Sodium Thiosulfate-supplemented UW سلوشن Syngeneic کڈنی ٹرانسپلانٹیشن کے ایک مورین ماڈل میں طویل عرصے تک کولڈ اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کے خلاف رینل گرافٹس کی حفاظت کرتا ہے۔

رابطہ: ali.ma@wecistanche.com

Max Y. Zhang et al

Cistanche tubulosa روکتا ہےگردہبیماری، حاصل کرنے کے لئے یہاں کلک کریںمصنوعات اور Cistanche Nz

خلاصہ

تعارف:کولڈ اسکیمیا ریپرفیوژن انجری (IRI) ایک ناگزیر واقعہ ہے جو ٹرانسپلانٹ کے بعد کی پیچیدگیوں کو بڑھاتا ہے۔ ہم نے پہلے یہ ظاہر کیا ہے کہ غیر FDA سے منظور شدہ ہائیڈروجن سلفائیڈ (H2S) ڈونر مالیکیولز کے ساتھ یونیورسٹی آف وسکونسن (UW) کے حل کی تکمیل کولڈ IRI کو کم کرتی ہے اور ٹرانسپلانٹیشن کے بعد رینل گرافٹ کے کام کو بہتر بناتی ہے۔ موجودہ مطالعہ اس بات کی تحقیقات کرتا ہے کہ آیا ایف ڈی اے سے منظور شدہ H2S ڈونر مالیکیول، سوڈیم تھیوسلفیٹ (STS) کا طبی لحاظ سے متعلقہ چوہا ماڈل میں syngeneic orthotopic کے ایک جیسا یا بہتر اثر پڑے گا۔گردہٹرانسپلانٹیشن

طریقہ:تیس لیوس چوہوں کی دو طرفہ نیفریکٹومی کی گئی جس کے بعد بائیں جانب سینجینک آرتھوٹوپک ٹرانسپلانٹیشن کی گئی۔گردہUW یا UW پلس STS محلول میں 4 ◦C پر 24-گھنٹہ محفوظ کرنے کے بعد۔ چوہوں کو ٹرانسپلانٹ کے بعد کے دن 14 تک مانیٹر کیا گیا اور گردوں کے فنکشن (پیشاب کی پیداوار، سیرم کریٹینائن، اور بلڈ یوریا نائٹروجن) کا اندازہ لگانے کے لیے قربانی دی گئی۔گردہسیکشنز کو H&E، TUNEL، CD68، اور myeloperoxidase (MPO) سے داغ دیا گیا تھا تاکہ ایکیوٹ ٹیوبلر نیکروسس (ATN)، اپوپٹوسس، میکروفیج انفلٹریشن، اور نیوٹروفیل انفلٹریشن کا پتہ لگایا جا سکے۔

نتیجہ:UW plus STS گرافٹس نے ٹرانسپلانٹیشن کے فوراً بعد گرافٹ فنکشن کو نمایاں طور پر بہتر دکھایا، UW گرافٹس کے مقابلے میں بہتر وصول کنندہ کی بقا کے ساتھ (p < {{0}}.05)۔="" ہسٹوپیتھولوجیکل="" امتحان="" نے="" uw="" گرافٹس="" (p=""><0.05) کے="" مقابلے="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" میں="" atn،="" apoptosis،="" macrophage،="" اور="" neutrophil="" infiltration="" اور="" pro-inflammatory="" اور="" pro-apoptotic="" جینوں="" کی="" کمی="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کرنے="" کا="" انکشاف="">

نتیجہ:ہم پہلی بار دکھاتے ہیں کہ ایس ٹی ایس کے اضافی UW محلول میں رینل گرافٹس کا تحفظ اپوپٹوٹک اور سوزش کے راستوں کو دبا کر طویل سرد IRI سے بچاتا ہے، اور اس طرح گرافٹ فنکشن کو بہتر بناتا ہے اور وصول کنندہ کی بقا کو طول دیتا ہے۔ یہ طویل عرصے تک سرد آئی آر آئی کے نقصان دہ طبی نتائج کو کم کرنے کے لیے طبی لحاظ سے قابل اطلاق علاج کی حکمت عملی کی نمائندگی کر سکتا ہے۔گردہٹرانسپلانٹیشن

مطلوبہ الفاظ:سوڈیم تھیوسلفیٹ (STS) اسکیمیا ریپرفیوژن انجری (IRI) جامد کولڈ اسٹوریج (SCS)گردہٹرانسپلانٹیشن گرافٹ اور وصول کنندہ کی بقا

1. تعارف

گردہٹرانسپلانٹیشن آخری مرحلے کے لیے بہترین علاج ہے۔گردہگردوںبیماری (ESRD)۔ ڈائلیسس کے مقابلے،گردہٹرانسپلانٹیشن بہتر ہے، کیونکہ یہ زندگی کا بہتر معیار فراہم کرتا ہے اور اس کی لاگت کی تاثیر کے ساتھ بقا کا ایک اہم فائدہ دیتا ہے [1–3]۔ تاہم، عطیہ دہندگان کے گردوں کی خریداری کا تعلق فطری طور پر اسکیمیا ریپرفیوژن انجری (IRI) سے ہے، جو کہ ٹرانس پلانٹیشن کے دوران خون کے بہاؤ کے خاتمے اور بعد میں بحال ہونے کا ناگزیر نتیجہ ہے [4]۔ ٹرانسپلانٹ سے متاثر آئی آر آئی کو کم کرنے کی موجودہ حکمت عملی معیاری تحفظ کے حل میں رینل گرافٹس کا جامد کولڈ اسٹوریج (ایس سی ایس) ہے جیسے کہ یونیورسٹی آف وسکونسن (UW) کا محلول برف پر 4 ◦C پر ٹرانسپلانٹ سے پہلے کی مدت کے دوران [5]۔ تاہم، طویل عرصے تک ایس سی ایس کو سیل کی بڑھتی ہوئی موت، سوزش، اور دیگر نقصان دہ سیلولر اور سالماتی واقعات سے منسلک دکھایا گیا ہے، جس کے نتیجے میں تاخیر سے گرافٹ فنکشن (DGF)، ایکیوٹ ٹیوبلر نیکروسس (ATN)، اور گرافٹ میں کمی کے واقعات میں اضافہ ہوتا ہے۔ بقا [6-10]۔ اس کے علاوہ، ESRD کے عالمی سطح پر بڑھتے ہوئے واقعات اور ٹرانسپلانٹ کی انتظار کی فہرستوں میں مریضوں کی بڑھتی ہوئی تعداد کو برقرار رکھنے کے لیے، بہت سے ٹرانسپلانٹ مراکز طویل سرد اسکیمک ادوار کے ساتھ رینل گرافٹس کو قبول کرتے ہیں، جو کہ ٹشو کو مجموعی طور پر نقصان پہنچاتا ہے۔ ایس سی ایس کے بعد ریفرفیوژن ہے، جب گرم آکسیجن والے خون کو ٹھنڈے اسکیمک گرافٹ میں بحال کیا جاتا ہے۔ ریپرفیوژن، جو اسکیمک چوٹ کا اثر کرنے والا مرحلہ ہے، ٹشو کی چوٹ میں اضافہ [11-13] کی خصوصیت ہے۔

سردی کے دوران IRI کو محدود کرنے کے لئے ایک ممکنہ علاج کی حکمت عملیگردہٹرانسپلانٹیشن میں ہائیڈروجن سلفائیڈ (H2S) کے ساتھ معیاری تحفظاتی محلول کی تکمیل شامل ہے، جو کہ ایک اینڈوجینس طور پر تیار کردہ گیسو ٹرانسمیٹر ہے جسے واسوڈیلیشن اور سیلولر سگنلنگ [14-16] میں اہم جسمانی کردار ادا کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ ہم نے پہلے دکھایا ہے کہ H2S کے اضافی UW حل میں طویل SCS ٹرانسپلانٹ سے متاثرہ کولڈ IRI کو کم کرتا ہے اور syngeneic اور allogenic کڈنی ٹرانسپلانٹیشن [17–19,41, 42] کے مورین ماڈلز میں گرافٹ کی بقا کو بہتر بناتا ہے۔ تاہم، ان مطالعات میں استعمال ہونے والے H2S ڈونر مالیکیول طبی لحاظ سے قابل عمل نہیں ہیں۔ اس کی وجہ سے سوڈیم تھیو سلفیٹ (STS) استعمال کرنے پر غور کیا گیا، جو ایک H2S ڈونر دوا ہے جسے فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن (FDA) نے ESRD مریضوں میں کیلسیفیلیکسس کے علاج کے لیے منظور کیا ہے، کینسر کے علاج میں سسپلٹین کی حوصلہ افزائی زہریلا، اور ایک تریاق کے طور پر۔ سائینائیڈ کا زہر [20-23]۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ STS IRI [24-26] کے جانوروں کے ماڈلز میں حفاظتی اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔ تاہم، ٹرانسپلانٹ سے متاثرہ کولڈ رینل IRI پر اس کا اثر نامعلوم ہے۔ لہذا، موجودہ مطالعہ رینل آئی آر آئی کے ایک ان وٹرو ماڈل میں ایس ٹی ایس کے رینو پروٹیکٹو اثرات کی تحقیقات کرتا ہے اور سینجینک آرتھوٹوپک کڈنی ٹرانسپلانٹیشن کے چوہا ماڈل۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 وٹرو پروٹوکول میں تجرباتی

کولڈ ہائپوکسیا اور گرم ری آکسیجنیشن چوٹ کا ایک ان وٹرو ماڈل جو Vivo کولڈ IRI کے دوران سیلولر حالات کی نقل کرتا ہے گردوں کے IRI کے دوران STS کے حفاظتی اثرات کا اندازہ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ چوہے کے گردے کے اپکلا خلیات (NRK{{0}}E سیل لائن؛ ATCC، USA) ان وٹرو تجربات میں استعمال کیے گئے تھے کیونکہ یہ خلیے اسکیمک چوٹ کے لیے حساس ہوتے ہیں [27]، اور ان کا استعمال چوہے کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔ ٹرانسپلانٹیشن کا ماڈل اس مطالعہ کے دوسرے مقصد کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ خلیوں کو Dulbecco کے Modified Eagle Medium (DMEM) میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 10 فیصد فیٹل بوائن سیرم (FBS) 20 منٹ کے لیے 60 ◦C پر گرمی سے غیر فعال ہو گیا تھا اور 1 فیصد پینسلن/سٹریپٹومائسن (P/S) تھا۔ خلیوں کو 37◦C، 21 فیصد O2، اور 5 فیصد CO2 کی عام نشوونما کے حالات میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ کنٹرول سیل ایسے حالات میں تھے جو پہلے تجرباتی خلیوں کے لیے تھے۔ تجرباتی خلیوں کا علاج یا تو سیرم فری میڈیا (SF)، SF پلس 200 nM AP39، یا SF کے ساتھ مختلف ارتکاز (50 µM، 150 µM، 500 µM، 1 mM) سوڈیم تھیوسلفیٹ پینٹا ہائیڈریٹ (STS) کے ساتھ کیا گیا، جس سے حاصل کیا گیا تھا۔ STS کا ایک 250 mg/mL انجیکشن قابل حل (Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc, Mississauga, ON, Canada])۔ 200 nM AP39 کا ارتکاز استعمال کیا گیا تھا کیونکہ ہم نے پہلے دکھایا تھا کہ اس ارتکاز میں AP39 کولڈ IRI [20] کے اسی طرح کے ماڈل میں ایک ہی سیل لائن کے خلاف سائٹو پروٹیکٹو ہے۔ اس کے بعد خلیوں کو ہائپوکسک حالات (5 فیصد CO2، 0.5 فیصد O2، 95 فیصد N2) کے تحت 10 ◦C پر HypOxystation H85 ہائپوکسیا چیمبر (HYPO2YGEN، USA) میں 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تاکہ سردی کی اسکیمک چوٹ لگائی جاسکے۔ 10 ◦C کا ہائپوتھرمک درجہ حرارت استعمال کیا گیا تھا کیونکہ یہ سب سے کم درجہ حرارت تھا جو ہائپوکسیا کی 0.5 فیصد O2 سطح کو برقرار رکھتے ہوئے تکنیکی طور پر حاصل کیا جا سکتا تھا۔ ہائپوکسیا کے بعد، تجرباتی خلیات پر مشتمل میڈیا کو کنٹرول میڈیا سے تبدیل کر دیا گیا، اور خلیات ریفرفیوژن اور اس سے منسلک چوٹ کی نقل کرنے کے لیے 24 گھنٹے کے لیے عام نشوونما کے حالات (37 ◦C، 21 فیصد O2، اور 5 فیصد CO2) میں انکیوبیشن کے ذریعے دوبارہ آکسیجن بنائے گئے۔ 24 گھنٹے ری آکسیجنیشن کے بعد، سیلولر قابل عملیت کا اندازہ FITC-conjugated Annexin-V (FITC-Annexin-V؛ BioLegend، USA) اور 7-Aminoactinomycin D (7-AAD؛ BioLegend، USA) والے خلیوں کے داغ کے ذریعے کیا گیا۔ ، جو بالترتیب سیلولر اپوپٹوس اور نیکروسس کی پیمائش کرتا ہے۔ CytoFLEX S (بیک مین کولٹر، USA) کا استعمال کرتے ہوئے فلو cytometry کے ذریعے سیلز کا تجزیہ کیا گیا۔ FlowJo ورژن 11 (FlowJo LLC, USA) کو شماریاتی تجزیہ کے لیے ڈیٹا کو مناسب طریقے سے گیٹ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

2.2 تجرباتی جانور

275–300 گرام وزنی اور چارلس ریور (سینٹ کانسٹنٹ، کیو سی، کینیڈا) سے خریدے گئے تیس نر لیوس چوہوں کو ویسٹرن یونیورسٹی (لندن، آن) میں جانوروں کی دیکھ بھال اور ویٹرنری سروسز کی سہولت میں معیاری حالات میں رکھا گیا تھا۔ جانوروں کے مطالعے کو ویسٹرن یونیورسٹی کونسل آن اینیمل کیئر اینڈ اینیمل استعمال نے پروٹوکول ID 2018–155 کے ساتھ منظور کیا تھا۔

2.3۔ کڈنی ٹرانسپلانٹ ماڈل

Syngeneic kidney transplantation in Lewis rats was performed to eliminate any confounding effects of immunosuppression. Rats were randomized into treatment groups of UW solution alone (UW) or UW+STS, anesthetized with ketamine (30 mg/kg) via intraperitoneal administration, and maintained under anesthesia with isoflurane during surgery. The left donor kidneys were procured under aseptic condition and flushed with 10 mL of either cold (4 ◦C) UW solution (UW group, n = 8) in a 28-G Angiocath Becton-Dickinson, or cold UW solution supplemented with sodium thiosulfate pentahydrate (150 µM Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc, Mississauga, ON, Canada]; UW+STS group, n = 6) until venous effluent was clear. Grafts were then subjected to SCS in UW solution at 4◦C with or without STS for 24 h to mimic prolonged cold ischemic time as previously described [13]. Following 24 h of SCS and bilateral nephrectomy in recipients, renal grafts were transplanted orthotopically into the left renal fossa of syngeneic recipient rats using 11–0 Prolene sutures as we previously described [22]. Sham-operated rats (mid-line incision only; n = 5), were used to establish a baseline for survival, histological analysis, BUN, and serum creatinine. Additionally, another subset of rats in the UW+STS group had grafts removed pre-emptively on a postoperative day (POD) 3 (n = 5) for histological comparison with UW grafts of recipients that were sacrificed at this time point. All surgeries were performed by the same microsurgeon with the length of surgery for the recipient being approximately 2–3 h for both UW and UW+STS groups. Graft failure was presumed in animals that required premature sacrifice (severe visible distress and/or >20 فیصد وزن میں کمی) یا موت۔ دن میں دو بار ہیومن اینڈ پوائنٹس کی جانچ پڑتال کی گئی اور تمام چوہوں کو ایک چیمبر میں 40 فیصد کی بہاؤ کی شرح سے CO2 کی نمائش سے خوش کیا گیا۔ ایتھاناسیا کے وقت، کوئی جراحی پیچیدگیاں نہیں تھیں جس کے نتیجے میں نتائج میں فرق آ سکتا تھا۔

2.4 گردوں کی تقریب کا تجزیہ

گردے کی پیوند کاری کے بعد، چوہوں کو میٹابولک پنجروں میں 14 دن تک مانیٹر کیا گیا اور پھر قربانی دی گئی۔ خون اور پیشاب کے نمونے پی او ڈی 3، 5، 7، 10، اور 14 پر جمع کیے گئے تھے تاکہ گردوں کے فنکشن کے پیرامیٹرز کا تعین کیا جا سکے (سیرم کریٹینائن، بلڈ یوریا نائٹروجن [BUN]، پیشاب کی osmolality، اور پیشاب کی پیداوار)۔ BUN اور سیرم کریٹینائن کڈنی ٹرانسپلانٹ وصول کنندگان سے تھے اور شام سے چلنے والے چوہوں کی پیمائش IDEXX Catalyst One Chemistry Analyzer مشین (مارخم، ON) کے ذریعے کی گئی۔ 3320 اوسمومیٹر مشین (ایڈوانسڈ انسٹرومنٹس، نورووڈ، ایم اے) کا استعمال کرتے ہوئے اور کمپنی کے فراہم کردہ معیارات کے مقابلے میں پیشاب کی اوسمولیٹی لیول کا تعین فریزنگ پوائنٹ اوسمومیٹری کے ذریعے کیا گیا تھا۔

2.5 ہسٹوپیتھولوجیکل اور مورفومیٹرک تجزیہ

پیرافین میں سرایت شدہ گردے کے ٹشوز کو 4 µm موٹے حصوں میں کاٹا گیا اور ہسٹولوجی کے لیے مائکروسکوپک سلائیڈوں پر نصب کیا گیا۔ حصوں کو بالترتیب اے ٹی این اور اپوپٹوس کی ڈگری کا تعین کرنے کے لیے ہیماتوکسیلین اور ای اوسین (H&E)، ٹرمینل ڈیوکسینیوکلیوٹائیڈل ٹرانسفراز ڈی یو ٹی پی نک اینڈ لیبلنگ (TUNEL) سے داغ دیا گیا تھا۔ ایچ اینڈ ای سیکشنز کو درج ذیل اسکیم کے مطابق ایک نابینا رینل پیتھالوجسٹ کے ذریعہ ATN کے لیے ایک اسکور تفویض کیا گیا تھا: 1 =<11%, 2="11–24%," 3="25–45%," 4="46–75%," 5="">75 فیصد گرافٹ اے ٹی این۔ گردے کے حصوں کو بھی درج ذیل بنیادی اینٹی باڈیز سے داغ دیا گیا تھا: گردے کی چوٹ مارکر (KIM-1)، میکروفیج سطح کا مارکر CD68، اور نیوٹروفیل مخصوص اینزائم مائیلوپیروکسیڈیس (MPO؛ Abcam®، ٹورنٹو، کینیڈا) اور ثانوی اینٹی باڈیز کے ساتھ تصور کیا گیا اور مینوفیکچرر پروٹوکول کے مطابق ڈاکو اینویژن سسٹم (ڈاکو، گلوسٹرپ، ڈنمارک) کا استعمال کرتے ہوئے ڈی اے بی سبسٹریٹ کروموجن جس کے بعد چاند گرہن 90i ڈیجیٹل لائٹ مائکروسکوپ (نیکون® انسٹرومینٹس، نیویارک) کے تحت 10x میگنیفیکیشن پر تجزیہ کیا گیا اور امیج جے سافٹ ویئر v. 1.8 (قومی سطح پر) انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ، بیتیسڈا، ایم ڈی)۔

2.6۔ مقداری پی سی آر تجزیہ

کل RNA RNeasy® Mini Kit (Qiagen، Toronto، Canada) کا استعمال کرتے ہوئے POD 3 پر حاصل کردہ رینل گرافٹ ٹشوز سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور oligo (dT) 12- کے ساتھ مل کر OneScript® Plus cDNA سنتھیسس کٹ (ABM، Canada) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA میں نقل کیا گیا تھا۔ کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق 18 پرائمر۔ الگ تھلگ آر این اے اور سی ڈی این اے کا تجزیہ نانوڈروپ (DeNovix DS-11 Spectrophotometer, Canada) کے ذریعے کیا گیا، جس میں A260/280 درجہ بندی بالترتیب > 1.95 اور > 1.8 تھی۔ ہر qPCR نمونے کے رد عمل کے مرکب کا حجم 20 µL تھا اور اسے Blastaq® Green 2X qPCR ماسٹر مکس (ABM، کینیڈا) پروٹوکول کے مطابق بنایا گیا تھا اور CFX Connect ریئل ٹائم PCR ڈیٹیکشن سسٹم مشین (Bio-Rad, Canada) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا تھا۔ . پرائمر سیکوئنس کو پرائمر-بلاسٹ سافٹ ویئر (NCBI) کا استعمال کرتے ہوئے بیٹا ایکٹین، پولی (ADP-ribose) پولیمریز (PARP)، انٹرفیرون-gamma (IFN-)، ٹیومر نیکروسس فیکٹر-الفا (TNF-)، interleukin 6 (IL) کے خلاف ڈیزائن کیا گیا تھا۔ -6), B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), Bcl-2- وابستہ X پروٹین (BAX), کیسپیس 3, BH3 انٹرایکٹنگ ڈومین ڈیتھ ایگونسٹ (BID), c-Jun N-terminal kinase 1/2 (JNK1/2)، Pparg coactivator 1 alpha (PGC-1)، mitochondria complex I (NDUFB8)، mitochondria complex II (SDHB)، mitogen-activated protein kinase 1/2 (ERK1) /2)، نیوٹروفیل جیلیٹنیز لیپوکلین (NGAL)، اور گردے کی چوٹ کا مالیکیول-1 (KIM-1) جین۔ دلچسپی کے تمام جینوں کو بیٹا ایکٹین کے خلاف معمول بنایا گیا تھا۔ جین کے اظہار کی فولڈ تبدیلیوں کا موازنہ شام سے چلنے والے چوہوں سے کیا گیا تھا اور ΔΔCt طریقہ استعمال کرکے حساب کیا گیا تھا۔

2.7۔ شماریاتی تجزیہ

تمام شماریاتی تجزیے گراف پیڈ (لا جولا، سی اے) پرزم شماریاتی سافٹ ویئر پیکج، ورژن 9 کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔{1}}۔ بقا کے اعداد و شمار کا تجزیہ Kaplan-Meier کے بقا کے تجزیہ اور لاگ رینک ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا جبکہ qPCR جین ایکسپریشن ڈیٹا کا تجزیہ بغیر جوڑی والے یک طرفہ ٹی-ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ گروپوں کے درمیان شماریاتی فرق کا تعین کرنے کے لیے ٹوکی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے بعد تغیرات (ANOVA) کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے دیگر تمام ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ شماریاتی اہمیت p پر قبول کی گئی۔<0.05. values="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" mean="">

3. نتائج

3.1 ایس ٹی ایس کی تکمیل شدہ سیرم فری میڈیا کولڈ ہائپوکسیا/ری آکسیجنیشن کے دوران رینل ٹیوبلر اپیٹیلیل سیل کی بقا کو بہتر بناتا ہے۔

اپوپٹوسس اور نیکروسس کے داغ کے بعد فلو سائٹومیٹری تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ وٹرو کولڈ IRI کے دوران SF کے ساتھ علاج کیے جانے والے NRK{{0}E سیلز نے کنٹرول (نارموکسک) سیلز (تصویر 1A؛ p < 0۔{9}}5)۔="" جب="" کہ="" تمام="" تجرباتی="" نمونوں="" نے="" نارموکسک="" حالات="" (p="">< 0.05)="" کے="" تحت="" بڑھنے="" والے="" خلیوں="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" رینل="" ٹیوبلر="" اپیٹیلیل="" سیل="" کی="" قابل="" عملیت="" کو="" ظاہر="" کیا،="" sf="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" جانے="" والے="" خلیات="" 150="" µm="" اور="" 500="" µm="" sts="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" جانے="" والے="" خلیوں="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" قابل="" عملیت="" کی="" نمائش="" کرتے="" ہیں۔="" اکیلے="" sf="" میڈیا="" کے="" ساتھ="" (تصویر="" 1a؛="" p=""><0.05)، جو="" اکیلے="" sf="" میڈیا="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" جانے="" والے="" خلیوں="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" اپوپٹوس="" کے="" ساتھ="" مطابقت="" رکھتا="" ہے="" (تصویر="" 1b؛="" p=""><0.05)۔ مزید="" برآں،="" سیل="" کی="" قابل="" عملیت="" میں="" اضافہ="" اور="" اپوپٹوسس="" میں="" کمی="" 150="" µm="" اور="" 500="" µm="" sts="" کے="" ساتھ="" زیادہ="" سے="" زیادہ="" سطح="" تک="" پہنچتی="" دکھائی="" دیتی="" ہے،="" کیونکہ="" زیادہ="" خوراک="" نے="" ان="" رجحانات="" کو="" الٹ="" دیا="" (تصویر="" 1a="" اور="">

3.2 STS کے ساتھ UW سلوشن کی تکمیل سے رینل گرافٹ کی ابتدائی بقا اور کام میں بہتری آتی ہے۔

ایس ٹی ایس کے ضمیمہ والے UW حل میں رینل گرافٹس کے تحفظ نے وصول کنندہ کی بقا کو نمایاں طور پر بہتر بنایا جس میں POD 14 (قربانی کے دن) تک 83 فیصد بقایا بغیر STS سپلیمینٹیشن کے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، جس نے 12.5 فیصد بقا ظاہر کی، خاص طور پر پہلے 3 دنوں میں (تصویر 1)۔ 2A؛ p < 0۔{13}}5)۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" صرف="" uw="" علاج="" کے="" مقابلے="" میں="" sts="" سپلیمنٹیشن="" نے="" ٹرانسپلانٹ="" کے="" بعد="" کے="" ابتدائی="" دور="" میں="" گرافٹ="" فنکشن="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" بہتر="" کیا۔="" pod="" 3="" پر="" uw="" اور="" uw="" پلس="" sts="" دونوں="" گروپوں="" میں="" سیرم="" کریٹینائن="" اور="" bun="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" تھا،="" جو="" شام="" کے="" مقابلے="" میں="" پیشاب="" کی="" osmolality="" میں="" کمی="" کے="" ساتھ="" منسلک="" تھا="" (تصویر="" 2b،="" c،="" اور="" 3a؛="" p="">< 0۔{25}="" }}="" 5)۔="" تاہم،="" uw="" پلس="" sts="" گروپ="" میں="" سیرم="" کریٹینائن="" اور="" bun="" کی="" سطح="" pod="" 3="" پر="" uw="" گروپ="" (تصویر="" 2b،="" c="" اور="" 3a؛="" p=""><0.05) کے="" مقابلے="" پیشاب="" کی="" osmolality="" میں="" اسی="" اضافے="" کے="" ساتھ="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" ہوئی۔="" دلچسپ="" بات="" یہ="" ہے="" کہ="" uw="" پلس="" sts="" گروپ="" میں="" سیرم="" کریٹینائن="" اور="" bun="" کی="" سطحیں="" pod="" 3="" سے="" pod="" 14="" تک="" بتدریج="" کم="" ہوئیں="" جس="" میں="" پیشاب="" کی="" osmolality="" میں="" اضافہ="" ہوا="" اور="" شمع="" (figs.="" 2b,="" c،="" اور="" 3a)="" سے="" موازنہ="" کیا="" جا="" سکتا="" ہے۔="" نیز،="" uw="" پلس="" sts="" گروپ="" میں="" پیشاب="" کی="" پیداوار="" uw="" اور="" sham="" گروپوں="" کے="" مقابلے="" پہلے="" چار="" پوسٹ="" آپریٹو="" دنوں="" کے="" دوران="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھی="" (تصویر="" 3b؛="" p=""><0.05)۔ تاہم،="" یہ="" بیس="" لائن="" (شام)="" ویلیو="" کی="" طرف="" بتدریج="" کم="" ہوا="" اور="" pod="" 14="" پر="" شام="" کے="" مقابلے="" میں="" تھا="" جبکہ="" uw="" گروپ="" میں="" زندہ="" بچ="" جانے="" والے="" چوہے="" میں="" پیشاب="" کی="" پیداوار="" pod="" 14="" (تصویر="" 3b)="" پر="" بیس="" لائن="" ویلیو="" سے="" زیادہ="">

3.3 یو ڈبلیو سلوشن میں ایس ٹی ایس کا اضافہ گردے کی پیوند کاری کے بعد ٹرانسپلانٹ کی وجہ سے سیل کی موت کو کم کرتا ہے۔

پی او ڈی 3 اور 14 پر حاصل کیے گئے گردے کے حصوں کو اپوپٹوٹک سیل کی موت کی پیمائش کے طور پر TUNEL سے داغ دیا گیا تھا اور ایک نابینا رینل پیتھالوجسٹ (تصویر 4A) نے اسکور کیا تھا۔ UW گروپ کے رینل گرافٹس نے POD 3 پر نمایاں طور پر زیادہ اپوپٹوٹک سیل کی موت کی نمائش کی جیسا کہ UW پلس STS اور Sham گروپوں کے گردوں کے مقابلے میں اعلی TUNNEL سکور سے ظاہر ہوتا ہے (تصویر 5A اور b; p < 0۔{11}="" }5)۔="" uw="" پلس="" sts="" گروپ="" کے="" گرافٹس="" ایک="" ہی="" وقت="" میں="" اور="" pod="" 14="" (تصویر="" 4b)="" میں="" شام="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" مختلف="" نہیں="" تھے۔="" مزید="" برآں،="" جبکہ="" uw="" اور="" uw="" پلس="" sts="" دونوں="" گروپوں="" کے="" گرافٹس="" نے="" pod="" 3="" پر="" شم="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" بڑھے="" ہوئے="" atn="" اسکور="" دکھائے="" (تصویر="" 5؛="" p="">< 0۔{21}}5)،="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" uw="" (تصویر="" 5؛="" p=""><0.05) کے="" مقابلے="" pod="" 3="" پر="" atn="" سکور="" میں="" کمی="" کو="" ظاہر="" کیا۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" جہاں="" uw="" گرافٹس="" کے="" وصول="" کنندگان="" pod="" 14="" تک="" زندہ="" نہیں="" رہے،="" اور="" اس="" وجہ="" سے="" pod="" 14="" پر="" ان="" کے="" atn="" اسکور="" کا="" تعین="" نہیں="" کیا="" جا="" سکا،="" uw="" plus="" sts="" گرافٹس="" pod="" 14="" تک="" زندہ="" رہے="" لیکن="" شم="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" atn="" کے="" اسکور="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" (تصویر="" 1)="" 5؛="" p=""><>

3.4 ایس ٹی ایس کے ضمنی UW حل میں محفوظ رینل گرافٹس نے گردے کی پیوند کاری کے بعد چوٹ کے نشانات اور سوزش کی دراندازی کی نمائش کی۔

POD 3 اور 14 پر حاصل کردہ گردے کے حصوں کو KIM-1 سے داغ دیا گیا تھا تاکہ قریبی نلی نما چوٹ کے ساتھ ساتھ CD68 (میکروفیج مارکر) اور MPO (نیوٹروفیل مارکر) کا پتہ لگایا جا سکے اور ایک نابینا رینل پیتھالوجسٹ (تصویر 6A, 7A, اور سی)۔ KIM-1، CD68، اور MPO کا رینل ٹشو ایکسپریشن POD 3 پر UW گروپ میں UW plus STS اور Sham گروپوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا (تصویر 6B، 7B اور D؛ p < {{11}="" }۔{16}}5)="" جبکہ="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" میں="" ان="" مارکروں="" کا="" اظہار="" pod="" 14="" پر="" sham="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" مختلف="" نہیں="" تھا="" (تصویر="" 6b،="" 7b="" اور="" d؛="" p=""> 0.05)۔

3.5 UW حل میں STS کی تکمیل نے سوزش کے حامی، پرو اپوپٹوٹک، اور مائٹوکونڈریل جینز کے گردوں کے اظہار کو دبا دیا۔

پرو سوزش، پرو اپوپٹوٹک، مائٹوکونڈریا ٹارگٹڈ، اور گردے کی چوٹ کے مارکر کے جین اظہار کا تعین پی او ڈی 3 پر حاصل کردہ ٹرانسپلانٹ شدہ گردوں میں کیو آر ٹی-پی سی آر کے ذریعے کیا گیا تھا۔ سوزش کے حامی جین IFN-، TNF- اور IL{{8} کا اظہار POD 3 (تصویر 8A؛ p < 0۔{18}}5)="" پر="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" کے="" نسبت="" uw="" گرافٹس="" میں="" }}="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" بڑھایا="" گیا="" تھا="" اور="" پرو="" اپوپٹوٹک="" جینز="" parp،="" bax="" کے="" ساتھ="" اسی="" طرز="" کی="" پیروی="" کی="" گئی="" تھی۔="" ,="" caspases-3,="" bid,="" jnk1="" اور="" jnk2="" (تصویر="" 8a؛="" p="">< 0۔{31}}5)="" جبکہ="" uw="" میں="" اینٹی="" اپوپٹوٹک="" bcl-2="" کے="" اظہار="" میں="" قدرے="" اضافہ="" ہوا="" تھا۔="" علاوہ="" uw="" گروپ="" کے="" مقابلے="" sts="" گروپ،="" حالانکہ="" یہ="" اضافہ="" شماریاتی="" اہمیت="" تک="" نہیں="" پہنچا="" (تصویر="" 8a)۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" uw="" گرافٹس="" میں="" mitochondrial="" genes="" pgc-1،="" ndufb8="" (complex="" i)،="" اور="" sdhb="" (complex="" ii)="" کے="" اظہار="" میں="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" (تصویر="" 8b؛="" p="">< 0="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" تھی۔="" 05)="" جب="" کہ="" الٹا="" erk1="" اور="" erk2="" اظہار="" کے="" ساتھ="" دیکھا="" گیا="" (تصویر="" 8b؛="" p=""><0.05)۔ مزید="" برآں،="" uw="" گرافٹس="" میں="" kim-1="" جین="" کے="" اظہار="" میں="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" (تصویر="" 8c؛="" p=""><0.05) کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" تھا="" جبکہ="" uw="" پلس="" sts="" گرافٹس="" میں="" ngal="" اظہار="" میں="" کمی="" اس="" کے="" مقابلے="" میں="" شماریاتی="" اہمیت="" تک="" نہیں="" پہنچی۔="" uw="" گرافٹس="" (تصویر="" 8c؛="" p=""> 0.05)۔

4. بحث

یہ مطالعہ طبی لحاظ سے قابل عمل FDA سے منظور شدہ H2S عطیہ دہندہ STS کے ساتھ معیاری تحفظ کے حل کا ضمیمہ قائم کرتا ہے، تاکہ ٹرانسپلانٹ کی وجہ سے کولڈ رینل IRI کو کم کیا جا سکے، گرافٹ کے معیار کو بہتر بنایا جا سکے اور وصول کنندہ کی بقا کو طول دیا جا سکے۔ رینل آئی آر آئی کے ان وٹرو ماڈل اور سینجینک آرتھوٹوپک کڈنی ٹرانسپلانٹیشن کے چوہے کے ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، ہم پہلی بار یہ ظاہر کرتے ہیں کہ طویل SCS کے دوران STS کے ساتھ UW محلول کی تکمیل عضو اور اعضاء کی حفاظت کرتی ہے۔

ہمارے ان وٹرو ماڈل میں بنیادی تلاش یہ ہے کہ سیرم فری میڈیا میں ایس ٹی ایس کی تکمیل گردوں کے اپکلا خلیوں کو کولڈ ہائپوکسیا اور گرم ری آکسیجنیشن سے متاثرہ اپوپٹوسس سے بچاتی ہے اور عملداری کو بڑھاتی ہے، جو ہمارے پچھلے مطالعہ سے مطابقت رکھتی ہے جہاں ہم نے مائٹوکونڈریا کے حفاظتی اثرات دکھائے تھے۔ - کولڈ رینل IRI [20] کے ان وٹرو ماڈل میں H2S ڈونر ڈرگ، AP39 کو نشانہ بنانا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ، 1 ایم ایم کی زیادہ STS ارتکاز نے فائدہ مند اثرات کو الٹ دیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ STS ایک بائفاسک خوراک کے ردعمل کے رجحان کو ظاہر کرتا ہے جسے ہارمیسس کہا جاتا ہے، جس میں کم ارتکاز سائٹو پروٹیکٹو ہوتا ہے جبکہ زیادہ ارتکاز سائٹوٹوکسک ہوتا ہے۔ مائٹوکونڈریل نقصان گردوں کے IRI کا ایک بڑا نتیجہ ہے، کیونکہ مائٹوکونڈریل پارگمیتا اڈینوسین ٹرائی فاسفیٹ (ATP) کی پیداوار کو روک سکتی ہے اور ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی تشکیل کو بڑھا سکتی ہے، جو ٹشو کی چوٹ کا ایک تباہ کن ثالث ہے [13]۔ حال ہی میں یہ تجویز کیا گیا ہے کہ مائٹوکونڈریا ایس ٹی ایس کی سرگرمی کی ایک بنیادی سائٹ ہے۔ ایس ٹی ایس نہ صرف مائٹوکونڈریا میں گلوٹاتھیون پر منحصر کمی اور اس کے برعکس سلفائیڈ آکسیڈیشن پاتھ وے کے ذریعے H2S پیدا کرنے کے لیے جانا جاتا ہے، بلکہ مائٹوکونڈریل اے ٹی پی کی ترکیب کو بھی محفوظ رکھتا ہے، ROS کی پیداوار کو کم کرتا ہے، اور الیکٹران ٹرانسپورٹ چین (ETC) میں پیچیدہ انزائم سرگرمیوں کو بہتر بناتا ہے۔ 28-30]۔ اس کے علاوہ، حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ STS نے PGC-1 کے اظہار میں نمایاں اضافہ کیا، جو کہ مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس اور اے ٹی پی پروڈکشن کا ایک مثبت ریگولیٹر ہے [26]، جو ہمارے ان ویوو مشاہدے سے متفق ہے۔ یہ مالیکیولر میکانزم ہمارے کڈنی ٹرانسپلانٹ ماڈل میں مائٹوکونڈریل ای ٹی سی کمپلیکس I اور II (بالترتیب NDUFB8 اور SDHB) کے نمایاں طور پر بڑھے ہوئے اظہار کا سبب بن سکتے ہیں جس میں STS کے اضافی UW محلول میں محفوظ رینل گرافٹس میں مشاہدہ کیا گیا ہے جس میں بقا اور افعال میں اضافہ ہوا ہے۔

ہمارے ان وٹرو نتائج کی بنیاد پر، ہم نے اس بات کی جانچ کرنے کا فیصلہ کیا کہ آیا ٹرانسپلانٹ ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے ویوو میں STS کا حفاظتی اثر لاگو ہوتا ہے جہاں کولڈ IRI گرافٹ ڈسفکشن اور ٹرانسپلانٹ کے بعد کی پیچیدگیوں میں اضافہ کرنے میں بڑا معاون ہے۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ایس ٹی ایس کے ضمنی UW حل میں رینل گرافٹس کے طویل عرصے تک (24 گھنٹے) ایس سی ایس گرافٹ کے معیار اور فنکشن کو نمایاں طور پر بہتر بناتا ہے جس کی خصوصیت سیرم کریٹینائن اور BUN کی سطح میں کمی، پیشاب کی زیادہ پیداوار، اور صرف UW محلول میں محفوظ گرافٹس کے مقابلے میں وصول کنندہ کی طویل بقا ہے۔ . یہ نوٹ کرنا ضروری ہے کہ کلینکل کڈنی ٹرانسپلانٹیشن کے بعد بھی پیشاب کی فوری پیداوار ایک اہم نتیجہ ہے جو اس بات کا تعین کرتا ہے کہ آیا تاخیری گرافٹ فنکشن (DGF) کو حل کرنے کے لیے ڈائیلاسز کی ضرورت ہے۔ لہٰذا، ہمارا مشاہدہ کہ ایس ٹی ایس پیوند کاری کے فوراً بعد پیشاب کی پیداوار کو بڑھاتا ہے اور پی او ڈی 14 پر شام گروپ کے مقابلے میں ایک امید افزا دریافت ہے۔ ایس ٹی ایس کے ضمنی UW حل میں محفوظ گرافٹس کی پیوند کاری کے بعد گردوں کے فنکشن میں دیکھی گئی بہتری نے بھی بقا کا ایک اہم فائدہ دیا۔ مقداری طور پر، ایس ٹی ایس سپلیمنٹیشن نے گرافٹ کی زندگی کو اس طرح طول دیا کہ 83 فیصد (5/6) چوہے جنہوں نے UW پلس STS گرافٹس حاصل کیے وہ POD 14 (قربانی کے دن) تک زندہ رہے جبکہ اس کے مقابلے میں صرف 12.5 فیصد (1/8) وصول کنندہ چوہے گرافٹس UW محلول میں بغیر STS سپلیمنٹیشن کے محفوظ ہیں۔ موجودہ مطالعہ سے یہ نتیجہ ہمارے پچھلے مطالعہ سے بھی مطابقت رکھتا ہے، جس میں گرافٹس کے وصول کنندگان کے چوہوں میں سے صرف 14 فیصد (1 میں سے 7) H2S (GYY4137) سپلیمنٹیشن کے بغیر UW محلول میں 24 گھنٹے تک محفوظ تھے، POD 14 [20] تک زندہ رہے۔ .

رینل فنکشن کے پیرامیٹرز میں بہتری ظاہر کرنے کے علاوہ، STS سپلیمنٹیشن نے اپوپٹوٹک اور پرو انفلامیٹری جینز کے ٹشو ایکسپریشن کو کم کرکے رینل گرافٹ اپوپٹوسس اور سوزش کو بھی روکا جبکہ بیک وقت اینٹی اپوپٹوٹک جینز کو اپ ریگولیٹ کرکے اور CD اور macrophages کو کم کرکے{3} ایم پی او پازیٹو نیوٹروفیلز، جس کے نتیجے میں مجموعی طور پر KIM-1 اظہار اور ATN میں کمی واقع ہوئی اور بالآخر رینل مورفولوجی کو محفوظ رکھا گیا۔ یہ سوزش والی سائٹوکائنز سرد آئی آر آئی کے دوران سیل کی موت کے ثالث کے طور پر جانے جاتے ہیں [31]، اور UW پلس STS گرافٹس میں ان کی کمی کا امکان STS کی معروف خصوصیات کی وجہ سے ہے جو ویسکولر اینڈوتھیلیل مونولیئر میں اینڈوتھیلیل پارگمیتا کو کم کرتی ہے، سائٹوکائن کی پیداوار کو کم کرتی ہے۔ ، اور سوزش مخالف سائٹوکائنز کی پیداوار کو ظاہر کرتا ہے [32]۔ اس کے علاوہ، ہمارا یہ پتہ چلا کہ UW حل کے لیے STS کی ضمیمہ سوزش کے حامی جینز کے اظہار کو کم کرتی ہے جو کہ اعصابی بیماریوں میں TNF- اور IL-6 کی سطح کو کم کرکے STS کی سوزش مخالف سرگرمی پر کیے گئے پچھلے مطالعے سے مماثل ہے۔ 34]۔ میکانکی طور پر، STS مضبوط ہائیڈروجن بانڈز کے ذریعے اپنی فعال سائٹ سے منسلک ہو کر کیسپیس کو غیر فعال کرتا ہے-3 اور اس طرح فعال سائٹ تک قدرتی سبسٹریٹ تک رسائی کو روکتا ہے، بالآخر apoptosis کو روکتا ہے [35]۔ ایس ٹی ایس جے این کے کی ایکٹیویشن کو بھی روکتا ہے، ایک پروٹین جو اپوپٹوٹک سگنلنگ میں اہم کردار ادا کرتا ہے [35]، جو کیسپیس 3 اور جے این کے پر ایس ٹی ایس کے کم ہونے والے اثر پر ہماری تلاش کی حمایت کرتا ہے۔ تاہم، ہم اس بات کا تعین کرنے سے قاصر ہیں کہ آیا اس طرح کے میکانزم موجودہ مطالعے میں کام کر رہے ہیں کیونکہ ہم نے ان مالیکیولر میکانزم کو دریافت کرنے کے لیے اضافی تجربات نہیں کیے تھے۔

ہمارے ان وٹرو تجربے کی ایک بڑی حد موجودہ معیاری تحفظ کے درجہ حرارت 4 ◦C [36] کو استعمال کرنے کا ہمارا تکنیکی چیلنج ہے، کیونکہ ہم نے جو 10 ◦C استعمال کیا تھا وہ سب سے کم درجہ حرارت تھا جو تکنیکی طور پر ہائپوکسک ماحول کو خطرے میں ڈالے بغیر حاصل کیا جا سکتا تھا۔ یہ سیلولر فزیولوجیکل عمل کے حوالے سے اور تحفظ کی تکنیکوں میں بھی ایک حقیقی فرق ہے۔ ایک ممکنہ حل یہ ہے کہ کیمیائی طور پر حوصلہ افزائی شدہ ہائپوکسیا کو پلاسٹک کے تھیلے میں استعمال کیا جائے اور اسے SCS کی طبی ترتیبات کو ظاہر کرنے کے لیے 4 ◦C فریج میں رکھا جائے۔ تاہم، یہ اینیروبک ماحول پیدا کرنے والے بیگز کو گرم درجہ حرارت (21–37 ◦C) پر استعمال کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا کیونکہ کیمیائی مرکبات جو اس حالت کے تحت ہائپوکسک ماحول کے کام کو اکساتے ہیں۔ مستقبل کے مطالعے کا مقصد طبی SCS ترتیبات کی نقل کرنے کے لیے ہائپوکسیا چیمبر میں درجہ حرارت کو بہتر بنانا ہے۔ ہائپوکسک ماحول سے سمجھوتہ کیے بغیر 4 ◦C کا مستقل درجہ حرارت حاصل کرنا ہمیں یہ تعین کرنے کی اجازت دے گا کہ آیا تجرباتی ان وٹرو کولڈ IRI ماڈل میں مشاہدہ شدہ فینوٹائپس کا مسلسل اظہار کیا گیا ہے۔ ان وٹرو تجربے کے علاوہ، ہمارا چوہا ٹرانسپلانٹ ماڈل بھی کسی خرابی کے بغیر نہیں ہے۔ ہم نے syngeneic کڈنی ٹرانسپلانٹیشن (جینیاتی طور پر ایک جیسے عطیہ دہندگان اور امیونولوجیکل مطابقت کے ساتھ وصول کنندگان) انجام دیے، جو صرف کلینیکل کڈنی ٹرانسپلانٹیشن میں ایک جیسے جڑواں بچوں پر لاگو ہوتا ہے، جبکہ زیادہ تر کلینیکل کڈنی ٹرانسپلانٹیشن ایلوجینک ہوتے ہیں (جینیاتی طور پر مختلف عطیہ دہندگان اور وصول کنندگان)۔ اللوجینک ٹرانسپلانٹیشن ٹرانسپلانٹ وصول کنندگان کو عطیہ دہندگان کے انسانی لیوکوائٹ اینٹیجنز (HLA؛ مالیکیولز جو مدافعتی ردعمل کو متحرک اور منظم کرتے ہیں) کی شناخت کے لیے ٹرانسپلانٹ سے قبل امیونولوجیکل ٹیسٹ کروانے پر مجبور کرتی ہے، عطیہ دہندگان اور وصول کنندگان کے درمیان امیونولوجیکل مطابقت کا تعین کرتی ہے، اور اعضاء کو مسترد کرنے سے گریز کرتی ہے۔ STS کا استعمال کرتے ہوئے مستقبل کے مطالعے کو اللوجینک ٹرانسپلانٹیشن پر غور کرنا چاہئے۔ ایک اور محدود کڈنی ٹرانسپلانٹ ماڈل یہ حقیقت ہے کہ ہم نے زندہ عطیہ دہندگان پر توجہ مرکوز کی، کارڈیک ڈیتھ (DCD) کے بعد عطیہ کرنے والے عطیہ دہندگان عالمی سطح پر بہت سے ٹرانسپلانٹ مراکز میں عطیہ دہندگان کے گردوں کے ذریعہ کے طور پر تیزی سے عام ہوتے جا رہے ہیں [39]۔ ڈی سی ڈی ایس سی ایس کے دوران سرد اسکیمک اوقات کے علاوہ گرم اسکیمیا کے مختلف ادوار میں عطیہ دہندگان کے اعضاء کو بے نقاب کرتا ہے، اور اس کا تعلق زندہ عطیہ دہندگان کے مقابلے ڈی جی ایف کی بڑھتی ہوئی شرح اور گرافٹ کی بقا میں کمی سے ہے [40]۔ لہذا، مستقبل کے مطالعے کو اس ماڈل میں IRI کے خلاف STS کے اثر کا اندازہ لگانے کے لیے DCD کڈنی ٹرانسپلانٹیشن ماڈل پر غور کرنا چاہیے۔

آخر میں، ہمارا مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ رینل گرافٹس کے طویل عرصے تک SCS کے دوران طبی لحاظ سے قابل عمل H2S ڈونر دوائی کے ساتھ معیاری تحفظ کے حل کی تکمیل ٹرانسپلانٹ سے متاثر ہونے والے کولڈ رینل IRI سے تحفظ فراہم کرتی ہے، گرافٹ کے مجموعی معیار اور گرافٹ کے کام کو بہتر بناتی ہے، اور ٹرانسپلانٹ وصول کنندہ کی بقا کو طول دیتی ہے۔ اس بات کو مدنظر رکھتے ہوئے کہ کلینیکل کڈنی ٹرانسپلانٹیشن میں طویل سرد اسکیمک وقت کے ساتھ DGF کا خطرہ بڑھ جاتا ہے، جو کہ ایک بڑی طبی تشویش کا باعث بنتا ہے، یہ مشاہدہ کہ STS طویل SCS کے دوران رینل گرافٹس کی حفاظت کرتا ہے اور ٹرانسپلانٹیشن کے بعد DGF کو روکتا ہے ایک بہت بڑا طبی وعدہ فراہم کرتا ہے جو کہ گردے کی پیوند کاری میں کمی یا روک تھام کر سکتا ہے۔ مستقبل قریب میں کلینیکل کڈنی ٹرانسپلانٹیشن میں ڈی جی ایف کے واقعات۔ اس طرح، تحفظ کے حل میں STS کو شامل کرنے کا مستقبل کا فائدہ اس جاری مسئلے کا ممکنہ حل پیش کر سکتا ہے۔ مجموعی طور پر، یہ مطالعہ ادب کے بڑھتے ہوئے جسم میں اضافہ کرتا ہے جو اعضاء IRI کے خلاف STS اور دیگر H2S عطیہ دہندگان کے cytoprotective اثرات کی حمایت کرتا ہے، خاص طور پر ٹرانسپلانٹ سے متاثر کولڈ رینل IRI میں گرافٹ کے نتائج کو بہتر بناتا ہے۔ یہ حکمت عملی طویل عرصے تک سرد اسکیمک اوقات کے سامنے آنے والے زیادہ گرافٹس کے استعمال میں سہولت فراہم کرسکتی ہے، جو ٹرانس پلانٹ ایبل اعضاء کے تالاب کو بڑھا سکتی ہے۔

CREDIT تصنیف کی شراکت کا بیان

تمام مصنفین نے اس مخطوطہ کو جمع کرنے پر اتفاق کیا ہے۔ مفادات کا کوئی تصادم نہیں ہے۔

حوالہ جات

[1] RA Wolfe, VB Ashby, EL Milford, et al.، ڈائیلاسز پر تمام مریضوں میں اموات کا موازنہ، ٹرانسپلانٹیشن کے انتظار میں ڈائیلاسز پر مریض، اور پہلے کیڈیورک ٹرانسپلانٹ کے وصول کنندگان، نیو انگل۔ جے میڈ 341 (23) (1999) 1725–1730۔

[2] M. Tonelli, N. Wiebe, G. Knoll, et al., منظم جائزہ: طبی لحاظ سے متعلقہ نتائج میں ڈائیلاسز کے مقابلے میں گردے کی پیوند کاری، ایم۔ جے ٹرانسپل 11 (10) (2011) 2093–2109۔

[3] MC Cavallo, V. Sepe, F. Conte, et al., اٹلی میں DCD سے گردے کی پیوند کاری کی لاگت کی تاثیر، ٹرانسپلانٹ۔ پروک 46 (10) (2014) 3289–3296۔

[4] B. Dorweiler, D. Pruefer, TB Andrasi, SM Maksan, W. Schmiedt, A. Neufang, CF Vahl, Ischemia- reperfusion injury, Eur. جے ٹراما ایمرج۔ سرگ 33 (6) (2007) 600–612۔

[5] EE Guibert, AY Petrenko, CL Balaban, AY Somov, JV Rodriguez, BJ Fuller, Organ preservation: موجودہ تصورات اور اگلی دہائی کے لیے نئی حکمت عملی، Transfus. میڈ. ہیمدر۔ 38 (2) (2011) 125–142۔

[6] اے کے صلاح الدین، این حیدر، ڈبلیو مئی، کولڈ اسکیمیا اور کیڈیورک رینل ایلوگرافٹس کی طویل مدتی بقا، کڈنی انٹ۔ 65 (2) (2004) 713–718۔

[7] I. Quiroga، P. McShane، DD Koo، et al.، گرافٹ فنکشن میں تاخیر کے اہم اثرات اور رینل ایلوگرافٹ کی بقا پر کولڈ اسکیمیا کا وقت، نیفرول۔ ڈائل. ٹرانسپلانٹ. 21 (6) (2006) 1689–1696۔

[8] LK Kayler، J. Magliocca، I. Zendejas، TR سری نواس، JD Schold، ECD ٹرانسپلانٹ وصول کنندگان میں گرافٹ سروائیول پر کولڈ اسکیمیا کے وقت کا اثر: گردے کا جوڑا تجزیہ، ایم۔ J. ٹرانسپلانٹ 11 (12) (2011) 2647–2656۔

[9] ایم ڈی دوشی، این گرگ، پی پی ریز، سی آر پاریکھ، وصول کنندہ کے خطرے کے عوامل جو گرافٹ فنکشن میں تاخیر سے وابستہ ہیں: ایک جوڑا گردے کا تجزیہ، ٹرانسپلانٹیشن 91 (6) (2011) 666–671۔

[10] A. Debout, Y. Foucher, K. Tr´ebern-Launay, et al.، سرد اسکیمیا کے وقت کا ہر اضافی گھنٹہ رینل ٹرانسپلانٹیشن کے بعد گرافٹ فیل ہونے اور اموات کے خطرے کو نمایاں طور پر بڑھاتا ہے، کڈنی انٹ۔ 87 (2) (2015) 343–349۔

[11] A. Kezic, I. Spasojevic, V. Lezaic, M. Bajcetic, Mitochondria-targeted antioxidants: مستقبل کے تناظر in kidney ischemia-reperfusion injury, Oxid۔ میڈ. سیل لونگیو۔ 2016 (2016) 2950503۔

[12] ٹی آئی پینگ، ایم جے جو، مائٹوکونڈریل کیلشیم اوورلوڈ کی وجہ سے آکسیڈیٹیو تناؤ، این۔ NY Acad. سائنس 1201 (2010) 183–188۔

[13] W. Jassem، SV Fuggle، M. Rela، DD Koo، ND Heaton، ischemia/reperfusion injury میں mitochondria کا کردار، Transplantation 73 (4) (2002) 493–499۔

[14] PM Snijder, E. van den Berg, M. Whiteman, SJ Bakker, HG Leuvenink, H. van Goor, Renal Transplantation میں Gasotransmitters کا ابھرتا ہوا کردار، Am. J. ٹرانسپلانٹ 13 (12) (2013) 3067–3075۔

[15] جے ٹی ہینکوک، ایم وائٹ مین، ہائیڈروجن سلفائیڈ اور سیل سگنلنگ: ٹیم پلیئر یا ریفری؟ پلانٹ فزیول۔ بائیو کیم۔ 78 (2014) 37–42۔

[16] W. Zhao, J. Zhang, Y. Lu, R. Wang, H(2)S کا ایک ناول اینڈوجینس گیسیئس K(ATP) چینل اوپنر کے طور پر vasorelaxant اثر، EMBO J. 20 (21) (2001) 6008–6016۔

[17] I. Lobb, M. Davison, D. Carter, et al.، ہائیڈروجن سلفائیڈ ٹریٹمنٹ کولڈ اسٹوریج کے دوران رینل ایلوگرافٹ اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کو کم کرتا ہے اور اللوجینک رینل ٹرانسپلانٹیشن کے بعد گردے کے ابتدائی ٹرانسپلانٹ کے فنکشن اور بقا کو بہتر بناتا ہے، J. Urol۔ 194 (6) (2015) 1806–1815۔

[18] I. Lobb, A. Mok, Z. Lan, W. Liu, B. Garcia, A. Sener, ضمنی ہائیڈروجن سلفائیڈ ٹرانسپلانٹ گردے کے فنکشن کی حفاظت کرتا ہے اور رینل گرافٹ اپوپٹوسس کو کم کرکے طویل عرصے تک سردی اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کے بعد وصول کنندہ کی بقا کو طول دیتا ہے۔ اور سوزش، BJU Int. 110 (11 Pt C) (2012) E1187–E1195۔

[19] I. Lobb, J. Jiang, D. Lian, et al.، ہائیڈروجن سلفائیڈ مخصوص مائٹوکونڈریل ایکشنز کے ذریعے رینل گرافٹس کو طویل سرد اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ سے بچاتا ہے، ایم۔ J. ٹرانسپلانٹ 17 (2) (2017) 341–352۔

[20] C. Renard, SW Borron, C. Renaudeau, FJ Baud, Sodium thiosulfate for acute cyanide poisoning: a study in a rat model, Ann. فارم۔ Fr. 63 (2) (2005) 154–161۔ [21] N. Laplace, V. Kepenekian, A. Friggeri, et al., Sodium thiosulfate hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) کے بعد Cisplatin, Int کے ساتھ گردوں کی خرابی سے بچاتا ہے۔ J. Hyperth. 37 (1) (2020) 897–902۔