سومی پروسٹیٹک ہائپرپلاسیا کی ترقی پر سیستانچ سالسا کے انسداد پھیلاؤ کے اثرات Ⅰ
Oct 18, 2022
خلاصہ:Cistanche Tubulosaکے علاج کے لئے روایتی ادویات میں استعمال کیا گیا ہےگردے کی کمی, نیورستھینیا, جنسی کمزوری کی بیماریاں، اورسومی پروسٹیٹک ہائپرپالسیا(BPH)۔ اس تحقیق کا مقصد اس طریقہ کار کی چھان بین کرنا تھا جس کے ذریعے C. tubulosa extract (CSE)پروسٹیٹ ٹشو پر اینٹی پھیلاؤ اثربی پی ایچ سے متاثرہ چوہوں کا۔ BPH پر CSE کے اثرات کا جائزہ پروسٹیٹ کے وزن، seruln dihydrotestosterone (DHT) کی پیداوار، اور BPH سے متاثرہ چوہوں کے پروسٹیٹ ٹشو میں 5o-reductase ٹائپ 1 اور ٹائپ 2 کے mRNA اظہار کے لحاظ سے لگایا گیا۔ اس کے علاوہ، پروسٹیٹ غدود کی مورفولوجی کے ہسٹولوجیکل امتحان کے لیے ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) کے داغ لگائے گئے، اور پروسٹیٹ ٹشو میں پروٹین کے اظہار کی سطح کی مغربی بلاٹ تجزیہ کے ذریعے جانچ کی گئی۔ CSE کے علاج سے پروسٹیٹ وزن، سیرم DHT ارتکاز، اور BPH-حوصلہ افزائی چوہوں کے پروسٹیٹ ٹشو میں 5o-reductase ٹائپ 1 اور ٹائپ 2 کے mRNA اظہار میں کمی واقع ہوئی۔ اس کے علاوہ، CSE علاج نے سوزش سے متعلق پروٹین (انڈیکیبل نائٹرک آکسائیڈ سنتھیس اور سائکلو آکسیجن 2) اور اپوپٹوس سے وابستہ پروٹین (کیسپیس-3 اور Bcl-2 فیملی پروٹینز) کے اظہار کی سطح کو ریگولیٹ کرکے سیل کے پھیلاؤ کو دبا دیا۔ سوزش اور اپوپٹوس سے متعلق پروٹین کے اظہار کو منظم کرنے کی صلاحیت کی وجہ سے CSE BPH کے لیے ممکنہ علاج کا امیدوار ہو سکتا ہے۔
مطلوبہ الفاظ:سومی پروسٹیٹک ہائپرپالسیا, Cistanche Tubulosa, dihydrotestosterone, inflammation, apoptosis, Bcl-2.
تعارف
Cistanche Tubulosaچین کے شمال مغرب میں رہنے والا ایک پرجیوی پودا ہے۔ اس کا تنا ایک اہم روایتی مشرقی دوا ہے جو کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔گردے کی کمیاورنیورستھینیا(Deng et al.2004) C.tubulosa کے علاج میں بھی کارگر ہونے کی اطلاع دی گئی ہے۔جنسی کمزوری کی بیماریاں، جیسا کہنامردیاورسومی پروسٹیٹک ہائپرپالسیا(BPH) کورین ادویات کی کتاب میں جسے DonguiBogam کہا جاتا ہے۔ Phenylethanoid glycosides (PhGs) اس جڑی بوٹی کے اہم فعال اجزاء ہیں (Jimenez and Riguera 1994)۔ بہت سے PhGs میں اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی ٹیومر اثرات سمیت بائیو لوجیکل خصوصیات کی ایک وسیع رینج دکھائی گئی ہے۔ Acteoside، C. tubulosa سے ایک PhG، سیریبلر گرینول نیوران (Pu et al. 2003) میں 1-methyl-4-phenylpyridinium ion (MMP*) کے ذریعے پیدا ہونے والے apoptosis کو روکتا ہے۔ اگرچہ C. tubulosa کے جسمانی افعال پر مطالعہ کیا گیا ہے، BPH پر C. tubulosa کے اثرات کے تحت مالیکیولر میکانزم (s) کی تحقیق نہیں کی گئی ہے۔
غدود کے اندر غیر کینسر کی نشوونما کی وجہ سے BPH کی خصوصیت پروسٹیٹ کے بڑھنے سے ہوتی ہے (Andriole et al. 2004)۔ عمر رسیدہ آبادی کے تناظر میں BPH کے پھیلاؤ اور واقعات میں اضافہ ہو رہا ہے۔ 2030،20 تک امریکی آبادی کا 20 فیصد 65 سال یا اس سے زیادہ عمر کا ہو جائے گا، ایک ایسا اعداد و شمار جس میں 20 ملین سے زیادہ مرد شامل ہوں گے (Parsons 2010)۔ اگرچہ BPH بوڑھے مردوں میں ایک عام عارضہ ہے، اس کی ایٹولوجی اور پیتھالوجی بی پی ایچ کی پوری طرح تعریف نہیں کی گئی ہے، اور فی الحال بی پی ایچ کے لیے کوئی بہترین علاج نہیں ہے (Djavan et al.2010)۔
BPH کے علاج کے اختیارات میں فارماسولوجیکل اور جراحی کی حکمت عملی شامل ہیں۔
حالیہ برسوں میں، BPH کے مریضوں میں جراحی مداخلتوں کی تعداد فارماسولوجیکل علاج کے حق میں کم ہوئی (Emberton et al. 2011)۔ BPH کی نوعیت کی وجہ سے، فارماسولوجیکل علاج کے لیے ادویات کے طویل اور مسلسل استعمال کی ضرورت ہوتی ہے۔ لہذا، دواؤں کی طویل اور مسلسل برداشت ایک بہت اہم مسئلہ ہے. مختلف قسم کے فارماکو-لوجیکل ایجنٹس جیسے کہ 5a-reductase inhibitors (finasteride اور du-tasteride) اور a-adrenoceptor antagonists (alfuzosin, terazosin, doxazosin, tamsulosin) BPH کے علاج کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں (Lepor 2011;
Untergasser et al.2005)۔BPH کے علاج کے لیے اہم فارماسولوجیکل ایجنٹ 5a-reductase inhibitors ہیں، جو 5o-dihydrotestosterone کی سطح کو regu-late، اور o-adrenergic blockers (Tiwari et al. 2005) کے لیے جانا جاتا ہے۔ اگرچہ یہ فارماسولوجیکل ایجنٹ BPH کی ترقی کو نمایاں طور پر روکتے ہیں، متعدد مطالعات نے ان کے ناپسندیدہ ضمنی اثرات کی اطلاع دی ہے (Patel and Chapple 2006)۔ مثال کے طور پر، Finasteride کے مختلف ضمنی اثرات کی اطلاع دی گئی ہے، بشمول چکر آنا، پٹھوں کی خرابی، اور سٹیرایڈل ہارمونز سے ساختی مماثلت کی وجہ سے شدید مایوپیتھی (McConnell et al.2003; Uygur et al.1998)۔کیونکہ یہ فارماسولوجیکل ایجنٹ ناپسندیدہ ضمنی اثرات ظاہر کرتے ہیں، اس لیے جڑی بوٹیوں کے علاج تلاش کرنا جو BPH کا مؤثر طریقے سے علاج کرتے ہیں کافی طبی قدر رکھتے ہیں۔
BPH پر C. tubulosa کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ C. tubulosa extract (CSE) ٹیسٹوسٹیرون سے متاثرہ BPH چوہے کے ماڈلز میں پروسٹیٹک سیل کی نمو اور اپوپٹوسس کے درمیان عدم توازن کو ماڈیول کر سکتا ہے۔
مواد اور طریقے مواد اور ری ایجنٹس
C.tubulosa Omniherb Co.Ltd سے خریدا گیا تھا۔ (Daegu, Republic Korea) اور finasteride کو Merck اور Co.Inc سے حاصل کیا گیا تھا۔ (نیو جرسی، امریکہ)۔ ٹیسٹوسٹیرون، فینیل میتھائل سلفونیل فلورائڈ (PMSF)، ٹرائٹن X-100، پروپیڈیم آئوڈائڈ (PI)، نونائیڈیٹ P-40 (NP-40)، اور پروٹین انحیبیٹر کاکٹیل (PIC) سگما-الڈرچ سے خریدے گئے تھے۔ کیمیکل کمپنی (سینٹ لوئس، مسوری، امریکہ)۔ GAPDH oligonucleotide پرائمر اور 5o-reductase type 1 اور type 2 بائیونیر (Deajeon, Korea) سے خریدے گئے تھے، اور SYBR Primix Ex Taq Takara (Shuzo, Shiga, Japan) سے خریدے گئے تھے۔ اینٹی iNOS (M{{9}) کے لیے اینٹی باڈیز۔ })، COX-2(C-20), poly(ADP-ribose)polymerase-1(PARP-1,(D-1),caspase{{ 16}} (H-277), Bcl-2(C-2), Bcl-xL(H-5), Bax (B-9)، اور اینٹی- -ایکٹین (ACTBD11B7) سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی (سانتا کروز، کیلیفورنیا، USA) سے خریدی گئی تھی۔ اینٹی پی سی این اے کے لیے اینٹی باڈی BD بایو سائنسز، فارمنگن (سان ڈیاگو، کیلیفورنیا، USA) سے خریدی گئی تھی۔ C کی تیاری tubulosa اقتباس (CSE)
C. tubulosa کی جڑی بوٹیاں Omniherb Co.Ltd سے خریدی گئی تھیں۔ (Yeongcheon، Kyungpook، جمہوریہ کوریا)۔ ان میں نمی کا مواد تھا۔<13% by="" weight="" and="" were="" air-dried.="" afterward,="" herbs="" underwent="" extraction="" with="" 50%(v/v)="" ethanol-water="" at="" 60="" ℃for="" 8="" h.="" the="" extract="" obtained="" was="" filtered="" through="" 20="" μm="" cartridge="" paper,="" and="" ethanol="" was="" removed="" by="" vacuum="" rotary="" evaporation="" (eyela,="" japan).="" the="" concentrate="" was="" subsequently="" freeze-dried,="" and="" the="" yield="" was="" found="" to="" be="" 12%="" w/w.="" the="" experiment="" was="" performed="" by="" dissolving="" the="" dry="" extract="" in="" distilled="" water,="" and="" the="" rest="" of="" extract="" was="" stored="" at="" -20="" ℃.="" the="" identities="" of="" the="" active="" components="" of="" the="" extract,as="" determined="" by="" hplc,="" were="" reported="" previously(jiang="" and="" tu="">
جانور
دس ہفتے پرانے نر اسپراگ ڈولی چوہے (200 ± 20 گرام) ڈیہان بائیو لنک (ڈیجیون، جمہوریہ کوریا) سے خریدے گئے تھے۔ جانوروں کو ایسے حالات میں رکھا گیا تھا جو لیبارٹری کے جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے رہنما خطوط کے مطابق تھے، جو سنگجی یونیورسٹی کی ادارہ جاتی اینیمل کیئر کمیٹی (Reg. No.{5}}) کے ذریعے گود لیے گئے تھے اور جاری کیے گئے تھے۔ تجربہ شروع کرنے سے پہلے چوہوں کو 2 ہفتوں تک لیبارٹری کے حالات کے مطابق بنایا گیا تھا۔ انہیں 4 ہفتوں تک خوراک اور پانی تک مفت رسائی فراہم کی گئی اور پورے تجربے کے دوران 22 ± 2 ڈگری کے مستقل درجہ حرارت اور 55 ± 9 فیصد کی نسبتہ نمی پر 12 گھنٹے روشنی/ 12 گھنٹے تاریک سائیکل کے تحت برقرار رکھا گیا۔ چوہوں کو تصادفی طور پر 4 گروپوں میں سے ایک کو تفویض کیا گیا تھا (n{15}}): کنٹرول گروپ (کون، گاڑیوں کے حل کے ساتھ نارمل پروسٹیٹ: فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) 200μL، po）؛ BPH-حوصلہ افزائی گروپ （BPH）، BPH- حوصلہ افزائی گروپ کو فائنسٹرائڈ کے ساتھ علاج کیا گیا (5 mg/kg/day, po, (Fina))؛ BPH-حوصلہ افزائی گروپ CSE کے ساتھ علاج کیا گیا (200 mg/kg/day; po) کنٹرول گروپ میں چوہوں کو کھلا کاٹا گیا اور پھر zoletil@50 (20 mg/kg, ip) کے ساتھ اینستھیٹائزیشن کے بعد خصیوں کو ہٹائے بغیر سلائی کر دیا گیا؛ دوسرے گروپوں میں چوہوں کو کاسٹر کیا گیا، صحت یابی کے 3 دن کے بعد، BPH کی حوصلہ افزائی کرنے والے گروپوں کو ٹیسٹوسٹیرون پروپیونیٹ (10mg/kg) کا انجکشن لگایا گیا۔ /day خون کے نمونے caudal vena cava سے لیے گئے تھے، اور سیرم کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے الگ کر کے-80 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔ پورے پروسٹیٹ غدود کو نکال کر وزن کیا گیا تھا (Guo et al. 2004)۔
پروسٹیٹ وزن سے جسمانی وزن کا تناسب
پروسٹیٹک ٹشوز کو فوری طور پر نکالا گیا، کلی کیا گیا اور ان کا وزن کیا گیا۔ پروسٹیٹ وزن سے جسمانی وزن کا تناسب (PW/BW تناسب) کا حساب لگایا گیا جیسا کہ ذیل میں بیان کیا گیا ہے۔
PW/BW تناسب
= (تجرباتی گروپ سے جانور کا ہر پروسٹیٹ وزن/تجرباتی گروپ سے جانور کا ہر جسمانی وزن) x 100 پروسٹیٹ وزن کی نمو روکنا
مطالعہ کی تکمیل پر، پروسٹیٹ کو ہٹا دیا گیا اور وزن کیا گیا۔ ترقی کی روک تھام کا فیصد اس طرح شمار کیا گیا:100-[(علاج شدہ گروپ کنٹرول گروپ)(BPH گروپ کنٹرول گروپ)×100]۔ dihydrotestosterone (DHT) کے تجزیہ کے سیرم کی تعداد
DHT کے سیرم کی تعداد کا تعین کمرشل-سیشل ELISA (ALPCO Diagnostics, Salem, New Hampshire, USA) کے ساتھ کیا گیا تھا۔ جیسا کہ کہتے ہیں کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔
ہسٹولوجیکل تجزیہ
ہر گروپ میں پروسٹیٹ ٹشو کو 4 فیصد فارملین محلول میں طے کیا گیا تھا، پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا، اور پھر 4 بجے کے حصوں میں کاٹ دیا گیا تھا۔ ہسٹولوجیکل معائنے کے لئے حصوں کو ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) سے داغ دیا گیا تھا۔ تصاویر SZX10 مائکروسکوپ (اولمپس، ٹوکیو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کی گئیں۔ ہسٹولوجیکل تجزیہ اور پروسٹیٹ (TETP) سے اپیتھیلیم ٹشو کی موٹائی کو سیول میڈیکل سائنس انسٹی ٹیوٹ (سیول، کوریا) کے ایک پیشہ ور ہسٹولوجسٹ نے استعمال کیا۔ ہسٹولوجیکل تجزیہ میں معروضی تشخیص کے لیے لائیکا ایپلیکیشن سویٹ (LAS، ver. 3.3.0) سافٹ ویئر۔ مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) تجزیہ
ہر جانور کے پروسٹیٹک ٹشو کو ہم آہنگ کیا گیا تھا، اور مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق Easy-Blue@ Reagent (Intron Biotech-nology Inc., Gyeongi-do, Republic of Korea) کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA کو الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ Epoch@micro-volum spectrophotometer system (BioTek Instruments, Inc. Winooski, Vermont, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA کی مقدار درست کی گئی۔ جگر اور ویسرل ایڈیپوز ٹشوز سے کل آر این اے کو اعلی صلاحیت والی سی ڈی این اے ریورس ٹرانسکرپشن کٹ (اپلائیڈ بایو سسٹم، فوسٹر سٹی، کیلیفورنیا، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے سی ڈی این اے میں تبدیل کیا گیا۔ )۔ 5o-reductase قسم 1 کے oligonucle-otide پرائمر، جو چوہے سے ڈیزائن کیے گئے تھے، GGAAGG TTT CAT GGCCTT CG (فارورڈ) اور TCG AGG GCA GCT GTA TG (ریورس)، 5o-ریڈکٹیس ٹائپ 2 پرائمر، چوہے سے ڈیزائن کیے گئے، ATG تھے۔ GGG ACC CTG ATC CTG TG (فارورڈ) اور CGA CAC CACAAA GGA AGG CA (ریورس)، اور GAPDH پرائمر، جو گھر کی حفاظت کرنے والے جین کے طور پر استعمال ہوتے ہیں اور چوہے سے بنائے گئے تھے، TGA TTC TAC CCA CGG CAA GT (فارورڈ) اور AGC تھے۔ ATC ACC CCA TTT GAT GT (الٹ)۔ ریورس ٹرانسکرپشن تھرموسی کلر (جین Amp⑧ PCR سسٹم 9700، اپلائیڈ بایو سسٹم) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، اور نتائج کو GAPDH کے لیے بہترین کثافت کے تناسب کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ مغربی دھبے کا تجزیہ
پروسٹیٹ ٹشوہر جانور سے کمرشل لیسیز بفر PRO-PREP⑧ (انٹرون بائیوٹیکنالوجی انکارپوریٹڈ) میں ہم آہنگ کیا گیا تھا اور سیل لیسز کو دلانے کے لیے برف پر 25 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ٹشو کے عرق کو 20 منٹ کے لیے 16 000g(4 ڈگری) پر سینٹرفیوج کیا گیا، اور سپرنٹنٹ کو صاف ٹیوب میں منتقل کیا گیا۔ پروٹین کے ارتکاز کو روکنے میں عام ہسٹولوجک تبدیلیاں دکھائی گئیں، جن میں ایک گاڑھا ہوا غدود کا اپیتھلیم، غدود کے لیومن کی طرف اشارہ کرنے والا ایک خالی سائٹوپلازم، اور ایک کم غدود کے لومینل ایریا (تصویر 3A) شامل ہیں۔ 4 ہفتوں تک CSE کی انتظامیہ نے ان مخصوص ہائپر پلاسٹک پیٹرن کو دبا دیا، جو کہ عام پروسٹیٹک ٹشو سے پروسٹیٹک ہائپرپلاسیا میں ہسٹولوجیکل تبدیلی کی نمائندگی کرتے ہیں۔ مختصراً، فائنسٹرائیڈ اور سی ایس ای کے زیر علاج گروپوں کے ہسٹولوجیکل معائنے نے پروسٹیٹک ہائپرپلاسیا کو کم کرنے کا واضح رجحان ظاہر کیا۔ اس کے علاوہ، جیسا کہ تصویر 3B میں دکھایا گیا ہے، TETP تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ BPH سے متاثرہ چوہوں میں سب سے زیادہ گاڑھا اپیتھیلیل ٹشو دیکھا گیا تھا جو کسی دوسرے اسٹڈی گروپ کے مقابلے میں تھا، اور فائنسٹرائیڈ- اور CSE سے علاج شدہ گروپوں نے پروسٹیٹ کی موٹائی میں نمایاں کمی ظاہر کی تھی۔ .
پروسٹیٹ اپکلا خلیوں کے پھیلاؤ کا اندازہ کرنے کے لیے، ہم نے BPH سے متاثرہ چوہوں کے پروسٹیٹ ٹشو میں PCNA کے پروٹین ایکسپریشن کی جانچ کی۔ جیسا کہ تصویر میں دکھایا گیا ہے۔ تاہم، BPH-حوصلہ افزائی گروپ کے مقابلے میں، Finasteride- اور CSE-علاج شدہ گروپوں نے PCNA پروٹین کے اظہار کو کم کیا، جو BPH میں ان کے پھیلاؤ مخالف اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔
سیرم ڈل ہائیڈروٹیسٹوسٹیرون (DHT) کی پیداوار اور 5a-reductase ٹائپ 1 اور ٹائپ 2 mRNA کی سطحوں پر Cistanche Tubulosa Extract (CSE) کا اثر سومی پروسٹیٹک ہائپرپلاسیا (BPH) سے متاثرہ چوہے کے ماڈلز کے پروسٹیٹ ٹشوز میں۔ (A) DHT کے سیرم کی تعداد کا تعین ELISA پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ (B) 5a-Reductase ٹائپ 1 اور ٹائپ 2 mRNA اظہار میں پروسٹیٹ ٹشو کا مقداری ریئل ٹائم پی سی آر کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا۔ دکھایا گیا ڈیٹا فی گروپ 6 چوہوں کے اوسط ± SEM کی نمائندگی کرتا ہے۔<><0.001 vs.con=""><0.001 vs.bph="">
