ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی ذیابیطس کے چوہوں میں گردے کی چوٹ کا علاج پوڈوکیٹس کی آٹوفیجی کو فروغ دے کر کرتا ہے

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

HAN Jiarui، ZHANG Yage، SHI Xiujie، PENG Zining، XING Yufeng، PANG Xinxin

خلاصہ

مقصد:

ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کے گردوں کی چوٹ اور ذیابیطس کے چوہوں میں اسٹریپٹوزوٹوسن کی حوصلہ افزائی پوڈوکیٹ آٹوفجی کے اثرات کی تحقیقات کے لیے۔

طریقے:

نر سپراگ ڈولی چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: نارمل، ماڈل، ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی (اعلی، درمیانی اور کم خوراک)، اور والسرٹن۔ ذیابیطس کے جانوروں کے ماڈل کی نقل تیار کرنے کے لیے اسٹریپٹوزوٹوسن کو انٹراپریٹونلی طور پر انجکشن لگایا گیا تھا۔ 8 ہفتوں کے بعد، ذیابیطس نیفروپیتھی ماڈل قائم کرنے کے لیے پروٹینوریا کا جائزہ لیا گیا۔ علاج روزانہ انٹرا گیسٹرک راستے سے کیا جاتا تھا۔ گیویج کے 16 ہفتوں بعد، ہم نے 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین کی حراستی، خون میں گلوکوز، سیرم کریٹینائن، اور یوریا نائٹروجن کی تعداد کا تعین کیا۔ اس کے بعد، چوہوں کی قربانی دی گئی، اور گردوں کی کٹائی کی گئی اور ان کو متواتر ایسڈ-شِف سے داغ دیا گیا تاکہ گلومیرولی میں پیتھولوجیکل تبدیلیوں کا اندازہ لگایا جا سکے، بشمول ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی کے ذریعے گلومیرولر پوڈوسیٹس۔ گردے کے ٹشوز میں نیفرین، پوڈوسن، p62، بیکلن-1، LC3Ⅱ/Ⅰ، اور p-mTOR/mTOR پروٹین کے اظہار کا تعین کرنے کے لیے مغربی بلاٹ تجزیہ استعمال کیا گیا تھا۔

نتائج:

ماڈل گروپ کے مقابلے میں، ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین کی ارتکاز، خون میں گلوکوز، ہیموگلوبن A1c، سیرم کریٹینائن، یوریا نائٹروجن کی تعداد، کل سیرم پروٹین، اور البومن میں کمی سے منسلک تھی۔ بیک وقت، میسنجیل میسینٹرک وسیع کرنے اور پیروں کے عمل کی فیوژن کو کم کیا گیا تھا، گلوومیرولر تہہ خانے کی جھلی نمایاں طور پر گاڑھی نہیں ہوئی تھی، اور پوڈوسائٹس کی تعداد اور پوڈوسیٹس میں آٹوفاگوسوم کی تعداد میں اضافہ کیا گیا تھا۔ مزید، گردے کے بافتوں میں نیفرین، پوڈوسن، LC3Ⅱ، اور بیکلن-1 پروٹین کے اظہار کو اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، جبکہ p62 پروٹین کے اظہار کو نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا اور ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کو روک دیا گیا تھا۔

نتیجہ:

ٹونگلو ڈیگوئی کا کاڑھا ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کو روک کر ذیابیطس نیفروپیتھی کے بڑھنے کو روک سکتا ہے، اس طرح پوڈوسیٹس کی حفاظت کے لیے آٹوفجی میں اضافہ اور پروٹینوریا کو کم کر سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:ذیابیطس nephropathies؛ آٹوفجی پوڈو سائیٹ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھا۔

cistanche اسٹیم کے فوائدکے لیےگردوں کی تقریب

تعارف

ذیابیطس نیفروپیتھی (DN) ذیابیطس کی شدید مائیکرو واسکولر پیچیدگیوں میں سے ایک ہے، جس میں 30 فیصد -40 فیصد ذیابیطس کے مریض گردے کی بیماری میں مبتلا ہیں۔ ذیابیطس کے بڑھتے ہوئے واقعات کے ساتھ، DN دنیا بھر میں گردوں کے آخری مرحلے کی بیماری کا بنیادی سبب بن گیا ہے۔

پوڈوسائٹ نقصان DN کی ترقی کی ایک اہم وجہ ہے۔ ایک مکمل طور پر مختلف سیل کے طور پر، آٹوفیجی پوڈوکیٹس کے جسمانی فعل کو برقرار رکھنے میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ 2,3 عام جسمانی حالت میں، پوڈوسیٹس کے اندر آٹوفجی کی ایک اعلیٰ ڈگری ہوتی ہے جو خراب شدہ پروٹین اور آرگنیلز کو ہٹاتی ہے۔4 تاہم، ذیابیطس میں ماحول میں، پوڈو سائیٹ آٹوفجی کو روکا جاتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ ڈی این کے روگجنن میں پوڈو سائیٹ آٹوفجی ایک اہم کردار ادا کرتی ہے۔ DN کا تعلق روایتی چینی طب میں "Xiao Ke"، "Guan Ge" اور "edema" کے زمروں سے ہے۔ روایتی چینی طب کا نظریہ یہ ہے کہ خون کے جمود اورین کمیDN.6 کی سب سے اہم وجوہات ہیں لہذا، DN کے علاج سے خون کی گردش کو فروغ دینا اور ین کی پرورش کرنی چاہیے، اور اس کے لیے ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھنا قائم کیا گیا تھا۔ ہم نے پہلے پایا تھا کہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی DN میں علاج کا فائدہ مند اثر رکھتی ہے۔ اس مطالعے میں، ہمارا مقصد گردے کی چوٹ، آٹوفیجی، اور ایم ٹی او آر سگنلنگ پاتھ وے پر ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے اسٹریپٹوزوٹوسن (STZ) سے حوصلہ افزائی قسم 1 DN چوہا ماڈل استعمال کرنا تھا۔ ہم نے DN کے بڑھنے میں تاخیر میں Tongluo Digui decoction کے بنیادی مالیکیولر میکانزم کو بھی دریافت کیا اور DN کی طبی روک تھام اور علاج کے لیے ثبوت فراہم کیے ہیں۔

مواد اور طریقے

جانور

مخصوص پیتھوجین فری (SPF) Sprague-Dawley rats [n=60, male, (150 ± 10) g; اہلیت کا سرٹیفکیٹ نمبر: SCXK (Yu) 2017-0001] ہینن تجرباتی جانوروں کے مرکز (زینگزو، چین) سے خریدا گیا تھا۔ معیاری روشنی کا چکر (14 گھنٹے کی روشنی، 10 گھنٹے رات)، اندرون خانہ درجہ حرارت (23 ± 2) ڈگری، نمی (40 فیصد -50 فیصد)، رہائش (فی پنجرے میں تین جانور)، اور کھانا کھلانا (جراثیم سے پاک خوراک اور پینے کا پانی) استعمال کیا جاتا تھا۔ یہ تجربہ روایتی چینی طب کے ہینان ہسپتال کے سیل امیجنگ سینٹر لیبارٹری میں مکمل کیا گیا (زینگ زو، چین)۔ تمام تجربات نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ کے ذریعہ شائع کردہ لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے رہنما کے مطابق کیے گئے تھے۔

منشیات

Valsartan (Val) کیپسول Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b، بیجنگ، چین) سے خریدے گئے تھے۔ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی شوچی (ہیروڈو) 12 گرام، گوجیا (کاراپیکس ایٹ پلاسٹرم ٹیسٹوڈینس) 30 گرام، دیہوانگ (ریڈیکس رحمانیہ) 20 گرام، ہوانگکی (ریڈکس آسٹراگلی پرپارٹا) 20 گرام، ڈینگگوئی (ریڈکس ایسٹراگلی پرپاراتا) 20 گرام، ڈینگگوئی (ریڈیکس زیڈ آر اینجلیکی) الیسمیٹیس) 10 گرام، ڈاہوانگ (ریڈیکس ایٹ رائزوما ریہی) 15 گرام، گانسیو (ریڈیکس گلائسیریزائی) 6 گرام۔ چینی جڑی بوٹیاں روایتی چینی طب کے ہینان ہسپتال (زینگ زو، چین) سے خریدی گئیں۔

تجرباتی نمونہ

چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، جن میں سے ہر ایک میں 10 چوہوں پر مشتمل تھا: کنٹرول گروپ (Ctrl)، DN ماڈل گروپ (STZ)، DN ماڈل والا ٹریٹمنٹ گروپ (Val)، DN ماڈل ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی ہائی ڈوز ٹریٹمنٹ گروپ (HTL) , Tongluo Digui decoction medium-dose treatment group (MTL) کے ساتھ DN ماڈل اور Tongluo Digui decoction low dose treatment group (LTL) کے ساتھ DN ماڈل۔ چوہوں کے چھ گروپوں کی قربانی 16 ہفتوں میں گیویج اور گردے جمع کرنے کے بعد کی گئی۔

ویل (10 mg·kg－1·d－1 ) اور Tongluo Digui decoction کو تین مختلف خوراکوں میں 16 ہفتوں تک روزانہ ایک بار گیویج کے ذریعے دیا گیا۔ دی گئی خوراکیں جانوروں اور انسانوں کے درمیان منشیات کی خوراک کے تبادلوں کے مساوات پر مبنی تھیں۔ چوہے کی خوراک (mg/kg)=بالغ انسانی خوراک (mg/kg) × تبدیلی کا عنصر (6.25)۔ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کی زیادہ خوراک، درمیانی خوراک اور کم خوراک والے گروپوں کو بالترتیب 5.4، 2.7 اور 1.35 g·kg － 1·d － 1 دیا گیا۔ چوہوں کا ہفتہ وار وزن کیا جاتا تھا۔ 0، 12 اور 24 ہفتوں کے آخر میں میٹابولک کیجز کا استعمال کرکے 24- گھنٹے کا پیشاب جمع کیا گیا تھا۔ علاج کے اختتام کے بعد (24 ہفتوں میں)، چوہوں کو کلورل ہائیڈریٹ سب کیوٹینیئس انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی، اور گردے اور خون کے ٹشو کے نمونے 80 ڈگری پر کاٹ کر محفوظ کیے گئے۔ چوہوں کو عام لیبارٹری جانوروں کی خوراک اور صاف پانی تک مفت رسائی حاصل تھی (سوائے جیسا کہ ذیل میں بیان کیا گیا ہے)۔

cistanche پلانٹ

ڈی این ماڈل کا قیام

STZ (Sigma, St. Louis, MO, USA) کو ذیابیطس دلانے کے لیے استعمال کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔ 7 تمام 60 چوہوں کو تجربات سے پہلے 12 گھنٹے تک پانی تک محدود رسائی حاصل تھی۔ ان میں سے 50 چوہوں کو سائٹریٹ بفر (0.1 mol/L، pH 4.5) میں تحلیل ہونے والے STZ 60 mg/kg کا ایک واحد انٹراپیریٹونیل انجکشن لگایا گیا۔ ذیابیطس کی تصدیق STZ انجیکشن کے بعد خون میں گلوکوز کی تعداد 72 گھنٹے کی پیمائش سے ہوئی۔ مسلسل تین دن تک 16.7 mmol/L سے زیادہ یا اس کے برابر گلوکوز کی حراستی والے جانوروں کو ذیابیطس سمجھا جاتا تھا۔ 8 ہفتوں کے بعد، چوہوں کو علیحدہ میٹابولک پنجروں میں رکھا گیا، اور پیشاب مائکروالبومین (یو اے ای) کی پیمائش کے لیے 24 گھنٹے کے لیے پیشاب جمع کیا گیا۔ DN ماڈل کی تصدیق متحدہ عرب امارات 30 ملی گرام/24 گھنٹے سے زیادہ یا اس کے برابر ہونے پر ہوئی۔

بائیو کیمیکل اشارے

سیرم اور پیشاب کی تشخیص کا استعمال جانوروں کے گردوں کے کام کا جائزہ لینے کے لیے کیا گیا تھا۔ میٹابولک کیج کا استعمال کرتے ہوئے چوہے کے پیشاب کا اندازہ کیا گیا۔ چوہے کے خون کے نمونے ٹیل کٹ کے طریقے سے حاصل کیے گئے تھے۔8 سیرم اور پیشاب کے نمونے استعمال ہونے تک －80 ڈگری پر منجمد کیے گئے تھے۔ سیرم کریٹینائن، خون میں یوریا نائٹروجن، البومین، اور پیشاب میں پروٹین کی تعداد کی پیمائش ریڈیو امیونواسے سے کی گئی۔ ہیموگلوبن A1c (HbA1c)، سی پیپٹائڈ اور انسولین کی سطح کو HbA1c ELISA Kit (Crystal Chem INC، Elk Grove Village، IL، USA)، C-peptide Elisa kit (Kainuo Bio Ltd.، بیجنگ، چین) اور انسولین کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ ایلیسا کٹ (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, USA) بالترتیب مینوفیکچررز کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے۔ چوہوں میں یورک ایسڈ، کل سیرم پروٹین (TP)، البومین (ALB)، الانائن امینوٹرانسفریز (ALT)، اور aspartate aminotransferase (AST) کا تعین خودکار بائیو کیمیکل تجزیہ کار کے ذریعے کیا گیا۔

ہسٹوپیتھولوجیکل معائنہ

فارمیلین فکسڈ گردے کے ٹشو کو پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا، اسے 3-4 μm موٹے حصوں میں کاٹا گیا تھا، اور پیریڈک ایسڈ-شِف (PAS) سے داغدار تھا۔ گردے کے بافتوں میں مورفولوجیکل تبدیلیاں، بشمول mesangial سیل کے پھیلاؤ، سیلولر دراندازی، اور mesangial میٹرکس کی تبدیلیوں کو، ہر داغ والے حصے کے لیے لائٹ مائکروسکوپی (NIKON D3100) (×400) کے ذریعے جانچا گیا۔

ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ

ٹی ای ایم کا استعمال گردے کے بافتوں میں پوڈوکیٹس اور میسنجیل خلیوں کی شکل کا مشاہدہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔ گردے کے تازہ ٹشوز کو بلاکس میں تقسیم کیا گیا تھا۔< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

مغربی دھبے کا تجزیہ

پروٹین لیسیز بفر (سولربیو بائیوٹیک، بیجنگ، چین) کے ذریعے گردوں کے ٹشو سے کل پروٹین نکالا گیا تھا۔ بی سی اے پرکھ کٹ (سولاربیو بایوٹیک، بیجنگ، چین، پی سی0020) کے ذریعے سپرنٹنٹ میں پروٹین کی مقدار کی جانچ کی گئی۔ 40 ug پروٹین پر مشتمل نمونوں کو 12 فیصد SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE) (Applygen, Beijing, China, B1004) پر الگ کیا گیا اور پھر نائٹروسیلوز فلٹر جھلی (سولر بائیوٹیک، بیجنگ، چین) میں منتقل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 5 فیصد سکم دودھ کے ساتھ 2 گھنٹے تک بلاک کرنے کے بعد، ایکٹین (پروٹینٹیک، آرٹیکل نمبر: 60008-1-lg)، LC3II/I (Ab cam، آئٹم نمبر: ab48394)، P62 (پروٹینٹیک، آئٹم نمبر: 18420-1-AP)، beclin-1 (پروٹین ٹیک، آئٹم نمبر: 11306-1-AP)، p-mTOR (CST، آئٹم نمبر: #5536)، mTOR (CST، آئٹم نمبر: # 2983)، نیفرین (Abcam، آئٹم نمبر: ab58968)، اور پوڈوسن (پروٹین ہر ایک، آئٹم نمبر: 20384 -1-AP) کو شامل کیا گیا اور راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس مکسچر کو پھر ٹی بی ایس پلس 0.05 فیصد ٹوین-20 (سولر بائیو بائیوٹیک، بیجنگ، چین) (ٹی بی ایس-ٹی) کے ساتھ 5 منٹ تک ثانوی اینٹی باڈی (1∶2000) کو کمرے میں انکیوبٹنگ سے پہلے شامل کرنے سے پہلے دھویا گیا۔ درجہ حرارت 1 گھنٹے کے لیے، 5 منٹ کے لیے TBST کے ساتھ پانچ بار دھونا، بہتر کیمیلومینیسینس (ECL، ملی پور، بلریکا، MA، USA) کے ساتھ رنگ کی نشوونما سے مشروط ہونا اور پٹی گرے اسکیل تجزیہ کے لیے ImageJ سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ظاہر کرنا۔

شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کا تجزیہ SPSS سافٹ ویئر (IBM SPSS Statistics for Windows, version 23۔{1}}. 2014, Armonk, NY, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ٹوکی کے ٹیسٹ کے بعد فرق کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے گروپوں کے درمیان اختلافات کی جانچ کی گئی۔ ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ پی <0.05 کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

luteolin

نتائج

Tongluo Digui decoction کا DN چوہے کے گردوں پر حفاظتی اثر

بائیو کیمیکل اشارے جیسے کہ خون میں گلوکوز، گلائکیٹیڈ ہیموگلوبن، سیرم کریٹینائن، خون میں یوریا نائٹروجن کا ارتکاز، اور {{0}}گھنٹہ پیشاب میں پروٹین کا ارتکاز gavage کے 16 ہفتوں بعد ناپا گیا۔ (ٹیبل 1)۔ نتائج سے معلوم ہوا کہ جب نارمل گروپ کے ساتھ موازنہ کیا جائے تو ماڈل گروپ میں بلڈ گلوکوز، گلائکیٹیڈ ہیموگلوبن، سیرم کریٹینائن، خون میں یوریا نائٹروجن کا ارتکاز، 24-گھنٹہ پیشاب میں پروٹین کا ارتکاز، TP اور ALB نمایاں طور پر زیادہ تھے۔ 7}}۔ ویل گروپ میں، دونوں سیرم کریٹینائن کی حراستی اور 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین کی حراستی میں کمی واقع ہوئی تھی (P <0.05)۔ مزید="" برآں،="" ٹونگلو="" ڈیگوئی="" کاڑھی="" کی="" زیادہ="" مقدار="" والے="" گروپ="" میں="" خون="" میں="" گلوکوز،="" hba1c،="" سیرم="" کریٹینائن،="" اور="" یوریا="" نائٹروجن="" کی="" تعداد="" میں="" نمایاں="" کمی="" دیکھی="" گئی،="" نیز="" 24="" گھنٹے="" پیشاب="" کا="" اخراج="" (p=""><0.01)۔ یہ="" اثرات="" خوراک="" پر="" منحصر="" تھے۔="" چوہوں="" کے="" ہر="" گروپ="" میں="" یورک="" ایسڈ،="" انسولین،="" alt="" اور="" ast="" کی="" سطح="" میں="" کوئی="" خاص="" فرق="" نہیں="" تھا۔="" ایک="" ساتھ="" مل="" کر،="" ہمارے="" نتائج="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" tongluo="" digui="" decoction="" نے="" خوراک="" پر="" منحصر="" انداز="" میں="" dn="" چوہوں="" میں="" گردوں="" کے="" نقصان="" کو="" کم="" کیا="" اور="" گردوں="" کے="" افعال="" کو="" بہتر="">

ڈی این چوہا رینل پیتھالوجی میں تبدیلیوں کا اندازہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کے علاج (شکل 1) کے بعد پی اے ایس سٹیننگ سے کیا گیا۔ عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں میسنجیل ایریا کو چوڑا کرنے کے ساتھ گلومیرولر میسنجیل سیلز اور میسنجیئل اسٹروما میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا۔ glomerular mesangial علاقے تین Tongluo Digui decoction خوراک کی سطح میں سے ہر ایک میں اور Val گروپ میں اضافہ ہوا. مزید برآں، ان چار ٹریٹمنٹ گروپس نے ماڈل گروپ کے مقابلے میسانجیئل میٹرکس کی چوڑائی کو کم کر دیا تھا، اور ہائی ڈوز ٹونگلو ڈیگوئی ڈیکوکشن گروپ میں گلوومیریولر میسانجیل ایریا ویل گروپ کے مقابلے میں کم تھا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھنا DN گلوومیرولر گھاووں کے بڑھنے میں تاخیر کرتا ہے۔

ڈی این چوہوں میں گلومیریولر پوڈوسیٹ چوٹ پر ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کا اثر

ویسٹرن بلٹ تجزیہ پوڈوسیٹ مارکر پروٹین نیفرین اور پوڈوسن (شکل 2) کے اظہار کا تعین کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں دونوں پروٹینوں کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P < 0۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" ماڈل="" گروپ="" (p=""><0.05) کے="" مقابلے="" ٹونگلو="" ڈیگوئی="" کاڑھی="" گروپوں="" میں="" نیفرین="" اور="" پوڈوسن="" کے="" اظہار="" کو="" باقاعدہ="" بنایا="" گیا="">

ڈی این چوہوں میں گلومیرولر پوڈوکیٹ آٹوفجی پر ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کا اثر

ٹی ای ایم (شکل 3) کے تحت گلوومیرولر پوڈوسیٹس میں آٹوفاگوسوم میں تبدیلیاں دیکھی گئیں۔ نتائج نے نارمل گروپ کے گلوومیرولر پوڈوسیٹس میں آٹوفاگوسومز کو دکھایا۔ ماڈل گروپ میں پوڈوسائٹ آٹوفاگوسوم غیر حاضر تھے، اور پوڈوسیٹ پاؤں کے عمل بھی غائب ہو گئے۔ تین ٹونگلو ڈیگوئی ڈیکوشن ڈوز گروپس اور والسارٹن گروپ میں، ہم نے گلومیرولر پوڈو سائیٹ آٹوفاگوسومز کا مشاہدہ کیا، جس نے تجویز کیا کہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی DN چوہوں میں پوڈوکیٹ آٹوفجی کو بڑھاتی ہے۔ ویسٹرن بلاٹ کا استعمال آٹوفجی سے متعلق پروٹینز P62، بیکلن-1، اور LC3 Ⅱ (شکل 4) کے اظہار کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں beclin-1 اور LC3Ⅱ اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P < 0۔{11}}1)،="" جبکہ="" p62="" کے="" اظہار="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" تھا="" (p="">< 0.01)۔="" ان="" نتائج="" نے="" اشارہ="" کیا="" کہ="" ڈی="" این="" چوہوں="" میں="" آٹوفیجی="" کمزور="" ہوگئی="" تھی۔="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" ٹونگلو="" ڈیگوئی="" ڈیکوکشن="" ہائی="" ڈوز="" گروپ="" میں="" p62="" کے="" نیچے="" ریگولیٹ="" اظہار="" کے="" ساتھ="" ساتھ="" بیکلن-1="" اور="" lc3ⅱ="" ایکسپریشن="" (p=""><0.05) کو="" اپ="" ریگولیٹ="" کیا="" گیا="" تھا۔="" ایک="" ساتھ،="" ان="" نتائج="" نے="" ظاہر="" کیا="" کہ="" dn="" کے="" ساتھ="" چوہوں="" میں="" tongluo="" digui="" decoction="" کے="" گردوں="" کے="" حفاظتی="" اثر="" کا="" تعلق="" گردے="" کے="" خلیوں="" میں="" آٹوفجی="" میں="" اضافہ="" سے="" ہو="" سکتا="">

ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کو روک کر ڈی این چوہوں میں گلومیرولر پوڈو سائیٹ آٹوفجی کو بڑھاتا ہے۔

ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کی روک تھام آٹوفجی کو بڑھاتی ہے (شکل 5)۔ عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کو بڑھایا گیا تھا (P < 0۔{3}}1)،="" جبکہ="" ٹونگلو="" ڈیگوئی="" ڈیکوکشن="" گروپس="" میں="" اسے="" روکا="" گیا="" تھا="" (p=""><0.05)۔ اس="" نے="" تجویز="" کیا="" کہ="" ٹونگلو="" ڈیگوئی="" کاڑھی="" ایم="" ٹی="" او="" آر="" سگنلنگ="" پاتھ="" وے="" کی="" ایکٹیویشن="" کو="" روک="" کر="" پوڈو="" سائیٹ="" آٹوفجی="" کو="" بڑھاتی="" ہے۔="" پچھلے="" مطالعات="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" آٹوفیجی="" پوڈوسائٹس="" کی="" حفاظت="" کرتی="" ہے="" اور="" گردے="" کے="" کام="" کو="" بہتر="" کرتی="">

بحث

DN بنیادی طور پر علامات اور علامات جیسے پیشاب میں پروٹین کی موجودگی، ہائی بلڈ گلوکوز، پولی ڈپسیا، پولی فیگیا، اور پولی یوریا سے نمایاں ہوتا ہے۔ علامات روایتی چینی ادویات سے ملتی جلتی ہیں، جیسے "ژاؤ کے"، "گوان جی" اور "ورم"۔ ڈی این کی موجودگی اور نشوونما ین کی کمی اور خون کے جمود کی پیتھولوجیکل بنیاد سے الگ نہیں ہوتی۔ 6 ین کی کمی اور خون کے جمود کی نشوونما کے ساتھ، گردے کو بتدریج نقصان پہنچتا ہے، اس طرح پیشاب میں پروٹین کی کمی ظاہر ہوتی ہے، جو مزید مائکروتھرومبس کی تشکیل کا باعث بنتی ہے۔ گردے کی فبروسس. ڈی این کے مریض لامحالہ آخری مرحلے کے گردوں کی بیماری میں مبتلا ہوتے ہیں۔

ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی ایک مشہور چینی روایتی ادویات کے ڈاکٹر ژانگ بنگھو نے قائم کی تھی اور DN.12 کے علاج میں اپنے برسوں کے تجربے کی بنیاد پر 13 ٹوگلو ڈیگوئی کاڑھی شوچی (ہیروڈو)، گوجیا (کاراپیکس اور پلاسٹرم ٹیسٹوڈینس) پر مشتمل ہے۔ Dihuang (Radix Rehmanniae)، Huangqi (Radix Astragali Perparata)، Danggui (Radix Angelicae Sinensis)، Ze Xie (Rhizoma Alismatis)، Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei)، Gancio (Radix Glycyrrhizae)۔ ان میں سے، Shuizhi (Hirudo) اور Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) بادشاہی دوائیں ہیں، جو ہمارے خیال میں ین کی پرورش اور DN میں خون کی گردش کو فروغ دینے میں کردار ادا کرتی ہیں۔ Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) جسم کی قوت مدافعت اور رازداری کی حالت کو بہتر بناتا ہے اور عمر بڑھنے میں تاخیر کرتا ہے۔14 Shuizhi (Hirudo) میں اینٹی کوگولنٹ، اینٹی ٹیومر، اینٹی انفلامیٹری، اور اینٹی فبروٹک اثرات ہوتے ہیں اور دیگر فارماسولوجیکل افعال کے ساتھ یہ گردوں کو بہتر بنا سکتا ہے۔ ڈی این میں پیتھولوجیکل تبدیلیاں سیرم کریٹینائن اور خون میں یوریا نائٹروجن کی مقدار کو نمایاں طور پر کم کرتی ہیں، اور پیشاب میں پروٹین کے اخراج کو کم کرتی ہیں۔ پوڈوسن پوڈوسائٹس کی سطح پر دونوں تاکنا جھلی پروٹین ہیں۔ دونوں پروٹین آپس میں ایک کمپلیکس بناتے ہیں جو گلوومیرولر فلٹریشن رکاوٹ کے کام میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔18 پروٹین کے اظہار کی غیر معمولی تقسیم پروٹینوریا کی مختلف ڈگریوں کا باعث بنتی ہے۔ 24 گھنٹے سے زیادہ پیشاب میں پروٹین کے اخراج اور خراب رینل فنکشن میں۔ مزید یہ کہ پی اے ایس سٹیننگ سے پتہ چلتا ہے کہ ماڈل گروپ میں میسنجیل سیلز اور میسنجیل میٹرکس کی تعداد میں اضافہ ہوا ہے، اس طرح یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ماڈل کامیابی کے ساتھ قائم ہوا ہے۔ Tongluo Digui decoction کی مختلف خوراکوں نے 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین اور سیرم کریٹینائن کی مقدار کو کم کیا اور ڈی این چوہوں کی رینل پیتھالوجی کو کم میسنجیئل سیلز اور میٹرکس کے ساتھ بہتر کیا۔ مغربی دھبے کے تجزیے سے معلوم ہوا کہ ٹونگلو ڈیگوئی ڈیکوکشن گروپ میں نیفرین اور پوڈوسن کا اظہار ماڈل گروپ کے مقابلے میں زیادہ تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہ فارمولہ پوڈوسائٹس کی حفاظت کرکے چوہوں میں ڈی این کی ترقی میں تاخیر کرتا ہے۔

آٹوفیجی خلیات میں لائسوسومل پروٹین کے انحطاط کا ایک راستہ ہے اور خراب یا زیادہ متاثر شدہ پروٹینوں کی کلیئرنس میں اہم کردار ادا کرتا ہے جو سیل ہومیوسٹاسس اور سالمیت کو برقرار رکھتے ہیں۔ 20 آٹوفیجی ذیابیطس میں پوڈوسیٹ لیسوسومل ہومیوسٹاسس کے لیے لازمی ہے، اور بہتر آٹوفیجی پوڈسٹری کو کم کر سکتی ہے۔ .5 پوڈو سائیٹس میں آٹوفجی سے متعلق جین Atg5 کو خاص طور پر دستک دینے کے بعد، چوہوں نے آہستہ آہستہ ہر جگہ پروٹین کا مجموعہ، مائٹوکونڈریل نقصان، اور پوڈو سائیٹس میں آٹوفجی سرگرمی دکھائی۔ پوڈوسائٹس کو نقصان پہنچا اور پاؤں کے عمل غائب ہو گئے اور ضم ہو گئے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ آٹوفیجی برقرار ہے۔ نارمل پوڈو سائیٹ فنکشن کو برقرار رکھنا ضروری ہے۔ 21,22 اس مطالعے میں، ہم نے TEM اور مغربی دھبے کے تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے گلومیرولر پوڈوسیٹس میں آٹوفجی پر ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی کے اثر کی تحقیقات کی۔ ٹی ای ایم نے ظاہر کیا کہ ماڈل گروپ کے مقابلے ہر ٹونگلو ڈیگوئی ڈیکوکشن ڈوز گروپ میں پوڈو سائیٹ آٹوفاگوسومز کی تعداد میں اضافہ ہوا۔ مزید یہ کہ مغربی دھبے نے آٹوفجی سے متعلق پروٹین LC3، بیکلن-1، اور p62 کا اظہار دکھایا۔ ماڈل گروپ کے مقابلے میں، LC3Ⅱ اور beclin-1 اظہار میں Tongluo Digui decoction گروپ میں نمایاں اضافہ ہوا، جبکہ p62 پروٹین کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھنے نے گلومیرولر پوڈوکیٹس میں آٹوفجی کی سطح میں اضافہ کیا۔

Rapamycin ٹارگٹ پروٹین (mTOR) آٹوفجی کے اہم ریگولیٹرز میں سے ایک ہے۔ 23 یہ رینل کورٹیکس اور میڈولا میں وسیع پیمانے پر تقسیم ہوتا ہے اور DN پوڈوسیٹ انجری کی نشوونما میں کردار ادا کرتا ہے۔ 24,25 ہائی گلوکوز اور تناؤ کے حالات میں، ایم ٹی او آر ایکٹیویٹڈ اور فاسفوریلیٹڈ ہے، جو اس کے بہاوی اہداف کی فاسفوریلیشن اور آٹوفجی کی روک تھام کا باعث بنتا ہے۔ لیو ایٹ ال 26 نے یہ ظاہر کیا کہ ایم ٹی او آر روکنے والا، ریپامائسن، خاص طور پر ایم ٹی او آر کناز سے منسلک ہے اور ایم ٹی او آر کی سرگرمی کو روکتا ہے، پوڈوسیٹ آٹوفجی کو بڑھاتا ہے، اور گردوں کے کام کو محفوظ رکھتا ہے۔ ہم نے پایا کہ ماڈل گروپ میں ایم ٹی او آر فاسفوریلیشن کو بڑھایا گیا تھا اور ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی نے اس عمل کو روکا تھا، جس نے تجویز کیا کہ ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھی پوڈوسیٹس میں آٹوفجی کو بڑھاتا ہے اور ایم ٹی او آر سگنلنگ پاتھ وے ایکٹیویشن کو روک سکتا ہے۔

خلاصہ طور پر، ٹونگلو ڈیگوئی کاڑھنا پوڈوکیٹس میں آٹوفجی کو روک سکتا ہے، گلومیریولر پوڈوسائٹس کی حفاظت کرسکتا ہے، گلومیریولر فلٹریشن جھلی کی سالمیت کو برقرار رکھتا ہے، 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین کے اخراج کو کم کرسکتا ہے، اور ایم ٹی او آر ایکٹیویشن کو روک کر ڈی این کے بڑھنے میں تاخیر کرسکتا ہے۔ یہ نتائج DN میں Tongluo Digui decoction کے حفاظتی اثر کی مزید تفہیم کے لیے بصیرت فراہم کرتے ہیں، تاہم، اس میں شامل بنیادی طریقہ کار کو واضح کرنا باقی ہے۔

cistanche کیا ہے؟گردے کی بیماری کے لئے

حوالہ جات
1 Tesch GH. ذیابیطس نیفروپیتھی - کیا یہ مدافعتی عارضہ ہے؟ Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199۔
2 لی جے جے، کواک ایس جے، جنگ ڈی ایس، وغیرہ۔ ذیابیطس نیفروپیتھی میں پوڈوسائٹ حیاتیات۔ کڈنی انٹ سپلائی 2007; (106): S{{3}S42۔
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podocyte autophagy: ذیابیطس نیفروپیتھی کی ترقی کو روکنے کے لیے ایک ممکنہ علاج کا ہدف۔ جے ذیابیطس ریس 2017؛ 2017(4): 1-6۔
4 Mizushima N، Komatsu M. Autophagy: خلیات اور بافتوں کی تزئین و آرائش۔ سیل 2011; 147(4): 728-741۔
5 Tagawa A، Yasuda M، Kume S، et al. خراب پوڈوسیٹ آٹوفجی ذیابیطس نیفروپیتھی میں پروٹینوریا کو بڑھاتا ہے۔ ذیابیطس 2016; 65(3): 755-767۔
6 سن C، Xie QY، Meng QG. ذیابیطس نیفروپیتھی کے TCM سنڈروم کے تقسیم کے قانون پر مطالعہ کریں۔ بیجنگ Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270۔
7 Szkudelski T. چوہے کے لبلبے کے B خلیوں میں alloxan اور streptozotocin کے عمل کا طریقہ کار۔ فزیول ریس 2001؛ 50(6):537-546۔
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Qingre Lishi Yishen کاڑھی کی تاثیر امیونوگلوبلین کے گلوومیرولر فائبروسس پر چوہے کے ماڈل میں ایک نیفروپیتھی۔ J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523۔
9 لو ایم کے، گونگ ایکس جی، گوان کے ایل۔ پوڈوسیٹ فنکشن میں ایم ٹی او آر: کیا ریپامائسن ذیابیطس نیفروپیتھی کے لیے اچھا ہے؟ سیل سائیکل 2011; 10(20): 3415-3416۔
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. آٹوفیجی گلوومرولر بیماری کی حساسیت کو متاثر کرتی ہے اور عمر رسیدہ چوہوں میں پوڈوسیٹ ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھتی ہے۔ جے کلین انویسٹ 2010؛ 120(4): 1084-1096۔
11 Sun GD، Li CY، Cui WP، et al. ذیابیطس نیفروپیتھی کے علاج کے لیے جڑی بوٹیوں کی روایتی چینی ادویات کا جائزہ۔ جے ذیابیطس ریس 2016؛ 2016: 5749857۔
12 Zhao WJ، Cai Z، Meng Y، et al. دائمی گردے کی بیماری کے علاج میں ژانگ بنگھو کے پرورش بخش گردے ین طریقہ کا اطلاق۔ بیجنگ Zhong Yi Yao 2016; 35(4): 341-343۔
13 Duan YF، Zhang HB. پروفیسر ژانگ بنگھو کے درخواست کے تجربے کا تعارف۔ Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149۔
14 یو ایکس جے، چن ایس ایچ، لو جی وائی۔ کچھوے کے شیل "زیین بوشین" کی فارماکوڈینامکس پر تحقیق کا ایک سروے۔ Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17۔
15 پینگ ایکس ایکس، ٹونگ وائی، لی ایچ پی، ہان جے آر۔ ذیابیطس نیفروپیتھی کے علاج میں جونک اور اس کے عرق کی تحقیق کی پیشرفت۔ گوانگ منگ ژونگ یی 2019؛ 34(1): 168-171۔
16 Zhang ZL، Dong H. ذیابیطس نیفروپیتھی کے علاج میں جونک اور اس کے فعال اجزاء کی تحقیقی پیشرفت Zhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018؛ 10(02): 106- 110۔
17 ڈائی ایچ، لیو کیو، لیو بی ذیابیطس نیفروپیتھی میں پوڈو سائیٹ کی کمی کے طریقہ کار پر تحقیقی پیشرفت۔ جے ذیابیطس ریس 2017؛ 2017: 2615286 ۔
18 مارٹن سی ای، جونز این نیفرین پوڈو سائیٹ میں سگنلنگ: سلٹ ڈایافرام اور اس سے آگے سگنل ریگولیشن کا ایک تازہ ترین منظر۔ فرنٹ اینڈو کرینول (لوزان) 2018؛ 9: 302.
19 جاکو پی، کارل ٹی. گلومیرولر فلٹریشن بیریئر کا مالیکیولر میک اپ۔ بائیوکیم بائیوف ریس کمپنی 2010؛ 396(1): 164-169۔
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. آٹوفیجی سیلولر خود ہضم کے ذریعے بیماری سے لڑتی ہے۔ فطرت 2008; 451(7182): 1069۔
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. اینڈوتھیلیل سیل
اور پوڈوسائٹ آٹوفجی ہم آہنگی سے ذیابیطس کی حوصلہ افزائی گلوومیرولوسکلروسیس سے بچاتا ہے۔ آٹوفجی 2015; 11(7): 1130-1145۔
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. ذیابیطس نیفروپیتھی میں پوڈوکیٹ کی چوٹ: TRPC چینلز کی انجیوٹینسن Ⅱ پر منحصر ایکٹیویشن کے مضمرات۔ سائنس کا نمائندہ 2015؛ 5 : 17637 .
23 Rabanal-Ruiz Y، Otten EG، Korolchuk VI. ایم ٹی او آر سی 1 آٹوفجی کے مرکزی گیٹ وے کے طور پر۔ مضامین بایو کیم 2017؛ 61 (6): 565-584۔
24 کم وائی سی، گوان کے ایل۔ ایم ٹی او آر: آٹوفجی ریگولیشن کے لیے ایک فارماسولوجک ہدف۔ جے کلین انویسٹ 2015؛ 125(1): 25-32۔
25 Li XY، Wang SS، Han Z، et al. Triptolide miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR راستے کے ذریعے ذیابیطس رینل فائبروسس کے خاتمے کے لیے آٹوفیجی کو بحال کرتا ہے۔ مول تھر نیوکلک ایسڈز 2017؛ 9: 48-56۔
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. mTORS6K1-LC3 Ⅱ سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے ذیابیطس نیفروپیتھی والے چوہوں کے رینل ٹشوز میں سیل آٹوفجی پر ریپامائسن کے حفاظتی اثرات۔ رین فیل 2018; 40(1): 492-497۔