3. بحث

اگرچہ ZER مختلف قسم کے حیاتیاتی افعال کو ظاہر کرتا ہے، بشمول اینٹی سوزش، اینٹی کینسر، اور اینٹی مائکروبیل سرگرمیاں، اس کی اینٹی میلانوجینک خصوصیات کی اطلاع نہیں دی گئی ہے [12]۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے پہلی بار یہ ظاہر کیا کہ Zingiber officinal (ZO) اقتباس اور اس کے فعال جزو ZER کا -melanocytes stimulating hormone (-MSH) کی حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس پر مضبوط روک تھام کا اثر ہے۔

متعلقہ مطالعات کے مطابق، cistanche ایک عام جڑی بوٹی ہے جسے "معجزہ جڑی بوٹی جو زندگی کو طول دیتی ہے" کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اس کا بنیادی جزو ہے۔cistanoside، جس کے مختلف اثرات ہوتے ہیں جیسےاینٹی آکسیڈینٹ, غیر سوزشی، اورمدافعتی فنکشن کو فروغ دینا. cistanche اور جلد کی سفیدی کے درمیان طریقہ کار cistanche glycosides کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر میں مضمر ہے۔ انسانی جلد میں میلانین ٹائروسین کے آکسیکرن کے ذریعے پیدا ہوتا ہے۔ٹائروسینیز، اور آکسیجن کے رد عمل میں آکسیجن کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، لہذا جسم میں آکسیجن سے پاک ریڈیکلز متاثر کرنے والا ایک اہم عنصر بن جاتا ہے۔میلانین کی پیداوار.Cistanche پر مشتمل ہے۔cistanoside، جو ایک اینٹی آکسیڈینٹ ہے اور جسم میں آزاد ریڈیکلز کی نسل کو کم کر سکتا ہے، اس طرحمیلانین کی پیداوار کو روکتا ہے۔.

سفید کرنے کے لیے رو کانگ رونگ فوائد پر کلک کریں۔

مزید معلومات کے لیے:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

الٹراوائلٹ (UV) شعاع ریزی، سوزش والی سائٹوکائنز، اور ہارمونل سگنلنگ کی وجہ سے غیر معمولی طور پر میلانوجینیسیس میں اضافہ، رنگت کی خرابیوں، جیسے کلوزما اور فریکلز [4] سے قریبی تعلق رکھتا ہے۔ UV کی نمائش پر، keratinocytes secrete -MSH، جو epidermal melanocytes میں melanin biogenesis کو متحرک کرتا ہے [1]۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے ظاہر کیا کہ Zingiber officinal (ZO) اور ZER کا میتھانولک جڑ کا عرق ایم ایس ایچ کی حوصلہ افزائی میلانین کے جمع ہونے کو سختی سے دباتا ہے۔ arbutin کے روکنے والے اثرات کا موازنہ، جو کہ ایک معروف اینٹی میلانوجینک کیمیکل ہے، اور میلانین کے جمع ہونے پر ZER سے پتہ چلتا ہے کہ 10 µM ارتکاز پر ZER -MSH- علاج شدہ B16F10 ماؤس میں arbutin کے مقابلے میں تقریباً 40 فیصد زیادہ مضبوط اینٹی میلانوجینک اثر دکھاتا ہے۔ .

کئی بائیو کیمیکل مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ Zingiber zerumbet rhizomes کے ضروری تیل میں ZER کی بڑی مقدار ہوتی ہے، جو پودوں کے ZER مواد کا تقریباً 13–70 فیصد بنتا ہے۔ تاہم، ZER کی تھوڑی مقدار Zingiber officinal میں بھی موجود ہے [20]۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ پچھلی رپورٹس سے پتہ چلتا ہے کہ جنوبی ہندوستان میں کاشت کی جانے والی زنگیبر زرمبیٹ میں ZER کا 76.3 سے 84.8 فیصد ہوتا ہے۔ تاہم، ہندوستان میں ایک سلوی کلچر فارم سے پتہ چلتا ہے کہ 1.81 فیصد ZER مواد rhizome میں، 0.16 فیصد جڑ میں، اور 0.09 فیصد Zingiber zerumbet کے پتوں میں پایا جاتا ہے [12]۔ لہذا، یہ پس منظر بتاتے ہیں کہ Zingiber zerumbet کے ZER مواد میں فرق جغرافیائی یا ماحولیاتی تغیرات کے ساتھ منسلک نہیں ہوسکتا ہے، لیکن اس کے بجائے ZER کیموٹائپ [12] میں فرق کی وجہ سے ہے۔ اگر ایسا ہے تو ZO میں میلانجینک مخالف سرگرمی کیوں ہے؟ ایک امکان تجویز کیا جا سکتا ہے کہ ZO کے دیگر فعال اجزاء، جو ZER سے مختلف ہیں، میلانوجینیسیس کو دبا سکتے ہیں۔ درحقیقت، ایک پچھلی رپورٹ سے پتہ چلتا ہے کہ Zingiber officinal rhizome کے ضروری تیل میں متعدد بائیو ایکٹیو اجزا ہوتے ہیں، جیسے کہ -پینین، ویلنسین، اور زنجیبیرین [21]۔ مزید برآں، B16F10 ماؤس میلانوما سیلز [22,23] میں -pinene اور valencene کے مخالف میلانوجینک اثرات بھی دیکھے گئے ہیں۔ اس کے علاوہ، [6]-اسکول کا میلانوجینیسیس روکنے والا اثر، Zingiber officinal rhizomes کا بڑا اسکول، ERK1/2-ثالثی MITF انحطاط [24] کے سرعت کے ذریعے دیکھا گیا ہے۔ یہ پچھلی رپورٹس ہمارے نتیجے کی تائید کرتی ہیں کہ ZO کے ساتھ ساتھ ZER کے متعدد قسم کے فعال اجزاء میں اینٹی میلانوجینک سرگرمی ہوتی ہے۔

مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) میلانوجینیسیس کے لیے ایک اہم عنصر ہے جو کہ جینوں کی نقل میں سہولت فراہم کرتا ہے، جیسے ٹائروسینیز، ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 1 (TYRP1)، اور ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 2 (TYRP2)، جو کہ melanynsis کے لیے ضروری ہیں۔ اور نقل و حمل [2,25]۔ UV شعاع ریزی پر، کیراٹینوسائٹس سے ماخوذ ایم ایس ایچ ایم آئی ٹی ایف کو متحرک کرتا ہے اور پروٹین کناز A (PKA)-cAMP رسپانس ایلیمنٹ بائنڈنگ پروٹین (CREB) سگنلنگ ایکسس [25] کے ذریعے اپنے ہدف والے جینز کے اظہار کو منظم کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، متعدد ٹرانسکرپشن عوامل، جیسے SOX10 اور LEF1، MITF کی نقل کی سرگرمی کو چالو کرتے ہیں [26]۔ SOX10 (جنس کا تعین کرنے والا علاقہ Y-box 10) MITF پروموٹر کو −264 اور −266 کے درمیان پابند کر سکتا ہے اور MITF ٹرانسکرپشن کو بڑھا سکتا ہے [27]۔ LEF1 (لیمفائیڈ اینہنسر بائنڈنگ فیکٹر 1) بھی MITF کے ساتھ ٹرانسکرپشن طور پر تعاون کرتا ہے ایک نان DNA-بائنڈنگ ایکٹیویٹر کے طور پر Wnt (wingless-type) سگنلنگ [28] پر MITF جین اظہار کو فروغ دینے کے لیے۔ ایم آئی ٹی ایف کی ترجمے کے بعد کی ترمیم، جیسے فاسفوریلیشن اور ایسٹیلیشن، اس کے پروٹین کے استحکام اور سرگرمی کو منظم کر سکتی ہے [26]۔ خاص طور پر، Ser73 میں MITF کا فاسفوریلیشن، جہاں انحطاط کو فروغ دینے والا PEST تسلسل موجود ہے، UV شعاع ریزی [17] کے جواب میں پروٹیزوم پر منحصر MITF انحطاط کا باعث بنتا ہے۔ پروٹیزوم پر منحصر MITF انحطاط بھی Ser409 [18] پر MITF کے فاسفوریلیشن کی وجہ سے ہوتا ہے۔ Ser73 اور Ser409 دونوں کا فاسفوریلیشن جو MITF انحطاط کو فروغ دیتا ہے ERK1/2 پاتھ وے [17,18] کو چالو کرنے پر منحصر ہے۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ ZER PKA-CREB سگنلنگ پاتھ وے (شکل 6) سے آزاد MITF اور اس کے ٹارگٹ جینز، جیسے ٹائروسینیز، TYRP1، اور TYRP2 پر -MSH محرک کے اظہار کو دباتا ہے۔ درحقیقت، ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ZER، لیکن arbutin اور kojic acid نہیں، -MSH-حوصلہ افزائی tyrosinase mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح کو کم کرنے کے لیے کافی ہے (شکل 2)۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ ZER میلانوجینک جینز اور ان کے پروٹین اظہار کی MITF ثالثی ٹرانسکرپشن کے ڈاؤن ریگولیشن کے ذریعے میلانوجینیسیس کو دباتا ہے۔ MITF کی Ubiquitin ثالثی انحطاط کو جزوی طور پر مستقل ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کنیزس (ERK1/2) ایکٹیویشن [6,7] کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ ہمارے نتائج نے ظاہر کیا کہ Zingiber officinal extract (ZO) اور ZER ERK1/2 فاسفوریلیشن کو بڑھاتے ہیں، اور B16F10 خلیوں میں میلانین کے جمع ہونے کو کم کرتے ہیں۔ مزید برآں، mitogen-activated protein kinase (MAPK) U0126 کا سلیکٹیو انحیبیٹر، مؤثر طریقے سے میلانین مواد کو بحال کرتا ہے، ZER سے کم ہوا، یہ تجویز کرتا ہے کہ ERK1/2 سگنلنگ Zingiber officinal (ZO) ایکسٹریکٹ اور zerumbone کے اینٹی میلانوجینک اثر سے وابستہ ہے۔

ہیپاٹو سیلولر کارسنوما اور U937 میکروفیج سیلز میں ZER کے ذریعے ERK1/2 کے فاسفوریلیشن میں کمی پہلے دیکھی جا چکی ہے [29]۔ اس کے علاوہ، Zingiber zerumbet rhizomes کے ایتھنول کے عرق کو ذیابیطس ریٹیناس [30] میں ERK1/2 فاسفوریلیشن کو دبانے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ اس کے برعکس، اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ ZER خوراک پر منحصر انداز میں ERK1/2 کے فاسفوریلیشن کو بڑھاتا ہے، لیکن MEK نہیں (شکل 3A)۔ ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتے ہوئے، ایک پچھلی رپورٹ میں دکھایا گیا ہے کہ 6-جنجرول اور 6-اسکول، جو ادرک کے اہم فعال اجزاء ہیں، ماؤس ہپپوکیمپس میں ERK1/2 فاسفوریلیشن کو کم کرنے والے اعصاب کی نشوونما کا عنصر (NGF) [31]۔ مزید برآں، دیگر تجرباتی شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ ZER اور 6-shogaol بالترتیب THP-1 مونوسائٹس اور ماؤس B16F10 میلانوما سیلز میں ERK1/2 فاسفوریلیشن کو تیز کرتے ہیں [24,32]۔ اس کے علاوہ، ماؤس B16BL6 میلانوما خلیوں میں جن کا علاج isosakuranetin کے ساتھ کیا گیا تھا، ایک 40 -O-methylated flavonoid، MITF کے فاسفوریلیشن میں کمی اور MITF استحکام میں اضافہ ERK1/2 کے دبانے سے دیکھا گیا ہے جو بعد میں میلانوجین کو متحرک کرتا ہے۔ ] اس طرح، ہم پرزور مشورہ دیتے ہیں کہ ZER اور ZO اقتباس کی حوصلہ افزائی ERK1/2 ایکٹیویشن MITF کی بڑھتی ہوئی فاسفوریلیشن اور اس کے عدم استحکام کی وجہ ہو سکتی ہے، جو میلانوجینیسیس کو دبانے کا باعث بنتی ہے۔ بہر حال، Zingiber کے نچوڑ اور ان کے اجزاء فاسفوریلیٹ ERK1/2 کے بارے میں ان تنازعات کو حل کرنے کے لیے وسیع تحقیق ضروری ہے کہ متعدد قسم کے خلیوں یا بافتوں میں مختلف طریقے سے۔ چونکہ MEK ایک بڑا اپ اسٹریم کناز ہے [34] جو آنکوجینک گروتھ سگنلنگ پر ERK1/2 کو فاسفوریلیٹ کرتا ہے، ZER کو ERK1/2 upstream kinase کی سرگرمی کو بھی تبدیل کرنے کے لیے سمجھا جاتا تھا۔ تاہم، ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ZER MEK فاسفوریلیشن کو متاثر نہیں کرتا ہے۔ اس طرح، ZER عمل کے مالیکیولر میکانزم کی وضاحت کے لیے دو مفروضے ہیں۔ (1) ZER براہ راست MEK کی کنیز سرگرمی کو ایک مسابقتی یا الوسٹرک انحیبیٹری میکانزم کے ذریعے روکتا ہے، اور (2) ایسے نامعلوم سگنلنگ مالیکیولز ہیں جو براہ راست یا بالواسطہ طور پر ZER سے متاثر ہوتے ہیں اور ERK1/2 کے ایکٹیویٹر کے طور پر کام کرتے ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ پچھلی رپورٹس سے پتہ چلتا ہے کہ ZER بالترتیب کولوریکٹل اور لبلبے کے کینسر کے خلیوں میں انٹرا سیلولر گلوٹاتھیون (GSH) کی کمی اور انٹرا سیلولر ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی شمولیت کے ذریعے آکسیڈیٹیو تناؤ کا سبب بنتا ہے [35,36]۔ مزید یہ کہ یہ بھی بتایا گیا ہے کہ بڑھتا ہوا انٹرا سیلولر ROS ERK1/2 فاسفوریلیشن کو دوہری مخصوص فاسفیٹیس 3 (DUSP3) کو Cys کے آکسیکرن کے ذریعے ماڈیول کرتا ہے-124 [37]۔ ایک ممکنہ مفروضہ یہ ہوسکتا ہے کہ بڑھتا ہوا آکسیڈیٹیو تناؤ اور ZER کے ذریعہ دبایا گیا DUSP3 ERK1/2 فاسفوریلیشن میں شامل ہوسکتا ہے۔ اس کے علاوہ، چن وغیرہ۔ نے تجویز کیا ہے کہ ZER NF-κB اور iNOS سگنلنگ پاتھ ویز کو دبا کر انٹرا سیلولر نائٹرک آکسائڈ (NO) کے جمع ہونے کو کم کرتا ہے، جو ماؤس کارنیا کو UVB-حوصلہ افزائی فوٹوکیریٹائٹس [38] سے روکتا ہے۔ نائٹرک آکسائیڈ (NO) ایک میلانوجینیسیس محرک عنصر ہے جو میلانوسائٹس اور کیراٹینوسائٹس سے UV شعاع ریزی اور proinflammatory cytokines [39,40] پر خارج ہوتا ہے۔ یہ لٹریچر اس امکان کی تجویز کرتا ہے کہ ZER انٹرا سیلولر NO کو برقرار رکھ کر -MSH-حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو کم کرتا ہے۔ لہذا، مالیکیولر میکانزم کو ظاہر کرنے کے لیے ایک توسیعی مطالعہ جس کے ذریعے ZER ERK1/2 سگنلنگ پاتھ وے کو متحرک کرتا ہے جلد کو سفید کرنے والے کاسمیٹکس کی ترقی کے لیے سائنسی پس منظر فراہم کر سکتا ہے۔

ZER کے متعدد حیاتیاتی افعال ہوتے ہیں، جیسے سوزش مخالف [41]، اینٹی مائکروبیل [42]، اینٹی آکسیڈینٹ [43]، اور اینٹی الرجک [44]۔ الٹرا وائلٹ A (UVA) شعاع ریزی کے طویل عرصے تک نمائش سے فوٹو گرافی سے متعلق جلد کے امراض، جیسے کہ جھریاں اور جلد کا کینسر ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کے زیادہ جمع ہونے سے ہوتا ہے [2]۔ ایک پچھلی رپورٹ سے پتہ چلتا ہے کہ ZER جلد کے کیراٹینوسائٹس میں UVA- شعاع ریزی سے متاثرہ سیلولر نقصان کے خلاف جوہری عنصر (erythroid-dirived 2)-like 2 (Nrf2) میں ثالثی اینٹی آکسیڈنٹس جین اظہار [1] بڑھا کر سائٹو پروٹیکشن کا استعمال کرتا ہے۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ ZER، ZO ایکسٹریکٹ کے ایک فعال جزو کے طور پر، جلد کے امراض، جیسے جلد کے کینسر، جھریوں اور ہائپر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، جو UV شعاع ریزی کی وجہ سے ہوتے ہیں۔ اگرچہ یہاں ہم نے B16F10 ماؤس اور G361 ہیومن میلانوما سیلز میں ZER اور ZO ایکسٹریکٹ کا اینٹی میلانوجینک اثر دکھایا ہے، لیکن جلد کو سفید کرنے والے کاسمیٹکس میں غور کرنے سے پہلے انسانی بنیادی میلانوسائٹس میں ان کی اینٹی میلانوجینک سرگرمیوں کا مزید جائزہ لینا ضروری ہے۔

4. مواد اور طریقے

4.1 ریجنٹس اور اینٹی باڈیز

MITF (#12590)، p-AKTS473 (#4060)، p-CREB (#9398)، p-ERK1/2 (#4370)، ERK1/2 (#9102)، p-MEK کے خلاف اینٹی باڈیز (#9154)، MEK (#9122)، اور ERK1/2 inhibitor U0126 سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی (Danvers, MA, USA) سے خریدے گئے تھے۔ اینٹی ٹائروسینیز (sc-7833) اور -tubulin (sc-9104) سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی (ڈلاس، TX، USA) سے حاصل کیے گئے تھے۔ اینٹی TYRP2 (DCT، ab74073) Abcam (کیمبرج، UK) سے خریدا گیا تھا۔ زرمبون (Z3902)، arbutin (A4256)، کوجک ایسڈ (K3125)، -MSH (M4135)، اور L-DOPA (333786) سگما-الڈرچ (سینٹ لوئس، MO، USA) سے خریدے گئے تھے۔ علاج سے پہلے فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) میں میلانوسائٹ محرک ہارمون کا اسٹاک حل تیار کیا گیا تھا۔ Recombinant human SCF R&D سسٹمز (Minneapolis, MN, USA) سے حاصل کیا گیا تھا اور اس کا اسٹاک سلوشن (10 µM) PBS میں تیار کیا گیا تھا۔ زیرمون (20 ایم ایم)، آربوٹن (1 ایم)، اور کوجک ایسڈ (0.2 ایم) کے اسٹاک سلوشن ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) میں تیار کیے گئے تھے۔ Lyophilized Zingiber officinal extract (035-061)، 99 فیصد میتھانول سے الگ تھلگ، کوریا پلانٹ ایکسٹریکٹ بینک (KPEB) (Daejeon، Korea) اور Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB) (Daejeon, Korea) سے حاصل کیا گیا تھا۔ علاج سے پہلے DMSO میں Zingiber officinal extract کا اسٹاک حل تیار کیا گیا تھا۔

4.2 سیل کلچر اور سیل وائبلٹی پرکھ

4.3 امیونوبلوٹنگ اور امیونوپریسیپیٹیشن

امیونوپریسیپیٹیشن اس بات کا پتہ لگانے کے لئے کی گئی تھی کہ آیا اینڈوجینس MITF Ser73 پر فاسفوریلیٹ ہے یا نہیں۔ 1 ملی گرام سیل لائسیٹس کو 1 µg اینٹی فاسفو-MITF اینٹی باڈی (pSer73؛ سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) کے ساتھ 16 گھنٹے کے لیے 4 ◦C پر انکیوبیشن کیا گیا، اس کے بعد 20 µL پروٹین A/ کے ساتھ انکیوبیشن کیا گیا۔ G-agarose موتیوں کی مالا (سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی، ڈلاس، TX، USA) 4 ◦C پر 3 گھنٹے کے لیے۔ تیز پروٹین کو ایس ڈی ایس نمونہ بفر میں نکالا گیا تھا اور پھر فاسفوریلیٹڈ MITF (Ser73) پروٹین کو اینٹی p-MITF اینٹی باڈی (pSer73) کا استعمال کرتے ہوئے امیونو بلوٹنگ کے ذریعہ ماپا گیا تھا۔ امیونوبلوٹنگ کی گئی تھی، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [4]۔ مختصراً، کل پروٹین کے نمونے lysis بفر کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے، جن میں 1 فیصد NP-40 (Nonidet P-40)، 150 mM NaCl، 50 mM Tris-HCl (pH 7.4)، 10 mM NaF، اور a پروٹیز روکنے والا کاک ٹیل۔ سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس (SDS-PAGE) ہر نمونے میں ان کے مالیکیولر وزن کی بنیاد پر پروٹین کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ اس کے بعد الگ شدہ پروٹین کو پولی وینیلائیڈین ڈائی فلورائڈ (پی وی ڈی ایف) جھلی (ملی پور، برلنگٹن، ایم اے، یو ایس اے) میں منتقل کیا گیا۔ منتقل شدہ پروٹین والی جھلیوں کو پھر بنیادی اینٹی باڈیز (1:1000) اور ثانوی اینٹی باڈیز (1:10,000) کے ساتھ 4 ◦C یا کمرے کے درجہ حرارت پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ ایک Chemiluminescent ECL پرائم کٹ (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) پروٹین کے تاثرات کو دیکھنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

4.4 انٹرا سیلولر اور ایکسٹرا سیلولر میلانین مواد کی پیمائش 

انٹرا سیلولر اور ایکسٹرا سیلولر میلانین مواد کی پیمائش اور تجزیہ کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [3]۔ ماؤس میلانوجینک B16F10 خلیوں کو فینول ریڈ فری DMEM کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا۔ اس کے بعد میلانجینک محرک کو فروغ دینے کے لیے سیلز کو -MSH (0.1 mM) کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے پہلے سے علاج کیا گیا، اور تین دن تک زیرمبون کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، کلچر میڈیم کو تازہ ٹیوبوں میں منتقل کیا گیا، اور کلچرڈ سیلز کو 1 N NaOH میں کاٹ کر تحلیل کیا گیا جس میں 10 فیصد DMSO 80 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے تھا۔ کلچر میڈیم اور سیل کے نچوڑ کے میلانین مواد کو جاذب ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm (OD475) پر ماپا گیا۔ میلانین کے مواد کو پھر سیلولر پروٹین کی حراستی میں معمول بنایا گیا۔

4.5 مقداری RT-PCR

مقداری ریئل ٹائم پی سی آر انجام دیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [4]۔ مختصراً، سی ڈی این اے کی ترکیب کے لیے ایک اعلیٰ صلاحیت والی سی ڈی این اے ریورس ٹرانسکرپشن کٹ (اپلائیڈ بایو سسٹم، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) اور کل آر این اے (2 µg) استعمال کیے گئے تھے۔ SYBR گرین PCR ماسٹر مکس (Dynebio، Seongnam، Korea) کو مقداری PCR کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ PCR پرائمر 50 اور 30 ​​کی ترتیب حسب ذیل تھی: MITF کے لیے TCAAGTTTCCAGAGAGACGGGT اور CATCATCAGCCTGGAATCAA؛ ٹائروسینیز کے لیے ATAGGTGCATTGGCTTGG اور TCTTCACCATGCTTTTGTGG؛ TYRP1 کے لیے CTCATCAAAGATGGGCGTCTG اور CTTCCTGAATGGGACCAATG۔

4.6 سیلولر ٹائروسینیز ایکٹیویٹی پرکھ

جیسا کہ اشارہ کیا گیا ہے، ماؤس میلانوجینک B16F10 سیلز 0.1 mM -MSH کے ساتھ زیرومبون، آربوٹین، کوجک ایسڈ، اور زنجیبر آفیسنل (ZO) ایکسٹریکٹ کی عدم موجودگی یا موجودگی میں انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ اس کے بعد کلچرڈ سیلز کو ٹھنڈے پی بی ایس کا استعمال کرتے ہوئے دھویا اور لیس کیا گیا جس میں 1 فیصد Triton X-100 تھا، اور ٹائروسینیز کی انزیمیٹک سرگرمی کو پہلے بیان کردہ طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا [4]۔

4.7 شماریاتی تجزیہ

5. نتائج

اس تحقیق کے بڑے نتائج یہ ہیں کہ Zingiber officinal (ZO) کا عرق اور اس کا فعال جزو، zerumbone (ZER)، (i) ایم ایس ایچ کے محرک پر میلانین کے جمع ہونے کو کم کرتا ہے۔ اور، (ii) PKA-CREB سگنلنگ پاتھ وے (شکل 6) سے آزاد ERK1/2 کو چالو کرکے میلانوجینیسیس سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر، MITF، اور اس کے ٹارگٹ جینز کے اظہار کو کم کرتا ہے۔ لہذا، یہ نتائج تجویز کرتے ہیں کہ Zingiber officinal (ZO) کے نچوڑ میں ZER، ایک فعال جزو کے طور پر موجود ہے، جو جلد کے امراض اور جلد کو سفید کرنے والی مصنوعات دونوں کی نشوونما میں مفید ہوگا۔

حوالہ جات

1. میامورا، وائی. Coelho, SG; وولبر، آر. ملر، SA؛ Wakamatsu, K.; Zmudzka، BZ؛ Ito, S.; سمودا، سی۔ پاسیرون، ٹی. چوئی، ڈبلیو. ET رحمہ اللہ تعالی. انسانی جلد کی رنگت کا ضابطہ اور الٹرا وایلیٹ تابکاری کے ردعمل۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2007، 20، 2-13۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. ریلی، PA میلانوجینیسیس اور میلانوما۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2003، 16، 548–552۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. ہچیا، A.؛ سریویریانونٹ، پی. کوبایشی، ٹی. ناگاساوا، اے. یوشیدا، ایچ. اوہوچی، اے. Kitahara, T.; Visscher, MO; تاکیما، وائی۔ Tsuboi, R. سٹیم سیل فیکٹر-KIT سگنلنگ ممالیہ کے بالوں میں پگمنٹیشن کو منظم کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ جے پاتھول۔ 2009، 218، 30-39۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

4. اوہ، ٹی آئی؛ یون، جے ایم؛ پارک، ای جے؛ کم، وائی ایس؛ لی، وائی ایم؛ لِم، جے ایچ پلمبگین ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک کر b16f10 ماؤس میلانوما خلیوں میں الفا-ایم ایس-حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو دباتا ہے۔ انٹر جے مول سائنس 2017، 18، 320۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. بسکا، آر. Ballotti, R. Cyclic AMP جلد کی رنگت کے ضابطے میں ایک اہم میسنجر۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2000، 13، 60-69۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. کم، ڈی ایس؛ ہوانگ، ای ایس؛ لی، جے ای؛ کم، ایس وائی؛ کوون، ایس بی؛ پارک، KC Sphingosine-1-فاسفیٹ مسلسل ERK ایکٹیویشن اور اس کے نتیجے میں MITF انحطاط کے ذریعے میلانین کی ترکیب کو کم کرتا ہے۔ جے سیل سائنس 2003، 116، 1699-1706۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

7. وو، ایم؛ Hemesath, TJ; ٹیکموٹو، سی ایم؛ ہورسٹ مین، ایم اے؛ ویلز، اے جی؛ قیمت، ER؛ فشر، ڈی زیڈ؛ فشر، DE c-Kit دوہری فاسفوریلیشن کو متحرک کرتا ہے، جو ضروری میلانوسائٹ عنصر ایم آئی کی ایکٹیویشن اور انحطاط کو جوڑتا ہے۔ جینز دیو۔ 2000، 14، 301–312۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

8. کانگ، ایس جے؛ چوئی، بی آر؛ لی، ای کے؛ کم، ایس ایچ؛ Yi, HY; پارک، HR؛ گانا، CH؛ لی، وائی جے؛ Ku, SK B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانوجینیسیس پر خشک انار کے ارتکاز پاؤڈر کا روک تھام کا اثر؛ p38 اور PKA سگنلنگ پاتھ ویز کی شمولیت۔ انٹر جے مول سائنس 2015، 16، 24219–24242۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

9. بی اے، جے ایس؛ ہان، ایم؛ Yao, C.; چنگ، جے ایچ چیٹوسن ERK کو چالو کرنے کے ذریعے B16F10 ماؤس میلانوما خلیوں میں IBMX-حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ کیم بائول تعامل 2016، 245، 66–71۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

10. ہاکوزاکی، ٹی. میوالا، ایل۔ Zhuang, J.; چھوا، ایم؛ متسوبارا، اے. Miyamoto, K.; Greatens, A.; ہلر برانڈ، جی جی؛ بسیٹ، ڈی ایل؛ Boissy, RE جلد کی رنگت کو کم کرنے اور میلانوزوم کی منتقلی کو دبانے پر نیاسینامائڈ کا اثر۔ Br J. ڈرمیٹول 2002، 147، 20-31۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

11. پیلیار، ٹی. مانیکم، ایم. جنگ، ایس ایچ ڈاؤن ریگولیشن آف میلانوجینیسس: منشیات کی دریافت اور علاج کے اختیارات۔ ڈرگ ڈسکو۔ آج 2017، 22، 282–298۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. رحمان، ایچ ایس؛ Rasedee, A.; جی ہاں، ایس کے؛ عثمان، ایچ ایچ؛ چارٹرینڈ، ایم ایس؛ نامور، ایف۔ عبدل، اے بی؛ کینسر کے علاج اور کیموپریوینشن ٹرائلز میں قدرتی غذائی پلانٹ میٹابولائٹ، زیرمبون کی سی ڈبلیو بایومیڈیکل خصوصیات کیسے۔ BioMed Res. انٹر 2014، 2014، 920742۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. یانگ، ایچ ایل؛ لی، سی ایل؛ کوریوی، ایم. لیاو، جے ڈبلیو؛ راجندرن، پی. وو، جے جے؛ Hseu, YC Zerumbone Nrf2 انڈکشن کے ذریعے انسانی جلد کے کیراٹینوسائٹس کو UVA-شعاع زدہ نقصانات سے بچاتا ہے۔ بائیو کیم۔ فارماکول۔ 2018، 148، 130–146۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. ژانگ، پی. لیو، ڈبلیو؛ یوآن، ایکس۔ ڈھکن.؛ گو، ڈبلیو. Gao, T. Endothelin-1 MITF-GPNMB پاتھ وے کے ذریعے میلانوجینیسیس کو بڑھاتا ہے۔ BMB Rep. 2013, 46, 364–369. [کراس ریف] [پب میڈ]

15. اموکاوا، جی؛ یادا، وائی. کیمورا، ایم. انسانی میلانوسائٹس میں اینڈوتھیلین انڈسڈ مائٹوجنسیس اور میلانوجینیسیس کے سگنلنگ میکانزم۔ بائیو کیم۔ جے 1996، 314، 305-312۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

16. کم، ایچ جے؛ Yonezawa, T.; ترویا، ٹی. وو، جے ٹی؛ چا، بی وائی نوبیلیٹن، ایک پولی ایتھوکسی فللاوونائڈ، انسانی میلانوسائٹس میں اینڈوتھیلین-1 کے علاوہ ایس سی ایف کی حوصلہ افزائی پگمنٹیشن کو کم کرتا ہے۔ فوٹو کیم۔ فوٹو بائیول۔ 2015، 91، 379–386۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

17. سو، ڈبلیو. گونگ، ایل. ہدہ، ایم ایم؛ Bischof, O.; کیمپیسی، جے؛ یہ، ای ایچ؛ میڈرانو، مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر MITF پروٹین لیولز کا EE ریگولیشن یوبیوکیٹین کنجوگیٹنگ انزائم hUBC9 کے ساتھ مل کر۔ ختم سیل ریس 2000، 255، 135–143۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

18. ویلبروک، سی۔ رانا، ایس. پیٹرسن، ایچ. Pickersgill, H.; Brummelkamp, ​​T.; Marais، R. Oncogenic BRAF نسب کے مخصوص عنصر MITF کے ذریعے میلانوما کے پھیلاؤ کو منظم کرتا ہے۔ PLOS ONE 2008, 3, e2734۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

19. شیرل، PA؛ جونز، ای اے؛ فاوٹا، ایم ایف؛ Daulerio, AJ; Convington, MB; نورنبرگ، SA؛ میگولڈا، آر ایل؛ Trzaskos، MAP kinase کی JM روکنا lipopolysaccharide-stimulated monocytes میں cytokine اور prostaglandin E2 کی پیداوار کو روکتا ہے۔ J. Immunol. 1998، 161، 5681–5686۔ [پب میڈ]

20. شریففی رد، ایم. ورونی، ای ایم؛ صالحی، بی۔ شریففی رد، ج. میتھیوز، K.؛ آیت اللہ، ص؛ کوبرفرڈ، ایف۔ ابراہیم، ص؛ منیر، ڈی۔ زکریا، اے اے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. زنجیبر جینس کے پودے بایو ایکٹیو فائٹو کیمیکلز کے ماخذ کے طور پر: روایت سے فارمیسی تک۔ مالیکیولز 2017، 22، 2145۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

21. شرما، پی کے؛ سنگھ، وی. علی، M. Zingiber Officinale Roscoe کے تازہ rhizome ضروری تیل کی کیمیائی ساخت اور antimicrobial سرگرمی۔ فارماکگن۔ J. 2016, 8, 185-190. [کراس ریف]

22. نام، جے ایچ؛ Nam, DY; لی، سائیپرس روٹینڈس کے ریزوم سے DU ویلنسین جلد کی تصویر کشی سے متعلق آئن چینلز اور b16f10 میلانوما خلیوں میں UV-حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ جے نیٹ پیداوار 2016، 79، 1091–1096۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. چاو، ڈبلیو ڈبلیو؛ ایس یو، سی سی؛ پینگ، ایچ وائی؛ Chou، ST Melaleuca quinquenervia ضروری تیل B16 میلانوما خلیوں میں میلانوسائٹ حوصلہ افزائی ہارمون کی حوصلہ افزائی میلانین کی پیداوار اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو روکتا ہے۔ فائٹو میڈیسن 2017، 34، 191–201۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. ہوانگ، ہائی کورٹ؛ چانگ، ایس جے؛ وو، سی وائی؛ Ke, HJ; چانگ، ٹی ایم [6]-شوگاول ERK اور PI3K/Akt-ثالثی MITF انحطاط کے سرعت کے ذریعے MSH-حوصلہ افزائی میلانوجینیسس کو روکتا ہے۔ BioMed Res. انٹر 2014، 2014، 842569۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. D'Mello, SA; فنلے، جی جے؛ بگولی، BC؛ Askarian-Amiri، ME melanogenesis میں سگنلنگ پاتھ ویز۔ انٹر جے مول سائنس 2016، 17، 1144۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

26. ہارٹ مین، ایم ایل؛ میلانوما میں Czyz، M. MITF: اس کے اظہار اور سرگرمی کے پیچھے میکانزم۔ سیل مول لائف سائنس. 2015، 72، 1249–1260۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

27. Verastegui، C.؛ بلے، کے؛ اورٹون، جے پی؛ بیلوٹی، آر. وارڈنبرگ سنڈروم ٹائپ 4 جین، ایس او ایکس 10 کے ذریعے مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر جین کا ضابطہ۔ J. Biol کیم 2000، 275، 30757–30760۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

28. سائتو، ایچ. یاسوموتو، KI؛ تاکیدا، K.؛ تاکاہاشی، K.؛ فوکوزاکی، اے. Orikasa, S.; شیبہارا، ایس میلانوسائٹ مخصوص مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر isoform اپنے جین پروموٹر کو لیمفائیڈ بڑھانے والے فیکٹر 1 کے ساتھ جسمانی تعامل کے ذریعے متحرک کرتا ہے۔ J. Biol۔ کیم 2002، 277، 28787–28794۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

29. حق، ایم اے؛ جنتان، آئی۔ ہری کرشنن، ایچ زرمبون MyD88-منحصر NF-κB/MAPK/PI3K-Akt سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے LPS-حوصلہ افزائی U937 میکروفیجز میں سوزش کے ثالثوں کی ایکٹیویشن کو دباتا ہے۔ انٹر امیونو فارماکول۔ 2018، 55، 312–322۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

30. ہانگ، ٹی وائی؛ زینگ، ٹی ایف؛ لیو، ایس ایس؛ Liu, IM Zingiber zerumbet rhizomes کا ایتھنول ایکسٹریکٹ ذیابیطس ریٹنا میں عروقی زخموں کو کم کرتا ہے۔ واسک فارماکول۔ 2016، 76، 18-27۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

31. لم، ایس. چاند، ایم؛ اوہ، ایچ. کم، ایچ جی؛ کم، ایس وائی؛ اوہ، MS جنجر ماؤس کے ہپپوکیمپس میں NGF-حوصلہ افزائی ERK/CREB ایکٹیویشن کے ذریعے علمی فعل کو بہتر بناتا ہے۔ جے نٹر بائیو کیم۔ 2014، 25، 1058–1065۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

32. لی، ایم ایچ؛ کم، ایس ایچ؛ Ryu, SR; لی، پی. Moon, C. THP-1 سیل ایکٹیویشن پر زرمبون کے اثرات کو بڑھانا۔ کوریائی جے کلین۔ لیب سائنس 2017، 49، 1–7۔ [کراس ریف]

33. سیگر، آر. کربس، ای جی ایم اے پی کے سگنلنگ جھرن۔ FASEB J. 1995, 9, 726–735. [کراس ریف] [پب میڈ]

34. ڈریرا، آر. Sakamoto, K. Isosakuranetin، ایک 40 -O-methylated flflavonoid، B16BL6 murine melanoma خلیات میں melanogenesis کو متحرک کرتا ہے۔ لائف سائنس. 2015، 143، 43–49۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

35. ژانگ، ایس. لیو، Q. لیو، وائی؛ Qiao, H.; Liu, Y. Zerumbone، ایک جنوبی ایشیائی ادرک sesquiterpene، p53 سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے لبلبے کے کارسنوما خلیوں کے apoptosis کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ ایوڈ پر مبنی تکمیل۔ متبادل میڈ. 2012، 2012، 936030۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

36. دیوروکھکر، اے. آہوجا، این. Mercado, AL; Diagaradjane، P.؛ راجو، یو۔ پٹیل، این. موہندرا، پی. ڈیپ، این. گوہا، ایس. کرشنن، ایس زرمبون ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان کو بڑھانے اور کولوریکٹل کینسر کے خلیوں کو تابکاری کے لیے حساس بنانے کے لیے تھیول پر منحصر ROS سے آزادانہ انداز میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو بڑھاتا ہے۔ کینسر میڈ. 2015، 4، 278–292۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

37. ژانگ، جے؛ وانگ، ایکس؛ وکاش، وی. ہاں، Q. وو، ڈی۔ لیو، وائی؛ ڈونگ، ڈبلیو آر او ایس اور آر او ایس میڈیٹڈ سیلولر سگنلنگ۔ آکسائڈ میڈ سیل لانگیو۔ 2016، 4350965۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

38. چن، BY؛ لن، ڈی پی؛ وو، سی وائی؛ ٹینگ، ایم سی؛ سورج، سی وائی؛ Tsai, YT; Su, KC; وانگ، ایس آر؛ چانگ، ایچ ایچ ڈائیٹری زرمبون NF-κB، iNOS، اور TNF اظہار کی روک تھام اور MDA کے جمع ہونے میں کمی کے ذریعے UVB-حوصلہ افزائی فوٹوکیریٹائٹس سے ماؤس کورینا کو روکتا ہے۔ مول Vis. 2011، 17، 854–863۔ [پب میڈ]

39. رومیرو-گریلیٹ، سی۔ ابرڈیم، ای. کلیمنٹ، ایم؛ اورٹون، جے پی؛ Ballotti, R. الٹرا وائلٹ شعاع ریزی کیراٹینوسائٹس کے ذریعہ تیار کردہ نائٹرک آکسائڈ میلانوجینیسیس کو متحرک کرتا ہے۔ جے کلین سرمایہ کاری کریں۔ 1997، 99، 635-642۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

40. لاسل، میگاواٹ؛ Igarashi, S.; ساساکی، ایم. Wakamatsu, K.; Ito, S.; Horikoshi, T. مہذب انسانی میلانوسائٹس میں eumelanin اور pheomelanin کی پیداوار پر melanogenesis inducing نائٹرک آکسائیڈ اور histamine کے اثرات۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2003، 16، 81–84۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

41. سلیمان، ایم آر؛ پیریمل، ای کے؛ اختر، ایم این؛ محمد، ع؛ خالد، MH; تسریپ، این اے؛ مختار، ایف۔ زکریا، زیڈ اے؛ لاجیس، این ایچ؛ اسراف، DA چوہوں میں شدید اور دائمی سوزش کے ماڈلز پر زرمبون کا اینٹی سوزش اثر۔ Fitoterapia 2010, 81, 855–858. [کراس ریف] [پب میڈ]

42. قادر، جی؛ نکون، ایف. راشد، ایم اے؛ یاسمین، T. زنگیبر زرمبیٹ لن کے ریزوم ایکسٹریکٹ کی اینٹی مائکروبیل سرگرمیاں۔ ایشیائی پیک۔ جے ٹراپ بایومیڈ 2011، 1، 409–412۔ [کراس ریف]

43. حبشہ، ایم. امران، ایم. میکین، ایم ایم؛ لاجیس، این ایچ؛ کیکوزاکی، ایچ۔ نکاتانی، این۔ رحمن، اے اے؛ علی، اینٹی مائکروبیل اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کے لیے زنگیبیراسی کے عرقوں کی AM اسکریننگ۔ J. Ethnopharmacol 2000، 72، 403–410۔ [کراس ریف]

44. تیوترکول، ایس. Subhadhirasakul, S. Zingiberaceae خاندان میں کچھ منتخب پودوں کی اینٹی الرجک سرگرمی۔ J. Ethnopharmacol 2007، 109، 535–538۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501