کیٹیچن کے ساتھ لییکٹیٹ ڈیہائیڈروجنیز A کو نشانہ بنانا SNU620/5FU گیسٹرک کینسر کے خلیوں کو 5- فلوروراسل حصہ 1 میں دوبارہ حساس بناتا ہے

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ:کینسر کے علاج کے خلاف مزاحمت تقریباً ہر قسم کے کینسر میں ہوتی ہے اور کینسر کے علاج میں ایک بڑی مشکل بن جاتی ہے۔ اگرچہ 5-فلووروراسل (5FU) گیسٹرک کینسر کے لیے اینٹی کینسر تھراپی کا پہلا انتخاب ہے، لیکن منشیات کے خلاف مزاحمت کی وجہ سے اس کی تاثیر محدود ہے۔ حال ہی میں، تبدیل شدہ کینسر میٹابولزم، بشمول واربرگ اثر، توانائی کی پیداوار کے لیے آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن کی بجائے گلائکولائسز کی ترجیح، کیموتھراپی کے خلاف مزاحمت کو منظم کرنے والے ایک اہم طریقہ کار کے طور پر قبول کیا گیا ہے۔ اس طرح، ہم نے قائم شدہ گیسٹرک کینسر سیل لائنوں، SNU620 اور SNU620/5FU.SNU620/5FU، ایک گیسٹرک کینسر سیل کو پناہ دینے والے، بہت زیادہ مزاحمت اور اعلی پیداوار کو ظاہر کرتے ہوئے، SNU620 اور SNU620/5FU.SNU620/5FU کا استعمال کرتے ہوئے 5FU مزاحمت کو کم کرنے میں antiglycolytic ایجنٹوں کے تفصیلی طریقہ کار اور ممکنہ افادیت کی چھان بین کی۔ کیglycolysis سے متعلق خامروں، جیسا کہ لییکٹیٹ ڈیہائیڈروجنیز A(LDHA)، والدین کے SNU620 خلیوں کی نسبت۔ گلائکولائسز کو محدود کرنے کے لیے، ہم نے کیٹیچن اور اس کے مشتقات کی جانچ کی، جو معلوم ہیں۔غیر سوزشیاور اینٹی کینسر قدرتی مصنوعات کیونکہ ایپیگلوکیٹچن گیلیٹ کو پہلے LDHA اظہار کو دبانے والے کے طور پر رپورٹ کیا گیا ہے۔ کیٹیچن، ان میں سب سے آسان مرکب، لییکٹیٹ کی پیداوار اور ایل ڈی ایچ اے کی سرگرمی پر سب سے زیادہ روکنے والا اثر رکھتا ہے۔ اس کے علاوہ، 5FUand catechin کے امتزاج نے SNU620/5FU خلیات میں اضافی سائٹوٹوکسیٹی اور حوصلہ افزائی ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) میڈیٹیڈ اپوپٹوس کو دکھایا۔ اس طرح، ان نتائج کی بنیاد پر، ہم کیٹیچن کو ایک نئی ضمنی دوا کی ترقی کے لیے امیدوار کے طور پر تجویز کرتے ہیں جو ایل ڈی ایچ اے کو محدود کر کے 5FU تک کیمورسٹینس کو کم کر دیتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ:5-فلوروورسلکیموریسسٹنٹ; glycolysis; lactate dehydrogenase; کیٹیچن

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

گیسٹرک کینسر کے علاج میں بنیادی ٹیومر اور 5-فلوروراسیل (5FU) پر مبنی مشترکہ کیموتھراپی، جیسے ایپیروبیسن، سیسپلٹین، اور فلوروراسل اور ڈوسیٹیکسل، آکسالیپلاٹن، اور 5FU[1] کے جراحی سے علاج میں قابل ذکر پیشرفت حاصل کی گئی ہے۔ ,21 آج تک، 5FU، uracil کا ایک اینالاگ جو تھائیمائیڈلیٹ سنتھیز [3] کو روک کر DNA کی ترکیب کو روکتا ہے، گیسٹرک کینسر کے علاج کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والی کیموتھراپی کی دوا بنی ہوئی ہے [1, A4]۔ تاہم، کیموتھراپی کی طبی افادیت غیر تسلی بخش رہی ہے کیونکہ منشیات کی مزاحمت سے متعلق بنیادی یا میٹاسٹیٹک کینسر کے دوبارہ شروع ہونے کی وجہ سے [1,5]۔

Cistanche قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

کئی سیلولر پروسیسز کو کلیدی میکانزم کے طور پر سمجھا جاتا ہے جو کیمورسٹینس کے تحت ہیں، بشمول منشیات کو چالو کرنا یا غیر فعال کرنا، ڈی این اے کے نقصان کی مرمت کی مشینری، منشیات کے اہداف میں ترمیم، اپوپٹوٹک راستوں کو غیر فعال کرنا، اور آٹوفجی میں اضافہ [6,7]۔ کینسر متفاوت ہے اور مختلف کینسر انرجی میٹابولزم کے لیے گلائکولیسس اور آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن دونوں کا استعمال کرتے ہیں [8]۔ تاہم، میٹابولک ری پروگرامنگ، خاص طور پر غیر معمولی ایروبک گلائکولیسس، گیسٹرک کینسر میں کیموتھراپیٹک ادویات، بشمول 5FU، کے خلاف مزاحمت کی نشوونما میں ایک اہم کھلاڑی کے طور پر رپورٹ کیا گیا ہے [9]۔ Lactate dehydrogenase A (LDHA) اور pyruvate dehydrogenase kinases (PDKs) کو ایروبک گلائکولیسس کے کلیدی ریگولیٹرز کے طور پر جانا جاتا ہے جو پائروویٹ سے لییکٹیٹ پیدا کرتے ہیں[10,11]۔ dichloroacetate کا مجموعہ، PDK کا ایک قائم کردہ روکنا، 5FU کی طرف حساسیت کو بحال کرتا ہے [12]۔ اس کے علاوہ، ایل ڈی ایچ اے، ایک کلیدی انزائم جو پائروویٹ کو لییکٹیٹ میں تبدیل کرتا ہے، کو گیسٹرک کینسر کے علاج کے لیے ممکنہ ہدف کے طور پر رپورٹ کیا گیا ہے [13,14]۔ کینسر کے خلیوں میں LDHA اظہار کی ناک آؤٹ مائیٹوکونڈریل سانس کو بڑھانے اور خلیوں کی عملداری کو کم کرنے کے ذریعے ٹیومرجنیسیٹی کو روکتا ہے [15]۔ کئی LDHA روکنے والے، جیسے FX11، PSTMB، اور GSK 2837808A، ATP کی سطح کو کم کرتے ہیں اور آکسیڈیٹیو تناؤ پیدا کرتے ہیں، اور آخر کار اپوپٹوٹک سیل کی موت کا سبب بنتے ہیں [16-18]۔ اگرچہ ایک مطالعہ نے یہ ظاہر کیا ہے کہ مائیکرو آر این اے کے ذریعے ایل ڈی ایچ اے کی روک تھام نے بڑی آنت کے کینسر میں 5FU کے خلاف مزاحمت کو بحال کیا ہے [19]، لیکن پچھلے کسی مطالعہ نے کیمورسٹینس پر جینیاتی یا فارماسولوجیکل LDHA روکنے والوں کے اثرات کی اطلاع نہیں دی ہے۔

سبز چائے کے پولی فینول، بشمول کیٹیچن (CA)، ایپیکیٹیچن (EC)، gallocatechin (GC)، epigallocatechin (EGC)، epicatechin-3-gallate (ECG)، اور epigallocatechin-3-gallate (EGCG)، انسانوں کو فروغ دیتے ہیں۔ کئی بیماریوں کی روک تھام اور علاج کے ذریعے صحت، بشمول سوزش، ذیابیطس، دل کی بیماری، اور مہلک کینسر [20,21]۔ پولیفینولز میں سے، EGCG AMPK کے راستوں کو چالو کرکے اور کینسر کے تناؤ کو محدود کرکے کولوریکٹل کینسر اور ہیپاٹو سیلولر کارسنوما سیلز میں 5FU کیموسینسیٹیٹی کو بڑھاتا ہے [22,23]۔ اس کے علاوہ، EGCG کو چھاتی اور لبلبے کے کینسر کے خلیات [24,25] میں اپنے تاثرات کو دبا کر ایل ڈی ایچ اے کو روکنے کی اطلاع دی گئی ہے۔

اس مطالعے میں، ہم نے یہ قیاس کیا کہ CA گیسٹرک کینسر کے خلیوں میں 5FU کے خلاف مزاحمت کو کم کرنے کے لیے معاون دوا کے لیے امیدوار ہو سکتا ہے۔ اس کی جانچ کی گئی کہ CA کا روک تھام کا اثر، اور/یا 5FU کے ساتھ اس کا امتزاج، LDHA سرگرمی پر اس طرح 5FU مزاحم خلیوں میں مائٹوکونڈریل ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (ROS) اور اپوپٹوٹک سیل کی موت کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔

2. نتائج

2.1 5FU مزاحم خلیات کی گلائکولٹک خصوصیات

بڑھا ہوا پھیلاؤ chemoresistance کی ایک خصوصیت ہے جس میں 5FU مزاحم کینسر کے خلیات شامل ہیں [26,27]۔ سب سے پہلے، ہم نے 5FU کے خلاف مزاحمت اور SNU620 اور SNU620/5FU سیلز کی طویل مدتی شرح نمو کی تصدیق کی۔ جب ان خلیوں کو 48 گھنٹے کے لیے 5FU کی نشاندہی شدہ ارتکاز کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا، SNU620/5FU خلیات (100.63 uM) میں 50 فیصد نمو کی روک تھام (Gl50) کا باعث بننے والی تخمینی خوراک اس کے والدین کے SNU620 خلیوں میں GIso کی وجہ سے بہت زیادہ تھی۔ (شکل 1A اور ضمنی شکل S1)۔ مزید برآں، SNU620/5FU خلیوں کی شرح نمو SNU620 خلیات (شکل 1B اور ضمنی اعداد و شمار S2) کے مقابلے میں تیز تھی۔ چونکہ کیمورسٹینس اور تیزی سے بڑھتی ہوئی خصوصیات گیسٹرک کینسر کے خلیوں میں بلند گلیکولیٹک خصوصیات سے متعلق ہو سکتی ہیں [28]، ایکسٹرا سیلولر تیزابیت کی شرح (ECAR) اور آکسیجن کی کھپت کی شرح (OCR) کو دونوں خلیوں میں آکسامیٹ کی موجودگی میں ماپا گیا، جو کہ ایک معروف ہے۔ glycolysis inhibitor، یا نہیں. نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ SNU620/5FU خلیات SNU620 خلیوں کے ذریعے چھپنے والے سے زیادہ لییکٹیٹ کو نمایاں طور پر خفیہ کرتے ہیں اور اس کے بعد کلچر میڈیم (شکل 1C اور سپلیمنٹری فگر S3) کو تیزابیت دیتے ہیں۔ تاہم، ان خلیات (شکل 1D) کے درمیان OCR میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دیکھی گئی۔ LDHA کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح کی پیمائش کی گئی۔ LDHA اظہار SNU620/5FU خلیوں میں SNU620 خلیوں کی نسبت زیادہ تھا (شکل 1E، F)۔ مزید، ہم نے PDK آاسوٹائپس کے mRNA اور پروٹین ایکسپریشن لیول کا جائزہ لیا اور پایا کہ PDK2 اور PDK3 SNU620/5FU سیلز میں SNU620 سیلز (ضمنی اعداد و شمار S4A، B) کے مقابلے میں زیادہ تھے۔ pyruvate dehydrogenase (PDHA1) کے E1 subunit کے فاسفوریلیشن، جس میں PDKs کے ذریعے اضافہ کیا گیا تھا، کا بھی جائزہ لیا گیا، اور یہ SNU620/5FU خلیوں میں SNU620 خلیات (ضمنی اعداد و شمار S4C) کے مقابلے میں زیادہ پایا گیا۔ اس کے علاوہ، ہم نے استعمال کیا۔ SNU620/5FU خلیوں میں 5FU مزاحمت پر قابو پانے کے لیے LDHA inhibitor کے طور پر oxamate۔ اس مرکب نے SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں (ضمنی اعداد و شمار S5) دونوں میں خلیوں کی نشوونما کو روکا۔ مزید، آکسامیٹ کے ساتھ علاج اور 5FU دبانے والے خلیوں کی نشوونما، آکسامیٹ یا 5FUin SNU620/5FU خلیات (شکل 1G) کے ساتھ انفرادی علاج کے مقابلے میں۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ SNU620/5FU خلیات LDHA کا بہت زیادہ اظہار کرتے ہیں، اور LDHA سرگرمی کی روک تھام SNU/5FU خلیوں کی 5FU کی مزاحمت پر قابو پا سکتی ہے۔

شکل 1. نتائج کے مطابق،5-فلوروورسیل (5FU) مزاحم خلیات میں ایک بلند گلائکولیٹک خصوصیت ہے:(A)SNU620 اور SNU620/5FU سیلز کو 48 گھنٹے کے لیے 5FU کی نشاندہی شدہ ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔ ان خلیوں کی قابل عملیت کا اندازہ MTT پرکھ کے ذریعے کیا گیا؛ (B) SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں کی نمو کی سطح کو MTT پرکھ کے ساتھ 4 دن تک ہر دن ماپا گیا؛ (C,D) SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں کا علاج آکسامیٹ ( 5mM) یا 24 گھنٹے کے لیے نہیں، اور ECAR اور OCR قدروں کا جائزہ Seahorse XF تجزیہ کار کے ذریعے کیا گیا؛ (E, F) SNU620 اور SNU620/5FU سیلز میں LDHA کے تاثرات کا پتہ qRT-PCR اور ویسٹرن بلاٹ تجزیہ کے ذریعے کیا گیا؛ (G) SNU620 اور SNU620/5FU خلیات کا علاج 48h کے لیے oxamate (25 mM) اور/یا 5FU（10μM） کے ساتھ کیا گیا۔ نتائج اوسط ± SEM کے طور پر دکھائے گئے ہیں۔**p<0.01><><><0.01,and ##=""><0.001, compared="" with="" the="" respective="" control.="" ecar,="" extracellular="" acidification="" rates;="" ocr,="" oxygen="" consumption="" rates;="" ldha,="" lactate="" dehydrogenase="" a.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

2.2 CA LDHA سرگرمی کو دباتا ہے۔

لییکٹیٹ کی پیداوار کا تجزیہ CA اور اس کے مشتقات کے ساتھ کیا گیا، بشمول EC، GC، EGC، اور EGCG، SNU620/5FU خلیوں میں۔ ان مشتقات کے مقابلے میں، CA نے زیادہ مؤثر طریقے سے لییکٹیٹ کی پیداوار کو کم کیا (شکل 2A)۔ مزید برآں، وٹرو میں، LDHA سرگرمی جیسا کہ کہا جاتا ہے، کی تصدیق ہو گئی، اور CA نے LDHA کی سرگرمی پر اس کے مشتقات (شکل 2B) کے مقابلے میں زیادہ مضبوط روک تھام کا اثر دکھایا۔ وٹرو ایل ڈی ایچ اے اور ایل ڈی ایچ بی کی سرگرمیوں پر سی اے کے روکنے والے اثرات کو خوراک پر منحصر انداز میں ماپا گیا۔ CA نے LDHB کی سرگرمی کو متاثر کیے بغیر LDHA سرگرمی کو روکا (شکل 2C، D)۔ مزید برآں، LDHA اور LDHB کی سرگرمیوں کو EGCG سے ماپا گیا، جو LDHA سرگرمی کو روکنے کے لیے جانا جاتا ہے، اور پایا گیا کہ خوراک پر منحصر کمی ہوئی ہے (ضمنی اعداد و شمار S6A, B)۔ مزید برآں، انٹرا سیلولر LDHA اور LDHB کی سرگرمیوں کا اندازہ SNU620/5FU خلیوں میں CA کے اشارے شدہ ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔ CA نے وٹرو نتائج میں خوراک پر منحصر انداز میں LDHA سرگرمی کو روکا لیکن LDHB سرگرمی نہیں (شکل 2E، F)۔ P-PDHA1، PDK2، PDK3، اور LDHA کی پروٹین ایکسپریشن لیول بھی CA علاج (ضمنی شکل S7) کے بعد SNU620/5FU خلیوں میں ماپا گیا، اور ہم نے مشاہدہ کیا کہ وہ اس علاج سے متاثر نہیں ہوئے تھے۔ یہ نتائج تجویز کرتے ہیں کہ CA اس کے اظہار کو متاثر کیے بغیر LDHA کی سرگرمی کو منظم کرتا ہے۔

2.3۔ سی اے کے ذریعہ ایل ڈی ایچ اے کی روک تھام کا طریقہ کار

CA اور اس کے مشتقات پر LDHA سرگرمی کی روک تھام کے طریقہ کار کا تجزیہ کرنے کے لیے، ہم نے انسانی recombinant LDHA اور CA (شکل 3A,B) کے درمیان پابند تعامل کی مالیکیولر ماڈلنگ کی۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ CA LDHA کے T94, A95, Q99, R105, S136, R168, H192, اور T247 کے باقیات کے ساتھ تعامل کر سکتا ہے۔ ان میں R105، S136، اور R168 سبسٹریٹ (pyruvate) بائنڈنگ کے لیے اہم ہیں۔ اس طرح، ہم نے فرض کیا کہ CA سبسٹریٹ بائنڈنگ سائٹس میں مداخلت کر سکتا ہے۔ اس کے برعکس، EGCG ایک مختلف سائٹ کے ذریعے LDHA کا پابند ہے۔ CA کی طرف سے LDHA کی روک تھام کے طریقہ کار کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، Michaelis-Menten اور Lineweaver-Burk پلاٹوں کی تصدیق pyruvate اور CA کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کی گئی۔ ایل ڈی ایچ اے کی سرگرمی کو پیروویٹ خوراک پر منحصر انداز میں بڑھایا گیا تھا۔ تاہم، یہ CA کے اضافے سے الٹ گیا۔ اس طرح، Michaelis-Menten اور Lineweaver-Burk پلاٹوں کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ CA LDHA (Figure 3C, D) کے لیے ایک غیر مسابقتی روک تھام کرنے والا ہے۔ اس کے علاوہ، isothermal titration calorimetry (ITC) ڈیٹا نے یہ ظاہر کیا کہ CA جسمانی طور پر LDHA سے ​​ایک Kd کے ساتھ منسلک ہے۔ 197 uM کی قدر (ضمنی شکل S8)۔ یہ نتائج بصیرت فراہم کرتے ہیں کہ CA LDHA کی سبسٹریٹ بائنڈنگ سائٹ کو پابند کرنے کے ذریعے LDHA سرگرمی کو دباتا ہے۔

2.4 CA LDHA سرگرمی کو کم کرنے کے ذریعے 5FU مزاحمت کو دوبارہ حساس بناتا ہے۔

ہم نے SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں پر CA کے سائٹوٹوکسک اثرات کا جائزہ لیا اور پایا کہ CA نے خلیوں کے دونوں گروہوں میں نمو کو دبایا ہے (شکل 4A)۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ نمو کی روک تھام کا تعلق LDHA سرگرمی کے دبانے سے تھا، LDHA کے اظہار کو LDHA (shLDHA) کے لیے شارٹ ہیئرپین رائبونیوکلک ایسڈ (shRNA) کے ذریعے ختم کر دیا گیا تھا اور اس کا اظہار LDHA ایکسپریسنگ پلاسمڈ (ضمنی اعداد و شمار S9A، B) کے ذریعے بازیافت کیا گیا تھا۔ ).shLDHA- منتقلی SNU620/5FU خلیوں میں، CA کے علاج سے لییکٹیٹ کی پیداوار اور سیل کی عملداری میں واضح طور پر تبدیلی نہیں کی گئی، ان کے مقابلے میں فرضی منتقلی والے خلیات (شکل 4B، C)۔ اس کے علاوہ، CA کی نشوونما کو روکنے والا اثر LDHA-knockdown SNU620/5FU خلیات (شکل 4D) میں LDHA اظہار کی بازیابی سے اضافہ ہوا۔ مزید، SNU620 اور SNU620/5FU سیلز کا انفرادی طور پر CA اور 5FU کے علاج یا دونوں کے امتزاج کے بعد معائنہ کیا گیا۔ CA اور 5FU کے ساتھ علاج نے SNU620/5FU خلیوں کی نشوونما کو نمایاں طور پر روکا (شکل 4E)۔ مزید برآں، CA اور 5FU کے امتزاج کے اثرات کو کئی دیگر سیل لائنوں میں جانچا گیا، جیسے کہ انسانی گیسٹرک کینسر AGS، لبلبے کے کینسر کی گھبراہٹ-1، MIA PaCa-2، اور بڑی آنت کے کینسر LS174T اور RKO خلیوں کے مقابلے SNU620 اور SNU620/5FUcells۔ لییکٹیٹ کی پیداوار اور LDHA اظہار نے ایک دوسرے کے ساتھ اچھا تعلق ظاہر کیا، اور SNU620/5FU، AGS، اور RKO (ضمنی اعداد و شمار S10A، B) میں یہ گلائکولیٹک خصوصیات نسبتاً زیادہ ہیں۔ مزید برآں، CA اور 5FU کے امتزاج کے علاج نے خلیوں کی عملداری کو نمایاں طور پر کم کیا، AGS اور RKO (ضمنی اعداد و شمار S10C) سمیت گلائکولٹک خلیوں میں 5FU کے واحد علاج کے مقابلے میں۔ تاہم، CA اور 5FU کے ساتھ علاج نے SNU620، Panic-1، MIA PaCa-2، اور LS174T سیلوں میں نمو کو نمایاں طور پر روکا نہیں، جس میں LDHA کے کم تاثرات ظاہر ہوئے۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ CA کے 5FU مزاحم خلیوں کو حساس کرنے کا اثر LDHA سرگرمی پر اس کے روکنے والے اثر سے متعلق ہوسکتا ہے۔

تصویر 2۔ کیٹیچن (CA) LDHA کی سرگرمی کو روکتا ہے لیکن اس کے اظہار کو نہیں: (A) SNU620/5FU کی لییکٹیٹ پیداوار کو CA مشتقات （10 μM） کے ساتھ 24 گھنٹے کے علاج کے بعد ماپا گیا تھا۔ CA مشتقات (10 uM) اور oxamate (20 mM) کے ساتھ؛ (C, D) وٹرو میں، LDHA اور LDHB سرگرمیوں کا تخمینہ CA کی نشاندہی کردہ ارتکاز کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ (E، F) خلیوں کا علاج 24 گھنٹے کے لیے CA کے اشارے شدہ ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔ انٹرا سیلولر ایل ڈی ایچ اے اور ایل ڈی ایچ بی کی سرگرمیوں کو سیل لائسیٹس کو بطور انزائم ماخذ استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ نتائج کو اوسط ± SEM کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ **p<0.01><0.001, compared="" to="" the="" control="" (1st=""><><0.01,and><0.001,compared to="" the="" negative="" control="" (second="" column).ldha,="" lactate="" dehydrogenase="" a;="" ldhb,="" lactate="" dehydrogenase="" b.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

شکل 4. 5FU مزاحم خلیوں میں کیٹیچن (CA) اور 5- فلوروراسل (5FU) کے ساتھ علاج کے ذریعہ سیل کی عملداری کو روکا گیا تھا: (A) SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں کی قابل عملیت کا اندازہ کیا گیا تھا کہ مندرجہ ذیل ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔ 48 گھنٹے کے لیے CA؛ （B）SNU620/5FU-pLKO.1 اور SNU620/5FU-shLDHA خلیات کو 24 گھنٹے کے لیے CA（10 μM） کے ساتھ علاج کیا گیا۔ SNU620/5FU-pLKO.1 اور SNU620/5FU-shLDHA خلیات؛ (C, D)SNU620/5FU-pLKO.1, SNU620/5FU-pLKO.1, SNU620/5FU-shLDHA، SNU620/5FU-pLKO.1 اور SNU620/5FU-pLKO.1 کے کلچر میڈیا میں لییکٹیٹ کی پیداوار کی پیمائش کی گئی۔ ، اور SNU620/5FU-shLDHA پلس LDHA#2 خلیوں کا علاج 48 گھنٹے کے لیے CA کی نشاندہی شدہ ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔ MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی عملداری کی پیمائش کی گئی؛ (E) SNU620 اور SNU620/5FU خلیوں کا علاج CA （10 μM） اور/یا 5FU（10μM）) سے 48 گھنٹے تک کیا گیا۔ ان خلیوں کی قابل عملیت کو MTT پرکھ کے ذریعے ماپا گیا تھا۔ نتائج بطور اوسط ±SEM.*p دکھائے گئے ہیں۔<><0.01,and**><><0.05, ##=""><0.01, and="" ##t=""><0.001, compared="" with="" the="" respective="" control.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

یہ مضمون Int سے ماخوذ ہے۔ جے مول سائنس 2021، 22، 5406۔ https://doi.org/10.3390/ijms22105406 https://www.mdpi.com/journal/ijms