STEAP1 Chimeric Antigen ریسیپٹر T سیل اور ٹیومر-لوکلائزڈ IL-12 امیونو تھراپی کے ساتھ اعلی درجے کے پروسٹیٹ کینسر کو نشانہ بنانا

پروسٹیٹ 1 (STEAP1) کا چھ ٹرانس میبرن اپیتھیلیل اینٹیجن پروسٹیٹ کینسر میں علاج کے ہدف کے لیے سیل کی سطح کا اینٹیجن ہے۔ یہاں، ہم مہلک میٹاسٹیٹک پروسٹیٹ کینسر میں پروسٹیٹ مخصوص جھلی اینٹیجن (PSMA) سے متعلق STEAP1 کے وسیع اظہار اور STEAP1-ڈائریکٹڈ chimeric antigen ریسیپٹر (CAR) T-سیل تھراپی کی ترقی کی اطلاع دیتے ہیں۔ STEAP1 CAR T خلیات کم اینٹیجن کثافت میں رد عمل کا مظاہرہ کرتے ہیں، میٹاسٹیٹک پروسٹیٹ کینسر کے ماڈلز میں اینٹیٹیمر سرگرمی، اور انسانی STEAP1 دستک ان ماؤس ماڈل میں حفاظت کا مظاہرہ کرتے ہیں۔ STEAP1 اینٹیجن فرار علاج کے خلاف مزاحمت کا ایک بار بار چلنے والا طریقہ کار ہے اور اس کا تعلق ٹیومر اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن کے کم ہونے سے ہے۔ کولیجن بائنڈنگ ڈومین (CBD)-IL-12 فیوژن پروٹین کی شکل میں ٹیومر لوکلائزڈ انٹرلییوکن-12 (IL-12) تھراپی کا اطلاق STEAP1 CAR T سیل تھراپی کے ساتھ مل کر بہتر کرتا ہے۔ پروسٹیٹ کینسر کے امیونولوجیکل طور پر کولڈ ٹیومر مائکرو ماحولیات کو دوبارہ تشکیل دے کر اور میزبان استثنیٰ اور ایپیٹوپ پھیلاؤ کی مصروفیت کے ذریعے STEAP1 اینٹیجن فرار کا مقابلہ کرکے اینٹیٹیمر افادیت۔

چینی جڑی بوٹی سیستانچ پلانٹ - اینٹیٹیمر

Metastatic prostate cancer represents an incurable disease responsible for over 33,000 deaths per year in the United States1. Prostate cancer is critically reliant on androgen receptor (AR) signaling and thus the suppression of gonadal androgen production through surgical or chemical castration (androgen deprivation therapy) has been a mainstay of treatment for advanced disease. However, metastatic prostate cancer inevitably develops resistance to androgen deprivation therapy and enters a stage called metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). mCRPC is currently incurable and is considered the end stage of the disease and is associated with a median overall survival of three years2. In the past decade, multiple therapies including an inhibitor of extragonadal androgen synthesis (abiraterone acetate)3, second-generation AR antagonists (enzalutamide)4, radioactive isotope (radium-223)5, and a prostate-specific membrane antigen (PSMA)-specific radioligand therapy (lutetium Lu 177 via votide tetraxetan)6 have been approved for mCRPC. Each of these agents extends survival on average by several months but long-term remissions are rare. Strategies to reprogram the immune system to combat prostate cancer first gained traction with the clinical approval of the dendritic cell vaccine sipuleucel-T for asymptomatic mCRPC7. More recently, several types of immunotherapies including immune checkpoint inhibitors, a DNA cancer vaccine, antibody-drug conjugates (ADC), T cell engaging bispecific antibodies (T-BsAb), and chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have been under active clinical investigation8,9. CARs are synthetic receptors that leverage the potency, expansion, and memory of T cells and can be engineered against virtually any tumor-associated cell surface antigen. The adoptive transfer of CAR T cells has rapidly become an established treatment for hematologic malignancies with exceptional response rates leading to six clinical approvals in the last five years10. In contrast, CAR T cell therapies targeting solid tumors have lagged due to additional challenges related to the lack of bona fide tumor-specific antigens, inhospitable tumor microenvironments, and poor trafficking, persistence, and expansion of CAR T cells11. Despite the challenges observed in driving effective immune responses toward solid tumors, recent early-phase clinical trials investigating CAR T cell therapies targeting PSMA in mCRPC have reported safety and evidence of significant biochemical and radiographic responses12,13. These preliminary results serve to embolden efforts to develop and optimize new CAR T cell therapies for prostate cancer. While PSMA is the preeminent target for therapeutic and diagnostic development in prostate cancer, recent work indicates that PSMA expression may be quite heterogeneous in mCRPC14. Tumor antigen heterogeneity, especially in the context of single antigen-targeted CAR T cell therapies for solid tumors like prostate cancer, is an important barrier to therapeutic efficacy15. Thus, identifying cell surface antigens with broad and relatively homogeneous expression in prostate cancer is imperative. In addition, very few if any tumor-associated antigens demonstrate tumor-restricted expression—most also exhibit low-level expression in normal tissues that could represent liabilities for CAR T cell therapies due to on-target off-tumor toxicities which can lead to devastating consequences including death16. We previously performed integrated transcriptomic and cell surface proteomic profiling of human prostate adenocarcinoma cell lines and identified six transmembrane epithelial antigens of the prostate 1 (STEAP1) as one of the most highly enriched cell surface antigens17. STEAP1 was first described over two decades ago18 and was recognized as being highly expressed in prostate cancer. STEAP1 is strongly expressed in >80% mCRPC جس میں ہڈی یا لمف نوڈ کی شمولیت19، Ewing sarcoma20 کا 62%، اور کینسر کی متعدد دیگر اقسام21۔ STEAP1 کا تعلق Metallo reductases کے STEAP خاندان سے ہے جو دوسرے STEAP پروٹینز کے ساتھ ہوموٹرائمرز یا ہیٹروٹرائمرز بنا سکتے ہیں۔ STEAP1 کا کینسر کے خلیوں کے پھیلاؤ، حملے، اور اپکلا سے mesenchymal منتقلی – 26 کو فروغ دینے میں ایک فعال کردار ہے۔

cistanche tubulosa-antitumor کے فوائد

مزید برآں، STEAP1 نارمل ٹشو 27 میں محدود اظہار کا مظاہرہ کرتا ہے جو اسے کینسر کے علاج کے لیے ایک انتہائی مجبور ہدف بناتا ہے۔ STEAP1 کو نشانہ بنانے کے لیے متعدد امیونوتھراپیٹک ایجنٹس تیار کیے گئے ہیں لیکن کسی کو بھی طبی طور پر منظور نہیں کیا گیا ہے۔ ADC vandor tuzumab ved otin (DSTP3086S) ایک ہیومنائزڈ اینٹی STEAP1 IgG1 اینٹی باڈی پر مشتمل ہے جو monomethyl auristatin E سے منسلک ہے mCRPC میں ایک مرحلے I کے کلینیکل ٹرائل میں قابل قبول حفاظتی پروفائل پایا گیا تھا لیکن ٹیومر کے کچھ معروضی ردعمل دیکھے گئے۔ ایک T-BsAb جس میں دو اینٹی STEAP1 فریگمنٹ-اینٹیجن بائنڈنگ (Fab) ڈومینز، ایک اینٹی CD3 سنگل چین ویری ایبل فریگمنٹ (scFv) اور ایک فریگمنٹ کرسٹلائز ایبل (Fc) ڈومین کو شامل کیا گیا ہے جس میں AMG 509 نامی انفیکٹر فنکشن کی کمی ہے جس کا فی الحال جائزہ لیا جا رہا ہے۔ ایم سی آر پی سی 29 میں ایک مرحلے I کلینیکل ٹرائل (NCT04221542) میں۔ BC261 نامی غیر متناسب دوہری دوغلی T-BsAb کو بھی حال ہی میں پروسٹیٹ کینسر اور Ewing sarcoma30 کے متعدد preclinical ماڈلز میں طاقتور اینٹیٹیمر سرگرمی کا مظاہرہ کرنے کی اطلاع ملی ہے۔ اس کے علاوہ، STEAP1 پیپٹائڈ کے لیے مخصوص ایک ہیومن لیوکوائٹ اینٹیجن (HLA) کلاس I-محدود ٹی سیل ریسیپٹر (TCR) کو ٹرانسجینک T خلیوں کی اپنانے والی منتقلی کے بعد preclinical xenograft ماڈل میں مقامی اور metastatic Ewing sarcoma کی نمو کو روکتا دکھایا گیا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم PSMA تھیرانوسٹک کے موجودہ دور میں STEAP1 کو نشانہ بنانے کی افادیت کی تحقیقات کے لیے مہلک mCRPC میں STEAP1 اور PSMA کے رشتہ دار اظہار کا تقابلی تجزیہ کرتے ہیں۔ ہم اینٹیجن مخصوص ٹی سیل ایکٹیویشن اور ٹارگٹ سیل سائٹولیسس کے لیے دوسری نسل کی STEAP1 CARs کو انجینئر اور اسکرین کرتے ہیں تاکہ مزید خصوصیات کے لیے ایک اہم امیدوار حاصل کیا جا سکے۔ ہم STEAP1 CAR T خلیوں کی فنکشنل ایپیٹوپ کی خصوصیت کا تعین کرتے ہیں اور متعدد عطیہ دہندگان سے STEAP1 CAR T سیل پروڈکٹس کی توسیع اور امیونو فینوٹائپ کی پروفائل کرتے ہیں۔ اس کے بعد ہم پروسٹیٹ کینسر کے متعلقہ preclinical ماڈلز میں STEAP1 CAR T سیل تھراپی کی طاقت اور ابتدائی حفاظت کو قائم کرتے ہیں لیکن علاج کے خلاف مزاحمت کے طریقہ کار کے طور پر STEAP1 اینٹیجن اظہار کے بار بار ہونے والے نقصان کا مشاہدہ کرتے ہیں۔ اس مسئلے پر قابو پانے کے لیے، ہم CBD-IL-12 کی ہم آہنگ انتظامیہ کا جائزہ لیتے ہیں جو پروسٹیٹ کینسر کے مدافعتی ٹیومر مائیکرو ماحولیات کو دوبارہ تشکیل دیتا ہے اور اینٹی ٹیمر ردعمل کو وسیع کرنے کے لیے endogenous امیونٹی کو شامل کرتا ہے۔ اجتماعی طور پر، یہ مطالعات mCRPC والے مردوں کے لیے STEAP1 CAR T سیل تھراپی کے طبی ترجمہ کے لیے ایک مضبوط دلیل فراہم کرتے ہیں اور علاج کی مزاحمت کے ممکنہ میکانزم پر قابو پانے کے لیے حکمت عملیوں کی رہنمائی کرتے ہیں۔

cistanche tubulosa-antitumor کے فوائد

نتائج

STEAP1 کا وسیع پیمانے پر علاج-ریفریکٹری mCRPC ٹشوز میں اظہار کیا جاتا ہے۔

We first set out to determine the pattern and extent of STEAP1 expression relative to PSMA in advanced metastatic prostate cancer. We performed immunohistochemical (IHC) staining on a duplicate set of tissue microarrays consisting of 121 metastatic tumors (each with up to three cores represented) collected from 44 men with lethal mCRPC patients collected by rapid autopsy between the years 2010 and 2017 through the University of Washington Tumor Acquisition Necropsy Program32 (Fig. 1a). Plasma membrane staining for STEAP1 and PSMA in each tissue was scored by a research pathologist and semiquantitative H-scores were determined based on the staining intensity (Supple mentary Fig. 1a) multiplied by the percentage of cancer cells staining at each intensity (Supplementary Fig. 1b). By implementing a minimal staining threshold with an H-score cut-off of 30, we found that 87.7% of evaluable matched mCRPC tissues (100 of 114) demonstrated staining for STEAP1 compared to only 60.5% (69 of 114) for PSMA (Fig. 1b). In addition, 28.1% of mCRPC tissues (32 of 114) showed STEAP1 but not PSMA staining (Fig. 1b, c) whereas only 0.9% (one of 114) exhibited PSMA but not STEAP1 staining. Based on these results, we used a linear mixed statistical model to determine that the odds of non-zero (H-score >PSMA کے مقابلے STEAP1 کے لیے {{0}}) سٹیننگ 22-گنا (95% CI 6-173) زیادہ تھے اور H-اسکور کی مشکلات 3{{ سے زیادہ یا اس کے برابر تھیں۔ 27}} PSMA کے مقابلے STEAP1 کے لیے 84- گنا (95% CI 30-317) زیادہ ہیں۔ ہڈی میں اوسط STEAP1 H- اسکور (193؛ 95% CI 171 سے 215) لمف نوڈ میٹاسٹیسیس کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا (فرق −48؛ 95% CI −21 سے −76؛ p < 0.001) اور ویسرل میٹاسٹیسیس کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ (فرق −59؛ 95% CI −42 سے −77؛ p <0.001)۔ لمف نوڈ میٹاسٹیسیس میں اوسط STEAP1 H-score کے درمیان visceral metastases کے مقابلے میں کوئی خاص فرق نہیں تھا (فرق 11؛ 95% CI −16 سے 39؛ p=0.4) (ضمیمہ تصویر 1c)۔ ہم نے کور (تصویر 1d) کے اندر PSMA کے متفاوت اظہار کے ساتھ متعدد معاملات کا بھی مشاہدہ کیا جو mCRPC بایپسیز 14 میں انٹراٹومورل PSMA ہیٹروجنیٹی کی حالیہ رپورٹ سے مطابقت رکھتا ہے۔ 30 سے ​​زیادہ یا اس کے مساوی اوسط H-اسکور کی حد کا استعمال کرتے ہوئے مریض کی سطح کے تجزیے اور McNemar کے ٹیسٹ سے یہ بات سامنے آئی کہ قابل تشخیص مریضوں میں سے 95% (44 میں سے 42) میں STEAP1 اظہار کے ساتھ ٹیومر تھے جبکہ 68% (44 میں سے 30) PSMA کے لیے مثبت تھے۔ (ضمنی شکل 1d)۔ STEAP1 اور PSMA اظہار کے ساتھ منسلک انٹر-مریض اور انٹرا-مریض ہیٹروجنیٹی کے نمونوں کا مطالعہ کرنے کے لیے، ہم نے ہائپر جیومیٹرک، سمپسن، اور شینن تنوع کے اسکورز کا اندازہ کرنے کے لیے STEAP1 اور PSMA H-اسکورز کا استعمال کیا۔ ہم نے STEAP1 اظہار کے دو نمونوں کا مشاہدہ کیا (تصویر 1e) 68% (30/44) مریضوں کے ساتھ جو تمام میٹاسٹیٹک سائٹس (اعلی STEAP1) پر STEAP1 اظہار دکھاتے ہیں اور 32% (14/44) مریض STEAP1 اظہار کے ساتھ اور اس کے بغیر میٹاسٹیٹک سائٹس دکھاتے ہیں۔ (متضاد STEAP1)۔ کسی ایسے مریض کی نشاندہی نہیں کی گئی جس میں تمام میٹاسٹیٹک ٹشوز میں STEAP1 اظہار کی کمی تھی۔ اسی گروہ میں PSMA اظہار کے لیے اسی طرح کے تجزیے سے پتہ چلا کہ 45% (20/44) مریض اعلی PSMA اظہار کے ساتھ، 32% (14/44) متضاد PSMA اظہار کے ساتھ، اور 23% (10/44) بغیر PSMA اظہار کے۔ AR کا استعمال کرتے ہوئے mCRPC ٹشوز کی مالیکیولر ذیلی درجہ بندی کی بنیاد پر اور IHC کے ذریعے تشخیص کردہ نیورواینڈوکرائن مارکر Synaptophysin (SYP) اظہار کی بنیاد پر، زیادہ یا متضاد STEAP1 اور PSMA اظہار والے زیادہ تر مریضوں کو AR-مثبت پروسٹیٹ کینسر (AR+/SYP- یا AR+/SYP) تھا جبکہ PSMA اظہار کے بغیر AR-null پروسٹیٹ کینسر تھا (AR-/SYP+ یا AR-/SYP-)۔ ہم نے STEAP1 اور AR (p <0.001) کے اظہار کے درمیان ایک مثبت ارتباط کی نشاندہی کی جس میں ایک فٹڈ لکیری مخلوط ماڈل کے ساتھ بے ترتیب اثر کے ساتھ ٹشو مائیکرو رے (ضمنی شکل 2a، b) پر پیش کیا جاتا ہے جس کی توقع کی جاتی تھی کہ STEAP1 ایک اینڈروجن ہے۔ ریگولیٹڈ جین 33,34۔ اس کے برعکس، STEAP1 اور SYP (ضمنی شکل 2c) کے اظہار کے درمیان منفی رجحان کو سراہا گیا۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ، PSMA35 کی طرح، STEAP1 اظہار پروسٹیٹ کینسر کے نیوروینڈوکرائن ٹرانسفرنٹی کے ساتھ کھو سکتا ہے۔

Fig. 1 | Comparative analysis of STEAP1 and PSMA in lethal, metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). a Characteristics of the mCRPC tissues represented on University of Washington Tissue Acquisition Necropsy Tissue Microarray 92 (UW TAN TMA92). b Contingency table showing the frequency of mCRPC tissues with STEAP1 or PSMA IHC staining above or below an H-score threshold of 30. Micrographs of select mCRPC tissues after STEAP1 and PSMA IHC staining to highlight the (c) absence of PSMA but the presence of STEAP1 expression and (d) intratumoral heterogeneity of PSMA expression but not STEAP1. Scale bars = 50 µm. For panels (c, d) n = 332 mCRPC cores were immunostained for STEAP1 and PSMA. e Dot and box plot showing the distribution of STEAP1 (top) and PSMA (bottom) H-scores in 44 patients from the UW TAN TMA92 cohort. Each dot represents a tumor specimen/core (n = 319 cores for PSMA and 333 cores for STEAP1) and the color indicates the molecular subtype: AR+/SYP+ (red), AR+/SYP− (green), AR−/SYP+ (yellow) and AR−/SYP− (purple). Gray rectangles show interquartile ranges spanning the 25th to the 75th percentiles of PSMA H-scores from each patient. Bar plots (on the right) summarize the frequencies of patients classified based on STEAP1 and PSMA expression as no expression (all cores with H-score ≤30, light grey), heterogeneous expression (at least one core with H-score ≤30 and H-score >30, mid grey) and high expression (all cores with H-scores >30، گہرا خاکستری)۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

ڈیولایک طاقتور، اینٹیجن مخصوص STEAP1 CAR کا اختیار

آخری مرحلے کے mCRPC میں STEAP1 کے وسیع اظہار اور کینسر کے بڑھنے 27,36,37 میں اس کے رپورٹ کردہ فعال کردار کو دیکھتے ہوئے، ہم نے اگلا ایک lentiviral STEAP1-مخصوص دوسری نسل کی CAR بنانا شروع کیا۔ ہم نے pCCL-c-MNDU3-X lentiviral backbone38 کا استعمال کیا جو بڑے پیمانے پر hematopoietic اسٹیم سیل جین تھراپی39 کے لیے استعمال کیا گیا ہے اور اندرونی MNDU3 پروموٹر کے ذریعے چلائے جانے والے T خلیوں میں CAR اظہار کو اس سے زیادہ دکھایا گیا ہے ای ایف ایس پروموٹر 40۔ ایک 4-1ٹی سیل میموری کی تشکیل اور طویل استقامت کے ساتھ اس کی وابستگی کی وجہ سے BB کاسٹیمولیٹری ڈومین پسند کیا گیا تھا41 اور ایک CD28 ٹرانس میبرن ڈومین متعارف کرایا گیا تھا کیونکہ یہ دوسری نسل کے لئے اینٹیجن کی حد کو کم کرتا ہوا دکھایا گیا ہے 4-1BB کار ٹی سیل ایکٹیویشن42۔ ہم نے Vandor tuzumab vedotin سے اخذ کردہ مکمل طور پر ہیومنائزڈ scFv کو شامل کیا، ایک ADC STEAP1 کو نشانہ بناتا ہے جس کی نشوونما پہلے مرحلے کے کلینیکل ٹرائل کے بعد بند کر دی گئی تھی۔ یہ scFv murine monoclonal antibody (mAb 120.545) کا ایک انسانی شکل ہے جو اصل میں Agensys, Inc. نے تیار کیا ہے جو سیل پر مبنی بائنڈنگ اسیس43 میں 1 nM وابستگی کو ظاہر کرتا ہے۔ ممکنہ طور پر CAR سرگرمی کو ٹیون کرنے کے لیے، ہم نے تین مختلف قبضے/اسپیسر کی لمبائی کو نافذ کیا جس میں مختصر (IgG4 قبضہ)، درمیانہ (IgG4 قبضہ-CH3)، اور طویل (IgG4 قبضہ-CH2- CH3) شامل ہیں۔ لمبے اسپیسر کو CH2 ڈومین میں پہلے بیان کردہ 4/2- NQ mutations44 کے ساتھ Fc-gamma ریسیپٹر بائنڈنگ اور ایکٹیویشن سے متاثرہ سیل کی موت کو روکنے کے لیے انجنیئر کیا گیا تھا جو طویل اسپیسر CAR T خلیات کی مدافعتی چوہوں میں منتقلی کے ساتھ ہوتا ہے۔ تینوں امیدواروں کی CARs کو lentiviral vector (تصویر 2a) میں کلون کیا گیا تھا جو ٹرانکیٹڈ ایپیڈرمل گروتھ فیکٹر ریسیپٹر (EGFRt) کو بطور ٹرانسڈکشن مارکر بھی ظاہر کرتا ہے۔ Lentiviruses پیدا کیے گئے تھے اور انسانی CD4 اور CD8 T خلیوں کو منتقل کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے جو انسانی عطیہ دہندہ کے پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) سے جمع کیے گئے تھے۔ توسیع شدہ CD4 اور CD8 CAR T خلیات کو امیونو فینوٹائپ کیا گیا تھا (ضمنی شکل 3a) اور ان کی فعال سرگرمیوں کا جائزہ لینے کے لیے عام CD4/CD8 تناسب کے ساتھ ایک متعین مرکب کے سیل پروڈکٹس میں دوبارہ تشکیل دیا گیا تھا۔ ایسوجینک انداز میں STEAP1 اظہار کو کنٹرول کرنے کے لیے، ہم نے 22Rv1 انسانی پروسٹیٹ کینسر سیل لائن پر توجہ مرکوز کی جو مقامی STEAP1 اظہار کو ظاہر کرتی ہے اور CRISPR/Cas9 جینوم ایڈیٹنگ کے ذریعے STEAP1 ناک آؤٹ (ko) کا مظاہرہ کیا۔ اس کے بعد ہم نے 22Rv1 STEAP1 ko سے STEAP1 کا اظہار کرنے والے لینٹیو وائرس (تصویر 2b) کے ساتھ نقل و حمل کے ذریعے ایک STEAP1 ریسکیو لائن بنائی۔ اس کے بعد ان لائنوں کو ٹی سیل ایکٹیویشن کے اشارے کے طور پر انٹرفیرون-گاما (IFN-) کی ریلیز کے ریڈ آؤٹ کے ساتھ کو کلچر اسسیس میں تین مختصر، درمیانے اور طویل اسپیسر STEAP1 CAR T سیلز کو اسکرین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ صرف طویل اسپیسر STEAP1 CAR T خلیات (اس کے بعد STEAP1-BBζ CAR T خلیات کہلاتے ہیں) نے IFN- ریلیز کے متوقع اینٹیجن مخصوص پیٹرن کو ظاہر کیا، جبکہ مختصر اور درمیانے اسپیسر STEAP1 CAR T خلیات نے ایسا نہیں کیا (تصویر 2c ، ضمنی شکل 3b، c)۔ مزید، STEAP1-BBζ CAR T خلیات نے 22Rv1 خلیات کی خوراک پر منحصر سائٹولیسس کو غیر منتقل شدہ T خلیات (تصویر 2d) کے مقابلے دکھایا اور 22Rv1 STEAP1 ko خلیات (تصویر 2e) کی نسبتاً بچت کا مظاہرہ کیا۔ اسی طرح کے مطالعے پھر DU145 انسانی پروسٹیٹ کینسر سیل لائن میں کیے گئے جس میں مقامی STEAP1 اظہار کی کمی ہے لیکن اسے lentiviral transduction (ضمنی شکل 4a) کے ذریعے STEAP1 (DU145 STEAP1) کو ظاہر کرنے کے لیے انجنیئر کیا گیا تھا۔ اس ترتیب میں، STEAP1-BBζ CAR T سیل ایکٹیویشن صرف DU145 STEAP1 سیلز کے ساتھ شریک ثقافتوں میں دیکھا گیا نہ کہ والدین کے DU145 سیلز (ضمیمہ تصویر 4b)۔ سائٹولائٹک سرگرمی کو صرف STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے ساتھ سراہا گیا نہ کہ DU145 STEAP1 خلیات (ضمیمہ تصویر 4c) کے ساتھ شریک ثقافتوں میں غیر منتقلی T سیلز کے ساتھ۔ ہم نے بعد میں انسانی پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں کے ایک بڑے پینل کا تجزیہ کیا تاکہ امیونو بلوٹ تجزیہ کے ذریعہ ان کے مقامی STEAP1 اظہار کو نمایاں کیا جاسکے۔ معلوم اے آر ایکسپریشن/سرگرمی کے ساتھ سیل لائنز (LNCaP، 22Rv1، VCaP، اور LNCaP95) نے STEAP1 ایکسپریشن کی مختلف سطحیں دکھائیں جبکہ AR-null سیل لائنز (PC3، DU145، MSKCC EF1، اور NCI-H660) اظہار کے لیے ظاہر نہیں ہوئیں۔ STEAP1 کی قابل شناخت سطح (تصویر 2f)۔ ہم نے ان لائنوں کے ساتھ STEAP1-BBζ CAR T کی مشترکہ ثقافتوں کو انجام دینے کے لیے آگے بڑھا تاکہ IFN- ریلیز (تصویر 2 جی) کی بنیاد پر ان کے اینٹیجن مخصوص ایکٹیویشن کو مزید درست کیا جا سکے۔ تاہم، ہم نے ایک متضاد دریافت کا مشاہدہ کیا کہ PC3 لائن، جس میں کوئی واضح STEAP1 پروٹین ایکسپریشن (تصویر 2f) نہیں دکھایا گیا، STEAP1-BBζ CAR T خلیات کی کافی ایکٹیویشن کی حوصلہ افزائی کی۔ پیشگی ادب نے تجویز کیا کہ STEAP1 کا اظہار PC3 سیل لائن میں نچلی سطح پر ہوتا ہے۔ درحقیقت، طویل عرصے تک امیونو بلوٹ کی نمائش نے ایک بینڈ کا انکشاف کیا جو STEAP1 (تصویر 2h) کے بہت کم اظہار کی موجودگی کا مشورہ دیتا ہے۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا STEAP1-BBζ CAR T سیل ایکٹیویشن PC3 سیلز میں اس معمولی STEAP1 اظہار کی وجہ سے تھا، ہم نے تین PC3 STEAP1 کو سب لائنز (تصویر 2h) تیار کیں اور دوبارہ STEAP{133} کے ساتھ مشترکہ ثقافتیں انجام دیں۔ BBζ CAR T خلیات۔ PC3 لائن میں STEAP1 ko نے STEAP1-BBζ CAR T سیل ایکٹیویشن (تصویر 2i) کو منسوخ کر دیا، جس کی مزید وضاحت کی گئی اور STEAP کی حساسیت کا ثبوت فراہم کیا گیا1-BBζ CAR T سیل کو کم اینٹیجن کثافت کے حالات.

ماؤس Steap1 اور انسانی STEAP1B کے ساتھ STEAP1-BBζ CAR کی کراس ری ایکٹیویٹی کا فقدان

cistanche سپلیمنٹ کے فوائد - قوت مدافعت میں اضافہ

vandor tuzumab vedotin کی انسان دشمن خصوصیت سے ہم آہنگ، STEAP1-BBζ CAR T خلیات نے ماؤس Steap1 کے ساتھ کراس ری ایکٹیویٹی کا مظاہرہ نہیں کیا (ضمنی شکل 4a, d, e)۔ تاہم، ہم نے اسے انفرادی طور پر تین انسانی STEAP1 ایکسٹرا سیلولر ڈومینز (ECDs) کو ماؤس Steap1 (ضمنی شکل 4f) پر دوبارہ تشکیل دینے کے لیے استعمال کیا تاکہ اس بات کا تعین کیا جا سکے کہ STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے ذریعے Epitope کی شناخت کے لیے کون سے ECDs اہم ہیں۔ شریک ثقافت کے تجربات STEAP1-BBζ CAR T سیلز اور DU145 سیلز کے ساتھ کیے گئے تھے جو ماؤس Steap1 کو ظاہر کرنے کے لیے بنائے گئے تھے تاکہ ماؤس ECDs کی انفرادی تبدیلی انسانی ECDs کے ساتھ کی جا سکے۔ ہم نے پایا کہ انسانی STEAP1 ECD2 لیکن ECD1 یا ECD3 نہیں STEAP1-BBζ CAR T سیل ایکٹیویشن (ضمنی شکل 4g) سے وابستہ تھا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ انسانی STEAP1 اور ماؤس Steap1 ECD2 نے 93.9% (31/33 امینو ایسڈز) ہومولوجی (ضمنی شکل 4h) کا مظاہرہ کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ انسانی STEAP1 کا Q198 اور/یا I209 STEBBζ{30}کی طرف سے نتیجہ خیز شناخت کے لیے اہم ہیں۔ CAR T خلیات۔ Q198 کو 120.545 کے Fab کے ساتھ تعامل کے ہاٹ اسپاٹ کے حصے کے طور پر دکھایا گیا ہے جو کرائیوجینک الیکٹران مائیکرو سکروپی22 کے ذریعے حل کیے گئے حالیہ ڈھانچے پر مبنی ہے۔ پروٹین کے انسانی STEAP خاندان میں سے، STEAP1B STEAP145 کی سب سے بڑی ہم آہنگی رکھتا ہے۔ تین STEAP1B ٹرانسکرپٹس کی نشاندہی کی گئی ہے، جن میں سے سبھی انسانی STEAP1 ECD2 (ضمنی شکل 5a) کے امینو ایسڈ کی ترتیب کے مکمل تحفظ کو ظاہر کرتے ہیں۔ متفقہ جھلی ٹوپولوجی پیشن گوئی الگورتھم TOPCONS46 نے ECD2 ڈومین کی ترتیب کو تین STEAP1B پروٹین آئسفارمز (ضمنی شکل 5b) میں ایکسٹرا سیلولر ہونے کے طور پر پیش گوئی کی ہے حالانکہ STEAP1B کے لیے کم قابل اعتماد اسکور کے ساتھ hSTEAP1 کے مقابلے میں پہلے سے پانچ ماڈلز کے درمیان کنسنسی ماڈل کی کمی کی وجہ سے۔ (OCTOPUS, Philius, PolyPhobius, SCAMPI, اور SPOCTOPUS) TOPCONS کے ذریعہ استعمال کیا جاتا ہے (ضمنی شکل 5c)۔ سلیکو میں ایک اور پوشیدہ مارکوف ماڈل پر مبنی ٹوپولوجی پیشن گوئی ٹول TMHMM47 کا استعمال کرتے ہوئے پیشگی تجزیہ نے یہ بھی تجویز کیا تھا کہ یہ ترتیب STEAP1B پروٹین آئسوفارمز 1 اور 245 میں ایکسٹرا سیلولر کے بجائے انٹرا سیلولر ہو سکتی ہے۔ یہ پیشن گوئیاں. عملی طور پر اس بات کا جائزہ لینے کے لیے کہ آیا STEAP1- BBζ CAR T خلیات بھی STEAP1B کے خلاف رد عمل کا مظاہرہ کر سکتے ہیں، ہم نے DU145 لائنوں کا استعمال کرتے ہوئے مشترکہ ثقافتیں انجام دی ہیں جو STEAP1B کے تین آئسفارمز میں سے ہر ایک کو ظاہر کرنے کے لیے بنائی گئی ہیں۔ ہم نے STEAP1-BBζ CAR T سیل ایکٹیویشن (ضمنی شکل 5d) کے ثبوت کی شناخت نہیں کی، یہ تجویز کرتا ہے کہ STEAP1-BBζ CAR T سیلز کو ایکٹوڈومین کے حصے کے طور پر پیش نہیں کیا جا سکتا بظاہر ترتیب ہومولوجی کے باوجود STEAP1B کے ذریعے۔

تصویر 2|STEAP1 CAR T سیل تھراپی کے لیے لیڈ کی شناخت کے لیے دوسری نسل کے 4-1BB chimeric antigen receptors (CARs) کی اسکریننگ۔ لینٹی وائرل STEAP1 CAR کی ایک اسکیمیٹک اور مختصر، درمیانے اور طویل اسپیسرز پر مبنی تبدیلی۔ LTR لانگ ٹرمینل ریپیٹ، MNDU3 مولونی مورین لیوکیمیا وائرس U3 ریجن، scFv سنگل چین متغیر فریگمنٹ، VL متغیر لائٹ چین، VH متغیر ہیوی چین، tm transmembrane، EGFRt کٹا ہوا ایپیڈرمل گروتھ فیکٹر ریسیپٹر، 4/2 NQ {{1{28} }}}} Fc-gamma ریسیپٹرز کے پابند ہونے سے روکنے کے لیے CH2 ڈومین کی تبدیلیاں۔ b 22Rv1 پیرنٹل سیلز میں STEAP1 کے امیونو بلوٹس، STEAP1 ناک آؤٹ (ko) سیلز، اور STEAP1 کو ریسکیو کے ساتھ STEAP1 ko سیل۔ c IFN- انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) کا نتیجہ 24 گھنٹے (p < 0۔{62}}01)۔ (بائیں) STEAP1-BBζ CAR T خلیات (p < 0.001) یا (d) 22Rv1 اور (e) 22Rv1 STEAP1 ko ٹارگٹ سیلز کی متعلقہ سیل کی عملداری وقت کے ساتھ ساتھ فلوروسینس لائیو سیل امیجنگ سے دائیں) متغیر انفیکٹر ٹو ٹارگٹ (E: T) سیل کے تناسب پر غیر منتقلی T خلیات۔ f امیونو بلوٹس اینڈروجن ریسیپٹر (AR) میں STEAP1 کے اظہار کا مظاہرہ کرتے ہیں - مثبت انسانی پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں لیکن AR-منفی پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں میں نہیں۔ g IFN- ELISA کی طرف سے یا تو غیر منتقل شدہ T خلیات یا STEAP1- BBζ CAR T خلیات سے ہر ایک انسانی پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں کے ساتھ (f) میں 1:1 کے تناسب سے 24 گھنٹے پر۔ h 22Rv1، PC3، اور PC3 STEAP1 کو سب لائنز میں STEAP1 کے لیے امیونو بلاٹس۔ I IFN- ELISA کے ذریعہ یا تو غیر منتقل شدہ T خلیات یا STEAP1- BBζ CAR T خلیات کے شریک کلچر سے (h) میں ہر سیل لائن کے ساتھ 24 h (p <0.001) پر 1:1 کے تناسب سے۔ پینلز کے لیے (c–e، g، اور i) n=4 فی شرط حیاتیاتی نقلیں استعمال کی گئیں اور ایرر بارز SEM کے ساتھ اوسط کی نمائندگی کرتے ہیں۔ پینل (b, f, h) n=3 حیاتیاتی نقلوں کے نمائندہ نتائج دکھاتا ہے۔ GAPDH کو پروٹین لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ پینلز (c) اور (i) کے لیے، Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ ANOVA استعمال کیا گیا تھا۔ پینلز (d) اور (e) کے لیے، ٹوکی کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ انووا استعمال کیا گیا تھا۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

STEAP1-BBζ CAR T سیل پروڈکٹس کی خصوصیت عطیہ دہندگان کی ایک سیریز میں

اس کے بعد ہم نے صحت مند عطیہ دہندگان سے جمع کردہ پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) کے تین آزاد سیٹوں کا استعمال کرتے ہوئے STEAP1-BBζ CAR T سیل پروڈکٹس کی توسیع، نقل و حمل کی کارکردگی، اور امیونو فینوٹائپ کی پروفائل کی۔ ہم نے عام طور پر ثقافت کے 11 دنوں کے اندر 20- سے 40-STEAP کی توسیع1- BBζ CAR T خلیات کا مشاہدہ کیا (ضمنی شکل 6a)۔ EGFRt+ CD8 T سیلز کا فیصد 24.3 سے 54.2% تک تھا جبکہ EGFRt+ CD4 T سیلز کا فیصد زیادہ تھا اور ہمارے STEAP1-BBζ CAR T سیل پروڈکٹس میں 60.1 سے 74.9% تک تھا (ضمیمہ تصویر 6b)۔ ہم نے غیر منتقلی اور STEAP1- BBζ CAR T سیل کے ذیلی سیٹوں میں T سیل کے اخراج کے نشانات PD-1 اور LAG-3 کے اظہار کی جانچ کی اور اظہار میں کوئی خاص اضافہ نہیں دیکھا (ضمنی شکل 6c )۔ اس تلاش نے STEAP1-BBζ CAR کی طرف سے کم یا غیر حاضر ٹانک سگنلنگ کی تجویز دی جو کہ CAR سگنلنگ کے طور پر حوصلہ افزا تھی CAR T سیل انفیکٹر فنکشن48 کو منفی طور پر متاثر کر سکتی ہے۔ دونوں سٹیم سیل میموری ٹی سیل (Tscm) اور سنٹرل میموری T سیل (TCM) فینوٹائپس CAR T سیل تھراپی کی علاج کی افادیت سے وابستہ ہیں کیونکہ وہ vivo49–51 میں مسلسل پھیلاؤ اور استقامت کو فروغ دیتے ہیں۔ غیر منتقلی اور STEAP1-BBζ CAR T سیل ذیلی سیٹوں کی امیونو فینوٹائپنگ نے عطیہ دہندہ PBMCs میں T سیل ذیلی سیٹوں کے مقابلے Tscm خلیوں کی اعلی تعدد کا مظاہرہ کیا جس سے سیل کی مصنوعات اخذ کی گئی تھیں (ضمیمہ تصویر 6d)۔ یہ اثر ممکنہ طور پر T سیل توسیعی میڈیا میں IL-7 اور/یا IL-15 کے اضافے کی وجہ سے ہے کیونکہ یہ سائٹوکائنز Tscm تفریق51,52 کو محفوظ اور بڑھانے کے لیے دکھائی گئی ہیں۔ ہمارے تجزیے سے Tcm آبادیوں میں خاص طور پر CD8 STEAP1-BBζ CAR T خلیات (ضمنی شکل 6e) میں افزودگی کا بھی انکشاف ہوا ہے۔

STEAP1-BBζ CAR T خلیات پھیلے ہوئے پروسٹیٹ کینسر کے ماڈلز میں کافی اینٹیٹیمر اثرات کا مظاہرہ کرتے ہیں جس میں مقامی STEAP1 اظہار مدافعتی چوہوں میں قائم ہوتا ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

ویوو اینٹی ٹیومر سرگرمی کی ابتدائی اسکرین کے طور پر، ہم نے مرد NOD سکڈ گاما (NSG) چوہوں میں 22Rv1 subcutaneous xenograft ٹیومر قائم کیے ہیں۔ جب ٹیومر تقریباً 100 mm3 تک بڑھ گئے، تو چوہوں کا علاج 5 × 106 غیر منتقلی T خلیات یا STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے واحد انٹراٹومورل انجیکشن سے کیا گیا۔ STEAP1- BBζ CAR T خلیات کے ساتھ انٹراٹومورل ٹریٹمنٹ اہم ٹیومر کی نشوونما کی روک تھام سے وابستہ تھا جو کہ علاج کے 18 ویں دن تک شماریاتی طور پر اہم تھا (تصویر 3a)۔ چوہوں کی قربانی 25 ویں دن کی گئی تھی اور چوہوں کے بقایا ٹیومر STEAP کے ساتھ علاج کیے گئے تھے CAR T خلیات (ضمنی شکل 7a)۔ STEAP1 اظہار علاج کے گروپوں میں ٹیومر میں محفوظ کیا گیا تھا (ضمیمہ تصویر 7b)۔ ہم نے فائر فلائی لوسیفریز (Luc) اظہار کو نافذ کرنے کے لیے lentivirus کے ساتھ 22Rv1 خلیات کو منتقل کیا اور 106 22Rv1-fLuc خلیات کو NSG چوہوں کی دم کی رگوں میں انجکشن لگایا گیا۔ میٹاسٹیٹک کالونائزیشن کو دو ہفتوں کے بعد لائیو بایولومینیسینس امیجنگ (BLI) کے ذریعے تصور کیا گیا، اس مقام پر چوہوں کا علاج 5 × 106 غیر منتقل شدہ T خلیات یا STEAP1-BBζ CAR T خلیات (تصویر 3b) کے واحد انٹراوینس انجیکشن سے کیا گیا۔ . سیریل BLI نے چوہوں میں تیزی سے بیماری کے بڑھنے کا انکشاف کیا جس کا علاج غیر منتقلی T خلیوں سے کیا گیا جبکہ STEAP1-BBζ CAR T خلیات حاصل کرنے والوں نے ٹیومر کے بڑھنے میں نمایاں تاخیر کا مظاہرہ کیا (تصویر 3c, d) اور بقا کی توسیع (97 دن بمقابلہ 31 دن۔ , p=0.0018 بذریعہ لاگ رینک ٹیسٹ، تصویر 3e)۔ علاج کے ہتھیاروں کے درمیان ماؤس کے وزن میں کوئی خاص فرق نہیں تھا (ضمنی شکل 7c)۔ مطالعہ کے اختتام پر ٹیومر کے IHC کے داغ پڑنے سے STEAP1 اظہار (ضمنی شکل 7d) میں نمایاں کمی واقع ہوئی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ اینٹیجن فرار مزاحمت کا ایک طریقہ کار تھا۔ تاہم، یہ پروسٹیٹ کینسر کی مختلف حالتوں میں تبدیلی کا نتیجہ نہیں تھا کیونکہ ہم نے مورفولوجک تبدیلیوں، AR اور PSMA اظہار53 کے نقصان، یا SYP اظہار (ضمیمہ تصویر 7d) کے حصول کی تعریف نہیں کی۔ پروسٹیٹ کینسر میں STEAP1 کے نقصان کے عالمی اثرات کی تحقیقات کے لیے، ہم نے isogenic 22Rv1 wildtype (wt)، 22Rv1 STEAP1 ko، اور 22Rv1 STEAP1 ko + ریسکیو سیل لائنوں کی ٹرانسکرپٹوم پروفائلنگ کی جو ہم نے پہلے تیار کی تھیں (تصویر 2b)۔ 22Rv1 STEAP1 ko خلیات کا 22Rv1 wt خلیات کے ساتھ موازنہ کرنے والے جین ایکسپریشن کے تجزیے میں ~ 1700 جین نمایاں طور پر کم ہوئے (FDR 0.05 سے کم یا اس کے برابر، فولڈ چینج<2) with STEAP1 knockout. Rescue of STEAP1 expression in the 22Rv1 STEAP1 ko cells revealed that ~600 genes were significantly upregulated (FDR ≤ 0.05, fold-change>2) بذریعہ STEAP1 ایڈ بیک (ضمیمہ تصویر 8a)۔ جین سیٹ افزودگی تجزیہ (GSEA) نے کئی حیاتیاتی راستے نامزد کیے ہیں جو STEAP1 اظہار کی ماڈیولیشن کے ذریعہ غیر منظم ہوسکتے ہیں۔ ان میں نمایاں سیل سائیکل پروگریشن اور متعدد میٹابولک عمل تھے جن میں کریب سائیکل اور گلائکولائسز شامل تھے جنہیں STEAP1 ناک آؤٹ کے ذریعے منفی طور پر افزودہ کیا گیا تھا اور STEAP1 (ضمیمہ تصویر 8b) کے اضافے پر بچایا گیا تھا۔ ہم نے توثیق شدہ 31-جین سیل سائیکل پروگریشن (سی سی پی) دستخط 54 کو اپنے ڈیٹا پر لاگو کیا جس نے −0.8 کے اسکور کے ساتھ STEAP1 ناک آؤٹ سے وابستہ CCP دستخط کی نمایاں کمی کو ظاہر کیا جو کافی حد تک بڑھ کر {{ تک پہنچ گیا۔ 14}}.5 STEAP1 اظہار کے بچاؤ کے ساتھ (ضمیمہ تصویر 8c)۔ یہ اعداد و شمار پیشگی اشاعت کے ساتھ مطابقت رکھتے ہیں جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ LNCaP پروسٹیٹ کینسر سیل لائن میں STEAP1 کا دستک ڈاؤن اپوپٹوسس 37 کو دلانے کے دوران سیل کی عملداری اور پھیلاؤ کو متاثر کرتا ہے۔ ہم نے یہ بھی نوٹ کیا کہ اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن STEAP1 ناک آؤٹ (ضمنی شکل 8b) کے ساتھ سب سے نمایاں طور پر غیر افزودہ KEGG راستوں میں سے ایک تھا۔ ہم نے PSME1 (پروٹیزوم ایکٹیویٹر سبونائٹ 1) سمیت جینوں کی نمایاں کمی کا مشاہدہ کیا جو امیونو پروٹیزوم کمپلیکس کا رکن ہے، TAP1 (ٹرانسپورٹر 1، ATP بائنڈنگ کیسٹ سب فیملی ممبر) جو کہ بڑے ہسٹو کمپیٹیبلٹی کمپلیکس (MHC) کلاس I پیپٹائڈ کے لیے اہم ہے۔ لوڈنگ کمپلیکس، اور کئی MHC کلاس I اور II کے جین جیسے MR1 (میجر ہسٹو کمپیٹیبلٹی کمپلیکس، کلاس I سے متعلق)، HLA-DQ-B1، اور HLA-DQB2 (ضمنی شکل 8d)۔ ہم نے STEAP1- BBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ علاج کیے گئے 22Rv1 پھیلائے گئے ماڈلز سے جمع کردہ ٹیومر کی مزید تفتیش کی جس نے ٹرانسکرپٹوم تجزیہ کے ذریعہ اینٹیجن کے نقصان (تصویر 3c، ضمنی شکل 7d) کو ظاہر کیا۔ جین کے مختلف اظہار کے تجزیے اور اس کے نتیجے میں GSEA نے STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں سے 22Rv1 میٹاسٹیٹک ٹیومر کا موازنہ کیا جو کہ غیر منتقلی T خلیوں کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے، MHC میں شامل راستوں کی منفی افزودگی ظاہر کرتا ہے۔ ضمنی تصویر 9a، b)۔ ہم نے خاص طور پر MHC کلاس I اور II کے جینوں کے اظہار کا بھی جائزہ لیا اور STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی (ضمیمہ تصویر 9c) کے ساتھ علاج کیے جانے والے 22Rv1 ٹیومر میں ان کی نمایاں کمی کو دیکھا۔ یہ نتیجہ ان ٹیومر میں IHC کے ذریعہ HLA-A, B, C کے داغ میں نمایاں کمی کے ذریعہ مزید ثابت ہوا (ضمیمہ تصویر 9d)۔ ان اعداد و شمار کا ممکنہ اثر یہ ہے کہ STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ علاج اور اس کے نتیجے میں پروسٹیٹ کینسر میں STEAP1 ٹیومر اینٹیجن اظہار کے نقصان کے نتیجے میں خراب اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن کے ذریعے مزید امیونو تھراپی مزاحمت پیدا ہو سکتی ہے۔ ہم نے نر NSG چوہوں کو C4-2B-fLuc سیل کے ساتھ ٹیل ویین انجیکشن کے ذریعے ٹیکہ لگایا۔ C4-2B LNCaP55 کی ایک کاسٹریشن مزاحم ذیلی لائن ہے جس میں پروسٹیٹ کینسر کے ساتھ ترقی کی رفتار زیادہ ہے۔ انجیکشن کے چار ہفتے بعد، BLI کے ذریعے میٹاسٹیٹک کالونائزیشن کی تصدیق ہوئی، اور چوہوں کا علاج 5 × 106 غیر منتقلی T خلیات یا STEAP1-BBζ CAR T خلیات (تصویر 3b) کے ایک ہی نس کے ذریعے کیا گیا۔ سیریل BLI نے ان تمام چوہوں میں مکمل ردعمل ظاہر کیا جنہوں نے علاج کے پانچ ہفتوں کے اندر STEAP1-BBζ CAR T خلیات حاصل کیے (تصویر 3f، g)۔ ہم نے غیر منتقلی ٹی سیل ٹریٹمنٹ گروپ (ضمنی شکل 10a) میں وزن میں کمی کے رجحان کی نشاندہی کی لیکن یہ اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھا۔ STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں کی Necropsy نے کوئی میکروسکوپک بیماری نہیں دکھائی اور اعضاء کے سابق Vivo BLI نے کوئی سگنل ظاہر نہیں کیا (ضمنی شکل 10b)، یہ تجویز کرتا ہے کہ ان چوہوں کے علاج کا امکان ہے۔ ہم نے تجربہ کے اختتام پر STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے پردیی استقامت کی شناخت کی CD3+ EGFRt+ splenocytes (تصویر 3h) کی موجودگی کی بنیاد پر۔

تصویر 3|مقامی STEAP1 اظہار کے ساتھ پروسٹیٹ کینسر کے ماڈلز میں STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کی Vivo antitumor سرگرمی۔ NSG چوہوں میں 22Rv1 subcutaneous ٹیومر کی ایک مقدار (n=4 untransduced T خلیات گروپ کے لئے اور n=5 STEAP1-BBζ CAR T خلیات گروپ کے لئے) وقت کے ساتھ ساتھ 5 کے ایک انٹراٹومورل انجیکشن کے بعد × 106 untransduced T خلیات یا STEAP{{10}BBζ CAR T خلیات عام CD4/CD8 تناسب پر۔ p < 0.0001 دنوں 20 اور 25 کو۔ بارز SEM کے ساتھ اوسط کی نمائندگی کرتے ہیں۔ b 22Rv1 (اوپر) اور C4-2B (نیچے) پھیلائے گئے ماڈلز کے لیے ٹیومر چیلنج تجربات کی منصوبہ بندی۔ Luc firefly luciferase، BLI بائولومینیسینس امیجنگ۔ c NSG چوہوں کی سیریل لائیو بایولومینیسینس امیجنگ (BLI) جس کو 22Rv1-fLuc میٹاسٹیسیس کے ساتھ کندہ کیا گیا ہے اور 5 × 106 غیر منتقلی ٹی سیلز یا STEAP1-BBζ CAR T سیلز کے ایک ہی انٹراوینس انجیکشن کے ساتھ عام CD4/ پر علاج کیا گیا ہے۔ دن 0 پر CD8 کا تناسب۔ Red X مردہ چوہوں کو ظاہر کرتا ہے۔ تابکاری کا پیمانہ دکھایا گیا ہے۔ d پلاٹ (c) میں ہر ماؤس کے براہ راست BLI سے وقت کے ساتھ کل بہاؤ کی مقدار کو ظاہر کرتا ہے۔ e Kaplan-Meier میں چوہوں کے بقا کے منحنی خطوط (c) کے ساتھ شماریاتی اہمیت کے ساتھ لاگ-رینک (Mantel-Cox) ٹیسٹ کے ذریعے متعین کیا جاتا ہے۔ پینلز کے لیے (c–e) n=5 چوہے فی شرط استعمال کیے گئے تھے۔ f NSG چوہوں کا سیریل لائیو BLI C4-2B میٹاسٹیسیس کے ساتھ کندہ کیا گیا اور 5 × 106 untransduced T خلیات یا STEAP1-BBζ CAR T خلیات کے ایک واحد انٹراوینس انجیکشن کے ساتھ دن میں عام CD4/CD8 تناسب پر علاج کیا گیا۔ 0. ریڈ ایکس مردہ چوہوں کو ظاہر کرتا ہے۔ تابکاری کا پیمانہ دکھایا گیا ہے۔ g پلاٹ (f) میں ہر ماؤس کے براہ راست BLI سے وقت کے ساتھ کل بہاؤ کی مقدار کو ظاہر کرتا ہے۔ پینلز کے لیے (f, g) n=4 چوہوں کو غیر منتقلی T سیل گروپ میں اور n=5 چوہوں کو STEAP1-BBζ CAR T سیل گروپ میں استعمال کیا گیا۔ h CD3+ EGFRt+ STEAP1-BBζ CAR T خلیوں کا بہاؤ cytometry کے ذریعے چوہوں کے splenocytes سے STEAP1-BBζ CAR T خلیات (n=4) کے آخر میں 49 دن کے تجربے کا۔ بارز اوسط کی نمائندگی کرتے ہیں۔ پینل (a) کے لیے، Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ ANOVA استعمال کیا گیا تھا۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

ماؤس میں ماؤس STEAP1 CAR T سیل مطالعہ اینٹیٹیمر علاج کی افادیت کو ظاہر کرتا ہے

STEAP1-BBζ CAR T خلیوں کی ایکٹیویشن اور cytolytic سرگرمی PC3 سیل لائن کے انتہائی کم STEAP1 اینٹیجن کثافت (~1500 مالیکیولز/ سیل) کے تناظر میں مشاہدہ کی گئی ہے (تصویر 2g–i، ضمنی تصویر 11a، b ) اور پھیلے ہوئے PC3-fLuc ٹیومر ماڈل (ضمنی شکل 11c–e) میں ویوو اینٹی ٹیومر سرگرمی کے شواہد نے ٹیومر سے دور ہونے والے زہریلے ہونے کے امکانات کے بارے میں خدشات کو پیش کیا۔ ٹریک ایبل ماڈل آرگنزم میں ممکنہ زہریلے پن کا اندازہ لگانے کے لیے، ہم نے ایک انسانی STEAP1 دستک ان (hSTEAP1-KI) ماؤس تیار کیا جس میں انسانی STEAP1 جین کو C57Bl/6 پس منظر پر ماؤس Steap1 جین لوکس میں داخل کیا گیا تھا۔ تصویر 4a)۔ ایک ماؤس کالونی ٹیل ڈی این اے (تصویر 4b) کے پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) کے ذریعے کی گئی جین ٹائپنگ کے ساتھ قائم کی گئی تھی۔ homozygous اور heterozygous hSTEAP1-KI چوہوں نے وائلڈ ٹائپ لیٹر میٹس کے مقابلے میں کوئی واضح فینوٹائپک یا تولیدی اسامانیتا نہیں دکھائے۔ مقداری ریورس ٹرانسکرپشن PCR (qRT-PCR) پر مبنی انسانی STEAP1 اظہار کے لیے ایک ٹشو سروے نر اور مادہ heterozygous hSTEAP1-KI (hSTEAP1-KI/ + ) چوہوں پر کیا گیا تھا اور سب سے بڑا رشتہ دار اظہار سامنے آیا تھا۔ پروسٹیٹ میں، اس کے بعد بچہ دانی اور ایڈرینل غدود (تصویر 4c)۔ مرد hSTEAP1-KI/ + پروسٹیٹ اور ادورکک غدود کے STEAP1 IHC کے حالات کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ انسانی STEAP1 اظہار پروسٹیٹ کے لومینل اپکلا خلیوں تک محدود ہے (تصویر 4d) اور ایڈرینل کورٹیکس (تصویر 4e) میں اظہار۔ . STEAP1 CAR کا ایک مورینائزڈ ورژن، جسے STEAP1-mBBζ CAR کہا جاتا ہے، جس میں scFv اور IgG4 hinge-CH2-CH3 اسپیسر کو برقرار رکھا گیا تھا لیکن CD28 ٹرانس میمبرین ڈومین، 4-1BB کاسٹیمولیٹری ڈومین ، اور CD3ζ ایکٹیویشن ڈومین کو ان کے ماؤس آرتھولوگس کے ساتھ تبدیل کیا گیا تھا جس کو گامریٹروائرل کنسٹرکٹ میں کلون کیا گیا تھا (تصویر 4f)۔ اس کے علاوہ، انسانی EGFRt ٹرانزیکشن مارکر کو ایک چھوٹا سا ماؤس CD19 (mCD19t) سے تبدیل کیا گیا تاکہ ممکنہ مدافعتی صلاحیت کو کم کیا جا سکے۔ ہم نے ماؤس اسپلینوسائٹس (تصویر 4 جی) سے افزودہ T خلیوں کی موثر ریٹرو وائرل نقل و حمل کی تصدیق کی اور ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا تاکہ RM9 ماؤس پروسٹیٹ کینسر سیل لائن 56 کے cytolysis کی حوصلہ افزائی کی جا سکے۔ (RM9- hSTEAP1) بذریعہ lentiviral transduction (تصویر 4h)۔ ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کی vivo افادیت NSG چوہوں میں پھیلے ہوئے RM9-STEAP1-fLuc ٹیومر ماڈل میں تصدیق کی گئی تھی (ضمنی شکل 12a)۔ RM9-STEAP1-fLuc خلیوں کے دم کی رگ کے انجیکشن کے ایک ہفتہ بعد، چوہوں کا علاج یا تو 5 × 106 untransduced ماؤس T خلیات یا ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ذریعے کیا گیا۔ . جن چوہوں کو ماؤس ٹی سیلز حاصل کیے گئے ان نے بیماری کی غیر چیک شدہ بڑھوتری کا مظاہرہ کیا، جب کہ STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہوں نے یکساں طور پر تیزی سے بیماری کے رجعت کا مظاہرہ کیا جس کے بعد دس دن بعد دوبارہ گرنا شروع ہوا (ضمنی شکل 12b، c)۔ STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کا تعلق شماریاتی طور پر اہم بقا کے فائدے سے تھا (22 دن بمقابلہ 12 دن، p=0.0039 بذریعہ لاگ رینک ٹیسٹ، ضمنی شکل 12d)۔ دونوں علاج گروپوں میں وزن میں کمی واضح تھی کیونکہ موت سے پہلے ٹیومر کا بوجھ بڑھ گیا تھا (ضمیمہ تصویر 12e، f)۔ necropsy میں جمع کیے گئے ماؤس اسپلینوسائٹس کے تجزیے سے STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کا پردیی استقامت ظاہر ہوا جس میں mCD3+ mCD19t+ خلیات کو گود لینے کے بعد 24 دن تک پتہ چلا (ضمنی شکل 12g)۔ دونوں ٹریٹمنٹ گروپس میں چوہوں سے پھیپھڑوں کی کٹائی کی گئی تھی اور STEAP1 IHC نے STEAP1-mBBζ CAR T خلیات (ضمنی شکل 12h) کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں سے پلمونری میٹاسٹیسیس میں STEAP1 اظہار کی کمی کو ظاہر کیا۔ ہم نے بعد میں کلونل RM9-STEAP1-fLuc لائنوں کو بڑھایا تاکہ یہ تعین کیا جا سکے کہ آیا مشاہدہ شدہ ٹیومر اینٹیجن فرار STEAP1 اظہار میں پہلے سے موجود ہیٹروجنیٹی کا نتیجہ ہو سکتا ہے۔ تجربہ NSG چوہوں میں کلونل، پھیلائے گئے RM9-STEAP1- fLuc ٹیومر ماڈل کے ساتھ دہرایا گیا تھا (ضمیمہ تصویر 13a)۔ اس تناظر میں، STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں نے ایک فوری اور پائیدار مکمل ردعمل کا مظاہرہ کیا (ضمیمہ تصویر 13b–d)۔ یہ نتائج STEAP1-mBBζ CAR T خلیوں کی STEAP1+ پروسٹیٹ کینسر کو ختم کرنے کی صلاحیت کو اجاگر کرتے ہیں اور مزید تجویز کرتے ہیں کہ اعلی درجے کے پروسٹیٹ کینسر کے مریضوں کے ذیلی گروپوں میں مزاحمت پر قابو پانے کے لیے ملحقہ علاج کی حکمت عملی کی ضرورت ہو سکتی ہے جہاں STEAP1 کی متفاوت ہے۔ اظہار موجود ہے (تصویر 1e)۔

مردوں کے مدافعتی نظام کو مضبوط بنانے کے لیے cistanche کے فوائد

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

STEAP1 CAR T سیل تھراپی انسانی STEAP1 ماؤس ماڈل میں محفوظ ہے۔

STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کی طبی حفاظت اور افادیت دونوں کی چھان بین کے لیے، ہم نے مرد heterozygous hSTEAP1-KI چوہوں کو syngeneic، non-clonal RM9-STEAP{{4} کے ساتھ ٹیکہ لگایا۔ } fLuc خلیات بذریعہ دم رگ کے انجیکشن (تصویر 5a)۔ تقریباً ایک ہفتہ بعد BLI کی طرف سے میٹاسٹیٹک کالونائزیشن کی تصدیق کے بعد، چوہوں کو پری کنڈیشنگ سائکلو فاسفمائیڈ 100 ملی گرام/کلو گرام انٹراپریٹونیل انجیکشن57 کے ذریعے موصول ہوا۔ ایک دن بعد، چوہوں کو 5 × 106 غیر منتقلی ماؤس T خلیات یا ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ذریعے ٹیل ویین انجیکشن کے ذریعے علاج کے لیے بے ترتیب بنایا گیا۔ تمام چوہوں جنہوں نے ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات حاصل کیے، BLI کی بنیاد پر علاج شروع کرنے کے پہلے ہفتے کے اندر ٹیومر کے بوجھ میں کمی کا مظاہرہ کیا (تصویر 5b، c)۔ مشاہدہ کیا گیا ردعمل قلیل المدت تھا لیکن اس کی وجہ سے بقا کی معمولی توسیع ہوئی (21 دن بمقابلہ 12 دن، p=0.0138 بذریعہ لاگ-رینک ٹیسٹ، تصویر 5d) — نان کلونل RM کے نتائج کی طرح NSG چوہوں میں 9-STEAP1-fLuc تجربات (ضمنی شکل 12d)۔ اس خوراک کی سطح پر خاص طور پر ماؤس سٹیپ1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ کوئی مجموعی زہریلا یا قبل از وقت اموات نہیں ہوئیں جہاں اینٹیٹیمر افادیت کا واضح ثبوت دیکھا گیا۔ وزن میں کمی ٹیومر کے بڑھتے ہوئے بوجھ سے وابستہ تھی لیکن علاج کے دونوں بازوؤں میں عام ہے (تصویر 5e، f)۔ STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ممکنہ زہریلے پن کا مزید جائزہ لینے کے لیے، اسی طرح کا تجربہ متوازی طور پر heterozygous hSTEAP1-KI چوہوں والے RM9-hSTEAP1 ٹیومر میں کیا گیا تھا اور کوئی ٹیومر نہیں تھا۔ غیر ٹیومر والے چوہوں کا علاج غیر منتقل شدہ T خلیوں یا STEAP1- mBBζ CAR T خلیوں نے بقا میں کوئی فرق ظاہر نہیں کیا (ضمنی شکل 14a) یا جسمانی وزن میں کمی سمیت مجموعی زہریلا (ضمنی شکل 14b)۔ چونکہ STEAP1-BBζ CAR ایک ترمیم شدہ IgG4 اسپیسر پر مشتمل ہے جو ممکنہ طور پر امیونوجینک ہو سکتا ہے، اس لیے ہم نے اس تجربے میں چوہوں سے ریٹرووربیٹل خون جمع کرکے ماؤس اینٹی ہیومن اینٹی باڈی (MAHA) ردعمل کا جائزہ لیا۔ STEAP1-BBζ CAR T خلیات (ضمنی شکل 14c) کے ساتھ علاج کے بعد 8ویں دن چوہوں کے سیرا میں کوئی انسان مخالف IgG اور IgM اینٹی باڈیز نہیں پائی گئیں۔

اہم بات یہ ہے کہ Heterozygous hSTEAP1-KI چوہوں کا علاج STEAP1-mBBζ CAR T خلیات نے ظاہر نہیں کیا کہ بافتوں میں کوئی واضح رکاوٹ یا CD3+ T خلیوں کی پروسٹیٹ میں دراندازی نہیں ہوئی (ضمیمہ تصویر 15a، b ) یا ادورکک غدود (ضمنی شکل 15c، d) ان کے ہم منصبوں کے مقابلے میں جن کا علاج غیر منتقلی ٹی خلیوں سے کیا جاتا ہے، جو کہ ٹیومر کے ہدف سے باہر زہریلے کی عدم موجودگی کا مشورہ دیتا ہے۔ تجربے کے اختتام پر جمع کیے گئے پھیپھڑوں نے RM9-hSTEAP1 پلمونری میٹاسٹیسیس میں انسانی STEAP1 اظہار ظاہر کیا جس میں چوہوں میں علاقائی متفاوت ہے جس کا علاج غیر منتقل شدہ ماؤس T خلیات (تصویر 5 جی) سے کیا گیا ہے۔ دوسری طرف، چوہوں کے ٹیومر کا علاج ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات نے پھر سے انسانی STEAP1 اظہار کی عدم موجودگی کا مظاہرہ کیا (تصویر 5h)۔ اس بات کا جائزہ لینے کے لیے کہ آیا ماؤس STEAP1- mBBζ CAR T سیل تھراپی اور انسانی STEAP1 اینٹیجن کا نقصان RM{{16}hSTEAP1 ٹیومر میں اینٹیجن پریزنٹیشن کو بھی متاثر کر سکتا ہے، ہم نے مورائن بیٹا-2-مائکروگلوبلین (B2m) کے لیے IHC انجام دیا۔ ) جو MHC کلاس I کے مالیکیولز کا کلیدی جزو ہے۔ ہم نے ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ساتھ علاج کے بعد پروگریسو ٹیومر میں B2m ایکسپریشن کی نمایاں کمی دیکھی ہے جو کہ 22Rv1 ماڈل میں ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتے ہوئے غیر منتقل شدہ T خلیات (ضمنی شکل 15e، f) کے مقابلے میں ہے۔

تصویر 4|انسانی STEAP1 دستک ان (hSTEAP1-KI) ماؤس ماڈل اور مورینیائزڈ STEAP1 کار کے ساتھ ماؤس ان ماؤس سسٹم قائم کرنا۔ C57Bl/6 پس منظر پر ماؤس Steap1 لوکس میں انسانی STEAP1 exons 2–5 کو دستک کرنے کے لیے ہدف سازی ویکٹر کا استعمال کرتے ہوئے ہم جنس دوبارہ ملاپ کی حکمت عملی کو دکھا رہا ہے۔ FRT فلپیس کی شناخت کا ہدف۔ b جنگلی قسم (+/+)، heterozygous (KI/+)، یا homozygous (KI/KI) چوہوں کی ٹیل ٹپ جین ٹائپنگ سے PCR پروڈکٹس کا تصور جو پرائمر جوڑوں کا استعمال کرتے ہوئے وائلڈ ٹائپ یا hSTEAP1-KI ایللیس کے حصوں کو بڑھانا ہے۔ . NTC null ٹیمپلیٹ کنٹرول۔ n=3 حیاتیاتی طور پر آزاد تجربات سے نمائندہ جیل کی تصویر۔ hSTEAP1-KI/+ چوہوں سے ٹشوز کے سروے میں انسانی STEAP1 اظہار کے لیے qPCR کو 18 S اظہار پر معمول بنایا گیا۔ n=3 جنس کے مخصوص اعضاء کے لیے اور n=6 عام اعضاء کے لیے۔ سلاخیں SEM کے ساتھ اوسط کی نمائندگی کرتی ہیں۔ (بائیں) +/+ اور (دائیں) KI/+ چوہوں اور (e) ایک KI/+ ماؤس سے ایڈرینل غدود سے (d) پروسٹیٹ ٹشوز کے STEAP1 IHC کے داغ کے فوٹو مائیکرو گراف۔ اسکیل بارز=50 µm۔ پینل (d، e) کے لیے STEAP1 امیونوسٹیننگ n=3 حیاتیاتی طور پر آزاد نمونوں پر کی گئی تھی۔ f retroviral murinized STEAP1 CAR کی تعمیر کا اسکیمیٹک۔ MuLV murine لیوکیمیا وائرس، mCD19t ماؤس نے CD19 کو چھوٹا کیا۔ g ماؤس CD3+ CD19t+ خلیات کی فریکوئنسی کی بنیاد پر تین آزاد تجربات سے چالو ماؤس T خلیات کی ریٹرو وائرل ٹرانزیکشن کی کارکردگی کی مقدار بہاؤ سائٹومیٹری (p {{40}}.0003)۔ h RM9 یا RM9-hSTEAP1 ٹارگٹ سیلز کی متعلقہ سیل کی قابل عمل وقت کے ساتھ ساتھ مائوس STEAP1-mBBζ CAR T سیلز یا untransduced T سیلز کے ساتھ 1:1 تناسب پر کو کلچر پر فلوروسینس لائیو سیل امیجنگ کے ذریعے ماپا جاتا ہے۔ (p <0.0001)۔ n=4 حیاتیاتی نقلیں فی شرط۔ خرابی والی سلاخیں SEM کے ساتھ اوسط کی نمائندگی کرتی ہیں۔ پینل (جی) کے لیے، ویلچ کی تصحیح کے ساتھ غیر جوڑی والے دو دم والے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا۔ پینل (ایچ) میں، سیڈک کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ انووا استعمال کیا گیا تھا۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

تصویر 5|hSTEAP میں ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کی افادیت اور حفاظت کا تعین1-KI چوہوں والے syngeneic، پھیلے ہوئے پروسٹیٹ کینسر۔

کولیجن بائنڈنگ ڈومین-IL-12 فیوژن سائٹوکائن بہتر T سیل ریسیپٹر سگنلنگ اور اینٹیجن پریزنٹیشن کے ذریعے اینٹیٹیمر ردعمل کو ظاہر کرتا ہے۔

IL{{0}} ایک heterodimeric cytokine ہے جو p40 اور p35 subunits پر مشتمل ہے جو T سیل کے ردعمل کو منظم کرتا ہے اور IFN- کی پیداوار کا باعث بنتا ہے۔ سیسٹیمیٹک IL-12 انتظامیہ کے ساتھ وابستہ حیرت انگیز اینٹیٹیمر ردعمل کا مظاہرہ کئی preclinical ماڈلز میں کیا گیا ہے 58,59 لیکن خوراک کو محدود کرنے والے زہریلے اور غیر موثر ہونے کی وجہ سے کلینک تک اس علاج کے طریقہ کار کا ترجمہ رک گیا60–63۔ ان مسائل کو روکنے کے لیے متبادل حکمت عملیوں کا مقصد ٹیومر کے لیے IL{{10}} کو مقامی بنانا ہے، یا تو انٹراٹومورل ڈیلیوری یا انجینئرنگ IL-12 فیوژن پروٹین کے ذریعے ٹیومر مائکرو ماحولیات کی منفرد خصوصیات کا فائدہ اٹھانا۔ حال ہی میں بیان کردہ ایک نقطہ نظر وون ولیبرانڈ فیکٹر A3 ڈومین میں فیوژن ہے جو کولیجن بائنڈنگ ڈومین (CBD، تصویر 6a) کے طور پر کام کرتا ہے اور ناکارہ ٹیومر vasculature64 میں بے نقاب کولیجن کے ساتھ فیوژن پروٹین کے پابند ہونے کے قابل بناتا ہے۔ سسٹمک CBD-IL-12 تھراپی کو بہتر IFN- سگنلنگ کے ذریعے امیونولوجیکل طور پر "کولڈ" مورین بریسٹ کینسر اور میلانوما ماڈلز کے ٹیومر مائکرو ماحولیات کو دوبارہ تشکیل دینے اور اینٹی PD کے ساتھ تعاون کرنے کے لئے دکھایا گیا تھا{{20}} ٹیومر کے خاتمے کی حوصلہ افزائی کے لیے مدافعتی چوکی روکنا65۔ ہم نے پوچھا کہ کیا CBD-IL-12 پروسٹیٹ کینسر کو "ٹھنڈے" سے "گرم" میں تبدیل کرنے اور اینٹیٹیمر ردعمل پیدا کرنے میں کارگر ہو سکتا ہے۔ مردانہ C57Bl/6 اور FVB چوہوں میں بالترتیب Subcutaneous، syngeneic RM9، اور Myc-CaP ٹیومر قائم کیے گئے تھے، اور چوہوں کو گاڑی، اینٹی PD-1، یا CBD-IL-12 کے ساتھ علاج کے لیے بے ترتیب بنایا گیا تھا۔ . سیسٹیمیٹک CBD-IL-12 انتظامیہ نے دونوں syngeneic RM9 اور Myc-CaP ٹیومر ماڈلز میں ٹیومر کی نشوونما کی روک تھام کی حوصلہ افزائی کی جو کہ دوسری صورت میں اینٹی PD-1 تھراپی (تصویر 6b، ضمنی شکل 16a) کے لیے ناقص جوابدہ تھے۔ . CBD-IL-12 کے عمل کے طریقہ کار کے بارے میں مزید بصیرت حاصل کرنے کے لیے، ہم نے گاڑی یا CBDIL-12 سے علاج کیے گئے چوہوں سے RM9 ٹیومر کا سنگل سیل RNA-seq (scRNA-seq) تجزیہ کیا۔ یونیفارم مینیفولڈ اپروکسیمیشن اور پروجیکشن پلاٹوں نے ٹیومر کے اپکلا، فبروبلاسٹ، اور اینڈوتھیلیل سیل کمپارٹمنٹس (ضمنی شکل 16b) میں کافی کمی کا انکشاف کیا جو اینٹیٹیمر سرگرمی کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔ scRNA-seq ڈیٹا میں فطری اور انکولی مدافعتی سیل ذیلی سیٹوں کی مارکر پر مبنی پروفائلنگ (تصویر 6c,d) نے CD8+ T خلیات میں خاطر خواہ اضافے کی نشاندہی کی (7.55 بمقابلہ 0.76%) ، اینٹیجن کراس پیش کرنے والے خلیات بشمول XCR1+ IRF8+ روایتی قسم 1 ڈینڈریٹک سیل (cDC1, 1.33 بمقابلہ 0%), CD86+ INOS2+ M1 پولرائزڈ میکروفیجز ( 2.26 بمقابلہ 0%)، اور گاڑی کنٹرول گروپ کے مقابلے CBDIL-12 ٹریٹمنٹ گروپ سے ٹیومر میں CD64+ F4/ 80+ monocytes/macrophages (29.2 vs 4.43%)۔ امیونوسوپریسی CD163+ CD206+ M2 پولرائزڈ میکروفیجز (0 بمقابلہ 0.25%) اور Ly6G+ نیوٹروفیلز (0.52 بمقابلہ 1.08%) میں کمی بھی CBD-IL-12 تھراپی سے وابستہ تھی۔ IHC تجزیہ نے اس بات کی تصدیق کی کہ گاڑی کے ساتھ علاج کیے جانے والے RM9 ٹیومر میں عام طور پر CD8+ T خلیات کی کمی ہوتی ہے جبکہ CBD-IL-12 کے ساتھ علاج کیے جانے والے ٹیومر میں CD8+ T خلیات کی واضح طور پر دراندازی ظاہر ہوتی ہے (ضمنی شکل 16c) . ٹیومر کے خلیوں نے پروٹیزوم اور امیونوپروٹیزوم ذیلی یونٹس Psmb8 اور Psmb9 اور بڑے ہسٹو کمپیٹیبلٹی کمپلیکس کلاس I (MHC I) جینز H2-K1، H2-D1، اور B2m کے افزودہ اظہار کا مظاہرہ کیا، جو اینٹیجن پروسیسنگ کی اپ گریجشن کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔ اور پریزنٹیشن مشینری (تصویر 6e، ضمنی شکل 16d)۔ متوازی طور پر، T خلیات نے T سیل ریسیپٹر سگنلنگ اور لیمفائیڈ اور غیر لیمفائیڈ سیل کے درمیان امیونوریگولیٹری تعامل کے ساتھ منسلک جین کے بہتر اظہار کی نمائش کی (تصویر 6f، ضمنی شکل 16e)۔ mononuclear phagocyte system (MPS) کے خلیات نے اینٹیجن پروسیسنگ اور کراس پریزنٹیشن کے ساتھ ساتھ سائٹوکائن سگنلنگ سے متعلق افزودہ جین کا اظہار دکھایا (ضمیمہ تصویر 16f، g)۔ ان مطالعات نے پروسٹیٹ کینسر کے ماڈلز میں CBD-IL{113}} کی اینٹی ٹیومر سرگرمی کو ٹیومر مائکرو ماحولیات کی دوبارہ پروگرامنگ اور پیدائشی اور موافق مدافعتی نظام دونوں کی مشغولیت کے ذریعے قائم کیا۔

ہم آہنگی STEAP1-mBBζ CAR T سیل اور CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ بہتر ٹیومر کنٹرول

ہم نے اس کے بعد یہ قیاس کیا کہ CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ اینٹی ٹیومر مدافعتی ردعمل کو وسیع کرنے سے پروسٹیٹ کینسر میں STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کی علاج کی افادیت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے جس سے ٹیومر اینٹیجن ہیٹروجنیٹی کا مقابلہ کیا جا سکتا ہے اور اینٹیجن پروسیسنگ سے بچایا جا سکتا ہے۔ پیشکش لہذا، ہم نے سنجینک، غیر کلونل RM9-STEAP1-fLuc metastases in نر heterozygous hSTEAP1-KI چوہوں میں قائم کیا اور 5 × 1 کے ساتھ علاج کے لیے بے ترتیب بنایا06 untransduced ماؤس T خلیات یا ماؤس STEAP1-mBBζ CAR T خلیات بذریعہ دم رگ کے انجیکشن کے ساتھ یا بغیر ہفتہ وار CBD-IL-12 تھراپی کے ذریعے ریٹرووربیٹل سائنوس انجیکشن کے ذریعے۔ وہ گروپ جنہوں نے اکیلے CBD-IL-12 تھراپی حاصل کی یا STEAP1-mBBζ CAR T تھراپی کے ساتھ مل کر لیمفو کو ختم کرنے والی سائکلو فاسفمائڈ (تصویر 7a) نہیں ملی۔ سیریل BLI نے غیر منتقل شدہ T خلیات اور CBD-IL-12 کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہوں میں تیزی سے بیماری کے بڑھنے کا انکشاف کیا جبکہ CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ مل کر STEAP1-BBζ CAR T خلیات حاصل کرنے والوں نے ایک نمایاں کارکردگی کا مظاہرہ کیا۔ ٹیومر کے بڑھنے میں تاخیر (تصویر 7 بی، سی)۔ اہم بات یہ ہے کہ ماؤس STEAP1- mBBζ CAR T خلیات اور ہفتہ وار CBD-IL-12 کے ساتھ مشترکہ علاج دیگر تمام علاج گروپوں (تصویر 7d) کے مقابلے میں مجموعی طور پر بقا میں اعدادوشمار کے لحاظ سے اہم توسیع سے وابستہ تھا۔ علاج کے 0 اور دن 8 پر جمع کیے گئے ریٹرووربیٹل خون پر پلازما سائٹوکائن کے تجزیے نے پروانفلامیٹری سائٹوکائنز IFN-، TNF-، IL-6، اور IL-4 کی سطحوں میں نمایاں اضافہ دکھایا (تصویر 7e، ضمنی Fig 17) چوہوں میں STEAP1-mBBζ CAR T خلیات اور CBD-IL-12 کے ساتھ علاج کیا گیا۔ بقایا ٹیومر necropsy میں جمع کیے گئے تھے اور STEAP1 IHC نے صرف STEAP1- mBBζ CAR T خلیات دونوں کے ساتھ اور CBD-IL-12 (تصویر 8a) کے ساتھ مل کر علاج کیے گئے چوہوں سے ٹیومر میں اینٹیجن کا نقصان دکھایا۔ اس کے علاوہ، ہم نے CBD-IL-12 تھراپی سے وابستہ ٹیومر B2m اظہار (تصویر 8a) میں اضافہ دیکھا۔ IL-12 تھراپی سے مشروط ٹیومر کے حالات میں CD3+ T خلیات میں بھی اضافہ کیا گیا تھا (تصویر 8b) لیکن، جب کہ ایک رجحان کو سراہا گیا، ہمیں انٹراٹومورل ٹی خلیوں میں اعداد و شمار کے لحاظ سے نمایاں اضافہ نہیں ملا۔ اسٹیپ1-mBBζ CAR T سیل اور مشترکہ STEAP1-mBBζ CAR T سیل اور CBD-IL-12 ٹریٹمنٹ گروپس۔ بقیہ ٹیومر بشمول چوہوں سے علاج کیے گئے مشترکہ STEAP1-mBBζ CAR T سیل اور CBD-IL-12 دن 10 میں زیادہ سے زیادہ علاج کے ردعمل (نادر) پر اور ٹیومر کے بڑھنے (دوبارہ لگنے) کے لیے ہمدردانہ اختتامی مقامات پر جمع کیے گئے تھے۔ واحد خلیات سے منقطع اور مدافعتی سیل کے ذیلی سیٹ ملٹی پیرامیٹرک فلو سائٹومیٹری (ضمنی شکل 18) کی خصوصیت رکھتے تھے۔ ہمارے scRNA-seq کے نتائج کے مطابق، CBD-IL-12 کا علاج یا تو تنہا یا STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ساتھ مل کر CD11b+ Ly6C-/+F4/{{68} میں نمایاں اضافہ ہوا۔ }} MHC-II+ میکروفیجز (تصویر 8c، d، ضمنی تصویر 19a)۔ CD11b+ Ly6CF4/80+ MHC-II+ خلیات بالغ اینٹیجن پیش کرنے والے میکروفیجز66 کی نمائندگی کرتے ہیں اور اس آبادی کو ترجیحی طور پر افزودہ کیا گیا تھا اور CBD کے ساتھ proinflammatory M1-پولرائزیشن کے نشان کے طور پر بڑھے ہوئے حوصلہ افزائی نائٹرک آکسائڈ سنتھیس (iNOS) اظہار کا مظاہرہ کیا گیا تھا{8} } تھراپی۔ ہم نے cDC1 کی آبادی میں توسیع اور روایتی قسم 2 ڈینڈریٹک سیل (cDC2) کی آبادی (تصویر 8e، ضمنی شکل 19b) میں کمی کا بھی مشاہدہ کیا۔ cDC1 کو اینٹی ٹیومر سائٹوٹوکسک CD8+ T خلیات اور علاج کی مزاحمت کے ممکنہ میکانزم کو چالو کرنے میں ملوث کیا گیا ہے۔ ہمیں ٹیومر میں سیل کی منتقلی کا کوئی نشان نہیں ملا جبکہ cDC2 KLRG1+ اور KLRG1- CD4+ T خلیوں کے قدرتی قاتل بشمول Tregs67 کے تناسب میں نمایاں فرق کو چالو کرنے کے لیے اہم ہیں۔ . سی ڈی سی 2 کے نتائج سے ہم آہنگ، علاج کے گروپوں میں خلیات (ضمیمہ تصویر 19 ڈی)۔ CD4+ FOXP3+ Tregs کی فریکوئنسی پروفائلنگ سے پتہ چلتا ہے کہ Tregs asso- of F40/80+ SiglecF+ eosinophils میں کمی واقع ہوئی ہے جبکہ Ly6G+ کو CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ نیوکیٹ کیا گیا ہے (ضمنی شکل 19c)۔ دلچسپی کی بات یہ ہے کہ CBD-IL-12 کو STEAP1- میں شامل کرنے کے ساتھ ٹرافیلز میں کمی واقع ہوئی ہے ہم نے دیکھا کہ مشترکہ STEAP1-mBBζ mBBζ CAR T سیل تھراپی (تصویر 8f، g)۔ خاص طور پر، ان CAR T سیل اور CBD-IL{116}} تھراپی کی فریکوئنسی میں cDC1 میں کمی واقع ہوئی تھی اور ٹیومر سے وابستہ نیوٹروفیلز کو Tregs میں اضافے کے ساتھ علاج کے ساتھ بڑھایا گیا تھا، جس سے سائٹوٹوکسک CD8 STEAP کی پرائمنگ میں کمی واقع ہوئی تھی{120 }}mBBζ CAR T خلیات غیر منتقل شدہ T خلیات (54 بمقابلہ T خلیات اور امیونوسوپریسو Treg سگنلنگ کی افزودگی 34%) کے مقابلے میں، CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ حالات میں کم ہوئے، لیکن مشترکہ STEAP کے بعد ٹیومر کے دوبارہ لگنے پر بڑھ گئے۔ 1-mBBζ CAR T سیل اور CBD-IL-12 تھراپی (19 سے 42٪)۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ٹیومر سے وابستہ نیوٹروفیلز کی مدافعتی خصوصیات علاج کے خلاف مزاحمت اور ٹیومر کے بڑھنے میں ثالثی میں نمایاں کردار ادا کر سکتی ہیں۔ مجموعی طور پر، یہ تجزیے اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ CBD-IL-12 کا علاج مخالف امیونوسوپریسی ٹیومر کے ماحول کو ایک سوزش والی حالت میں بدل دیتا ہے اور اپنانے والے STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ مل کر اینٹی ٹیومر سرگرمی کو وسیع کرتا ہے۔ ہم نے ملٹی پلیکس پی سی آر پر مبنی ٹی سی آر بیٹا چین کی ترتیب 68 کا استعمال کرتے ہوئے ٹی سی آر کے ذخیرے کا تجزیہ کیا جو ہر ٹریٹمنٹ گروپ سے نیکروپسی میں جمع کیے گئے پھیپھڑوں کے حامل ٹیومر پر ہے۔ ہم نے اکیلے CBD-IL-12 کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں کے نمونوں میں اور STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ مل کر سمپسن کلونالٹی میں نمایاں کمی دیکھی جو کہ intratumoral T سیل کے تنوع میں اضافہ کی نشاندہی کرتی تھی (تصویر 1)۔ 8ھ)۔ ان نتائج سے ثابت ہوتا ہے کہ CBD-IL-12 کو STEAP1 CAR T سیل تھراپی کے ضمنی طور پر شامل کرنا پروسٹیٹ کینسر ٹیومر مائیکرو ماحولیات کی دوبارہ تشکیل، اینٹیجن پروسیسنگ اور پریزنٹیشن کو بڑھانے، اور ایپیٹوپ پھیلاؤ کو فروغ دینے کے لیے میزبان قوت مدافعت کو شامل کرنے کے ذریعے فائدہ مند ہو سکتا ہے۔

تصویر 6|سیسٹیمیٹک کولیجن بائنڈنگ ڈومین IL-12 (CBD-IL-12) سائٹوکائن فیوژن تھراپی پروسٹیٹ کینسر کے ٹیومر کی نشوونما کو روکتی ہے اور ٹیومر کے مدافعتی مائکرو ماحولیات کو دوبارہ پروگرام کرتی ہے۔ CBD-IL-12 کا ایک اسکیمیٹک، p35 اور p40 ذیلی یونٹس پر مشتمل ہے جو وان ولیبرانڈ فیکٹر ڈومین A3 سے CBD میں ملایا گیا ہے۔ b وقت کے ساتھ گاڑی کے ساتھ علاج کے ساتھ Sygeneic C57Bl/6 چوہوں میں RM9 subcutaneous ٹیومر کی مقدار، اینٹی PD-1 (کلون 29 F.1A12) 200 Μg ہر 5 دن بعد انٹرا پیریٹونیئل انجیکشن کے ذریعے، یا CBD-IL-12 25 Μg ہر 5 دن بعد انٹراوینس انجیکشن کے ذریعے 0 دن سے شروع ہوتا ہے۔ n=7 گاڑیوں میں چوہے اور CBD-IL-12 علاج شدہ گروپس اور اینٹی میں n=8 چوہے -PD1 علاج شدہ گروپ۔ p <0.0001 دن 9 اور 12 پر۔ سلاخیں SEM کے ساتھ اوسط کی نمائندگی کرتی ہیں۔ P-values ​​Dunnett کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ ANOVA سے اخذ کیے گئے ہیں، ns اہم نہیں ہیں۔ c سنگل سیل RNA-seq (scRNA-seq) سے مختلف امیون سیل سب سیٹس (ٹاپ) کے یکساں مینی فولڈ اپروکسیمیشن اینڈ پروجیکشن (UMAP) پلاٹ پانچ RM9 ٹیومر کے تجزیہ سے ہر ایک کو گاڑی یا CBD-IL کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں سے جمع کیا گیا ہے{{41} } پین-مونوسائٹس/میکروفیجز، M1 اور M2 پولرائزڈ میکروفیجز، روایتی قسم 1 ڈینڈریٹک خلیات (cDC1)، قدرتی قاتل (NK) خلیات، اور T مددگار قسم 1 (Th1) کے لیے مدافعتی سیل کے ذیلی سیٹ کے مخصوص مارکروں کے جین اظہار کے ساتھ رنگین UMAP پلاٹ خلیات d مخصوص مدافعتی خلیوں کی آبادی کی تعدد کو ظاہر کرنے والے پلاٹ (CD45 + مدافعتی خلیوں کے نسبت) جس کی شناخت scRNA-seq تجزیہ کے ذریعے کی گئی ہے بشمول CD4+ اور CD8+ T خلیات، Th1 (Infg+Tbx{ {56}} ) اور Th2 (cMAF+ Gata3+ ) خلیات، Ly6C+/− monocytes/macrophages (Ly6C+/− Adgre1+) , M1 macrophages (CD80+ CD{{67} } INOS2+ ), M2 macrophages (CD163+ Mrc1+ cMAF+ ), cDC1 (XCR1+ IRF8+)، روایتی قسم 2 ڈینڈریٹک خلیات (cDC2 , CD1+ IRF4+ ), ہجرت کرنے والے CD103+ ڈینڈریٹک خلیات (Itgae+ ), eosinophils (SiglecF+)، neutrophils (Ly6G+)، اور NK خلیات (Klrb1c+ Ncr1+ ) گاڑی یا CBDIL-12 سے علاج کیے جانے والے ٹیومر میں۔ آتش فشاں پلاٹ (e) ٹیومر کے خلیات اور (f) چوہوں کے RM9 ٹیومر کے T خلیات CBD-IL-12 میں جن کا علاج گاڑی کے ساتھ کیا جاتا ہے ان کے مقابلے میں امتیازی جین کا اظہار دکھاتا ہے۔ ایف سی فولڈ تبدیلی، ایف ڈی آر غلط دریافت کی شرح۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

بحث

CAR T سیل تھراپی اور دیگر امیون پر مبنی ٹارگٹڈ علاج کی تاثیر کا انحصار انفرادی مریض کے اندر ٹیومر کی آبادی پر مشتمل تمام یا زیادہ تر خلیوں پر اینٹیجن کے مستقل اظہار پر ہوتا ہے۔ تاہم، پراسٹیٹ کینسر سمیت ٹھوس ٹیومر میں اینٹیجن ہیٹروجنیٹی کا اعلان کیا جاتا ہے، جہاں ایم سی آر پی سی میں ترقی اور علاج کے خلاف مزاحمت کا تعلق الگ الگ ٹرانسکرپشن پروگرامز – 71 اور سیل سطح کے اینٹیجن اظہار کے ذریعہ نشان زد مختلف بیماریوں کے ذیلی قسموں کے ظہور سے ہوتا ہے۔ اگرچہ PSMA کو پروسٹیٹ کینسر میں سب سے اہم بائیو مارکر سمجھا جاتا ہے جس میں بیماری کے بڑھنے کے اسپیکٹرم میں نمایاں حد سے زیادہ اظہار پایا جاتا ہے، ہمارا کام حالیہ اشاعت14 کے نتائج کی تصدیق کرتا ہے جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ PSMA اظہار مہلک ایم سی آر پی سی میں متفاوت ہے۔ ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ STEAP1 اس ترتیب میں PSMA سے زیادہ وسیع پیمانے پر ظاہر ہوتا ہے لیکن کسی بھی طرح سے تمام mCRPC ٹشوز میں اعلی سطح پر یکساں طور پر ظاہر نہیں ہوتا ہے۔ کوئی بھی واحد اینٹیجن ٹارگٹڈ تھراپی بشمول CAR T سیل تھراپی ایم سی آر پی سی میں پہلے سے موجود ٹیومر اینٹیجن ہیٹروجنیٹی پر قابو پانے کے قابل نہیں ہوسکتی ہے۔ اس طرح، ایم سی آر پی سی میں STEAP1 جیسے اضافی علاج کے اہداف کو مکمل طور پر تسلیم کرنا انتہائی اہمیت کا حامل ہے جو ناقابل تسخیر علاج کے دباؤ کو استعمال کرنے والے امتزاج علاج کو قابل بنا سکتے ہیں۔ ان میں دوہری اینٹیجن ٹارگٹڈ (مثال کے طور پر، PSMA اور STEAP1) CAR T سیل تھراپیز یا ملٹی موڈل حکمت عملی شامل ہیں جو CAR T سیل کے علاج کو ADCs، T-BsAbs، یا دوسرے علاج کے ساتھ جوڑتے ہیں جو ممکنہ طور پر اینٹیجن سے آزاد اور منحصر ٹیومر کے قتل کو فروغ دیتے ہیں۔ ہم نے ایک STEAP1-ٹارگٹڈ CAR T سیل تھراپی تیار کی ہے جو انتہائی اینٹیجن کے ساتھ مخصوص ہے اور STEAP1 کے دوسرے ECD میں CAR کے ذریعے پہچانے گئے ایپیٹوپ کو فعال طور پر مقامی بناتی ہے۔ ہمارے STEAP1-BBζ CAR T خلیات انسان میں ماؤس اور ماؤس میں ماؤس دونوں طرح سے پھیلائے گئے پروسٹیٹ کینسر کے متعدد ماڈلز کے خلاف کافی اینٹی ٹیمر سرگرمی کا مظاہرہ کرتے ہیں۔ اہم بات یہ ہے کہ ہماری STEAP1-BBζ CAR کم اینٹیجن کثافت والے حالات میں بھی T سیل ایکٹیویشن اور ٹارگٹ سیل cytolysis کرنے کی صلاحیت رکھتی ہے، جیسا کہ PC3 پروسٹیٹ کینسر ماڈل کے خلاف رد عمل سے ظاہر ہوتا ہے۔ تاہم، STEAP1-BBζ CAR T خلیات کی STEAP1 اظہار کی کم سطح تک یہ حساسیت اینٹی ٹیومر افادیت کو بڑھانے کے نقطہ نظر سے فائدہ مند ہو سکتی ہے لیکن ہدف سے دور ٹیومر زہریلے سے ذمہ داریوں کو بھی بڑھا سکتی ہے۔ STEAP1 کا نظامی اظہار اس سے قبل عام انسانی بافتوں میں تقریباً غیر حاضر بتایا گیا ہے 18,72 پروسٹیٹ غدود کے علاوہ جہاں پروسٹیٹ اپکلا خلیوں میں جھلیوں کے اظہار کو بیان کیا گیا ہے۔ ابتدائی ترتیب میں STEAP1-BBζCAR T سیل تھراپی کی حفاظت کو جاننے کے لیے، ہم نے ایک ہیومنائزڈ STEAP1 ماؤس ماڈل تیار کیا۔ hSTEAP1-KI ماؤس ماڈل نے پروسٹیٹ غدود میں انسانی STEAP1 اظہار کو دوبارہ نقل کیا اور ایڈرینل کورٹیکس میں اظہار دکھایا۔ یقین دہانی کے ساتھ، STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی ایک خوراک پر جو کہ اینٹی ٹیومر سرگرمی کو دلانے کے لیے کافی ہے، HSTEAP1-KI چوہوں میں انسانی STEAP1 کی جگہوں پر ٹیومر کے ہدف سے باہر ہونے والے زہریلے ہونے سمیت واضح سیسٹیمیٹک زہریلے پن کا باعث نہیں بنی۔ اظہار. ہمارے مطالعے میں STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے بعد پروسٹیٹ کینسر کے دوبارہ شروع ہونے اور بڑھنے کا ایک بار بار چلنے والا طریقہ کار ٹیومر اینٹیجن سے فرار تھا۔ ایک طرف، یہ تلاش STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کی مجموعی طاقت کو واضح کرتی ہے۔ تاہم، یہ واضح نہیں ہے کہ آیا ٹیومر STEAP1 اظہار کا نقصان صرف موروثی ٹیومر اینٹیجن ہیٹروجنیٹی کی وجہ سے ہے یا STEAP1 اظہار کی انکولی کمی بھی ہے۔ ایک حالیہ اشاعت سے پتہ چلتا ہے کہ STEAP1 کا پروموٹر میتھیلیشن STEAP1 اظہار کو ماڈیول کرتا ہے اور DNA methyltransferase اور ہسٹون deacetylase inhibition کے ذریعے epigenetic deregulation STEAP1 اظہار73 کو نمایاں طور پر اپ گریڈ کرنے کے لیے کافی تھا۔ STEAP1 CAR T سیل تھراپی کے ساتھ مل کر ایپی جینیٹک انحیبیٹرز کے ساتھ علاج بیک وقت ٹیومر STEAP1 اظہار کو بڑھا سکتا ہے اور CAR T خلیات کو تھکن کے خلاف مزاحم تفریق والی حالتوں میں 74,75 کو دوبارہ پروگرام کر سکتا ہے، اس طرح ٹیومر کے اینٹیجن کے نقصان کو کم کر سکتا ہے اور کینسر کے انسداد میں اضافہ کر سکتا ہے۔ ہمارا مطالعہ STEAP1 کو پروسٹیٹ کینسر میں سیل سائیکل کی ترقی اور سیلولر میٹابولزم کو منظم کرنے میں ایک فعال کردار ادا کرنے کے طور پر بھی متاثر کرتا ہے۔ STEAP1 دوسرے STEAP فیملی ممبرز (STEAP2, 3, اور 4) سے منفرد ہے کیونکہ اس میں انٹرا سیلولر آکسیڈوریکٹیس ڈومین 22 کی کمی ہے جو میٹالو ریڈکٹیس سرگرمی کے لیے ضروری ہے۔ نتیجے کے طور پر، STEAP1 homotrimers، لیکن دوسرے STEAP پروٹین کے ساتھ heterotrimers نہیں، Fe3+ سے Fe2+ اور Cu2+ سے Cu1+ کو کم کرنے کے لیے انزیمیٹک فنکشن کی کمی ہے۔ آیا اور کیسے دھاتی آئنوں اور سیلولر میٹابولزم میں STEAP1 کی شمولیت کینسر کے بڑھنے کو فروغ دیتی ہے اس کا ابھی تعین ہونا باقی ہے اور مزید تفتیش کے لائق ہے۔ پروسٹیٹ کینسر کا امیونولوجیکل طور پر 'سرد' ٹیومر مائکرو ماحولیات کینسر کے امیونو تھراپیوں کی افادیت میں ایک بڑی رکاوٹ ہے۔ مثال کے طور پر، ایم سی آر پی سی میں غالب-منفی ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر- ریسیپٹر (TGF R-DN) کو ظاہر کرنے کے لیے بکتر بند PSMA CAR T سیل تھراپی کے فیز I کے کلینیکل ٹرائل سے وابستہ تحقیقی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ٹیومر مائکرو ماحولیات میں امیونوسوپریسی سگنلنگ مالیکیولز کا اظہار بڑھتا ہے۔ CAR T انفیوژن کے بعد 13۔ ہمارے مطالعے میں، ایک اہم دریافت STEAP1 اظہار کے نقصان اور اینٹیجن پروسیسنگ اور پیشکش کی کمی کے درمیان تعلق تھا، دونوں STEAP1 ناک آؤٹ سیلز اور STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے بعد STEAP1 اینٹیجن کے نقصان کے ٹیومر میں۔ اس طرح، پروسٹیٹ کینسر میں STEAP1 اینٹیجن کا نقصان نہ صرف STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے خلاف براہ راست مزاحمت کو فروغ دیتا ہے بلکہ میزبان انڈیپٹیو اینٹیٹیمر قوت مدافعت کو بھی محدود کر سکتا ہے۔ ٹیومر ٹارگٹ اینٹیجن ایکسپریشن کا نقصان اور ٹریگس کی بڑھتی ہوئی دراندازی اور امیونوسوپریسی مالیکیولز کے زیادہ اظہار کے ساتھ زیادہ امیونوسوپریسی حالت میں تبدیل ہونا بھی EGFR-vIII CAR T خلیات کے ایک مرحلے I مطالعہ میں بار بار گلیوبلاسٹوما 76 کے ساتھ شرکاء میں دیکھا گیا ہے۔ STEAP1 اینٹیجن کے نقصان کے زیر اثر فعال میکانزم کو سمجھنے کے لیے اضافی کام ضروری ہو گا اور عام طور پر کس طرح اپنانے والے CAR T سیل تھراپی کے متحرک اثرات ٹھوس ٹیومر میں ٹیومر-امیون-سٹرومل تعاملات کو ماڈیول کر کے اینٹیجن کے نقصان اور امیونو ایڈیٹنگ میں معاون ثابت ہو سکتے ہیں۔

تصویر 7|CBD-IL-12 کو STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ ملانا مجموعی طور پر بقا اور سوزش والی سائٹوکائن کی سطح کو بڑھاتا ہے۔ HSTEAP1-KI/+ چوہوں میں CBD-IL-12 کے امتزاج کی چھان بین کرنے والے RM9-hSTEAP1 کے لیے ٹیومر چیلنج کے تجربے کا منصوبہ }}}mBBζ CAR T سیل تھراپی۔ Cy cyclophosphamide (پیشگی شرط کے لیے)۔ BioRender.com کے ساتھ تخلیق کیا گیا۔ b hSTEAP کا سیریل لائیو BLI1-KI/ + چوہوں کو RM9-hSTEAP1- fLuc میٹاسٹیسیس کے ساتھ کندہ کیا گیا اور 5 × 106 ماؤس کے ایک ہی انٹراوینس انجیکشن کے ساتھ علاج کیا گیا ہفتہ وار CBD-IL- 12 علاج کے ساتھ یا اس کے بغیر ٹی سیلز یا STEAP1-mBBζ CAR T سیلز 0 دن۔ ریڈ ایکس مردہ چوہوں کی نشاندہی کرتا ہے۔ تابکاری کا پیمانہ دکھایا گیا ہے۔ (c) پلاٹ (b) میں ہر ماؤس کے لائیو BLI سے وقت کے ساتھ کل بہاؤ کی مقدار کو ظاہر کرتا ہے۔ d کپلن-میئر چوہوں کی بقا کے منحنی خطوط (b) میں شماریاتی اہمیت کے ساتھ جو لاگ-رینک (Mantel-Cox) ٹیسٹ (p=0.002) کے ذریعے متعین ہوتے ہیں۔ e پلاٹ جو IFN- (بائیں، p=0.002) اور TNF- (دائیں، p < 0.0001) کی سیرم سائٹوکائن لیول دکھاتے ہیں جو hSTEAP1-KI/+ چوہوں کے ریٹرووربیٹل خون سے ProcartaPlex immunoassays پر مبنی ہے ( n=4 چوہے فی گروپ) RM9-hSTEAP1-fLuc میٹاسٹیسیس (دن 0) سے پہلے اور علاج کے بعد (دن 8) غیر منتقل شدہ ماؤس ٹی سیلز یا ماؤس اسٹیپ کے ساتھ{{38} }mBBζ CAR T خلیات CBD-IL-12 تھراپی کے ساتھ یا اس کے بغیر۔ ایرر بار SEM کے ساتھ مطلب کی نمائندگی کرتا ہے۔ پینل (e) کے لیے، p-values ​​Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ دو طرفہ ANOVA سے اخذ کیے گئے تھے۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

تصویر 8|CBD-IL-12 کو STEAP1-mBBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ جوڑنا ٹیومر کے مدافعتی مائکرو ماحولیات کو دوبارہ پروگرام کرتا ہے اور اینٹیجن پریزنٹیشن اور ایپیٹوپ پھیلانے کو فروغ دیتا ہے۔ STEAP1 (اوپر)، B2m (درمیانی)، اور CD3 (نیچے) کے IHC داغ کے فوٹو مائکروگرافس RM9-hSTEAP1 پھیپھڑوں کے ٹیومر کے علاج کے بعد ماؤس کے بغیر منتقلی T خلیات یا STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے ساتھ یا بغیر CBD-IL-12 علاج کے۔ اسکیل بارز=50 µm۔ b بار پلاٹ میٹاسٹیٹک پھیپھڑوں کے ٹیومر (n=4 ٹیومر فی گروپ) میں دراندازی کرنے والے CD3 مثبت خلیوں کی IHC مقدار کو ظاہر کرتا ہے۔ یک طرفہ انووا p=0۔{80}}021۔ ایرر بار SD کے ساتھ مطلب کی نمائندگی کرتا ہے۔ پلاٹ (c) Ly6C− F4/{{20}} MHC-II+ (بائیں، یک طرفہ ANOVA p=0 کی تعدد دکھا رہے ہیں۔{94}}0{ {98}}5) اور Ly6C − F4/80+ iNOS2+ (دائیں، ایک طرفہ ANOVA p=0.0017) میکروفیجز، (d) Ly6C+ F4/ {{36} } MHC-II+ (بائیں، یک طرفہ ANOVA p=0.0038) اور Ly6C+ F4/80+ iNOS2+ (دائیں، ایک طرفہ ANOVA p=ns) میکروفیجز، (e) CD11b+ XCR1+ cDC1 (ایک طرفہ ANOVA p=0.0003), (f) F4/80+ SiglecF+ eosinophils (ایک طرفہ ANOVA p=0۔ 0008)، اور (g) Ly6G+ نیوٹروفیلز (ایک طرفہ ANOVA p=0.0035) کو کل CD45+ سیلوں میں معمول بنایا گیا جیسا کہ غیر منتقلی T خلیات کے ساتھ علاج کے بعد ملٹی پیرامیٹرک فلو سائٹومیٹری کے ذریعے طے کیا جاتا ہے، STEAP{{67 }}mBBζ CAR T خلیات، غیر منتقلی T خلیات اور CBD-IL-12، اور STEAP1- mBBζ CAR T خلیات اور CBD-IL-12 زیادہ سے زیادہ علاج کے ردعمل (نادر) اور ٹیومر کے دوبارہ لگنے پر (دوبارہ لگنا)۔ h بار پلاٹس جو TCR ذخیرے کی 'یکسانیت' کی پیمائش کے طور پر سمپسن کلونالٹی کی نمائندگی کرتے ہیں جس کا تجزیہ TCRB کی ترتیب سے (a) میں چوہوں سے جمع کردہ ٹیومر سے گھسنے والے خلیوں پر کیا جاتا ہے۔ n=4 ٹیومر فی گروپ۔ غیر منتقلی T خلیات + CBD-IL-12 کے لئے P-values ​​untransduced T خلیات اور STEAP1-mBBζ CAR T خلیات کے مقابلے بالترتیب 0.008 اور 0.02 ہیں؛ اور STEAP1-mBBζ CAR T خلیات + CBD-IL-12 untransduced اور STEAP1-mBBζ CAR T سیلز بالترتیب 0.004 اور 0.01 ہیں۔ ایرر بار SD کے ساتھ مطلب کی نمائندگی کرتا ہے۔ پینلز کے لیے (c–g) n=3 ٹیومر فی گروپ، *p <0.05; **p <0.01، ***p <0.001، پینلز میں p-values ​​(b–h) ڈن کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ یک طرفہ ANOVA سے ہیں۔ سورس ڈیٹا سورس ڈیٹا فائل میں فراہم کیا جاتا ہے۔

اینٹی ٹیومر ردعمل کو وسیع کرنے کے لیے، ہم نے STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کے ساتھ مل کر CBD-IL-12 کی سیسٹیمیٹک ایڈمنسٹریشن کی چھان بین کی جو کہ hSTEAP میں ایک پھیلائے ہوئے، syngeneic RM9-hSTEAP1 ٹیومر ماڈل میں 1-KI چوہوں کو mCRPC کی مدافعتی نوعیت کا تخمینہ لگانے کے لیے RM9 کی پیشگی خصوصیات کی بنیاد پر ایک ناقص امیونوجینک ماڈل57,77۔ CBD-IL12 کے ساتھ مشترکہ علاج سے مجموعی طور پر بقا، سائٹوکائن کی پیداوار، ٹیومر اینٹیجن پریزنٹیشن، اور انٹراٹومورل ٹی سیل تنوع میں بہتری آئی جو ایپیٹوپ پھیلاؤ کے ساتھ مطابقت رکھتی ہے۔ ٹیومر کے مدافعتی مائیکرو ماحولیات کی قریبی تحقیقات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ CBD-IL-12 کو STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی میں شامل کرنے سے ٹیومر سٹرومل ریورژن ہوتا ہے اور ٹیومر سے وابستہ نیوٹروفیلز کو کم کرتے ہوئے فعال میکروفیجز اور cDC1 میں اضافہ ہوتا ہے۔ تاہم، ہمارے مطالعے میں علاج حاصل نہیں کیا گیا، اور ہم مزاحمت اور ٹیومر کے بڑھنے کے ممکنہ معاوضہ، انکولی میکانزم کو اجاگر کرتے ہیں جس میں امیونوسوپریسی نیوٹروفیلز اور سی ڈی سی 2 کی بڑھتی ہوئی تعدد بھی شامل ہے جو ٹریگ انڈکشن کو فروغ دے سکتی ہے۔ یہ نوٹ کرنا ضروری ہے کہ اینٹی ٹیومر ردعمل کو زیادہ سے زیادہ کرنے کے لیے CBD-IL-12 کی خوراک اور انتظامیہ کے شیڈول کو مزید بہتر بنانے کی ضرورت پڑ سکتی ہے۔ تاہم، یہ نتائج ریکومبیننٹ سائٹوکائنز78 (مثال کے طور پر، IL-2، IL-12، IL-15، یا IL{{24} کے اظہار کے لیے CAR T خلیوں کو بکتر بند کرنے جیسے مشترکہ مدافعتی طریقوں کی تحقیقات کی حمایت کرتے ہیں۔ }})، امیونو موڈیولٹرز کے ساتھ ایک ساتھ علاج (مثلاً، اینٹی PD-1/PD-L1 یا اینٹی CTLA4)، یا پروسٹیٹ کینسر کے ٹیومر مائیکرو ماحولیات کو دوبارہ بنانے اور CAR T سیل انفیکٹر فنکشن کو بڑھانے کے لیے ٹیومر ڈائریکٹڈ ریڈیو تھراپی۔ جب یہ مخطوطہ تیاری کے مراحل میں تھا، ناروے میں ایک گروپ کے ایک مطالعہ نے امیونوکمپرومائزڈ چوہوں میں ایک subcutaneous 22Rv1 ماڈل میں اینٹی ٹیومر سرگرمی کے ساتھ STEAP1 CAR T سیل تھراپی کی ابتدائی ترقی کی اطلاع دی۔ رپورٹ کردہ STEAP1 CAR STEAP1-BBζ CAR سے مختلف ہے کیونکہ اس میں Oslo1 نامی ایک مصنوعی scFv اور CD8 قبضہ اور ٹرانس میمبرین ڈومین شامل ہے۔ ایک اور امتیازی خصوصیت یہ ہے کہ STEAP1-BBζ CAR T خلیات CD4/CD8 T خلیات کے نارمل تناسب کے ساتھ ایک متعین پروڈکٹ کے طور پر تیار کیے جاتے ہیں جبکہ Oslo1 STEAP1 CAR T خلیات نہیں ہیں۔ Oslo1 STEAP1 CAR T سیل تھراپی سے متعلق مزاحمت اور حفاظتی مطالعات کے طریقہ کار کی اطلاع نہیں دی گئی۔ تاہم، یہ دیکھنا دلچسپی کا باعث ہوگا کہ کس طرح CAR انجینئرنگ اور سیل پروڈکٹ کی ساخت میں یہ فرق اینٹی ٹیومر افادیت، استقامت اور حفاظت پر اثر انداز ہو سکتے ہیں کیونکہ Oslo1 STEAP1 CAR T سیل تھراپی اور ہماری STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی دونوں پروگراموں کا کلینک میں ترجمہ کیا جاتا ہے۔ ہمارے مطالعات کے نتائج نے نیشنل کینسر انسٹی ٹیوٹ (NCI) کے تجرباتی علاج (NExT) پروگرام کے ساتھ شراکت داری کی ہے تاکہ mCRPC والے مردوں کے لیے پہلے انسانوں میں STEAP1-BBζ CAR T سیل تھراپی کا ترجمہ کیا جائے۔ اس ابتدائی مرحلے کے کلینیکل ٹرائل سے حفاظتی اور افادیت کے اشارے اس بات کا تعین کرنے میں مدد کریں گے کہ آیا کینسر کی دیگر اقسام کے لیے اس علاج کے طریقہ کار کی تحقیقات میں بھی کوئی قدر ہو سکتی ہے جو STEAP1 کا بہت زیادہ اظہار کرتی ہے۔

حوالہ جات

1. Siegel, RL, Miller, KD, Fuchs, HE & Jemal, A. کینسر کے اعداد و شمار، 2022. CA: Cancer J. Clinicians 72, 7–33 (2022)۔

2. آرمسٹرانگ، اے جے وغیرہ۔ پریوییل ٹرائل سے کیموتھریپی-نائیو میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر والے مردوں میں enzalutamide کے ساتھ پانچ سالہ بقا کی پیش گوئی اور حفاظتی نتائج۔ یور یورول 78، 347–357 (2020)۔

3. فزازی، کے وغیرہ۔ میٹاسٹیٹک، کاسٹریشن حساس پروسٹیٹ کینسر میں ابیریٹرون پلس پریڈیسون۔ این انگلش جے میڈ 377، 352–360 (2017)۔

4. Scher، HI وغیرہ. کیموتھریپی کے بعد پروسٹیٹ کینسر میں enzalutamide کے ساتھ بقا میں اضافہ۔ این انگلش جے میڈ 367، 1187–1197 (2012)۔

5. پارکر، C. et al. الفا ایمیٹر ریڈیم-223 اور میٹاسٹیٹک پروسٹیٹ کینسر میں بقا۔ این انگلش جے میڈ 369، 213–223 (2013)۔

6. سارٹر، O. et al. میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر کے لیے لیوٹیم-177–PSMA-617۔ این انگلش جے میڈ 385، 1091–1103 (2021)۔

7. Kantoff، PW et al. کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر کے لئے Sipuleucel-T امیونو تھراپی۔ این انگلش جے میڈ 363، 411–422 (2010)۔

8. Jackson, HJ, Rafiq, S. & Brentjens, RJ ڈرائیونگ CAR T-cells کو آگے بڑھانا۔ نیٹ Rev. Clin. اونکول۔ 13، 370–383 (2016)۔

9. وینر، جی جے بلڈنگ بہتر مونوکلونل اینٹی باڈی پر مبنی علاج۔ نیٹ Rev. Cancer 15, 361–370 (2015)۔

10. Chavez, JC, Bachmeier, C. & Kharfan-Dabaja, MA CAR T-cell therapy for B-cell lymphomas: دستیاب مصنوعات کے کلینیکل ٹرائل کے نتائج۔ علاج کا Adv. ہیماتول۔ 10، 2040620719841581 (2019)۔

11. سٹرنر، RC اور سٹرنر، RM CAR-T سیل تھراپی: موجودہ حدود اور ممکنہ حکمت عملی۔ بلڈ کینسر J. 11, 69 (2021)۔

12. سلوین، ایس ایف وغیرہ۔ میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر (mCRPC) والے مریضوں میں P-PSMA-101 CAR-T خلیوں کا مرحلہ 1 مطالعہ۔ جے کلین اونکول۔ 40، 98–98 (2022)۔

13. نارائن، وی وغیرہ۔ پی ایس ایم اے کو نشانہ بنانے والا ٹی جی ایف - میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر میں غیر حساس بکتر بند CAR T خلیات: ایک مرحلہ 1 ٹرائل۔ نیٹ میڈ. 28، 724–734 (2022)۔

14. Paschalis، A. et al. پروسٹیٹ کینسر میں پروسٹیٹ مخصوص جھلی کے اینٹیجن ہیٹروجینیٹی اور ڈی این اے کی مرمت کے نقائص۔ یورو یورول 76، 469–478 (2019)۔

15. چن، این، لی، ایکس، چنٹالا، این کے، ٹانو، زیڈ ای اور ادوسمیلی، پی ایس ڈرائیونگ کاریں ٹھوس ٹیومر میں اینٹیجن ہیٹروجنیٹی کی ناہموار سڑک پر۔ کرر رائے۔ امیونول۔ 51، 103–110 (2018)۔

16. Morgan, RA et al. ERBB2 کو تسلیم کرنے والے chimeric antigen ریسیپٹر کے ساتھ منتقل T خلیوں کی انتظامیہ کے بعد سنگین منفی واقعہ کی کیس رپورٹ۔ مول وہاں جے ایم Soc جین تھیر۔ 18، 843–851 (2010)۔

17. لی، جے کے وغیرہ۔ سیسٹیمیٹک سرفیسوم پروفائلنگ ایڈوانس پروسٹیٹ کینسر کی ذیلی قسموں میں مدافعتی پر مبنی تھراپی کے لیے ہدف کے اینٹیجنز کی شناخت کرتی ہے۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 115, E4473–e4482 (2018)۔

18. Hubert, RS et al. STEAP: ایک پروسٹیٹ مخصوص سیل سطح کا اینٹیجن جس کا اظہار انسانی پروسٹیٹ ٹیومر میں ہوتا ہے۔ پروک نیٹل اکاد۔ سائنس USA 96، 14523–14528 (1999)۔

19. Nolan-Stevaux, O. Abstract DDT02-03: AMG 509: ایک ناول، ہیومنائزڈ، نصف لائف بڑھا ہوا، bispecific STEAP1 × CD3 T سیل XmAb® 2+1 اینٹی باڈی کی بھرتی۔ کینسر ریس 80، DDT02-03-DDT02-03 (2020)۔

20. Grunewald, TG et al. اعلی STEAP1 اظہار Ewing کے سارکوما کے مریضوں میں بہتر نتائج سے وابستہ ہے۔ این۔ اونکول۔ بند. جے یور Soc میڈ. اونکول۔ 23، 2185–2190 (2012)۔

21. Moreaux, J., Kasambara, A., Hose, D. & Klein, B. STEAP1 کینسر میں زیادہ اظہار کیا گیا ہے: ایک امید افزا علاج کا ہدف۔ بائیو کیم۔ بائیوفیس۔ Res. کمیون 429، 148–155 (2012)۔

22. Oosterheert, W. & Gros, P. کریو الیکٹران مائکروسکوپی ڈھانچہ اور پروسٹیٹ 1 (STEAP1) کے انسانی چھ ٹرانس میبرین اپیتھیلیل اینٹیجن کا ممکنہ انزیمیٹک فنکشن۔ J. Biol کیم 295، 9502–9512 (2020)۔

23. جیاؤ، زیڈ وغیرہ۔ پروسٹیٹ 1 ایکسپریشن کا چھ ٹرانس میمبرین اپیتھیلیل اینٹیجن اپیٹیلیل سے میسینچیمل منتقلی کی ترقی میں مدد کرکے ڈمبگرنتی کینسر میٹاسٹیسیس کو فروغ دیتا ہے۔ ہسٹو کیم۔ سیل بائیول۔ 154، 215–230 (2020)۔

24. Gomes, IM, Arinto, P., Lopes, C., Santos, CR & Maia, CJ STEAP1 پروسٹیٹ کینسر اور پروسٹیٹک انٹراپیٹیلیل نیوپلاسیا گھاووں میں بہت زیادہ متاثر ہے، اور یہ گلیسن سکور کے ساتھ مثبت طور پر منسلک ہے۔ یورولوجک آنکولوجی میں: سیمینار اور اصل تحقیقات۔ والیوم 32, 53.e23–53.e29 (Elsevier, 2014)۔

25. Huo, S.-f. ET رحمہ اللہ تعالی. STEAP1 JAK2/ STAT3 سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے پھیپھڑوں کے اڈینو کارسینوما کی میٹاسٹیسیس اور اپیٹیلیل – mesenchymal منتقلی کی سہولت فراہم کرتا ہے۔ بائیوسی Rep. 40, BSR20193169 (2020)۔

26. گومز، آئی ایم وغیرہ۔ STEAP1 کا ناک آؤٹ سیل کی نشوونما کو روکتا ہے اور LNCaP پروسٹیٹ کینسر کے خلیوں میں اپوپٹوس کو اکساتا ہے جو اینڈروجن کے اثر کا مقابلہ کرتا ہے۔ میڈ. اونکول۔ 35، 1–10 (2018)۔

27. Gomes, IM, Maia, CJ & Santos, CR STEAP پروٹین: ساخت سے لے کر کینسر تھراپی میں ایپلی کیشنز تک۔ مول کینسر ریس MCR 10، 573–587 (2012)۔

28. Danila, DC et al. DSTP3086S کا مرحلہ I مطالعہ، ایک اینٹی باڈی-ڈرگ کنجوگیٹ جو پروسٹیٹ 1 کے چھ ٹرانس میبرن اپیتھیلیل اینٹیجن کو نشانہ بناتا ہے، میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر میں۔ جے کلین اونکول۔ بند. جے ایم Soc کلین اونکول۔ 37، 3518–3527 (2019)۔

29. کیلی، ڈبلیو کے وغیرہ۔ AMG 509 کا مرحلہ I مطالعہ، ایک STEAP1 x CD3 T سیل جو XmAb 2+1 مدافعتی تھراپی کی بھرتی کرتا ہے، میٹاسٹیٹک کاسٹریشن مزاحم پروسٹیٹ کینسر (mCRPC) کے مریضوں میں۔ جے کلین اونکول۔ 38، TPS5589–TPS5589 (2020)۔

30. Lin, T.-Y., Park, JA, Long, A., Guo, H.-F. اور چیونگ، N.-KV ناول کا طاقتور اینٹی STEAP1 بائی اسپیفک اینٹی باڈی کینسر کے امیونو تھراپی کے لیے ٹی سیلز کو ری ڈائریکٹ کرنے کے لیے۔ J. Immunother. کینسر 9، e003114 (2021)۔

31. شوبر، ایس جے وغیرہ۔ MHC کلاس I-محدود TCR-Transgenic CD4(+) T Cells Against STEAP1 Vivo میں Ewing Sarcoma کے مقامی ٹیومر پر قابو پاتے ہیں۔ سیلز 9، 1581 (2020)۔

32. Roudier، MP et al. اختتامی مرحلے کے پروسٹیٹ کارسنوما میٹاسٹیٹک سے ہڈی کی فینوٹائپک ہیٹروجنیٹی۔ ہم پاتھول۔ 34، 646–653 (2003)۔

33. Gomes, IM, Santos, CR, Socorro, S. & Maia, CJ پروسٹیٹ 1 کا سکس ٹرانس میمبرین اپیتھیلیل اینٹیجن پروسٹیٹ کے خلیات میں جنسی ہارمونز کے ذریعے نیچے ریگولیٹ کیا جاتا ہے۔ پروسٹیٹ 73، 605–613 (2013)۔

34. تیز، A. et al. پروسٹیٹ کینسر میں کاسٹریشن مزاحمت کے ساتھ اینڈروجن ریسیپٹر اسپلائس ویرینٹ-7 اظہار ابھرتا ہے۔ جے کلین سرمایہ کاری کریں۔ 129، 192–208 (2019)۔

35. بخت، ایم کے وغیرہ۔ پروسٹیٹ کینسر کی نیوروینڈوکرائن تفریق PSMA کو دبانے کا باعث بنتی ہے۔ اینڈوکر - ریلیٹ۔ کینسر 26، 131–146 (2018)۔

36. Ihlaseh-Catalano, SM et al. STEAP1 پروٹین اوور ایکسپریشن پروسٹیٹ کارسنوما میں بائیو کیمیکل تکرار کے لئے ایک آزاد مارکر ہے۔ ہسٹوپیتھولوجی 63، 678–685 (2013)۔

37. گومز، آئی ایم وغیرہ۔ STEAP1 کا ناک آؤٹ سیل کی نشوونما کو روکتا ہے اور LNCaP پروسٹیٹ کینسر کے خلیوں میں اپوپٹوس کو اکساتا ہے جو اینڈروجن کے اثر کا مقابلہ کرتا ہے۔ میڈ. اونکول۔ 35، 40 (2018)۔

38. لوگن، اے سی وغیرہ۔ ٹائٹر کو متاثر کرنے والے عوامل اور لینٹیو وائرل ویکٹرز کی بیماری۔ ہم جین تھیر۔ 15، 976–988 (2004)۔

39. Morgan, RA, Grey, D. Lomova, A. & Kohn, DB Hematopoietic سٹیم سیل جین تھراپی: پیشرفت اور سیکھے گئے اسباق۔ سیل سٹیم سیل 21، 574–590 (2017)۔

40. لارسن، ایس ایم وغیرہ۔ کینسر امیونو تھراپی کے لئے چیمریک اینٹیجن ریسیپٹرز کے ساتھ ہیماٹوپوائٹک اسٹیم سیلز کے جین میں ترمیم کی پری کلینیکل ترقی۔ ہم امیونودر ویکسین۔ 13، 1094–1104 (2017)۔

41. سالٹر، AI وغیرہ۔ chimeric antigen ریسیپٹر سگنلنگ کا فاسفوپروٹیومک تجزیہ حرکیاتی اور مقداری فرق کو ظاہر کرتا ہے جو سیل کے کام کو متاثر کرتے ہیں۔ سائنس سگنل 11، eaat6753 (2018)۔

42. مجزنر، آر جی وغیرہ۔ CAR T-cell کی سرگرمی کے لیے اینٹیجن کثافت کی ضرورت کو ٹیوننگ کرنا۔ کینسر ڈسکو۔ 10، 702–723 (2020)۔

43. چلیتا-عید، پی ایم وغیرہ۔ پروسٹیٹ کے چھ ٹرانس میبرن اپیتھیلیل اینٹیجنز کے مونوکلونل اینٹی باڈیز-1 وٹرو میں انٹر سیلولر کمیونیکیشن اور ویوو میں انسانی ٹیومر زینوگرافٹس کی نشوونما کو روکتی ہیں۔ کینسر ریس 67، 5798–5805 (2007)۔

44. Hudecek، M. et al. chimeric antigen ریسیپٹرز کا غیر سگنلنگ ایکسٹرا سیلولر اسپیسر ڈومین Vivo antitumor سرگرمی کے لیے فیصلہ کن ہے۔ کینسر امیونول۔ Res. 3، 125–135 (2015)۔

45. گومز، آئی ایم، سینٹوس، سی آر اور مایا، پروسٹیٹ سیل لائنوں میں STEAP1 اور STEAP1B کا CJ اظہار، اور پوسٹ ٹرانسکرپشن اور پوسٹ ٹرانسلیشنل میکانزم کے ذریعے STEAP1 کا پوٹیٹو ریگولیشن۔ جینز کینسر 5، 142–151 (2014)۔

46. ​​Bernsel, A., Viklund, H., Hennerdal, A. & Elofsson, A. TOPCONS: جھلی پروٹین ٹوپولوجی کی متفقہ پیشین گوئی۔ نیوکلک ایسڈ Res. 37، W465–W468 (2009)۔

47. کروگ، اے.، لارسن، بی، وون ہیجن، جی اور سون ہیمر، ای ایل ایک پوشیدہ مارکوف ماڈل کے ساتھ ٹرانس میبرن پروٹین ٹوپولوجی کی پیش گوئی: جینوم کو مکمل کرنے کے لیے درخواست۔ جے مول بائول 305، 567–580 (2001)۔

48. لمبی، ہجری وغیرہ۔ 4-1BB کاسٹیمولیشن ٹی سیل کی تھکن کو کم کرتا ہے جو chimeric antigen ریسیپٹرز کے ٹانک سگنلنگ کی وجہ سے ہوتا ہے۔ نیٹ میڈ. 21، 581–590 (2015)۔

49. برجر، C. et al. مرکزی میموری کے خلیات سے حاصل کردہ انفیکٹر CD8+ T خلیوں کی اپنانے والی منتقلی پرائمیٹ میں مستقل T سیل میموری قائم کرتی ہے۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 118، 294–305 (2008)۔

50. Gattinoni، L. et al. اسٹیم سیل جیسی خصوصیات کے ساتھ انسانی میموری ٹی سیل سب سیٹ۔ نیٹ میڈ. 17، 1290–1297 (2011)۔

51. Xu, Y. et al. قریبی طور پر متعلقہ T-میموری اسٹیم سیلز CAR.CD19-T خلیے IL-7 اور IL-15 کے ذریعے محفوظ کیے جاتے ہیں۔ خون 123، 3750–3759 (2014)۔

52. Cieri، N. et al. IL-7 اور IL-15 انسان کی یادداشت کے اسٹیم ٹی سیلز کی تخلیق کو بے ہودہ پیش رو سے ہدایت دیتے ہیں۔ خون 121، 573–584 (2013)۔

53. ہینسل، ڈی ای وغیرہ۔ مورفولوجیکل اور فینوٹائپک طور پر الگ الگ سمورتی پرائمری چھوٹے سیل نیوروینڈوکرائن کارسنوما اور پروسٹیٹ کے اڈینو کارسینوما میں مشترکہ TP53 جین تغیر۔ پروسٹیٹ 69، 603–609 (2009)۔

54. Cuzick، J. et al. پروسٹیٹ کینسر کے مریضوں میں سیل سائیکل پھیلاؤ والے جینوں سے اخذ کردہ آر این اے اظہار کے دستخط کی تشخیصی قدر: ایک سابقہ ​​​​مطالعہ۔ لینسیٹ آنکول۔ 12، 245–255 (2011)۔

55. Chen, ME, Lin, SH, Chung, LW & Sikes, RA Isolation and characterization of PAGE-1 and GAGE-7. LNCaP پروسٹیٹ کینسر کے بڑھنے کے ماڈل میں نئے جین کا اظہار کیا گیا ہے جو میلانوما سے وابستہ اینٹیجنز کے ساتھ ہومولوجی کا اشتراک کرتے ہیں۔ J. Biol کیم 273، 17618–17625 (1998)۔

56. بیلی، پی اے، یوشیدا، کے.، کیان، ڈبلیو.، سہگل، آئی اور تھامسن، ٹی سی پروگریشن ٹو اینڈروجن غیر حساسیت کے لیے ایک ناول ان وٹرو ماؤس ماڈل برائے پروسٹیٹ کینسر۔ J. سٹیرایڈ بائیو کیم۔ مول بائول 52، 403–413 (1995)۔

57. مراد، جے پی وغیرہ۔ پری کنڈیشنگ ٹھوس ٹیومر CAR T سیل کی افادیت اور endogenous حفاظتی استثنیٰ کو بڑھانے کے لیے TME میں ترمیم کرتی ہے۔ مول وہاں جے ایم Soc جین تھیر۔ 29، 2335–2349 (2021)۔

58. برونڈا، ایم جے وغیرہ۔ مورین ٹیومر کے خلاف انٹرلییوکن 12 کی اینٹی ٹیومر اور اینٹیٹیمسٹیٹک سرگرمی۔ J. Exp. میڈ. 178، 1223–1230 (1993)۔