فائٹو کیمیکل تجزیہ، ان وٹرو اینٹی پرولیفیریٹو، اینٹی آکسیڈینٹ حصہ 2

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

a-گلوکوسیڈیس روک تھام پرکھ

100,2{11}}0,300,400، اور 500mg/ml کی ارتکاز حاصل کرنے کے لیے، مختلف حصوں کی ایک کمزور سیریز بنائی گئی۔ رد عمل کے مرکب میں 0.1 ملی لیٹر 1U/ml -glucosidase محلول 0.2ml ایک ایکسٹریکٹ ڈائلیشن اور 0.5 ml 100mM فاسفیٹ بفر، pH6.8 کے ساتھ ملا ہوا تھا۔ مرکب کو 15 منٹ کے لئے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، 0.2ml 5mM p-nitrophenyl-D-galactopyranosidePNPG کو رد عمل کے مرکب میں شامل کیا گیا، اور انکیوبیشن کو مزید 20 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر بڑھایا گیا۔ رد عمل کو 0.1 M NazCO3 شامل کرکے ختم کردیا گیا۔ تمام نمونوں کے لیے جاذبیت 405 nm کی طول موج پر ریکارڈ کی گئی۔ Acarbose ایک مثبت کنٹرول کے طور پر اسی ارتکاز میں استعمال کیا جاتا تھا جیسا کہ پودوں کے نچوڑ سے ہوتا ہے۔ نتائج کو درج ذیل مساوات کے مطابق فیصد کی روک تھام کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

جہاں Ag بغیر کسی ینجائم روکنے والے کے جاذب ہے، اور جیسا کہ انزائم روکنے والے کی موجودگی میں جاذب ہے [26]۔

سیل لائنز اور MTS پرکھ

HeLa اور MCF7 کینسر سیل لائنیں ATCC سے حاصل کی گئیں، خلیات کو RPMI-1640 میڈیا میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم، 1 فیصد پینسلن/اسٹریپٹومائسن اینٹی بائیوٹکس، اور 1 فیصد L-گلوٹامین کے ساتھ مکمل کیا گیا تھا۔ خلیات 37 ڈگری پر 5 فیصد CO2 کے ساتھ مرطوب ماحول میں اگائے گئے تھے۔ سیلز کو 2.6×10* سیلز/کنویں میں 96-کنویں پلیٹ میں سیڈ کیا گیا تھا۔ 48h کے بعد، خلیات سنگم تھے، میڈیا کو تبدیل کر دیا گیا تھا. اس کے بعد خلیوں کو 24 گھنٹے کے لیے R. rothschildianus کے 025-10 mg/ml سے لے کر مختلف پتوں کے حصے کی تعداد کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ سیل کی عملداری کا اندازہ لگایا گیا۔

مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق سیل ٹِلٹر 96 ڈگری ایکوئس ون سولیوشن سیل پرولیفریشن (MTS) پرکھ (Promega Corporation, Madison, WI) کے ساتھ۔ مختصراً، علاج کے اختتام پر، ہر کنویں میں 20 ul MTS محلول فی 100ul میڈیا شامل کیا گیا اور 2 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ جذبوں کو 490 nm [27,28] پر ماپا گیا۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

شماریاتی تجزیہ

پودوں کے چار حصوں کے حاصل کردہ تمام نتائج (اینٹی آکسیڈینٹاینٹی لپیس،اینٹی amylase, اینٹی glycosidase، اورcytotoxicityسرگرمیاں) کا مطلب ±SD معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ نتیجہ اہم سمجھا جاتا تھا جب p-value تھی۔<0.05. data="" were="" compared="" using="" unpaired="">

نتائج

فائٹو کیمیکل اسکریننگ

R. rothschildianus aqueous fractions پر ابتدائی فائٹو کیمیکل ٹیسٹ کے نتائج نے saponin، phenols، پروٹین، نشاستہ اور flavonoids کی موجودگی کو ظاہر کیا۔ میتھانول کے نچوڑ میں پیچیدہ پولی سیکرائڈز، فینول، پروٹین، اور فلاوونائڈز کی موجودگی ظاہر کی گئی، جب کہ فینول، ٹیننز، اور فلاوونائڈز ایسیٹون کے کسر میں دیکھے گئے، اور ہیکسین فریکشن میں فینول، ٹیننز، اور فلاوونائڈز، گلائکوسائیڈز، ٹیرپینوائڈز، اور فلیوونائڈز کی نشاندہی کی گئی۔ جیسا کہ جدول 1 میں دکھایا گیا ہے۔ تاہم، نکالنے کے عمل کے لیے، میتھانول نے سب سے زیادہ فیصد پیداوار 29.4 فیصد ظاہر کی، اس کے بعد ایسیٹون کا حصہ 16.5 فیصد ہے۔ پانی کے اخراج سے 10.6 فیصد حاصل ہوا، جبکہ سب سے کم پیداوار (7.3 فیصد) ہیکسین فریکشن (ٹیبل 2) میں تھی۔

TPC، TFC، اور TTC کا مقداری تجزیہ TPC، TFC، اور TTC کی تشخیص کے لیے، گیلک ایسڈ، روٹین ایسڈ، اور کیٹیچن اسٹینڈرز (STDs) کے کئی ارتکاز کی جذب (Abs) قدریں حاصل کی گئیں، اور ان نکات کے حوالے سے ہر STD بمقابلہ اس کے ارتکاز کے لیے تین مساواتیں حاصل کی گئیں تاکہ ہیکسین، ایسیٹون، میتھانول، اور آبی آر کے کل فینول، فلاوونائڈ، اور ٹینن مواد کا حساب لگایا جا سکے۔

Cistanche قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی

R. rothschildianus کے پتوں سے چار حصوں کی آزاد بنیاد پرست صفائی کی سرگرمی کا جائزہ لینے کے نتائج، Trolox کو ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ معیاری حوالہ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے، فیصدی DPPH روکنا (تصویر 1 اور جدول 4) کے طور پر ظاہر کیا گیا۔ لہذا، R. rothschildianus کے پتوں کو اینٹی آکسیڈینٹس کے لیے جڑی بوٹیوں کا ذریعہ سمجھا جا سکتا ہے، اور ایسیٹون فریکشن کے لیے، جس نے 6.3±0.4 ug/ml کی ICso قدر ظاہر کی۔ اسی طرح کے نتائج ہیکس این فریکشن کے لیے بھی حاصل کیے گئے، جس کی ICso ویلیو 7.9±1.3ug/ml (ٹیبل 4) تھی۔ نتائج کا موازنہ Trolox سے کیا گیا، جو ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ مرکب ہے، جو 3.1±0.9 ug/ml کے برابر ہے۔ اس کے برعکس، پانی کا حصہ صرف معتدل اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی دکھاتا ہے، جس کی اعلی ICso قدر 19.9±0.7ug/ml ہے، جبکہ میتھانول کا عرق اس پرکھ میں غیر فعال تھا۔

لیپیس کی روک تھام کی سرگرمی

اس پرکھ میں، R. rothschildianus پتوں کے نچوڑ کے مختلف حصوں کی موٹاپا مخالف سرگرمی کا موازنہ کیا گیا۔

orlistat، ایک طاقتور lipase inhibitory agent (تصویر 2 اور جدول 4)۔R. روتھسچلڈینس کے پتے لپیس روکنے والے ایجنٹوں کا ایک بہترین متبادل قدرتی ذریعہ تھے۔ ایسیٹون فریکشن نے 26.3±0.6ug/ml کی ICso ویلیو ظاہر کی، جو کہ حوالہ com-pound orlistat （12.3±0.3ug/ml） کے بہت قریب تھی۔ ہیکسین اور میتھانول فریکشنز نے صرف اعتدال پسند ICso قدریں ریکارڈ کیں، بالترتیب 39.8±0.3ug/ml اور 60.3±0.4ug/ml کے برابر؛ جبکہ پانی کا حصہ غیر فعال تھا۔

a-Amylase کی روک تھام کی سرگرمی

اس پرکھ میں، R. rothschildianus پتوں کے نچوڑ سے فرکشن کی اینٹی امائلیز سرگرمی کا موازنہ acarbose سے کیا گیا، جو کہ ایک طاقتور a-amylase inhibitory agent (تصویر 3) ہے۔ 19 کے ICso کے ساتھ ایسٹون فریکشن -amylase کا سب سے زیادہ قوی روک تھام کرنے والا تھا۔ اس نے تجویز کیا کہ R. rothschildianus ذیابیطس کے لیے ایک طاقتور جڑی بوٹیوں کا علاج ہو سکتا ہے۔ پانی کے حصے نے اس پرکھ میں صرف 45.7±0.3 ug/ml کی ICso قدر کے ساتھ اعتدال پسند سرگرمی دکھائی، جبکہ ہیکسین کی ICso قدر 354.8±1.2ug/ml تھی۔ میتھانول کا حصہ -amylase انزائم کے خلاف غیر فعال تھا۔ نیز، اقدار کا حساب چار حصوں (ٹیبل 4) کے لیے کیا گیا تھا۔

a-گلوکوسیڈیس کی روک تھام کی سرگرمی

a-glucosidase کے نتائج کا موازنہ acarbose کے ساتھ کیا گیا، جو ایک مضبوط انزائم روکنے والا ایجنٹ ہے، اور چار حصوں (ٹیبل 4 اور تصویر 4) کے لیے بھی اقدار کا حساب لگایا گیا تھا۔ ایسیٹون فریکشن نے 54.9±0.3 ug/ml کے ICso کے ساتھ -glucosidase پر سب سے بڑی روک تھام کی کارروائی کی، acarbose کے مقابلے میں، حوالہ مرکب، 37.1±{{1{15}}} }.3 ug/ml اس کے برعکس، میتھانول ایکسٹریکٹ فریکشن نے 251.2±0.4ug/ml کے ICso کے ساتھ -گلوکوسیڈیس کی صرف اعتدال پسند روک تھام ظاہر کی، جبکہ اس پرکھ میں ہیکسین اور آبی فریکشن غیر فعال تھے۔

انسداد پھیلاؤ کی سرگرمی

HeLa اور MCF7 کینسر کے خلیات کے علاج کے نتائج مختلف نچوڑوں کے لیے mg/ml میں پانچ مختلف ارتکاز کے ساتھ ظاہر کرتے ہیں کہ HeLa کینسر سیل لائن کے خلاف سرگرمی MCF7 کینسر سیل لائن کے مقابلے میں بہتر تھی۔ تاہم، ہیکسین کا عرق سب سے زیادہ طاقتور تھا۔

HeLa اور MCF7 کینسر سیل لائنوں کے خلاف بالترتیب 98.9 اور 97.4 فیصد کی روک تھام کے فیصد کے ساتھ 4mg/ml ارتکاز، جبکہ اسی ارتکاز میں میتھانول ایکسٹریکٹ نے 97.2 اور 95.6 فیصد کے ساتھ HeLa اور MCF7 کینسر سیل لائنوں کے خلاف قوی سرگرمی ظاہر کی۔ مثبت کنٹرول doxorubicin (تصویر 5a) کے مقابلے میں، R. rothschildianus پتوں سے مختلف حصوں کی نمائش پر HeLa سیل فیصد کی روک تھام کو دستاویز کیا گیا تھا۔ کنٹرول (تصویر 5b) کے مقابلے، R. rothschildianus کے پتوں کے چار حصوں کے لیے MCF7 خلیات کی فیصد کی روک تھام کا تعین اسی طرح کیا گیا تھا۔

بحث

ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینگنگ پرکھ کو کم پاؤنڈز میں اینٹی آکسیڈینٹ کی صلاحیت کا پتہ لگانے کے ایک آسان طریقہ کے طور پر جانا جاتا ہے۔ ڈی پی پی ایچ ایک مستحکم فری ریڈیکل ہے جو الکحل کے محلول میں جامنی رنگ دیتا ہے، اور ہائیڈروجن عطیہ کرنے والے اینٹی آکسیڈنٹس کی موجودگی میں کمی پر محلول کو بے رنگ کر دیتا ہے [29]۔ لہذا، R. rothschildianus کے پتوں کو اینٹی آکسیڈنٹس کا قدرتی ذریعہ سمجھا جا سکتا ہے، خاص طور پر ایسیٹون فریکشن کے لیے، جس نے 6.3±0.4ug/ml کی ICso قدر ظاہر کی۔ اسی طرح کے نتائج ہیکسین فریکشن کے لیے بھی حاصل کیے گئے، جس کی ICso ویلیو 7.9±1.3 ug/ml (ٹیبل 4) تھی۔ نتائج کا موازنہ Trolox سے کیا گیا، جو ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ مرکب ہے، جو 3.1±0.9 ug/ml کے برابر ہے۔ اس کے برعکس، پانی کا حصہ صرف معتدل اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی دکھاتا ہے، جس کی اعلی ICso قدر 19.9±0.7 ug/ml ہے، جبکہ میتھانول کا عرق اس پرکھ میں غیر فعال تھا۔ یہ نتائج پلانٹ میں فینولز اور فلیوونائڈز کی موجودگی سے مطابقت رکھتے تھے، جو کہ آزاد ریڈیکلز کے لیے ایک طاقتور سکیوینجر ذریعہ ہے جیسا کہ اس تحقیق میں DPPH کے ساتھ دکھایا گیا ہے۔ یہ نتائج پودوں میں فینولک مرکبات کے تنوع، سادہ فینول جیسے گیلک ایسڈ، اور زیادہ نفیس فینولک ایسڈ جیسے اینتھوسیانز، ہائیڈروکسائل سنامک ایسڈ ڈیریویٹیوز، اور فلیوونائڈز کے مطابق تھے۔ مرکبات کے ان تمام طبقوں کو ان کے متعدد جسمانی افعال کی وجہ سے وسیع توجہ حاصل ہوئی ہے، خاص طور پر آزاد ریڈیکل سکیوینگنگ، اینٹی میوٹیجینک، اینٹی سوزش، اور اینٹی سرطان پیدا کرنے والی سرگرمیاں [30]۔ جیسا کہ جدول 3 میں درج ہے، ایسیٹون ایکسٹریکٹ نے فینولک مرکبات اور فلیوونائڈز دونوں کا سب سے زیادہ مواد ریکارڈ کیا، بالترتیب 28.2±0.8mg GAE/g اور 107.3±4.6mg RU/g۔ کچھ رومیکس پرجاتیوں کے بارے میں ایک پچھلی رپورٹ میں رومیکس ویکیریئس ایل کے پتوں سے ایتھنول کے عرق میں فینولک مرکبات پائے گئے، جو ممکنہ طور پر آزاد ریڈیکل رد عمل میں ملوث تھے، جس سے مستحکم استعمال شدہ ڈی پی پی ایچ ریڈیکل کو اس کے اصلی وائلیٹ سے مشتق ڈیفینائل پکریل ہائیڈرا زائن بنا دیا گیا۔ رنگ [31]۔

R. rothschildianus leaves were an excellent alternative natural source of lipase inhibitory agents. The acetone fraction showed an ICso value of 26.3±0.6μg/ml, which was very close to that of the reference compound orlistat （12.3±0.3μg/ml）. Hexane and methanol fractions only re-corded moderate ICso values, equal to 39.8±0.3 μg/ml and 60.3±0.4μg/ml, respectively; while the aqueous fraction was inactive. Pancreatic lipase is a major enzyme involved in enterocyte triglyceride absorption. Therefore, its inhibition represents an important strategy in the management of obesity [32]. Plants rich in phenolic compounds have been screened in several reports for anti-lipase activity. Lipase inhibitory activity ranging from 40 to >بہت سے مختلف خاندانوں میں وٹرو ٹیسٹ کے ذریعے 70 فیصد پایا گیا ہے، بشمول Solanaceae (Solanum tuberosum)، Brassicaceae (Brassica nigra and Raphanus sativus)، Rosaceae (Malus Domestica Borkh. اور Filipendula ulmaria (L.) Maxim.)

(Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. and Ericaceae Vaccinium myrtillus L.)، اور Fabaceae (Pisum sativum L. اور Phaseolus vulgaris L.) [33]۔

19 کے ICso کے ساتھ ایسٹون فریکشن -amylase کا سب سے زیادہ قوی روک تھام کرنے والا تھا۔ اس نے تجویز کیا کہ R. rothschildianus ذیابیطس کے لیے ایک طاقتور جڑی بوٹیوں کا علاج ہو سکتا ہے۔ پانی کے حصے نے اس پرکھ میں 45.7±0.3 ug/ml کی ICso قدر کے ساتھ صرف اعتدال پسند سرگرمی دکھائی، جبکہ ہیکسین کی ICso قدر 354.8±1.2 ug/ml تھی۔ میتھانول کا حصہ -amylase کے خلاف غیر فعال تھا۔ پانی کے حصے کے ایک اچھا انزائم روکنے والا ہونے کی ممکنہ وضاحت saponins کی موجودگی تھی۔ اس سے پہلے کی سائنسی تحقیقات سے پتا چلا ہے کہ سیپوننز ذیابیطس کے خلاف بایو ایکٹیو تھے [34]۔ امیلیس کے خلاف ایسٹون ایکسٹریکٹ فریکشن کا قوی اثر فینولک مرکبات اور فلیوونائڈز دونوں کے اعلی مواد کی وجہ سے ہوسکتا ہے۔ Corchorus olitorius ماہرین -amylase اور -glucosidase inhibitory اثرات اجزاء کی وجہ سے، خاص طور پر phenolic مرکبات جیسے caf-feic acid [35]۔

ایسیٹون فریکشن نے 54.9±0.3ug/ml کے ICso کے ساتھ a-glucosidase پر سب سے بڑی روک تھام کی کارروائی کی، acarbose کے مقابلے میں، حوالہ مرکب، 37.1±0.3ug/ml پر . اس کے برعکس، میتھانول کے ایکسٹریکٹ فریکشن نے 251.2±0.4ug/ml کے ICso کے ساتھ، a-glucosidase کی صرف اعتدال پسند روک تھام ظاہر کی، جب کہ اس پرکھ میں ہیکسین اور پانی کے حصے غیر فعال تھے۔ زبانی ہائپوگلیسیمک ایجنٹوں کی تیسری قسم میں -گلوکوسیڈیس انحیبیٹرز شامل ہیں۔ مختلف قسم کے -گلوکوسیڈیز انابیٹرز ہیں، جیسے کہ ایکربوز اور ووگلیبوز، جو عام طور پر پودوں کے ذرائع میں پائے جاتے ہیں۔ وہ کھانے کے بعد خون میں گلوکوز کی سطح کے قابل قدر استحکام کو ظاہر کرتے ہیں اور ذیابیطس mellitus کے انتظام میں طبی طور پر استعمال ہوتے رہے ہیں [36، 37]۔

دونوں کینسر کے خلیات (HeLa اور MCF7) کے مختلف نچوڑوں کے لیے mg/ml میں مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ HeLa کینسر سیل لائن کے خلاف عمومی سرگرمی MCF7 کینسر سیل لائن سے بہتر تھی۔ ہیکسین ایکسٹریکٹ نے 4mg/ml کے ارتکاز میں HeLa اور MCF7 کینسر سیل لائنوں کے خلاف بالترتیب 98.9 اور 97.4 فیصد کی روک تھام کے ساتھ قوی انسداد کینسر سرگرمی ظاہر کی، جبکہ اسی ارتکاز میں میتھانول ایکسٹریکٹ نے HeLa اور MCF7 کینسر سیل لائنوں کے خلاف قوی سرگرمی ظاہر کی۔ اور 95.6 فیصد روکنا فیصد۔ پچھلے نتائج سے، ہیکسین فریکشن نے HeLa اور MCF7 سیل دونوں پر ایک اہم سائٹوٹوکسک اثر ڈالا، جس میں روکنا فیصد بالترتیب 4mg/ml ہیکسین فریکشن کنسنٹریشن پر 99 اور 92.4 فیصد تک پہنچ گیا۔ یہ terpenoids اور steroids دونوں کے cytotoxic اثرات سے مطابقت رکھتا تھا، جو ہیکسین فریکشن میں پائے گئے تھے۔ کچھ پودوں میں پائے جانے والے قدرتی طور پر پائے جانے والے سٹیرایڈ اور ٹرائیٹرپینائڈ ڈیوسجینن کو چھاتی کے کینسر کو روکنے کے لیے دکھایا گیا ہے [38، 39]۔

نتیجہ

R. rothschildianus پتوں پر اس تحقیق کے نتائج نے اشارہ کیا کہ ایسیٹون کے عرق کے حصے میں ذیابیطس اور موٹاپے کے لیے فائٹو تھراپی فراہم کرنے کی قابل قدر صلاحیت ہے، اس کی بنیاد پر لپیس، a-amylase، اور a-glucosidase کی قوی روک تھام ہے۔ اس کے علاوہ، ایسیٹون فریکشن نے بھی ایک اہم فری ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی ظاہر کی۔ دوسری طرف، ہیکسین فریکشن نے HeLa اور MCF7 سیل لائنوں دونوں کی نمایاں روک تھام ظاہر کی، جو اس کے terpenes اور steroids کے اعلیٰ مواد سے متعلق ہو سکتی ہے۔ اس مطالعے میں یہ مشاہدات موٹاپے، ذیابیطس میلیتس اور کچھ کینسر کے علاج میں موثر نئی قدرتی فارماسیوٹیکل فارمولیشن تیار کرنے کے لیے ویوو اسٹڈیز میں مزید آگے بڑھ سکتے ہیں۔

یہ مضمون جرادات وغیرہ سے ماخوذ ہے۔ BMC تکمیلی دوا اور علاج (2021) 21:107