بوڑھے قبض چوہے کے ماڈل میں شوچ پر Cistanche Deserticola کا علاج کا اثر
Mar 27, 2022
رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791
Xia Zhang، Fa-Juan Zheng، Zhen Zhang
خلاصہ
پس منظر
قبض معدے کی دائمی فعال بیماریوں میں سے ایک ہے۔ یہ زندگی کے معیار کو سنجیدگی سے متاثر کرتا ہے۔ Cistanche deserticola (C. deserticola) ظاہر ہے کہ قبض کا علاج کر سکتا ہے، لیکن اس کا طریقہ کار واضح نہیں کیا گیا ہے۔ ہمیں لگتا ہے کہ اس کے طریقہ کار نے انٹرسٹیشل کیجل سیلز (آئی سی سی) کو متحرک کرکے آنتوں کی حرکت کو بہتر بنایا ہے۔ آئی سی سی کی سطح پر سی کٹ ریسیپٹر کی ایکٹیویشن کا آئی سی سی کے فنکشن سے گہرا تعلق ہے، اور سٹیم سیل فیکٹر (ایس سی ایف)/سی کٹ سگنلنگ پاتھ ویز اس میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ اس طریقہ کار کی چھان بین کرنے کے لیے کہ C. deserticola کس طرح قبض کا علاج کرتا ہے، اس تحقیق کا مقصد چوہوں میں قبض کا ماڈل قائم کرنا اور علاج میں SCF/C-کٹ سگنلنگ پاتھ وے کے کردار کو دریافت کرنا ہے۔
مقصد
C. deserticola کے کردار میں SCF/C-Kit سگنلنگ پاتھ ویز کو دریافت کرنے کے لیے قبض چوہے کے ماڈل کے ذریعے قبض کے علاج۔
طریقے
اڑتالیس 8-ماہ پرانے اسپراگ – ڈاؤلی چوہوں کو بے ترتیب وزن کے طریقے سے 4 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: نارمل گروپ (n=12)، ماڈل گروپ (n=12)، C. deserticola گروپ (n=12) اور بلاکر گروپ (n=12)۔ نارمل گروپ کو گاویج کے ذریعے نارمل نمکین ملا۔ ماڈل گروپ نے گیویج کے ذریعہ لوپیرامائڈ حاصل کیا؛ بلاکر گروپ نے لوپیرامائڈ اور سی ڈیزرٹیکولا کو گیویج کے ذریعے حاصل کیا، اور STI571 کو انٹراپریٹونی طور پر انجکشن لگایا گیا۔ علاج کے دوران، ہر 10 دن بعد وزن، فیکل گرینولز، اور فیکل کی کوالٹی ریکارڈ کی گئی۔ ماڈل شامل کرنے کے 20 ویں دن، ہر گروپ کے بڑی آنت کے ٹشوز کو ہٹا دیا گیا۔ پیتھولوجیکل تبدیلیوں کا مشاہدہ کرنے کے لئے ہیماتوکسیلین اور ای اوسین داغ کا استعمال کیا گیا تھا۔ SCF، C-kit، اور Aquaporin جینز کے اظہار کی سطح کا پتہ امیونو ہسٹو کیمسٹری، ویسٹرن بلوٹنگ، اور ریئل ٹائم مقداری پولیمریز چین ری ایکشن کے ذریعے پایا گیا۔ نوآبادیاتی اپکلا مائٹوکونڈریا اور گوبلٹ سیلز کا مشاہدہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے ذریعے کیا گیا۔
نتائج
عام گروپ کے مقابلے میں، جیسے جیسے علاج آگے بڑھا، ماڈل اور بلاکر گروپوں میں چوہوں کا وزن نمایاں طور پر کم ہوا، پاخانہ کا وزن کم ہوا، اور پاخانہ کا معیار خشک تھا (P < {{0}}}۔{6}="" }5)۔="" c.="" deserticola="" نے="" جسمانی="" وزن="" اور="" پاخانہ="" کے="" وزن="" میں="" کمی="" اور="" پاخانہ="" کے="" معیار="" کو="" بہتر="" کیا۔="" ہسٹوپیتھولوجیکل="" تجزیہ="" نے="" اشارہ="" کیا="" کہ="" ماڈل="" گروپ="" میں="" کالونک="" میوکوسل="" اپیتھیلیم="" نامکمل="" تھا،="" اور="" غدود="" کی="" ترتیب="" بے="" قاعدہ="" یا="" خراب="" تھی۔="" c.="" deserticola="" کے="" ساتھ="" علاج="" سے="" اپیتھیلیل="" خلیوں="" کی="" سالمیت="" اور="" تسلسل="" اور="" غدود="" کی="" باقاعدہ="" ترتیب="" میں="" بہتری="" آئی۔="" مسدود="" کرنے="" والے="" ایجنٹوں="" نے="" c.="" deserticola="" immunohistochemistry="" کے="" اثرات="" کو="" روکا="" اور="" ریئل="" ٹائم="" مقداری="" پولیمریز="" چین="" کے="" رد="" عمل="" سے="" ظاہر="" ہوا="" کہ="" ماڈل="" گروپ="" کے="" کالونک="" ٹشو="" میں="" scf="" اور="" c-kitprotein="" یا="" جینز="" کا="" اظہار="" کم="" ہوا="" (p=""><0.05)، جبکہ="" c="" کے="" ساتھ="" علاج="" کے="" دوران۔="" deserticola="" نے="" پروٹین="" یا="" جین="" کے="" اظہار="" میں="" اضافہ="" کیا="" (p=""><0.05)۔ مغربی="" بلوٹنگ="" نے="" ظاہر="" کیا="" کہ="" ایکواپورین="" apq3="" کے="" اظہار="" میں="" اضافہ="" ہوا،="" جبکہ="" ماڈل="" گروپ="" میں="" cx43="" کا="" اظہار="" کم="" ہوا۔="" c.="" deserticolain="" کے="" ساتھ="" علاج="" نے="" apq3="" کے="" اظہار="" کو="" روکا="" اور="" cx43="" کے="" اظہار="" کو="" فروغ="" دیا۔="" ٹرانسمیشن="" الیکٹران="" مائیکروسکوپی="" نے="" ظاہر="" کیا="" کہ="" ماڈل="" گروپ="" میں="" کالونک="" اپیتھیلیم="" کا="" مائٹوکونڈریا="" سوجن="" اور="" بے="" ترتیبی="" سے="" ترتیب="" دیا="" گیا="" تھا،="" اور="" مائیکرویلی="" بہت="" کم="" تھے۔="" c.="" deserticola="" گروپ="" میں="" حالت="" بہتر="" تھی۔="" sti571="" بلاکر="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" گئے="" چوہوں="" نے="" تصدیق="" کی="" کہ="" scf/c-kit="" کے="" راستے="" کو="" مسدود="" کرنے="" سے="" c.="" deserticola="" کے="" قبض="" کی="" بہتری="" کو="" روکتا="">
نتیجہ
C. deserticola نے قبض کے ساتھ چوہوں میں شوچ کو بہتر کیا، اور SCF/C-kitsignaling پاتھ وے، جو کہ ICC فنکشن کی ایک اہم کڑی ہے، نے علاج میں اہم کردار ادا کیا۔
کلیدی الفاظ:Cistanche deserticola; بزرگ قبض؛ سٹیم سیل عوامل؛ سی کٹ
تازہ cistanche خام مال
تعارف
بوڑھے قبض (SC) معدے کی عام بیماریوں میں سے ایک ہے جو جراثیمی مریضوں میں معدے کی عام بیماریوں میں سے ایک ہے، جو دماغی امراض اور دیگر امراض کو جنم دیتی ہے یا اس میں اضافہ کرتی ہے اور بزرگ آبادی کے معیارِ زندگی کو سنجیدگی سے متاثر کرتی ہے[1,2]۔ روایتی چینی طب کے مطابق، اہم SCare معدے کی گرمی کی etiology اور pathogenesis، Yin اور Jin کی کمی، اور آنتوں کا گیلا ہونا[3,4]، جبکہ Cistanche deserticola (C. deserticola) گردوں کو گرم کر سکتا ہے اور آنتوں کو آرام پہنچا سکتا ہے۔ محققین نے رپورٹ کیا ہے کہ آنتوں کے اثرات حرکت پذیری میں بہتری اور ایس سی کا علاج واضح ہے، لیکن اس کا طریقہ کار واضح نہیں کیا گیا ہے[5,6]۔ انٹرسٹیشل کیجل سیلز (ICCs) معدے کی نالی میں ایک خاص قسم کے mesenchymal خلیات ہیں۔ ICCs کی سطح پر C-kit ریسیپٹر کی ایکٹیویشن کا سیل کے پھیلاؤ، تفریق اور فعل سے گہرا تعلق ہے۔ ICCs معدے کی موٹر کی بہت سی خرابیوں کے روگجنن میں حصہ لیتے ہیں[7,8]۔ سی کٹ کی ایکٹیویشن اس کے لیگینڈ اسٹیم سیل فیکٹر (SCF) کے پابند ہونے پر منحصر ہے[9]۔ سی کے اثر اور عمل کے طریقہ کار کی تحقیقات کے لیے۔ deserticola on SC، اس مطالعہ کا مقصد چوہوں میں ایک SC ماڈل قائم کرنا ہے جس کا مقصد لوپیریڈول کی طرف سے حوصلہ افزائی کرنا ہے تاکہ C. deserticola کے قبض کے علاج میں SCF/C-کٹ سگنلنگ پاتھ وے کے کردار کو تلاش کیا جا سکے۔
مواد اور طریقے
تجرباتی مواد
تجرباتی جانور:تجرباتی جانور 48 نر 8-موجود Sprague Dawley چوہے تھے جن کا وزن 500-550 g; سبھی چانگشا تیانکن بائیوٹیکنالوجی کمپنی سے خریدے گئے ہیں۔ لمیٹڈ چوہوں کو Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd. کی جانوروں کی لیبارٹری میں پالا گیا، جس کو دن اور رات کی روشنی، کھانے پینے کی معمول دی گئی تھی۔ تمام طریقہ کار Chongqing کے روایتی چائنیز میڈیسن ہسپتال کی اخلاقیات کمیٹی کی طرف سے جاری کردہ انتظامی رہنما خطوط پر عمل کرتے ہیں۔
بنیادی ری ایجنٹس:بنیادی ری ایجنٹس میں لوپیرامائیڈ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یونائیٹڈ سٹیٹس)، ہوبی جوروئی روایتی چائنیز میڈیسن ڈیکوکشن کو سی ڈیزرٹیکولا شامل تھے۔ لمیٹڈ، چینی سیلیک کمپنی لمیٹڈ سے STI571، اور SCF, C-kit, connexin 43 (Cx43), aquaporin 3 (AQP3) اور ایکٹین اینٹی باڈیز (Abcam, Cambridge, MA, United States), PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit and Premix Taq™ (Ex Taq™ ورژن 2۔{9}})(Takara Co. Ltd., Japan)۔
cistanche جڑی بوٹیاں اقتباس سپلیمنٹس
طریقے
ایس سی ماڈل کی تیاری اور گروپ بندی:تجرباتی نتائج پر جسمانی وزن جیسے الجھنے والے عوامل کے اثر سے بچنے کے لیے، چوہوں کو تصادفی طور پر بلاک بے ترتیب گروپنگ کے طریقہ کار کے ذریعے گروپ کیا گیا تھا۔ اڑتالیس چوہوں کو 1 ہفتے کے لیے موافقت کے ساتھ کھانا کھلایا گیا، اور چوہوں کو ہلکے سے بھاری تک وزن کے حساب سے شمار کیا گیا۔ جسمانی وزن کی ترتیب کے مطابق، چوہوں کو 12 زونز میں تقسیم کیا گیا تھا (ہر زون میں چوہوں کا وزن ایک جیسا تھا)، ہر زون میں 4 چوہے تھے۔ 12 زونز کو 12 کے 4 گروپس میں تقسیم کیا گیا تھا (نارمل، ماڈل، سی ڈیزرٹیکولا، اور بلاکر)۔ ماڈل گروپ میں چوہوں کو لوپیرامائیڈ (0۔{14}}625/100 g, 10 mL/kg) گیویج کے ذریعے دی گئی۔ پہلی خوراک کی خوراک کو دوگنا کر دیا گیا تھا، اور دوائی ہر روز 10:00 بجے، دن میں ایک بار لگاتار 20 دنوں تک دی جاتی تھی۔ نارمل گروپ کو گیویج کے ذریعہ عام نمکین کی اتنی ہی مقدار دی گئی۔ اس کے علاوہ، ماڈل گروپ کا علاج C. deserticola (0.156 g/100 g، 10 ml/kg) سے گیویج کے ذریعے کیا گیا۔ دی بلاکر گروپ کو C. deserticola (0.156 g/100 g, 10 mL/kg) gavage اور STI571 (25 mg/mL, 1 mL/kg) intraperitoneal انجیکشن کے ذریعے دیا گیا۔ تجربے کے دوران، جسمانی وزن، پاخانہ کا وزن، اور پاخانہ کی حالت ہر 10 دن بعد ریکارڈ کی گئی۔ کسی بھی چوہوں کی حادثاتی موت نہیں ہوئی۔ بیس دن بعد، چوہے مارے گئے، اور کالونی ٹشو کو جانچنے اور مائع نائٹروجن کے تحفظ کے لیے ہٹا دیا گیا۔ باقی حصوں کو طے اور سرایت کیا گیا تھا۔
ہسٹوپیتھولوجیکل تجزیہ:راتوں رات روزہ رکھنے والے چوہوں کو اگلے دن 7 فیصد کلورل ہائیڈریٹ (5 ملی لیٹر/کلوگرام) کے ساتھ انٹرا پیریٹونیل انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی۔ بڑی آنت کے ٹشو کو الگ کرنے کے لیے پیٹ کو کھولا گیا تھا، اور بڑی آنت کا 8-10 ملی میٹر ہٹا دیا گیا تھا۔ آنتوں کے مواد کو پہلے سے ٹھنڈا پولی بیوٹلینی سوسینیٹ میں ہلکے سے ہلا کر ہٹا دیا گیا اور 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ فکسیٹو محلول میں 24 گھنٹے کے لیے طے کیا گیا۔ روایتی پیرافین ایمبیڈنگ کی گئی۔ ٹشو سیکشنز (5 μm) کو ہیماتوکسیلین اور eosin کے داغ کے لیے ہٹا دیا گیا تھا، اور ہسٹوپیتھولوجیکل مورفولوجی کو ایک خوردبین کے تحت دیکھا گیا تھا۔
امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ کے ذریعے ایس سی ایف اور سی کٹ کے اظہار کا پتہ لگانا:اوپر ہسٹوپیتھولوجی کے ذریعہ جانچے گئے پیرافین ٹشوز کو سیکشن کیا گیا تھا، سیکشن شدہ زائلین ڈی ویکسڈ گریڈینٹ ایتھنول کے ساتھ ری ہائیڈریٹ کیا گیا تھا، اینٹیجن کو گرمی سے ٹھیک کیا گیا تھا، اور کمرے کے درجہ حرارت پر بکری کے سیرم کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے سیل کیا گیا تھا۔ ایس سی ایف اور سی کٹ پرائمری اینٹی باڈیز کو ڈراپ وار شامل کیا گیا تھا، اور ٹشوز کو راتوں رات 4 ڈگری پر رکھا گیا تھا۔ پولی بیوٹیلین سوسینیٹ کے ساتھ کلی کرنے کے بعد، ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز کو سیکنڈری اینٹی باڈی کا لیبل لگانے کے لیے چھوڑ دیا گیا، پولی بیوٹائلین سکسینیٹ کے ساتھ 5 منٹ تک کلی کیا گیا، ڈراپ 2،4-ڈائیمینوبوٹیرک ایسڈ کروموجن سلوشن، ہیماتوکسیلین کے ساتھ دوبارہ رنگنا، ریورس گریڈینٹ، الکول ڈی ہائیڈریشن اور ٹرانسپریل ڈی ہائیڈریشن کے ذریعے رال مہر. خوردبینی طور پر، مرکزے ارغوانی نیلے رنگ کے تھے، اور مثبت نتائج کی مصنوعات بھورے پیلے یا پیلے رنگ کے ذرات تھے۔
ریئل ٹائم کوانٹیٹیٹو پولیمریز چین ری ایکشن (RT-qPCR) کے ذریعے کالونک ٹشو میں C-kit mRNA کے اظہار کا پتہ لگانا:جمے ہوئے چوہے کے کالونی ٹشو کو ہوموجنائزر کے ذریعے گراؤنڈ کیا گیا تھا، اور 1 ملی لیٹر RNAiso Plus شامل کیا گیا تھا۔ کالونک ٹشو کا کل RNA کلوروفارم/isopropanol طریقہ سے نکالا گیا تھا، اور RNA کوالٹی کا پتہ جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے کیا گیا تھا۔ بائیو ریڈ جیل امیجر کے ذریعے شناخت کیے جانے کے بعد، 1 ug RNA کو Takara PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit کے ذریعے cDNA میں تبدیل کیا گیا۔ NCBI ڈیٹا بیس جین ID: 64030 کے مطابق، C-Kit جین کا CDS خطہ ملا اور اس کے ساتھ NCBI پرائمر-بلاسٹ ڈیزائن پرائمر ترتیب، جسے Sangon Biotech Co. Ltd، C-kit پرائمر سیکوینس سینس اسٹرینڈ 5'-AGGT GTACCGTTTCCTGTCCC-3'، اینٹی سینس اسٹرینڈ 5'-GGCTGGATTTGCTTTGCTGCTGCTGTCC-3'، -{1}}' ایکٹین سینس اسٹرینڈ 5'-CTTCCTTCGGGGTATGGAATC-3'، اینٹی سینس اسٹرینڈ 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'۔ پی سی آر ایمپلیفیکیشن بائیو-راڈ سی ایف ایکس 90 ریئل ٹائم پی سی آر آلے پر انجام دیا گیا تھا۔ پی سی آر پرکھ کی شرائط ابتدائی طور پر 5 منٹ کے لیے 95 ڈگری، 30 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری کے 30 سائیکل، 30 سیکنڈ کے لیے 60 ڈگری اور 1 منٹ کے لیے 72 ڈگری پر اس کے بعد 10 منٹ کے لیے 72 ڈگری پر حتمی توسیع تھی۔ 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct قدر - -actin Ctvalue) کو متعلقہ جین اظہار کا تجزیہ کرنے کے لیے لیا گیا تھا۔
مغربی بلوٹنگ کے ذریعے کالونک ٹشو میں Cx43 اور AQP3 کے پروٹین ایکسپریشن لیول کا پتہ لگانا:تقریباً 1 سینٹی میٹر منجمد کالونک ٹشو کو اکٹھا کیا گیا اور اسے RIPA مضبوط پائرولیس مائع (100 μL) کے ساتھ لیس کیا گیا۔ ٹشو کو گلاس ہوموجینائزر کے ساتھ 20 بار ہم آہنگ کیا گیا اور 1.5 ملی لیٹر سینٹرفیوج ٹیوب میں منتقل کیا گیا۔ سپرنٹنٹنٹ کو 12000 rpm پر سینٹرفیوگریشن کے بعد 4 ڈگری پر 5 منٹ کے لیے نکالا گیا تھا، اور سپرنٹنٹ میں کل پروٹین کا ارتکاز BCA طریقہ سے طے کیا گیا تھا۔ ہم نے سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس انجام دینے کے لیے 25ug ڈینیچرڈ پروٹین کو ہٹا دیا اور پھر جیل میں موجود پروٹین کو 200 ایم اے کے مستقل کرنٹ پر پولی وینیلائیڈین فلورائیڈ میمبرین میں منتقل کیا پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے کے لیے 5 فیصد سکم دودھ کے بند مائع سے سیل کر دیا۔ متعلقہ بنیادی اینٹی باڈیز کو سگ ماہی کے سیال سے پتلا کیا گیا، راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا، پھر جھلی کی مزاحمت کو دھویا گیا اور دوسری اینٹی باڈیز شامل کی گئیں۔ ای سی ایل سیال شامل کرنے کے بعد، آپٹیکل کثافت کے تجزیے کے ذریعے انہیں ٹیسٹ کے لیے ایکسپوزر میٹر کے نیچے رکھا گیا۔
ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی:ہم نے تقریباً 1 سینٹی میٹر قریبی کالونک ٹشو لیا، اسے 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائیڈ میں 24 گھنٹے کے لیے طے کیا، درجہ بندی شدہ ایسیٹون کے ساتھ پانی کی کمی کی، Epon812 میں سرایت کی، اور الٹرا مائیکروٹوم پر 50 nm الٹراتھین حصے کاٹے۔ حصوں کو 10 منٹ تک کمرے کے درجہ حرارت پر یورینیم ڈائی آکسائیڈ ایسٹیٹ اور لیڈ سائٹریٹ رنگنے والے مائع سے داغ دیا گیا تھا۔ ہم نے فلپس ٹیکنی-10 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ کے تحت کالونک ولی، اپیتھیلیل سیل مائٹوکونڈریا، اور گوبلٹ سیلز کا مشاہدہ کیا۔
شماریاتی تجزیہ
SPSS 19۔{1}} سافٹ ویئر ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور گراف پیڈ Prism8.4 سافٹ ویئر کو نتائج کی منصوبہ بندی کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ Shapiro-Wilk کے ٹیسٹ کو نارملٹی ٹیسٹنگ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ نارمل تقسیم کے ساتھ ڈیٹا کو اوسط ± SD سے ظاہر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد ہیموگلوبن کے اوسط ± SD کی نمائندگی کرنے کے لئے خرابی والی اشیاء استعمال کی گئیں۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ دو گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ متعدد گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے تغیر کا تجزیہ استعمال کیا گیا۔ اسٹوڈنٹ-نیومین-کیولس طریقہ جوڑوں میں متعدد گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور ڈنیٹ کا ٹیسٹ ہر تجرباتی گروپ اور کنٹرول گروپ کے درمیان فرق کو ترتیب میں ماپنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ وابستہ ڈیٹا کو متعدد ٹائم پوائنٹس سے ماپا گیا تھا، اور تغیر کے بار بار پیمائش کے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا تھا۔ منعقد کیا. اگر گولائی ٹیسٹ نے P > 0 دکھایا۔{10}}5، متغیر کا بار بار پیمائشی ڈیٹا کا تجزیہ استعمال کیا گیا۔ اگر P <0.05، تو="" عمومی="" تخمینہ="" کی="" مساوات="" لی="" گئی="" تھی۔="" ڈیٹا="" جو="" عام="" تقسیم="" کے="" مطابق="" نہیں="" تھا="" کی="" نمائندگی="" m="" (p25,="" p75)="" کے="" ذریعے="" کی="" گئی="" تھی،="" اور="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" کرسکل-والس="" ایچ="" رینک="" سم="" ٹیسٹ="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" χ2ٹیسٹ="" کا="" استعمال="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کرنے="" کے="" لیے="" کیا="" گیا="" تھا="" جب="" ڈیٹا="" غیر="" ترتیب="" شدہ="" ڈیٹا="" تھا،="" اور="" پیئرسن="" کا="" χ2ٹیسٹ="" استعمال="" کیا="" جاتا="" تھا="" اگر="" نظریاتی="" فریکوئنسی="" والے="" خلیوں="" کا="" تناسب=""><5><20 فیصد="" تھا۔="" اگر="" نظریاتی="" فریکوئنسی=""><5 والے="" خلیات="" کا="" تناسب="" 20="" فیصد="" سے="" زیادہ="" یا="" اس="" کے="" برابر="" تھا،="" تو="" فشر="" کا="" درست="" ٹیسٹ="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" p=""><0.05 کا="" استعمال="" اس="" بات="" کا="" تعین="" کرنے="" کے="" لیے="" کیا="" گیا="" تھا="" کہ="" فرق="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="">
شکل 1 کالونک ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں۔
نتائج
عام حالات
عام گروپ کے مقابلے لوپیرامائیڈ کے گیجج کے ایک دن بعد، ماڈل گروپ میں جسمانی وزن اور پاخانہ کے وزن میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P < {{0}}.05)،="" لیکن="" پاخانے="" کے="" معیار="" میں="" کوئی="" خاص="" فرق="" نہیں="" تھا۔="" سکور="" (p=""> 0.05)۔ C. ماڈل گروپ میں صحرائی علاج نے جسمانی وزن اور پاخانہ کے وزن میں کمی کو سست کردیا (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
کالونک ہسٹوپیتھولوجی
چوہوں کے کالونک ٹشو کے ہیماتوکسیلین اور ای اوسین کے داغ کو شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ نارمل گروپ میں آنتوں کی ویلی برقرار تھی، آنتوں کا میوکوسا برقرار اور مسلسل تھا، خلیات اور غدود باقاعدگی سے ترتیب دیے گئے تھے۔ Mucosa اور submucosa سوزش کے خلیات کی طرف سے گھس نہیں کیا گیا تھا، اور ٹشو کی ساخت عام تھی. ماڈل گروپ میں، آنتوں والی اور میوکوسا بڑے پیمانے پر تباہ ہو گئے تھے، مقامی وِلی کو بہایا گیا تھا اور ڈھیلے طریقے سے ترتیب دیا گیا تھا، اور غدود کی ساخت کا کچھ حصہ غائب ہو گیا تھا۔ C. deserticola گروپ میں، ہسٹوپیتھولوجیکل سٹیننگ ماڈل گروپ کے مقابلے میں کم تھا، لیکن سومگوبلٹ خلیوں میں نیکروسس تھا۔ C.deserticola گروپ کے مقابلے میں بلاکر گروپ میں انٹراپیریٹونیئل انجیکشن کے بعد، آنتوں کی وللی کا مقامی نقصان اب بھی موجود تھا، اور آنتوں کی میوکوسا میں فریکچر اور نقصان تھا۔
شکل 2 امیونو ہسٹو کیمیکل پتہ لگانے کے ذریعے کالونک ٹشو میں اسٹیم سیل فیکٹر اور رشتہ دار آپٹیکل ڈینسٹی تناسب کا اظہار۔
امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ کے ذریعے سٹیم سیل فیکٹر اور سی کٹ پروٹین کے اظہار کا پتہ لگانا
امیونو ہسٹو کیمیکل داغ نے ظاہر کیا کہ کنٹرول گروپ کے کالون میں ایس سی ایف اور سی کٹ کا اظہار کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں ایس سی ایف اور سی کٹ کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P < 0۔{5}}5)۔="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" c.="" deserticola="" گروپ="" میں="" scf="" اور="" c-kit="" کے="" اظہار="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" تھا="" (p="">< 0.05)۔="" بلاکر="" اور="" ماڈل="" گروپس="" (p=""><0.05، اعداد="" و="" شمار="" 2="" اور="" 3)="" کے="" درمیان="" ایس="" سی="" ایف="" اور="" سی="" کٹ="" کے="" اظہار="" میں="" کوئی="" فرق="" نہیں="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ C. deserticola کے ذریعہ ایڈجسٹ کردہ C-kit اظہار نے قبض کی بہتری میں حصہ لیا، اور بلاکرز نے C کی افادیت کو روکا۔ deserticola
cistanche سالسا فوائد
مغربی دھبہ
ویسٹرن بلوٹنگ سے پتہ چلتا ہے کہ AQP3 پروٹین کا اظہار معمولی کنٹرول گروپ میں کم سطح پر کیا گیا تھا، جب کہ کنٹرول گروپ (شکل 5) (P < 0="" کے="" مقابلے="" ماڈل="" گروپ="" میں="" اس="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" تھا۔{6}}5)="" .="" c.="" deserticola="" کے="" ساتھ="" علاج="" کے="" بعد="" aqp3="" پروٹین="" کا="" اظہار="" کم="" ہوا،="" اور="" aqp3="" کے="" اظہار="" پر="" c.deserticola="" کے="" روکے="" ہوئے="" اثر="" کو="" بلاکر="" ٹریٹمنٹ="" (p=""><0.05) سے="" روکا="" گیا۔="" cx43="" کا="" اظہار="" aqp3="" کے="" برعکس="" تھا۔="" ان="" نتائج="" نے="" تجویز="" کیا="" کہ="" sc="" والے="" چوہوں="" پر="" c.="" deserticola="" کا="" فارماسولوجی="" اثر="" cx43="" کے="" اظہار="" کو="" فروغ="" دے="" کر="" اور="" aqp3="" (اعداد="" و="" شمار="" 5-7)="" کے="" اظہار="" کو="" روک="" کر="" حاصل="" کیا="" گیا="">
ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی
لوپیرامائڈ انڈکشن کے بعد، ماڈل گروپ میں کچھ کالونی میوکوسل اپیتھیلیل سیلز میں مائٹوکونڈریل سوجن اور آٹوفجی واقع ہوئی۔ آنتوں کے مائکروویلی کی تعداد اور لمبائی میں کمی واقع ہوئی، اور گوبلٹ سیل پکنوسس واقع ہوا (شکل 8)۔ C. deserticola کے ساتھ علاج کے بعد، آنتوں کے مائکروویلی کی تعداد میں اضافہ ہوا۔ تھیمیکروولی کو صاف ستھرا ترتیب دیا گیا تھا، اور ڈھانچہ مکمل تھا۔ گوبلٹ سیلز کی لمبائی چھوٹی، مائٹوکونڈریا کی فاسد شکل، اور گوبلٹ سیلز کی شدید پائیکنوسس۔
تصویر 3 امیونو ہسٹو کیمیکل پتہ لگانے کے ذریعہ کالونک ٹشو میں سی کٹ اور رشتہ دار آپٹیکل کثافت کے تناسب کا اظہار۔
بحث
بزرگ آبادی میں قبض عام ہے اور یہ عام علامات میں سے ایک ہے جو عمر رسیدہ لوگوں کی صحت کی حالت اور معیار زندگی کو متاثر کرتی ہے[10,11]۔ روایتی چینی طب کے وقفے، بائی ایٹ ال[12] کا خیال تھا کہ ایس سی کی بنیادی روگجنن بڑی آنت کی ترسیل کے کام کی خرابی، بوڑھے جسم کی خرابی، جگر اور گردے کے افعال کا بتدریج نقصان، کیوئ اور خون کی کمی، اور جسمانی رطوبت کی کمی تھی۔ جس کی وجہ سے پاخانہ خشک ہو جاتا ہے، جس کے نتیجے میں قبض ہوتا ہے[13]۔ SC مریضوں اور ان کے خاندانوں پر بہت سے پہلوؤں سے دباؤ ڈالتا ہے، اور اس کے روگجنن کو تلاش کرنا ضروری ہے۔
C. deserticola گردے یانگ کو ٹونیفائی کرنے، خون کو فائدہ پہنچانے، اور جسم کی قوت مدافعت کو منظم کرنے کے کام کرتا ہے[14]۔ C. deserticola اور چینی جڑی بوٹیوں کا کاڑھی مشتمل C. deserticola وسیع پیمانے پر قبض کے علاج میں استعمال کیا گیا ہے، اور طبی اثر قابل ذکر ہے. Du et al[15] نے یانگ کی کمی اور قبض کے چوہے کے ماڈل میں پایا کہ C. deserticola نے الگ تھلگ بڑی آنت کے سنکچن کے طول و عرض کو بہتر بنایا، آنتوں کی نالی کی سکڑاؤ کو مضبوط کیا، اور معدے کے ہارمونز کی سطح کو معمول پر لایا۔ مزید برآں، C. deserticola کا غذائی ریشہ، C. deserticola کا ایک پروسیسنگ ضمنی پروڈکٹ، feces کی پانی رکھنے کی صلاحیت کو بہتر بناتا ہے اور کم خوراک کا فائدہ ہے اور آنتوں کی پرورش اور شوچ کو بہتر بنانے میں اچھا اثر رکھتا ہے[16]۔ ہمارے مطالعے سے پتا چلا ہے کہ C. deserticola کے علاج نے قبض کے ساتھ چوہوں کے fecalmoisture اور colonic histopathology کو بہتر بنایا ہے۔
ICCs پورے آنتوں کے راستے میں پائے جاتے ہیں اور پیس میکر اور آنتوں کے اعصاب کی ترسیل کے طور پر آنتوں کی حرکت کے اعصابی کنٹرول میں اہم کردار ادا کرتے ہیں سی کٹ[18]۔ SCF/C-kit نظام ICCs کی نشوونما میں بہت اہم ہے۔ SCF/C-کٹ سگنلنگ پاتھ وے کا تجزیہ ایکیوپنکچر کے ذریعے چوہوں میں سست منتقلی قبض کے علاج کے دوران کیا گیا ہے[19]۔ تیانشو پوائنٹ پر الیکٹرو ایکیوپنکچر نے ACK2-علاج شدہ چوہوں میں بڑی آنت کے ICCs کی تعداد میں اضافہ کیا، SCF اور C-kit پروٹین کے غیر منظم اظہار، اور ICC کے فینو ٹائپ کو الٹ دیا۔ کیوئ اور تلی کو متحرک کرنے کا نسخہ کالونک ٹشو میں آئی سی سی کے اظہار کو بڑھا سکتا ہے اور سی کٹ اور ایس سی ایف ایم آر این اے کے اظہار کو بڑھا سکتا ہے، اس طرح قبض کی علامات کو بہتر بنا سکتا ہے[20]۔ ہمارے مطالعے میں، امیونو ہسٹو کیمسٹری نے دکھایا کہ C. deserticola نے SC کے چوہے کے ماڈل میں SCF اور C-kit پروٹین کے اظہار کو نمایاں طور پر بڑھا دیا ہے، اور RT-qPCR نے ظاہر کیا ہے کہ C. deserticola نے C-kitmRNA کے اظہار کو نمایاں طور پر بڑھا دیا ہے۔ سی کٹ بلاکر نے SCF اور C. deserticola کی طرف سے حوصلہ افزائی C-kit اظہار کی اپ گریجشن کو روک دیا۔
آنتوں کے پانی کا مواد اور کالونک واٹر ٹرانسپورٹ کا AQPs سے گہرا تعلق ہے، جو آنتوں کے پانی کے تحول میں اہم کردار ادا کرتے ہیں[21]۔ سست نقل و حمل کے قبض کے ساتھ چوہوں کے ایک مطالعہ میں، شوچ کی کاڑھی AQP3 اور AQP4 کو کم کرنے کے ذریعے آنتوں کے پانی کے جذب کو منظم کرکے قبض کی علامات میں نمایاں طور پر بہتری لاتی ہے[22]۔ فنکشنل قبض کے چوہے کے ماڈل میں، فنکشنل قبض کے لیے اورل ژاؤفو ٹونگجی فلوئڈ کے علاج کا طریقہ کار بڑی آنت میں واسو ایکٹیو آنتوں کے پولی پیپٹائڈ اور اے کیو پی 3 کے اظہار کو منظم کرکے حاصل کیا جا سکتا ہے[23]۔ ہموار پٹھوں کے خلیات کے سنکرونس سنکچن میں ثالثی میں گیپ جنکشنز ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ اس عمل کے دوران Cx43 سب سے اہم پروٹین ہے[24]۔ Cx43 اظہار کا نقصان جزوی طور پر ہموار پٹھوں کی موٹر کی خرابی کے لیے ذمہ دار ہو سکتا ہے[25]۔ آہستہ ٹرانزٹ قبض کے ساتھ چوہوں میں آنتوں کے اعصابی نظام کے نیٹ ورک کی ساخت کی مرمت Cx43 وغیرہ کے اظہار اور قبض کی علامات کو بہتر بنا سکتی ہے AQP3 کا اظہار آنتوں میں پانی کی مقدار کو کم کرتا ہے، جو قبض کا باعث بنتا ہے، جو کہ قبض کا ایک اہم طریقہ کار ہو سکتا ہے۔ Cx43 کا اظہار آنتوں کے ہموار پٹھوں کے سکڑنے اور قبض کی موجودگی کو کم کرنے سے متعلق ہو سکتا ہے۔ ہمارے مطالعے میں، ویسٹرن بلوٹنگ نے دکھایا کہ Cx43 اظہار میں اضافہ ہوا اور AQP3 اظہار کو C.deserticola علاج سے روکا گیا، جس کے نتیجے میں ہموار پٹھوں کے سکڑاؤ میں اضافہ ہوا اور پانی کے جذب میں کمی آئی، اور بلاکر ٹریٹمنٹ نے ان اثرات کو الٹ دیا۔
مزید معلومات کے لیے، براہ کرم یہاں کلک کریں۔
نتیجہ
آخر میں، C. deserticola AQP3 کے اظہار کو روک سکتا ہے اور SCF/C-kit پاتھ وے کے ذریعے Cx43 کے اظہار کو فروغ دے سکتا ہے، اس طرح سے لوپیرامائن کی وجہ سے قبض کو بہتر بنا سکتا ہے اور بوڑھے چوہوں میں بڑی آنت کے بافتوں کے نقصان کو کم کر سکتا ہے۔ اس مطالعہ نے C. deserticola کے طبی استعمال کے لیے اچھی نظریاتی بنیاد فراہم کی۔
