BCG کی حوصلہ افزائی سے تربیت یافتہ استثنیٰ ایک ریسرچ رینڈمائزڈ کلینیکل ٹرائل میں Acellular Pertussis ویکسینیشن ردعمل کو بڑھاتا ہے۔

تعارف

Pertussis ایک انتہائی منتقل ہونے والی شدید سانس کی بیماری ہے جس کی وجہ جراثیم Bordetella pertussis ہے اور یہ ویکسین کی زیادہ کوریج کے باوجود صحت عامہ کے ایک سنگین مسئلے کے طور پر دوبارہ ابھرا ہے۔ برسوں تک، صنعتی ممالک میں اس بیماری کو پورے سیل پرٹیوسس ویکسین (wPs) کے ذریعے ویکسینیشن کے ذریعے کنٹرول کیا گیا جو 1940s-1950 میں لاگو کیا گیا تھا۔ یہ ویکسین انتہائی موثر اور طویل مدتی تحفظ کی حوصلہ افزائی کرتی تھیں۔

تاہم، اعلی ردعمل اور حفاظتی خدشات نے 1990-2000 کی دہائی میں ان کی جگہ سیلولر پرٹیوسس ویکسین (اے پی ایس) کے ذریعے لی۔ aP بوسٹر ویکسین، بشمول امتزاج ویکسین جن میں تشنج اور خناق ٹاکسائڈ (Tdap) یا تو غیر فعال پولیو وائرس (IPV) (Tdap-IPV) کے ساتھ یا اس کے بغیر، اس کے فوراً بعد متعارف کرایا گیا۔ اے پی ویکسین اب بڑے پیمانے پر پری اسکول کے بچوں، نوعمروں اور بالغوں میں قوت مدافعت بڑھانے کے لیے استعمال ہوتی ہیں۔ ان اقدامات اور ان کے بہتر حفاظتی پروفائل کے باوجود، متعدد مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ حوصلہ افزائی قوت مدافعت سب سے بہتر رہتی ہے اور وقت کے ساتھ ساتھ کم ہوتی جاتی ہے۔ مزید برآں، بار بار اے پی کی خوراک کے بعد تحفظ کا دورانیہ بتدریج 4–6 کم ہوتا ہے۔ ویکسینیشن کی نئی اور بہتر حکمت عملیوں کی بڑھتی ہوئی ضرورت نے نئے معاونین کی تلاش کا باعث بنی ہے جو فطری قوت مدافعت کو نشانہ بناتے ہیں اور aPs7–9 کے لیے مخصوص استثنیٰ کو بڑھاتے ہیں۔

مشترکہ ویکسین قوت مدافعت کو بڑھا سکتی ہیں۔ امتزاج ویکسین کئی مختلف بیماریوں سے بچاؤ والی ویکسین کا مجموعہ ہیں جو ایک ہی وقت میں مریضوں کو متعدد تحفظات فراہم کرتی ہیں، جس سے متعدد انجیکشن لگنے کے تناؤ اور درد کو کم کیا جاتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، مجموعہ ویکسین ویکسین کی قوت مدافعت کو بھی بہتر بنا سکتی ہے، کیونکہ یہ زیادہ مدافعتی ردعمل کو متحرک کر سکتی ہے اور زیادہ اینٹی باڈیز اور مدافعتی خلیات پیدا کر سکتی ہے، جس سے بہت سی مختلف بیماریوں سے بچنے کی صلاحیت کو مؤثر طریقے سے بہتر بنایا جا سکتا ہے۔ ہماری روزمرہ کی زندگی میں قوت مدافعت کو بہتر بنانا بہت ضروری ہے۔ Cistanche قوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے۔ گوشت میں پولی سیکرائڈز انسانی مدافعتی نظام کے مدافعتی ردعمل کو منظم کر سکتے ہیں، مدافعتی خلیوں کی تناؤ کی صلاحیت کو بہتر بنا سکتے ہیں، اور مدافعتی خلیوں کے اثر کی نس بندی کو بڑھا سکتے ہیں۔

cistanche کیا ہے جاننے کے لیے کلک کریں۔

Bacille Calmette-Guérin (BCG) ویکسین مائکوبیکٹیریل انفیکشن جیسے کہ تپ دق 10 کے ساتھ ساتھ ماؤس ماڈلز میں غیر متعلقہ پیتھوجینز کے ساتھ ثانوی انفیکشن سے تحفظ فراہم کرتی ہے۔ انسانوں میں، یہ غیر مخصوص فائدہ مند اثرات بچوں کی اموات میں کمی سے منسلک ہیں 11,12 اور بے ترتیب کلینیکل ٹرائلز 10,13 میں ان کی توثیق کی گئی ہے۔ BCG پیدائشی مدافعتی خلیوں میں طویل مدتی تبدیلیاں لاتا ہے جو غیر متعلقہ پیتھوجینز کے ساتھ محرک کے لیے ان کی ردعمل کو بڑھاتا ہے۔ تربیت یافتہ استثنیٰ کہلانے والے اس عمل میں مونوسائٹس کی ایپی جینیٹک ری پروگرامنگ شامل ہوتی ہے اور BCG ویکسینیشن14 کے بعد ایک سال تک برقرار رہتی ہے۔ تربیت یافتہ استثنیٰ کی طبی مطابقت انسانوں میں ایسے مطالعات کے ذریعے ظاہر کی گئی ہے جو تربیت یافتہ استثنیٰ اور ویکسینیشن یا تجرباتی انسانی انفیکشن کو ثانوی قوت مدافعت 15-17 کے طور پر شامل کرنے کے لیے BCG کو بطور نمونہ استعمال کرتے ہیں۔ اس بات کے جمع ہونے والے شواہد موجود ہیں کہ BCG ویکسینیشن ویکسین کے لیے مدافعتی ردعمل کو تبدیل کرتی ہے۔ ایک حالیہ جائزے میں جن آٹھ مطالعات کا جائزہ لیا گیا، ان میں سے پانچ نے ویکسین کے لیے مخصوص مزاحیہ ردعمل ظاہر کیا۔

بی سی جی اور پرٹیوسس ویکسین کے باہمی اثر کو بیان کرنے کی کوششوں سے پتہ چلتا ہے کہ بی سی جی سے تربیت یافتہ استثنیٰ کا پرٹیوسس کے مدافعتی ردعمل پر مثبت اثر پڑ سکتا ہے۔ چوہوں میں، BCG کے ساتھ پہلے کی ویکسینیشن نے Th1 اور aP کے بعد مزاحیہ مدافعتی ردعمل کو بڑھایا، لیکن wP ویکسینیشن19 نہیں۔ انسانوں میں، آبادی کے لحاظ سے ایک مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ پرٹیوسس ویکسینیشن کے ساتھ BCG کی مشترکہ انتظامیہ نے 20 بچوں میں شرح اموات کو ترتیب وار ویکسین حاصل کرنے کے مقابلے میں کم کیا۔ ہمارے بہترین علم کے مطابق، آج تک کسی بھی مطالعہ نے بے ترتیب کنٹرول شدہ مطالعہ میں یہ تحقیق نہیں کی ہے کہ آیا تربیت یافتہ قوت مدافعت پرٹیوسس ویکسین کے لیے مدافعتی ردعمل کو تبدیل کرتی ہے یا اس نے BCG ویکسینیشن کی انتظامیہ کے وقت کا موازنہ دوسری ویکسینیشن یا چیلنج سے کیا ہے۔

یہاں، ہم نے جانچ کی کہ آیا BCG ویکسینیشن ویکسینیشن کے لیے مدافعتی ردعمل کو متاثر کرتی ہے، اور کیا تربیت یافتہ استثنیٰ ان ردعمل سے وابستہ ہے۔ ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ BCG کی حوصلہ افزائی سے تربیت یافتہ قوت مدافعت ap-مخصوص اینٹی باڈی، ap-مخصوص Th1 سیل ردعمل، اور Tdap-IPV امیونائزیشن کے 2 ہفتے بعد کل میموری B سیل کے ردعمل کو بڑھاتی ہے۔ یہ اضافہ IL-1 اور IL-6 سمیت تربیت یافتہ مدافعتی بائیو مارکر میں اضافہ کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھے۔ ہماری دریافتیں BCG ویکسینیشن کے ذریعے تربیت یافتہ استثنیٰ کے کردار کو اجاگر کرتی ہیں جو پرٹیوسس ویکسین کے لیے قوت مدافعت کو مضبوط کرتی ہیں۔

نتائج

مطالعہ ڈیزائن

Seventy-five healthy female volunteers were randomized to one of three cohorts to receive BCG and Tdap-IPV vaccines in different orders21. We chose to enroll only women since gender-specific effects of pertussis vaccines have been reported 22. The median age of the volunteers was 23, with no significant difference in age between cohorts (Kruskal–Wallis test; P = 0.6), as previously reported21. Two subjects were excluded from analysis for having a high anti-pertussis toxin IgG concentration before Tdap-IPV vaccination (>100 IU/ml)، جو پرٹیوسس 23,24 کے ساتھ حالیہ انفیکشن کا اشارہ ہے (تصویر 1a)۔

TdapIPV ویکسین کے ردعمل میں تبدیلیوں کی نشاندہی کرنے کے لیے جو تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ ہیں، "BCG سے تربیت یافتہ" کوہورٹ نے TdapIPV سے 3 ماہ قبل BCG حاصل کیا۔ ہم نے BCG ویکسینیشن کے وقت کے حساب سے دو کنٹرول گروپس کو بھی شامل کیا۔ "BCG پلس Tdap" کوہورٹ نے ایک ہی وقت میں مخالف اعضاء میں دونوں ویکسینیشن حاصل کیے، اور "Tdap-IPV" کوہورٹ نے پہلے Tdap-IPV اور BCG 3 ماہ بعد حاصل کیے (تصویر 1b)۔ ٹیکے لگانے سے پہلے اور بعد میں کئی بار خون جمع کیا گیا۔ ٹائم اسٹیمپس کی تعریف Tdap-IPV ویکسینیشن کی بیس لائن (-M3=3 مہینے پہلے، -M3 پلس W2 = 3 مہینے پہلے کے علاوہ 2 ہفتے، D0=Tdap-IPV کی بیس لائن یا بیک وقت BCG اور Tdap-IPV ویکسینیشن، اس کے بعد W2=2 ہفتے، M3 پلس W2=3 مہینے جمع 2 ہفتے اس کے بعد، Y1=1 سال اس کے بعد)۔ بنیادی نتائج Tdap-IPV ویکسینیشن کے 2 ہفتے یا 1 سال بعد انکولی مدافعتی ردعمل میں اضافے کے طور پر بیان کیے گئے تھے۔

مجموعی طور پر، ہم نے ویکسینیشن کے تین گروہوں میں 31 امیونولوجیکل نتائج کا اندازہ کیا۔ ہم نے پرٹیوسس اینٹیجنز پرٹیوسس ٹاکسن (PT)، filamentous haemagglutinin (FHA)، pertactin (PRN)، نیز ڈفتھیریا ٹاکسائڈ (DIPH) اور تشنج ٹاکسن (TET) 25 کے خلاف IgG کی اینٹی باڈی ارتکاز کی پیمائش کرنے کے لیے مالا پر مبنی ملٹی پلیکس امیونوسے کا استعمال کیا۔ کل B-سیل اور PRN کے مخصوص B-خلیوں کو فلوروسینٹلی لیبل والے PRN (ضمنی شکل 1) کا استعمال کرتے ہوئے فلو سائٹومیٹری کے ذریعے پورے خون میں براہ راست ماپا گیا۔ پرٹیوسس اینٹیجنز کے خلاف Th1 اور Th17 T-سیل کے ردعمل کی پیمائش پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) میں سے کسی ایک کے ساتھ PRN، PT، یا FHA کے ساتھ 7 دنوں تک کی گئی اور ELISA26 کے ذریعے خفیہ IFN، IL22، اور IL-17 کی پیمائش کی گئی۔

BCG ویکسینیشن غیر متعلقہ محرکات کے لیے مدافعتی سیل سائٹوکائن ردعمل کو بڑھاتی ہے، ایک ایسا رجحان جس کی وضاحت دو مختلف حیاتیاتی میکانزم کے ذریعے کی گئی ہے۔ پہلے عمل کو heterologous امیونٹی کہا جاتا ہے اور یہ T خلیات کے غیر مخصوص ایکٹیویشن پر منحصر ہے 27,28۔ دوسرا عمل جسے تربیت یافتہ استثنیٰ کہا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں پیدائشی مدافعتی خلیات کی طرف سے proinflammatory cytokine کی پیداوار میں اضافہ ہوتا ہے۔ ہم نے BCGTrained cohort کے لیے ثانوی نتائج کی وضاحت کی ہے کہ PBMCs کی سائٹوکائن کی پیداوار میں تبدیلی کے بعد گرمی سے ہلاک ہونے والے Candida albicans (C_alb)، Staphylococcus aureus (S_aur)، Bordetella pertussis (Bp) ، یا lipopolysaccharide (LPS)۔ جیسا کہ پچھلے مطالعات میں 16,21، ہم نے Th1/ 17 سائٹوکائنز IFN، IL-22، یا IL-17 کو 7 دن کے بعد ہیٹرولوگس امیونٹی، یا مونوسائٹ سے ماخوذ سائٹوکائنز IL-10 کی ریڈ آؤٹ کے طور پر مقدار درست کردی۔ , IL-6, IL-1, یا TNF 24 گھنٹے کے بعد تربیت یافتہ استثنیٰ کے لیے ریڈ آؤٹ کے طور پر (تصویر 1b)۔ سونیکیٹڈ مائکوبیکٹیریم تپ دق (Mtb) کے جواب میں سائٹوکائن کی پیداوار کو اینٹی مائکوبیکٹیریل قوت مدافعت کو کم کرنے کے لیے ماپا گیا۔

پہلے BCG ویکسینیشن Tdap-IPV-حوصلہ افزائی انکولی مدافعتی ردعمل کو بڑھاتا ہے

Tdap-IPV ویکسینیشن پر تربیت یافتہ استثنیٰ کے اثرات کو درست کرنے کے لیے، ہر ایک بنیادی اختتامی نقطہ کے لیے، ہم نے نمونہ وقت، ہمہ گیر رکنیت کے ساتھ ساتھ وقت اور کوہورٹ کے باہمی تعامل کے ساتھ ایک لکیری مخلوط اثرات کا ماڈل بنایا ہے۔ ہم نے دو تضادات کا جائزہ لیا: (i) ہر ایک گروہ کے اندر بنیادی لائن (D0) کے مقابلے میں اختلافات (ٹیکے لگانے کے بعد کے اثرات، ضمنی جدول 1)، اور (ii) ان تبدیلیوں کی شدت میں ہم آہنگی کے درمیان فرق (تفرقی) اثرات، ضمنی جدول 2)۔ تمام گروہوں نے Tdap-IPV حفاظتی ٹیکوں کے بعد پانچ اینٹیجنز کے اینٹی باڈی ردعمل میں نمایاں اضافہ کیا۔ اینٹی باڈی کی تعداد ایک سال کے بعد ویکسینیشن (Y1) تک بیس لائن سے زیادہ رہی، سوائے TET کے، جو BCGTrained اور BCG پلس Tdap کوہورٹس (ضمنی شکل 2a) میں کم ہو گئی تھی۔

امیونائزیشن کے 2 ہفتوں کے بعد تمام گروہوں میں گردش کرنے والے PRN پلس B خلیوں کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہوا تھا، جو بنیادی طور پر میموری B خلیات (MBCs) تھے (ضمیمہ تصویر 3a)۔ ہم نے گروہوں کے درمیان فرق نہیں دیکھا (ضمنی جدول 2 اور ضمنی شکل 3b)۔ Tdap-IPV کوہورٹ کے مقابلے میں، BCG سے تربیت یافتہ کوہورٹ نے PT، FHA، اور PRN کے لیے IgG ردعمل کے لیے بہتر بیس لائن نارملائزڈ لاگ1{{10} فولڈ تبدیلیاں (W2/D0) دکھائیں۔ ان جوابات کا BCG پلس Tdap cohort (تصویر 2a) سے موازنہ کرتے وقت اسی طرح کا نمونہ دیکھا گیا۔ ہم نے BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں 2 ہفتوں کے بعد ویکسینیشن (ضمنی شکل 2b) میں بلند پرٹیوسس مخصوص IgG ارتکاز کا بھی مشاہدہ کیا، حالانکہ مطلق قدروں میں فرق ان اضافے کے فرق سے کم واضح تھا جو کہ بنیادی لائن سے متعلق ہیں۔ D0۔

مزید برآں، BCG سے تربیت یافتہ گروہ کے مضامین نے MBC کے کل جوابات میں نمایاں طور پر اضافہ کیا، بشمول IgG کلاس سوئچڈ MBCs (تصویر 2b اور ضمنی شکل 4)۔ BCG سے تربیت یافتہ گروہ کے مضامین نے بھی تینوں پرٹیوسس اینٹیجنز کے ساتھ محرک کے جواب میں بلند IFN سراو کو ظاہر کیا۔ اس کے برعکس، Tdap-IPV کوہورٹ (PT) میں ایک ایک پرٹیوسس اینٹیجن اور BCG پلس Tdap کوہورٹ (PT اور FHA، تصویر 2c اور ضمنی شکل 5) میں دو پرٹیوسس اینٹیجنز میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا۔ ہم نے ایک رجحان کا بھی مشاہدہ کیا جہاں IFNg کی پیداوار میں اضافہ BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں دوسرے گروہوں کی نسبت زیادہ تھا، حالانکہ یہ شماریاتی اہمیت تک نہیں پہنچا تھا (ضمنی جدول 2 اور ضمنی شکل 5b)۔ پرٹیوسس سے متعلق مخصوص IL-22 اور IL-17 جوابات تمام گروہوں کے لیے کمزور تھے (ضمنی جدول 1)۔ مجموعی طور پر، یہ نتائج دوسرے دو گروہوں کے مقابلے میں BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں بڑھے ہوئے پرٹیوسس مخصوص اینٹی باڈی ردعمل، مجموعی IgG- سوئچڈ MBC ردعمل، اور وسیع پرٹیوسس مخصوص IFN ردعمل کی طرف اشارہ کرتے ہیں۔

ہم نے بنیادی نتائج میں اضافے کے درمیان تعلقات کی کھوج کی جو BCG کے تربیت یافتہ گروہ میں بڑھے تھے۔ اس تحقیقی تجزیے کے لیے، اینٹی باڈیز، بی سیلز، اور سائٹوکائنز کے درمیان ارتباط کا ہر ایک گروپ کے لیے حساب لگایا گیا۔ BCG سے تربیت یافتہ گروہ نے ان ردعمل کے درمیان بہت سے اہم اور مقداری طور پر مضبوط مثبت ارتباط ظاہر کیے، جب کہ Tdap-IPV اور BCG پلس Tdap ساتھیوں نے IFN جوابات میں تبدیلیوں سے متعلق مضبوط ترین پیٹرن کے ساتھ، کمزور یا الٹا ارتباط ظاہر کیا (تصویر 3a)۔ بی سی جی ٹرینڈ میں جوابات کے درمیان ارتباط کے گتانک کنٹرول کوہورٹس کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھے، مکمل طور پر بی سی جی کے تربیت یافتہ گروہ (تصویر 3b) میں زیادہ مربوط پرٹیوسس سے متعلق انکولی مدافعتی ردعمل کی شمولیت کی طرف اشارہ کرتے ہیں۔

IL-1 اور IL-6 cytokine کی پیداوار کا تعلق پرٹیوسس کے ساتھ مخصوص انکولی مدافعتی ردعمل سے ہے

BCG سے تربیت یافتہ گروہ نے مجموعی IgG-switched MBC اور pertussis-specific IFN جوابات دکھائے۔ مزید برآں، Tdap-IPV اور BCG پلس Tdap کوہورٹس کے مقابلے میں، BCG سے تربیت یافتہ گروہ نے بھی زیادہ پرٹیوسس اینٹی باڈی ردعمل ظاہر کیا۔ چونکہ انسانوں میں بی سی جی ویکسینیشن ہیٹرولوجس محرک کے جواب میں گردش کرنے والے مدافعتی خلیوں کی سائٹوکائن کی پیداوار میں اضافہ کر سکتی ہے، ویکسینیشن 27 کے ہفتوں سے مہینوں بعد، ہم نے جائزہ لیا کہ آیا یہ BCG کی حوصلہ افزائی سائٹوکائن ردعمل Tdap-IPV v. BCG ویکسینیشن کے دو ہفتے اور 3 ماہ بعد، BCG ویکسینیشن بیس لائن (ضمنی شکل 6a، b) کے مقابلے میں IL-22 اور IFN کی پیداوار میں اضافہ کے ساتھ نمایاں طور پر بڑھا ہوا اینٹی مائکوبیکٹیریل ردعمل تھا۔

مجموعی طور پر، BCG سے تربیت یافتہ گروہ نے ہیٹرولوگس امیونٹی یا تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائنز کی پیداوار میں اضافہ نہیں دکھایا، جیسا کہ پہلے دیکھا گیا تھا (ضمیمہ انجیر 6 اور 8)21۔ تاہم، چونکہ سائٹوکائن کی پیداوار افراد کے درمیان مختلف ہوتی ہے، اس لیے ہم نے BCG بیس لائن (ضمیمہ انجیر 7 اور 9) کے مقابلے میں BCG کے بعد 2 ہفتوں اور BCG کے بعد 3 ماہ کے درمیان تبدیلیوں کا حساب لگایا۔ ہر ٹائم پوائنٹ پر ان پیمائشوں کے مابین ایسوسی ایشن کی طاقت کا تعین کرنے کے لئے پیئرسن کے ارتباط کا حساب لگایا گیا تھا۔ BCG ویکسینیشن کے تین ماہ بعد، یعنی Tdap-IPV بیس لائن پر، وٹرو محرک کے لیے سائٹوکائن کے ردعمل انتہائی باہم مربوط تھے۔ ہیٹرولوگس امیونٹی سے وابستہ سائٹوکائن ردعمل کو تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائن ردعمل کے ساتھ منفی طور پر منسلک کیا گیا تھا، اور ان میں سے، IL-6 اور IL-1 کے درمیان ارتباط سب سے مضبوط تھے (تصویر 4)، جیسا کہ پہلے بیان کیا جا چکا ہے۔ BCG ویکسینیشن کے 2 ہفتوں کے بعد باہمی تعلق کے پیٹرن ہیٹرولوجس امیونٹی سے وابستہ سائٹوکائنز کے لیے یکساں تھے لیکن IL-10 ردعمل کے علاوہ، تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائنز کے درمیان ارتباط بہت کمزور تھے۔ ایک ساتھ مل کر، یہ نتائج BCG کے تربیت یافتہ گروہ میں BCG حفاظتی ٹیکوں کے بعد 3 ماہ کے مربوط فطری مدافعتی ایکٹیویشن کی طرف اشارہ کرتے ہیں، لیکن 2 ہفتے نہیں۔

اگلا، ہم نے دریافت کیا کہ آیا BCG سے تربیت یافتہ کوہورٹ کے سائٹوکائن ردعمل میں تغیرات TdapIPV انکولی مدافعتی اختتامی نقطوں میں تبدیلیوں سے وابستہ تھے۔ ہم نے BCG ویکسینیشن کے 2 ہفتے اور 3 ماہ بعد سائٹوکائن کی پیداوار میں تبدیلیوں کا جائزہ لیا۔ ہم نے پایا کہ ہیٹرولوگس استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائنز میں اضافہ کمزور اور منفی طور پر ہوتا ہے، دونوں 2 ہفتوں (ضمنی شکل 10) اور 3 ماہ بعد BCG ویکسینیشن (تصویر 5a) میں بنیادی اختتامی نقطہ کے ساتھ منسلک ہوتا ہے۔ اس کے برعکس، BCG ویکسینیشن کے 3 ماہ بعد تربیت یافتہ قوت مدافعت سے وابستہ سائٹوکائنز میں اضافہ، خاص طور پر LPS محرک کے جواب میں IL-1 /IL-6، نمایاں طور پر PRN اور FHA اینٹی باڈی ردعمل کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھے، IFN کی پیداوار PT محرک کا ردعمل، اور کل IgG-switched MBC ردعمل (تصویر 5b، c)۔

اس کے مطابق، ہم نے پرفیرل بلڈ سیل نمبرز کی نسبتہ کثرت میں تبدیلیوں کا مشاہدہ نہیں کیا (ضمنی شکل 11a)، اور نہ ہی سیلولر کثرت میں تبدیلیاں 3 ماہ کے بعد BCG ویکسینیشن پرٹیوسس اینڈ پوائنٹس (ضمنی شکل 11b) کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھیں۔ ایل پی ایس محرک (IL1b. LPS) کے جواب میں IL-1 کی پیداوار میں 3 ماہ بعد BCG ویکسینیشن نے متعدد Tdap-IPV ردعمل کے ساتھ ایک مضبوط تعلق ظاہر کیا اور اس بات کا تعین کرنے کے لیے منتخب کیا گیا کہ وہ ہر ردعمل کی کتنی تبدیلی کی وضاحت کر سکتے ہیں۔ . ہر ایک نتیجہ کے لیے کل تغیر (پیش گوئی روپے) کا حساب لگایا گیا اور IL-1 میں تبدیلیاں جوابی تغیرات کے 60 فیصد تک کی وضاحت کر سکتی ہیں (تصویر 5d)۔ مجموعی طور پر یہ نتائج اس بات پر روشنی ڈالتے ہیں کہ BCG ویکسینیشن کے 3 ماہ بعد تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائن ردعمل کا تعلق پرٹیوسس سے متعلق مخصوص اینٹی باڈی ردعمل اور IFN کی پیداوار میں اضافے کے ساتھ ساتھ کل IgG سوئچڈ MBC ردعمل کے ساتھ ہے۔

بحث

انسانوں میں تربیت یافتہ قوت مدافعت کی شمولیت BCG ویکسینیشن 14 کے ہفتوں سے مہینوں بعد ہوتی ہے اور یہ انسانوں میں 16,17 کے بعد کی حفاظتی ٹیکوں کے ردعمل کو متاثر کر سکتی ہے۔ یہاں، ہم وہ تربیت یافتہ استثنیٰ دکھاتے ہیں جو BCG ویکسینیشن سے 3 ماہ پہلے حاصل ہوتی ہے، لیکن Tdap-IPV کی بوسٹر خوراک کے ساتھ نہیں، پرٹسس IgG کے ردعمل کو بڑھاتی ہے اور پرٹسس کے مخصوص سیلولر ردعمل کو ماڈیول کرتی ہے۔ کئی مطالعات میں BCG اور دیگر ویکسینز کے باہمی اثر کی تحقیقات کی گئی ہیں، ان میں سے زیادہ تر مطالعات نے 20,21,29,30 پرٹیوسس کے مدافعتی ردعمل پر BCG کے مثبت اثر کی اطلاع دی ہے۔ تاہم، ہمارے بہترین علم کے مطابق، آج تک کسی بھی مطالعے نے پرٹیوسس کے ردعمل پر BCG ویکسینیشن کے وقت کی تحقیقات نہیں کی ہیں یا یہ مطالعہ نہیں کیا ہے کہ BCGinduced تربیت یافتہ قوت مدافعت کے ردعمل کی کون سی خصوصیات ویکسین کے بہتر ردعمل کے ساتھ منسلک ہیں۔

تینوں گروہوں کے مضامین نے TdapIPV کے ساتھ ویکسینیشن کے 2 ہفتے بعد اینٹی پرٹیوسس ہیومرل اور PRN پلس B سیل کے جوابات لگائے۔ اگرچہ PRN اینٹی باڈی کے ردعمل BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں بہت زیادہ تھے، لیکن ہم نے PRN مخصوص B سیل ردعمل میں اسی طرح کا نمونہ نہیں دیکھا۔ اس کی وضاحت BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں اینٹی باڈیز کی تیزی سے شمولیت سے کی جا سکتی ہے، جو ان کی طویل نصف زندگی کی وجہ سے وقت کے ساتھ ساتھ جمع ہو جاتی ہے۔

تاہم، چونکہ اینٹی باڈی کے ارتکاز کی پیمائش 2 ہفتوں کے بعد ویکسینیشن سے پہلے نہیں کی گئی تھی، اس لیے ہم وطنوں کے درمیان حرکیات میں فرق کا اندازہ لگانا ممکن نہیں تھا۔ پی آر این اینٹی باڈی کے بڑھتے ہوئے ردعمل کے ساتھ، ہم نے یہ بھی پایا کہ بی سی جی سے تربیت یافتہ گروہ میں ایف ایچ اے اور پی ٹی اینٹی باڈی کے ردعمل زیادہ تھے۔ ہم، بدقسمتی سے، FHA اور PT سے B خلیوں کے اعلی غیر مخصوص پابند ہونے کی وجہ سے PT- اور FHA- مخصوص B سیل ردعمل کی پیمائش کرنے سے قاصر تھے۔ پھر بھی، یہ امید افزا ہے کہ BCG سے تربیت یافتہ کوہورٹ میں کل IgG MBC ردعمل میں اضافہ کیا گیا تھا اور یہ اضافہ اینٹی باڈی ردعمل میں اضافے کے ساتھ منسلک تھا۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ پرٹیوسس اینٹیجن دوبارہ محرک کے جواب میں IFN ردعمل کو BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں بڑھایا گیا تھا۔ اگرچہ یہ تبدیلیاں نسبتاً چھوٹی تھیں، ہم نے ایک ایسے رجحان کا مشاہدہ کیا جہاں W2–D{9}} تبدیلیاں دوسرے گروہوں کی نسبت زیادہ تھیں۔ مزید مضامین کے ساتھ مزید مطالعہ اس نمونہ کی توثیق کرنے میں مدد کرسکتے ہیں، جس کی تصدیق ماؤس اسٹڈی19 میں ہوئی ہے۔ اسی طرح، نوزائیدہ BCG ویکسینیشن کو بھی ٹیٹنس ٹاکسائڈ 31 کے بارے میں Th1 ردعمل کو ممکنہ طور پر دکھایا گیا ہے۔

پرٹیوسس اینٹی باڈیز میں اضافہ، کل IgG MBC ردعمل، اور pertussis IFNg ردعمل BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں ایک دوسرے کے ساتھ مضبوطی سے منسلک تھے، جو انفیکٹر اور میموری کے افعال کو مربوط ایکٹیویشن کا مشورہ دیتے ہیں۔ مزید برآں، پرٹیوسس اینٹی باڈیز میں اضافہ، کل IgG-switched MBC ردعمل، اور IFN BCG سے تربیت یافتہ گروہ میں PT ریسٹیمولیشن کے جواب میں پیدائشی ردعمل سے وابستہ تھے، خاص طور پر IL-1 اور IL-6۔ یہ نتائج ہمارے گروپ کے پچھلے انسانی مطالعے کے مطابق ہیں جہاں ہم نے انفلوئنزا ویکسینیشن17 پر BCG کے اثر کا مطالعہ کیا۔ IL-1 /IL-6 راستے کی اہمیت بطور تربیت یافتہ قوت مدافعت کے بائیو مارکر کو زرد بخار کی ویکسینیشن16 کے بعد تجرباتی وائرل انفیکشن کے ماڈل میں بھی اجاگر کیا گیا ہے۔ مجموعی طور پر، ہم نے مخصوص مائکروبیل محرکات اور بنیادی نتائج کے درمیان ارتباط کا مشاہدہ نہیں کیا، جس سے پتہ چلتا ہے کہ سائٹوکائن کے ردعمل کے راستوں میں مجموعی تبدیلیاں اور کسی خاص محرک کی حالت کا تعلق پرٹیوسس ویکسینیشن کے لیے بہتر ردعمل سے نہیں ہے۔ جب کہ ہم توقع کرتے ہیں کہ مائکروبیل محرک پر غالب IL-1 ردعمل monocytes اور dendritic خلیات16 سے حاصل کیا جائے گا، B خلیے بھی سائٹوکائن کی پیداوار میں حصہ ڈال سکتے ہیں32 اور ہم ان کی ممکنہ شراکت کو مسترد نہیں کر سکتے۔
ایک اہم سوال یہ ہے کہ BCG کی حوصلہ افزائی سے تربیت یافتہ قوت مدافعت کتنی دیر تک برقرار رہتی ہے۔ وٹرو میں، انسانوں میں BCG کی حوصلہ افزائی سے تربیت یافتہ قوت مدافعت کے دستخطوں کی شناخت 2 ہفتوں تک اور 1-سال کے بعد ویکسینیشن14 تک کی گئی ہے۔ انسانوں میں کلینیکل اسٹڈیز جن کا مقصد ان نتائج کو ویوو ریسپانسیونیس میں ترجمہ کرنا ہے، نے مشاہدے کی ونڈو کو BCG ویکسینیشن 15-17 کے بعد 5 ہفتوں تک محدود کر دیا ہے۔ ہم نے پچھلے مطالعات کے مقابلے میں تربیت یافتہ استثنیٰ سے وابستہ سائٹوکائنز IL-6 اور IL-1 کی کمزور شمولیت کا مشاہدہ کیا16، جیسا کہ پہلے بتایا جا چکا ہے۔ بی سی جی ویکسین کی تیاری میں بیچ سے بیچ کے تغیرات تربیت یافتہ استثنیٰ کی شمولیت کو متاثر کر سکتے ہیں اور اس اثر کی وضاحت کر سکتے ہیں جس کا ہم نے اس مطالعہ 33 میں مشاہدہ کیا ہے۔

مزید برآں، BCG کے تناؤ کے درمیان تغیرات بھی دیکھے گئے ہیں جو ان کی مدافعتی صلاحیت اور طبی افادیت کو متاثر کرتے ہیں34–36۔ اس کے باوجود، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ BCG ویکسینیشن کے 3 ماہ بعد ہیٹرولوگس IL-1 اور IL-6 ردعمل، یعنی Tdap-IPV ویکسینیشن کے وقت، لیکن BCG ویکسینیشن کے 2 ہفتے بعد نہیں جو کہ بڑھی ہوئی پرٹیوسس سے وابستہ ہے۔ مزاحیہ اور سیلولر استثنیٰ۔ ان نتائج سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ تربیت یافتہ قوت مدافعت BCG ویکسینیشن کے بعد پچھلے 2 ہفتوں میں ترقی کرتی رہتی ہے، اور اس بات پر زور دیتے ہیں کہ پیدائشی مدافعتی خلیوں کی گردش کرنے والی بنیادی فعلی 'ردعمل' زیادہ طاقتور ویکسین ردعمل کی نشوونما کے لیے اہم ہو سکتی ہے۔

یہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ BCG سے پہلے کی ویکسینیشن اے پی ویکسین اینٹی جینز کے لیے ردعمل کو بڑھا سکتی ہے۔ حیرت انگیز طور پر، ہم نے TET اور DIPH کے لیے اس اثر کا مشاہدہ نہیں کیا۔ اس کی وضاحت اس حقیقت سے کی جا سکتی ہے کہ تمام بالغوں نے Td-IPV کے ساتھ پہلے بوسٹر ویکسینیشن حاصل کی تھی لیکن 9 سال کی عمر میں aP کے ساتھ نہیں، جیسا کہ قومی امیونائزیشن پروگرام میں تجویز کیا گیا ہے۔ اس کے مطابق، ہم نے پایا کہ اے پی اینٹیجنز کی بنیادی اینٹی باڈی ارتکاز ہمارے مطالعے کے تمام مضامین میں انتہائی باہم مربوط تھے، لیکن ان کا DIPH اور TET کے ساتھ کوئی تعلق نہیں تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ ان اجزاء کے لیے مزاحیہ استثنیٰ اے پی اینٹیجنز کے ساتھ ہم آہنگ نہیں ہے (ضمیمہ تصویر 12)۔ بیس لائن ڈی آئی پی ایچ اور ٹی ای ٹی اینٹی باڈی کی سطح بہت زیادہ باہم مربوط تھی، جو کہ ویکسین میں ان کی شریک انتظامیہ کے مطابق ہے۔ اس طرح، مختلف ویکسین کے اجزاء کے خلاف پہلے سے موجود استثنیٰ میں تغیرات BCG ویکسینیشن کی صلاحیت اور Tdap-IPV کے ردعمل کو متاثر کرنے کے لیے تربیت یافتہ استثنیٰ میں کردار ادا کر سکتے ہیں۔

Although our study was not designed to investigate vaccine efficacy, a major question is whether the enhanced antibody response that we observed in the BCG-trained cohort may translate into better clinical protection. There is much debate about the correlates of protection against pertussis37. Nonetheless, PT antibodies have previously been used to correlate with clinical protection against disease (>25 IU/ml) 29۔ اس حد کو استعمال کرتے ہوئے، BCG سے تربیت یافتہ اور BCG پلس Tdap کوہورٹس میں TdapIPV کے بعد کے 2 ہفتوں کے بعد قریب قریب مکمل سیرو پروٹیکشن حاصل کیا گیا تھا، جبکہ Tdap-IPV کوہورٹ میں مضامین کا ایک حصہ سیرو پروٹیکٹڈ نہیں تھا (ضمنی شکل 13)۔

اینٹی باڈیز کے علاوہ، ٹی سیل کی قوت مدافعت اور خاص طور پر Th1 اور Th17 ردعمل کو بھی جانوروں کے ماڈلز 2,38 میں پرٹیوسس سے تحفظ کے لیے اہم قرار دیا گیا ہے۔ ہم نے پایا کہ BCG سے تربیت یافتہ گروہ نے پرٹیوسس اینٹیجن دوبارہ محرک کے جواب میں بڑھا ہوا IFN ظاہر کیا، جو Th1 استثنیٰ کے لیے ایک ریڈ آؤٹ ہے اور اس وجہ سے پرٹیوسس کے خلاف بہتر طبی تحفظ تجویز کر سکتا ہے۔ آخر میں، موجودہ امیونولوجیکل اینڈ پوائنٹس جن کا مقصد پرٹیوسس کے لیے مخصوص انکولی قوت مدافعت کی مقدار درست کرنا ہے، جیسے کہ ٹی سیل، بی سیل، یا مزاحیہ ردعمل، کو ابھی تک تحفظ کے امیونولوجیکل ارتباط کے طور پر توثیق نہیں کیا گیا ہے۔ علم کے اس خلاء کو ختم کرنے کے کئی امکانات ہیں، مثال کے طور پر، وبائی امراض کا مطالعہ کر کے یا B. pertussis39 کے لیے حال ہی میں قائم کردہ کنٹرول شدہ انسانی انفیکشن ماڈل کے استعمال سے۔

ہمارے تحقیقی مطالعے کی ایک حد یہ ہے کہ مطالعہ کی آبادی بالغوں پر مشتمل تھی جو بچپن میں پورے سیل ڈی ٹی پی ویکسین کے ساتھ شروع کیے گئے تھے، جو پرائمنگ کے کئی دہائیوں بعد پرٹیوسس کے انکولی ردعمل کو متاثر کرنے کے لیے جانا جاتا ہے اور ٹی سیل کی قوت مدافعت کی شمولیت کو متاثر کرتا ہے۔ بوسٹر ویکسینیشن کا جواب 40۔ اس طرح، اس بات کا تعین کرنا اہم ہوگا کہ آیا ہمارے نتائج کا ترجمہ بچوں کے معمول کے AP ویکسینیشن کے دور میں پیدا ہونے والے بچوں کے لیے ہوتا ہے۔ مزید برآں، چونکہ ہم نے صرف خواتین کو شامل کیا ہے، اس لیے یہ تعین کرنا اہم ہوگا کہ آیا مردوں کے ساتھ اختلافات موجود ہیں۔ اس تحقیقی مطالعہ میں، ہم نے اینٹی پرٹیوسس امیونوجنیسیٹی اینڈ پوائنٹس کی پیمائش کی جس میں اینٹی باڈی ردعمل، کل اور پی آر این پلس بی سیل ردعمل، اور اینٹیجن مخصوص ٹی سیل ردعمل شامل ہیں۔ تشخیص شدہ مدافعتی ردعمل کی ھدف شدہ نوعیت کی وجہ سے متعدد جانچ کے لئے P-values ​​کو درست نہیں کیا گیا تھا۔ اہم بات یہ ہے کہ یہ مطالعہ مغربی یورپی (ڈچ) نسل کے رضاکاروں پر کیا گیا تھا، اور مستقبل کے مطالعے میں اس بات کی تحقیق کرنی چاہیے کہ آیا مختلف جینیاتی پس منظر کی آبادیوں میں بھی اسی طرح کے اثرات پائے جا سکتے ہیں۔ ایک اور حد یہ ہے کہ سائٹوکائنز کا صرف ایک ذیلی سیٹ ماپا گیا تھا۔ اگرچہ یہ ان مخصوص مفروضوں کے لیے موزوں تھا جن کا ہم نے ٹیسٹ کرنا تھا، لیکن سائٹوکائن کی ایک زیادہ جامع، غیر جانبدارانہ پروفائلنگ اور دیگر ردعمل نئی بصیرتیں پیدا کر سکتے ہیں۔

آخر میں، موجودہ مطالعہ میں، ہم رپورٹ کرتے ہیں کہ Tdap-IPV ویکسینیشن سے 3 ماہ پہلے لگائی گئی BCG ویکسینیشن اینٹی پرٹیوسس کی قوت مدافعت کو نمایاں طور پر بڑھاتی ہے اور تربیت یافتہ قوت مدافعت کے بائیو مارکر ان بہتر ویکسینیشن ردعمل کے سب سے قابل اعتماد ارتباط ہیں۔ متنوع مطالعاتی آبادیوں میں ان نتائج کا جائزہ لینے کے لیے اضافی توثیق کے مطالعے ضروری ہوں گے، اور IL-1 اور IL-6 راستوں کے کردار کو میکانکی طور پر درست کرنے کے لیے مزید امیونولوجیکل اور جینیاتی مطالعات کی ضرورت ہے۔ مجموعی طور پر، بیس لائن فطری مدافعتی فنکشن کی وضاحت، جسے BCG کے ذریعے ماڈیول کیا جا سکتا ہے، یہ سمجھنے کے لیے ضروری ہو گا کہ کس طرح ویکسین کی حوصلہ افزائی کے لیے مدافعتی ردعمل کو بہتر مدافعتی اور بیماری کے خلاف تحفظ کی طرف رہنمائی کرنا ہے۔

طریقے

طبی آزمائش

یہ سنگل سینٹر، بے ترتیب اوپن لیبل ٹرائل 2 مارچ015 سے 2 جولائی01621 تک Radboud University Medical Center (Nijmegen، Netherlands) میں انجام دیا گیا۔ مطالعاتی پروٹوکول کلینیکل ٹرائلز میں رجسٹرڈ ہے۔ gov (NCT02771782) اور اسے Arnhem-Nijmegen میڈیکل ایتھیکل کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ رضاکاروں کو بلیٹن بورڈز کا استعمال کرتے ہوئے اور نجمگین کی ریڈباؤڈ یونیورسٹی میں بھرتی کیا گیا اور انہیں معمولی معاوضہ ملا۔ وہ رضاکار شامل تھے جنہیں پہلے BCG یا حال ہی میں پرٹیوسس کی ویکسین نہیں لگائی گئی تھی۔ اخراج کے معیارات یہ تھے (i) پچھلی BCG ویکسینیشن یا پرٹیوسس پر مشتمل ویکسین کے ساتھ حالیہ ویکسینیشن، (ii) نیومائسن، پولیمیکسن سے الرجی، یا خناق، تشنج، پرٹیوسس، یا پولیو ویکسین کے ساتھ سابقہ ​​ویکسینیشن پر الرجک رد عمل، (iii) نظام کا استعمال۔ زبانی مانع حمل ادویات کے علاوہ دوائیں، اور (iv) حمل یا امیونو کی کمی کے نتیجے میں ہونے والی بیماریوں کی تاریخ۔ کوہورٹ سائز کا تعین ہمارے گروپ کے ذریعہ کئے گئے پچھلے مطالعات کی بنیاد پر کیا گیا تھا جس میں ہم نے پیدائشی مدافعتی ردعمل پر BCG ویکسینیشن کے اثرات کی چھان بین کی تھی۔ مطالعہ کے تمام بازوؤں میں بے ترتیب کاری سافٹ ویئر پر مبنی الگورتھم کے ساتھ کی گئی۔ تمام مضامین کی زندگی کے پہلے سال میں پورے سیل پرٹیوسس کے ساتھ پرائمنگ کی تاریخ تھی۔ پچھتر خواتین رضاکار شامل تھیں۔ تحریری باخبر رضامندی حاصل کرنے کے بعد، خون کو ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) یا لتیم ہیپرین (LiHep) ٹیوبوں میں جمع کیا گیا، اور ویکسینیشن دی گئیں۔ خون کی مکمل گنتی ایک Sysmex XN-450 ہیماتولوجی تجزیہ کار کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کی گئی۔ مضامین نے BCG Danish 1331 (Staten Serum Institut, Copenhagen, Denmark; 0.1 ml intradermally) اور Tdap-IPV (Boostrix Polio, GlaxoSmithKline; 0.5 ml intramuscularly) حاصل کیا۔ تجزیہ تک سیرا کو −20 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا تھا، اور مزید تجزیہ کے لیے پورے خون پر کارروائی کی گئی تھی جیسا کہ ذیل میں بیان کیا گیا ہے۔ رپورٹنگ ٹرائلز کے کنسولیڈیٹڈ سٹینڈرڈز (CONSORT) کے رہنما خطوط اس مخطوطہ کو تیار کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے (ضمنی شکل 14)۔

سیرولوجیکل تجزیہ

سیرا کا تجزیہ PT-، FHA-، PRN-، TET-، اور DIPH- مخصوص IgG اینٹی باڈی ارتکاز کے لیے فلوروسینٹ بیڈ پر مبنی ملٹی پلیکس امیونواسے 25 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ اینٹیجنز کو ہم آہنگی کے ساتھ الگ الگ رنگ کوڈڈ ایکٹیویٹڈ کاربوکسیلیٹڈ مائیکرو پلیکس مائیکرو اسپیئرز (موتیوں) (Luminex، آسٹن، ٹیکساس، USA) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ جوڑے کے لیے درج ذیل اینٹیجنز استعمال کیے گئے: انتہائی صاف شدہ PT (نیدرلینڈ ویکسین انسٹی ٹیوٹ)، FHA (Kaketsuken، Kumamoto، Japan)، P.69 PRN E. coli construct41 سے ظاہر اور پاک، خناق ٹاکسائڈ (نیدرلینڈ ویکسین انسٹی ٹیوٹ)، اور تشنج ٹاکسن (T3194، سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، مسوری، USA)۔ پی بی ایس میں دھونے کے ایک قدم کے بعد، 12.5 × 106 کاربو آکسیلیٹڈ موتیوں/ایم ایل کو پی بی ایس میں چالو کیا گیا جس میں 2.5 ملی گرام 1-ایتھیل3-({{20}} dimethyl aminopropyl -carbodiimide hydrochloride (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) اور 2.5 mg N-hydroxysulfosuccinimide (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)۔ پی بی ایس میں کپلنگ کے لیے اینٹیجنز کو 10 ug PT، FHA، یا PRN، 100 ug DT، یا 25 ug TET فی 12.5 × 106 چالو موتیوں کے ارتکاز میں پتلا کر دیا گیا اور اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ مسلسل گردش. دھونے کے تین مراحل کے بعد، پی بی ایس میں اندھیرے میں اینٹیجن کپلڈ موتیوں کو ذخیرہ کیا گیا جس میں 0.03 فیصد (wt/vol) سوڈیم ایزائیڈ اور 1 فیصد (wt/vol) بووائن سیرم البومین استعمال ہونے تک 4 ڈگری پر تھا۔ سیرا نے پی بی ایس میں 1/200 اور 1/4000 کو پتلا کیا جس میں 0.1 فیصد (والیوم/ والیوم) ٹوئن 20 اور 3 فیصد (ڈبلیو ٹی/ والیوم) بی ایس اے کو 45 منٹ تک ایک 96-کنویں فلٹر پلیٹ میں اینٹیجن کپلڈ موتیوں کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اندھیرے میں 750 بجے کمرے کے درجہ حرارت پر۔ ہر پلیٹ میں ڈیلیشن سیریز میں حوالہ سیرا، کوالٹی کنٹرول سیرا، اور خالی جگہیں شامل تھیں۔

پرٹیوسس کے لیے اندرون خانہ حوالہ کا معیار WHO 1st IS حصہ 06/140 کے خلاف کیلیبریٹ کیا گیا تھا اور 6 کنوئیں (1/ 200 سے 1/204800) کو سلسلہ وار پتلا کر دیا گیا تھا۔ DIPH اور TET کے لیے اندرون خانہ حوالہ معیار کو WHO NIBSC DI-3 اور TE-3 کے خلاف کیلیبریٹ کیا گیا تھا اور 8 کنویں (1/50 سے 1/819200) پر ترتیب وار طور پر 4-فولڈ کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے بعد، کنویں کو پی بی ایس کے ساتھ 3 بار دھویا گیا، 30 منٹ تک R-phycoerythrin کے لیبل والے بکرے کے اینٹی ہیومن IgG اینٹی باڈی (جیکسن امیونوسرچ لیبارٹریز، ویسٹ-گرو، PA، USA) کے ساتھ لگائے گئے، اور دھوئے گئے۔ موتیوں کو پی بی ایس میں شامل کیا گیا تھا اور میڈین فلوروسینس انٹیسٹیٹی (ایم ایف آئی) بائیو پلیکس ایل ایکس 200 پر حاصل کیا گیا تھا۔ MFI کو بائیوپلیکس مینیجر 6.2 سافٹ ویئر (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA) کا استعمال کرتے ہوئے 5-پیرامیٹر لاجسٹک معیاری وکر سے انٹرپولیشن کے ذریعے IU/mL میں تبدیل کیا گیا اور Microsoft Excel کو برآمد کیا گیا۔

PBMC تنہائی، محرک، اور سائٹوکائن کا پتہ لگانا

PBMCs کو Ficoll density gradient centrifugation کے ذریعے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور RPMI کلچر میڈیم (Roswell Park Memorial Institute medium؛ Invitrogen, CA, USA) میں 5 × 106 /ml پر دوبارہ معطل کیا گیا تھا جس کی تکمیل gentamycin، Glutamax (GIBCO)، اور کے ساتھ کی گئی تھی۔ مجموعی طور پر، گول نیچے والی پلیٹوں (کارننگ) میں 100 ul کو فی کنواں ایلی کوٹ کیا گیا تھا اور RPMI (منفی کنٹرول) میں سے ایک کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی تھی، Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS؛ 10 ng/ml، Sigma-Aldrich) سونیکیٹڈ مائکوبیکٹیریم تپ دق H37Rv (5 ug/ml)، گرمی سے مارے جانے والے Staphylococcus aureus (1 × 106 /ml، کلینکل الگ تھلگ)، گرمی سے ہلاک ہونے والے Candida albicans (1 × 106 /ml، UC820 سٹرین)، اور گرمی سے مارے جانے والے بورڈیٹس (Bordetella) 1 ug/ml، B1917 سٹرین، PT (2 ug/ml)، PRN (4 ug/ml، ReagentProteins، PFE-031)، اور FHA (2 ug/ml)۔ PT اور FHA برائے مہربانی AM Buisman نے نیشنل انسٹی ٹیوٹ فار پبلک ہیلتھ اینڈ انوائرمنٹ (RIVM، Bilthoven، the Netherlands) میں فراہم کیے تھے۔ IL-1، IL-6، IL-10، اور TNF کا پتہ لگانے کے لیے سیلز کو 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 پر 24 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا تھا یا IFN، IL{{31} کے لیے 7 دن }، اور IL-17۔ سپرنٹنٹس کو −20 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا تھا۔ R&D سسٹمز (IL-1, TNF, IL17, IL-22) یا Sanquin (IL-6, IL) سے انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) کٹس کا استعمال کرتے ہوئے PBMC کلچر سپرنٹنٹس میں سائٹوکائنز کی پیمائش کی گئی۔ -10، IFN ) مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق۔

بی سیل فلو سائٹوومیٹری

B سیل کا داغ براہ راست پورے خون پر اینٹی باڈی سٹیننگ پینل (ضمنی جدول 3) کے ساتھ انجام دیا گیا تھا جس میں اینٹیجن مخصوص B خلیوں کی کھوج کے لیے فلوروسینٹلی لیبل لگا ہوا PRN بھی شامل ہے۔ PRN مخصوص B خلیات کو لیبل کرنے کے لیے، PRN (ReagentProteins، PFE-031) کو کارخانہ دار کے پروٹوکول (PRN-FITC) کے مطابق فلوروسین (FITC اینٹی باڈی لیبلنگ کٹ، پیئرس) سے جوڑ دیا گیا تھا۔ مجموعی طور پر، LiHep ٹیوبوں میں جمع کیے گئے 1–2 ملی لیٹر تازہ نکالے گئے پورے خون کو FACS بفر میں پتلا کیا گیا تھا (PBS پلس 0۔ کیلبیوکیم) اور خلیوں کو گولی مار دی گئی اور پھر FACS بفر سے دو بار دھویا گیا۔ خلیوں کو FACS بفر میں دوبارہ معطل کیا گیا تھا اور پھر B سیل فینوٹائپنگ اینٹی باڈی کاک ٹیل کے ساتھ 15 منٹ تک داغ دیا گیا تھا، فکسڈ (FACSLysing، BD Biosciences)، اور FACS بفر کے ساتھ ایک اور دھونے کے بعد داغ لگنے کے 1 گھنٹے کے اندر اندر تجزیہ کیا گیا تھا۔ پورے خون میں PRN-اینٹیجن-مخصوص B خلیات کی فلو سائٹومیٹری معیاری آلے کی ترتیبات کے ساتھ LSRII (BD بایوسینسز) فلو سائٹومیٹر پر کی گئی تھی۔ فلو سائٹومیٹری ڈیٹا کا تجزیہ Infinicyte (ورژن 2.0، Cytognos) کے ساتھ کیا گیا۔ فی نمونہ، لیمفوسائٹ گیٹ میں 2 × 106 خلیات حاصل کیے گئے تھے (ضمنی شکل 1a)۔ ڈبلٹس اور ملبے کو ہٹانے کے بعد لیمفوسائٹس کو گیٹ کیا گیا تھا۔ B خلیوں کی شناخت CD45 پلس CD19 پلس کے طور پر کی گئی تھی اور PRN-FITC- مخصوص B خلیوں کی شناخت کی گئی تھی۔ بی سیل سبسیٹ کی شناخت ایک موافقت پذیر گیٹنگ حکمت عملی43 کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ ہم نے فلو سائٹومیٹری کے ذریعہ پی ٹی کے مخصوص بی خلیوں کا پتہ لگانے کی کوشش کی، لیکن غیر مخصوص داغ کی وجہ سے ہونے والے اعلی پس منظر کی وجہ سے ہم ناکام رہے۔

شماریات

سائٹوکائن اور اینٹی باڈی کی قدروں کو لاگ10-ان کی ترچھی تقسیم کے حساب سے تبدیل کر دیا گیا تھا۔ ابتدائی یا ثانوی نتائج کے ردعمل کا تجزیہ 'lme4' 44 R پیکیج کا استعمال کرتے ہوئے مخلوط اثرات کے ریگریشن ماڈل میں کیا گیا۔ ہر ایک نتیجہ کے لیے، ماڈل کا فارمولا (R اشارے میں) یہ ہے:

موازنہ کا حساب 'ذرائع' 45 R پیکیج کے ساتھ کیا گیا اور ہم نے دو تضادات کا جائزہ لیا۔ سب سے پہلے، ہم نے جانچا کہ آیا بنیادی اختتامی پوائنٹس Tdap-IPV ویکسینیشن بیس لائن کے مقابلے میں ہر ایک گروپ کے اندر نمایاں طور پر مختلف تھے (پوسٹ ویکسینیشن اثرات کو W2–D0 کے طور پر ہر ایک گروپ کے اندر بیان کیا گیا تھا، ضمنی جدول 1)۔ اس کے بعد، ہم نے ان تبدیلیوں کی شدت میں ہم آہنگی کے درمیان فرق کا جائزہ لیا (تفرقی اثرات، ضمنی جدول 2، جس کی وضاحت (W2c1 – D{{10}}c1)) – (W2c2 – D0 c2) جہاں c1 اور c2 دیئے گئے موازنہ کے لیے مختلف گروہوں کا حوالہ دیتے ہیں)۔ بی سی جی سے تربیت یافتہ گروہ میں ہیٹرولوگس یا تربیت یافتہ استثنیٰ سائٹوکائنز میں تبدیلیوں کا اسی طرح تجزیہ کیا گیا۔ P-values ​​کی اطلاع کینورڈ-Roger ڈگریوں کی آزادی کے طریقہ کار کے ذریعے کی جاتی ہے۔ اعداد و شمار کے پیرامیٹرز کو براہ راست اعداد و شمار اور اعداد و شمار کے علامات میں رپورٹ کیا جاتا ہے. تحقیقی مطالعہ کے ڈیزائن اور ہدف شدہ مدافعتی ردعمل کا اندازہ کرنے کی وجہ سے، متعدد جانچ کی اصلاح نہیں کی گئی۔ جوڑے کے لحاظ سے ارتباط کو لاگ10-بیس لائن پر قدروں کو فولڈ کرنے کے ساتھ انجام دیا گیا۔ بنیادی نتائج کے متغیرات پر سائٹوکائن کی پیمائش کے ذریعے بیان کردہ تغیر کا تخمینہ R پیکیج 'کیریٹ' 46 کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ ممکنہ حد سے زیادہ فٹنگ کے حساب سے، 10 بار دہرایا گیا، 4-فولڈ کراس توثیق کی گئی۔ ہم نے فشر کے عین مطابق ٹیسٹ کے ساتھ PT، TET، یا DIPH کے خلاف سیرو پروٹیکٹو اینٹی باڈی ٹائٹرز کا تجزیہ کیا۔ سیرو پروٹیکشن اسٹیٹس اور کوہورٹ کے مابین ایسوسی ایشن کا تعین چی اسکوائر ٹیسٹ کے باقیات کی جانچ کرکے کیا گیا تھا۔ پی ٹی کے لیے سیرو پروٹیکشن کی حد کی قدریں 25 IU/ml18 اور DIPH اور TET37 کے لیے 0.1 IU/ml تھیں)۔

رپورٹنگ کا خلاصہ

تحقیقی ڈیزائن کے بارے میں مزید معلومات اس مضمون سے منسلک نیچر ریسرچ رپورٹنگ سمری میں دستیاب ہے۔

ڈیٹا کی دستیابی

اس مطالعہ کے نتائج کی حمایت کرنے والا ڈیٹا متعلقہ مصنف سے معقول درخواست پر دستیاب ہے۔

کوڈ کی دستیابی

آر کوڈ جو اس مطالعہ کے نتائج کی حمایت کرتا ہے مناسب درخواست پر متعلقہ مصنف سے دستیاب ہے۔

حوالہ جات

1. ٹین، ٹی وغیرہ۔ دنیا بھر میں پرٹیوسس: 2000 سے 2013 تک حالیہ وبائی امراض کے رجحانات۔ پیڈیاٹر۔ متاثر کرنا۔ ڈس J. 34, e222–e232 (2015)۔

2. وارفیل، جے ایم، زیمرمین، ایل آئی اور مرکل، ٹی جے سیلولر پرٹیوسس ویکسین بیماری سے حفاظت کرتی ہیں لیکن غیر انسانی پریمیٹ ماڈل میں انفیکشن اور ٹرانسمیشن کو روکنے میں ناکام رہتی ہیں۔ پروک نیٹل اکاد۔ سائنس USA 111، 787–792 (2014)۔

3. ہوانگ، ایل ایم وغیرہ۔ 2 ماہ کی عمر میں شروع کی گئی سیلولر، جزو، اور پورے سیل پرٹیوسس ویکسین کی بنیادی اور بوسٹر خوراک کے جوابات۔ ویکسین 14، 916–922 (1996)۔

4. Klein, NP, Bartlett, J., Rowhani-Rahbar, A., Fireman, B. & Baxter, R. بچوں میں سیلولر پرٹیوسس ویکسین کی پانچویں خوراک کے بعد حفاظتی تحفظ۔ نیو انگلش جے میڈ 367، 1012–1019 (2012)۔

5. Misegades، LK et al. پچھلی ویکسین کی خوراک، کیلیفورنیا، 2010 کے بعد سے وقت کے مطابق پرٹیوسس ویکسین کی 5 خوراکوں کی وصولی کے ساتھ بچپن کے پرٹیوسس کی ایسوسی ایشن۔ JAMA 308، 2126–2132 (2012)۔

6. Hendrikx, LH, Berbers, GA, Veenhoven, RH, Sanders, EA & Buisman, AM IgG کے رد عمل 4 سال کی عمر کے ڈچ بچوں میں مختلف پرٹیوسس ویکسین کے ساتھ بوسٹر ویکسینیشن کے بعد: ویکسین کے اینٹیجن مواد کا اثر۔ ویکسین 27، 6530–6536 (2009)۔

7. Misiak، A. et al. ایک سیلولر پرٹیوسس ویکسین میں TLR7 ایگونسٹ کا اضافہ ماؤس ماڈل میں Th1 اور Th17 ردعمل اور حفاظتی استثنیٰ کو بڑھاتا ہے۔ ویکسین 35، 5256–5263 (2017)۔

8. Dunne, A. et al. Bordetella pertussis کا ایک ناول TLR2 agonist ایک طاقتور معاون ہے جو acellular pertussis ویکسین کے ساتھ حفاظتی استثنیٰ کو فروغ دیتا ہے۔ میوکوسل امیونول۔ 8، 607–617 (2015)۔

9. Sugai، T. et al. ایک CpG پر مشتمل oligodeoxynucleotide ایک موثر معاون کے طور پر خناق-ٹیٹنس-پرٹیوسس ویکسین میں Th1/Th2 مدافعتی ردعمل کو متوازن کرتا ہے۔ ویکسین 23، 5450–5456 (2005)۔

10. Colditz, GA et al. تپ دق کی روک تھام میں بی سی جی ویکسین کی افادیت۔ شائع شدہ ادب کا میٹا تجزیہ۔ JAMA 271، 698–702 (1994)۔

11. کرسٹینسن، I.، Aaby، P. & Jensen، H. روٹین ویکسینیشن اور بچے کی بقا: گنی بساؤ، مغربی افریقہ میں ایک فالو اپ مطالعہ۔ بی ایم جے 321، 1435–1438 (2000)۔

12. Hirve, S. et al. دیہی مغربی ہندوستان میں بچوں کی بقا پر ویکسینیشن کے غیر مخصوص اور جنسی امتیازی اثرات۔ ویکسین 30، 7300–7308 (2012)۔

13. Aaby، P. et al. کم وزن والے بچوں کو پیدائش کے وقت بی سی جی ویکسینیشن کا بے ترتیب ٹرائل: نوزائیدہ دور میں فائدہ مند غیر مخصوص اثرات؟ J. انفیکٹ۔ ڈس 204، 245–252 (2011)۔

14. نیٹیا، ایم جی وغیرہ۔ تربیت یافتہ استثنیٰ: صحت اور بیماری میں پیدائشی مدافعتی میموری کا ایک پروگرام۔ سائنس 352، aaf1098 (2016)۔

15. واک، J. et al. بی سی جی ویکسینیشن کے بعد کنٹرول شدہ انسانی ملیریا کے انفیکشن کے نتائج۔ نیٹ کمیون 10، 874 (2019)۔

16. آرٹس، آر جے ڈبلیو وغیرہ۔ BCG ویکسینیشن دانے دار قوت مدافعت سے وابستہ سائٹوکائنز کی شمولیت کے ذریعے انسانوں میں تجرباتی وائرل انفیکشن سے بچاتی ہے۔ سیل ہوسٹ مائکروب 23، 89–100 e105 (2018)۔

17. Leentjens, J. et al. بی سی جی ویکسینیشن صحت مند رضاکاروں میں بعد میں آنے والی انفلوئنزا ویکسینیشن کی مدافعتی صلاحیت کو بڑھاتی ہے: ایک بے ترتیب، پلیسبو کے زیر کنٹرول پائلٹ مطالعہ۔ J. انفیکٹ۔ ڈس 212، 1930–1938 (2015)۔

18. زیمرمین، پی اور کرٹس، این ویکسین کے ردعمل پر بی سی جی کا اثر - ایک منظم جائزہ۔ ماہر Rev. ویکسینز 17, 547–554 (2018)۔

19. Broset، E. et al. BCG ویکسینیشن چوہوں میں DTaP کے مدافعتی ردعمل کو بہتر بناتی ہے اور ماحولیاتی وبائی امراض کے مطالعہ میں کم پرٹیوسس کے واقعات سے وابستہ ہے۔ EBioMedicine 65, 103254 (2021)۔

20. Aaby, P., Andersen, A., Ravn, H. & Zaman, K. BCG کی شریک انتظامیہ اور خناق-ٹیٹنس-پرٹیوسس (DTP) کے ٹیکے بچوں کی اموات کو WHO کے پہلے BCG کے شیڈول سے زیادہ کم کر سکتے ہیں اور پھر DTP. دیہی بنگلہ دیش سے آبادیاتی نگرانی کے اعداد و شمار کا دوبارہ تجزیہ۔ EBioMedicine 22, 173–180 (2017)۔

21. بلاک، بی اے وغیرہ۔ بیکیلس کالمیٹ-گیرین اور ٹیٹنس-ڈفتھیریا-پرٹیوسس غیر فعال پولیو ویکسینیشن کے باہمی تعامل، غیر مخصوص، مدافعتی اثرات: ایک تحقیقی، بے ترتیب آزمائش۔ کلین متاثر کرنا۔ ڈس 70، 455–463 (2020)۔

22. Aaby, P., Ravn, H., Fisker, AB, Rodrigues, A. & Benn, CS کیا خناق-ٹیٹنس-پرٹیوسس (DTP) خواتین کی بڑھتی ہوئی اموات سے وابستہ ہے؟ ڈی ٹی پی ویکسین کے جنسی فرق کے غیر مخصوص اثرات کے مفروضوں کی جانچ کرنے والا ایک میٹا تجزیہ۔ ٹرانس R. Soc ٹراپ میڈ. ہائگ 110، 570–581 (2016)۔

23. وین ڈیر لی، ایس وغیرہ۔ ہالینڈ میں 2012 کی وبا کے دوران نوعمروں میں بورڈٹیلا پرٹیوسس کے حصول کی شرح میں اضافہ اور انفیکشن کے بعد طویل عرصے تک اینٹی باڈی برقرار رہنے کے ثبوت۔ یورو سرویل۔ https://doi.org/10.2807/1560-7917۔ ES.2017.22.47۔{8}} (2017)۔

24. بربرز، جی ایٹ ال۔ 18 یورپی ممالک میں درمیانی عمر کے بالغوں میں خناق کی گردش اور خناق کے خلاف کمزور تحفظ۔ نیٹ کمیون 12، 2871 (2021)۔ 25. وین گیگلڈونک، پی جی، وین شیجک، ایف جی، وین ڈیر کلیس، ایف آر اینڈ بربرز، جی اے ڈیولپمنٹ اور بورڈٹیلا پرٹیوسس، خناق اور تشنج کے لیے سیرم اینٹی باڈیز کے بیک وقت تعین کے لیے ملٹی پلیکس امیونوسے کی توثیق۔ J. Immunol. طریقے 335، 79–89 (2008)۔

26. Schure, RM et al. 4- سالہ ڈچ بچوں میں مسلسل پانچویں سیلولر پرٹیوسس ویکسینیشن سے پہلے اور بعد میں ٹی سیل کے ردعمل۔ کلین ویکسین امیونول۔ 19، 1879–1886 (2012)۔

27. Mathurin, KS, Martens, GW, Cornfeld, H. & Welsh, RM CD4 T-cell-mediated heterologous immunity between mycobacteria and poxviruses. جے ویرول۔ 83، 3528–3539 (2009)۔

28. Lertmemongkolchai, G., Cai, G., Hunter, CA & Bancroft, GJ Bystander CD8 پلس T خلیات کی ایکٹیویشن بیکٹیریل پیتھوجینز کے جواب میں IFN-gamma کی تیزی سے پیداوار میں معاون ہے۔ J. Immunol. 166، 1097–1105 (2001)۔

29. Zimmermann، P. et al. شیر خوار بچوں میں ہیٹرولوگس ویکسین کے ردعمل پر نوزائیدہ باسیل کالمیٹ-گورین (بی سی جی) کے حفاظتی ٹیکوں کا اثر۔ ویکسین 37، 3735–3744 (2019)۔

30. Ritz, N., Mui, M., Balloch, A. & Curtis, N. معمول کی حفاظتی ٹیکوں کے مدافعتی ردعمل پر Bacille CalmetteGuerin ویکسین کا غیر مخصوص اثر۔ ویکسین 31، 3098–3103 (2013)۔

31. Libraty، DH et al. نوزائیدہ بی سی جی ویکسینیشن کا تعلق ہیٹرولوگس شیر خوار بچوں کی ویکسین کے لیے بہتر T-Helper 1 مدافعتی ردعمل سے ہے۔ ویکسینول کی آزمائش۔ 3، 1–5 (2014)۔ 32. du Plessis, WJ et al. اینٹی جینک محرک پر بی خلیوں کا فعال ردعمل: اویکت تپ دق کی ابتدائی رپورٹ۔ PLOS ONE 11, e0152710 (2016)۔

33. Biering-Sorensen، S. et al. BCG ویکسین کی پیداوار میں ترقی کی تبدیلی اور مدافعتی ردعمل کے ساتھ وابستگی۔ بے ترتیب آزمائش کے اندر ایک مشاہداتی مطالعہ۔ ویکسین 33، 2056–2065 (2015)۔

34. آر یو، ایچ وغیرہ۔ جینوم ریجن آف ڈفرنس 4 (RD4) کا مائکوبیکٹیریل وائرلینس اور BCG کی افادیت پر اثر۔ سامنے والا۔ سیل متاثر کرنا۔ مائکروبیول 7، 239 (2017)۔ 35. Cho, T. et al. BCG ویکسین کا جائزہ اور تپ دق کے خاتمے کی طرف دیگر طریقوں کا جائزہ۔ ہم ویکسین. امیونودر۔ 17، 2454–2470 (2021)۔

36. Brosch، R. et al. BCG کی جینوم پلاسٹکٹی اور ویکسین کی افادیت پر اثر۔ پروک نیٹل اکاد۔ سائنس USA 104، 5596–5601 (2007)۔

37. پلاٹکن، ​​SA ویکسینیشن کی وجہ سے تحفظ کے باہمی تعلق۔ کلین ویکسین. امیونول۔ 17، 1055–1065 (2010)۔

38. راس، پی جے وغیرہ۔ بورڈٹیلا پرٹیوسس کے لیے انکولی استثنیٰ میں Th1 اور Th17 خلیات کا رشتہ دار حصہ: ایک بہتر سیلولر پرٹیوسس ویکسین کے عقلی ڈیزائن کی طرف۔ پی ایل او ایس پیتھوگ۔ 9، e1003264 (2013)۔

39. ڈی گراف، ایچ. وغیرہ. بورڈٹیلا پرٹیوسس کالونائزیشن اور استثنیٰ کی تحقیقات: ایک داخلی مریض کے کنٹرول شدہ انسانی انفیکشن ماڈل کے لیے پروٹوکول۔ BMJ Open 7, e018594 (2017)۔

40. da Silva Antunes, R. et al. Th1/Th17 پولرائزیشن بار بار سیلولر بوسٹر کے باوجود پورے سیل پرٹیوسس ویکسینیشن کے بعد برقرار رہتا ہے۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 128، 3853–3865 (2018)۔

41. Hijnen, M., van Gageldonk, PG, Berbers, GA, van Woerkom, T. & Mooi, FR The Bordetella pertussis virulence factor P.69 pertactin Escherichia coli میں زیادہ پیداوار کے بعد اپنی مدافعتی خصوصیات کو برقرار رکھتا ہے۔ Protein Expr. پیوریف۔ 41، 106–112 (2005)۔

42. Kalina، T. et al. فلو سائٹو میٹر کے آلے کی ترتیبات اور امیونو فینوٹائپنگ پروٹوکول کی یورو فلو معیاری کاری۔ لیوکیمیا 26، 1986–2010 (2012)۔

43. Blanco، E. et al. پردیی خون میں عام بی سیل اور پلازما سیل سبسیٹ کی عمر سے وابستہ تقسیم۔ J. الرجی کلین۔ امیونول۔ 141، 2208–2219۔ e2216 (2018)۔

44. Bates, D., Machler, M., Bolker, BM & Walker, SC فٹنگ lme4 کا استعمال کرتے ہوئے لکیری مخلوط اثرات والے ماڈلز۔ جے اسٹیٹ نرم 67، 1–48 (2015)۔

45. Lenth, R. Emmeans: تخمینہ شدہ مارجنل مطلب، یعنی کم سے کم مربع، مطلب (2018)۔

46. ​​Kuhn، M. کیریٹ پیکج کا استعمال کرتے ہوئے R میں پیشن گوئی کے ماڈل بنانا۔ جے اسٹیٹ نرم 28، 1–26 (2008)۔

اعترافات

ہم PT اور FHA antigens کی فراہمی کے لیے Anne-Marie Buisman (RIVM) کا شکریہ ادا کرنا چاہیں گے جو PBMC کے دوبارہ محرک کے تجربات کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ ہم ان تمام رضاکاروں کا شکریہ ادا کرتے ہیں جنہوں نے ٹرائل میں حصہ لیا۔ اس کام کو نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف پبلک ہیلتھ اینڈ دی انوائرمنٹ (RIVM)، نیدرلینڈز (SPR پروجیکٹ S112200) نے تعاون کیا۔ MGN کو ERC ایڈوانسڈ گرانٹ (#833247) اور نیدرلینڈز آرگنائزیشن فار سائنٹیفک ریسرچ کی جانب سے اسپینوزا گرانٹ سے تعاون حاصل تھا۔

مصنف کی شراکتیں۔

تصورات: BAB، MGN، RvC، اور DAD؛ طریقہ کار: ES، MJE، GAMB، PGMvG، BAB، اور LCJdB؛ تفتیش: ES، MJE، GAMB، PGMvG، BAB، LCJdB، اور JG؛ رسمی تجزیہ: جے جی؛ تحریری-اصلی مسودہ: JG اور DAD؛ تحریری جائزہ اور ترمیم: تمام۔

مسابقتی دلچسپیاں

MGN کے پاس TTxD کے لیے لائسنس یافتہ تربیت یافتہ استثنیٰ کو روکنے کے لیے نانوبیولوجکس میں ایک پیٹنٹ ہے، اور TTxD کے لیے لائسنس یافتہ تربیت یافتہ استثنیٰ کو متحرک کرنے کے لیے نانوبیولوجی میں ایک پیٹنٹ ہے۔ دیگر تمام مصنفین کسی ممکنہ تنازعات کی اطلاع نہیں دیتے ہیں۔ تمام مصنفین نے دلچسپی کے ممکنہ تنازعات کے انکشاف کے لیے ICMJE فارم جمع کرایا ہے۔

اضافی معلومات

اضافی معلومات آن لائن ورژن میں اضافی مواد موجود ہے جو https://doi.org/10.1038/s41541-022-00438-4 پر دستیاب ہے۔

مواد کے لیے خط و کتابت اور درخواستوں کو Dimitri A. Diavatopoulos سے مخاطب کیا جانا چاہیے۔

دوبارہ پرنٹس اور اجازت کی معلومات http://www.nature.com/ دوبارہ پرنٹس پر دستیاب ہیں۔

پبلشر کا نوٹ Springer Nature شائع شدہ نقشوں اور ادارہ جاتی وابستگیوں میں دائرہ اختیار کے دعووں کے بارے میں غیر جانبدار رہتا ہے۔

رسائی کھولیں۔

یہ مضمون تخلیقی العام انتساب 4 کے تحت لائسنس یافتہ ہے ) اور ماخذ، Creative Commons لائسنس کا لنک فراہم کریں، اور نشاندہی کریں کہ آیا تبدیلیاں کی گئی ہیں۔ اس آرٹیکل میں موجود تصاویر یا دیگر فریق ثالث کا مواد آرٹیکل کے تخلیقی العام لائسنس میں شامل کیا گیا ہے جب تک کہ مواد کو کریڈٹ لائن میں دوسری صورت میں اشارہ نہ کیا جائے۔ اگر مواد آرٹیکل کے تخلیقی العام لائسنس میں شامل نہیں ہے اور آپ کے مطلوبہ استعمال کی قانونی ضابطے کے ذریعے اجازت نہیں ہے یا اجازت شدہ استعمال سے زیادہ ہے، تو آپ کو کاپی رائٹ ہولڈر سے براہ راست اجازت حاصل کرنے کی ضرورت ہوگی۔

For more information:1950477648nn@gmail.com