Cistanche Deserticola کے کل Glycosides اور Polysaccharides آسٹیوپوروسس کو روکتے ہیں

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

Fujiang Wang 1, Pengfei Tu, Kewu Zeng *, Yong Jiang **

خلاصہ

ایتھنوفارماکولوجیکل مطابقت:روایتی چینی ادویات Cistanche deserticola YC Ma میں "گردے کو مضبوط کرنے اور ہڈی کو مضبوط بنانے" کا اثر ہے۔ تاہم، C. deserticola کے مخصوص فعال عرق اور آسٹیوپوروٹک کے علاج کے طریقہ کار واضح نہیں ہیں۔

مطالعہ کا مقصد:ہم آسٹیوپوروسس کے علاج اور ممکنہ میکانزم کے لیے C. deserticola کے مؤثر اجزاء کی نشاندہی کرنا چاہتے تھے۔

مواد اور طریقے:ہمارے گروپ نے C. deserticola کے نچوڑوں کی تحقیق کی جس میں اینٹی آسٹیوپوروٹک سرگرمی شامل ہے، بشمول ٹوٹل گلائکوسائیڈز (TGs)، پولی سیکرائڈز (PSs)، اور oligosaccharides (OSs) in Senescence-accelerated mouse prone 6 (SAMP6) چوہوں۔ گولڈنر ٹرائکروم، وان گیسنز (وی جی)، سیفرانن او فاسٹ گرین سٹیننگ، اور وون کوسا سٹیننگ ہڈیوں کے ڈھانچے کی تشکیل اور کیلشیم کے ذخائر کی تحقیقات کے لیے کیے گئے۔ سیرم کو بائیو کیمیکل مارکروں کا پتہ لگانے کے لیے جمع کیا گیا تھا۔ مائیکرو سی ٹی کے ذریعہ ہڈیوں کے مائیکرو فن تعمیر کا پتہ چلا۔ ہڈیوں کے مورفوجینیٹک پروٹین-2 (BMP-2)، اوسٹیوکالسن (OCN)، اوسٹیوپروٹیجیرن (OPG)، نیوکلیئر فیکٹر κ B ligand (RANKL) کے ریسیپٹر ایکٹیویٹر، p-glycogen synthetase kinase{11 }} (p-GSK-3)، اور p- -کیٹنین کا تجزیہ مغربی بلاٹنگ اور امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعے کیا گیا۔

نتائج:TGs اور PSs نے ہڈیوں کے ہسٹوپیتھولوجیکل نقصانات کو کم کیا، نئی ہڈی، کولیجینس فائبر، اور کونڈروسائٹس کی تشکیل کو فروغ دیا، اور کیلشیم کے ذخائر کو تیز کیا۔ مزید یہ کہ انہوں نے ہڈیوں کے ٹرن اوور کے بائیو مارکر کو نمایاں طور پر تبدیل کیا اور ہڈیوں کے مائکرو آرکیٹیکچر کو مؤثر طریقے سے بہتر کیا۔ مزید میکانزم کے مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ TGs اور PSs نے RANKL، p- -کیٹنین کے اظہار کو نمایاں طور پر کم کیا ہے، اور ساتھ ہی BMP-2، OCN، OPG، اور p-GSK کے اظہار کو بھی منظم کیا ہے{{ 4}} (Ser9)۔

نتیجہ:اس تحقیق کے نتائج بتاتے ہیں کہ TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کے مائیکرو سٹرکچر کو پہنچنے والے نقصان کو اوسٹیو کلاسٹوجینک ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دے سکتے ہیں، اور آسٹیوپوروسس پر ان کا علاج معالجہ Wnt/-catenin سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے ہوتا ہے۔

Cistanche کر سکتے ہیںosteoclastogenic ہڈی کو فروغ دیناتشکیل اور بہتریہڈیوں کے مائکرو ڈھانچے کو نقصان.

1. تعارف

آسٹیوپوروسس بوڑھے افراد میں ایک عام بیماری ہے جو بنی نوع انسان کی صحت کو سنگین طور پر خطرے میں ڈالتی ہے (Ye et al., 2020)۔ آسٹیوپوروسس کے مریض فریکچر سے پہلے مکمل طور پر غیر علامتی ہوسکتے ہیں، اس طرح آسٹیوپوروسس کی مؤثر روک تھام اور علاج سب سے اہم ہے (Tella and Gallagher, 2014)۔

تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ ہڈیوں کی ریزورپشن میں اضافہ اور ہڈیوں کی تشکیل میں کمی ہڈیوں کی دوبارہ تشکیل میں عدم توازن کو جنم دیتی ہے، جس سے آسٹیوپوروسس (Sims and Gooi، 2008) ہوتا ہے۔ Osteoblasts اور osteoclasts سیل کی دو اقسام ہیں جو ہڈیوں کی تشکیل اور ریزورپشن کے لیے اہم ہیں۔ wnt/ -catenin پاتھ وے ہڈیوں کے بافتوں کی نشوونما، نشوونما اور دیکھ بھال کے لیے ضروری ہے (Cadigan and Nusse, 1997)، اور بیگل ڈاگ بون میرو سٹرومل سیلز (BMSCs) کے فرق کو منظم کرنے میں بھی کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔ ، 2018)۔ GSK-3 -کیٹنین کے انحطاط کو روکتا ہے۔ -کیٹنین بعد میں نیوکلئس میں داخل ہوتا ہے، اور پھر یہ ٹی سیل فیکٹر/لیمفائیڈ بڑھانے والے بائنڈنگ فیکٹر کے ساتھ منسلک ہو سکتا ہے اور Wnt ٹارگٹ جینز کے اظہار کو منظم کرتا ہے۔ اس دوران، یہ پایا گیا ہے کہ Wnt/ -catenin سگنلنگ OPG (Glass et al.، 2005) کی پیداوار اور رطوبت کو تحریک دے کر آسٹیو کلاس تفریق کو کم کرتا ہے، جو کہ RANKL کا قدرتی مخالف ہے (Lacey et al.، 1998)۔ OPG ہڈیوں کی تشکیل اور ہڈیوں کی بحالی میں ایک اہم ریگولیٹری کردار ادا کرتا ہے۔ کسی بھی صورت میں، آسٹیو کلاسٹس میں -کیٹنین کو حذف کرنے سے آسٹیوکلاسٹ کی تعداد اور ہڈیوں کی ریزورپشن میں اضافہ ہوتا ہے اور ہڈیوں کے بڑے پیمانے پر کمی آتی ہے (وی ایٹ ال۔، 2011)۔ ہڈیوں کی ریزورپشن روکنے والے اور ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دینے والے بنیادی طور پر آسٹیوپوروسس کے علاج میں استعمال ہوتے ہیں۔ اس بات کو مدنظر رکھتے ہوئے کہ کلینیکل میں درست افادیت کے ساتھ اس وقت استعمال ہونے والی دوائیوں کے منفی ردعمل بھی واضح ہیں، اس لیے فوری طور پر ان دوائیوں کی تلاش کی جائے جن کے مضر اثرات کم ہوں۔

Cistanche deserticola YC Ma (C. deserticola) وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والی ٹانک روایتی چینی دواؤں کی جڑی بوٹی Cistanches Herba، Roucongrong کے ماخذ پودوں میں سے ایک ہے جو کئی بیماریوں کے علاج کے لیے ہے، جیسے گردے کی کمی، خواتین کی بانجھ پن، اور بوڑھے قبض کے لیے۔ چین میں 1000 سال سے زیادہ (نیشنل فارماکوپیا کمیٹی، 2020)۔ روایتی چینی طب (TCM) کے نظریات کے مطابق، "گردوں پر غالب ہڈیاں" اور "گردے کو مضبوط کرنے والی ہڈی"، C. deserticola کو آسٹیوپوروسس کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ C. deserticola سیرم الکلائن فاسفیٹیس (ALP)، اوسٹیوکالسن، اور کیلشیم آئن کی سطح کو بہتر بنا سکتا ہے، چوہوں کے آسٹیو بلوسٹس (Gang et al.، 2018) میں BMP-2 کے اظہار کو فروغ دے سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ C. deserticola نے RANKL حوصلہ افزائی آسٹیو کلاسٹوجینس (Zhang et al.، 2019) کے خلاف حفاظتی اثرات مرتب کیے ہیں۔ اگرچہ C. deserticola کا آسٹیوپوروسس پر علاج کا اثر ہے، لیکن اس کے مخصوص فعال اجزاء زیادہ واضح نہیں ہیں۔ آسٹیوپوروسس کے علاج اور متعلقہ میکانزم کے لیے C. deserticola کے مؤثر اجزاء کی اقسام کو تلاش کرنا بہت اہمیت کا حامل ہے۔

لہذا، ہم نے یہ مطالعہ اس بات کا تعین کرنے کے لیے کیا کہ آیا SAMP6 چوہوں پر C. deserticola سے مختلف قسم کے کیمیائی اجزاء پر مشتمل عرقوں کے کچھ فائدہ مند اثرات تھے۔ تلاش کے نتائج C. deserticola کے طبی استعمال کے لیے درست رہنمائی فراہم کر سکتے ہیں اور ساتھ ہی ساتھ آسٹیوپوروسس کے علاج کے لیے C. deserticola کی مادی بنیاد کو بھی ظاہر کر سکتے ہیں۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 کیمیکل اور ری ایجنٹس

Cistanche deserticola YC Ma کو Mandela Biotechnology Co., Ltd (Alashan, Inner Mongolia, China) سے خریدا گیا تھا، اور پھر مصنفین میں سے ایک شخص نے ان کی شناخت کی (PF Tu)۔ TGs، PSs، اور OS پہلے بیان کردہ طریقہ کے طور پر تیار کیے گئے تھے (Gao et al.، 2015)۔ رپورٹ کے مطابق HPLC کے استعمال کے ذریعے ہر ایک نچوڑ کا جزوی تجزیہ مکمل کیا گیا تھا۔ (Li et al., 2019; Wang et al., 2020)۔ H&E، گولڈنر کا ٹرائیکروم سٹیننگ، وان گیسنز (VG) سٹیننگ، اور Safranin O-Fast Green کٹس بوسٹر (Hubei, China) سے خریدی گئیں۔ خرگوش مخالف ماؤس BMP-2 (ab14933)، OCN (ab93876)، OPG (ab183910)، اور RANKL (ab216484) Abcam (کیمبرج، برطانیہ) سے خریدے گئے تھے۔ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی خرگوش مخالف ماؤس p-GSK-3 (Ser9) (#5558)، GSK3 (#12456)، -کیٹنین (#13727)، اور p- -کیٹنین (# 4176)۔ ثانوی اینٹی باڈیز ژونگشن گولڈن برج بائیو ٹیکنالوجی (بیجنگ، چین) سے خریدی گئیں۔

اعلی معیار کا سیستانچ کا عرقسےChengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd

2.2 جانور

5-ماہ کی عمر میں سنسنی تیز کرنے والا ماؤس/مزاحم 1 (SAMR1) اور SAMP6 چوہے وائٹل ریور لیبارٹری اینیمل ٹیکنالوجی (بیجنگ، چین) سے حاصل کیے گئے تھے۔ تمام جانوروں کی ہیرا پھیری پیکنگ یونیورسٹی ہیلتھ سائنس سینٹر کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے جاری کردہ رہنما خطوط کے مطابق کی گئی تھی۔

2.3۔ منشیات کی انتظامیہ

چوہوں کو تصادفی طور پر درج ذیل پانچ گروپوں میں الگ کیا گیا تھا: SAMR1 گروپ (عام نمکین، n=10)؛ SAMP6 گروپ (عام نمکین، n =10)؛ TGs گروپ (400 mg/kg, n=10); PSs گروپ (400 mg/kg, n=10), اور OSs گروپ (400 mg/kg, n=10) (Gao et al., 2015)۔ تمام دوائیں 12 ہفتوں تک روزانہ اور روزانہ دی جاتی تھیں۔

2.4 گولڈنر کا ٹرائکروم سٹیننگ، H&E سٹیننگ، SafraninO-Fast Green سٹیننگ، اور Van Gieson's (VG) سٹیننگ

12 ہفتوں کے بعد، فیمر کو تیزی سے ہٹا دیا گیا اور 10 فیصد ایتھیلین ڈائمین ٹیٹراسیٹک ایسڈ (EDTA) کا استعمال کرتے ہوئے 7 d کے لیے 4 ◦C پر درست کیا گیا۔ اس کے بعد، فیمر کو ایک ٹکڑا (5 μm) میں تقسیم کیا گیا اور مینوفیکچرر کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے گولڈنر ٹرائکروم، وان گیسن (VG)، SafraninO-Fast Green، اور H&E کے داغوں سے داغ دیا گیا۔ تصاویر کو ہلکے خوردبین (لائیکا، سولمس، جرمنی) سے دیکھا گیا۔

2.5 BGP، BALP، P1NP، PICP، ALP، S-CTX، TRACP، U-CTX، U-NTX، D-Pyr، اور Pyr کی سطحوں کی پیمائش

بون گلا پروٹین (BGP)، ہڈی کے لیے مخصوص الکلائن فاسفیٹیس (BALP)، پروکولجن ٹائپ 1 N-ٹرمینل پروپیپٹائڈ (P1NP)، پروکولجن ٹائپ I C-ٹرمینل پروپیپٹائڈ (PICP)، الکلائن فاسفیٹیس (ALP)، S–C -ٹائپ-I-کولاجن (S-CTX) کا ٹیلوپیپٹائڈ، ٹاٹریٹ-ریزسٹنٹ ایسڈ فاسفیٹیس (TRACP)، قسم-I-کولاجن (U-CTX) کا U–C-telopeptide، type-I- کا U–N-telopeptide کولیجن (U-NTX)، D-pyridinoline (D-Pyr)، اور pyridinoline (Pyr) کا تعین انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Jiangsu, China) کے ذریعے کیا گیا تھا۔

2.6۔ وان کوسا سٹیننگ

فیمر کے ٹکڑوں کو 1 فیصد سلور نائٹریٹ میں 30 منٹ تک دھوپ کی تیز شعاع کے نیچے ڈبو دیا گیا اور پھر ڈیونائزڈ پانی سے تین بار دھویا گیا۔ اس کے بعد، غیر رد عمل والی چاندی کو دور کرنے کے لیے 5 فیصد سوڈیم تھیو سلفیٹ 5 منٹ کے لیے شامل کیا گیا۔ کیلشیم فاسفیٹ نمکیات کو سیاہ داغ کے طور پر دیکھا گیا تھا۔ فیمر کیلشیم کے مواد کا مقداری تجزیہ کرنے کے لیے امیج پرو پلس سافٹ ویئر ورژن 6.0 اور ایڈوب فوٹوشاپ کا اطلاق کیا گیا۔

2.7۔ مائیکرو کمپیوٹیڈ ٹوموگرافی تجزیہ

مائیکرو سی ٹی اسکینر (پرکن ایلمر، ایم اے، امریکہ) کے ذریعہ فیمر کے تمام نمونے 9 μm ریزولوشن پر اسکین کیے گئے تھے۔ مزید تجزیہ Analyze12 کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔{3}} سافٹ ویئر ہڈیوں کی معدنی کثافت (BMD)، ہڈیوں کا حجم/کل حجم (BV/TV)، ٹریبیکولر نمبر (Tb. N)، ٹریبیکولر علیحدگی (Tb. Sp)، ٹریبیکولر موٹائی (Tb. Th)، اور ٹشو منرل ڈینسٹی (TMD)۔ CTVox سافٹ ویئر (PerkinElmer، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے سہ جہتی تصاویر کی تعمیر نو کی گئی۔

2.8۔ ٹیٹراسائکلائن اور کیلسن کا جمع ہونا

ہر جانور کو 25 ملی گرام/کلوگرام ٹیٹراسائکلائن اور 5 ملی گرام/کلو گرام کیلسن بالترتیب 13 ویں دن اور 3 ویں دن یوتھناسیا سے پہلے دی گئی تھی۔ Tetracycline اور calcein کے جمع ہونے کی جانچ Vectra® Polaris™ خودکار مقداری پیتھالوجی امیجنگ سسٹم (PerkinElmer, MA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ ٹیٹراسائکلائن اور کیلسن کے درمیان فاصلے کو امیج پرو پلس سافٹ ویئر ورژن 6 سے دیکھا جا سکتا ہے۔{6}}۔

2.9 مغربی بلوٹنگ تجزیہ

فیمر ٹشوز کو ہم آہنگ کیا گیا تھا اور RIPA lysis بفر میں لیس کیا گیا تھا۔ پروٹین کی ارتکاز کا تعین بائیسنچونک ایسڈ (BCA) پروٹین پرکھ ریجنٹ کٹ (بیجنگ ٹرانسجن بائیوٹیک، بیجنگ، چین) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ کل پروٹین کو 10 فیصد یا 12 فیصد SDS-PAGE جیلوں پر لوڈ کیا گیا اور پھر نائٹروسیلوز جھلی پر منتقل کیا گیا۔ جھلی کو بلاک کر دیا گیا اور پھر راتوں رات پرائمری اینٹی باڈیز اور GAPDH (لاس اینجلس، USA) کے ساتھ 4 ◦C پر انکیوبیشن کیا گیا جس کے بعد سیکنڈری اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیشن کی گئی۔ ٹینون 5200 ملٹی (شنگھائی، چین) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کے تجزیہ کے بینڈ کا تجزیہ کیا گیا۔

2.10 امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ

فیمر ٹشوز کے حصے 4 ◦C پر بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ لگائے گئے تھے۔ BMP-2، OCN، OPG، اور RANKL کے خلاف پولی کلونل اینٹی باڈیز کو بالترتیب 1:200 اور 1:100 پر گھٹا دیا گیا۔ سیکنڈری اینٹی باڈی ماؤس اینٹی خرگوش IgG (1:200) 37 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے۔ Vectra® Polaris™ خودکار مقداری پیتھالوجی امیجنگ سسٹم (PerkinElmer, MA, USA) کا استعمال۔ پروٹین کے اظہار کا مقداری تجزیہ کرنے کے لیے، امیج پرو پلس سافٹ ویئر ورژن 6.0 اور ایڈوب فوٹوشاپ کا اطلاق کیا گیا۔

2.11۔ شماریاتی تجزیہ

نتائج کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ مختلف گروپوں کا موازنہ کرتے وقت یک طرفہ انووا انجام دیا گیا۔ SPSS سافٹ ویئر ورژن 22۔{2}} شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور P < 0.05="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

cistanche reddit

3. نتائج

3.1 TGs اور PSs ہڈیوں کے ہسٹوپیتھولوجیکل نقصانات کو کم کرتے ہیں اور SAMP6 چوہوں میں کولیجینس فائبر اور کونڈروسائٹس کی تشکیل کو فروغ دیتے ہیں۔

فیمر پیتھولوجیکل نقصان کو H&E کے داغ کے ذریعے دیکھا جا سکتا ہے۔ SAMR1 گروپ میں ہڈیوں کے ہسٹومورفولوجیکل ڈھانچے کو باقاعدگی سے ترتیب دیا جاتا ہے۔ تاہم، SAMP6 گروپ میں مذکورہ ہڈی کے ڈھانچے کو نقصان پہنچا۔ TGs اور PSs گروپوں میں مورفولوجی کی تبدیلیاں SAMP6 گروپ کے مقابلے کم تھیں۔ تاہم، OSs ٹریٹمنٹ گروپ نے مورفولوجی تبدیلیوں (تصویر 1A) کے لیے کوئی خاص بہتری نہیں دکھائی۔ گولڈنر ٹرائکروم، وان گیسنز (VG)، اور Safranin O Fast Green سٹیننگ ہڈیوں کے ڈھانچے کی تشکیل کو ظاہر کرنے کے لیے کیے گئے تھے۔ نتائج نے واضح کیا کہ SAMP6 گروپ کے مقابلے TGs اور PSs گروپوں میں نئی ​​ہڈی، کولیجینس فائبر، اور کونڈروسائٹس کو بہتر بنایا گیا تھا۔ تاہم، OSs ٹریٹمنٹ گروپ نے ہڈیوں کی ساخت میں تبدیلیوں کے لیے کوئی خاص بہتری نہیں دکھائی (تصویر 1B–D)۔

تصویر 1. TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہسٹوپیتھولوجیکل نقصان کو کم کرتے ہیں۔

3.2 TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کے ٹرن اوور کے بائیو مارکر کو تبدیل کرتے ہیں۔

جب آسٹیوپوروسس ہوتا ہے تو، ہڈیوں کی تشکیل کے بائیو مارکر کی سطح میں نمایاں کمی واقع ہو جاتی ہے، جیسے سیرم BGP اور PICP۔ اس کے برعکس، ہڈیوں کی ریزورپشن سے وابستہ بائیو مارکر کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا، بشمول سیرم TRACP اور S-CTX (تصویر 2)۔ حوصلہ افزا طور پر، TGs اور PSs گروپس BGP، BALP، P1NP، PICP، ALP، S-CTX، TRACP، U-CTX، U-NTX، D-Pyr، اور Pyr کی سطح کو تبدیل کر سکتے ہیں، لیکن OSs ایسا نہیں کر سکے۔

تصویر 2. SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کے ٹرن اوور کے بائیو مارکر پر TGs اور PSs کے اثرات۔

3.3 TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کی نئی تشکیل اور کیلشیم کے ذخائر کو فروغ دیتے ہیں۔

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا ہڈیوں کی تشکیل اور فاسفیٹ معدنیات کے جمع ہونے کو TGs، PSs، اور OSs کے علاج سے فروغ دیا جا سکتا ہے، tetracycline calcein لیبلنگ، اور Von Kossa سٹیننگ کی گئی تھی۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کی نئی تشکیل SAMR1 چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی، جبکہ TGs اور PSs نے نئی ہڈیوں کی تشکیل کو نمایاں طور پر فروغ دیا (تصویر 3A)۔ وان کوسا کے داغ نے انکشاف کیا کہ TGs اور PSs ٹریٹمنٹ گروپس (تصویر 3B) میں بہت زیادہ کیلشیم جمع تھا۔

تصویر 3. TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کی نئی تشکیل اور معدنی جمع کو فروغ دیتے ہیں۔

3.4 TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کے مائکرو آرکیٹیکچر کو بہتر بناتے ہیں۔

مائیکرو سی ٹی کے ذریعہ ہڈیوں کے مائیکرو آرکیٹیکچر کا پتہ چلا۔ SAMR1 چوہوں کے مقابلے میں، SAMP6 چوہوں کا مائیکرو فن تعمیر زیادہ خراب تھا، جبکہ TGs اور PSs کے ساتھ 12 ہفتوں تک علاج کیے گئے چوہوں میں ہڈیوں کی حالت بہتر ہوئی (تصویر 4)۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ BMD، BV/TV، Tb.N، اور Tb کے اشاریہ جات۔ ٹی بی کے اشاریہ جات کو کم کیا گیا تھا۔ SAMR1 چوہوں کے مقابلے SAMP6 چوہوں میں Sp اور TMD میں اضافہ کیا گیا تھا۔ TGs اور PSs نے نمایاں طور پر BMD، BV/TV، Tb میں اضافہ کیا۔ این، ٹی بی ویں اور ٹی بی میں کمی۔ SAMP6 چوہوں کے مقابلے میں Sp اور TMD۔ تاہم، OSs گروپ میں کوئی خاص تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔

3.5 TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں BMP-2، OCN، OPG، اور RANKL اظہار کو تبدیل کرتے ہیں

ہم نے BMP-2، OCN، OPG، اور RANKL کے پروٹین ایکسپریشنز کا جائزہ لیا۔ TGs اور PSs نے BMP-2، OCN، اور OPG کی قابل ذکر اپ گریجشن کی حوصلہ افزائی کی، جبکہ RANKL کے اظہار کو کم کیا گیا تھا (تصویر 5)۔ تاہم، OSs تھراپی گروپ میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔

تصویر 4. ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے مائکرو آرکیٹیکچر پر TGs اور PSs کے اثرات۔

3.6۔ TGs اور PSs SAMP6 چوہوں میں p-GSK-3 (Ser9) اور p- -کیٹنین اظہار کو تبدیل کرتے ہیں

TGs اور PSs کے osteoblastogenesis کو فروغ دینے کے طریقہ کار کو سمجھنے کے لیے، SAMP6 چوہوں کی ہڈیوں کے ٹشوز میں p-GSK-3 (Ser9) اور p- -کیٹنین کے تاثرات کو مغربی بلوٹنگ (تصویر 6) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ TGs اور PSs کے علاج نے SAMP6 گروپ کے مقابلے میں p-GSK-3 (Ser9) کے اظہار کو نمایاں طور پر بہتر کیا اور فیمر میں p- -کیٹنین کے اظہار کو کم کیا۔ تاہم، OSs ٹریٹمنٹ گروپ نے کوئی خاص تبدیلی نہیں دکھائی۔

4. بحث

موجودہ کام میں SAMP6 اور SAMR1 چوہوں کا استعمال کرتے ہوئے C. deserticola سے آسٹیوپوروسس کے خلاف موثر اجزاء تلاش کرنا۔ C. deserticola سے تین نچوڑ علاج کے اثرات کے ساتھ ساتھ ممکنہ میکانزم کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیے گئے۔ اس کے علاوہ، RANKL، OPG، OCN، اور BMP-2 کے اظہار کے ساتھ ساتھ دیگر ہڈیوں کے ریزورپشن ریگولیٹرز کا بھی تجزیہ کیا گیا۔ SAMP6 گروپ کے مقابلے میں، TGs اور PSs ہڈیوں کے ہسٹوپیتھولوجیکل نقصان کو بہتر بنا سکتے ہیں، اور ساتھ ہی نئی ہڈی، کولیجن فائبر، کونڈروسائٹ، اور کیلشیم کے جمع ہونے کو فروغ دے سکتے ہیں۔ اس دوران، دونوں ہڈیوں کے ٹرن اوور کے بائیو مارکر کو تبدیل کر سکتے ہیں، اور ہڈیوں کے مائیکرو اسٹرکچر کو مؤثر طریقے سے بہتر بنا سکتے ہیں۔ تاہم، OSs کے علاج کے لیے کوئی حفاظتی اثرات نہیں دیکھے گئے۔

تصویر 5. TGs اور PSs BMP-2، OCN، اور OPG کے اظہار کو فروغ دیتے ہیں اور RANKL کے اظہار کو کم کرتے ہیں۔

آسٹیوپوروسس جیسی کئی بیماریوں کی علامات کو دور کرنے کے لیے ٹی سی ایم کو بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔ آسٹیوپوروسس سمیت بیماریوں کی مختلف علامات کو دور کریں۔ درجنوں قدرتی چینی دواؤں کی جڑی بوٹیوں سے متعدد اینٹی آسٹیوپوروٹک بائیو ایکٹیو مرکبات کی نشاندہی کی گئی ہے جو عام طور پر گردوں کو ٹونیفائی کرنے کے ساتھ ساتھ گردے کے جوہر کو محفوظ رکھنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں (Xu et al., 2017; Liu et al., 2018)۔ C. deserticola میں نسبتاً زیادہ حفاظت ہوتی ہے اور گردوں کی کمی کے علاج کے لیے علاج کے افعال کی ایک وسیع رینج ہے۔ بہت سے تحقیقی مطالعات نے آسٹیوپوروسس پر C. deserticola کے نچوڑ کے علاج کے اثرات دریافت کیے ہیں (Li et al., 2012; Liang et al., 2013; Song et al., 2018)۔

ہڈیوں کی تشکیل کرنے والے آسٹیو بلوسٹس اور ہڈیوں کو ریزورب کرنے والے آسٹیو کلاسٹس، جو کہ ملٹی پوٹینشل mesenchymal اسٹیم سیلز (MSCs) کے فرق سے تھے، مختصر زندگی والے خلیے ہیں (Teitelbaum and Ross, 2003)۔ ان دونوں کو مستقل طور پر اسٹیم سیلز (لانگ، 2011) سے پیدا ہونے والے نئے سے تبدیل کرنے کی ضرورت ہے۔ Wnt/-catenin سگنلنگ پاتھ وے، جو ہڈیوں کے ٹشوز کے فرق میں اہم کردار ادا کرتا ہے، کثیر پوٹینشل MSCs کی آسٹیو بلوسٹس میں واقفیت اور تفریق کو فروغ دے کر آسٹیو بلاسٹ کی پیداوار کو متحرک کرتا ہے (Rodda and McMahon, 2006)۔ اس کے علاوہ، Wnts بالغ آسٹیو بلوسٹس کے apoptosis کو روکتا ہے اور اس طرح کیٹنین پر منحصر اور آزاد دونوں راستوں سے ان کی عمر کو طول دیتا ہے (المیڈا ایٹ ال۔، 2005)۔ لہذا، Wnt/ -catenin سگنلنگ پاتھ وے آسٹیوپوروسس کے روگجنن کو واضح کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ موجودہ تجربے میں، SAMP6 چوہوں کا استعمال مختلف C. deserticola ارکوں سے اینٹی آسٹیوپوروٹک کی تاثیر کو جانچنے کے لیے کیا گیا۔ TGs اور PSs نے RANKL اور p- -کیٹنین کی سطحوں کو نمایاں طور پر نیچے ریگولیٹ کیا اور BMP-2، OCN، OPG، اور p-GSK-3 کے تاثرات کو اپ ریگولیٹ کیا۔ خلاصہ یہ کہ SAMP6 چوہوں پر TGs اور PSs کا علاج معالجہ بنیادی طور پر Wnt/ -catein سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے تھا۔

چونکہ آسٹیو کلاسٹس کا ضرورت سے زیادہ جذب آسٹیوپوروسس کی ایک اہم وجہ ہے، اس لیے آسٹیو کلاسٹس کی فعالیت اور تفریق سے منسلک عوامل کو ہڈیوں کے نقصان کو روکنے کے لیے اہم مقاصد کے طور پر سمجھا جا سکتا ہے (Takatsuna et al.، 2005)۔ ہمارے مطالعے میں، RANKL کے اظہار کو نمایاں طور پر نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا، اسی وقت OPG کی سطح کو TGs اور PSs کے ذریعے اپ ریگولیٹ کیا جا سکتا ہے۔ یہ اچھی طرح سے دستاویزی کیا گیا ہے کہ ہڈیوں کی تشکیل اور آسٹیو بلاسٹ سیل کی تفریق کو دوبارہ تشکیل دینے کا عمل بنیادی طور پر BMP-2 اور OPN (کینالس، 2009) کے بڑھتے ہوئے تاثرات سے ہوتا ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ C. deserticola کے TGs اور PSs نے BMP-2 اور OPG اظہار میں اضافہ کیا اور ہڈیوں کی معدنیات کو بڑھایا۔ لہذا، TGs اور PSs BMP-2 اور OPN کو اپ ریگولیٹ کرکے اور RANKL کو گھٹا کر ہڈیوں کی تشکیل میں ثالثی کرتے ہیں۔

ہڈیوں کی تشکیل کے مارکر ہڈیوں کی تعمیر کرنے والے خلیوں کی سرگرمی کی عکاسی کرتے ہیں، وہی ہڈیوں کی ریزورپشن مارکر آسٹیو کلاسٹس کی سرگرمی کی عکاسی کرتے ہیں۔ ہڈیوں کے بدلے ہوئے ٹرن اوور مارکروں کے نتیجے میں مائیکرو آرکیٹیکچر بگڑ جاتا ہے۔ ہمارے مطالعے میں، TGs اور PSs گروپوں میں ہڈیوں کی بحالی کے مارکر (S-CTX، TRACP، U-CTX، D-Pyr، U-NTX، Pyr) کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا، اس کے برعکس، ہڈیوں کی تشکیل کے مارکر (BGP، BALP) ، P1NP، PICP، ALP) میں نمایاں اضافہ ہوا۔ لہذا کوئی دیکھ سکتا ہے کہ C. deserticola کے TGs اور PSs آسٹیوپوروٹک ہڈی کی تعمیر نو کو فروغ دیتے ہیں۔

Wnt/ -catenin پاتھ وے آسٹیو بلاسٹ تفریق مارکروں اور معدنیات کے اظہار کو متحرک کرتا ہے، ساتھ ہی یہ آسٹیو بلوسٹس میں ماسٹر آسٹیوجینک فیکٹر BMP-2 کے اظہار کو متحرک کرتا ہے (Zhang et al.، 2013)۔ مزید برآں، -کیٹنین آسٹیو بلاسٹ میں او پی جی کے اظہار کو بڑھاتا ہے، جو ہڈیوں کی ریزورپشن کو روک کر بالواسطہ طور پر آسٹیو کلاس تفریق کو دباتا ہے (بیرون اور کنیسل، 2013)۔ ہمارا موجودہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ TGs اور PSs نمایاں طور پر p-GSK-3 کو اپ-ریگولیٹ کرتے ہیں اور p- -کیٹنین کی سطح کو نیچے کو منظم کرتے ہیں۔ یہ نتائج اس نتیجے کی تائید کرتے ہیں کہ اینٹی آسٹیوپوروٹک پر TGs اور PSs کے کام کو Wnt/ -catenin سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔

ہمارے پچھلے HPLC تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ پانچ فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز بشمول echinacoside، cistanoside A، acteoside، isoacteoside، اور 2′-acetylacteoside TGs میں اہم اجزاء تھے (Li et al., 2019; Shi et al., 2019)۔ مندرجہ بالا پانچ phenylethanoid glycosides کے ڈھانچے تمام phenolic hydroxyl گروپوں سے بھرپور تھے، جو C. deserticola (Chen et al.، 2016) کی اینٹی آکسیڈینٹ خاصیت کے لیے ذمہ دار ہیں۔ یہ بتایا گیا ہے کہ اینٹی آکسیڈینٹ نظام کو بہتر بنانے سے ہڈیوں کے نقصان کو روکا جا سکتا ہے، اس طرح یہ فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز C. deserticola کے ممکنہ فعال اجزاء ہو سکتے ہیں جو اینٹی آسٹیوپوروٹک سرگرمی کے لیے ذمہ دار ہیں۔ ایسی اطلاعات ہیں کہ echinacoside اور ایکٹیوسائیڈ آسٹیوپوروسس کی مخصوص پیتھولوجیکل خصوصیات کو بہتر بنا سکتے ہیں، جیسے کہ ہڈیوں کے معیار اور کل فیمر BMD کو بہتر بنانا، ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دینا، اور ہڈیوں کی بحالی کو روکنا (Chen et al.، 2020)۔ مزید برآں، echinacoside کا ایک زبردست اینٹی آسٹیوپوروٹک اثر ہے (Li et al.، 2013)۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ cistanoside A ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دے سکتا ہے اور NF-κB کو روکنے اور PI3K/Akt کے راستوں کو چالو کرنے کے ذریعے ہڈیوں کی بحالی کو روک سکتا ہے (Xu et al., 2017)۔ C. deserticola polysaccharides کے اینٹی آسٹیوپوروٹک اثر کی اطلاع نہیں ملی ہے۔ تاہم، دیگر مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ ایسٹراگلس پولی سیکرائڈز RANKL کے اظہار کو دبا سکتے ہیں، سیرم OPG کی سطح کو بڑھا سکتے ہیں اور آخر کار آسٹیو کلاس تفریق کو روک سکتے ہیں (Huo and Sun، 2016؛ Hwang et al.، 2018)۔ C. deserticola کے OS بنیادی طور پر mannitol، betaine، fructose، glucose، اور sucrose (Shi et al., 2019) پر مشتمل ہوتے ہیں، جن کی اینٹی آسٹیوپوروٹک سرگرمی کی کوئی اطلاع نہیں ہے، لہذا، OSs کا آسٹیوپوروسس پر کوئی علاج معالجہ نہیں ہوتا ہے۔ خلاصہ یہ کہ TGs اور PSs اینٹی آسٹیوپوروسس کے اثر کے لیے C. deserticola میں فعال اجزاء ہیں۔

Cistanche herba سپلیمنٹس پاؤڈرایک ہےاینٹی آسٹیوپوروسس اثر.

مزید معلومات کے لیے، براہ کرم یہاں کلک کریں۔

5. نتائج

آخر میں، C. deserticola کے TGs اور PSs Wnt/ -catenin سگنلنگ پاتھ وے کو ریگولیٹ کرنے کے ذریعے SAMP6 چوہوں میں ہڈیوں کی تشکیل کو بڑھا سکتے ہیں لیکن OSs کو نہیں۔ مستقبل میں، TGs اور PSs آسٹیوپوروسس کے لیے ہڈیوں کے حفاظتی علاج کے امید افزا ایجنٹ بن سکتے ہیں۔