Exosomal PD-L1 کو گردش کرنے کا پتہ لگانے کے طریقے

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

گردش کرنے والے exosomal PD-L1 کا پتہ لگانے کے لئے قبول شدہ اور مرکزی دھارے کے طریقوں کی اب بھی کمی ہے۔ روایتی خارجی پتہ لگانے کے طریقے جیسے کہ اینزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) اور بہاؤ کے تجزیہ کو گردش کرنے والے exosomes میں PD-L1 کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، اور ELISA فی الحال سب سے زیادہ استعمال شدہ طریقہ ہے۔ ELISA طریقہ گردش کرنے والے exosomes میں PD-L1 کے مواد کا مقداری طور پر پتہ لگا سکتا ہے اور کام کرنا آسان ہے۔ فلو سائٹومیٹری کا استعمال بڑے نمونوں میں گردش کرنے والے exosomal PD-L1 کا مقداری طور پر پتہ لگانے کے لیے کیا جا سکتا ہے، لیکن اس کے لیے اعلیٰ پتہ لگانے والے آلات کی ضرورت ہوتی ہے۔ exosomes پر گہری تحقیق کے ساتھ، exosomal پروٹینز اور نیوکلک ایسڈز کا پتہ لگانے کے طریقے بھی افزودہ اور تیار کیے گئے ہیں، اور کچھ نئے طریقے PD-L1 کو گردش کرنے والے exosomes میں پتہ لگانے کے میدان میں متعارف کرائے گئے ہیں (شکل)۔

کا پتہ لگاناگردشexosomalPD-L1

1. ڈیجیٹل پی سی آر

ایکزومز میں نیوکلک ایسڈ کی تھوڑی مقدار کی وجہ سے، روایتی پتہ لگانے کے طریقوں کے لیے ان کے جین کاپی نمبروں کا درست پتہ لگانا مشکل ہے۔ ڈیجیٹل پی سی آر ٹیکنالوجی ایک نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کا طریقہ ہے جس میں انتہائی حساسیت اور مطلق مقدار ہے۔ اس کی حساسیت ایک واحد نیوکلک ایسڈ مالیکیول کی سطح تک پہنچ سکتی ہے، اس لیے اس کے exosomes کے نیوکلک ایسڈ مواد کا پتہ لگانے میں فوائد ہیں۔ محققین نے میلانوما اور غیر چھوٹے خلیے کے پھیپھڑوں کے کینسر کے مریضوں کے پلازما exosomes میں PD-L1 mRNA کاپی نمبر کا درست طریقے سے تجزیہ کرنے کے لیے ڈیجیٹل PCR ٹیکنالوجی کا استعمال کیا اور پلازما exosomal PD-L1 mRNA کاپی نمبر اور اینٹی PD1 ارتباط کے درمیان تعلق کا انکشاف کیا۔ علاج کے اثرات کے درمیان. ڈیجیٹل PCR ٹیکنالوجی کے متعارف ہونے سے exosomal PD-L1 mRNA کی کھوج کی صلاحیت میں نمایاں بہتری آئی ہے، جو exosomal PD-L1 کی تحقیق کے لیے بہت اہمیت کی حامل ہے۔ تاہم، exosomal PD-L1 mRNA کے مواد اور PD-L1 پروٹین کے اظہار کے درمیان تضادات ہو سکتے ہیں۔ لہذا، اکیلے exosomal PD-L1 mRNA کی کھوج میں کچھ نقائص ہوسکتے ہیں، جن کے لیے مزید تحقیق اور وضاحت کی ضرورت ہے۔

انسداد کینسر صحرائی cistanche cistanche کے عرق سے فائدہ اٹھاتا ہے۔

2. ایلیسا

ELISA ایک روایتی امیونولوجیکل تجزیہ کا طریقہ ہے، جو اکثر پلازما یا کلچر میڈیم میں چھوٹے مالیکیولر پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ اس میں اعلیٰ حساسیت ہے اور اس کا مقداری تجزیہ کیا جا سکتا ہے۔ ELISA کو exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے اور نمونوں کے بڑے بیچوں کی مقداری کھوج حاصل کر سکتا ہے۔ ELISA طریقہ کے اصول پر مبنی PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے والی کٹ کا اطلاق پلازما exosomal PD-L1 پروٹین کی مقداری پتہ لگانے پر بھی کیا گیا ہے۔ چن وغیرہ۔ ELISA کے اصول پر مبنی ایک exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کا نظام بنایا، جو سیل کلچر میڈیم یا پلازما سے اخذ کردہ exosomal PD-L1 پروٹین کی کھوج کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ لکیری پتہ لگانے کی حد {{10}} تھی۔{11}}.0 ng/mL۔ ELISA exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے ایک اچھا طریقہ ہے، جس کا مقداری طور پر پتہ لگانا آسان ہے اور اس کی تکرار بھی اچھی ہے۔ تاہم، پلازما میں مفت PD-L1 پروٹین کی موجودگی کی وجہ سے، یہ اس کی درستگی میں مداخلت کرے گا۔ لہذا، یہ طریقہ گردش کا پتہ لگاتا ہے. Exosomal PD-L1 پروٹین کی حساسیت اور خصوصیت کو ابھی مزید دریافت کرنے کی ضرورت ہے۔

Herba cistanche جڑ: انسداد کینسر

3. بہاؤ تجزیہ کا طریقہ

فلو سائٹومیٹری کا استعمال اکثر مائع میں معلق خلیوں یا دیگر حیاتیاتی ذرات کو ٹائپ کرنے اور گننے کے لیے کیا جاتا ہے، اس لیے اس طریقہ کو خارجی شناخت اور گنتی میں بھی متعارف کرایا گیا ہے۔ تھیوڈوراکیس وغیرہ۔ سر اور گردن کے کینسر کے مریضوں کے پلازما میں ابتدائی طور پر الگ الگ exosomes کے لیے پہلے کرومیٹوگرافی کا استعمال کیا اور پھر PD-L1-مثبت exosomes کا پتہ لگانے اور شمار کرنے کے لیے بہاؤ کے تجزیہ کا استعمال کیا۔ PD-L1 پروٹین ایکسپریشن کو فلوروسینس کی شدت کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اس طریقہ میں exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے میں اچھی تولیدی صلاحیت ہے، اور اس کا انٹرا انفرادی تغیر 7 فیصد ہے جب ایک ہی مریض کے نمونے پر متعدد متوازی اسیس کیے جاتے ہیں۔ ایک ہی وقت میں، طریقہ کار کی درستگی کی تصدیق کرنے کے لیے، محققین نے exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے حوالہ کے طریقہ کار کے طور پر confocal fluorescence analysis کا استعمال کیا۔ تین نمونوں کا متوازی طور پر تجربہ کیا گیا، اور نتائج کا موازنہ کیا گیا، اور یہ پایا گیا کہ فلو سائٹومیٹری اور کنفوکال فلوروسینس تجزیہ کے نتائج انتہائی مطابقت رکھتے تھے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ فلو سائٹومیٹری exosomal PD-L1 کے مقداری تجزیہ کے لیے ایک درست طریقہ ہے۔ اس کے علاوہ، LUX et al. فلو سائٹومیٹری کے ذریعے لبلبے کے کینسر کے مریضوں کے سیرم میں exosomal PD-L1 اور c-Met پروٹین کے اظہار کا بھی کامیابی سے پتہ چلا، لیکن پتہ لگانے کے طریقہ کار کی کارکردگی کا مزید مطالعہ کرنے کی ضرورت ہے۔ فی الحال، خاص طور پر exosome پتہ لگانے کے لیے استعمال ہونے والے فلو اینالائزر بھی لانچ کیے گئے ہیں، جیسے کہ Apogee انتہائی حساس نینو فلو اینالائزر، جو روایتی بہاؤ تجزیہ کاروں کے مقابلے exosome پروٹین کی کھوج کے لیے زیادہ موزوں ہے۔

cistanche tubulosa extract supplement کا فائدہ: اینٹی ٹیومر اور کینسر

4. سطح سے بہتر رمن سکیٹرنگ ٹیکنالوجی

سرفیس اینہانسڈ رمن سکیٹرنگ (SERS) ایک انتہائی حساس فنگر پرنٹ سپیکٹروسکوپی تکنیک ہے جو بایومیڈیکل شعبوں میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتی رہی ہے۔ فی الحال، اسکالرز نے exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے SERS ٹیکنالوجی کا استعمال کیا ہے۔ محققین نے پہلے TiO2-تبدیل شدہ مقناطیسی موتیوں کو پلازما میں غیر مخصوص طور پر جذب کرنے کے لیے استعمال کیا، اور پھر سونے کے نینو پارٹیکلز میں ترمیم کرنے کے لیے PD-L1 اینٹی باڈیز سے منسلک SERS تحقیقات کا استعمال کیا، اور پھر exosome نمونوں کو سونے کے نینو پارٹیکلز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا۔ یہ ایک مقناطیسی مالا-ایکزووم-گولڈ نینو پارٹیکل کمپلیکس ڈھانچہ بناتا ہے، اور آخر میں کمپلیکس کو افزودہ کرنے اور الگ کرنے کے لیے مقناطیسی فیلڈ کا استعمال کرتا ہے، اور پھر پتہ لگانے کے لیے لیزر کنفوکل رامان اسپیکٹومیٹر پر رکھ دیتا ہے، تاکہ PD-L1 مثبت exosomes کی کھوج کا احساس ہو سکے۔ . جسمانی مواد کا پتہ لگانا۔ اس طریقہ میں پتہ لگانے کی حساسیت زیادہ ہے، اور اس کی سب سے کم پتہ لگانے کی حد 1 PD-L1 پلس exosome/μL پلازما تک پہنچ سکتی ہے۔ اس کے علاوہ، محققین نے اس طریقہ کار کو مختلف ارتکاز کے ساتھ نمونوں کے ایک گروپ کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ SERS کی شدت کا تعلق خطی طور پر exosome نمونوں کے ارتکاز کے لوگارتھم سے تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ پتہ لگانے کے طریقہ کار میں اچھی استحکام ہے اور اسے براہ راست پلازما میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اضافی exosome تنہائی کے مرحلے کے بغیر exosomes کا پتہ لگائیں۔ فی الحال، exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کے لیے SERS ٹیکنالوجی کے براہِ راست استعمال کے بارے میں کچھ مطالعات موجود ہیں، لیکن دیگر exosomes کی کھوج کے لیے SERS ٹیکنالوجی کے استعمال پر تحقیق کی گئی ہے، جس کا ایک اہم حوالہ بھی ہے۔ exosomal PD-L1 پروٹین کی قدر کا پتہ لگانے کے لیے۔

صحرائی سیستانچ کی بڑھتی ہوئی صورتحال

5. HOLMES-ExoPD-L1 طریقہ

HOLMES-ExoPD-L1 طریقہ exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کا ایک نیا طریقہ ہے۔ اس طریقہ کار میں، PD-L1 پروٹین کو نشانہ بنانے والا ایک نیا MJ5C اپٹیمر ڈیزائن کیا گیا تھا، جو PD-L1 پروٹین کو exosome جھلی پر مؤثر طریقے سے باندھ سکتا ہے اور PD-L1 پروٹین گلائکوسیلیشن کے ذریعے اس میں مداخلت نہیں کی جاتی ہے۔ اس طریقہ کار میں، فلوروسینٹلی لیبل لگا ہوا MJ5C اپٹیمر اور exosomes سب سے پہلے ایک دوسرے سے منسلک ہونے کے لیے ایک پتلی کیپلیری میں اکٹھے کیے گئے تھے، اور انفراریڈ لیزر کو مائکرون پیمانے پر درجہ حرارت کا میلان بنانے کے لیے پتلی کیپلیری میں مرکوز کیا گیا تھا۔ مفت MJ5C aptamer اور exosomal MJ5C آپٹیمر کمپلیکس کے تھرموفورسس کی شرحیں نمایاں طور پر مختلف تھیں، اور مفت اپٹیمر کی تھرموفوریٹک کمی exosome-aptamer کمپلیکس کی نسبت تیز تھی۔ الگ کر دیا. لہذا، اتیجیت روشنی کی کارروائی کے تحت، exosomal PD-L1 پروٹین کے مواد کا تعین فلوروسینٹ لیبل والے اپٹیمرز کی فلوروسینس کی شدت کا پتہ لگا کر کیا جا سکتا ہے۔ اس طریقہ کار میں زیادہ حساسیت اور 17.6 pg/mL کی شناخت کی حد ہے۔ اس کے علاوہ، اس میں نمونے کے کم حجم اور مختصر پتہ لگانے کے وقت کے فوائد بھی ہیں۔ Exosomal PD-L1 پروٹین کی کھوج کے لیے یہ ایک انتہائی اصل طریقہ ہے، جو کہ نئے کی نشوونما کے لیے بہت اہم ہے Exosomal PD-L1 پروٹین کا پتہ لگانے کا طریقہ روشن قدر رکھتا ہے۔

اینٹی ٹیومر: cistanche سپلیمنٹ

Exosomal PD-L1 کے مہلک ٹیومر امیونو تھراپی کے میدان میں وسیع اطلاق کے امکانات ہیں اور یہ exosome تحقیق کے میدان میں ہاٹ سپاٹ میں سے ایک بن گیا ہے۔ ٹشو PD-L1 ایکسپریشن کی کھوج کے مقابلے میں، گردش کرنے والے exosomal PD-L1 کا پتہ لگانا نمونوں کو حاصل کرنا اور حقیقی وقت کا پتہ لگانا آسان ہے، جبکہ پیتھولوجیکل سیمپلنگ کی وجہ سے ٹشو ہیٹروجنیٹی کے مسئلے سے بچتے ہوئے؛ exosomal PD-L1 بھی ٹیومر استثنی کی طرف جاتا ہے. یہ فرار کی ایک اہم وجہ ہے اور اس کا تعلق مہلک ٹیومر کے بڑھنے سے ہے، اور یہ بیماری کی تشخیص اور تشخیص کی پیشن گوئی کے لیے ایک اہم اشارہ بن سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، پلازما exosomal PD-L1 کی سطحوں کو بھی اینٹی PD-L1 امیونو تھراپی کے لیے موزوں مریضوں کی اسکریننگ اور علاج کے لیے ان کے ردعمل کی پیش گوئی کرنے کے لیے استعمال کیے جانے کی توقع ہے۔ تاہم، گردش کرنے والے exosomes PD-L1 کا پتہ لگانے کے لیے ابھی تک تسلیم شدہ اور موثر طریقوں کی کمی ہے۔ سادہ یا بغیر علیحدگی، کم نمونے کی طلب، زیادہ حساسیت، اچھی تکرار کی صلاحیت، اور کم حساس پتہ لگانے والے سگنلز کے ساتھ ایک مثالی گردش کرنے والا ایکزوم قائم کرنا ضروری ہے۔ Vivo میں PD-L1 کا پتہ لگانے کا طریقہ۔ گردش کرنے والے exosomal PD-L1 کے پتہ لگانے کے طریقہ کار کو ابھی مزید گہرائی سے تحقیق کی ضرورت ہے، لیکن یہ خیال کیا جاتا ہے کہ مستقبل میں پتہ لگانے کے نئے طریقوں کی ترقی اور اطلاق کے ساتھ، گردش کرنے والا exosomal PD-L1 اینٹی PD1 امیونو تھراپی کی بہتر رہنمائی کر سکے گا۔ اور مہلک ٹیومر کی تشخیص اور علاج میں استعمال کیا جائے۔ زیادہ اہم کردار ادا کریں۔