پیشاب کے اخراج وینکومائسن سے وابستہ شدید گردے کی چوٹ میں سوزش کے راستوں کی نشاندہی کرتے ہیں۔

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

لنڈا اوڈیشو 1،*، ایمی لی 1، جارڈن اماتو 1، ودھیوت جانی 1، سوما بال 2، رابرٹ ایچ ملز 1، مارویک کیریلو ٹیرازاس 1، ڈیوڈ جے گونزالیز 1، اشیتا ٹولوانی 3، انجلی آچاریہ 4، جارج سی۔ 5، میلانیا ایس جوائے 6,7، پاولا نکولیٹی 8، ایٹین میسیڈو 2، سچیتا وینگنکر 2، رویندر مہتا 2، ستیش پی رام چندر راؤ 9 اور براہ راست تفتیش کاروں کی جانب سے †

1 Skaggs سکول آف فارمیسی اینڈ فارماسیوٹیکل سائنسز، یونیورسٹی آف کیلیفورنیا، سان ڈیاگو، CA 92093، USA;a6le@ucsd.edu (AL); jegilmor@ucsd.edu (JA) vgjani@ucsd.edu (VJ)؛ rhmills@health.ucsd.edu (RHM);mac215@health.ucsd.edu (MC-T.); djgonzalez@ucsd.edu (DJG)

2 سکول آف میڈیسن، یونیورسٹی آف کیلیفورنیا، سان ڈیاگو، CA 92093، USA؛ sobal@ucsd.edu (SB);emacedo@ucsd.edu (EM)؛ svaingankar@health.ucsd.edu (SV)؛ rmehta@ucsd.edu (RM)

3 School of Medicine, University of Alabama, Birmingham, AL 35233, USA; atolwani@uab.edu

4 Albert Einstein College of Medicine, The Bronx, NY 10461, USA; anjali2526@gmail.com

5 البانی میڈیکل کالج، البانی، NY 12208، USA؛ jorge.cerda82@gmail.com

6 ڈویژن آف رینل ڈیزیز اینڈ ہائی بلڈ پریشر، سکیگس سکول آف فارمیسی اینڈ فارماسیوٹیکل، ارورہ، CO 80045، USA؛ MELANIE.JOY@cuanschutz.edu

7 سکول آف میڈیسن، یونیورسٹی آف کولوراڈو، ارورہ، CO 80045، USA

8 ماؤنٹ سینائی سکول آف میڈیسن، نیویارک، NY 10029، USA؛ paola.nicoletti@mssm.edu

9 ڈیپارٹمنٹ آف سیلولر اینڈ مالیکیولر میڈیسن، یونیورسٹی آف مشی گن میڈیکل سسٹم، این آربر، MI 48109، USA؛ satishpr@med.umich.edu

* خط و کتابت: lawdishu@ucsd.edu; ٹیلی فون: جمع 858-534-3919

† براہ راست تفتیش کاروں کی رکنیت تسلیمات میں فراہم کی گئی ہے۔

خلاصہ:

پس منظر:Vancomycin کو عام طور پر گرام پازیٹو جانداروں کے لیے پہلی لائن تھراپی کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے جیسے کہ میتھیسلن مزاحم Staphylococcus aureus۔ وینکومائسن سے متاثرہ شدیدگردہچوٹ(V-AKI) 43 فیصد تک مریضوں میں رپورٹ کیا گیا ہے، خاص طور پر ان لوگوں میں جن میں زیادہ ٹارگٹ گرت ارتکاز ہے۔ انسانوں میں چوٹ لگنے کا درست طریقہ کار اب بھی پراسرار ہے، حالیہ شواہد کے ساتھ قریبی ٹیوبول سیل اپوپٹوسس کی طرف ہدایت دی گئی ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے V-AKI والے مریضوں میں پیشاب کے خارج ہونے والے پروٹین کے مواد کی تحقیقات کی تاکہ چوٹ کے میکانزم اور ممکنہ ردعمل کے بائیو مارکر کو مزید واضح کیا جا سکے۔ طریقے: V-AKI والے مریضوں کے پیشاب کے نمونے جو DIRECT مطالعہ میں شامل تھے اور UAB-UCSD O'Brien CenterBiorepository سے صحت مند کنٹرول سے مماثل تھے تجزیہ میں شامل تھے۔ Exosomes کو سالوینٹس کے اخراج کے اصول اور پولی تھیلین گلائکول سے متاثرہ ورن کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ پروٹین کی شناخت اور مقدار کا تعین لیبل سے پاک مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹومیٹری (LC/MS) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ اوسط چوٹی سیرم کریٹینائن 3.7 ± 1.4 mg/dL تھی اور اس کا وقتگردہچوٹ4 تھا۔{1}} ± 3۔{3}} دن۔ ڈسچارج کے وقت، 90 فیصد مریضوں نے جزوی صحت یابی کا مظاہرہ کیا۔ 33 فیصد نے 28 دن تک مکمل صحت یابی کا تجربہ کیا۔ پانچ V-AKI اور 7 کنٹرول نمونوں پر پروٹومک تجزیوں سے انکشاف ہوا کہ 2009 میں تمام نمونوں میں پروٹین اور 251 پروٹین نمایاں طور پر V-AKI (پی-اسکور> 1) سے وابستہ ہیں۔ سب سے اوپر امتیازی پروٹین ComplementC3، complement C4، galectin-3-بائنڈنگ پروٹین، fibrinogen، alpha-2 macroglobulin، immunoglobulin heavy constant mu، اور serotransferrin تھے۔

نتیجہ:پیشاب کے اخراج V-AKI میں نیفروٹوکسک چوٹ کے بعد سوزش والی پروٹین کے اپ ریگولیشن کو ظاہر کرتے ہیں۔ پیتھوفیسولوجک میکانزم کی وضاحت اور ممکنہ چوٹ کے بائیو مارکر کی توثیق کے لیے ان نتائج کی تصدیق کے لیے ایک بڑے مریض کے نمونے کے لیے مزید مطالعات ضروری ہیں۔

مطلوبہ الفاظ:وینکومائسن؛ اے کے آئی؛ nephrotoxicity؛ exosomes سوزش؛ تکمیل مدافعتی راستے

Cistanche herbaگردے کی چوٹ کا علاج کر سکتے ہیں۔

Chengdu Wecistanche ہےcistancheگردے کی چوٹ کے علاج کے لیے مصنوعات

1. تعارف

Vancomycin ایک glycopeptide antibiotic ہے جو شدید بیمار مریضوں میں methicillin-resistant Staphylococcus aureus انفیکشن کے علاج کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ Nephrotoxicity ایک سنگین منفی واقعہ ہے جو 10-20 فیصد علاج شدہ مریضوں پر اثر انداز ہوتا ہے اور اس کا تعلق ہسپتال میں قیام کی بڑھتی ہوئی مدت، 30-دن کے ہسپتال میں داخلے کی شرح، اور ہر وجہ سے 30-دن کی اموات [1] سے ہے۔ وینکومیسن سے وابستہ شدیدگردہچوٹ(V-AKI) خوراک سے متعلق ہے اور 4-17 دنوں کے تھراپی کے آغاز کے ساتھ ہے۔ اگرچہ V-AKI کو طویل عرصے سے وینکومائسن کے ایک بڑے ضمنی اثر کے طور پر تسلیم کیا گیا ہے، نیفروٹوکسٹی کے طریقہ کار کو اچھی طرح سے سمجھا نہیں گیا ہے۔ وینکومائسن کے ذریعہ متحرک سیلولر اور مالیکیولر ردعمل کی تفہیم میکانزم کو سمجھنے اور V AKI کے خطرے کو کم کرنے کے لئے حکمت عملی تیار کرنے اور انفیکشن کے علاج میں اس کی افادیت کو زیادہ سے زیادہ کرنے کے لئے کلیدی اہمیت کا حامل ہے۔ زہریلے گردوں کا ردعمل قریبی نلیوں کے اپکلا پر وینکومائسن کے براہ راست اثر کی وجہ سے ظاہر ہوتا ہے [2]۔ آج تک، ماؤس ماڈلز میں V-AKI کا مطالعہ کرنے کے لیے معیاری ٹاکسیکوجینومک طریقوں کا اطلاق کیا گیا ہے، لیکن انسانی مطالعات میں [3–5] کی کمی ہے۔ جانوروں کے ماڈل یہ ظاہر کرتے ہیں کہ وینکومائسن انتظامیہ آکسیڈیٹیو تناؤ کو جنم دیتی ہے جو گردے کی چوٹ میں حصہ ڈال سکتی ہے [6,7]۔ چوٹ کا ایک ممکنہ طریقہ کار قریبی نلی نما خلیوں میں منشیات کا پھنس جانا ہے کیونکہ اسے آرگینک کیٹیشن ٹرانسپورٹرز (OCTs) کے ذریعے بیسولیٹرل جھلی کے پار اور قربت والے ٹیوبول سیل میں منتقل کیا جاتا ہے، لیکن کسی بھی فعال بہاؤ کی نقل و حمل کے طریقہ کار کی نشاندہی نہیں کی گئی ہے۔ -8]۔

Exosomes جھلی سے ماخوذ مائیکرو سائیٹک ویسیکلز ہیں جو انٹر سیلولر کمیونیکیشن اور پروٹین/نیوکلک ایسڈ کی ترسیل میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں اور نوول بائیو مارکر کی دریافت کی صلاحیت فراہم کرتے ہیں۔گردہچوٹ[9]۔ یہ تجویز کیا گیا ہے کہ بائیو مارکر کی دریافت کے لیے exosomes میں زیادہ خاصیت اور حساسیت ہوتی ہے، جو روایتی سیرم اور پیشاب کے نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسکرپٹومک اور پروٹومک طریقوں کے مقابلے میں نمونوں کے استحکام سے منسوب ہے [9]۔ اس مطالعے میں، ہم نے اس مفروضے کا تجربہ کیا کہ V-AKI کے جواب میں پیشاب کے خارجی پروٹینوں میں تبدیلی چوٹ کے طریقہ کار کو واضح کرنے اور منشیات سے متاثرہ گردے کی چوٹ کے مریضوں میں نئے بائیو مارکر کی شناخت کرنے میں مدد کرتی ہے۔ اس کے لیے، ہم نے Drug-Induced Renal Injury Consortium (DIRECT) اسٹڈی کے مضامین کو استعمال کیا، جو کہ ایک بین الاقوامی، ملٹی سینٹر کوہورٹ ہے جو کہ منشیات سے متاثرہ ایکیوٹ کے طبی لحاظ سے فیصلہ شدہ کیسوں کا ہے۔گردہچوٹاور آبادی پر مبنی کنٹرول جینوم وسیع ایسوسی ایشن کا استعمال کرتے ہوئے فارماکوجینومکس کے پیش گوئوں کی جانچ کرنے کے لیے۔ براہ راست مطالعہ کی تفصیلات طریقوں کے سیکشن اور ہماری لیبارٹری کی حالیہ اشاعت میں بیان کی گئی ہیں [10]۔

2. نتائج

22 مضامین کے پیشاب کے نمونے، 10 V-AKI کیسز، اور 12 کنٹرول، تجزیوں میں شامل تھے۔ مریضوں کی آبادیات V-AKI کیسز اور کنٹرولز کے درمیان یکساں تھیں اور ان کا خلاصہ ٹیبل 1 میں دیا گیا ہے۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، V-AKI کیسز میں ہائی بلڈ پریشر، ذیابیطس اور دل کی ناکامی کا پھیلاؤ کنٹرولز (ٹیبل 1) کے مقابلے میں زیادہ تھا۔

تمام V-AKI کیسز نے AKI اسٹیج 2 یا اس سے زیادہ تیار کیا جیسا کہ گردے کی بیماری کو بہتر بنانے والے عالمی نتائج (KDIGO) کے معیار (شکل 1) کے ذریعہ بیان کیا گیا ہے [11]۔ V-AKI کا آغاز 4۔{6}} ± 3۔{8}} دن وینکومائسن کے آغاز کے بعد ہوا۔ ہسپتال میں داخل ہونے کے بعد سیرم کریٹینائن (Scr) میں تبدیلیوں کا ٹائم کورس، اور اس کے بعد، شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔

شکل 1. V-AKI کورس پر سیرم کریٹینائن میں تبدیلیاں۔ یہ اعداد و شمار وینکومائسن سے وابستہ شدید کے دوران 10 معاملات میں سیرم کریٹینائن میں ہونے والی تبدیلیوں کو ظاہر کرتا ہے۔گردہچوٹہسپتال میں داخل ہونے سے لے کر دن 90 تک چوٹ کے بعد۔ ٹائم پوائنٹس Drug-Induced Renal InjuryConsortium (DIRECT) اسٹڈی ٹائم پوائنٹس سے مطابقت رکھتے ہیں۔ مخففات: SCr=سیرم کریٹینائن، ہسپتال=ہسپتال میں داخلہ، منشیات کی نمائش سے پہلے Predrug =، DIRI=منشیات سے متاثرہ گردوں کی چوٹ کی تعریف پوری ہوئی، DrugDC {{8} } منشیات کا بند ہونا یا خوراک میں کمی، نادر Scr=V-AKI کے بعد سب سے کم سیرم، ہسپتال ڈسچ= ہسپتال سے ڈسچارج

V-AKI کیسوں میں بنیادی خطرے کے عوامل میں سیپسس (30 فیصد)، دل کی بیماری (30 فیصد)، ذیابیطس میلیتس (30 فیصد)، خون کی کمی (20 فیصد)، ریڈیو کنٹراسٹ کی نمائش (10 فیصد)، جگر کی بیماری (10 فیصد) شامل ہیں۔ hypoalbuminemia (10 فیصد) (شکل 2)۔

زیادہ سے زیادہ، V-AKI کیسز میں وینکومائسن کی تین دوائیوں کی خوراک کی اقساط موصول ہوئی تھیں۔ وینکومائسن کی روزانہ خوراک 1000 سے 4000 ملی گرام تک ہوتی ہے۔ ہر ڈوزنگ ایپی سوڈ میں گزارے گئے دنوں کی اوسط (انٹرکوارٹائل رینج (IQR)) تعداد کو شکل 3 میں دکھایا گیا ہے۔ اوسط (معیاری انحراف (SD)) وینکومائسن گرت پلازما ارتکاز جو خوراک کی اقساط 1–3 سے منسلک ہے 20.6 ± 8.1 پر بڑھا دیا گیا، بالترتیب 29.6 ± 16.3، 38.0 ± 13 mg/L۔ تاہم، ہر ایک اقساط کے درمیان ارتکاز میں فرق اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھا (قسط 1 بمقابلہ 2 p=0.5، قسط 2 بمقابلہ 3 p=0.41)

دیگر نتائج کے اعداد و شمار کا خلاصہ جدول 2 میں دیا گیا ہے۔ چوٹ کی شدت کو دیکھتے ہوئے، 20 فیصد مریضوں کو گردوں کی تبدیلی کی تھراپی کی ضرورت ہوتی ہے۔ ہسپتال میں اموات کی شرح 10 فیصد تھی۔ ہسپتال سے ڈسچارج ہونے پر، 90 فیصد مریض V-AKI سے ٹھیک نہیں ہوئے۔ چھ مریضوں میں چوٹ کے بعد 28 دن اور 90 ویں دن چار کی پیمائش کی گئی۔ 28 ویں دن تک، چھ میں سے دو (33 فیصد) مریضوں کو AKD تھا لیکن باقی چار مریضوں میں سے کسی کو بھی 90 ویں دن AKD نہیں تھا۔گردہV-AKI کے 20 فیصد کیسز (ٹیبل 2) میں بایپسی کی گئی۔

12 نمونے جو پیپٹائڈس کو ان کے علمی سپیکٹرا کے ساتھ ملانے کے لیے فلٹر لگانے کے بعد تجزیوں کے لیے کوالیفائی کیے گئے تھے، ان میں کل 2009 پروٹین تھے، ان پروٹینوں کا مزید تجزیہ کیا گیا۔ سب سے پہلے، ہر نمونے کے مجموعی پروٹوم کا موازنہ کرنے کے لیے ایک پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ (PCoA) کیا گیا۔ اس تجزیے سے AKI اور کنٹرول کے نمونوں (شکل 4) کے درمیان ایک اہم علیحدگی (PERMANOVA p-value=0.037) کا انکشاف ہوا، جو کہ exosome پروٹین کی سطح پر بھی نظاماتی سطح کے فینوٹائپ کو دوبارہ بیان کرتا ہے، اس طرح ان ڈیٹا سیٹس میں ہمارے اعتماد میں اضافہ ہوتا ہے۔ . ہر پروٹین اور V-AKI اسٹیٹس کے درمیان ایسوسی ایشن کی طاقت کو pi-value میٹرک کا استعمال کرتے ہوئے درجہ بندی کیا گیا، جو p-value کی اہمیت کو فولڈ چینج کے ساتھ جوڑتا ہے [12]۔

شکل 4. پروٹوم کمپوزیشن V-AKI مریضوں کے پیشاب کے اخراج اور کنٹرول کو ممتاز کرتی ہے۔ (A) نمونہ پروٹوم کے پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ۔ Bray-Curtis فاصلہ میٹرک نمونہ پروٹوم کے درمیان فرق کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا اور ایک پرنسپل کوآرڈینیٹ پلاٹ دکھایا گیا ہے۔ AKI نمونے (سرخ) اور کنٹرول نمونے (نیلے) کے درمیان محور 1 اور 3 کے ساتھ علیحدگی دیکھی گئی۔ (B) Boxplot کنٹرول اور AKI نمونوں کے درمیان Bray-Curtis کے فاصلے کا خلاصہ کرتا ہے۔ (A) میں دکھائے گئے AKI اور کنٹرول کے نمونوں کے درمیان شماریاتی علیحدگی کو تغیر ٹیسٹ (PERMANOVA) کے ترتیبی تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے جانچا گیا۔ کنٹرول کے فاصلے یا AKI نمونوں کو کنٹرول کرنے کے لیے نمونوں کا موازنہ کرتے وقت باکس پلاٹس کو نتائج کا خلاصہ دکھایا گیا ہے۔

اگلا، V-AKI اور کنٹرول کے نمونوں کے درمیان بائنری موازنہ سے 42 پروٹین ملے جو AKI فینوٹائپ کے ساتھ نمایاں طور پر وابستہ ہیں اور کنٹرول فینوٹائپ (Pi اسکور> 1) (ضمنی جدول S1) سے وابستہ 26 پروٹین۔ ایک آتش فشاں پلاٹ جو ہر پروٹین سے وابستہ اہمیت اور فولڈ چینج کو ظاہر کرتا ہے، شکل 5A میں دکھایا گیا ہے۔ V-AKI کیسز کے لیے سب سے زیادہ امتیازی پروٹین فائبرنوجن، تکمیلی C3، تکمیلی C4، گیلیکٹن-3-بائنڈنگ پروٹین، الفا-2 میکروگلوبلین، امیونوگلوبلین ہیوی کنسٹنٹ mu، اور سیروٹرانسفرین (شکل 5B) تھے۔ جین سیٹ کی افزودگی کا تجزیہ V-AKI مریضوں میں تبدیل شدہ پروٹین کے زمرے کی نشاندہی کرنے کے لیے اہم پروٹینوں کے درمیان کیا گیا اور نتائج کا خلاصہ ضمنی جدول S1 میں دیا گیا ہے۔ کئی پروٹین جو AKI-phenotype سے وابستہ تھے ان کے افعال سوزش اور/یا ثالثی سوزش فینوٹائپ سے منسلک ہوتے ہوئے دکھائے گئے تھے۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا ان پروٹین کی تبدیلیوں کا تعلق بنیادی سائٹوکائن سگنلنگ میں ہونے والی تبدیلیوں سے ہو سکتا ہے، ایک سائٹوکائن کا اندازہ لگایا گیا، جس نے AKI سے وابستہ پروٹین اور سائٹوکائنز IL10، IL6، اور TNF کے درمیان مضبوط تعلق کی نشاندہی کی۔ ان سائٹوکائنز میں 2.8، 2.3، اور 2 شامل ہیں۔{24}}بالترتیب AKI سے وابستہ پروٹینوں سے زیادہ کنکشن کنٹرول سے وابستہ پروٹینوں کے مقابلے میں، جیسا کہ شکل 5C میں خلاصہ کیا گیا ہے۔ AKI سے وابستہ پروٹینوں اور قیاس شدہ سائٹوکائنز کے پروٹین-پروٹین انٹرایکشن نیٹ ورکس نے AKI سے وابستہ پروٹین کے درمیان بنیادی طور پر proinflammatory کنکشن ظاہر کیے جیسا کہ شکل 5D میں خلاصہ کیا گیا ہے۔

شکل 5. V-AKI سے پروٹین لیول ایسوسی ایشنز۔ (A) آتش فشاں پلاٹ V-AKI کی حیثیت میں ہر پروٹین کی فولڈ چینج اور ٹی ٹیسٹ کی اہمیت کو ظاہر کرتا ہے۔ AKI اور کنٹرول اسٹیٹس سے وابستہ ٹاپ 10 پروٹین بالترتیب نیلے اور سرخ رنگ میں دکھائے گئے ہیں۔ Pi سکور > 1 پر مبنی دیگر وابستہ پروٹین پیلے رنگ میں دکھائے گئے ہیں۔ (B) ایک پائی سکور، جو فولڈ چینج اور ٹی-ٹیسٹ دونوں کی اہمیت کا حامل ہے ہر پروٹین کے لیے شمار کیا گیا تھا اور مضبوط ترین ایسوسی ایشن کے ساتھ پروٹین کی منصوبہ بندی کی گئی ہے۔ (C) AKI یا کنٹرول پروٹین سے وابستہ Topcytokines۔ ایک نیٹ ورک پر مبنی سائٹوکائن انفرنس اپروچ لیا گیا اور AKI یا کنٹرول سے وابستہ پروٹین کی طرف مضبوط ترین افزودگی کے اسکور دکھانے والی سائٹوکائنز کو دکھایا گیا ہے۔ سرخ سلاخیں AKI سے وابستہ پروٹین سے متعلق سائٹوکائنز کی نمائندگی کرتی ہیں، نیلی سلاخیں کنٹرول سے وابستہ پروٹین سے متعلق سائٹوکائنز کی نمائندگی کرتی ہیں۔ (D) AKI سے وابستہ پروٹین اور AKI سے افزودہ قیاس شدہ سائٹوکائنز کا پروٹین-پروٹین انٹرایکشن نیٹ ورک۔ پروٹین نوڈس کا بیرونی کنارہ رنگین ہوتا ہے جس کا انحصار پرو یا اینٹی سوزش سائٹوکائنز کی انجمنوں پر ہوتا ہے۔ ہر نوڈ کا سائز AKI کی حیثیت سے ہر پروٹین کی شماریاتی ایسوسی ایشن کی طاقت کی نمائندگی کرتا ہے۔

Cistanche tubulosaگردے کی چوٹ کا علاج کر سکتے ہیں۔

3. بحث

ہم منشیات کی حوصلہ افزائی میں ملوث پیتھو فزیولوجیکل میکانزم کو مطلع کرنے کے لئے پیشاب کے خارجیوں کو استعمال کرنے کے لئے ایک نئے نقطہ نظر کی اطلاع دیتے ہیں۔گردہچوٹvancomycin کو بطور پروٹو ٹائپیکل رینل ٹوکسیکنٹ استعمال کرنا۔ اس مطالعے کی ایک خوبی یہ ہے کہ براہ راست مطالعہ [10] سے اچھی خصوصیات والے مریض کی سطح کے اعداد و شمار کو شامل کرنا ہے جس میں میکانزم کو واضح کرنے کے لیے تیار کیا گیا ہے جس میں منشیات کی حوصلہ افزائی کے جینومکس بھی شامل ہیں۔گردہچوٹ. اسٹیج 2 یا اس سے زیادہ AKI والے مضامین کو بیس لائن پر روایتی خطرے کے عوامل کا سامنا کرنا پڑا۔ تمام مطالعاتی مضامین نے 4 جی فی دن کی عام طور پر قبول شدہ نیفروٹوکسٹی حد سے کم روزانہ خوراک حاصل کرنے کے باوجود وینکومائسن پلازما گرت کی حراستی میں نمایاں طور پر اضافہ کیا تھا [13]۔ ہسپتال سے ڈسچارج ہونے پر بہت سے مضامین V-AKI سے مکمل طور پر صحت یاب نہیں ہوئے تھے اور انہیں چوٹ کے بعد ایک ماہ تک گردے کی شدید بیماری تھی۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، چند مریضوں نے گردے کی بایپسی حاصل کی۔

یورینری ایکسوزوم/ایکسٹرا سیلولر ویسیکل (EV) پروٹومکس نے ثابت کیا کہ V-AKI کیسز کے لیے ہدف بنائے گئے امتیازی پروٹینوں میں C3 کمپلیمنٹ، C4 کمپلیمنٹ، گیلیکٹن-3-بائنڈنگ پروٹین، فائبرنوجن، الفا-2 میکروگلوبلین، امیونوگلوبلین ہیوی مستقل مزاج شامل ہیں۔ ، اور سیروٹرانسفرین۔ یہ خارجی نتائج V-AKI کے لیے ذیلی سیلولر/سوپرا مالیکیولر سطح پر چوٹ کے طریقہ کار کو مطلع کرتے ہیں اور ممکنہ طور پر منشیات سے متاثرہ بیماری کے عمل کے تسلسل کے ساتھ بائیو مارکر کے طور پر کام کرتے ہیں۔

خون اور پیشاب میں موجود Exosomes کا انٹر سیلولر کمیونیکیشن، جمنا، اور فضلہ کے انتظام میں اہم کردار ہوتا ہے [14]۔ ٹاکسن سے متعلق شدید کے بعدگردہچوٹ، نلی نما اپکلا خلیات سے جاری ہونے والے ایکزومز میکروفیج کی دراندازی کو بھرتی کرنے اور ٹیوبولوئنٹرسٹیشیل سوزش کو فروغ دینے کے لئے چوٹ کے اشاروں کو بات چیت کرسکتے ہیں [15]۔ ہم نے استدلال کیا کہ Exosomes کے پروٹین کے مواد V-AKI کیسز اور صحت مند کنٹرول کے درمیان مختلف ہوں گے۔ V-AKI میں دو سو اکیاون پروٹین غیر منظم تھے، اور یہ بنیادی طور پر سوزش اور جمنے کے راستوں میں ملوث دکھائی دیتے ہیں۔ ان 251 پروٹینوں میں سے، ہمارے تجزیے نے ثابت کیا کہ C3 تکمیلی، C4 تکمیل، گیلیکٹن-3- بائنڈنگ پروٹین، فائبرنوجن، الفا-2 میکروگلوبلین، امیونوگلوبلین ہیوی کنسٹنٹ mu، اور سیروٹرانسفرین V-AKI کیسز سے نمایاں طور پر وابستہ تھے۔

ہمارے نتائج کی بنیاد پر کہ C3 اور C4 سب سے زیادہ امتیازی سلوک کرنے والے V-AKI exosome پروٹینوں میں شامل تھے، ہم تجویز کرتے ہیں کہ ایک تکمیلی نظام کو چالو کرنا وینکومائسن کی حوصلہ افزائی رینل نلی نما چوٹ میں شامل ہے۔ یہ شائع شدہ لٹریچر کے ساتھ بھی اچھے معاہدے میں ہے کہ تکمیلی نظام کی ایکٹیویشن مدافعتی پیچیدہ گلوومیرولونفرائٹس اور گردے کی بیماریوں کی متنوع صفوں میں ایک کردار ادا کرتی ہے [16]۔ اسکیمیا یا نیفروٹوکسین کی نمائش کی وجہ سے AKI میں تکمیلی ایکٹیویشن ثالثی گردے کو پہنچنے والے نقصان کو نظامی سوزش کے واقعات سے جوڑا گیا ہے جو دور دراز کے اعضاء کی چوٹ اور مریض کی اموات میں حصہ ڈالتے ہیں اور اس میں حصہ ڈالتے ہیں [17]۔ اسکیمیا ریپرفیوژن (IR) کی چوٹ کے ماڈلز میں، ہائپوکسیا، اے ٹی پی کی کمی، اور مائٹوکونڈریل نقصان کے نتیجے میں ریپرفیوژن پر آزاد آکسیجن ریڈیکلز پیدا ہوتے ہیں [18]۔ سائٹوکائنز، کیموکائنز، اور تکمیلی ایکٹیویشن سوزش کو بڑھاتے ہیں، جس کے نتیجے میں شدید نلی نما چوٹ ہوتی ہے۔ مزید برآں، C3a اور C5a رسیپٹر کی کمی والے چوہوں کو IR چوٹ [19,20] سے محفوظ رکھا جاتا ہے۔ IR چوٹ کو تکمیلی اجزاء کی مقامی پیداوار کو اپ گریڈ کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے۔گردہاینڈوتھیلیل اور نلی نما خلیات [16,21]۔ جانوروں کے ماڈلز اور انسانی مضامین میں متعدد مطالعات میں صدمے یا چوٹ کے بعد نلی نما تہہ خانے کی جھلی کے ساتھ ساتھ تکمیلی پروٹین مصنوعات جیسے C3 اور C4 کے بڑھتے ہوئے جمع ہونے کی نشاندہی کی گئی ہے۔گردہ. جمع کی یہ بڑھتی ہوئی سطحیں پیریٹیوبلر یا گلوومیرولی کے علاقے میں نمایاں طور پر موجود نہیں پائی گئی ہیں، لیکن یہ نلی نما جھلی میں بہت زیادہ مرتکز ہیں، جیسا کہ انسانوں اور جانوروں کے ماڈل گردوں کے بائیوپسی میں دیکھا گیا ہے [17]۔ Exosomes اور EVs گردشی تکمیلی اجزاء کی نقل و حمل کر سکتے ہیں جب تکمیلی ایکٹیویشن کو غیر منظم کیا جاتا ہے [22,23]۔ کئی سیلولر تجربات اور طبی مشاہدات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ جاری ہونے والی EVs تکمیلی پروٹین کو لے کر چلتی ہیں اور اس میں ترمیم کرتی ہیں اور ساتھ ہی، سوزش کی حالت میں ان کی پیداوار بھی گردشی ویسکلز کی تعداد کو متاثر کرنے کے قابل ہوتی ہے [23]۔ دونوں عملوں کا یہ باہمی انحصار اس نتیجے پر پہنچا ہے کہ EVs بائیو مارکر ذرائع، اہداف، اور علاج کی ترسیل کے ایجنٹوں کی تکمیل اور امیونوموڈولیٹری مرکبات کی طرف ہونے کی صلاحیت کو ظاہر کرتے ہیں جو AKI کے سوزشی میکانزم کے دائرہ کار میں انتہائی متعلقہ ہیں۔ ہماری یہ دریافت کہ V-AKI کے نمونے صحت مند کنٹرول کے مقابلے میں، گردوں کے نلی نما خلیوں میں وینکومائسن کے براہ راست زہریلے پن کے خلاف مدافعتی ردعمل کے کردار کو ظاہر کرتے ہیں۔ مندرجہ بالا تمام پروٹین مواد کے علاوہ، پیشاب سے اخذ کردہ exosomes/EVs بھی ممکنہ غیر حملہ آور بائیو مارکر کو گردے کی بایپسی کے متبادل کے طور پر پیش کرتے ہیں تاکہ منشیات کی حوصلہ افزائی میں تکمیلی نظام کے کردار کا پتہ لگایا جا سکے۔گردہچوٹ.

اگرچہ پچھلے کئی مطالعات (مخصوص حوالہ جات کے لیے اگلے چند جملے دیکھیں) نے گیلیکٹن کے کردار پر توجہ مرکوز کی ہے-3 (Gal-3)گردہچوٹ، گیلیکٹن-3 بائنڈنگ پروٹین (گیل-3-بی پی) پر بہت کم ڈیٹا ہے۔ گال-3 کا اظہار گردے کی جمع نلیوں میں ہوتا ہے اور نیفروجنیسیس کو فروغ دینے، سیل سیل اور سیل میٹرکس کے تعامل کو ماڈیول کرنے، اور سوزش کو منظم کرنے کے کام کرتا ہے [24–26]۔ ہینڈرسن وغیرہ۔ سوزش میں Gal-3 کے کردار کا جائزہ لیا اور پتہ چلا کہ Gal-3 دائمی سوزش میں ایک اہم جزو ہے اور اگر ٹشو کی چوٹ بار بار ہوتی ہے۔ یہ ٹشو کی چوٹ کی "دیوار بند کرنے" کی سہولت فراہم کرتا ہے، چوٹ کے پھیلنے میں تاخیر کرتا ہے [27]۔ مزید برآں، نیشیاما وغیرہ۔ اسکیمک AKI کے ساتھ چوہوں میں یہ ظاہر کیا گیا کہ Gal-3 mRNA کو اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، اور مندرجہ ذیل ریپرفیوژن، امیونو ہسٹو کیمسٹری نے ظاہر کیا کہ نیفران کے حصوں میں Gal-3 میں اضافہ ہوا [25]۔ Tsuchiyama et al. پتہ چلا کہ نیفروٹوکسک سیرم ورم گردہ کے ساتھ چوہوں میں گال-3 کا انتظام کرنے سے پیشاب میں پروٹین کے اخراج میں کمی، کریسنٹ کی تشکیل، اور گلومیرولی میں میکروفیجز کی دراندازی میں کمی آئی [28]۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ اسکیمک یا مدافعتی ثالثی چوٹ کے بعد، Gal-3 تخلیق نو میں کردار ادا کرتا ہے۔ Gal-3 کے علمی پارٹنر کے طور پر، Gal-3-bp کا بنیادی کردار، اور وینکومائسن اور دیگر ایجنٹوں کی وجہ سے نیفروٹوکسک چوٹ میں اس کے اپ گریجشن کی وجہ، مستقبل کی تحقیقات میں ایک لازمی توجہ ہوگی۔

ہمارے مطالعے سے یہ بھی پتا چلا ہے کہ فائبرنوجن کے تینوں ذیلی یونٹ غیر منظم ہیں، پہلے شائع شدہ ڈیٹا کے ساتھ اچھے معاہدے میں۔ فائبرنوجن ایک حل پذیر ڈائمرک پلازما مالیکیول ہے اور ہر ڈائمر تین پولی پیپٹائڈس پر مشتمل ہے: الفا، بیٹا اور گاما [29]۔ یہ hemostasis اور coagulation میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے لیکن سوزش کی ثالثی کی حالتوں [30-32] کے ضابطے میں بھی اسے اہم دکھایا گیا ہے۔ اجے وغیرہ۔ نے ظاہر کیا کہ گردے کے کام، سوزش اور بقا کے لیے فائبرنوجن کی دستیابی اہم ہے [33]۔ مزید برآں، فائبرنوجن کا گردے کے اپکلا خلیوں پر اینٹی چپکنے والا اثر ہو سکتا ہے جو نلی نما رکاوٹ کو روکنے میں مدد کر کے فائدہ مند ہو سکتا ہے [34]۔ AKI میں Fibrinogen کو نمایاں طور پر بڑھایا گیا ہے اور اسے اپ گریڈ کیا گیا ہے اور اس سے قبل AKI کے ابتدائی پتہ لگانے کے لیے ممکنہ بائیو مارکر کے طور پر جانچا جا چکا ہے [29]۔ Hoffman et al.، نے چوہوں میں اسکیمیا/ریپرفیوژن اور سسپلٹین انتظامیہ کے بعد فائبرنوجن میں تبدیلی کا مطالعہ کیا، اور mRNA کو دو طرفہ IR چوٹ کے 30 منٹ بعد اپریگولیٹ کیا گیا اور 48–72 h پر عروج پر پہنچ گیا، جبکہ سسپلٹین انتظامیہ میں، mRNA کا اظہار fibrinogen کا تھا۔ 24 گھنٹے [29] پر پتہ چلا۔ پیشاب کے فائبرنوجن کا پتہ 3 گھنٹے کے بعد اسکیمک ریپرفیوژن انجری اور 24 گھنٹے کے بعد سسپلٹین انتظامیہ کے طور پر پایا گیا تھاگردہچوٹمالیکیول 1 (KIM-1) [29]۔

Cistanche فوائد: علاج کر سکتے ہیں۔گردے کی چوٹ

تاریخی طور پر، V-AKI کے لیے دو مختلف پیتھو فزیولوجیکل میکانزم کو عام طور پر قبول کیا گیا ہے، براہ راست زہریلے اثرات سے شدید نلی نما نیکروسس اور شدید بیچوالا ورم گردہ۔ شدید نلی نما نیکروسس [35] میں گردوں کے قریبی نلی نما اپکلا میں سائٹوسکیلیٹل سالمیت، نیکروسس اور اپوپٹوس کے نقصان سے گزرتا ہے۔ نیکروٹک خلیے ایسے مالیکیولز کو جاری کرتے ہیں جو فطری مدافعتی نظام کو اپ گریڈ کرتے ہیں جو سوزش پیدا کرتے ہیں اور نلی نما چوٹ کو تیز کرتے ہیں [35]۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے V-AKI والے مریضوں کے پیشاب کی EVs میں سوزش کے نشانات کا مظاہرہ کیا۔ مزید برآں، ہمیں سائٹوکائنز IL10، IL6، اور TNF اور ہمارے اعلیٰ AKI امتیازی پروٹینوں کے درمیان ایک پروانفلامیٹری رشتہ ملا۔ ان اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ V-AKI کی پیتھوفیسولوجی 24-72 گھنٹے کے بعد کی چوٹ کے دوران سوزش کی اپ گریجولیشن کے ساتھ نلی نما زہریلا ہے۔

ہمارے مطالعے کی کئی حدود ہیں۔ 22 مریضوں کے چھوٹے نمونے کا سائز جو مرد تھے اور بنیادی طور پر کاکیشین تھے، ہمارے نتائج کی عامیت کو دوسری جنسوں، نسلوں اور نسلوں تک محدود کرتے ہیں۔ ہمارے مطالعے کی ایک دوسری حد یہ تھی کہ ہر مریض کے پیشاب کے خارجی نمونے میں کل پروٹین کی مقدار مختلف ہوتی ہے، اس طرح مخصوص پروٹینوں کی پیمائش مشکل ہو جاتی ہے، خاص طور پر کم مطلق مقداروں کے لیے۔ اگرچہ یہ ضروری نہیں کہ اس مطالعے کی حد فی نفسہ ہو، کیونکہ ہر فرد کی اپنے پیشاب کے خارجی حصے پر پروٹین پیک کرنے کی صلاحیت قدرتی طور پر متغیر ہوتی ہے، لیکن کچھ افراد میں پروٹین کی کم مقدار مزید تجزیوں اور بامعنی نتائج اخذ کرنے کی ہماری صلاحیت کو محدود کرتی ہے جو عام طور پر قابل عمل ہیں۔ بڑی آبادی. ایک تیسری حد سنگل ٹائم پوائنٹ کا نمونہ ہے جو AKI تسلسل کے مختلف مراحل میں ہونے والی سیلولر تبدیلیوں کے بارے میں ہماری سمجھ کو محدود کرتا ہے، جیسے، فوری چوٹ کا مرحلہ، مرمت کا مرحلہ، وغیرہ۔ تبدیلیاں، منشیات کے جمع ہونے سے پیدا ہونے والا آکسیڈیٹیو تناؤ، اور مرمت میں مدافعتی راستوں کا اپ گریجولیشن۔ موجودہ مطالعہ میں مریضوں کو شامل کیا گیا ہے جیسا کہ Scr کی حد کے ذریعہ بیان کیا گیا ہے۔ سیرم کریٹینائن ایک نامکمل گردے کے فعال بائیو مارکر ہے کیونکہ Scr میں بلندی اکثر چوٹ سے پیچھے رہ جاتی ہے [36]۔ یہ جلد پتہ لگانے کے لیے Scr کی حساسیت اور مخصوصیت کو محدود کرتا ہے۔گردہچوٹ[36]، اور مطالعہ کی شناخت ابھر کر سامنے آئے ہیںگردہچوٹبائیو مارکر جیسےگردہ چوٹمالیکیول 1 (KIM1) اور نیوٹروفیل جیلیٹنیز سے وابستہ لیپوکلین (این جی اے ایل) نیفروٹوکسٹیٹی [37,38] کے جلد پتہ لگانے کے لئے۔ جیسا کہ پہلے اطلاع دی گئی ہے، بائیو مارکر منشیات کی حوصلہ افزائی کی واضح اور ذیلی طبی سطح دونوں کا پتہ لگانے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔گردہچوٹ[39,40].

4. مواد اور طریقے

4.1 مریض کا انتخاب

V-AKI والے 10 مریضوں کے پیشاب کے نمونے، جو DIRECT مطالعہ [10] میں شامل تھے اور UAB-UCSD O'Brien Center Biorepository سے 12 صحت مند کنٹرول پیشاب کے نمونے تجزیہ میں شامل کیے گئے تھے۔ کنٹرول کے مضامین جنس، نسل، اور دہائی کی عمر کے لحاظ سے مطالعہ کے مضامین سے مماثل تھے اور ان میں وینکومائسن کا کوئی اثر نہیں تھا یا معلومگردہچوٹ. DIRECT مطالعہ ایک بین الاقوامی مطالعہ ہے جو منشیات کی حوصلہ افزائی کے فارماکوجنیٹک پیش گوئوں کی جانچ کرتا ہے۔گردہچوٹکیسز اور آبادی پر مبنی کنٹرول [10] کے جینوم وسیع ایسوسی ایشن اسٹڈی کا استعمال کرتے ہوئے DIRECT مطالعہ کو ادارہ جاتی تحقیقی بورڈ (IRB #121651) نے منظور کیا تھا اور اندراج سے قبل تمام شرکاء سے تحریری باخبر رضامندی حاصل کی گئی تھی جس میں مستقبل کے تجزیوں کے لیے ذخیرہ شدہ نمونوں کو استعمال کرنے کی فراہمی شامل تھی۔ AKI کو DIRECT میں گردے کے فعل میں اچانک کمی کے طور پر بیان کیا گیا ہے جو درج ذیل میں سے کسی ایک معیار سے ظاہر ہوتا ہے: (1) سیرم کریٹینائن (Scr) میں مطلق اضافہ (0.3 mg/dL سے زیادہ یا اس کے برابر یا 26.4 µmol/ سے زیادہ یا اس کے برابر L) (48-h ٹائم ونڈو کے اندر) حوالہ اسکر کی قدر سے، (2) سات دنوں کے اندر Scr میں 50 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر کا اضافہ (حوالہ سے 1.5 گنا)، (3) پیشاب میں کمی آؤٹ پٹ (دستاویز شدہ oliguria of<0.5 ml/kg/h="" for="">6 h) مناسب سیال کی بحالی کے باوجود جب قابل اطلاق ہو، (4) اسکر میں مطلق کمی یا اس کے برابر 0.3 mg/dL یا اس سے زیادہ یا اس کے برابر 26.4 µmol/L (48- کے اندر) h ٹائم ونڈو) ریفرنس Scr سے، اور (5) سات دنوں کے اندر اندر 50 فیصد (حوالہ سے 1.5 گنا) سے زیادہ یا اس کے برابر کے Scr میں نسبتاً کمی۔ اسٹیج 2 AKI یا اس سے زیادہ وینکومائسن کی نمائش کے بعد مریضوں کا مطالعہ میں اندراج کیا گیا تھا۔ کلینکل ڈیٹا بشمول ڈیموگرافکس، طبی تاریخ، جسمانی امتحان کے نتائج، اہم علامات، خون اور پیشاب کی کیمسٹری، بایپسی کے نتائج، اور منشیات کی خوراک کا ڈیٹا، مندرجہ ذیل وقت پر جمع کیا گیا: (1) ہسپتال میں داخلہ، (2) وینکومائسن کا آغاز، ( 3) چوٹ کی چوٹی، (4) دوا کا بند ہونا یا خوراک میں کمی، (5) چوٹ کا حل، (6) ہسپتال سے ڈسچارج، (7) 28 دن- اور (8) چوٹ کے بعد 90 دن۔ وینکومائسن ڈوزنگ ایپی سوڈ کو خوراک یا فریکوئنسی میں تبدیلی کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ ایکیوٹ کڈنی ڈیزیز (AKD) کی تعریف اسٹیج 1 AKI کی مستقل مزاجی کے طور پر کی جاتی ہے یا ایکسپوژر کے بعد 7 دن سے زیادہ یا اس سے زیادہ ہوتی ہے [41]۔ اگر AKI مرحلہ 1 یا اس سے زیادہ برقرار رہے اور ہسپتال سے ڈسچارج ہونے کا وقت سات دن سے زیادہ ہو تو مریضوں کو ہسپتال سے ڈسچارج پر AKD کے ساتھ درجہ بندی کیا گیا تھا۔ تمام شرکاء سے پیشاب اور پورے خون کے نمونے حاصل کیے گئے۔ V-AKI کے تمام معاملات کا فیصلہ دو آزاد نیفرولوجسٹ (EM, JC, RL) نے وجہ کا تعین کرنے کے لئے کیا تھا۔ طریقوں کی مکمل تفصیل پہلے شائع کی جا چکی ہے [10]۔

4.2 Exosome تیاری اور پروٹومک ڈیٹا اکٹھا کرنا

براہ راست مطالعہ کے شرکاء سے پیشاب اور خون کے نمونے اکٹھے کیے گئے تھے اور نمونے −80 ◦C پر exosome تیاری سے پہلے منجمد کیے گئے تھے۔ اس تجزیہ میں استعمال ہونے والے پیشاب کے نمونے 24 سے 72 گھنٹے کے بعد کے گردے کی توہین کے قریب ترین وقت سے منتخب کیے گئے تھے۔گردہچوٹ. پولیتھیلین گلائکول (پی ای جی) کی حوصلہ افزائی شدہ بارش کا استعمال کرتے ہوئے اندرون خانہ پروٹوکول کا استعمال کرتے ہوئے منجمد AKI پیشاب کے نمونوں سے Exosomes نکالے گئے تھے، جیسا کہ Rao et al میں بیان کیا گیا ہے۔ Exosomal پروٹین کی حالیہ اشاعت [42] صفحہ جیل ٹرپسنائزیشن سے پہلے NuPAGE bisTris10 فیصد ایکریلامائڈ 12 ویل جیل کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا تاکہ کنٹرول اور-AKI پیشاب کے نمونوں کے exosomes سے 40 µL پروٹین کو حل کیا جاسکے۔

پروٹولیسس کو روکنے کے لیے جیل کے عرق کو بفر کے ساتھ ملایا گیا جس میں 75 ایم ایم NaCl (سگما، سینٹ لوئس، MO، USA)، 3 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ (SDS, Fischer, Arnold AFB, Tullahoma, TN, USA)، 1 mM NaF تھا۔ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)، 1 ایم ایم بیٹا گلیسرو فاسفیٹ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)، 1 ایم ایم بیٹا گلیسرو فاسفیٹ (سگما، سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)، 1 ایم ایم سوڈیم آرتھواناڈیٹ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)، 10 ایم ایم سوڈیم پائروفاسفیٹ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)، 1 ایم ایم فینیلمیٹائل سلفونائل فلورائیڈ (پی ایم ایس ایف، سگما)، اور 1× مکمل منی مفت پروٹیز روکنے والی گولی تمام 50 ایم ایم HEPES (سگما، سینٹ لوئس، MO، USA) میں، pH 8.5۔ پروٹین کو ڈینیچر کرنے کے لیے، 50 ایم ایم ایچ ای پی ای ایس، پی ایچ 8.5 میں 8 ایم یوریا کا مساوی حجم شامل کیا گیا اور 25 فیصد طول و عرض پر دو 10- وقفوں کا استعمال کرتے ہوئے پروب سونیکیشن کی گئی۔ ڈیتھیوتھریٹول اور آئوڈوسیٹامائڈ کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کو کم کیا گیا، الکائیلیٹ کیا گیا اور بجھایا گیا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [43]۔ آئس پر نمونوں میں ٹرائکلورواسیٹک ایسڈ (سگما، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) شامل کرکے، اور 4 ◦C پر سینٹرفیوگریشن کے ذریعے پروٹین کو چھیڑ کر پروٹینز کو تیز کیا گیا۔ پروٹین کی چھریاں برف کے ٹھنڈے ایسٹون سے دو بار دھوئے گئے۔ پروٹین کی گولیوں کو 56 ◦C پر 30 منٹ تک خشک کیا گیا، پھر 50 ملی میٹر HEPES میں 1 M یوریا میں دوبارہ ہضم کیا گیا پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 6 µg LysC (واکو، رچمنڈ، کامن ویلتھ آف ورجینیا، USA) کے ساتھ راتوں رات ہضم کیا گیا جس کے بعد {{2} 37 ◦C پر سیکوینسنگ گریڈ ٹرپسن (پرومیگا، فِچبرگ، WI، USA) کے ساتھ ہاضمہ۔ C18 Sep-Paks کے ذریعے نمونے نکالے گئے اور پروٹین کی مقدار درست کر دی گئی [44]۔ Easy-nLC 1000 (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, USA) پر 85 منٹ مائع کرومیٹوگرافی گریڈینٹ کا استعمال کرتے ہوئے مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (LC-MS [2]) کے ذریعے فی نمونہ کل 1.0 ug پروٹین کا تجزیہ کیا گیا۔ ایک Orbitrap فیوژن ماس اسپیکٹرومیٹر (تھرمو فشر سائنٹیفک) سے لائن میں جڑا ہوا ہے۔

کرومیٹوگرافی گھر سے کھینچی گئی اور پیکڈ 30 سینٹی میٹر کالم پر کی گئی تھی جس میں 0.5 سینٹی میٹر، 0.5 سینٹی میٹر، اور 30 ​​سینٹی میٹر 5 µm C4، 3 کے ساتھ ٹرپل پیک کیا گیا تھا۔ بالترتیب µm C18، اور 1.8 µm C18، اور 60 ◦C پر گرم کیا جاتا ہے۔ پیپٹائڈس کو پہلے 500 بار پر لوڈ کیا گیا تھا جس کے بعد کرومیٹوگرافی گریڈینٹ 6 سے 25 فیصد ایسٹونائٹرائل 70 منٹ سے زیادہ تھا اور اس کے بعد ایک 5- منٹ گریڈینٹ سے 100 فیصد ایسٹونائٹرائل تھا، جو 10 منٹ تک رکھا گیا تھا۔ تجزیاتی کالم اور ایزی-این ایل سی سسٹم کو جوڑنے والے سٹینلیس سٹیل ٹی جنکشن کے ذریعے الیکٹرو سپرے آئنائزیشن 2000 V لگا کر کی گئی۔ ہر نمونے کے بعد 15 منٹ سے زیادہ 3 سے 100 فیصد ایسٹونائٹرائل کے گریڈینٹ کے ساتھ شروع ہونے والے دو واش کیے گئے اور 100 فیصد ایسٹونیٹرائل پر اضافی 10 منٹ۔ ماس ٹو چارج (m/z) رینج 375–1500 پیپٹائڈس کے لیے اسکین کی گئی جس میں 2-6 کے درمیان چارج سٹیٹس ہیں۔ چوٹیوں کی مقدار کے لیے سینٹروائیڈ ڈیٹا استعمال کیا گیا تھا۔ حصول ڈیٹا پر منحصر مثبت آئن موڈ میں چلایا گیا تھا۔ پروٹوم ڈسکوور ورژن 2.1 میں خام سپیکٹرا کو یونی پروٹ (www.uniprot.org (5 نومبر 2017 کو حاصل کیا گیا)) سیکوسٹ الگورتھم [18] کا استعمال کرتے ہوئے ہومو سیپینز کے حوالہ ڈیٹا بیس کے خلاف پیپٹائڈ اور غلط دریافت کو کنٹرول کرنے کے لیے استعمال ہونے والے ریورس ڈیٹا بیس اپروچ کے ساتھ تلاش کیا گیا۔ شرح (FDR) سے 1 فیصد [17]۔ سلیکو ٹرپسن ڈائجسٹ میں جیسا کہ تلاش کے پیرامیٹرز میں چھ امینو ایسڈ کی کم از کم پیپٹائڈ لمبائی کے ساتھ بیان کیا گیا ہے۔ تلاش کی ترتیبات میں میتھیونائنز کے آکسیکرن کے لیے متحرک ترمیم اور سسٹینز کے کاربامیڈومیتھیلیشن کی جامد ترمیم بھی شامل ہے۔ پیشگی بڑے پیمانے پر رواداری 50 پی پی ایم اور 0.6 ڈی اے کے ٹکڑے بڑے پیمانے پر رواداری پر سیٹ کی گئی تھی۔

اس کے علاوہ سپیکٹرل میچز اور پروٹینز پر پابندی ہے۔<1% fdr,="" peptide="" matches="" were="" further="" screened="" to="" only="" include="" peptide="" spectral="" matches="" (psms)="" identified="" with="" high="" confidence.="" the="" summed="" abundance="" of="" the="" area="" under="" the="" curve="" of="" ms1="" peaks="" associated="" with="" psms="" was="" used="" to="" represent="" protein="" abundances.="" to="" help="" account="" for="" run-to-run="" variation="" in="" lc-ms2="" experiments,="" the="" raw="" protein="" abundances="" were="" next="" normalized="" by="" a="" two-step="" process.="" in="" the="" first="" step,="" protein="" abundances="" were="" divided="" by="" the="" average="" abundance="" of="" a="" given="" protein="" throughout="" the="" experiment="" divided="" by="" the="" median="" of="" the="" protein="" averages="" observed="" throughout="" the="" experiment.="" in="" the="" second="" step,="" the="" adjusted="" protein="" abundances="" were="" divided="" by="" the="" median="" protein="" abundances="" observed="" within="" their="" respective="" samples="" divided="" by="" the="" median="" protein="" abundance="" observed="" in="" the="" entire="" experiment.="" records="" of="" the="" normalization="" and="" analysis="" of="" proteomics="" data="" are="" available="" in="" a="" jupyter="" notebook="" form="" at="">

4.3 پروٹومکس ڈیٹا کا تجزیہ

پروٹومکس ڈیٹا کے تجزیے کے ریکارڈز کو جپیٹر نوٹ بک فارمیٹ میں گیتھب ریپوزٹری میں اپ لوڈ کیا گیا تھا (3 مارچ 2021 کو حاصل کیا گیا)۔ اصولی نقاط کا تجزیہ (PCoA) Qiime2 (ورژن 2019-7) [45] کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ ٹائم ڈائیورسٹی کور میٹرکس کمانڈ کو پی سی او اے کا استعمال کرتے ہوئے برے کرٹس میٹرک اور ویژولائزیشن کا استعمال کرتے ہوئے نمونے کے درمیان فاصلے کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ کنٹرول اور V-AKI نمونوں کے درمیان فاصلوں کا شماریاتی تجزیہ "qiime diversity beta-group significance" کمانڈ کے ذریعے جوڑے وار PERMANOVA ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ان نتائج کا ایک باکس پلاٹ ویژولائزیشن سیبورن پیکیج (3 مارچ 2021 کو حاصل کیا گیا) کے ذریعے بنایا گیا تھا۔ V-AKI کیسز اور کنٹرول مضامین کا ثنائی موازنہ اسکائی پیکج ((3 مارچ 2021 کو حاصل کیا گیا)) غیر مساوی تغیر کے ساتھ ایک آزاد ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ہر پروٹین اور V-AKI کی حیثیت کے مابین ایسوسی ایشن کی طاقت کو pi-value میٹرک کا استعمال کرتے ہوئے درجہ بندی کیا گیا تھا جو p-value کی اہمیت کو فولڈ چینج کے ساتھ جوڑتا ہے [12]۔ جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [46] ٹاپ رینکڈ، اہم ایسوسی ایشنز کو pi-value > |1| رکھنے کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ V-AKI کی حیثیت سے ہر ایک پروٹین ایسوسی ایشن کو ایک آتش فشاں پلاٹ میں بنایا گیا تھا تاکہ ٹاپ-10 درجہ بندی والے پروٹین کے مقام کو مزید نمایاں کیا جا سکے۔ DAVID سرور [47] کا استعمال کرتے ہوئے جین سیٹ کی افزودگی کا تجزیہ کیا گیا، ڈیٹاسیٹ میں شناخت شدہ تمام پروٹینوں کے پس منظر سے اہم پروٹین (pi-value > |1|) کا موازنہ کیا گیا۔ متعلقہ فنکشنل افزودگی کے جھرمٹ کی اطلاع ضمنی جدول S1 میں دی گئی ہے۔

To test for a relationship between V-AKI-associated proteins and inflflammatory cytokines, a recently developed network-based cytokine inference approach was utilized [48]. Briefly, a list of cytokines (TGFb, TNF, IFN, IL1-40, CXCL1-16, CCL1-27) was submitted alongside signifificantly altered proteins (pi-value > |1|) to the STRING-db tool [49]. Connections between proteins were determined using all interaction sources and a minimum interaction score >0.4۔ سائٹوکائنز کو سب سے پہلے فلٹر کیا گیا تھا تاکہ وہ نمایاں طور پر تبدیل شدہ پروٹینوں سے کم از کم پانچ کنکشن رکھتے ہوں۔ اس کے بعد، ہر سائٹوکائن اور V-AKI سے وابستہ یا کنٹرول سے وابستہ پروٹین کے درمیان رابطوں کے تناسب کا موازنہ V-AKI یا کنٹرول سے وابستہ پروٹین کے درمیان رابطوں کی کل تعداد سے کیا گیا۔ ہر سائٹوکائن کے دوسرے پروٹینوں سے کنکشنز کی تعداد میں فرق کے حساب سے، یہ قدر اگلی ان کنکشنز کی تعداد کے مقابلے میں تھی جو ہر سائٹوکائن کے تمام نمایاں طور پر تبدیل شدہ پروٹینوں سے ہوتی تھی۔ منتخب سائٹوکائنز کے لیے افزودگی کے اسکور ان کی وابستگی کے لیے بنائے گئے تھے یا تو V-AKI- یا کنٹرول سے وابستہ پروٹین کے ساتھ۔ آخر میں، V-AKI سے وابستہ پروٹینوں اور V-AKI سے وابستہ پروٹینوں سے افزودہ کنکشن کے ساتھ سائٹوکائنز کی ایک بہتر تلاش کو Cytoscape ورژن 3.5.1 [50] کا استعمال کرتے ہوئے ان کے تعامل کے لیے تصور کیا گیا۔ پروٹین-پروٹین کے تعامل کے نیٹ ورکس کو ہر V-AKI سے وابستہ پروٹین کو ان کے pi-اسکور ایسوسی ایشن کے مطابق V-AKI کی حیثیت سے سائز دے کر سجایا گیا تھا اور پرو یا اینٹی سوزش اثرات کے ساتھ افزودہ سائٹوکائنز کے ساتھ ایک قیاس کنکشن کے ذریعے رنگین کیا گیا تھا۔

ڈریگن جڑی بوٹیاں cistancheعلاج کر سکتے ہیںگردے کی چوٹ

5. نتائج

ہم نے طبی لحاظ سے فیصلہ شدہ کیسوں سے V-AKI کے لیے چوٹ کے طریقہ کار کو بہتر طور پر سمجھنے کی کوشش کی اور، دلچسپ بات یہ ہے کہ ہمیں تکمیلی، galectin-3 بائنڈنگ پروٹین، اور fibrinogen نمایاں طور پر V-AKI سے وابستہ تھے۔ پچھلے مطالعات اور ہمارے نتائج V-AKI میں تکمیلی نظام اور سوزش کے راستوں کے کردار کی تجویز کرتے ہیں۔ اگرچہ وینکومائسن اور اس کے نتیجے میں مرمت کے راستوں سے ہونے والے نقصان میں مالیکیولر عمل کی توثیق کرنے کے لیے بڑے مطالعے کی ضرورت ہے، لیکن نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ پیشاب کے اخراج پیتھو فزیولوجک میکانزم کے بارے میں اہم معلومات فراہم کر سکتے ہیں اور منشیات کی حوصلہ افزائی کے لیے بائیو مارکر کے طور پر کام کر سکتے ہیں۔گردہچوٹ.

مصنف کی شراکتیں:

تصوراتی، LA اور SPR، طریقہ کار، SV، SPR، DJG، RM؛ سافٹ ویئر، DJG، RHM، رسمی تجزیہ، LA، AL، RHM؛ تفتیش، AL، JA، VJ، SB، MC-T.، PN؛ تحریر — اصل مسودہ کی تیاری، AL، JA، VJ، LA؛ تحریر — جائزہ اور ترمیم، RHM, DJG, MC-T., AT, AA, JC, MSJ, EM, RM, PN; نگرانی، SV، SPR؛ پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، LA؛ فنڈنگ ​​کا حصول، LA تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔

فنڈنگ:

اس تحقیق کو انٹرنیشنل سیریس ایڈورس ایونٹس کنسورشیم نے مالی اعانت فراہم کی۔ MCT کو T32 ٹریننگ گرانٹ DK007202 سے تعاون حاصل ہے۔

ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: یہ مطالعہ ہیلسنکی کے اعلامیہ کے رہنما خطوط کے مطابق کیا گیا تھا، اور ادارہ جاتی جائزہ بورڈ (یا اخلاقیات کمیٹی) یونیورسٹی آف کیلیفورنیا، سان ڈیاگو ہیومن سبجیکٹس ریسرچ پروٹیکشن پروگرام (IRB#121651) سے منظور کیا گیا تھا۔

باخبر رضامندی کا بیان: مطالعہ میں شامل تمام مضامین سے باخبر رضامندی حاصل کی گئی تھی۔

اعترافات:

ہم براہ راست تفتیش کاروں کے تعاون کو تسلیم کرنا چاہیں گے: ڈینا کروز، اسٹورٹ گولڈسٹین، پیٹرک مرے، اینڈریو ڈیون پورٹ، اینڈریو لیونگٹن، ڈیوڈ سیلوسکی، مائیکل زیپیٹیلی، مارلیز آسٹرمین، لی یانگ، بھاونا پانڈیا، پیٹرک بروفی، ڈینیئل پونس، جولیا سٹی، جو بوچارڈ، کارلوس ارارازابل، ڈیوڈ اسکنازی، نتن کولھے، رولینڈو کلیئر ڈیل گراناڈو، نادین بینڈور، کلیئر کاسٹلڈین، جوناتھن بیراٹ، سنیل بھنڈاری، الیسا ریلی، آئس اکن-اریکان، ٹی کے ڈیوس، کرسٹوفر فارمر، مارک پینگی، ایف کرینگ، مارک پینگی، ایف۔ , Hansjoerg Rothe.

مفادات میں تضاد:

مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

منجانب: لنڈا اوڈیشو کی طرف سے 'یورینری ایگزوسومز وینکومائسن ایسوسی ایٹڈ ایکیوٹ کڈنی انجری میں سوزش کے راستوں کی شناخت کرتے ہیں'

---انٹ۔ جے مول سائنس 2021، 22، 2784