سپرمائڈائن آکسیڈیٹیو تناؤ کو روک کر اور مائٹوکونڈریل کوالٹی کنٹرول کو ریگولیٹ کرکے چوہوں میں نوزائیدہ مایوکارڈیل مائٹوکونڈریل نقصان کو انٹرا یوٹرن ہائپوکسیا سے متاثر اولاد کو کم کرتی ہے حصہ 1

خلاصہ

پس منظر: انٹرا یوٹرن ہائپوکسیا (IUH) اولاد میں قلبی امراض کا خطرہ بڑھاتا ہے۔ ایک ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (ROS) سکیوینجر کے طور پر، پولیمین اسپرمائڈائن (SPD) جنین اور جنین کی بقا اور نشوونما کے لیے ضروری ہے۔ تاہم، SPD تحفظ اور IUH کی حوصلہ افزائی سے بچوں میں دل کو پہنچنے والے نقصان کے طریقہ کار پر مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔

سیستانچ کا گلائکوسائیڈ دل اور جگر کے بافتوں میں ایس او ڈی کی سرگرمی کو بھی بڑھا سکتا ہے، اور ہر ٹشو میں لیپوفسن اور ایم ڈی اے کے مواد کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے، مختلف رد عمل آکسیجن ریڈیکلز (OH-، H₂O₂، وغیرہ) کو مؤثر طریقے سے ختم کر سکتا ہے اور DNA کو پہنچنے والے نقصان سے بچا سکتا ہے۔ OH ریڈیکلز کے ذریعہ۔ Cistanche phenylethanoid glycosides میں آزاد ریڈیکلز کی مضبوطی سے صاف کرنے کی صلاحیت ہوتی ہے، وٹامن C سے زیادہ کم کرنے کی صلاحیت، سپرم معطلی میں SOD کی سرگرمی کو بہتر بناتی ہے، MDA کے مواد کو کم کرتی ہے، اور سپرم کی جھلی کے کام پر ایک خاص حفاظتی اثر رکھتی ہے۔ Cistanche polysaccharides D-galactose کی وجہ سے تجرباتی طور پر حساس چوہوں کے erythrocytes اور پھیپھڑوں کے ٹشوز میں SOD اور GSH-Px کی سرگرمی کو بڑھا سکتے ہیں، نیز پھیپھڑوں اور پلازما میں MDA اور کولیجن کے مواد کو کم کر سکتے ہیں، اور elastin کے مواد کو بڑھا سکتے ہیں۔ ڈی پی پی ایچ پر اچھا اثر ڈالتا ہے، سینسنٹ چوہوں میں ہائپوکسیا کے وقت کو طول دیتا ہے، سیرم میں ایس او ڈی کی سرگرمی کو بہتر بناتا ہے، اور تجرباتی طور پر سنسنی والے چوہوں میں پھیپھڑوں کے جسمانی انحطاط میں تاخیر کرتا ہے، سیلولر مورفولوجیکل انحطاط کے ساتھ، تجربات سے معلوم ہوا ہے کہ Cistanche میں اینٹی آکسیڈنٹ کی اچھی صلاحیت ہے۔ اور جلد کی بڑھتی ہوئی بیماریوں کو روکنے اور علاج کرنے کے لیے ایک دوا بننے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، Cistanche میں echinacoside میں DPPH فری ریڈیکلز کو ختم کرنے کی قابل ذکر صلاحیت ہے اور اس میں رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کو نکالنے اور آزاد ریڈیکل-حوصلہ افزائی کولیجن کے انحطاط کو روکنے کی صلاحیت ہے، اور تھامین فری ریڈیکل ایون کے نقصان پر بھی اچھا اثر ڈالتا ہے۔

اینٹی ایجنگ کے لیے Cistanches Herba پر کلک کریں۔

【مزید معلومات کے لیے:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

مقاصد: اس مطالعہ کا مقصد نوزائیدہ بچوں کی چوہوں میں IUH کی حوصلہ افزائی سے دل کو پہنچنے والے نقصان اور اس کے بنیادی مائٹوکونڈریل سے متعلق میکانزم پر قبل از پیدائش کے SPD علاج کے حفاظتی اثرات کی تحقیقات کرنا ہے۔

طریقے: IUH کا چوہا ماڈل مدت سے سات دن پہلے 10 فیصد O2 کی نمائش سے قائم کیا گیا تھا۔ دریں اثنا، سات دنوں تک، حاملہ چوہوں کو SPD (5 mg.kg-1.d-1; ip) دیا گیا۔ ایک دن کی اولاد والے چوہوں کو کئی پیرامیٹرز کا جائزہ لینے کے لیے قربان کیا گیا، بشمول نمو کی نشوونما، دل کو پہنچنے والے نقصان، کارڈیو مایوسائٹس کا پھیلاؤ، مایوکارڈیل آکسیڈیٹیو تناؤ، سیل اپوپٹوسس، اور مائٹوکونڈریل فنکشن، اور مائٹوکونڈریل کوالٹی کنٹرول (MQC)، بشمول مائٹوفیگی، مائٹوکونڈریل بائیو جینس، اور مائٹوکونڈریل فیوژن/فِشن۔ وٹرو تجربات میں، پرائمری کارڈیو مایوسائٹس کو 24 گھنٹے تک SPD کے ساتھ یا اس کے بغیر ہائپوکسیا کا نشانہ بنایا گیا۔

نتائج: IUH نے جسمانی وزن، دل کا وزن، کارڈیک Ki67 اظہار، SOD کی سرگرمی، اور CAT اور اڈینوسین 5'- ٹرائی فاسفیٹ (ATP) کی سطح کو کم کیا اور BAX/BCL2 اظہار اور TUNEL- مثبت نیوکلی نمبروں میں اضافہ کیا۔ مزید برآں، IUH کی وجہ سے مائٹوکونڈریل ڈھانچے کی غیر معمولییت، dysfunction، اور مائٹوفیجی میں کمی (مائٹوفاگوسوم کی تعداد میں کمی)، مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس میں کمی (SIRT-1، PGC-1، NRF{7}، اور TFAM)، اور مایوکارڈیم میں فیوژن/فیوژن عدم توازن (مائٹوکونڈریل ٹکڑوں کی فیصد میں اضافہ، DRP1 اظہار میں اضافہ، اور MFN2 اظہار میں کمی) کا باعث بنا۔ حیرت انگیز طور پر، SPD علاج نے IUH-حوصلہ افزائی پیرامیٹرز میں تغیرات کو معمول بنایا۔ مزید برآں، ایس پی ڈی نے ہائپوکسیا سے متاثرہ ROS جمع ہونے، مائٹوکونڈریل جھلی کے ممکنہ زوال، اور کارڈیو مایوسائٹس میں مائٹوفگی کی کمی کو بھی روکا۔

نتیجہ: زچگی کے SPD کے علاج نے نوزائیدہ بچوں کے چوہوں میں IUH کی حوصلہ افزائی سے دل کو نقصان پہنچایا جس سے مایوکارڈیل مائٹوکونڈریل فنکشن کو اینٹی آکسیڈیشن اور اینٹی اپوپٹوسس کے ذریعے بہتر بنا کر اور MQC کو ریگولیٹ کیا گیا۔

1. پس منظر

وبائی امراض اور جانوروں کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ انٹرا یوٹرن ماحول جوانی میں قلبی امراض کے بڑھتے ہوئے خطرے سے وابستہ ہے (1)۔ قبل از پیدائش ہائپوکسیا، سب سے عام منفی انٹرا یوٹرائن ماحول، جنین کو اس کی جینیاتی طور پر طے شدہ نشوونما کی صلاحیت کا ادراک کرنے سے قاصر بنا سکتا ہے، جو کہ موسم بہار میں نمو میں کمی اور اعضاء کے کام کی چوٹ کے طور پر ظاہر ہوتا ہے۔ دائمی برانن ہائپوکسیا اکثر حمل کے نتیجے میں ہوتا ہے جس میں نالی کی عروقی مزاحمت میں اضافہ ہوتا ہے جیسے پری کلیمپشیا، اونچائی پر بین حمل، یا زچگی کی سانس کی بیماریاں۔ زیادہ نمایاں طور پر، ان میں سے ایک تہائی حمل کے آخر میں اوبسٹرکٹیو سلیپ ایپنیا ہائپووینٹیلیشن سنڈروم (OSAHS) سے متاثر ہوتے ہیں، اور اس کا تعلق جنسٹیشنل ہائی بلڈ پریشر سنڈروم کی نشوونما سے بھی ہے۔ سب سے اہم pathophysiological تبدیلی SAHS دائمی وقفے وقفے سے hypoxia ہے (3, 4). کئی جانوروں کے ماڈلز میں، انٹرا یوٹرن ہائپوکسک (IUH) کارڈیک کارکردگی میں کمی، ڈائیسٹولک اور سسٹولک dysfunction، ہائپرٹروفک بڑھوتری، کارڈیو مایوسائٹ کے پھیلاؤ میں کمی، اور جنین اور نوزائیدہ دل میں کارڈیو مایوسائٹ کی پختگی میں تاخیر کا باعث بنتا ہے، اس طرح بالغوں میں دل کی دھڑکن کی خرابیوں کا خطرہ بڑھ جاتا ہے۔ 5)۔ دائمی ہائپوکسیا کا پروگرامنگ اثر بنیادی طور پر دل کی نشوونما کے اہم مراحل میں طریقہ کار کی وضاحت کر سکتا ہے، جس سے کارڈیک آکسیڈیٹیو تناؤ میں اضافہ ہوتا ہے اور اولاد میں سیل اپوپٹوسس میں اضافہ ہوتا ہے (6-9)۔ ڈیولپمنٹ پروگرامنگ کا تصور معنی خیز ہے کیونکہ ہماری فزیالوجی ابتدائی زندگی کے دوران بہت زیادہ خراب اور پلاسٹک ہوتی ہے۔ انٹرا یوٹرن کی حالت فزیالوجی اور میٹابولزم کے تصورات کا تعین اور پروگرام کرتی ہے جو ہماری زندگی ہے۔ اس کے مطابق، IUH کے لیے جنین کے موافق ردعمل بالغوں میں قلبی امراض کی نشوونما کا باعث بنتا ہے (10)۔ مائٹوکونڈریا پیچیدہ آرگنیلز ہیں جو سیلولر انرجی پیدا کرنے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں اور سیلر سگنلنگ کے بے شمار واقعات ہیں۔ مائٹوکونڈریا کی ساختی اور فعال سالمیت کارڈیو مایوسائٹس کی بقا کے لیے اہم ہے، اور جب سمجھوتہ کیا جاتا ہے، تو مِٹ-ہنڈریل ہومیوسٹاسس کی رکاوٹ کاراک بیماریوں کی نشوونما کا باعث بنتی ہے۔ حال ہی میں، کئی مطالعات نے اولاد کے دل کو پہنچنے والے نقصان میں ثالثی کرنے میں دائمی قبل از پیدائش ہائپوکسیا کو دلانے والے مائٹوکونڈریل dysfunction کے کردار پر توجہ مرکوز کی ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ مائٹوکونڈریلریٹری فنکشن خراب تھا، اور کئی مائٹوکونڈریل مول قواعد کے اظہار نے IUH (11) کے سامنے آنے والے پیرینیٹل دل کو تبدیل کردیا۔ مزید برآں، IUH مایوکارڈیل اسکیمیا (12) کے بعد الٹ اولاد میں مائٹوکونڈریل کمپلیکس اینز ای سرگرمی میں کمی اور دل کے ٹکڑوں کی خرابی کا باعث بنتا ہے۔ اسی مناسبت سے، اس مطالعے کا مقصد نئی اولاد میں مالیکیولر لنک امو قبل از پیدائش ہائپوکسیا، آکسیڈیٹیو تناؤ، مائٹوکونڈریل ڈائس ایکشن، اور دل کی چوٹ کو دریافت کرنا تھا۔

مایوکارڈیم میں اس اعلیٰ حجم والے مائٹوکونڈریل نظام کی نشوونما اور پختگی بنیادی طور پر پیدائشی اور بعد از پیدائش کی نشوونما کے مراحل میں ہوتی ہے، بنیادی طور پر پیدائش کے بعد اڈینوسین 5'-ٹرائی فاسفیٹ (ATP) نسل کے لیے گلوکوز او فیٹی ایسڈز کے استعمال سے کارڈیک میٹابولک تبدیلی کی وجہ سے۔ (14)۔ ابھرتے ہوئے شواہد بتاتے ہیں کہ مائٹوکونڈریل کوالٹی کنٹرول (MQC) میکانزم کارڈیو مایوسائٹس (15) کی پختگی کے لیے اہم عامل ہیں۔ مائٹوکونڈریل کوالٹی کنٹرول، جس میں بنیادی طور پر مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس، مائٹوفیجی ایک ساتھ ڈائنامکس کے ساتھ، ایک باریک ٹیونڈ ریگولیٹری نیٹ ورک، مائٹوکونڈریا کی مقدار اور معیار کو ترتیب دیتا ہے اور تناؤ کے حالات میں مائٹوکونڈریل فنکشن اور کارڈیو مایوسائٹ کی بقا کو بہتر بناتا ہے (16)۔ Peroxisome proliferators-activate receptors (PPAR) coactivator 1 (PGC-1) ​​دل میں مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس اور فنکشن کو چلانے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے (17)۔ Peroxisome proliferators-activate receptors coactivator 1/(-/-) چوہوں کے دلوں میں پختگی کی خرابی اور مائٹوکونڈریل فنکشن اور کثافت (18) میں شدید اسامانیتا کے دستخط ہوتے ہیں۔ مزید برآں، mitophagy-mediator Parkin کو حذف کرنا نوزائیدہ مرحلے (19) میں مورفولوجیکل اور فعال مائٹوکونڈریا کی پختگی کو روکتا ہے۔ مائٹوکونڈریا انتہائی متحرک آرگنیلز ہیں، جو اپنے فنکشن سے وابستہ مسلسل فیوژن اور فیوژن واقعات سے گزرتے ہیں۔ ایمبریونک مدت کے آخر میں، MFN1 اور MFN2 میں MFN1 اور MFN2 میں کار کے مخصوص جینیاتی خاتمے سے پیدائش کے بعد شدید مائٹوکونڈریل dysfunction ظاہر ہوتا ہے اور کارڈیو مایوپیتھی (20) کی نشوونما ہوتی ہے۔ حیرت انگیز طور پر، ایک حالیہ تحقیق سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ دائمی ہائپ آئی اے نے جنین کے گوئ اور پگ فوربرین (21) میں مائٹوکونڈریل ڈائنامکس میں خلل ڈالا ہے۔ اس کے مطابق، MQC IUH نوزائیدہ اولاد میں مایوکارڈیم کی چوٹ کی نشوونما میں ایک فوکل پوائنٹ کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ تاہم، نوزائیدہ کارڈیک MQC نظام پر قبل از پیدائش کے ہائپوکسیا کے اثرات اور نوزائیدہ دل کی صحت پر MQC کی خرابی کے اثرات کے بارے میں بہت کم معلومات ہیں۔ اس مطالعہ نے اس مشن کو سنبھالا تاکہ نئی اولاد میں IUH کی حوصلہ افزائی مایوکارڈیل نقصان کے مائٹوکونڈریل سے متعلق میکانزم کو تلاش کیا جا سکے اور IUH کی دل کی چوٹ کو کم کرنے کے لیے مزید روک تھام کی حکمت عملیوں کو تلاش کیا جا سکے۔

پولی مائنز (PAs)، بشمول پوٹریسین (PU)، اسپرمائڈائن (SPD)، اور اسپرمائن (SP)، تقریباً تمام جانداروں میں موجود ہیں اور جنین اور جنین کے سر ویل، نمو اور نشوونما کے لیے ضروری ہیں (22-24) . مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ IUH کے سامنے آنے والی بھیڑیں exogenous polyamines (25, 26) کی تکمیل کے ذریعے برانن ڈیسپلاسیا کو بہتر بنا سکتی ہیں۔ مزید برآں، ادب کا بڑھتا ہوا جسم فری ریڈیکلز کو ختم کرنے اور ڈی این اے، پروٹینز اور لپڈس کو آکسیڈیٹیو تناؤ کے نقصان دہ نقصان سے بچانے میں پولی مائنز کے کردار کی نشاندہی کرتا ہے۔ یہ بھی انکشاف ہوا ہے کہ پولیمین کی سپلیمنٹیشن ماڈل جانداروں میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی انفلامیٹری، اور مائٹوفجی انڈیوسنگ پرو ٹرائیز (27-29) کے ذریعے زندگی کی مدت کو بڑھاتی ہے۔ حالیہ مطالعات نے دستاویزی کیا ہے کہ غذائیت میں ایس پی ڈی کے ساتھ سپورٹ مینٹیشن کارڈیو پروٹیکٹو ہے اور مائٹوفگی اور مائٹوکونڈریل سانس کو متحرک کرکے اور دل کے افعال کو بہتر بنا کر چوہوں اور انسانوں دونوں کی عمر کو طول دیتا ہے (30، 31)۔ مزید اہم بات یہ ہے کہ ہم نے پہلے اطلاع دی تھی کہ جنین کی نشوونما کے آخری مراحل کے دوران زچگی کے ہائپوکسک نمائش کے نتیجے میں ڈیسڈ اینا لسٹ اور نوزائیدہ چوہوں کے کیریک ٹشو میں پولیمینز کی کیٹابولزم میں اضافہ ہوا۔ ایس پی ڈی نے مائٹوکونڈریل مینٹیشن (32) کو روک کر IUH کے سامنے آنے والے وین ڈے اولاد والے چوہوں میں دل کی چوٹ کو روکا۔

2. مقاصد

اس مطالعہ میں، IUH کو آکسیڈیٹیو تناؤ کو بڑھا کر اور نوزائیدہ اولاد کے دل میں MQC میکانزم کو تباہ کر کے مائٹوکونڈریل ڈھانچے اور فنکشن کے خسارے کو دلانے کے لیے قیاس کیا گیا ہے، اور utero میں زچگی کے SPD علاج کو مائٹوکونڈریا کے ترقیاتی پروگرام کو کم کر کے مایوکارڈیل چوٹ کو کم کرنے کے لیے فرض کیا گیا ہے۔ یہ مطالعہ بالغوں کے قلبی امراض کو روکنے کے لیے IUH اولاد کے لیے روک تھام یا علاج کی حکمت عملیوں کی ترقی میں معاون ثابت ہو سکتا ہے۔

3. طریقے

3.1 جانور

نر اور مادہ چوہوں (3 ماہ کی عمر) کو ہاربن میڈیکل یونیورسٹی کے شعبہ لیبارٹری اینیمل سے خریدا گیا تھا۔ تمام طریقہ کار کو ہاربن میڈیکل یونیورسٹی (چین) کی ایتھکس ریویو کمیٹی نے منظور کیا تھا، اور تمام تجربات نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ کے رہنما خطوط کے ذریعے کیے گئے تھے۔ 2:1 کے نر سے مادہ تناسب والے چوہوں کو ملاوٹ کے لیے تصادفی طور پر پنجرے میں رکھا گیا تھا۔ اندام نہانی کے سمیر اگلے دن اندام نہانی کے پلگ یا اندام نہانی کے سمیر میں سپرم کی موجودگی کا پتہ لگانے کے لیے کیے گئے، جس کی تصدیق حمل کے صفر دن کے طور پر کی گئی۔ حاملہ چوہوں کو ایک ایسے کمرے میں رکھا گیا تھا جس میں نمی (60 فیصد) اور کنٹرول درجہ حرارت (21 ڈگری) تھا، اور روشنی اور اندھیرے کا دورانیہ 12:12 گھنٹے تھا۔

3.2 انٹرا یوٹرن ہائپوکسیا ماڈل

حمل کے 15 ویں سے 21 ویں دن تک، ہائپوکسیا گروپ (n=10) میں چوہوں کو ایک بند پلیکس گلاس چیمبر میں رکھا گیا، ہوا اور نائٹروجن کے ساتھ انجکشن لگایا گیا، اور آکسیجن تجزیہ کار (Pro OX12{{13) کے ذریعے ان کی نگرانی کی گئی۔ }}؛ BioSpherix، نیویارک، USA)، اور روزانہ چار گھنٹے تک 10 فیصد آکسیجن کے ساتھ سانس لیا جاتا ہے۔ شریان کے خون کے نمونے دائیں فیمورل شریان سے لیے گئے، خون کی گیس اور پی ایچ کی قدروں کو آرٹیریل آکسیجن کے جزوی دباؤ کو 50 - 55 mmHg برقرار رکھنے کے لیے ماپا گیا، خون میں آکسیجن کی سنترپتی کو 80 - 85 فیصد پر برقرار رکھا گیا، اور مخصوص طریقہ کار انجام دیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (32)۔ تجرباتی مادہ چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: کنٹرول گروپ (کنٹرول)، انٹراٹورین ہائپوکسیا گروپ (Hpx)، انٹرا یوٹرائن ہائپوکسیا پلس اسپرمائڈائن گروپ (Hpx-Spd)، اور انٹرا یوٹرائن ہائپوکسیا پلس اسپرمائڈائن پلس انحیبیٹر گروپ (Hpx-Spd-DFMO۔ )۔ حمل کے 15ویں - 21 دن فی گروپ چھ چوہوں کو انٹراپریٹونلی انجکشن لگایا گیا تھا۔ چوہوں کو کنٹرول اور Hpx گروپوں میں 0.9 فیصد نمکین (1 mL/kg/d)، Hpx-Spd گروپ میں SPD ​​(5 mg/kg/d)، اور SPD (5 mg/kg/d) اور difuoromethy دیا گیا تھا۔ بالترتیب Hpx-Spd-DFMO گروپ میں L-ornithine (DFMO، پولیمین ترکیب ODC کے کلیدی انزائم کا ایک روکنے والا) (5 mg/kg/d)۔ ڈیلیوری کے بعد، 1- دن کے نوزائیدہ بچوں کی قربانی دی گئی، اور ان کے دلوں کو فالو اپ تجرباتی مطالعات کے لیے نکالا گیا۔

3.3 ہسٹولوجیکل تجزیہ

چوہوں کے بائیں ویںٹرکولر ٹشو کو <1 سینٹی میٹر کی موٹائی میں کاٹا گیا تھا، 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ فکس کیا گیا تھا، الکحل سے پانی کی کمی تھی، اور پیرافین میں سرایت کی گئی تھی۔ ایمبیڈڈ پیرافین کو 5 ملی میٹر موٹی سلائسوں میں کاٹا گیا، پھر 60 ڈگری کے مستقل تندور کے درجہ حرارت پر خشک کیا گیا، زائلین سے ڈیویکس کیا گیا، اور اس کے بعد ہیماتوکسیلین-ایوسین (ایچ ای) کو داغ دیا گیا۔ آپٹیکل مائیکروسکوپ (Eclipse E200; Nikon, Tokyo, Japan) کے ذریعے کارڈیک مورفولوجی اور ڈھانچے میں ہونے والی تبدیلیوں کا اندازہ لگانے کے لیے ٹشو کے ٹکڑوں کا مشاہدہ کیا گیا۔

3.4 امیونو فلوروسینس تجزیہ

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (33) کی 67 امیونو فلوروسینس سٹیننگ انجام دیا گیا تھا۔ مختصراً، چوہوں کے بائیں ویںٹرکولر ٹشو کو 4 فیصد فارملین میں طے کیا گیا تھا، جو پیرافین میں سرایت کرتا تھا۔ ڈی ویکسنگ، ہائیڈریشن، اور اینٹیجن کی مرمت پہلے مکمل کی گئی۔ ان ٹشوز کو 2 گھنٹے کے لیے 0.5 فیصد بوائین سیرم البومین کے ساتھ بلاک کیا گیا اور پھر Ki67 Rabbit Monoclonal Antibody (1:100, AF1738, Beyotime, China) کے ساتھ راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ پی بی ایس کے ساتھ دھونے کے بعد، ٹشو کو الیکسا فلور کے ساتھ گوٹ اینٹی خرگوش آئی جی جی (1: 500، اے 0468، بیو ٹائم، چائنا) کا لیبل لگایا گیا تھا اور نیوکللی کے لیے DAPI کے ساتھ کاؤنٹر اسٹین کیا گیا تھا۔ تصاویر لیزر کنفوکل مائکروسکوپی (اولمپس، ایف وی 1000، جاپان) کے تحت دیکھی اور اسکین کی گئیں۔ سافٹ ویئر کا استعمال ضم شدہ تصاویر کے اجتماعی تجزیہ کے لیے کیا گیا تھا۔

3.5 فبروسس کی مقدار

کارڈیک فبروسس کا اندازہ میسن کے ٹرائکروم سٹیننگ سے کیا گیا۔ جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے، نوزائیدہ چوہوں کے کارڈیک ٹشو سیکشنز کو معیاری طریقوں سے ڈیویکس اور ہائیڈریٹ کیا گیا تھا اور پھر پروٹوکول کے مطابق میسن کے ٹرائیکروم سے داغ دیا گیا تھا۔ ہر دل کے لئے دو غیر متصل کراس سیکشن استعمال کیے گئے تھے۔ امیج جے سافٹ ویئر، vl.52 (NIH، Bethesda، MD) کا استعمال کرتے ہوئے کل بائیں ویںٹرکولر مایوکارڈیل ایریا میں فائبروٹک ایریا کی فیصد کا تجزیہ کیا گیا۔

3.6۔ TdT- ثالثی dUTP نک اینڈ لیبلنگ اور اپوپٹوٹک سیل کی پیمائش

ایک دن پرانے نوزائیدہ چوہے کے دلوں میں اپوپٹوٹک خلیوں کی تعداد کا تعین کرنے کے لئے ایک TdT-ثالثی dUTP نک اینڈ لیبلنگ (TUNEL) پرکھ کا استعمال کیا گیا تھا۔ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق سیل ڈیتھ ڈیٹیکشن کٹ (روچے، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے ہمارے پہلے بیان کردہ طریقہ کار کے بعد دل کے ٹشوز کا علاج کیا گیا۔ اپوپٹوٹک خلیوں کی فیصد کے لئے ہر بلاک سے تین سلائیڈوں کا اندازہ کیا گیا۔ چار سلائیڈ فیلڈز کو 200×میگنیفیکیشن کے ساتھ تصادفی طور پر جانچا گیا۔ مجموعی طور پر، ہر فیلڈ میں 100 خلیات شمار کیے گئے تھے۔

3.7 اینٹی آکسیڈینٹ انزائم سرگرمی کی پیمائش

سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD) اور catalase (CAT) کی سرگرمی کو کمرشل کٹس (SOD: A001-3- 1 اور CAT: A007-1-1؛ Jiancheng Bio. Institute, Nanjing, China) کا استعمال کرتے ہوئے اسپیکٹرو فوٹومیٹر (Perkin-Perkin- ایلمر، نارواک، سی ٹی، ریاستہائے متحدہ)۔ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق، آپریشن مکمل کیا گیا تھا، اور پروٹین کی ارتکاز کو بائیسنچونینک ایسڈ طریقہ (پیئرس، راکفورڈ، ریاستہائے متحدہ) کے ساتھ بوائین سیرم البومین (BSA) کو معیاری (34) کے ساتھ ماپا گیا تھا۔

3.8۔ Adenosine 5'-Triphosphate مواد کی پیمائش

کارڈیک ٹشو میں اے ٹی پی مواد کو اے ٹی پی پرکھ کٹ (S0026B، بیو ٹائم، بائیو انسٹی ٹیوٹ، چین) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق، لیسیٹ کو ٹشو کے وزن کے مطابق تناسب میں شامل کیا گیا، شیشے کے ہوموجنائزر کے ساتھ ہم آہنگ کیا گیا، اور پھر 4 ڈگری 12000 گرام پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ لیا گیا تھا، اور ہر نمونے میں اے ٹی پی کے مواد کو ایک لومینو میٹر (نانو ڈراپ، نانوڈروپ2000، تھرمو، USA) BCA کٹ (P0012s، Beyotime، Bio. Institute, China) سے پتہ چلا تھا۔ پروٹین کی ارتکاز کا تعین کرنے اور پھر ATP کے ارتکاز کو nmol/g پروٹین میں تبدیل کرنے کے لیے Bicinchonic acid کا طریقہ استعمال کیا گیا۔

3.9 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی

کارڈیک اپیکل ٹشو کو تقریباً 1 ملی میٹر × 1 ملی میٹر × 1 ملی میٹر چھوٹے ٹکڑوں میں الگ کیا گیا اور پھر 4 ڈگری پر گلوٹرالڈیہائیڈ فاسفیٹ بفر میں طے کیا گیا۔ معمول کی پانی کی کمی، بھیگنے، سرایت کرنے اور داغ لگانے کے بعد، 50 - 70 nm کے الٹراتھائن حصے بنائے گئے تھے۔ کارڈیک ٹشو کے الٹرا سٹرکچر کو ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (TEM) کے تحت دیکھا گیا اور تصویر کشی کی گئی (H600 ہٹاچی، ٹوکیو، جاپان)۔ سنگل مائٹوکونڈریا اور مایوفیلمینٹس کو امیج جے سافٹ ویئر ورژن 1.80 (نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ) کے ساتھ 10000 بار میگنیفیکیشن کی شرط کے تحت میپ کیا گیا تھا، اور ان کے علاقوں کو ہر دل (35) سے ماپا گیا تھا۔ اس دوران، مائٹوکونڈریل ٹکڑوں <1 µm3، جو تقسیم نہیں کیے گئے تھے (عام طور پر گول)، شناخت کیے گئے، اور ویو فیلڈ میں مائٹوکونڈریل ٹکڑوں کی اوسط فیصد کو مائٹوکونڈریل فریگمنٹیشن انڈیکس (MFI) کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا۔

3.10 مائٹوکونڈریل تنہائی

مائٹوکونڈریا کو مائٹوکونڈریا آئسولیشن کٹ (بیو ٹائم بائیوٹیکنالوجی، شنگھائی، چین) کے ساتھ تفریق سینٹرفیوگریشن کا استعمال کرتے ہوئے 4 ڈگری پر الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ مختصراً، دل کے تازہ بافتوں کو ٹشو کے ٹکڑوں میں کاٹا گیا اور پری ٹھنڈا پی بی ایس کی 10 جلدوں کے ساتھ سینٹرفیوج کیا گیا، سپرنیٹنٹ کو ضائع کر دیا گیا، 20 منٹ کے لیے ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا، اضافی آئسولیشن بفر اے کو سینٹرفیوج کیا گیا، سپرنٹنٹ کو دوسرے میں منتقل کر دیا گیا۔ ٹیوب، دوبارہ سینٹرفیوجڈ، اور پرکشش حصہ الگ تھلگ مائٹوکونڈریا تھا۔ حتمی کارڈیک مائٹوکونڈریل گولی کو ہوموجنائزنگ بفر میں دوبارہ معطل کر دیا گیا، برف پر ذخیرہ کیا گیا، اور 4 گھنٹے کے اندر مائٹوکونڈریل سانس کے فنکشن پر تجربات کے لیے استعمال کیا گیا۔

3.11۔ مائٹوکونڈریل آکسیجن کی کھپت کی پیمائش

مائٹوکونڈریل آکسیجن کی کھپت کو کلارک قسم کے آکسیجن الیکٹروڈ (Hansatech Instruments، Norfolk، UK) کے ذریعے مائٹوکونڈریل سانس لینے والے بفر میں ماپا گیا۔ Pyruvate (5 mM) اور malate (5 mM) کو 500 µg پروٹین/mL کی حتمی حراستی میں پیچیدہ I پر مشتمل مائٹوکونڈریا کے لیے سبسٹریٹ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ADP-حوصلہ افزائی آکسیجن کی کھپت (ریاست 3 تنفس) کو 200 µM ADP کی موجودگی میں ماپا گیا تھا، اور ADP سے آزاد آکسیجن کی کھپت (ریاست 4 سانس) کی نگرانی کی گئی تھی۔ سانس کے کنٹرول کا تناسب (RCR، ریاست 3 کو ریاست 4 سے تقسیم کیا گیا) فاسفوریلیشن (کپلنگ) کے ذریعے آکسیجن کی کھپت کو ظاہر کرتا ہے۔ طریقہ کار جاری رہا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (36)۔

3.12۔ ویسٹرن بلاٹ تجزیہ

کارڈیک ٹشوز کے نمونے کی کٹائی اور -80 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا تھا۔ منجمد بائیں ویںٹرکولر کارڈیک ٹشوز کو برف کے ٹھنڈے RIPA lysis بفر (Beyotime Inc.، Shanghai، China P0013B) میں ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ بی سی اے پروٹین پرکھ کٹ (بیو ٹائم انکارپوریشن، شنگھائی، چین P0006C) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی تعداد کو درست کیا گیا۔ کل پروٹین پر مشتمل نمونوں کو 10 فیصد (w/v) SDS-PAGE سے الگ کیا گیا تھا اور PVDF جھلی (ملی پور، بیڈفورڈ، ایم اے، ریاستہائے متحدہ) میں منتقل کیا گیا تھا۔ درج ذیل اینٹی باڈیز کا استعمال کیا گیا تھا: اینٹی باڈیز برائے GAPDH (1:2000,10494-1-AP), MFN2 (1:1000,12186-1- AP), SIRT-1 (1:1000,{{16) }}AP), NRF-2 (1:600,16396-1-AP), TFAM (1:1000,19998-1-AP), اور BAX (1.1000,509599-2-Ig) Proteintech (WuHan, China), BCL2 (1: 2000, sc-7382) اور DRP1 (1:1000, sc-271583) کو سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی (ڈلاس، TX) اور PGC سے خریدا گیا تھا۔ -1 (1:1000, ab106814, Abcam, Cambridge, MA, UK)۔ ثانوی اینٹی باڈی (ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز لیبل والا بکرا اینٹی خرگوش آئی جی جی) بیو ٹائم کارپوریشن (شنگھائی، چین) سے تھا۔ پروٹین بینڈ کی شدت کو فلور کیم کیمیلومینیسینس جیل امیجنگ سسٹم (پروٹین سادہ، USA) کا استعمال کرتے ہوئے مقدار درست کیا گیا۔ پروٹین بینڈز کی نظری کثافت کا تجزیہ امیج جے سافٹ ویئر ورژن l.52 (NIH, Bethesda, MD) کے ساتھ کیا گیا۔

3.13۔ ہائپوکسک کارڈیومیوسائٹ ماڈل

نوزائیدہ چوہا کارڈیو مایوسائٹس (NRMCs) کو معیاری طریقوں سے الگ تھلگ اور مہذب کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (32)۔ مختصراً، تین دن کے نوزائیدہ چوہوں کے دلوں کو نکالا گیا، کیما بنایا گیا، کلچر کیا گیا، اور پھر 0.25 فیصد ٹرپسن اور 0.02 فیصد EDTA (بیو ٹائم بائیوٹیکنالوجی، شنگھائی، چین) میں ہضم کیا گیا۔ سنٹری فیوگریشن کے بعد، 10 فیصد فیٹل کلف سیرم (بائیلوٹ، روس) کے ساتھ اضافی ڈی ایم ای ایم میں پریسیپیٹیٹس منتقل کیے گئے اور 5 فیصد 2 پر مشتمل مرطوب ہوا میں انکیوبیٹ کیا گیا۔ , Redfield, NY)، اور بقایا آکسیجن خارج کرنے کے لیے 8 منٹ کے لیے نائٹروجن سے بھرا ہوا ہے۔ ان کارڈیو مایوسائٹس کو تصادفی طور پر درج ذیل گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: (1) کنٹرول گروپ (کنٹرول)، خلیات جو کہ عام انکیوبیشن حالات میں مہذب ہوتے ہیں۔ (2) ہائپوکسیا (Hpx) گروپ، خلیات ہائپوکسک چیمبر میں 24 گھنٹے کے لیے رکھے جاتے ہیں اور پھر عام طور پر 24 گھنٹے کے لیے کلچر ہوتے ہیں۔ (3) Hpx-Spd گروپ، ہائپوکسک چیمبر میں رکھے گئے خلیات اور 24 گھنٹے کے لیے 10 μmol/L SPD کے ساتھ انکیوبیٹڈ؛ (4) Hpx-SpdDFMO گروپ، خلیات ایک ہائپوکسک چیمبر میں رکھے گئے ہیں اور 10 μmol/L SPD کے علاوہ 2 mmol/L DFMO کے ساتھ 24 گھنٹے تک انکیوبیٹڈ ہیں۔

3.14۔ ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں کی پیمائش

آر او ایس جنریشن کی پیمائش ڈائی ہائیڈروتھیڈیم (DHE) سٹیننگ پرکھ (Cat No. S0063، Beyotime، China) سے کی گئی۔ مختصراً، پرائمری کارڈیو مایوسائٹس کو 5 μmol/L DHE کے ساتھ 37 ڈگری پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، پی بی ایس سے دھویا گیا، اور پھر فلوروسینس کی شدت میں ہونے والی تبدیلیوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے مائکروسکوپ کے نیچے منتقل کیا گیا۔ اولمپس فلو ویو FV1000 فلوروسینس مائیکروسکوپ (Olympus Optical Co., Ltd., Takachiho, Japan) کے ساتھ 535 nm کی اتیجیت طول موج پر تصاویر لی گئیں، اور زیادہ سے زیادہ اخراج طول موج 610 nm، n > 20 سیلز فی گروپ تھی۔

3.15 مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل کا تعین

ڈائی tetramethylrhodamine ethyl ester (TMRE) مثبت طور پر چارج کیا جاتا ہے اور منتخب طور پر مائٹوکونڈریا میں واقع ہوسکتا ہے۔ یہ وسیع پیمانے پر مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت (∆Ψm) کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ مختصراً، 200 μmol/L کے ارتکاز پر TMRE سٹیننگ ورکنگ سلوشن کو گروپ شدہ علاج شدہ کارڈیو مایوسائٹس میں شامل کیا گیا، اچھی طرح ملایا گیا، اور سیل انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 20 منٹ کے لیے رکھا گیا۔ سپرنیٹنٹ کی خواہش کی گئی تھی، اور خلیوں کو پی بی ایس سے دھویا گیا تھا اور فلوروسینس کی شدت میں تبدیلی کا مشاہدہ کرنے کے لیے الٹی مائکروسکوپ میں منتقل کیا گیا تھا۔ اتیجیت طول موج 549 nm تھی، اور اخراج روشنی 579 nm تھی۔ سرخ فلوروسینس کی شدت نے ∆Ψm، n > 20 سیلز فی گروپ کی تبدیلی کی نشاندہی کی۔

3.16۔ مائٹوکونڈریل اور لائسوسومل لوکلائزیشن کا تجربہ

ہدایات کے مطابق، Mito-Tracker Green (NO.C1048, Beyotime, China) اور Lyso-Tracker Red (NO.C1046, Beyotime, China) نے mitochondrial اور lysosomal colocalization کے تجزیہ کا استعمال کیا۔ تجربات سے پہلے 30 منٹ تک HBSS میں NRCMs کو 200 nM MitoTracker Green FM اور 50 nM LysoTracker Red کے ساتھ لوڈ کیا گیا تھا، خلیات کو PBS سے دھویا گیا تھا، اور پھر Olympus FluoView FV1000 فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی تصاویر حاصل کی گئی تھیں۔ 488 nm لیزر لائن MitoTracker Green fluorescence کو اکسانے کے لیے استعمال کی گئی تھی، جس کی پیمائش 505 اور 515 nm کے درمیان تھی۔ LysoTracker Red کے لیے، 577 nm لیزر لائن 590 nm کی پیمائش کے ساتھ استعمال کی گئی تھی۔ سرخ اور سبز پکسل کی شدت کے اوورلے کا تعین Nikon Eclipse Microscope، n > 20 سیلز فی گروپ پر کوانٹیفیکیشن سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

3.17۔ شماریاتی تجزیہ

تجرباتی گروپوں کے تمام ڈیٹا کا یک طرفہ انووا کا استعمال کرتے ہوئے موازنہ کیا گیا جس کے بعد گراف پیڈ پرزم سافٹ ویئر ورژن 8 (GraphPad Software Inc., La, Jolla.CA) اور SPSS سافٹ ویئر ورژن 17.1 (SPSS, Chicago, IL, United) کے ساتھ بونفرونی پوسٹ ہاک ٹیسٹ ریاستیں)۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا، اور اہمیت کی سطح P < 0.05 پر سیٹ کی گئی تھی۔

4. نتائج

4.1 اولاد اور دل کی خصوصیات

جسمانی وزن (BW) اور دل کا وزن (HW) ماپا گیا، اور HW سے BW تناسب (HW/BW) کا حساب لگایا گیا (شکل 1)۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ نوزائیدہ چوہوں کے BW اور HW میں کمی واقع ہوئی ہے، اور ان کے HW/BW میں انٹرا یوٹرن ہائپوکسیا کی وجہ سے اضافہ ہوا ہے۔ IUH گروپ کے مقابلے میں، SPD گروپ میں نوزائیدہ چوہوں کے BW اور HW میں اضافہ ہوا (P < 0.05)، اور HW/BW کم ہوا (P < 0۔ 05); SPD گروپ کے مقابلے میں، DFMO ٹریٹمنٹ گروپ کے BW اور HW دونوں میں کمی آئی (P <0.05)، اور HW/BW میں نمایاں اضافہ ہوا (P <0.05)۔

4.2 مایوکارڈیل مورفولوجیکل سٹرکچر، سیل کے پھیلاؤ، اور فبروسین نوزائیدہ بچوں پر ایس پی ڈی کے اثرات

کارڈیک ایچ ای سٹیننگ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ IUH کے سامنے آنے والی ایک دن کی اولاد کے دلوں میں سوجن دکھائی دیتی ہے اور مایوکارڈیل ریشوں کو ڈھیلے طریقے سے ترتیب دیا گیا ہے۔ تاہم، SPD کے ساتھ علاج کیے جانے والے IUH دلوں نے قابل قبول مایوکارڈیل ٹشو ڈھانچہ (شکل 2A) کو برقرار رکھا۔ اگلا، ہم نے HE- داغ والے ٹشو سلائس کے ساتھ بائنوکلیئر کارڈیو مایوسائٹس کی تعداد کا جائزہ لیا۔ Binuclear cardiomyocytes کی تعداد IUH گروپ میں کنٹرول گروپ کی نسبت زیادہ تھی (P < 0۔{5}}5)۔ IUH گروپ کے مقابلے میں، SPD ٹریٹمنٹ گروپ میں بائنوکلیئر کارڈیو مایوسائٹس کا تناسب نمایاں طور پر کم ہوا (P < 0۔{14}}5); DFMO نے SPD (P < 0 کے اثر کو کم کیا۔{19}}5) (شکل 2C)۔ ہم نے امیونو فلوروسینس طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے چوہے کے مایوکارڈیم میں Ki67 (سیل کے پھیلاؤ کا ایک نشان) کے اظہار کا مزید پتہ لگایا۔ Ki67 کا اظہار جتنا زیادہ ہوگا، سرخ اور نیلے رنگ کو ملا کر گلابی فلوروسینس اتنا ہی مضبوط ہوگا (شکل 2E)۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، IUH گروپ میں Ki67 کا اظہار نمایاں طور پر کم ہوا (P < 0.05), Ki67 اظہار میں SPD ​​انتظامیہ کے بعد نمایاں اضافہ ہوا (P < { {28}}.05)، اور SPD کے اثر کو DFMO (P <0.05) (شکل 2F) نے ختم کر دیا تھا۔ ان نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ SPD IUH کے ذریعے پیدا ہونے والے سیل سائیکل سے کارڈیو مایوسائٹس کے قبل از وقت انخلا کو روک سکتا ہے اور IUH کے سامنے آنے والی نئی اولاد میں کارڈیو مایوسائٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتا ہے۔ پھر ہم نے مایوکارڈیل کولیجن مواد میں تبدیلیوں کا پتہ لگانے کے لیے میسن سٹیننگ کا استعمال کیا اور کولیجن ایریا کی پیمائش (شکل 2 بینڈ ڈی) کے ذریعے مایوکارڈیل فبروسس کا اندازہ کیا۔ ہم نے پایا کہ IUH کے سامنے آنے والے نوزائیدہ چوہوں کے دلوں میں مایوکارڈیل کولیجن کا ذخیرہ بڑھ گیا (P <0.05)، جس کی سطح کنٹرول گروپ کے مقابلے میں زیادہ تھی۔ اس کے برعکس، ایس پی ڈی کے علاج کے بعد مایوکارڈیل فائبروسس کا علاقہ نمایاں طور پر کم ہوا (P <0.05)۔ تاہم، SPD ٹریٹمنٹ گروپ کے مقابلے میں، HpxSpd-DFMO گروپ (P <0.05) میں فائبروسس کے علاقے میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔

4.3 مایوکارڈیل مائٹوکونڈریل ڈھانچے، سانس کی تقریب، اور نوزائیدہ بچوں میں اڈینوسین 5'-ٹرائی فاسفیٹ مواد پر سپرمائڈائن کے اثرات جو انٹرا یوٹرن ہائپوکسیا کا شکار ہوتے ہیں۔

TEM (شکل 3A) کے ذریعہ کارڈیک ٹشو اور مائٹوکونڈریل خصوصیت کی الٹراسٹرکچرل ڈھانچے کی تبدیلیوں کا تجزیہ کیا گیا۔ امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال مائٹوکونڈریل مواد کی فیصد (پورے سیل ایریا میں مائٹوکونڈریل ایریا) اور مائٹوکونڈریل ایریا (اعداد و شمار 3 بی اور سی) کی مقدار درست کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کنٹرول گروپ میں، مایوکارڈیل مایوفیلمینٹس کو منظم طریقے سے ترتیب دیا گیا تھا، سارکومیر کا ڈھانچہ صاف تھا، مائٹوکونڈریا کمپیکٹ تھا، میٹرکس کثافت تھا، اور مائٹوکونڈریل کرسٹی کو منظم طریقے سے ترتیب دیا گیا تھا۔ تاہم، مائٹوکونڈریا پھول گیا، اور IUH گروپ کے کچھ کارڈیو مایوسائٹس میں ڈھیلے ہونے والے میٹرکس اور کثافت میں کمی دیکھی گئی۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، کارڈیو مایوسائٹس میں مائٹوکونڈریا کا تناسب اور مائٹوکونڈریا کا رقبہ دونوں کم ہو گئے تھے (P < 0۔{4}}5)۔ تاہم، SPD علاج کے چوہے کے دلوں میں، مایوکارڈیل myofilaments صاف تھے، sarcomere کا ڈھانچہ صاف تھا، mitochondrial میٹرکس کمپیکٹ تھا، اور mitochondrial سوجن میں کمی واقع ہوئی تھی۔ IUH گروپ کے مقابلے میں، cardiomyocytes میں mitochondria کے تناسب میں اضافہ ہوا (P < 0.05)، اور mitochondria کے علاقے میں اضافہ ہوا (P <0.05)۔ DFMO نے ان SPD-حوصلہ افزائی اثرات (P <0.05) کو روکا۔

ہم نے مائٹوکونڈریل سانس کی تقریب کا اندازہ کرنے کے لیے پائروویٹ/ملیٹ کو بطور سبسٹریٹ استعمال کیا، بشمول ریاستیں 3 اور 4 سانس کی شرح اور RCR (شکل 3D - F)۔ ہم نے دیکھا کہ کنٹرول گروپ کے مقابلے، ریاستوں 3 اور 4 میں سانس کی شرح اور IUH گروپ کے RCR سب نمایاں طور پر کم تھے (P < 0.{{10}}5)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ریاستوں 3 اور 4 کا RCR SPD علاج (P < 0 کے بعد بحال ہوا۔{17}}5)۔ اس کے برعکس، یہ SPD اثرات DFMO ٹریٹمنٹ گروپ (P < 0.05) میں نمایاں طور پر روکے گئے تھے۔ اسی طرح، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، IUH گروپ میں مایوکارڈیل ATP کا مواد نمایاں طور پر کم ہوا (P <0.05)۔ IUH گروپ کے مقابلے میں، SPD سے علاج شدہ گروپ (P <0.05) میں ATP مواد میں نمایاں اضافہ ہوا، اور DFMO نے SPD (P <0.05) (شکل 3G) کے اثرات کو کم کیا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ SPD مایوکارڈیل مائٹوکونڈریل ڈھانچے اور فنکشن کو پہنچنے والے نقصان کی حفاظت کر سکتا ہے اور IUH کے سامنے آنے والے نوزائیدہ بچوں کے چوہوں میں ATP کی سطح کو گرنے سے روک سکتا ہے۔

【مزید معلومات کے لیے:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】