ایکٹیوسائیڈ پرائمری ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لیے ممکنہ علاج کے آپشن کے طور پر: ایک طبی مطالعہ

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

دی ما، جوآن وانگ، لو لیو، میکی چن اور زیونگ وانگ

خلاصہ

پس منظر: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (HCC) ایک عام مہلک ٹیومر ہے جس میں خراب تشخیص، زیادہ بیماری اور دنیا بھر میں اموات کی خصوصیات ہیں۔ خاص طور پر، ایچ سی سی کے اعلیٰ درجے کے مریضوں کے لیے صرف چند سیسٹیمیٹک علاج کے اختیارات دستیاب ہیں اور ان میں صرافینیب اور حال ہی میں بیان کردہ ایٹیزولیزوماب پلس بیواسیزوماب ریگیمین ممکنہ پہلی لائن کے علاج کے طور پر شامل ہیں۔ ہم یہاں ایکٹیوسائیڈ کی تجویز پیش کرتے ہیں، ایک فینائلیتھانوائڈ گلائکوسائیڈ جو کہ بہت سے دواؤں کے پودوں میں بڑے پیمانے پر تقسیم کیا جاتا ہے بطور ایڈوانسڈ HCC کے خلاف ممکنہ امیدوار۔

طریقے: سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، اور منتقلی کا تین انسانی HCC سیل لائنوں BEL7404، HLF اور JHH-7 میں تجزیہ کیا گیا۔ انجیوجینیسیس پرکھ HUVESs کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ BEL7404 یا JHH-7 xenograft عریاں چوہوں کا ماڈل ایکٹیوسائیڈ کے ممکنہ اینٹیٹیمر اثرات کا تجزیہ کرنے کے لیے قائم کیا گیا تھا۔ ایکٹیوسائڈ کے ممکنہ اینٹیٹیمر میکانزم کو ظاہر کرنے کے لئے کیو آر ٹی-پی سی آر اور ویسٹرن بلوٹنگ کا استعمال کیا گیا تھا۔

نتائج:cistanche سے Acteosideتینوں انسانی HCC سیل لائنوں BEL7404، HLF اور JHH-7 میں سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، اور منتقلی کو روکتا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کے ذریعہ انجیوجینیسیس کی ممانعت ٹیوب کی تشکیل اور HUVECs کے خلیوں کی منتقلی کی روک تھام سے ظاہر ہوئی۔ ایکٹیوسائیڈ اور صرافینیب کے امتزاج نے سیل کالونی کی تشکیل اور HCC خلیوں کی منتقلی کے ساتھ ساتھ HUVECs کی انجیوجینیسیس کو مضبوط روک دیا۔ ایکٹیوسائیڈ کی ویوو اینٹی ٹیومر افادیت کو مزید BEL7404 یا JHH-7 xenograft کے عریاں چوہوں کے ماڈل میں ظاہر کیا گیا، جس میں اضافہ کے ساتھ صرافینیب کے ساتھ مل کر JHH-7 xenograft کی نشوونما کو روکنا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ JHH-7 خلیوں کے مزید علاج سے ٹیومر کو دبانے والے پروٹین p53 کی سطح میں اضافے کے ساتھ ساتھ کالیکرین سے متعلق پیپٹائڈیس (KLK1, 2, 4, 9, اور 10) جین کی سطح میں کمی کا انکشاف ہوا جس میں کوئی خاص اہمیت نہیں ہے۔ باقی KLK1-15 جینوں کی تبدیلیاں۔

نتیجہ:cistanche سے Acteosideممکنہ طور پر اس کے p53 کی سطح کے اپ ریگولیشن کے ساتھ ساتھ KLK اظہار اور انجیوجینیسیس کی روک تھام کے ذریعے اینٹی ٹیومر اثر ڈالتا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کلینک میں اعلی درجے کی ایچ سی سی کے علاج میں معاون کے طور پر کارآمد ثابت ہوسکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: Acteoside, Hepatocellular carcinoma, Sorafenib, Xenograft, p53, Kallikrein

پس منظر

ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (HCC) ایک عام مہلک ٹیومر ہے جس میں خراب تشخیص اور دنیا بھر میں اعلی بیماری اور اموات کی خصوصیات ہیں [1، 2]۔ ایچ سی سی کے ہونے اور بڑھنے میں کردار ادا کرنے کے لیے مختلف عوامل کی نشاندہی کی گئی ہے، جن میں ہیپاٹائٹس بی یا سی وائرس کا انفیکشن، ٹیومر دبانے والے جینز جیسے p53 کا غیر فعال ہونا، کے-راس جیسے آنکوجینز کا غیر معمولی فعال ہونا، اور کچھ سگنلنگ مالیکیولز شامل ہیں۔ جیسے PI3K، ERK/MAPK، اور Wnt/ -catenin نیز میزبان مدافعتی نظام کی چوری [3, 4]۔ ایچ سی سی کے انتظام کے لیے، ریسیکشن، لیور ٹرانسپلانٹیشن اور ریڈیو فریکونسی ایبلیشن ابتدائی مرحلے کے ایچ سی سی کے مریضوں کے لیے اختیارات ہیں، پھر بھی تکرار اور میٹاسٹیسیس کی اعلی شرح کے ساتھ [3، 5، 6]۔ اس کے علاوہ، ایچ سی سی کے اعلیٰ درجے کے مریضوں کے لیے صرف چند سیسٹیمیٹک علاج کے اختیارات دستیاب ہیں اور ان میں صرافینیب اور حال ہی میں بیان کردہ atezolizumab plus bevacizumab regimen کو ممکنہ پہلی لائن کے علاج کے طور پر شامل کیا گیا ہے [7]۔ اس تناظر میں، یہ اہمیت اور دلچسپی کا حامل ہے کہ یا تو ایک سے زیادہ مالیکیولر اہداف کو نشانہ بنانے والے نئے ایجنٹوں کو تیار کیا جائے یا ایک نئی حکمت عملی ترتیب دی جائے جیسے کہ جدید HCC کے علاج میں مشترکہ تھراپی کا اطلاق۔

cistanche سے Acteosideایک phenylethanoid glycoside ہے جو بہت سے دواؤں کے پودوں میں وسیع پیمانے پر تقسیم کیا جاتا ہے، بشمول Ligustrum purpurascens [8]، Rehmannia glutinosa [9]، اور Ligustrum purpurascens [10]۔ بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ ایکٹیوسائیڈ مختلف حیاتیاتی سرگرمیاں انجام دے سکتا ہے، بشمول اس کی اینٹیٹیمر سرگرمی۔ مثال کے طور پر، ایکٹیوسائیڈ نے پروسٹیٹک کینسر کے خلیات پر مضبوط antiproliferative اثرات دکھائے [11]۔ میلانوما ماؤس ماڈل میں ممکنہ طور پر پروٹین کناز سی کو روکنے کے ذریعے ایکٹیوسائڈ کو دبانے والے ٹیومر کی نشوونما کی انٹرا پیریٹونیئل ترسیل [12]۔ اس کے علاوہ، ایکٹیوسائیڈ نے PI3K/Akt سگنلنگ [13] کو نشانہ بنانے کے ذریعے کولوریکٹل کینسر کے خلیات کی حساسیت کو 5- فلوروراسل تک پہنچایا۔ ہمارے پچھلے اعداد و شمار نے B16 میلانوما خلیوں میں ایکٹیوسائیڈ کے ذریعہ میلانوجینیسیس کی روک تھام کو بھی دکھایا ہے [14]۔ اس کے باوجود، ایچ سی سی کے علاج میں ایکٹیوسائیڈ کی ممکنہ افادیت اور ممکنہ بنیادی میکانزم کے بارے میں بہت کم معلومات دستیاب ہیں۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم نے دکھایا ہے کہcistanche سے Acteosideتینوں انسانی HCC سیل لائنوں BEL7404، HLF اور JHH7 میں سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، اور ہجرت کو روکتا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ علاج کے بعد انجیوجینیسیس کو بھی روکا جاتا ہے، جیسا کہ ٹیوب کی تشکیل اور HUVECs کی سیل کی منتقلی کی روک تھام سے ظاہر ہوتا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کی ویوو اینٹی ٹیومر افادیت کو مزید BEL7404 یا JHH-7 xenograft کے عریاں چوہوں کے ماڈل میں ظاہر کیا گیا ہے، جس میں اضافہ کے ساتھ صرافینیب کے ساتھ مل کر JHH-7 xenograft کی نشوونما کو روکنا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ کے اینٹی ٹیومر اثرات اس کے p53 کے اپ ریگولیشن کے ساتھ ساتھ KLKs اور انجیوجینیسیس کو دبانے سے بھی منسوب ہوسکتے ہیں۔

طریقے

سیل کلچر

ہیومن ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (HCC) سیل لائنز BEL7404، HLF، اور JHH7 امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن سے حاصل کیے گئے تھے اور انہیں معمول کے مطابق DMEM میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم 100 یونٹس/ملی لیٹر پینسلن/ملی لیٹر پینسلن/ملی سیرم کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تھا۔ 5 فیصد کاربن ڈائی آکسائیڈ کے ساتھ 37 ڈگری پر مرطوب انکیوبیٹر میں۔ انسانی نال کے انڈوتھیلیل سیل (HUVECs) کو انسانی نال کی رگوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا (سائنس سیل ریسرچ لیبارٹریز، سان ڈیاگو، USA کے ذریعہ فراہم کردہ) اور ایک اینڈوتھیلیل سیل میڈیم میں برقرار رکھا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15]۔

ری ایجنٹسcistanche سے Acteoside (اے صرافینیب سیلیک کیمیکلز (ہیوسٹن، امریکہ) سے حاصل کیا گیا تھا۔ ہم نے ایکٹیوسائیڈ کو 0.9 فیصد نمکین میں تحلیل کیا۔ صرافینیب کا سٹاک محلول ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO؛ 10 mM) میں تیار کیا گیا تھا، الگ کیا گیا تھا، اور −20 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔

جانور

نر BALB/c (Nu/Nu) چوہوں (18-20 g، رسید کے وقت 6–8 ہفتے) مطالعہ میں استعمال کیے گئے (Shanghai Slac Laboratory Animal Co. Ltd., Shanghai, China)۔ جانوروں کو انفرادی طور پر ہوادار پولی سلفون پنجروں میں درجہ حرارت- اور روشنی سے کنٹرول کرنے والے کمرے میں رکھا گیا ہے (12 گھنٹے روشنی- 12 گھنٹہ تاریک سائیکل، صبح 7:00 بجے روشنی) کھانے اور پانی تک مفت رسائی کے ساتھ . تمام تجرباتی پروٹوکولز کو ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی نے منظور کیا تھا اور لیبارٹری جانوروں کے استعمال سے متعلق بین الاقوامی ایسوسی ایشن فار دی اسٹڈی آف پین کے رہنما خطوط پر عمل کیا تھا۔

سیل پھیلاؤ پرکھ MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے انسداد پھیلاؤ کی سرگرمی کی گئی تھی۔ مختصراً، سیلز کو 4–5 × 103 سیلز کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا تھا۔ راتوں رات منسلک ہونے کے بعد، خلیوں کا علاج ایکٹیوسائیڈ کے ارتکاز کی ایک سیریز کے ساتھ کیا گیا۔ اشارہ شدہ وقت پر منشیات کے علاج کے بعد، خلیات کو 3-(4,5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ; Roche Diagnostic Corporation, Indianapolis, IN, USA۔ حتمی ارتکاز: 5 ug/ml) 3-4 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر۔ فارمازان پروڈکٹ کو 570 nm کی طول موج پر مقدار کے لیے DMSO میں تحلیل کیا گیا تھا۔

Colony formation assay Cells were seeded in 24-well plates at a density of 200 cells per well and allowed to attach to the bottom of the well overnight. Cells were then treated with indicated drugs at the given concentration. The culture medium was replaced every 3 days until colonies were visible on day 12 post-culturing. For colonies counting, the cells were fixed with 4% paraformaldehyde and stained with 0.1% crystal violet. Colonies>10 خلیوں کو ہلکے خوردبین کے تحت شمار کیا گیا تھا (× 100 اضافہ؛ اولمپس، ٹوکیو، جاپان)۔

زخم کو بھرنے والے پرکھ کو {{0}} کنویں کی پلیٹوں میں (1 × 105 سیل فی کنواں) میں سیڈ کیا گیا اور 90 فیصد سنگم پر کلچر کیا گیا۔ زخم کا خلا پیدا کرنے کے لیے سیل کی پرت کو جراثیم سے پاک 200 ul پائپیٹ ٹپ سے کھرچ دیا گیا تھا۔ زخمی علاقے میں سیل کی منتقلی کو اشارہ شدہ وقت پوائنٹس (0، 10، اور 24 گھنٹے) پر ایک الٹی لائٹ مائکروسکوپ کے تحت × 100 کی میگنیفیکیشن پر دیکھا گیا تھا۔ ہر تجربہ سہ رخی میں کیا گیا تھا۔

ٹیوب کی تشکیل پرکھ HUVECs کو مہذب کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15]۔ مختصراً، کنویں کی پلیٹوں کو مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق میٹریجل (BD بایوسینسز، فرینکلن لیکس، USA) کے ساتھ لیپت کیا گیا اور پھر 30-40 منٹ تک پولیمرائز کرنے کے لیے انکیوبیٹر میں واپس آ گیا۔ اس کے بعد HUVECs کو 2 × 105 خلیات/mL کی کثافت پر بیج دیا گیا اور 8 گھنٹے تک مختلف دی گئی دوائیوں کے ساتھ علاج کیا گیا۔ ٹیوب کی تشکیل کو اشارہ کردہ ٹائم پوائنٹس پر الٹی مائکروسکوپ کے ساتھ فوٹو گرافی کی گئی تھی اور امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا تھا۔

مغربی بلوٹنگ تجزیہ

کل سیل لائسیٹس ریڈیو امیونوپریسیپیٹیشن پرکھ بفر (RIPA) (50 mM Tris HCl pH 8 کے ساتھ تیار کیے گئے تھے۔ ug/ml leupeptin، 10 ug/ml aprotinin اور 2 mM PMSF)۔ مساوی مقدار (20 ug/لین) کے ساتھ پروٹین کے نمونے SDS-PAGE جیل پر الگ کیے گئے تھے اور PVDF جھلیوں (Bio-Rad، Hercules, CA) میں منتقل کیے گئے تھے۔ جھلیوں کو راتوں رات p53 اینٹی باڈی (سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، بوسٹن، ایم اے) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا تھا۔ لوڈنگ کنٹرول کے لیے، جھلیوں کو سٹرپنگ بفر سے دھویا جاتا تھا اور ایکٹین اینٹی باڈی (سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی، سانتا کروز، سی اے) سے ملامت کی جاتی تھی۔ ای سی ایل کا پتہ لگانے کے نظام (پرکن ایلمر لائف سائنسز، بوسٹن، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کا پتہ لگایا گیا۔

qRT-PCR

ٹوٹل آر این اے کو سیل لائنوں سے Trizol ریجنٹ (انویٹروجن، USA) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا اور تجارتی طور پر دستیاب کٹ کا استعمال کرتے ہوئے cDNA کی ترکیب کے لیے ریورس ٹرانسکرپشن-پولیمریز چین ری ایکشن (RT-PCR) سے گزرا تھا۔ 2xSYBR گرین qPCR سپرمکس کا استعمال کرتے ہوئے ریئل ٹائم qRT-PCR Stratagene Mx3000P PRC ma chine (Agilent Technologies, USA) پر کیا گیا تھا۔ پرائمر کے سلسلے ذیل میں دکھائے گئے تھے: KLK1 کے لیے احساس 5′-CACCATGTGG TTCCTGGTTC-3′ اور اینٹی سینس 5′- CAAACAAGTT GTGGCGACCC-3′؛ KLK2 کے لیے احساس 5′-GTGTACAGTC ATGGATGGGC-3′ اور اینٹی سینس 5′-CCCAGAATCA CCCCCACAAG-3′؛ احساس 5′- CCACACCC GCTCTACGATATGA-3′ اور اینٹی سینس 5′-CCC AGA ATCACCCGAGCAG-3′ KLK3 کے لیے؛ KLK4 کے لیے احساس 5′-CGCACA CTGTTTCCAGAACTC-3′ اور اینٹی سینس 5′- GTTG CAGGAGTCCTTCTGGT-3′؛ KLK5 کے لیے احساس 5′-CCTG CACCCACATCTTTCTCT-3′ اور اینٹی سینس 5′- GGTAAGCATCCTCGCACCTT-3′؛ احساس 5′- CTCTCTCCTGGGGACACAGA-3′ اور اینٹی سینس 5′- TCCGCCATGCACCAACTTAT-3′ KLK6 کے لیے؛ KLK7 کے لیے احساس 5′- TTTTGGAGCCCAGCTGTGTG-3′ اور اینٹی سینس 5′- GTCACCATTGCAGGCGTTTT-3′؛ KLK8 کے لیے احساس 5′- CTGGGCAGGGACACTCCAG-3′ اور اینٹی سینس 5′- ACACCGCCACAGAGTAGTTG-3′؛ احساس 5′- GTAGGGGGTTCGTAGGGT-3′ اور اینٹی سینس 5′- CGGTGACGTCATAGAGACGG-3′ KLK9 کے لیے؛ KLK10 کے لیے احساس 5′-CAGGAGTGCCAGCCTCAC-3′ اور اینٹی سینس 5′- CTGGGGGAGGAAGAGGATGGA-3′؛ KLK11 کے لیے احساس 5′-CCCACCCCTTGGATTCTGTCT-3′ اور اینٹی سینس 5′-GTGAACTATGTAGCGGGGGCT-3′؛ KLK12 کے لیے احساس 5′-TGTTCTTGGTGAGTTCTCCCG{{96}′ اور اینٹی سینس 5′-GGATCCAGTCCACATACTTGC-3′؛ KLK13 کے لیے احساس 5′-CCTGAACCACGACCATGACA-3′ اور اینٹی سینس 5′-GCAGGGTTTGGATGTAGCCT-3؛ KLK14 کے لیے احساس 5′-CCCAACTACAACTCCCGGAC-3′ اور اینٹی سینس 5′-CCTGAAGCAACTGCTCGTGA-3′؛ KLK15 کے لیے احساس 5′-AGTTGCTGGAAGGTGACGAG- 3′ اور اینٹی سینس 5′-TGGCTAACATCTGGGCCTTG- 3′؛ احساس 5′-GACAGTCAGCCGCATCTT CT-3′ اور اینٹی سینس 5′- GCGCCCAATACGACCAAA TC-3′ GAPDH کے لیے۔ ہر KLK جین کی سائیکل تھریشولڈ (Ct) اقدار کو GAPDH کے مطابق معمول بنایا گیا تھا اور MxPro سافٹ ویئر کے ساتھ تجزیہ کیا گیا تھا۔

اکیلے A01 کی ویوو اینٹی ٹیومر سرگرمی میں یا صرافینیب The BEL740کے ساتھ مل کر 4 سیل معطلیاں تیار کی گئیں (3 × 106 خلیات) اور دائیں حصے میں ذیلی طور پر انجیکشن لگائے گئے۔ athymic عریاں چوہے. ٹیکہ لگانے کے دس دن بعد، ٹیومر والے چوہوں (جسمانی وزن(g):22–26؛ اوسط ± SEM:23.8 ± 0.14) کی جانچ کی گئی اور ٹیومر کے حجم کے بعد 7 علاج گروپوں میں بے ترتیب ہونے کے لیے منتخب کیا گیا ({ {12}} ملی میٹر 3)۔ کل 38 چوہوں کو مختلف علاج گروپوں کو تفویض کیا گیا تھا (n=5 فی گروپ سوائے ماڈل گروپ کے (n=8))۔ اس کے بعد جانوروں کا علاج ایکٹیوسائیڈ (A01؛ 12.5، 25 اور 50 mg/kg)، صرف صرافینیب (50 mg/kg) کے ساتھ یا A01 (50 mg/kg) کے ساتھ 14 دن تک روزانہ ایک بار کے ذریعے کیا گیا۔ مزید یہ کہ 20 ملی گرام/کلوگرام A01 کی خوراک بھی نس کے ذریعے دی گئی۔ خوراکوں کا انتخاب پچھلے مطالعات اور ہمارے ابتدائی ڈیٹا کی بنیاد پر کیا گیا تھا [15]۔ الیکٹرانک کیلیپر کا استعمال کرتے ہوئے ہر 3 یا 4 دن میں ٹیومر کی نشوونما کی نگرانی کی جاتی تھی، جس کا حجم 0.5xlengthxwidth (mm3) کے حساب سے لگایا جاتا تھا۔ اس کے علاوہ، JHH-7 ٹیکہ کا استعمال کرتے ہوئے ایک متوازی تجربہ شامل کیا گیا تھا۔ ٹیکہ لگانے کے سات دن بعد، ٹیومر والے چوہوں (جسمانی وزن(g):20–26؛ اوسط ± SEM:24.0 ± 0.20) کی جانچ کی گئی اور ٹیومر کے حجم (80-130 mm3) کے مطابق علاج کے گروپوں میں بے ترتیب ہونے کے لیے منتخب کیا گیا۔ )۔ کل 23 چوہوں کو 4 علاج گروپوں کو تفویض کیا گیا تھا (n=5 فی گروپ سوائے ماڈل گروپ کے (n=8))۔ پھر جانوروں کو A01 (20 mg/kg, iv)، صرف صرافینیب (50 mg/kg, ig) یا A01 (20 mg/kg, iv) کے ساتھ ملا کر 14 دنوں تک روزانہ ایک بار ملا۔ تمام چوہوں کو کلورل ہائیڈریٹ (350 ملی گرام/کلوگرام) کے ساتھ بے ہوشی کی گئی اور مشاہدے کی مدت کے اختتام پر گردن کی نقل مکانی سے قربانی دی گئی۔ اور ٹیومر ماس کو ہٹا دیا گیا اور ڈیجیٹل کیمرے سے تصویر کشی کی گئی۔

شماریاتی تجزیہ

تمام ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ جب تک کہ دوسری صورت میں بیان نہ کیا گیا ہو، شماریاتی تجزیے تغیرات کے تجزیہ (ANOVA) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے جس کے بعد پوسٹ ہاک ٹکی ٹیسٹ کیا گیا تھا۔ ٹیومر کے حجم کی قدروں کو اوسط ± معیاری غلطی (SEM) کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ ٹیومر کے حجم کے ڈیٹا کا تجزیہ کرنے کے لیے ٹوکی ٹیسٹ کے بعد دو طرفہ انووا کا استعمال کیا گیا۔ گراف پیڈ پرزم سافٹ ویئر شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ p < 0.05="" کی="" قدر="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

نتائج

وٹرو میں HCCs کے پھیلاؤ اور کالونی کی تشکیل پر A01 کے اثرات

تین HCC سیل لائنیں (BEL7404، HLF، اور JHH7) سیل پھیلاؤ پرکھ کے لیے استعمال کی گئیں۔ جیسا کہ تصویر 1 میں دکھایا گیا ہے، MTT پرکھ نے انکشاف کیا کہ A01 نے HCC کے تینوں خلیوں کے پھیلاؤ کو روکا۔ مزید یہ پوچھنے کے لیے کہ آیا A01 کی antiproliferative سرگرمی سیل کلونجینیٹی کو روکنے کی صلاحیت کی وجہ سے تھی، کالونی کی تشکیل پرکھ کی گئی۔ 100 μM پر A01 نے BEL7404 خلیات (تصویر 2a اور b) میں کالونی کی تشکیل کی مضبوط روک تھام دکھائی۔ جب صرافینیب (2 μM) کے ساتھ ملایا جائے تو، روکنے کی طاقت صرف A01 یا صرافینیب سے زیادہ مضبوط تھی۔ اسی طرح کے نتائج دیگر دو HCC سیلز، HLF اور JHH-7 (تصویر 2c اور d) میں بھی دیکھے گئے۔

اکیلے A01 کے اثرات یا وٹرو میں HCCs کی سیل منتقلی پر صرافینیب کے ساتھ مل کر

ہم نے اگلا سکریچ زخم پرکھ کا استعمال کرکے سیل کی منتقلی کا اندازہ کیا۔ جیسا کہ تصویر 3 میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں A01 (100 یا 500 μM) اور صرافینیب (10 μM) کے امتزاج نے HCC کے تینوں خلیوں میں زخم بھرنے سے نمایاں طور پر روکا ہے۔ BEL7404 خلیات کے لیے، A01 (100 یا 500 μM) اور sorafenib (10 μM) دونوں نے صرف زخم بھرنے کی روک تھام کا رجحان پیدا کیا جس کی کوئی شماریاتی اہمیت نہیں ہے (تصویر 3a اور d)۔ HLF خلیات کے لیے، 500 μM پر A01 اور 10 μM پر صرافینیب نے زخم کو بھرنے سے روک دیا۔ خاص طور پر، A01 (500 μM) sorafenib (10 μM) کے ساتھ مل کر اکیلے صرافینیب (تصویر 3b اور e) کے مقابلے میں زخم کے بھرنے میں زیادہ مضبوط رکاوٹ پیدا کرتا ہے۔ JHH خلیوں کے لئے، A01 (500 μM) اور صرافینیب (10 μM) کے ذریعہ زخم کی شفا یابی کو روکا گیا تھا۔ A01 (100 μM) اور صرافینیب (10 μM) کے امتزاج نے اکیلے A01 (100 μM) یا صرافینیب (10 μM) کے مقابلے میں زخم بھرنے کی مضبوط روک تھام کی۔ مزید برآں، صرافینیب (10 μM) کے ساتھ مل کر 500 μM پر A01 نے A01 (500 μM) یا صرافینیب (10 μM) اکیلے (تصویر 3c اور f) کے مقابلے میں زخم بھرنے کی مضبوط روک تھام ظاہر کی۔

اکیلے A01 کے اثرات یا وٹرو میں انجیوجینیسیس پر صرافینیب کے ساتھ مل کر

انجیوجینیسیس ٹیومر کی نشوونما، بڑھوتری، اور میٹاسٹیسیس [16] کے ساتھ گہرا تعلق رکھتا ہے، اور اس طرح اسے کینسر کے علاج کے لیے مداخلت کرنے والے اہداف میں سے ایک سمجھا جاتا ہے۔ ہم نے سب سے پہلے وٹرو میں ممکنہ انجیوجینیسیس کا تجزیہ کرنے کے لیے ٹیوب کی تشکیل پرکھ کی۔ جیسا کہ تصویر 4 میں دکھایا گیا ہے، صرف صرافینیب (10 μM) کے ساتھ 3 گھنٹے کے علاج یا A01 (100 اور 500 μM) اور صرافینیب (10 μM) کے امتزاج سے برتن جیسے ڈھانچے کی تشکیل پر روکے اثرات ظاہر ہونے لگے، یعنی HUVECs کی لمبائی اور سیدھ (تصویر 4a اور c)۔ 8 گھنٹے کے علاج کے بعد، A01 (100 اور 500 μM)، صرافینیب (10 μM) کے ساتھ ساتھ A01 اور صرافینیب کے امتزاج نے برتن کی طرح کے ڈھانچے کی تشکیل کو نمایاں طور پر روکا، جس میں A01 اور صرافینیب کے امتزاج سے زیادہ مضبوط روک تھام کے ساتھ A01 یا صرف صرافینیب (تصویر 4a اور c)۔ اس کے علاوہ، HUVECs کی سیل کی منتقلی انجیوجینیسیس کے دوران نئے برتنوں کی تشکیل کے لیے ایک اہم قدم ہے اور اس طرح اس کی تحقیقات کی جاتی ہیں۔ جیسا کہ تصویر 4b اور d میں دکھایا گیا ہے، A01 (500 μM)، صرافینیب (10 μM) کے ساتھ ساتھ A01 (100 اور 500 μM) اور صرافینیب (10 μM) کے امتزاج نے HUVECs کی سیل کی منتقلی کو نمایاں طور پر روک دیا۔ A01 (500 μM) نے صرافینیب (10 μM) کے ساتھ مل کر اکیلے A01 (500 μM) یا صرافینیب (10 μM) سے زیادہ مضبوط روکنا پیدا کیا۔

BEL7404 اور JHH-7 HCC xenografts کے ان ویوو ٹیومر کی نشوونما پر تنہا A01 کے اثرات یا صرافینیب کے ساتھ مل کر

اکیلے A01 کی تاثیر کا مزید جائزہ لینے کے لیے یا HCC کے ان ویوو ٹیومر کی نشوونما پر صرافینیب کے ساتھ مل کر، ہم نے BEL7404 یا JHH-7 کا استعمال کرتے ہوئے ایک subcutaneous xenograft عریاں ماؤس ماڈل قائم کیا۔ خلیات جیسا کہ تصویر 5 میں دکھایا گیا ہے، A01 (25 اور 50 ملی گرام/کلوگرام، زبانی نالی کے ذریعے؛ 20 ملی گرام/کلوگرام، دم کی رگ کے ذریعے؛ تمام p <0.01 بمقابلہ="" ماڈل="" گروپ)="" یا="" صرافینیب="" (50="" ملی="" گرام/کلوگرام،="" بذریعہ="" اورل="" گیویج؛="" پی=""><0.01 بمقابلہ="" ماڈل="" گروپ)="" اکیلے="" (تصویر="" 5="" اے="" اور="" بی)۔="" a01="" (50="" mg/kg)="" اور="" sorafenib="" (50="" mg/kg)="" کے="" امتزاج="" نے="" صرف="" صرافینیب="" (p=""><0.01) کے="" مقابلے="" میں="" ٹیومر="" کی="" نشوونما="" کو="" مضبوط="" روکا،="" لیکن="" اکیلے="" a01="" (تصویر="" 5a="" اور="" c)="" جیسا="" ہی="" اثر="" پیدا="" کیا۔="" )۔="" اس="" کے="" بعد="" ہم="" نے="" a01="" کی="" ممکنہ="" اینٹی="" ٹیومر="" افادیت="" کو="" مزید="" جانچنے="" کے="" لیے="" jhh-7="" xenograft="" عریاں="" چوہوں="" کا="" ماڈل="" استعمال="" کیا۔="" جیسا="" کہ="" تصویر="" 6="" میں="" دکھایا="" گیا="" ہے،="" a01="" (20="" mg/kg,="" iv)="" یا="" sorafenib="" (50="" mg/kg,="" ig)="" کے="" ساتھ="" علاج="" نے="" jhh-7="" xenograft="" (p=""><0.01 بمقابلہ="" ماڈل="" گروپ)="" کے="" ٹیومر="" کی="" نشوونما="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" روک="" دیا۔="" )،="" زیادہ="" روک="" تھام="" کے="" ساتھ،="" جب="" ایک="" ساتھ="" ملایا="" جائے="" (تصویر="" 6a="" اور="" b؛="" p=""><0.01 بمقابلہ="" a01="" یا="" صرف="" صرافینیب="">

kallikrein سے متعلق peptidase اور p53 کی ممکنہ ماڈیولیشن بذریعہcistanche سے Acteoside

کالیکرین سے متعلق پیپٹائڈیس (KLK) کو مختلف کینسروں کی تشخیص اور تشخیص میں کینسر کے بائیو مارکر کے طور پر تجویز کیا گیا ہے، بشمول ہیپاٹوسیولر کارسنوما اس کے غیر منظم اظہار [17–19] کی وجہ سے۔ اس منظر نامے میں، ہم نے HCC JHH-7 سیل لائن میں KLK1–15 کے جین اظہار کا پتہ لگایا۔ جیسا کہ تصویر 7 میں دکھایا گیا ہے، ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ علاج نے KLK1، 2، 4، 9، اور 10 mRNA کی سطحوں (تصویر 7a-e) کو نمایاں طور پر روکا، جس میں KLK1–15 کے باقی حصوں میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) )۔ اس کے علاوہ، ہم نے ٹیومر کو دبانے والے پروٹین p53 کی سطح کا بھی پتہ لگایا اور ایکٹیوسائیڈ (تصویر 7f) کے علاج سے اضافہ کا انکشاف کیا۔

بحث

ابتدائی مراحل میں تشخیص کی ناکامی اور ٹیومر کی کیمورسٹینس [5، 6] کی وجہ سے ایڈوانسڈ ایچ سی سی کا انتظام طویل عرصے سے ناقابل برداشت ہے۔ صرافینیب، ملٹی کناز انحیبیٹر جو سیل کے پھیلاؤ اور انجیوجینیسیس کو روکتا ہے، ایک اور اورل ملٹی کناز انحیبیٹر لینواٹینیب کے ساتھ مل کر اعلی درجے کی HCC [3, 5, 20, 21] کا معیاری علاج بن گیا ہے۔ تاہم، مجموعی طور پر بقا کی شرح کم ردعمل کی شرح اور طبی ترتیبات میں غیر موزوں ہونے کی روشنی میں معمولی ہے [3، 22]۔ ایک حالیہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ atezolizumab plus bevacizumab نے ناقابل علاج HCC والے مریضوں میں صرافینیب کے مقابلے میں بہتر طبی نتائج پیدا کیے ہیں، جس سے یہ امتزاج اعلی درجے کی HCC کے لیے پہلی لائن کے علاج کا ایک ممکنہ آپشن بناتا ہے [7]۔ اس تناظر میں، ہم نے شناخت کیا ہے کہ phenylethanoid glycoside،cistanche سے Acteosideتین انسانی HCC سیل لائنوں BEL7404، HLF، اور JHH-7 کے ساتھ ساتھ HUVECs کی ممنوع انجیوجینیسیس میں سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، اور منتقلی کو روکتا ہے۔ ایکٹیوسائیڈ اور صرافینیب کے امتزاج نے سیل کالونی کی تشکیل اور HCC خلیوں کی منتقلی کے ساتھ ساتھ HUVECs کی انجیوجینیسیس کو مضبوط روک دیا۔ ایکٹیوسائیڈ نے BEL7404 یا JHH-7 xenograft کے عریاں چوہوں کے ماڈل میں اینٹی ٹیومر افادیت کو پیش کیا، جب JHH-7 xenograft کی نشوونما کو روکنے میں صرافینیب کے ساتھ مل کر ایک اضافہ ہوتا ہے۔ مزید تجزیوں سے p53 میں اضافے کے ساتھ ساتھ کچھ KLK جینوں میں کمی کا انکشاف ہوا۔ اس کے مطابق، کلینک میں اعلی درجے کی ایچ سی سی کے علاج میں ایکٹیوسائڈ کے ممکنہ استعمال پر غور کیا جانا چاہئے.

بڑھتے ہوئے شواہد نے اینٹیٹیمر اثرات دکھائے ہیں۔cistanche سے Acteosideمختلف ٹیومر خلیوں میں جیسے B16 میلانوما خلیات، گلیوبلاسٹوما خلیات، کولوریکٹل کینسر کے خلیات، زبانی اسکواومس سیل کارسنوما خلیات، پروسٹیٹ کینسر کے خلیات، اور انسانی چھاتی کے اڈینو کارسینوما خلیات [11–13، 23–25] یا ٹیومر والے جانوروں میں [12]۔ اس کے باوجود، چند مطالعات نے وٹرو میں یا Vivo میں HCC پر ایکٹیوسائیڈ کے اثرات پر توجہ مرکوز کی ہے سوائے ایک مطالعہ کے جس میں چوہوں میں hepatocarcinogenesis کو اکسانے اور ایکٹیوسائیڈ [26] کے ذریعے کیموپریوینشن کو ظاہر کرنے کے لیے ڈائیتھائلنائٹروسامین کو کارسنجن کے طور پر استعمال کیا گیا ہے۔ موجودہ مطالعے میں، ہم نے HCC سیل لائنوں میں سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، اور ہجرت کے ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ ساتھ HCC سیل لائن xenografts والے چوہوں میں ٹیومر کی نمو کے ذریعہ روک تھام کو دکھایا، اس طرح HCC میں ایکٹیوسائیڈ کے اینٹی ٹیومر اثرات کو براہ راست ظاہر کیا۔ مزید برآں، ایکٹیوسائیڈ اور صرافینیب کے امتزاج نے اور بھی مضبوط اینٹیٹیمر اثرات پیدا کیے ہیں۔ ان شواہد کے ساتھ مل کر کہ ایکٹیوسائیڈ جگر کی چوٹوں [27–29] کے خلاف حفاظتی ہے جس میں جانوروں میں کوئی زہریلے اثرات نہیں ہیں اور نہ ہی کوئی تغیر پذیری [30]، ایسا لگتا ہے کہ ایکٹیوسائیڈ اور صرافینیب کے امتزاج تھراپی کا مستقبل میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کلینک میں ایچ سی سی۔

انسانی کالیکرین فیملی 15 ہومولوجس، سنگل چین، سیکریٹڈ ٹرپسن- یا کیموٹریپسن نما سیرین پروٹیز (KLK1–15) پر مشتمل ہے اور اسے ٹیومر کی نشوونما، نوپلاسٹک بڑھنے، انجیوجینیسیس، اور میٹاسٹیسیس کے ضابطے میں ملوث کیا گیا ہے [18, 31]۔ خاص طور پر، KLKs کو مختلف کینسروں کی تشخیص اور تشخیص میں کینسر کے بائیو مارکر کے طور پر تجویز کیا گیا ہے، بشمول ہیپاٹو سیلولر کارسنوما اس کے غیر منظم اظہار [17-19] کی وجہ سے۔ مثال کے طور پر، KLK1 کو گیسٹرک نیوپلازم میں KLK1 کی سطح کی بلندی اور kallikrein-binding پروٹین (KBP) کے ساتھ KLK1 سرگرمی کی روک تھام کے ذریعے گیسٹرک کینسر میں ٹیومر کی افزائش کی روک تھام کی وجہ سے گیسٹرک کینسر کے بائیو مارکر کے طور پر تجویز کیا گیا ہے [32]۔ اس منظر نامے میں، ہم نے ایکٹیوسائیڈ (KLK1، 2، 4، 9، اور 10) کے ذریعہ KLK mRNA کی سطح کی ایک اہم روک تھام کا مشاہدہ کیا۔ KBP کا اطلاق، جو خاص طور پر ٹشو کالیکرین سے منسلک ہوتا ہے اور کالیکرین کی سرگرمی کو روکتا ہے، اس کی اطلاع دی گئی تھی کہ ممکنہ طور پر اس کی اینٹی انجیوجینک سرگرمی [33] کے ذریعے چوہوں میں ایچ سی سی کی افزائش کو دبانے کے لیے، HCC کی ترقی میں KLKs کی ممکنہ شمولیت کا مشورہ دیتی ہے۔ اس کے علاوہ، ٹیومر کو دبانے والا پروٹین p53 سنسنی، اپوپٹوس کے ساتھ ساتھ سیل سائیکل گرفتاری کو دلانے کے قابل ہے۔ p53 اظہار میں اضافہ کینسر کے خلیوں میں کیمو حساسیت کو بڑھاتا ہے [34]۔ اس سلسلے میں، ہمارے مغربی نتائج نے ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ علاج کے بعد p53 کی سطح میں اضافہ ظاہر کیا۔ ایک ساتھ مل کر، یہ اندازہ لگانا مناسب ہے کہ ایکٹیوسائیڈ HCC پر ممکنہ طور پر p53 کے اپ ریگولیشن کے ساتھ ساتھ KLK اور انجیوجینیسیس کی روک تھام کے ذریعے اینٹی ٹیومر اثرات مرتب کرتا ہے۔

واضح رہے کہ براہ راست مالیکیولر ہدف جس پر ہے۔cistanche سے Acteosideبراہ راست باندھ سکتا ہے ابھی تک واضح نہیں ہے. مالیکیولر ڈاکنگ کا استعمال کرتے ہوئے ہمارے ابتدائی ڈیٹا نے کالیکرین (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) کے ساتھ ایکٹیوسائیڈ کی براہ راست پابندی کا انکشاف کیا۔ اس مفروضے کو واضح کرنے کے لیے مزید تجربات ضروری ہوں گے۔ اس کے علاوہ، مطالعہ میں سیل پرکھ کے لیے استعمال ہونے والی ایکٹیوسائیڈ کی خوراکوں کے لیے جو صرافینیب (10 μM) سے 10–50 گنا زیادہ ہے، سب سے پہلے ہم نے ایکٹیوسائیڈ کی ان خوراکوں کا انتخاب کیا MTT پرکھ میں خوراک کے ردعمل کا رشتہ۔ دوسرا، ہم نے جو خوراکیں استعمال کیں (100, 500 μM) وہ پچھلے مطالعات سے موازنہ تھیں [35]، جس میں ایکٹیوسائیڈ (100 μM) نے کولوریکٹل کینسر کے خلیوں کے پھیلاؤ کو روکا۔ آخر میں، سیل پرکھ میں زیادہ خوراک کے باوجود، ایکٹیوسائیڈ نے ہمارے مطالعہ (25 اور 50 ملی گرام/کلوگرام) میں ایچ سی سی زینوگرافٹ عریاں چوہوں کے ماڈل میں ٹیومر کی نشوونما کو واضح طور پر روکا، اثرات صرافینیب (50 ملی گرام/کلوگرام) سے ملتے جلتے ہیں۔ صرافینیب کے لیے، یہ ہمارے مطالعے میں سیلولر سطح پر 10 μM کی خوراک میں استعمال کیا گیا تھا۔ یہ خوراک پچھلے مطالعات سے موازنہ ہے جس میں صرافینیب کو PLC/PRF/5 اور HepG2 خلیوں کی HCC سیل لائنوں میں 4.0–6.5 μM کے IC50 کے ساتھ سیل کی عملداری کو روکتا ہوا پایا گیا تھا۔ اس کے برعکس، SCID مادہ چوہوں میں HCC xenografts کی نشوونما کو دبانے کے لیے استعمال ہونے والی صرافینیب کی خوراک 30 mg/kg تھی (po by gavage) [36]۔ کلینک میں، مریض کے لیے صرافینیب کی تجویز کردہ خوراک 400 ملی گرام فی وقت (2*0.2 جی) ہے، دن میں دو بار (کل 800 ملی گرام فی دن)۔ کلینک میں استعمال ہونے والی صرافینیب کی یہ خوراک سیل پرکھ میں استعمال ہونے والی خوراک کے برعکس ہے (μM سطح میں IC50 قدر)، ممکنہ طور پر vivo حالات میں اس کی ناقص جذب ہونے کی وجہ سے۔ ایکٹیوسائیڈ کے لیے، چوہوں میں اس کی خوراک (50 ملی گرام/کلوگرام، آئی جی) کی بنیاد پر، انسانوں کے لیے اس کی مساوی خوراک (60 کلوگرام BW) تقریباً 250 ملی گرام ہے۔ یہ خوراک کلینک میں استعمال ہونے والی صرافینیب سے موازنہ ہے اور مریضوں کے لیے قابل قبول ہونی چاہیے۔

نتیجہ آخر میں،cistanche سے ActeosideHCC سیل لائنوں میں اور HCC سیل لائن xenografts والے عریاں چوہوں میں اینٹی ٹیومر اثر ڈالنے کے قابل ہے، ممکنہ طور پر p53 کی سطح کو بڑھانے کے ساتھ ساتھ KLK اور انجیوجینیسیس کو روکنے کے ذریعے اثرات مرتب ہوتے ہیں۔ ایکٹیوسائیڈ کلینک میں اعلی درجے کی ایچ سی سی کے علاج میں معاون کے طور پر کارآمد ثابت ہوسکتا ہے۔

حوالہ جات

1 Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, Siegel RL, Torre LA, Jemal A. عالمی کینسر کے اعدادوشمار 2018: GLOBOCAN 185 ممالک میں 36 کینسروں کے لیے دنیا بھر میں واقعات اور اموات کا تخمینہ۔ CA کینسر جے کلین۔ 2018؛68(6):394–424..

2. Llovet JM, Zucman-Rossi J, Pikarsky E, Sangro B, Schwartz M, Sherman M, Gores G. Hepatocellular carcinoma. نیٹ ریو ڈس پرائمرز۔ 2016؛ 2:16018۔

3. امیونو تھراپی کے دور میں سم HW، Knox J. Hepatocellular carcinoma. کرر کا مسئلہ کینسر۔ 2018؛42(1):40–8۔ 4. جیانگ وائی، ہان کیو جے، ژانگ جے ہیپاٹو سیلولر کارسنوما: ترقی اور امیونو تھراپی کے طریقہ کار۔ ورلڈ جے گیسٹرو انٹرول۔ 2019؛ 25(25):3151–67۔

5. Forner A, Da Fonseca LG, Diaz-Gonzalez A, Sanduzzi-Zamparelli M, Reig M, Bruix J. Hepatocellular carcinoma کے انتظام میں تنازعات۔ JHEP Rep. 2019؛ 1(1):17–29۔

6. ہارٹکے جے، جانسن ایم، گبریل ایم۔ ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کی تشخیص اور علاج۔ سیمین ڈائگن پاتھول۔ 2017؛34(2):153–9۔

7. Finn RS, Qin S, Ikeda M, Galle PR, Ducreux M, Kim TY, Kudo M, Breder V, Merle P, Kaseb AO, et al. Atezolizumab پلس Bevacizumab Unresectable Hepatocellular Carcinoma میں۔ این انگل جے میڈ۔ 2020؛382(20):1894–905۔

8. He ZD، Ueda S، Akaji M، Fujita T، Inoue K، Yang CR. Ligustrum peduncular سے Monoterpenoid اور phenylethanoid glycosides. فائٹو کیمسٹری۔ 1994؛36(3):709–16۔

9. لی ایچ، چو جی ایکس، وانگ زیڈ ٹی، ہو زیڈ بی۔ HPLC کا تعینایکٹیوسائیڈRadix Rehmanniae میں Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2006؛31(10):822–4۔

10. وونگ آئی وائی، ہی زیڈ ڈی، ہوانگ وائی، چن زیڈ وائی۔ Ligustrum purpurascens سے phenylethanoid glycosides کی اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمیاں۔ جے ایگرک فوڈ کیم۔ 2001؛49(6):3113–9۔

11. Mulani SK, Guh JH, Mong KK. ایک عام مصنوعی حکمت عملی اور پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں پر قدرتی فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز کے خلاف پھیلاؤ کی خصوصیات۔ Org Biomol Chem. 2014؛12(18):2926–37۔

12. Cheimonidi C, Samara P, Polychronopoulos P, Tsakiri EN, Nikou T, Myrianthopoulos V, Sakellaropoulos T, Zoumpourlis V, Mikros E, Papassideri I, et al. ٹیومر کے خلیات اور اس کی میکانکی بصیرت کے خلاف جڑی بوٹیوں کے مادہ ایکٹیوسائیڈ کی منتخب سائٹوٹوکسیٹی۔ ریڈوکس بائیول۔ 2018؛ 16:169-78۔

13. عطیہ وائی ایم، ایل کرش ڈی ایم، واگڈی ایچ اے، ایلمزار ایم ایم۔ ورباسکوسائیڈ: PI3K/AKT پاتھ وے کو ہدف بنا کر 5-FU میں کولوریکٹل کینسر کے خلیات کی شناخت، مقدار کا تعین، اور ممکنہ حساسیت۔ سائنس کا نمائندہ 2018؛ 8(1):16939۔

14. Liu S, Zhao Z, Huo Z, Xu Z, Zhong Y, Wang X, Yang Y, Wang Z. Osmanthus خوشبودار پھولوں کے پانی کے نچوڑ اور اس کی افزودہ ایکٹیوسائیڈ میلانوجینیسس اور الٹرا وائلٹ-حوصلہ افزائی پگمنٹیشن کو روکتی ہے۔ نیٹ پروڈ کمیون۔ 2018؛ 13(5):575–80۔

15. Wang J, Ma S, Chen X, Zhang S, Wang Z, Mei Q. ناول PI3K inhibitor S1 نان اسمال سیل پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیوں میں صرافینیب کے ساتھ ہم آہنگی کرتا ہے جس میں اکٹ-S6 سگنلنگ شامل ہے۔ نئی دوائیوں کی تحقیقات کریں۔ 2019؛37(5):828–36۔

16. ہاناہن ڈی، وینبرگ RA. کینسر کے نشانات: اگلی نسل۔ سیل 2011؛ ​​144(5):646–74۔ 17. امامی این، دیامندیس ای پی۔ کینسر بائیو مارکر کے طور پر کالیکرین سے متعلق پیپٹائڈیسز (KLKs) کی افادیت۔ کلین کیم۔ 2008؛54(10):1600–7۔

18. ٹیلر PD، Kodeboyina SK، Bai S، Patel N، شرما S، Ratnani A، Copland JA، She JX، شرما A. کینسر کی مختلف اقسام میں کالیکرین فیملی جینز کی تشخیصی اور پروگنوسٹک بائیو مارکر پوٹینشل۔ Oncotarget. 2018؛ 9(25): 17876–88۔

19. Kontos CK، Mavridis K، Talieri M، Scorilas A. Kallikrein-related peptidases (KLKs) معدے کے کینسر میں: میکانکی اور طبی پہلو۔ تھرمب ہیموسٹ۔ 2013؛ 110(3):450–7۔

20. Cheng AL، Kang YK، Chen Z، Tsao CJ، Qin S، Kim JS، Luo R، Feng J، Ye S، Yang TS، et al. اعلی درجے کی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے ساتھ ایشیا پیسیفک خطے کے مریضوں میں صرافینیب کی افادیت اور حفاظت: ایک مرحلہ III بے ترتیب، ڈبل بلائنڈ، پلیسبو کنٹرول ٹرائل۔ لینسیٹ آنکول۔ 2009؛10(1):25–34۔ 21. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. اعلی درجے کی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں صرافینیب۔ این انگل جے میڈ۔ 2008؛359(4):378–90۔

22. گانا ایم جے۔ اعلی درجے کی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لئے ہیپاٹک آرٹری انفیوژن کیموتھریپی۔ ورلڈ جے گیسٹرو انٹرول۔ 2015؛21(13):3843–9۔

23. لیاو وائی ایف، راؤ وائی کے، زینگ وائی ایم۔ Anisomeles India کا آبی عرق اور اس کا پیوریفائیڈ مرکب انسانی چھاتی کے کینسر کے MCF-7 خلیوں میں NF kappaB/AP-1-منحصر MMP-9 ایکٹیویشن کی روک تھام کے ذریعے اینٹی میٹاسٹیٹک سرگرمی کا مظاہرہ کرتا ہے۔ فوڈ کیم ٹاکسیکول۔ 2012؛50(8):2930–6۔

24. Zhang Y، Yuan Y، Wu H، Xie Z، Wu Y، Song X، Wang J، Shu W، Xu J، Liu B، et al. انسانی زبانی squamous سیل کارسنوما میں apoptosis اور metastasis پر verbascoside کا اثر۔ انٹ جے کینسر۔ 2018؛ 143(4):980–91۔

25. ہوانگ ٹی ڈبلیو، کم ڈی ایچ، کم ڈی بی، جنگ ٹی ڈبلیو، کم جی ایچ، مون ایم، یون کے اے، چوئی ڈی ای، پارک جے ایچ، کم جے جے۔ ایکٹیوسائڈ اور ٹیموزولومائڈ پر مبنی گلیوبلاسٹوما کیموتھریپی کا ہم آہنگی سے بچنے والا اثر۔ انٹ جے مول میڈ۔ 2019; 43(3):1478–86۔

26. پیرزادہ کے جے، فریدی اے ایچ، شرما ایل، بھردواج ایس سی، ستی این کے، ششی بی، تصدق ایس اے۔ STAT-3 ریگولیٹڈ آکسیڈیٹیو تناؤ اور اپوپٹوسس کے ذریعے تجرباتی جگر کے سرطان پیدا کرنے کے کیموپریوینشن کو Acteoside-ثالثی کرتا ہے۔ اینوائرن ٹاکسیکول۔ 2016؛31(7):782–98۔

27. Cui Q، Pan Y، Zhang W، Zhang Y، Ren S، Wang D، Wang Z، Liu X، Xiao W. غذائی ایکٹیوسائیڈ کے میٹابولائٹس: پروفائلز، تنہائی، شناخت، اور ہیپاٹوپروٹیکٹو صلاحیتیں۔ جے ایگرک فوڈ کیم۔ 2018؛ 66(11):2660–8۔

28. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Namba T, Kadota S. Acteoside D-galactosamine اور lipopolysaccharide سے متاثرہ جگر کی چوٹ میں apoptosis کو روکتا ہے۔ لائف سائنس. 1999؛65(4):421–30۔

29. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z, Huang Y. بیکیلس کالمیٹ گیورین پلس لیپوپولیساکرائڈ کے ذریعہ امیونولوجیکل جگر کی چوٹ پر ایکٹیوسائیڈ کا حفاظتی اثر۔ پلانٹا میڈ۔ 2009؛75(14):1463–9۔

30. Lu B، Li M، Zhou F، Huang W، Jiang Y، Mao S، Zhao Y، Lou T. Osmanthus کے خوشبودار پھول phenylethanoid glycoside سے بھرپور نچوڑ: شدید اور ذیلی دائمی زہریلا مطالعہ۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2016؛ 187:205-12۔

31. Diamandis EP، Yousef GM. انسانی ٹشو کالیکرینز: کینسر کے نئے بائیو مارکر کا ایک خاندان۔ کلین کیم۔ 2002؛48(8):1198–205۔

. انٹ امیونو فارماکول۔ 2001؛1(12):2063–80۔

33. Lu L, Yang Z, Zhu B, Fang S, Yang X, Cai W, Li C, Ma JX, Gao G. Kallikreinbinding پروٹین antiangiogenic سرگرمی کے ذریعے hepatocellular carcinoma کی نشوونما کو روکتا ہے۔ کینسر لیٹ. 2007؛257(1):97–106۔

34. Guntur VP, Waldrep JC, Guo JJ, Selting K, Dhand R. p53 پروٹین میں اضافہ نان اسمال سیل پھیپھڑوں کے کینسر کو paclitaxel اور cisplatin in vitro کے لیے حساس بناتا ہے۔ اینٹی کینسر ریس. 2010؛30(9):3557–64۔

35. Zhou L, Feng Y, Jin Y, Liu X, Sui H, Chai N, Chen X, Liu N, Ji Q, Wang Y, Li Q. Verbascoside انسانوں میں HIPK2-p53 سگنلنگ کو ریگولیٹ کرکے apoptosis کو فروغ دیتا ہے۔ کولوریکٹل کینسر. بی ایم سی کینسر۔ 2014؛ 14:747۔

36. Liu L, Cao Y, Chen C, Zhang X, McNabola A, Wilkie D, Wilhelm S, Lynch M, Carter C. Sorafenib RAF/MEK/ERK کے راستے کو روکتا ہے، ٹیومر انجیوجینیسیس کو روکتا ہے، اور ہیپاٹو سیلولر میں ٹیومر سیل اپوپٹوس کو اکساتا ہے۔ کارسنوما ماڈل PLC/PRF/5۔ کینسر ریس 2006؛ 66:11851–8۔