Cistanche Deserticola کے ٹوٹل گلائکوسائیڈز Nrf- 2/Keap-1 پاتھ وے کے ذریعے ایم سی اے او/آر چوہوں میں نیوروواسکولر ری جنریشن کو شامل کرکے اعصابی فنکشن کی بحالی کو فروغ دیتے ہیں-Ⅱ

TGs I/R زخمی چوہوں میں نیورل ریموڈلنگ کو فروغ دیتے ہیں۔

متعدد مطالعات کے مطابق، فالج کے بعد نیوروجینیسیس فعال بحالی کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے۔ Synaptophysin (SYN)، postsynaptic density 95 (PSD-95) پروٹین، اور microtubule سے وابستہ پروٹین 2 (MAP-2) کو پرانتستا کے اسکیمک پینمبرا میں نیورونل پلاسٹکٹی کی جانچ کرنے کے لیے مارکر کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ I/R زخمی چوہوں میں نیوروجینیسیس پر TGs، PSs، اور OSs کے علاج کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے، SYN، PSD95، اور MAP-2 اظہار کے لیے امیونو فلوروسینس اور ویسٹرن بلاٹ کو انجام دیا گیا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 9 اور 10 میں دکھایا گیا ہے، I/R چوہوں میں SYN، PSD95، اور MAP{10}} کے اظہار کی سطح 14 دن کے ریفرفیوژن کے بعد NOR چوہوں کے مقابلے میں کم ہوئی، جبکہ TGs اور PSs کا علاج نمایاں طور پر بڑھ سکتا ہے۔ ان کے اظہار کی سطح کو منظم کریں۔ OSs گروپ میں MOD گروپ کے مقابلے میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئی۔ اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ TGs اور PSs کا علاج ڈرامائی طور پر کرنے کے قابل تھا۔I/R چوٹ کے بعد عصبی ریموڈلنگ کو فروغ دیں۔. 

اسکیمک اسٹروک سے بچاؤ کے لیے نیچرل CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ایکٹ 12%

TGs I/R زخمی چوہوں میں Nrf-2 اور کیپ-1 تاثرات کو تبدیل کرتا ہے

آکسیڈیٹیو تناؤ I/R چوٹ میں اہم روگجنک طریقہ کار ہے۔ مطالعات نے تصدیق کی کہ Nrf-2 اینٹی آکسیڈیٹیو ردعمل کا ایک ماسٹر ریگولیٹر ہے۔ I/R چوٹ کے بعد Nrf-2 اور Keap-1 ثالثی آکسیڈیٹیو ردعمل کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے سائٹوپلاسمک کا جائزہ لیا۔

اظہار کے ساتھ ساتھ Keap-1 کا جوہری ٹرانسلوکیشن۔ دریں اثنا، I/R زخمی چوہوں کے دماغی بافتوں میں Nrf-2 کے اظہار کی بھی جانچ کی گئی (اعداد و شمار 10 اور 11)۔ امیونو فلوروسینس تجزیہ کے مطابق، NRF-2 بنیادی طور پر NOR گروپ میں سائٹوپلازم میں پایا گیا تھا۔ TGs گروپ میں، سائٹوپلاسمک لوکلائزیشن میں Nrf-2 کے اظہار کو کم کیا گیا تھا، لیکن نیوکلئس میں اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، اور Keap-1 اظہار میں کمی بھی دیکھی گئی تھی۔ اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TGs کا دماغی تحفظ Nrf-2 اور Keap-1 کی ماڈیولیشن سے وابستہ ہوسکتا ہے۔

TGs I/R زخمی چوہوں میں دماغی ٹشو آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے۔

TGs کے اینٹی آکسیڈیٹیو اثرات کی تصدیق کرنے کے لیے، SOD، CAT، GSH-Px، اور MDA کی سرگرمیوں کا I/R زخمی چوہوں میں جائزہ لیا گیا۔ شکل 12 میں، MOD گروپ میں MDA کے مواد میں واضح طور پر اضافہ کیا گیا تھا، اور ایک ہی وقت میں، SOD، CAT، اور GSH-Px کی سرگرمیوں میں عام چوہوں کے مقابلے میں کمی واقع ہوئی تھی۔ اس کے برعکس، TGs کے علاج سے MDA کے مواد میں نمایاں کمی واقع ہوئی اور SOD، CAT، اور GSH-Px کی سرگرمیوں میں اضافہ ہوا۔ ان نتائج نے TGs کی اینٹی آکسیڈیشن سرگرمی کی مزید تصدیق کی۔

اسکیمک اسٹروک کے علاج کے لیے نیچرل CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

بحث

بہت سے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ TCM C. deserticola میں وسیع حیاتیاتی سرگرمیاں ہیں، مثلاً سیکھنے کی صلاحیت، یادداشت اور قوت مدافعت کو بڑھانا۔ تاہم، نیورو پروٹیکشن کے لیے C. deserticola کے فعال اجزا غیر واضح ہیں۔ موجودہ کام کا مقصد فعال اجزاء کو اسکرین کرنا ہے۔C. اسکیمک اسٹروک کے خلاف deserticolaMCAO/R ماڈل پر۔ C. deserticola (TGs، PSs، اور OSs) سے تین اقتباسات MCAO/R چوہوں پر ان کے اثرات کے ساتھ ساتھ ممکنہ میکانزم کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔

اسٹروک ایک عام شدید دماغی بیماری ہے۔ وبائی امراض کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ خواتین کے مقابلے مردوں میں فالج زیادہ عام ہے۔ اس طرح، ہمارے تجربے میں، ٹیسٹ کے لئے نر چوہوں کو اپنایا گیا تھا. ہمارے نتائج نے ثابت کیا کہ I/R انڈکشن نے آکسیڈیٹیو تناؤ اور infarct حجم کو تیز کیا، BBB کو توڑا اور اعصاب اور دماغی چوٹ کا باعث بنی۔ اسکریننگ کے بعد، TGs infarct حجم کو کم کرنے اور عصبی دوبارہ تشکیل دینے اور انجیوجینیسیس کو فروغ دینے کے لئے پائے گئے۔ مزید یہ کہ I/R چوٹ کے بعد BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لیے TGs کا مشاہدہ کیا گیا۔ اس کے برعکس، PSs اور OS I/R کی چوٹ میں کوئی خاص کمی نہیں لاتے۔ اس طرح، TGs کو نیورو پروٹیکشن کے لیے C. deserticola کا بڑا فعال حصہ سمجھا جاتا ہے، ممکنہ طور پر Nrf- 2/Keap-1 راستے کو چالو کرنے کے ذریعے نیورل ریموڈلنگ، انجیوجینیسیس، اور BBB سالمیت کو فروغ دینے کے ذریعے۔

بڑھتے ہوئے شواہد اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ انفکشن اور اسکیمک پینمبرا کی تشکیل سے بچنے کے لیے مؤثر کولیٹرل گردش کا قیام نمایاں طور پر اہم ہے، اور اسکیمک اسٹروک کے ابتدائی مرحلے میں ایک اہم علاج ہے۔ اسکیمک انفکشن کے بعد عروقی اینڈوتھیلیل خلیوں اور ہموار پٹھوں کے خلیوں کا پھیلاؤ کولیٹرل گردش کے قیام کا تعین کرتا ہے۔ تاہم، اسکیمیا ماڈلز میں ایک عام رجحان ہے- یعنی آکسیڈیٹیو تناؤ دماغ کے مائیکرو واسکولچر میں وسیع پیمانے پر موجود ہے۔ مطالعہ کے اعداد و شمار نے ظاہر کیا ہے کہ اینٹی آکسائڈنٹ کی ایک بڑی تعداد BBB کے کام اور انجیوجینیسیس کی خصوصیات کو پریشان کر سکتی ہے. CD31 اور a-SMA بالترتیب عروقی اینڈوتھیلیل خلیوں کے ساتھ ساتھ ہموار پٹھوں کے خلیوں کے مارکر ہیں۔ C. deserticola سے نچوڑ کے اوپر بیان کردہ سیل کے پھیلاؤ کے اثر کی تحقیقات کے لیے، ہم نے دماغی اسکیمک penumbra homogenate میں CD31 اور a-SMA کے تاثرات کا جائزہ لیا۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TGs نے CD31 اور a-SMA کے تاثرات کو نمایاں طور پر بڑھایا۔ تاہم، PSs اور OSs گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ لہذا، ہم نے اندازہ لگایا کہ TGs CD31 اور a-SMA کے تاثرات کو بڑھا کر انجیوجینیسیس کو فروغ دے کر دماغی نقصان کو کم کر سکتے ہیں، جبکہ PSs اور OSs نے دماغی نقصان سے ایسا کوئی تحفظ فراہم نہیں کیا۔ ان نتائج نے مزید تصدیق کی کہ صرف TGs ہی دماغی I/R کی چوٹ کو روک سکتے ہیں۔

اسکیمک اسٹروک کو دماغی اسکیمیا کے نتیجے کے طور پر سوچا جا سکتا ہے جو نیورونل پلاسٹکٹی میں خرابی یا دماغی علاقوں کی دوبارہ تشکیل کی وجہ سے ہوتا ہے۔ فالج کے مریضوں کی اکثریت اعصابی خسارے کا شکار ہوتی ہے۔ فالج کے مریضوں کے لیے اعصابی افعال کو بہتر بنانے کے لیے نیوروجینیسیس کو چالو کرنا ایک امید افزا حکمت عملی ہے۔ دماغی I/R چوٹ کے بعد نیوروجینیسیس نیورولوجیکل فنکشن کی بحالی میں براہ راست حصہ لیتا ہے۔ پچھلی تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ TGs ہپپوکیمپل اہرام کے خلیوں کی بقا کی شرح کو بہتر بنا سکتے ہیں اور نیوروجنسیس کو آمادہ کر سکتے ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ بہت سی بیماریوں کے دوران نیوران کے نقصان کا سبب بنتا ہے، جیسے پارکنسنز، فالج وغیرہ۔ Nrf-2 اپنے فروغ دینے والے علاقے میں نیورو پروٹیکشن سے متعلق بہت سے جینوں کی نقل کرتا ہے، جس میں بنیادی طور پر SOD، MDA، CAT، اور g-glutamyl cysteine ​​ligases، وغیرہ شامل ہیں۔ SYN، PSD-95، اور MAP{{ 4}} پروٹین، جو Synaptic تشکیل اور نیورو ٹرانسمیشن کے ساتھ قریبی تعلق رکھتے ہیں، اسکیمک penumbra خطے میں تحقیقی نیورونل پلاسٹکٹی کے مارکر سمجھے جا سکتے ہیں۔ مطالعہ کرنے کے بعد، ہم نے پایا کہ TGs کے ساتھ علاج PSD95، SYN، اور MAP-2 کے تاثرات کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ TGs کا دماغی تحفظ I/R کے دوران بہتر نیورونل پلاسٹکٹی کے ساتھ منسلک تھا۔ تاہم، یہ افسوس کی بات ہے کہ PSs کے ساتھ ساتھ OSs گروپوں میں کوئی واضح فرق نہیں ہے۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ TGs دماغی I/R چوٹ کے بعد نیوروپلاسٹیٹی کو بڑھا سکتے ہیں۔

فالج کے مریضوں میں امیجنگ ریسرچ سے پتہ چلتا ہے کہ بی بی بی کی خرابی کو پیری اسکیمک دماغ کی ایک نمایاں صفت کے طور پر سوچا جا سکتا ہے (بینگ ایٹ ال۔، 2007)۔ TJs، جو cytoplasmic پروٹین، transmembrane پروٹینز، اور کیپلیری endothelial خلیات کے درمیان جنکشن adhesion molecules پر مشتمل ہیں، BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں بہت اہم ہیں (Ye et al.، 2019)۔ ان میں، ZO-1، claudin-5، اور occludin TJs میں سب سے اہم پروٹین ہیں۔ بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ اسکیمیا کی وجہ سے BBB کی بڑھتی ہوئی پارگمیتا عام طور پر ZO-1، claudin-5، اور occludin (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu et al.، 2017؛ Liu et al.، 2018)۔ اس کام میں، نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ اگرچہ TGs ZO-1، claudin-5، اور occludin پروٹین کے اظہار کو MCAO سے متاثر دماغی بافتوں میں نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں، نہ تو PSs اور نہ ہی OSs نے ایسا کیا۔ بی بی بی دماغی اینڈوتھیلیل خلیوں پر مشتمل ہوتا ہے اور یہ پیریسیٹس (Nyul-Toth et al.، 2016) کے ساتھ قریبی تعلق رکھتا ہے۔ پیریسیٹس بی بی بی کی سالمیت کے لیے اہم ہیں (بیل ایٹ ال۔، 2010)۔ اسکیمک اسٹروک شدید مرحلے میں دماغ کے اینڈوتھیلیل سیلز سے پیرسائٹ کی موت اور لاتعلقی کو متحرک کرتا ہے، اس طرح مائیکرو ویسکولیچر کو غیر مستحکم کرتا ہے اور بی بی بی کی خصوصیات کو تبدیل کرتا ہے (زکریا ایٹ ال۔، 2013)۔ ہمارے ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ TGs کیپلیریوں پر pericyte کوریج کو بڑھا سکتے ہیں اور ZO-1، claudin-5، اور occludin کے اظہار کی سطح کو بڑھا سکتے ہیں۔ ان مظاہر نے ثابت کیا کہ TGs دماغی I/R کی چوٹ کے بعد مؤثر طریقے سے BBB کی سالمیت کی حفاظت کر سکتے ہیں۔ خلاصہ یہ کہ TGs دماغی چوٹ کو متعدد طریقوں سے کم کر سکتے ہیں، جیسے انجیوجینیسیس کو فروغ دینا، نیورونل پلاسٹکٹی کو بہتر بنانا، اور BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنا۔

اس کے بعد ہم نے TGs کے دماغی تحفظ کے بنیادی طریقہ کار کو دریافت کرنے کے لیے سگنلنگ پاتھ وے کی چھان بین کی۔ I/R چوٹ کا عمل کثیر الجہتی ہے، اور اس طرح روگجنن میں متعدد میکانزم شامل ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ ایک بنیادی خطرے کا عنصر ہے جو I/R کی حوصلہ افزائی سے دماغی چوٹ میں حصہ ڈالتا ہے، جیسے BBB ڈھانچے کو نقصان، عروقی انڈوتھیلیل dysfunction، اور اسکیمک نیورونل چوٹ کا بڑھ جانا۔ اس طرح، آکسیڈیٹیو تناؤ I/R حوصلہ افزائی دماغی چوٹ میں ایک پرکشش علاج کا ہدف بن گیا ہے۔ فیز 2 انزائمز، جو جوہری عنصر E2-متعلقہ عنصر-2 (Nrf-2) کے ذریعے ثالثی کرتے ہیں، کو ایک اہم ذریعہ سمجھا جاتا ہے جس کے ذریعے نیوران خود کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچاتے ہیں۔ بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ I/R کے دوران Nrf-2 کو چالو کرنا نیورو پروٹیکشن کے لیے ممکنہ علاج کا ہدف ہے۔ Nrf-2، endogenous antioxidant دفاع کے ایک اہم ریگولیٹر کے طور پر، heme oxygenase 1 (HO-1) اور دیگر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، جیسے NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1) کی سطح میں ثالثی کرتا ہے۔ SOD، CAT، GSH، اور MDA۔ مزید برآں، Nrf-2 انجیوجینیسیس میں ایک اہم ریگولیٹر کا کردار ادا کرتا ہے۔ موجودہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ Nrf-2 کو عروقی نشوونما کے عمل میں نمایاں طور پر بڑھا اور فعال کیا جا سکتا ہے۔

اینٹی اسکیمک اسٹروک کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیوبولوسا PHGS75% ECH 30% ایکٹ 12%

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے، TGs میں بہت سے بایو ایکٹیو مرکبات ہوتے ہیں، مثال کے طور پر، echinacoside، tubuloside A، acteoside، isoacteoside، اور 2'-acetylacteoside، اور ان میں سے کچھ دماغی I/R کی چوٹ کے بعد نیورو پروٹیکٹو افعال دکھاتے ہیں۔ Echinacoside کے بہت سے فارماسولوجیکل اثرات ہیں، جیسے اینٹی آکسیڈیشن، اینٹی سینسینس، نیورو پروٹیکشن، اینٹی سوزش، سیکیٹرائزیشن کو فروغ دینا، ہیپاٹو پروٹیکشن، ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دینا، اور ٹیومر مخالف سرگرمیاں۔ حال ہی میں، echinacoside کو مرکزی اعصابی نظام میں ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ کے طور پر شناخت کیا گیا ہے۔ Echinacoside MDA مواد کو کم کر سکتا ہے اور اسکیمیا دماغی چوٹ میں SOD اور GSH-Px کی سرگرمیوں کو بہتر بنا سکتا ہے، اور مالیکیولر ڈاکنگ تجزیہ ظاہر کرتا ہے کہ echinacoside Keap-1 سے منسلک ہو سکتا ہے، جو Nrf-2 جوہری نقل مکانی کا باعث بن سکتا ہے۔ زیا کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ ایکٹیوسائیڈ انفارکٹ کے حجم اور دماغی پانی کے مواد کو کم کر سکتا ہے تاکہ آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کر کے MCAO/R چوہوں میں اعصابی خسارے کو بہتر بنایا جا سکے۔ دیگر مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ isoacteoside H2O2-علاج شدہ V{10}} خلیوں میں سیلولر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، SOD، اور CAT کی سرگرمیوں کو بڑھا سکتا ہے۔ TGs میں موجود فعال مرکبات کی مذکورہ بالا رپورٹوں کی بنیاد پر، یہ اندازہ لگانا ممکن ہے کہ TGsاینٹی آکسیڈیشن راستوں کے ذریعے اسکیمک اسٹروک سے حفاظت کریں۔.

Li نے Nrf2/ARE پاتھ وے (Li et al.، 2018) کے ذریعے PC12 خلیوں پر H2O2-کی حوصلہ افزائی apoptosis پر phenylethanoid glycosides (PhGs) کے نیورو پروٹیکٹو اثرات کی اطلاع دی۔ ان PhGs کو Nrf2 نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن کو متحرک کرکے اور HO-1، NQO1، گلوٹامیٹ سسٹین لیگیس-کیٹلیٹک سبونائٹ (GCLC)، اور گلوٹامیٹ-سسٹین لیگیس موڈیفائر سبونائٹ (GCLM) (Li et al. گونگ وغیرہ، 2019)۔ لہذا، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ Nrf-2/ARE راستہ نیورونل سیلز پر پی ایچ جی کی ثالثی کے حفاظتی اثرات میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔ اسی طرح، اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ TGs MDA کی سطح کو کم کر سکتے ہیں اور I/R چوہوں میں SOD، CAT، اور GSH-Px کی سطح کو بڑھا سکتے ہیں۔ دریں اثنا، TGs نیوکلئس میں Nrf2 اظہار کو اپ گریڈ کر سکتے ہیں، سائٹوپلازم میں متعلقہ اظہار کو کم کر سکتے ہیں، اور Keap-1 اظہار کو نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں۔ لہذا، Nrf-2/Keap-1 کا راستہ TGs کے ثالثی نیورو پروٹیکٹو اثرات میں شامل ہو سکتا ہے۔ اس راستے کی مزید توثیق مستقبل میں آکسیجن-گلوکوز کی کمی/ری آکسیجنیشن انجری ماڈلز کے ساتھ وٹرو سیل کلچر میں کی جائے گی۔ مزید یہ کہ ہمارے مطالعے میں C. deserticola کے عرقوں کو مسلسل 14 دن تک دیا گیا۔ چونکہ بالغ نیوروجینیسیس 14 دنوں کے ریفرفیوژن کے دوران نیورو پروٹیکٹو اثرات کی تشریح کو متاثر کرے گا، اس لیے CTs کے نیورو پروٹیکٹو اثر کو تلاش کرنے کے لیے ہمارے موجودہ تجرباتی ڈیزائن سے نیوروجینیسیس کو خارج نہیں کیا جا سکتا۔ یہ ہماری تحقیق کی حد ہے۔

آخر میں، یہ C. deserticola کے TGs ہیں جو کر سکتے ہیں۔انجیوجینیسیس اور نیوروجنسیس کو بڑھانانیز I/R چوٹ والے چوہوں میں BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنا، لیکن PSs اور OSs میں نہیں۔ اثرات کو Nrf-2/Keap-1 پاتھ وے کو چالو کرنے سے ثالثی کیا جا سکتا ہے۔

اسکیمک اسٹروک کے علاج کے لیے نیچرل CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%