مدافعتی فنکشن پر Cistanche Polysaccharide کے کیا فوائد ہیں؟

رابطہ: emily.li@wecistanche.com

Cistanche Polysaccharide کی مدافعتی سرگرمی اور طریقہ کار

زینگ قونلی، زینگ یفان، لو زیلیانگ

[خلاصہ]مقصد: مطالعہ کرنامدافعتیکی سرگرمیCistancheپولی سیکرائیڈ(CDPS) اور اس کا طریقہ کارمدافعتیوٹرو میں ریگولیشن. طریقے: تھیازول بلیو کلرومیٹرک طریقہ (ایم ٹی ٹی) سی ڈی پی ایس کے ریگولیشن اثر کو دیکھنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا (Cistanche Polysaccharide) IQS DEX TNF پر وٹرو میں ماؤس تھیمک لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔ سی ڈی پی ایس (Cistanche Polysaccharide) فلو سائٹوومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے سیل سائیکل اور سیل سائیکل تجزیہ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ انٹرا سیلولر Ca2 کا تعین۔ نتائج: CDPS (Cistanche Polysaccharide) زیادہ ارتکاز میں لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ پر ISQDEX کے روکے ہوئے اثر اور لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ پر اعلی ارتکاز TNF کے روکنے والے اثر کی مزاحمت کر سکتا ہے، اور لیمفوسائٹس پر کم ارتکاز TN F کے پھیلاؤ کے فروغ کے اثر کو ہم آہنگ کر سکتا ہے۔Cistanche Polysaccharide) تقسیم کے مرحلے میں خلیوں کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے۔ زیادہ ارتکاز (100g/ml) CDPS (Cistanche Polysaccharide) ماؤس تھائموسائٹس میں Ca ion کے ارتکاز کو نمایاں طور پر فروغ دے سکتا ہے۔ نتیجہ: CDPS (Cistanche Polysaccharide) تقسیم کے مرحلے میں داخل ہونے کے لیے خلیوں کو فروغ دے سکتا ہے، اور یہ اندازہ لگایا جاتا ہے کہ ماؤس تھائمک لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ پر اس کا فروغ اثر ماؤس تھائمک لیمفوسائٹس میں کیلشیم کے اخراج کے فروغ سے متعلق ہے۔

Cistanche(CistancheڈیزرٹیکولاYC Ma) میرے ملک میں ایک نایاب اور قیمتی چینی ادویاتی مواد ہے۔ یہ "شین نونگز میٹیریا میڈیکا" میں اعلی درجے کے طور پر درج ہے۔Cistancheخون کی پرورش، گردے کی پرورش اور یانگ کی مدد کرنے، آنتوں کو نمی بخشنے، اور عمر بڑھنے میں تاخیر کے کام کرتا ہے۔ جدید فارماسولوجیکل ریسرچ یہ بتاتی ہے۔Cistancheپولی سیکرائیڈجسم کو بہتر کر سکتے ہیںمدافعتیفنکشنڈی این اے کی ترکیب کو فروغ دیتا ہے، جسمانی طاقت کو مضبوط کرتا ہے، ذہانت کو بہتر بناتا ہے، اور اس کے واضح مخالف عمر کے اثرات ہوتے ہیں [1]۔ مصنف نے CDPS کے ضابطے کا مطالعہ کیا۔(Cistanche Polysaccharide) کا ایک پولی سیکرائیڈ جزوCistanche، پرمدافعتیفنکشنماؤس لیمفوسائٹس کا۔

Cistanche Polysaccharideفروغ دیناکے پھیلاؤلیمفوسائٹس

1 مواد اور طریقے

1.1 ریجنٹس اور دوائیں

RPM، I 1640 میڈیم: GIB-CO؛ ہیپس: فارکو؛ ایل گلوٹامین: شنگھائی ڈونگفینگ ریجنٹ فیکٹری؛ پینسلن اور سٹریپٹومائسن: شمالی چین دواسازی کی فیکٹری؛ Concanavalin (ConA)، MTT: SIGM A کمپنی؛ Phytohemagglutinin (PHA): شنگھائی میڈیکل لیبارٹری؛ Isoproterenol (ISO): شنگھائی Tianfeng فارماسیوٹیکل فیکٹری؛ Mercaptoethanol: Fluka Company؛ نوزائیدہ بچھڑے کا سیرم: Sijiqing Bioengineering Company؛ ڈیکسامیتھاسون (DEX) کو ڈاکٹر ما لیانگ نے پیش کیا، ژی جیانگ یونیورسٹی سکول آف میڈیسن کے پہلے منسلک ہسپتال؛ ٹیومر سپریسر فیکٹر (TNF) یو یوہان، پروفیسر، سیلز ڈیپارٹمنٹ، سکول آف لائف سائنسز، زیجیانگ یونیورسٹی نے فراہم کیا تھا۔ باقی ری ایجنٹس تمام مقامی طور پر تیار کردہ تجزیاتی درجات ہیں۔

1.2 تجرباتی جانور۔

ICR چوہے، نر، 68 ہفتے پرانے، وزن 18-20g, 22، Zhejiang Experimental Animal Center سے خریدے گئے۔

1.3 Cistanche Polysaccharide کا اخراج [2]:

Cistancheپولی سیکرائیڈہماری لیبارٹری سے نکالا جاتا ہے! خام منشیات کو کچلنے کے بعدCistanche، اسے گرم ایتھنول میں ڈوبا جاتا ہے، ابلتے ہوئے پانی میں نکالا جاتا ہے، اور ایتھنول میں تیز کیا جاتا ہے۔ غیر جانبدار انزائم کو ڈیپروٹینائزیشن کے لیے Sewag طریقہ کے ساتھ ملا کر، CDPS کا ایک جزو حاصل کرنے کے لیے anion DEAE-Sephadex A- 50 ایکسچینج کرومیٹوگرافی اور Sephacry S-200 جیل فلٹریشن کرومیٹوگرافی (Cistanche Polysaccharide))۔ خشک رکھیں، استعمال سے پہلے ایک خاص ارتکاز بنانے کے لیے نامکمل RPMI1640 استعمال کریں، اور الٹرا فلٹریشن کے ذریعے جراثیم سے پاک کریں۔

1.4 تلی اور تھیمس لیمفوسائٹس کی تیاری [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93، تلی کے خلیات کے ارتکاز کو X 10/ml اور thymocytes کے ارتکاز کو × 10 ڈگری/ml پر ایڈجسٹ کریں۔

1.5 لیمفوسائٹ پھیلاؤ کا رد عمل:Mosmanmn طریقہ کے مطابق [4] بہتری: 96-وییل سیل کلچر پلیٹ، ہر کنویں میں 10/ml spleen cell suspension یا water 10/ml thymocyte suspension 100M1 اور دوائیاں 10041 کی مختلف مقداریں شامل کریں۔ CO2.37C انکیوبیٹر میں 72 گھنٹے تک کاشت کریں۔ کلچر کے اختتام سے 4 گھنٹے پہلے، ہر کنویں میں 8μ1 MTT (5 mg/ml) ڈالیں۔ کلچر کے اختتام پر، ہر کنویں سے 150"1 سپرناٹینٹ کو ایسپریٹ کریں، اور 0.5N آئسوپروپینول ہائیڈروکلورائیڈ 150M1 ڈالیں۔ نیلے کرسٹل کو مکمل طور پر تحلیل کرنے کے لیے مائکرو شیکر پر ہلکے سے ہلائیں۔ مائیکرو پلیٹ ریڈر پر OD570 کی پیمائش کریں۔ ہر تجرباتی کو سیٹ کریں۔ تین نقل کنویں کے طور پر اشارہ کریں۔

1.6 سیل سائیکل پر اثر و رسوخ کا تعین [5]:

{{0}}ویل سیل کلچر پلیٹ، ہر کنویں میں 4 10 ڈگری /ml تھائموسائٹ سسپنشن 1ml شامل کریں، مضبوط CO میں 2ml میں مختلف ریجنٹس اور پولی سیکرائیڈ محلول شامل کریں، 37 انکیوبیٹرز 72 گھنٹے تک کلچر کرنے کے بعد، سینٹری فیوج 1500r/منٹ پر 15 منٹ کے لیے، سپرناٹینٹ کو ضائع کریں، تیز خلیات کو ٹھیک کرنے کے لیے 7 ایتھنول شامل کریں، اسٹینڈ بائی ٹیسٹنگ کے لیے 4C پر اسٹور کریں، سیلز کو PBS کے ساتھ دو بار دھوئیں، 15 منٹ کے لیے 1500r/منٹ پر سینٹری فیوج کریں، خارج کر دیں سپرنٹنٹ، اور شامل کریں 0.5ml0.1 RNaseA کو 30 منٹ کے لیے 4C پر ہضم کرنے کے بعد، 50ug/ml bromoacetate کو 4C پر 30 منٹ کے لیے داغ دیا گیا، اور سیل کے نمونوں کی فلوروسینس کی شدت FACScan فلو سائٹو میٹر پر ماپا گیا۔ 10،000 سیل ٹیسٹ پوائنٹس ہر ایک نمونے کے لیے جمع کیے گئے تھے، اور ڈیٹا میں Mul tricycle سافٹ ویئر کے تجزیہ کا استعمال کیا گیا تھا۔

1.7 انٹرا سیلولر کیلشیم آئن کی حراستی کا تعین [6]

ماؤس thymocytes کو اوپر کی طرح اسی طرح لیں۔ نامکمل RPMIl640 کلچر میڈیم میں معطل کریں اور سیل کے ارتکاز کو × 10'/ml پر ایڈجسٹ کریں۔ ہر تجرباتی ٹیوب Fluo میں 1 ملی لیٹر تھاموسائٹ سسپنشن اور 1 μM شامل کریں منٹ، 10 منٹ کے لیے سینٹری فیوج، سپرنٹنٹ کو ضائع کریں، اور پولی سیکرائڈز اور پولی سیکرائڈز کی مختلف ارتکاز کو تیز خلیوں میں شامل کریں ConA کے بعد، فلوروسینس کی شدت کو FACScan فلو سائٹو میٹر پر ناپا گیا۔ ہر نمونے کے لیے 10،000 سیل ٹیسٹ پوائنٹس کا ڈیٹا اکٹھا کیا گیا اور CELLQUEST سافٹ ویئر کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ 1.8 تغیرات کے تجزیہ کے لیے شماریاتی طریقے استعمال کیے گئے، اور سیل سائیکل اور کیلشیم آئن کی پیمائش کا تجزیہ فلو سائٹو میٹر کے سافٹ ویئر کے ذریعے کیا گیا۔

cistanche deserticola سے Cistanche Polysaccharide

2 نتائج

2.1 وٹرو میں Cistanche Polysaccharide ISO DEX TNF کے ذریعہ ماؤس تھیمک لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔

ایڈرینرجک ریسیپٹر ایگونسٹ آئسوپروٹیرنول (آئی ایس او) اور ایڈرینل کورٹیکس ہارمون ڈیکسامیتھاسون (ڈی ای ایکس) کی ایک کلاس لیمفوسائٹ کے پھیلاؤ کو روکتی ہے۔Cistanche Polysaccharide) زیادہ ارتکاز پر (75 125ug/ml) لیمفوسائٹ کے پھیلاؤ (P) پر ISO DEX کے روکنے والے اثر کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے۔<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche پولی سیکرائیڈ) (125ug/ml) زیادہ ارتکاز میں TNF کے روکنے والے اثر کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے، اور TNF کی کم ارتکاز کے ساتھ ہم آہنگی سے لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دیتا ہے (شکل 2)

2.2 Cistanche Polysaccharide کا تھائمس لیمفوسائٹ سائیکل کا ضابطہ

سی ڈی پی ایس (Cistancheپولی سیکرائیڈ) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml تین ارتکاز کو ماؤس تھائمک لیمفوسائٹس پر 72 گھنٹے تک عمل میں لایا گیا، خلیات میں DNA مواد کو FACS کے ذریعے ماپا گیا، اور پھیلاؤ انڈیکس (PI) کا حساب لگایا گیا۔ فارمولے کے مطابق. نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 100ug/ml اور 200ug/ml دونوں تقسیم کے مرحلے میں خلیات کو نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں، اور دونوں کا پھیلاؤ انڈیکس (68.0 فیصد، 56.6) کنٹرول گروپ (44.6) اور 200ug/ml سے نمایاں طور پر زیادہ ہے۔ گروپ 100ug/ml گروپ سے تھوڑا کم ہے کیونکہ 200ug/ml کے ارتکاز میں، سیل کے پھیلاؤ پر اس کا اثر نیچے کی طرف رجحان بن گیا ہے [7]۔ 25ug/ml گروپ کی PI قدر (47.5 فیصد) کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ نہیں تھی۔

2.3 ماؤس تھائموسائٹس میں کیلشیم آئن کے ارتکاز پر Cistanche Polysaccharide کا اثر

تجرباتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی پی ایس کا زیادہ ارتکاز (100 ug/ml)Cistanche Polysaccharide) ماؤس تھائموسائٹس میں کیلشیم آئن کی حراستی میں اضافے کو نمایاں طور پر فروغ دے سکتا ہے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ایک اہم فرق ہے (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 بحث

Cistancheعام طور پر کے طور پر جانا جاتا ہے"صحرا ginseng"، کا ایک خشک، کھردرا مانسل تنا ہے۔Cistanche.Cistancheگردے یانگ، پرورش جوہر، خون اور آنتوں کی پرورش کے کام کرتا ہے۔ اس کا تعلق پٹیوٹری-ایڈرینل پرانتستا کے ایک قسم کے جوش سے ہے یا اس کا ہارمون جیسا اثر ہے جو کہ ایڈرینل کورٹیکس کی طرح ہے۔ ایک قیمتی چینی دوا جو کہ کنٹرول کر سکتی ہے۔مدافعتیفنکشنجسم کے. ہمارے پچھلے تحقیقی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ CDPS (Cistanche Polysaccharide) ان وٹرو تھائمک ٹی لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتا ہے جو کونا پی ایچ اے کے ذریعہ فعال یا فعال نہیں کیا گیا ہے۔ ConA PHA کے ساتھ مل کر، T سیل محرک کی دو قسمیں ہیں، ہمیں یقین ہے کہ CDPS (Cistanche Polysaccharide) ٹی سیلز کے لیے ایک بیڈجووینٹ ہے، اور ہم نے یہ بھی پایا کہ CDPS (Cistanche Polysaccharide) زیادہ تعداد میں ماؤس سپلینک لیمفوسائٹس کے سراو کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے [8]

کچھ مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ ریکومبیننٹ TNF وٹرو میں عام ماؤس اور انسانی ٹی لیمفوسائٹ کلسٹرز کے اپوپٹوس کا سبب بن سکتا ہے، اور اس اثر کو ممکنہ طور پر IIL-2 IL-1 IFN اور IIL-4 کے ذریعے روکا جا سکتا ہے۔ dexamethasone (DEX) کے ساتھ یہ لیمفوسائٹ کے اظہار اور IL-2 کی رطوبت کو روک کر اور اعلی وابستگی IL-2R کی پیداوار کو کم کر کے لیمفوسائٹ کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے۔ اس تجربے سے معلوم ہوا کہ سی ڈی پی ایس کی زیادہ ارتکاز (Cistancheپولی سیکرائیڈ) لیمفوسائٹ کے پھیلاؤ پر TN F کے اعلی ارتکاز کے اثرات کا مقابلہ کر سکتا ہے۔ روکنا، لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دینے کے لیے TNF کی کم ارتکاز کے ساتھ ہم آہنگی، اور لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ پر ISQ DEX کے روکنے والے اثر کا مقابلہ کر سکتا ہے۔ یہ اثرات بالکل CDPS کے ذریعے ہوتے ہیں (Cistancheپولی سیکرائیڈ) T lymphocytes کے پھیلاؤ کو فروغ دینے کے لئے اور T خلیات IL-2 اور دیگر سائٹوکائنز کو مکمل کرنے کے لئے آٹوکرائن ہیں۔

حالیہ برسوں میں، پودوں کے پولی سیکرائڈز کے امیونو فارماکولوجیکل اثرات کے بارے میں بہت سے مطالعات ہوئے ہیں، لیکن اس پر کچھ مطالعاتمدافعتیپولی سیکرائڈز کا ریگولیشن میکانزم، خاص طور پر دوسرے میسنجر کے طور پر Ca2 کے ساتھ لیمفوسائٹس پر کام کرنے والے پولی سیکرائڈز کا سگنل کی منتقلی کا راستہ۔ کوئی رپورٹ نہیں ہے۔ اس تجربے نے اس علاقے میں ابتدائی تحقیق کی۔ انٹرا سیلولر سگنلنگ مالیکیولز میں cAM R Ca" IP3 DG cGMP وغیرہ شامل ہیں، جن میں Ca" کا خلیات پر انتہائی اہم جسمانی اثر ہوتا ہے۔ انٹرا سیلولر Ca² ارتکاز میں اضافہ لیمفوسائٹ ایکٹیویشن اور پھیلاؤ کے ابتدائی مرحلے میں ایک اہم رجحان ہے۔ یہ عمل بنیادی طور پر پہلے دسیوں سیکنڈ سے منٹوں میں ہوتا ہے جب خلیات محرکات کے ذریعے متحرک ہوتے ہیں۔ ٹی سیل ایکٹیویشن کا کلاسیکی طریقہ فاسفیٹائیڈلائنوسیٹول (PIB) ہے تاکہ فاسفیٹائل پٹھوں کو میٹابولائز کیا جا سکے۔ الکحل میٹابولائٹ 1,4۔{4}}انوسیٹول ٹرائی فاسفیٹ (IP3) اندرونی میش ریسیپٹرز کو باندھ کر اندرونی میش میں ذخیرہ شدہ Ca" کے اخراج کو فروغ دے سکتا ہے، انٹرا سیلولر Ca2 کی سطح کو بڑھاتا ہے، اور انٹرا سیلولر Ca کی حراستی کو بڑھا سکتا ہے۔ * بڑھتا ہے۔ ہائی این ایف-اے ٹی (ایکٹیویٹڈ ٹی سیل کا عریاں عنصر) کی پیداوار کو فروغ دے سکتا ہے، مؤخر الذکر IIL-2 جین کے اظہار کو فروغ دینے کا اثر رکھتا ہے۔ تجرباتی نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ زیادہ ارتکاز (100g/ml) ) CDPS (Cistancheپولی سیکرائیڈ) 5 10 منٹ کے لیے موثر ہے وقت کا ماؤس تھائموسائٹس میں Ca* کے ارتکاز کو بڑھانے پر اہم اثر پڑتا ہے، اور ConA کے ساتھ ہم آہنگی کا اثر ہوتا ہے۔ لہذا، ہم قیاس کرتے ہیں کہ CDPS (Cistanche Polysaccharide) انٹرا سیلولر کیلشیم آئن ارتکاز کو بڑھانے کے لیے ماؤس تھائمک لیمفوسائٹس میں کیلشیم کے اخراج کو فروغ دیتا ہے۔ یہ اضافہ IL-2 جین کے اظہار کو فروغ دیتا ہے اور T خلیات کے پھیلاؤ کا باعث بنتا ہے، جو کہ اس کی نظریاتی بنیادوں میں سے ایک ہے۔Cistancheپولی سیکرائیڈزجسم پر ریگولیٹری اثر

Cistanche Polysaccharide

حوالہ جات

1. XiuHin، SU Yuke میں (فارماکولوجی ریسرچ کی عمومی صورتحالCistancheSka 【J】۔ چینی روایتی اور جڑی بوٹیوں کی دوائیں ((چینی جڑی بوٹیوں کی دوا)۔ 1993.24(10. 550-552(چینی میں)))

2. ZHANG Weijiee (کمپاؤنڈ پولی سیکرائیڈ کی بائیو کیمیکل ٹیکنالوجی [M]۔ Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press)، 1994۔

3. ایم اے بو- (ما باؤلی)۔ امیونولوجی ٹیکنیک【M1۔ شنگھائی میڈیکل یونیورسٹی پریس (شنگھائی میڈیکل یونیورسٹی پریس)، 1984 188-190۔ (n چائنیز))

4. Mosmann T. Rapiloloimeric پرکھ برائے پھیلاؤ اور سائٹوٹوکسٹی دوروں میں آسان ترقی اور بقا کے اطلاق کے لیے[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58۔

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, etc.), زن کا اثر چکراتی خلیوں کے پھیلاؤ پرمدافعتیبہاؤ سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے اعضاء کا تجزیہ [J]۔ چینی امیونولوجی (چائنیز جرنل آف امیونولوجی)، 1994، 10X5: 278-281۔ (چین میں)

6. TAO محور۔ JIYong-yong، GAO Qi-rong، et al (Tao Jiaxian، Ji Yongpu Gao Qirong، وغیرہ)۔ ایکٹیویشن کے دوران انٹرا سیلولر C2 میں تبدیلیوں کا FACS تجزیہ (چینی میں)

7. ZENGQ-li.MAO Jum-hao, LU Suchiang; طہارت d کی پولیسیکڈرائڈCistancheڈیزرٹیکولاYC Mfa اور ٹیل فنکشن پر اس کے امیونو موڈولیٹری اثرات

8. سرین اے، مشیل سی سی پیری اے ایچ سائٹوٹوکسک ایفڈ آف TNF اور لیمفوٹوکسن T Lymphoblak پر۔ جے امیونول، 1995، 1553716-3721۔