعے مائٹوفجی اور اینڈوپلاسمک ریٹیکولم تناؤ کو کنٹرول کر سکتا ہے، مائٹوکونڈریل توانائی کے تحول کو بہتر بنا سکتا ہے، اور انسانی کارڈیک مایوسائٹس کی حفاظت کر سکتا ہے [27]۔ تاہم، SIRT5 succinylation پر quercetin کے اثر اور مایوکارڈیل خلیات پر اس کے حفاظتی اثر کے تحت ریگولیٹری میکانزم غیر واضح ہیں۔ لہذا، ہم نے یہ قیاس کیا کہ SIRT5 کے ذریعہ منظم کردہ succinylation mitochondrial کوالٹی سرویلنس اور mitochondrial homeostasis کے ذریعے خلیوں کی میٹابولک نمو کو متاثر کرتا ہے۔ ہم نے پایا کہ SIRT5 کو حذف کرنے سے succinylation میں اضافہ ہوسکتا ہے، جس کے نتیجے میں cardiomyocyte کی سرگرمی اور myocardial fibrosis متاثر ہوتی ہے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1.جانور اور منشیات کا علاج۔

تمام تجرباتی طریقہ کار لیبارٹری جانوروں کی نگہداشت اور استعمال کے لیے NIH گائیڈ کے مطابق انجام دیئے گئے تھے اور شیڈونگ یونیورسٹی آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن انسٹیٹیوشنل اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی سے منظور کیے گئے تھے۔ مختصراً، 30 نر جنگلی قسم کے C57BL/6] چوہوں (8-ہفتے پرانے) کو شیڈونگ یونیورسٹی آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن کے تجرباتی اینیمل سینٹر سے حاصل کیا گیا اور تصادفی طور پر تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا: (1) شیم آپریشن، ( 2) ٹرانسورس ایورٹک کنسٹرکشن (TAC)، اور (3) TAC پلس quer-cetin۔ TAC پلس quercetin گروپ کو 50mg/kg quercetin روزانہ (شنگھائی یوآنی بائیوٹیکنالوجی کمپنی، شنگھائی، چین) کے ساتھ 15 دنوں کے لیے انٹراپریٹونلی طور پر دیا جاتا تھا۔ شام اور ٹی اے سی چوہوں کو عام نمکین کے اسی طرح کے انٹراپریٹونیل انجیکشن کے ساتھ لگایا گیا تھا۔

2.2 اینیمل ماڈل کا قیام۔

TAC [29] کا استعمال کرتے ہوئے دل کی ناکامی کا ایک ماڈل قائم کیا گیا تھا۔ مختصراً، چوہوں کو پینٹوباربیٹل (50mg/kg؛ سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) کے نس کے ذریعے انجکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی اور ایک وینٹی لیٹر جوڑا گیا جس کے بعد تھوراکوٹومی کی گئی۔ شہ رگ کو دائیں شریان اور بائیں عام کیروٹڈ شریان کے درمیان ریشم کے دھاگے سے باندھا گیا تھا اور 27 جی کی سوئی کے ساتھ اصل کراس سیکشنل ایریا کے 25-30 فیصد تک کم کر دیا گیا تھا۔

2.3 سیل کلچر۔

HL{{0}} myocytes شیڈونگ یونیورسٹی آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن کے تجرباتی مرکز کے ذریعہ فراہم کیے گئے تھے۔ خلیوں کو ایک Claycomb میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم، 100U/mL پینسلن/سٹریپٹومائسن، 0.1 mM نوراڈرینالین، اور 2mM L-glutamine شامل تھے۔ خلیوں کو 37 ڈگری اور 5 فیصد CO، [30] پر مہذب کیا گیا تھا۔ گلوکوز سگما الڈرچ سے خریدا گیا تھا۔ Quercetin شنگھائی Yuanye بائیو ٹیکنالوجی کمپنی سے حاصل کیا گیا تھا۔ خلیوں کو چار تجرباتی گروپوں میں بے ترتیب کیا گیا تھا: (1) کنٹرول، (2) ہائی گلوکوز (HG)، (3) HG پلس querce-tin، اور (4) HG پلس quercetin plus si-SIRT5۔ HL-1 خلیوں کا علاج ہائی گلوکوز (30mmol/L) اور quercetin (150mg/L) سے کیا گیا۔ چھوٹے مداخلت کرنے والے RNA (siRNA) کی منتقلی کے لیے، Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) کو علاج سے 24 گھنٹے پہلے HL-1 خلیوں میں 50nM siRNA کی منتقلی کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تمام siRNAs جیکائی بیالوجی (شنگھائی، چین) سے حاصل کیے گئے تھے۔

2.4 فلو سائٹوومیٹری۔

اپوپٹوس کی سطح کا تجزیہ کرنے کے لیے، HL-1 سیلز کو فاسفیٹ بفرڈ نمکین (Gibco, Grand Island, NY, USA) میں دوبارہ معطل کیا گیا، 24 گھنٹے کے لیے 70 فیصد ایتھنول کے ساتھ فکس کیا گیا، دھویا گیا، اور پھر 50ug/mL پروپیڈیم آئوڈائڈ میں رکھا گیا۔ حل 30 منٹ کے بعد، خلیات کو دوبارہ معطل کر دیا گیا، اور اپوپٹوسس کا پتہ لگانے کے لیے فلو سائٹوومیٹری کی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔

2.5 سیل وائبلٹی پرکھ۔

MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے HL-1 خلیات کی عملداری کا جائزہ لیا گیا۔ خلیوں کو 50 کی کثافت پر 12-کنویں کی پلیٹوں میں،000 سیل/کنویں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ 22 گھنٹے کے بعد، خلیوں کو تازہ نمو میڈیم کے ساتھ پورا کیا گیا اور 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا، جس کے بعد سیل کی عملداری کا تعین MTT پرکھ [31] کے ذریعے کیا گیا۔

2.6.Enzyme-linked Immunosorbent Assay۔

ایک انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) کٹ کا استعمال ماؤس مایوکارڈیل ٹشو ہوموجنیٹس اور HL-1 خلیوں میں اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز اور سوزش کے عوامل کی سرگرمی کا مقداری تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ مختصراً، مایوکارڈیل ٹشو ہوموجینیٹس اور HL-1 سیل معطلی کو جمع کیا گیا۔

2.7۔آکسیجن کی کھپت کی شرح۔

مختلف گروپوں میں HL-1 خلیوں کی آکسیجن کی کھپت کی شرح سی ہارس ایکس ایف سیل مائٹوکونڈریل پریشر ٹیسٹ کٹ (ایجیلنٹ ٹیکنالوجیز، سانتا کلارا، سی اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا، جبکہ ایکسٹرا سیلولر تیزابیت کی شرح کو سی ہارس ایکس ایف گلائکولیسس کے ساتھ ماپا گیا تھا۔ ریٹ پرکھ کٹ (ایجیلنٹ ٹیکنالوجیز)۔ دونوں اسسز کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دی گئیں۔ 2.8۔ ریئل ٹائم مقداری پی سی آر۔ کل آر این اے کو TRIzol ریجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا، اور آر این اے کی سالمیت کا تجزیہ ایگرز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ فرسٹ اسٹرینڈ cDNA کو iScript" cDNA سنتھیسس کٹ (کل RNA کا 1 μL؛ Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے 20μL کے کل حجم میں ترکیب کیا گیا تھا۔ ایک CFX96 RT-PCR سسٹم（Bio-Rad） استعمال کیا گیا تھا۔ 500×10-nM مخصوص پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے سی ڈی این اے کی سطح کا دو بار تجزیہ کرنے کے لیے۔ ہر تجربے میں، پی سی آر تجزیہ کی کارکردگی کو جانچنے کے لیے مسلسل گھٹا ہوا مخلوط سی ڈی این اے استعمال کیا گیا تھا۔ جین کے اظہار کو ہاؤس کیپنگ جین کے ہندسی وسط کے مطابق مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ ایکسپریشن کو اسی نمونے میں بڑھا دیا گیا جس کا مطالعہ کیا گیا جین تھا، اور جین کے اظہار کا طریقہ تھا [32]۔ 2-AACT کا استعمال کرتے ہوئے طے کیا گیا

2.9 شماریاتی تجزیہ۔

ڈیٹا کو وسط کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ متعدد گروپوں کے درمیان فرق کی تصدیق کے لیے تغیر کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا، اور اسٹوڈنٹ-نیومین-کیولس پوسٹ ہاک ٹیسٹ کیا گیا۔ دو گروپوں کا موازنہ کرنے کے لئے دو دم والے ٹی ٹیسٹ استعمال کیے گئے تھے۔ شماریاتی تجزیہ SPSS 22{6}} سافٹ ویئر (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار کی اہمیت P پر رکھی گئی تھی۔<>

3. نتائج

3.1 Quercetin TAC کے بعد Myocardial Hypertrophy اور Cardiac Dysfunction کو ختم کرتا ہے۔ C57BL/6J نر چوہوں کو تصادفی طور پر تین گروپوں (کنٹرول، TAC آپریشن، اور TACoperation پلس quercetin) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ Quercetin کو TAC پلس quercetin گروپ (50mg/kg، ہر 12h) میں ایڈمن کے ذریعے شامل کیا گیا تھا۔ TAC کے سات ہفتے بعد، TAC ماڈل گروپ میں تقریباً 20 فیصد چوہوں اور 10 فیصد quercetin ٹریٹمنٹ گروپ میں مر گئے۔ اس کے مقابلے میں شیم آپریشن گروپ میں، TAC گروپ میں کارڈیک فنکشن 3 ہفتوں کے بعد نمایاں طور پر بگڑ گیا (اعداد و شمار 1(a)-1(i))۔ تاہم، quercetin کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں کارڈیک فنکشن کو ان چوہوں کے مقابلے میں بہتر کیا گیا جس کا علاج Quercetin سے نہیں کیا گیا تھا (اعداد و شمار 1(a)-1())۔

اس کے بعد ہم نے TAC چوہوں میں مایوکارڈیل ہائپر ٹرافی کا اندازہ TAC پلس quercetin علاج کے بعد TAC (اعداد و شمار 1(j)-1(m)) کے 8 ہفتوں بعد ہیماتوکسیلین اور eosin، WGA، اور TUNEL سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے کیا۔ اس کے مقابلے میں شمع آپریشن گروپ میں، کارڈیک ہائپر ٹرافی اور کارڈیو مایوسائٹ ہائپر ٹرافی یا ٹی اے سی چوہوں میں موت کی ڈگری میں نمایاں اضافہ ہوا تھا (اعداد و شمار 1(j)-1(m))؛ تاہم، quercetin علاج (اعداد و شمار 1(j)-1(m)) کے بعد اس اثر میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔

3.2 Quercetin TAC کے بعد مایوکارڈیل فائبروسس اور سوزش کی سطح کو کم کرتا ہے۔

ہم نے امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعہ مختلف گروپوں کے مایوکارڈیم میں کولیجینیز I کی سطح کا پتہ لگایا۔ ماڈل گروپ کے مایوکارڈیم میں کولیجنیس I/II کی سطح TAC (اعداد و شمار 2(h)-2(i)) کے بعد نمایاں طور پر بڑھ گئی تھی۔ اس اثر کو quercetin (اعداد و شمار 2(h)-2(I) کے ذریعے تبدیل کر دیا گیا۔ ہم نے میسن سٹیننگ کے ذریعے مختلف گروپوں میں مایوکارڈیل فائبروسس کی ڈگری کا بھی اندازہ کیا۔ ماڈل گروپ میں مایوکارڈیل فائبروسس کی ڈگری

TAC کے بعد نمایاں طور پر اضافہ ہوا؛ quercetin کے ساتھ علاج نے اس رجحان کو پلٹ دیا اور مایوکارڈیل ٹشو (اعداد و شمار 2(a) اور 2(b)) کو محفوظ کیا۔

مایوکارڈیل فائبروسس ایک پیچیدہ پیتھولوجیکل عمل ہے جو بنیادی طور پر طویل مدتی دباؤ کے اوورلوڈ اور اشتعال انگیز رد عمل کی وجہ سے ہوتا ہے۔ بہت سے سوزش کے عوامل، جیسے TGF-، TNF-، IL-13، IL-18، اور MMPs، مایوکارڈیل فائبروسس میں حصہ لے سکتے ہیں۔ لہذا، ہم نے ELISA کے ذریعہ منتخب سوزش کے عوامل (TNF-، IL-13، اور IL-18) ​​کی کثرت کا پتہ لگایا، جبکہ TGF- اور MMP-9 کی نقل کی سطح کا پتہ لگایا گیا RT-PCR۔ ماڈل گروپ میں TNF-، IL-13، اور IL-18 اور TGF- اور MMP-9 کے mRNA کی سطحیں کنٹرول گروپ کے مقابلے زیادہ تھیں (اعداد و شمار 2( c)-2(g))۔ Quercetin نے اس رجحان کو الٹ دیا اور سوزش کو روکا (اعداد و شمار 2(c)-2(g))۔ یہ تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا quercetin کا ​​علاج کا طریقہ کار SIRT5 اور IDH2 سے متعلق ہے، ہم نے SIRT5 اور IDH2 کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کا پتہ لگایا۔ ٹی اے سی (فگرز 2(ایم)-2(پی) کے بعد ایم آر این اے اور پروٹین ایکسپریشن لیولز کو نمایاں طور پر روکا گیا تھا۔ Quercetin نے ان اثرات کو الٹ دیا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ quercetin SIRT5 اور IDH2 کو مایوکارڈیل فبروسس اور ہارٹ فیلیئر سے بچانے کے لیے ہدف بناتا ہے (اعداد و شمار 2( m)-2(p))۔

مایوکارڈیل فائبروسس یا ٹی اے سی کے بعد مایوکارڈیل انجری پر کوئرسیٹن کے حفاظتی طریقہ کار کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، ہم نے مایوکارڈیل ٹشو میں آر او ایس کی پیداوار کی تحقیقات کی اور پایا کہ ٹی اے سی (فگرز 2(کے) اور 2(آئی) کے بعد اس میں نمایاں اضافہ ہوا ہے، جب کہ کوئرسیٹن کو روکا گیا تھا۔ ROs کی زیادہ پیداوار (اعداد و شمار 2(k) اور 2())۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ مایوکارڈیل فائبروسس یا مایوکارڈیل انجری پر کوئرسیٹن کا حفاظتی اثر ریڈوکس ہومیوسٹاسس کے ضابطے سے متعلق ہے۔

3.3 Quercetin آکسیڈیٹیو تناؤ کو منظم کرکے ہائی گلوکوز سے متاثرہ HL-1 سوزش کی چوٹ کو کم کرتا ہے۔ مذکورہ بالا تجرباتی نتائج نے ابتدائی طور پر ظاہر کیا کہ quercetin کارڈیک فنکشن کو بہتر بنا سکتا ہے اور TAC کے بعد چوہوں میں مایوکارڈیل فائبروسس کی سطح کو روک سکتا ہے۔ اس کا حفاظتی اثر SIRT5 اور سوزش کے عوامل کے ضابطے سے متعلق ہو سکتا ہے۔ تاہم، آیا یہ واقعات براہ راست ریگولیٹری میکانزم کے ذریعے ہوتے ہیں، یہ واضح نہیں ہے۔ ہائی گلوکوز کے حالات میں quercetin کے ریگولیٹری میکانزم کا مطالعہ کرنے کے لیے، ہم نے HL-1 سیل کی چوٹ کو ہائی گلوکوز سے متاثر کیا، ان سیلوں کا quercetin کے ساتھ علاج کیا، اور SIRT5 کو siRNA سے گرایا۔ MTT اور CCK-8 اسسیس کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی سرگرمی کا پتہ لگایا گیا، اپوپٹوسس کی سطحوں کا پتہ فلو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اور سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD)، GSH، TrxR، اور میلونڈیالڈہائڈ (MDA) کی سرگرمیوں کا ELISA کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا۔ ہم نے مختلف گلوکوز ارتکاز کے تحت HL-1 خلیوں کی عملداری کا تجزیہ کرنے کے لیے CCK-8 کا استعمال کیا۔ جیسا کہ شکل 3(j) میں دکھایا گیا ہے، 30mM کے اعلی گلوکوز کے ارتکاز پر سیل کی عملداری میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ ایم ٹی ٹی اور فلو سائٹومیٹری نے انکشاف کیا کہ ہائی گلوکوز کی حالت سیل کی سرگرمی کو روکتی ہے، اپوپٹوسس اور آر او ایس کی پیداوار میں اضافہ کرتی ہے، اور سیل کی موت کو تیز کرتی ہے (اعداد و شمار 3(a)-3(e))۔ اس کے مقابلے میں کنٹرول گروپ میں، ہائی گلوکوز کی حوصلہ افزائی نے MDA کی سرگرمی میں اضافہ کیا اور اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، جیسے SOD، GSH، اور TrxR (اعداد و شمار 3(f)-3(i)) کی سرگرمی کو روک دیا۔

Quercetin نے MDA کی سرگرمی کو روکا، SOD، GSH، اور TrxR کی سرگرمی میں اضافہ کیا ))، اور سیل کی سرگرمی میں بہتری (شکل 3(c))۔ تاہم، si-SIRT5 پلس quercetin علاج نے MDA کی سرگرمی کو مزید بڑھایا، apoptosis اور ROS کی پیداوار کی سطح میں اضافہ کیا، اور سیلولر سرگرمی کو روکا (اعداد و شمار 3(a){ {8}}(i))۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ quercetin ہائی گلوکوز کے ذریعے متحرک ریڈوکس حالت میں عدم توازن کو کنٹرول کرتا ہے اور HL-1 کارڈیو مایوسائٹس کی حفاظت کرتا ہے۔ یہ ریگولیٹری اثر براہ راست SIRT5 سے متعلق ہو سکتا ہے۔

3.4 Quercetin اعلی گلوکوز سے متاثرہ HL-1 SIRT کو فروغ دے کر سوزش کی چوٹ کو کم کرتا ہے5-متعلقہ ڈیسوسینیلیشن ترمیم۔

آکسیڈیٹیو تناؤ مایوکارڈیل خلیوں کی ساخت اور کام کو براہ راست متاثر کرتا ہے اور مایوکارڈیل فائبروسس سے وابستہ سگنلنگ مالیکیولز کو براہ راست متحرک کر سکتا ہے، جیسے ایم ایم پی، ہائپر ٹرافی اور مایوکارڈیل سیلز کے اپوپٹوسس کا باعث بنتا ہے، جس کا تعلق ROS کی ضرورت سے زیادہ پیداوار سے ہوتا ہے، اس کے ساتھ ایک سوزشی ردعمل ہوتا ہے۔ . ROS کی اضافی پیداوار مائٹوکونڈریل میکرو مالیکیولز کو ان کی تشکیل کی جگہوں پر یا اس کے قریب نقصان پہنچا سکتی ہے۔ دل کی ناکامی میں مائٹوکونڈریل ساختی نقصان اور فنکشنل گرنے کا تعلق ROS کی بڑھتی ہوئی سطح سے ہے، جو بنیادی طور پر مائٹوکونڈریل لپڈ پیرو آکسائیڈ میں اضافہ اور مائٹوکونڈریل ریسپریٹری کمپلیکس I، III، اور IV کی انزائم سرگرمیوں میں کمی کے طور پر ظاہر ہوتا ہے۔ تاہم، توانائی میٹابولزم میں

شکل 2: Quercetin (Que) ٹرانسورس ایورٹک کنسٹرکشن (TAC) کے بعد مایوکارڈیل فائبروسس اور سوزش کی سطح کو کم کرتا ہے۔ (a) میسن کا داغ۔ (ب) فائبروٹک ایریا (فیصد)۔ (ce) IL-18، TNF-، اور IL-13 کے اظہار کی سطحوں کا پتہ ELISA کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ -PCR.(hj) کولیگنیس (کولاج) I/Ill کا اظہار امیونو ہسٹو کیمسٹری کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا۔ (k، I) ROS کی تبدیلیاں۔ (mp) SIRT5 اور IDH2 کے پروٹین/RNA اظہار کا پتہ چلا۔ Mean± SD؛*P<>

mitochondria succinylation کی طرف سے منظم کیا جاتا ہے. پچھلے تجرباتی نتائج نے ثابت کیا کہ مایوکارڈیل فبروسس اور دل کی ناکامی پر quercetin کا ​​علاج اثر SIRT1 سے متعلق ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، ہائی گلوکوز سے محرک HL-1 خلیوں میں SIRT5 اور IDH2 کے mRNA کی سطحوں اور امیونوپریسیپیٹیشن سے پتہ چلتا ہے کہ HL-1 خلیوں میں IDH2 اظہار کو ہائی گلوکوز محرک کے بعد نمایاں طور پر روکا گیا تھا، جبکہ IDH2 کی succinylation کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا تھا (اعداد و شمار 4(a)-4(d))۔ مزید برآں، quercetin مداخلت کے بعد، SIRT5 اور IDH2 کے mRNA اظہار اور IDH2 desucinylation کی سطح میں اضافہ ہوا (اعداد و شمار 4(a)-4(d))۔ مائٹوکونڈریل سانس کی زنجیر پر SIRT کے ثالثی کے اثر کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، ہم نے مائٹوکونڈریل ریسپائریٹری کمپلیکس I، III، اور IV کا اندازہ کیا۔ ہائی گلوکوز محرک کے بعد، ان احاطے کی سطح کم ہو گئی تھی۔ تاہم، quercetin نے اس رجحان کو الٹ دیا (اعداد و شمار 4(e)-4(g))۔

si-SIRT5 علاج (اعداد و شمار 4(a)-4(g)) کے بعد مائٹوکونڈریل ریسپریٹری کمپلیکس اور IDH2 succinylation پر quercetin کے ریگولیٹری اثر کو بھی روک دیا گیا تھا۔ لہذا، IDH2 کا SIRT5-ثالثی ڈیسوسینیلیشن مایوکارڈیل فائبرو سس اور دل کی ناکامی کا ایک اہم ریگولیٹری طریقہ کار ہو سکتا ہے۔ مزید برآں، quercetin SIRT5- کے ذریعے سوزش کے ردعمل اور آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ کو بہتر بنا سکتا ہے IDH2 کی ثالثی ڈیسوکسینیلیشن؛ تاہم، مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کے ریگولیٹری میکانزم کو مزید تجزیہ کی ضرورت ہے۔

3.5 Quercetin مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم اور NLRP3 کو ریگولیٹ کرکے ہائی گلوکوز سے متاثرہ HL-1 سوزش کی چوٹ کو کم کرتا ہے۔

مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کو سکسینیلیشن کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ تاہم، مختلف عوامل کی وجہ سے دل کی ناکامی یا مایوکارڈیل فائبروسس میں آکسیڈیٹیو تناؤ کا ایک اہم پیتھولوجیکل میکانزم اور سوزش کی حالت میں مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کی خرابی شامل ہے۔ لہذا، ہم نے مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم اور ہومیوسٹاسس پر quercetin کے ریگولیٹری اثرات کی تصدیق کی۔ امیونو فلوروسینس تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ اعلی گلوکوز محرک کے بعد NLRP3 کا بہت زیادہ اظہار کیا گیا تھا ، جو quercetin (اعداد و شمار 5 (f) اور 5 (g)) کے ذریعہ الٹ گیا تھا۔ مزید یہ کہ، si-SIRT5 علاج نے NLRP3 (اعداد و شمار 5(f) اور 5(g)) پر quercetin کے ریگولیٹری اثر کو ختم کردیا۔

مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کا ضابطہ NLRP3 ایکٹیویشن سے گہرا تعلق رکھتا ہے۔ درحقیقت، NF-xB نقصان پہنچا مائٹوکونڈریا [33، 34] کو ختم کرکے NLRP3 کی ایکٹیویشن کو محدود کر سکتا ہے۔ ہم نے پایا کہ کوئرسیٹن نے NLRP3 کو ریگولیٹ کرکے مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو متاثر کیا۔ ہائی گلوکوز سے محرک HL-1

خلیات نے مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کی سنگین خرابی ظاہر کی۔ اے ٹی پی کی سطح، بیسل سانس، زیادہ سے زیادہ سانس، اور مائٹوکونڈریا کے سانس کے ذخائر میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے۔ مزید برآں، ایم پی ٹی پی کھولنے میں غیر معمولی اضافہ ہوا تھا (اعداد و شمار 5(a)-5(e))۔ Quercetin نے ان اثرات کو تبدیل کیا اور mitochondrial توانائی کے تحول اور mPTP بندش کو بحال کیا (اعداد و شمار 5(a)-5(e))۔ تاہم، si-SIRT5 علاج نے مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم اور ایم پی ٹی پی (اعداد و شمار 5(a)-5(e)) پر quercetin کے ذریعہ بنائے گئے ضابطے کو الٹ دیا۔ لہذا، سوزش اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے ساتھ ROS کی زیادہ پیداوار مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ کا باعث بن سکتی ہے، اور NLRP3 مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کے ساتھ تعامل کر سکتا ہے۔ مائٹوکونڈریا سوزش کا "ٹروجن ہارس" ہو سکتا ہے، جو پچھلے مطالعے کے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے [35]۔

یہ مضمون ہنداوی آکسیڈیٹیو میڈیسن اینڈ سیلولر لمبییوٹی والیوم 2021، آرٹیکل ID 5876841، 17 صفحات https://doi.org/10.1155/2021/5876841 سے لیا گیا ہے۔