خلاصہ:Quercetin اس کے مخالف الزائمر کی بیماری (AD) اور عمر رسیدہ اثرات کے لیے بڑے پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعے سے پتہ چلا ہے کہ quercetin اور اس کے glycoside کی شکل میں، rutin، نیوروبلاسٹوما خلیوں میں پروٹیزوم فنکشن کو ماڈیول کر سکتا ہے۔ ہمارا مقصد دماغ کے انٹرا سیلولر ریڈوکس ہومیوسٹاسس پر quercetin اور rutin کے اثرات کو تلاش کرنا تھا (کم گلوٹاتھیون/آکسیڈائزڈ گلوٹاتھیون، GSH/GSSG)، اس کا -site APP کلیونگ انزائم 1 (BACE1) سرگرمی، اور amyloid precursor پروٹین (APP) سے تعلق۔ ٹرانسجینک TgAPP چوہوں میں اظہار (انسانی سویڈش اتپریورتن APP transgene، APPswe)۔ اس بنیاد پر کہ BACE1 پروٹین اور اے پی پی پروسیسنگ کو ubiquitin – پروٹیزوم پاتھ وے کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے اور GSH کے ساتھ ضمیمہ نیورونز کو پروٹیزوم کی روک تھام سے بچاتا ہے، ہم نے تحقیق کی کہ آیا quercetin یا rutin پر مشتمل خوراک (30 mg/kg/day، 4 ہفتے) کئی چیزوں کو کم کرتی ہے۔ AD کی ابتدائی علامات پی سی آر کے ذریعہ جانوروں کے جینی ٹائپنگ کے تجزیے کیے گئے۔ انٹرا سیلولر ریڈوکس ہومیوسٹاسس کا تعین کرنے کے لیے، O-phthalaldehyde کا استعمال کرتے ہوئے GSH اور GSSG کی سطحوں کی مقدار درست کرنے کے لیے spectrofluorometric طریقے اپنائے گئے، اور GSH/GSSG تناسب کا پتہ لگایا گیا۔ ٹی بی اے آر ایس کی سطح لپڈ پیرو آکسائڈریشن کے مارکر کے طور پر طے کی گئی تھی۔ SOD، CAT، GR، اور GPx کی انزائم سرگرمیاں کارٹیکس اور ہپپوکیمپس میں طے کی گئیں۔ BACE1 کی سرگرمی کو دو رپورٹر مالیکیولز (EDANS اور DABCYL) کے ساتھ جوڑنے والے سیکریٹیز سے متعلق مخصوص سبسٹریٹ کے ذریعہ ماپا گیا تھا۔ اہم اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کا جین اظہار: APP، BACE1، ایک Disintegrin اور metalloproteinase ڈومین پر مشتمل پروٹین 10 (ADAM10)، کیسپیس-3، کیسپیس-6، اور سوزش والی سائٹوکائنز کا تعین RT-PCR کے ذریعے کیا گیا تھا۔ سب سے پہلے، TgAPP چوہوں میں APPswe کی زیادہ کارکردگی سے GSH/GSSG تناسب میں کمی واقع ہوئی، میلونالڈہائیڈ (MDA) کی سطح میں اضافہ ہوا، اور مجموعی طور پر، جنگلی قسم (WT) چوہوں کے مقابلے میں اہم اینٹی آکسیڈینٹ انزائم سرگرمیوں میں کمی واقع ہوئی۔ quercetin یا rutin کے ساتھ TgAPP چوہوں کے علاج نے GSH/GSSG میں اضافہ کیا، MDA کی سطح کو کم کیا، اور خاص طور پر روٹین کے ساتھ انزائم اینٹی آکسیڈینٹ کی صلاحیت کو فروغ دیا۔ دوم ، TgAPP چوہوں میں quercetin یا rutin کے ساتھ APP اظہار اور BACE1 سرگرمی دونوں کو کم کیا گیا تھا۔ ADAM10 کے بارے میں، یہ TgAPP چوہوں میں rutin علاج کے ساتھ بڑھنے کا رجحان رکھتا ہے۔ جہاں تک caspase{21}} اظہار کا تعلق ہے، TgAPP نے ایک اضافہ دکھایا جو rutin کے برعکس تھا۔ آخر میں، TgAPP چوہوں میں سوزش مارکر IL-1 اور IFN- کے اظہار میں اضافے کو quercetin اور rutin دونوں نے کم کیا۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ، دو فلیوونائڈز میں سے، روٹین کو AD میں ضمنی تھراپی کی ایک شکل کے طور پر روزانہ کی خوراک میں شامل کیا جا سکتا ہے۔

Antioxidant Cistanche Chemist Warehouse پر کلک کریں۔

【مزید معلومات کے لیے:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

مطلوبہ الفاظ:quercetin؛ rutin glutathione؛ APPswe; BACE1; ایک دماغی مرض کا نام ہے

1. تعارف

علمی فعل میں کمی ایک بنیادی طبی نیوروڈیجنریشن کی علامت ہے جس کا تعلق عمر سے سختی سے ہے [1]۔ عمر سے وابستہ علمی زوال پر غذائیت کا اثر ایک تیزی سے بڑھتا ہوا موضوع ہے، کیونکہ یہ ایک اہم عنصر ہے جس میں آسانی سے ترمیم کی جا سکتی ہے۔ علمی زوال کے دوران مشاہدہ شدہ دماغ میں پیتھولوجیکل تبدیلیاں کسی بھی طبی ظہور سے پہلے اچھی طرح سے ہوتی ہیں، جو زیادہ تر بڑھاپے میں ہوتی ہیں۔ یہ عمر سے متعلق علمی کمی اور ڈیمنشیا سے متعلق روک تھام کی حکمت عملیوں کو قائم کرنے کے لیے ایک طویل مدت فراہم کرتا ہے، جو کہ صحت عامہ کی ایک بڑی تشویش ہے [2]۔ کئی سالوں سے، روزانہ کی خوراک میں پائے جانے والے قدرتی مادّہ کے مرکبات پر گہرائی سے تحقیق کی جاتی رہی ہے، جو علم کو بڑھانے والی تھراپی پر کی جاتی رہی ہے [3]۔

عمر سے متعلق سب سے عام نیوروڈیجینریٹو بیماریوں میں سے ایک الزائمر کی بیماری (AD) ہے، جس کی خصوصیات دو نیوروپیتھولوجیکل ہالمارکس ہیں: امائلائیڈ- (A) تختی اور نیوروفائبریلری ٹینگلز۔ جانوروں پر تحقیق کے لحاظ سے، جانوروں کے ماڈل A پیشگی پروٹین (اے پی پی) میں ترمیم کرکے AD کے اسیمپٹومیٹک مرحلے کی تقلید کر سکتے ہیں، مثال کے طور پر [4,5]۔

قابل ذکر بات یہ ہے کہ متعدد حیاتیاتی فائٹو کیمیکلز جو مختلف صحت کے فوائد سے وابستہ پودوں سے حاصل کیے گئے ہیں اور بہت سی بیماریوں کے خطرے میں کمی کو امائلائیڈ- (A) پیپٹائڈ [3] کے ساتھ غیر ہم آہنگ کمپلیکس بنانے کے لیے اسکرین کیا گیا ہے۔

اگرچہ متعدد روایتی ادویات اور قدرتی غذائی مصنوعات نے AD پیتھالوجی کے تخفیف کی طرف بڑی پیشرفت دکھائی ہے، لیکن ہم AD جانوروں کے ماڈلز کی حدود سے پوری طرح واقف ہیں، کیونکہ ان مادوں کے امید افزا اثرات انسانی مطالعات میں ہمیشہ نقل نہیں ہوتے ہیں [6]۔ تاہم، انسانوں میں دماغی بافتوں کا تجزیہ کرنے میں دشواری کی وجہ سے، خاص طور پر ترقی کے بہت ابتدائی مراحل میں، چوہا ماڈلز میں مطالعہ ضروری ہے۔ نتیجے کے طور پر، یہ تجرباتی ماڈل روایتی ادویات اور محفوظ قدرتی مرکبات سے صارف ایجنٹوں کی نشوونما میں مدد کر سکتے ہیں تاکہ نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے بڑھنے میں تاخیر ہو سکے۔ اس طرح، بیماری سے بچاؤ اور AD کے خطرے سے تحفظ کے لیے، روزانہ کی خوراک میں پائے جانے والے قدرتی مرکبات کی جانچ ترجیح ہونی چاہیے۔

ان اہم غذائی قدرتی ایجنٹوں میں quercetin ہے، جو کئی پھلوں اور سبزیوں میں اہم پولی فینولک فلیوونائڈ ہے [7]۔ Quercetin بنیادی طور پر اس کے glycoside شکل میں موجود ہے، یعنی، rutin. اس کے حصے کے لیے، rutin (quercetin-3-O-rutinoside) نے مختلف سیلولر فنکشنز پر گہرے اثرات دکھائے ہیں جو کئی پیتھولوجیکل حالات، یعنی antimicrobial، anticarcinogenic، antithrombotic، cardioprotective، اور neuroprotective ہیں۔ یہ فارماسولوجیکل اثرات بنیادی طور پر روٹین کی سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں سے وابستہ ہیں۔ خون – دماغی رکاوٹ، اور/یا اس کے میٹابولائٹس کو عبور کرنے کی صلاحیت کی وجہ سے، یہ ثابت کیا گیا ہے کہ روٹین نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے علمی اور طرز عمل دونوں علامات کو تبدیل کر سکتا ہے [8]۔

ہمارے پچھلے مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ دونوں فلیوونائڈز، کوئرسیٹن، اور روٹین، نیوروبلاسٹوما کے خلیوں میں پروٹیزوم افعال کی ماڈیولیشن سے منسلک سگنلنگ کے مختلف راستوں اور مالیکیولر نیٹ ورکس کو متاثر کرتے ہیں [9]۔ اس کے علاوہ، یہ بھی ظاہر کیا گیا ہے کہ BACE1 ایکسپریشن اور اے پی پی پروسیسنگ کو ubiquitin – پروٹیزوم پاتھ وے [10] کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے اور یہ کہ کم گلوٹاتھیون (GSH) کے ساتھ ضمیمہ نیوران کو پروٹیزوم روکنا [11] سے محفوظ رکھتا ہے۔ دماغ میں جی ایس ایچ کی کمی نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کے مریضوں میں ایک عام بات ہے، جیسے کہ AD، اور بیماری شروع ہونے سے پہلے نیوروڈیجنریشن کا سبب بن سکتی ہے [12]۔ BACE1 کا ہر وقت ہونا اور ubiquitin–proteasome پاتھ وے کو مسدود کرنا BACE1 کے انحطاط کو روکتا ہے اور اس کے نتیجے میں، BACE1 انزیمیٹک سرگرمی کی پیداوار میں اضافہ ہوتا ہے [10]۔

ان نتائج کی بنیاد پر، اور یہ کہ غذائی عادات اور ضمیمہ سیلولر ریڈوکس کی حیثیت کو متاثر کر سکتا ہے، ہمارا مقصد دماغ کے انٹرا سیلولر ریڈوکس ہومیوسٹاسس (GSH/GSSG) پر quercetin یا rutin پر مشتمل غذا کے اثرات کو تلاش کرنا تھا، اس کا BACE1 سرگرمی سے تعلق، اور AD کے چوہوں کے ماڈلز میں اے پی پی اظہار (انسانی سویڈش اتپریورتن Amyloid Precursor Protein APP transgene، APPswe)۔

آخر میں، جیسا کہ مخصوص علمی ڈومینز اور/یا MRI نتائج کو بہتر بنانے میں flavonoid سپلیمنٹیشنز کے اثر کے قائل ثبوت موجود ہیں، ہم نے جانوروں میں، ایک صحت مند غذا فراہم کر کے مداخلت کی نقل کرنے کی کوشش کی جس میں ایک خاص ممکنہ فعال کی اعتدال پسند مقدار موجود ہو۔ AD مارکر کے اظہار کو روکنے کے لئے ایک مؤثر حکمت عملی کے طور پر جزو (quercetin یا rutin)۔

2. نتائج

2.1 چوہوں کی جین ٹائپنگ

TgAPP ماؤس کالونی ہماری لیبارٹری میں Tg2576 heterozygous مرد اور جنگلی قسم کی خواتین سے تیار کی گئی تھی۔ ٹرانسجینک افراد کا پتہ لگانے کے لیے چوہوں کی جین ٹائپنگ کی گئی۔ جانچے گئے تمام چوہوں میں سے تقریباً 40 فیصد ٹرانسجینک (TgAPP) پائے گئے۔

حاصل کردہ PCR مصنوعات کو الیکٹروفورسس کے ذریعے 1.5 فیصد ایگرز جیلوں میں 0.5X TBE (Tris-Borate-EDTA) بفر میں 70 V (مستقل وولٹیج) پر الگ کیا گیا تھا اور پھر جیلریڈ (ملی پور) سے داغ لگا کر تصویر کشی کی گئی تھی۔ ٹرانسجینک اور ڈبلیو ٹی چوہوں دونوں کے لئے امپلیفیکیشن پروفائل شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔

2.2 گلوٹاتھیون

ٹی جی اے پی پی چوہوں میں نیورانوں میں انٹرا سیلولر ریڈوکس ہومیوسٹاسس کا اندازہ کرنے کے لئے، جی ایس ایچ اور جی ایس ایس جی کی سطح کو مقدار میں طے کیا گیا تھا، اور جی ایس ایچ / جی ایس ایس جی تناسب کو مرد اور خواتین دونوں میں سیلولر کم کرنے والی طاقت کے مارکر کے طور پر مقرر کیا گیا تھا (شکل 2)۔

Glutathione نظام پر ٹرانسجن کے اثر کے جائزے میں، WT جانوروں سے متعلق TgAPP چوہوں میں سیلولر کم کرنے والی طاقت (GSH/GSSG) میں کمی دیکھی گئی، نر اور مادہ اور دماغ کے دونوں حصوں میں (شکل 2C3، H3)، خاص طور پر ہپپوکیمپس میں۔ WT اور TgAPP چوہوں دونوں میں، GSH/GSSG تناسب عورتوں کے مقابلے مردوں میں نمایاں طور پر کم تھا (شکل 2C3، H3؛ p < 0.05)۔ جب کہ TgAPP خواتین میں یہ کمی GSH کی کم سطح (شکل 2C1, H1) کا نتیجہ ہے، TgAPP مردوں میں یہ زیادہ تر GSSG کی سطح میں اضافے سے منسوب ہے (شکل 2C2، H2)۔

ٹی جی اے پی پی چوہوں کے جی ایس ایچ اور جی ایس ایس جی کی سطح میں تبدیلیاں، بالترتیب، quercetin یا rutin کے علاج پر، خواتین کے مقابلے مردوں میں زیادہ نمایاں ہیں۔ ایسا لگتا ہے کہ quercetin GSH کی سطح کو بڑھاتا ہے (Figure 2C1, H1; p < 0.05) اور Rutin GSSG کی سطح کو کم کرتا ہے (شکل 2C2, H2; p <0.05)۔

Quercetin اور rutin کے علاج، نر اور مادہ دونوں میں، ہپپوکیمپس (شکل 2H3) میں GSH/GSSG کے تناسب میں گرنے کو ریورس کرنے کے قابل تھے جہاں غیر علاج شدہ TgAPP چوہوں کے مقابلے میں ریڈوکس پاور کی بازیابی اہم تھی۔ مردوں میں، اس انڈیکس نے ہپپوکیمپس (H3) میں WT چوہوں کی طرح کی قدریں حاصل کیں۔ خواتین میں، اگرچہ یہ تناسب WT چوہوں کے مقابلے میں نہیں بڑھایا جاتا ہے، quercetin اور rutin کے ساتھ علاج نے TgAPP چوہوں کے مقابلے میں ان کے ہپپوکیمپی (H3: quercetin، p < 0 کے مقابلے میں اس میں نمایاں اضافہ کیا ہے۔ 6}}01؛ روٹین، صفحہ <0.05)۔

2.3 تھیوباربیٹورک ایسڈ ری ایکٹیو مادہ (ٹی بی اے آرز)

ٹی بی اے آر کی سطح لپڈ پیرو آکسائڈریشن کے مارکر کے طور پر طے کی گئی تھی۔ انشانکن منحنی خطوط کا استعمال کرتے ہوئے، نتائج کو میلونڈیالڈہائڈ (ایم ڈی اے) حراستی (شکل 3) کے طور پر ظاہر کیا گیا۔

اے پی پی کے اوور ایکسپریشن کے بعد، ڈبلیو ٹی چوہوں کے مقابلے میں ایم ڈی اے کی سطح میں نمایاں اضافہ دونوں پرانتستا (فگر 3 سی) اور ہپپوکیمپس (فگر 3 ایچ) اور نر اور مادہ دونوں میں دیکھا گیا (p < 0.001) .

TgAPP خواتین میں، quercetin اور rutin دونوں علاج نے MDA کی سطح کو تقریباً WT چوہوں کی طرح بحال کر دیا (شکل 3C، H)۔ TgAPP مردوں میں، اسی طرح، quercetin اور rutin دونوں علاج MDA کی سطح کو اسی طرح بحال کرتے ہیں جیسے پرانتستا میں WT چوہوں کی ہوتی ہے (شکل 3C) اور ہپپوکیمپس (شکل 3H) میں اور بھی کم ہو جاتی ہے۔ WT اور TgAPP دونوں چوہوں میں، علاج نہ کیے جانے والے اور flavonoid غذا سے علاج کیے جانے والے، MDA کی سطح جنسی پر منحصر تھی (شکل 3C، H؛ p < 0.05)، سوائے ہپپوکیمپس میں quercetin سے علاج شدہ TgAPP چوہوں کے۔

2.4 انزائم کی سرگرمی اور اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کا اظہار

اس بات کا پتہ لگانے کے لئے کہ آیا انزیمیٹک سرگرمی کا ضابطہ یا اہم اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کے جین اظہار، یا دونوں، ایک quercetin یا rutin غذا پر ہوتا ہے، enzymatic سرگرمی اور mRNA کی سطح کا تعین کیا گیا تھا۔

شکل 4 SOD، CAT، GR، اور GPx کی انزائم سرگرمیاں دکھاتی ہے، جو مادہ اور نر چوہوں میں، دماغی پرانتستا (شکل 4a) اور ہپپوکیمپس (شکل 4b) میں طے ہوتی ہے۔

اے پی پی اوور ایکسپریشن کے نتیجے کے طور پر، دونوں پرانتستا میں WT چوہوں کے مقابلے TgAPP چوہوں میں صرف CAT سرگرمی میں نمایاں کمی دیکھی گئی (شکل 4a(C2)؛ p < 0۔{6}}5) اور ہپپوکیمپس (شکل 4b(H2)؛ p <0.05)۔

Quercetin کے علاج نے TgAPP چوہوں کے مقابلے میں انزائم کی سرگرمیوں میں کوئی خاص تغیر پیدا نہیں کیا، مردوں یا عورتوں میں، دماغی علاقوں میں مطالعہ کیا گیا۔ اس کے برعکس، روٹین کے ساتھ علاج کیے جانے والے جانوروں نے پرانتستا (فگر 4a(C2)) اور ہپپوکیمپس (فگر 4b(H3)) میں نر اور مادہ دونوں میں (p < 0) میں CAT سرگرمی میں اضافہ دیکھا۔ .05)۔ مزید یہ کہ، روٹین نے TgAPP مردوں میں ہپپوکیمپل CAT کی سرگرمی میں اضافہ کیا (شکل 4b (H2)) اور خواتین میں GPx سرگرمی (شکل 4b (H4))۔

شکل 5 دماغی پرانتستا (شکل 5a) اور ہپپوکیمپس (شکل 5b) میں مادہ اور نر چوہوں میں متعین مرکزی اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، SOD، CAT، GR، اور GPx کے جین اظہار کو ظاہر کرتی ہے۔

TgAPP اور WT چوہوں کے درمیان جین کے اظہار میں کوئی فرق اہم اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز (شکل 5a، b) کے لیے نہیں دیکھا جاتا۔ روٹین کے ساتھ علاج کیے جانے والے TgAPP مردوں نے ہپپوکیمپس (شکل 5b(H2)) میں CAT کے اظہار میں نمایاں اضافہ دکھایا۔ جہاں تک ہپپوکیمپل GPx کا تعلق ہے، CAT سے ملتا جلتا نمونہ دیکھا گیا، حالانکہ اضافہ اہم نہیں تھا (شکل 5b(H4))۔

2.5 اے پی پی پروسیسنگ: BACE1 اور ADAM10

مردوں اور عورتوں میں دماغی پرانتستا اور ہپپوکیمپس دونوں میں BACE1 انزائم کی سرگرمی کے نتائج کو شکل 6 میں دکھایا گیا ہے، جس کا اظہار علاج نہ کیے جانے والے TgAPP چوہوں سے متعلق سرگرمی کے فیصد کے طور پر کیا گیا ہے۔

شکل 6 میں، TgAPP چوہوں میں BACE1 انزائم کی سرگرمی میں WT چوہوں کے مقابلے میں تقریباً 10 فیصد اضافہ پایا گیا، دماغ کے دونوں حصوں میں زیر تفتیش اور دونوں جنسوں میں، اور اعدادوشمار کے لحاظ سے اہم پایا گیا (p <0.05)۔

ٹرانسجینک چوہوں میں مشاہدہ کی گئی سرگرمی میں اضافہ quercetin اور rutin کے علاج سے، دونوں پرانتستا اور ہپپوکیمپس میں کم ہوا۔ اس کے باوجود، یہ اب بھی نوٹ کیا جا سکتا ہے کہ rutin کا ​​اثر مردوں میں quercetin کے مقابلے میں قدرے زیادہ تھا۔

BACE1 کی سرگرمی معلوم ہونے کے بعد، ہم نے APP کے جین ایکسپریشن اسٹڈی کو انجام دینے کا فیصلہ کیا، جو کہ ٹرانسجینک جانوروں کے ماڈل کی اہم خصوصیت ہے، اور اس کے اہم پروسیسنگ انزائمز: BACE1 اور ADAM10۔ شکل 7 خواتین اور نر چوہوں میں حاصل کردہ نتائج کو ظاہر کرتی ہے، دونوں پرانتستا اور ہپپوکیمپس میں۔

دونوں جنسوں میں، WT چوہوں کے بارے میں 85 فیصد سے زیادہ اے پی پی کے اظہار میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا، جو دماغی پرانتستا میں دونوں جین کے زیادہ اظہار کو ظاہر کرتا ہے (شکل 7C1؛ p < 0 05) اور ہپپوکیمپس میں (شکل 7H1؛ p < 0.05)۔ quercetin اور rutin کے ساتھ علاج اس اظہار کو 45 فیصد (p <0.05) سے زیادہ کم کرنے میں کامیاب رہا نر اور مادہ دونوں چوہوں کے لیے دماغی دونوں علاقوں میں زیر تفتیش (شکل 7C1، H1)، جس کے اثرات ہپپوکیمپس میں زیادہ نمایاں ہوتے ہیں۔ شکل 7H1)۔

جہاں تک BACE1 پروٹین ایکسپریشن کا تعلق ہے، اگرچہ BACE1 سرگرمی کو تبدیل کر دیا گیا تھا، ٹرانسجینک اور غیر ٹرانسجینک چوہوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا قطع نظر اس کے کہ جنس اور فلیوونائڈ علاج کی جانچ کی گئی۔

اس طرح، ہم نے اے پی پی کی نان امائلائیڈوجینک پروسیسنگ میں شامل ADAM10 اظہار کا جائزہ لیا۔ اگرچہ WT چوہوں کے مقابلے TgAPP چوہوں میں ADAM10 کے اظہار میں تبدیلیاں اعدادوشمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھیں، لیکن اس میں معمولی کمی دیکھی گئی۔ flavonoid علاج کے بارے میں، Rutin نے ADAM10 اظہار میں بڑھتے ہوئے رجحان کو ظاہر کیا، مردوں اور عورتوں دونوں میں اور دماغ کے دونوں حصوں میں (شکل 7C3، H3)۔

【مزید معلومات کے لیے:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】