خلاصہ

تعارف: Propolis شہد کی مکھیوں کے ذریعہ مختلف درختوں اور پودوں کی کلیوں اور اخراج سے اکٹھا کیا جانے والا ایک قدرتی مادہ ہے۔ یہ بڑے پیمانے پر قبول کیا جاتا ہے کہ پروپولیس کی ساخت جمع کرنے کی جگہ کی phytogeographic خصوصیات پر منحصر ہے۔

سیستانچ کا گلائکوسائیڈ دل اور جگر کے بافتوں میں ایس او ڈی کی سرگرمی کو بھی بڑھا سکتا ہے، اور ہر ٹشو میں لیپوفسن اور ایم ڈی اے کے مواد کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے، مختلف رد عمل آکسیجن ریڈیکلز (OH-، H₂O₂، وغیرہ) کو مؤثر طریقے سے ختم کر سکتا ہے اور DNA کو پہنچنے والے نقصان سے بچا سکتا ہے۔ OH ریڈیکلز کے ذریعے۔ Cistanche phenylethanoid glycosides میں آزاد ریڈیکلز کو صاف کرنے کی مضبوط صلاحیت ہوتی ہے، وٹامن C سے زیادہ کم کرنے کی صلاحیت، سپرم معطلی میں SOD کی سرگرمی کو بہتر بناتی ہے، MDA کے مواد کو کم کرتی ہے، اور سپرم کی جھلی کے کام پر ایک خاص حفاظتی اثر رکھتی ہے۔ Cistanche polysaccharides D-galactose کی وجہ سے تجرباتی طور پر حساس چوہوں کے erythrocytes اور پھیپھڑوں کے ٹشوز میں SOD اور GSH-Px کی سرگرمی کو بڑھا سکتے ہیں، نیز پھیپھڑوں اور پلازما میں MDA اور کولیجن کے مواد کو کم کر سکتے ہیں، اور elastin کے مواد کو بڑھا سکتے ہیں۔ ڈی پی پی ایچ پر اچھا اثر ڈالتا ہے، سینسنٹ چوہوں میں ہائپوکسیا کے وقت کو طول دیتا ہے، سیرم میں ایس او ڈی کی سرگرمی کو بہتر بناتا ہے، اور تجرباتی طور پر سنسنی والے چوہوں میں پھیپھڑوں کے جسمانی انحطاط میں تاخیر کرتا ہے، سیلولر مورفولوجیکل انحطاط کے ساتھ، تجربات سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche میں اینٹی آکسیڈنٹ کی اچھی صلاحیت ہے۔ اور جلد کی بڑھتی ہوئی بیماریوں کو روکنے اور علاج کرنے کے لیے ایک دوا بننے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، Cistanche میں echinacoside میں DPPH فری ریڈیکلز کو ختم کرنے کی قابل ذکر صلاحیت ہے اور یہ رد عمل آکسیجن کی انواع کو ختم کر سکتا ہے، آزاد ریڈیکل-حوصلہ افزائی کولیجن کے انحطاط کو روک سکتا ہے، اور تھامین فری ریڈیکل ایون کے نقصان پر بھی اچھا مرمتی اثر رکھتا ہے۔

Cistanche Tubulosa Supplement پر کلک کریں۔

【مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

مقاصد: اس مطالعے کا مقصد بینن (شمالی، مرکز اور جنوب) اور کانگو، افریقہ کے مختلف علاقوں میں جمع کیے گئے آٹھ پروپولیس بیچوں سے ایتھانولک نچوڑ کی فائٹو کیمیکل ساخت کا تعین کرنا تھا۔

مواد اور طریقے:پروپولیس نمونوں کی خصوصیات کاربن-13 جوہری مقناطیسی گونج (13C NMR) MixONat سافٹ ویئر کے ساتھ مل کر مختلف ہائفینیٹڈ کرومیٹوگرافک طریقوں کا استعمال کرکے انجام دی گئیں۔ اس کے بعد ان کے اینٹی آکسیڈینٹ یا اینٹی ایڈوانسڈ گلائیکیشن اینڈ پروڈکٹ (اینٹی AGE) سرگرمی کا بالترتیب diphenylpicrylhydrazyl اور bovine serum albumin asses استعمال کرکے جائزہ لیا گیا۔

نتائج: 13C NMR ڈی ریپلیکیشن کے ساتھ مل کر کرومیٹوگرافک تجزیوں سے پتہ چلتا ہے کہ بینن کے مرکز سے دو نمونوں کی نمائش کی گئی ہے، اس کے علاوہ پینٹا سائکلک ٹرائیٹرپینز، میتھوکسیلیٹڈ سٹیلبینوئڈز یا فیننتھرینز، جو پہلے نمونے کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کے لیے ذمہ دار ہیں۔ ان میں سے، کومبریٹاسٹیٹن سائٹوٹوکسک ہو سکتا ہے۔ دوسرے کے لیے، ماکارنگا قسم کے پروپولیس میں پہلے سے تیار شدہ فلاوانونز ان کی اہم اینٹی AGE سرگرمی کے لیے ذمہ دار تھے۔ کانگو کا نمونہ Mangifera indica پرجاتیوں سے تعلق رکھنے والے بہت سے triterpene مشتقات پر مشتمل تھا۔

نتیجہ: لہذا، بینن کے مرکز سے پروپولس خاص دلچسپی کا حامل معلوم ہوتا ہے، اس کی اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی AGE خصوصیات کی وجہ سے۔ اس کے باوجود، چونکہ اشنکٹبندیی علاقوں میں اس کے کیمو تنوع کی وجہ سے پروپولیس کا معیاری بنانا مشکل ہے، افریقہ میں خوراک اور صحت کی مصنوعات میں پروپولیس کے استعمال کو فروغ دینے سے پہلے ایک منظم فائٹو کیمیکل تجزیہ کی ضرورت ہے۔

مطلوبہ الفاظ

13C NMR ڈی ریپلیکیشن، میتھوکسیلیٹڈ اسٹیلبینائڈز یا فیننتھرینز، پینٹا سائکلک ٹرائیٹرپینز، پرینلیٹیڈ فلاوانونز، پروپولیس

1. تعارف

پروپولس ایک قدرتی رال والا مادہ ہے جو شہد کی مکھیوں کے ذریعے مختلف درختوں اور پودوں کی کلیوں اور اخراج سے اکٹھا کیا جاتا ہے، جس میں موم اور تھوک کے خامروں سے ملایا جاتا ہے۔ چھتے کے اندر (چھوٹے کیڑے)، اور انتہائی نمی یا خشک سالی کے حالات کو متوازن رکھتے ہیں۔ , موم (30 فیصد)، تیل (10 فیصد)، پولن (5 فیصد)، اور اضافی فینولک مرکبات جیسے کہ flavonoids. , جس سے شہد کی مکھیاں exudates جمع کرتی ہیں۔ 7 یہ قبول کیا جاتا ہے کہ کئی عوامل، جیسے علاقے کی پھولوں کی ساخت، جمع کرنے کی جگہ اور وقت، موسم، جمع کرنے والے کی قسم، دستیابی اور اونچائی، اور خوراک کی سرگرمی پروپولیس کے استحصال کا پروپولیس کی کیمیائی ساخت پر اثر پڑتا ہے۔8,9 پیداوار کے جغرافیائی علاقے، نباتاتی ماخذ اور کیمیائی ساخت کے لحاظ سے پروپولیس کی مختلف اقسام ہیں۔ پروپولس کی سب سے عام قسمیں معتدل، برچ، اشنکٹبندیی، بحیرہ روم اور بحر الکاہل ہیں۔ 10 معتدل موسمی علاقوں سے پروپولیس، جیسے یورپ، شمالی امریکہ، یا ایشیا کے غیر اشنکٹبندیی علاقوں سے، بنیادی طور پر پاپولس پرجاتیوں کی کلیوں کے اخراج سے آتی ہے۔ Salicaceae) اور اس لیے flavonoids اور phenolic acids اور ان کے esters سے بھرپور ہے۔ تاہم، اشنکٹبندیی پروپولیس، ان خطوں سے شروع ہوتا ہے جہاں نہ تو چنار اور نہ ہی برچ اگتے ہیں، p-coumaric acids، benzophenones، یا terpenoids کے پہلے سے تیار شدہ مشتقات سے بھرپور ہوتے ہیں۔ جاپان، اور جزائر سولومن، اور برچ پروپولس خاص طور پر روس میں پایا جاتا ہے۔ 12 اشنکٹبندیی ایشیا سے پروپولیس کے مطالعہ سے انڈونیشین پروپولیس کے پودوں کے ذرائع کے طور پر ماکارنگا ڈیناریس ایل اور منگیفیرا انڈیکا ایل کی دریافت ہوئی ہے۔ دوسری طرف، Cupressaceae خاندان کی مخروطی نسلیں بحیرہ روم کے علاقوں میں پروپولیس کا بنیادی نباتاتی ذریعہ ہیں۔14 کیمیائی تجزیوں سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ پروپولس میں 300 سے زیادہ مختلف قدرتی مصنوعات (NPs) شامل ہیں، جن میں فینولک ایسڈ ڈیریویٹوز، کومارینز، فلاوونائڈز، ڈسپوزل، ڈسپوزل، ڈسپوزل شامل ہیں۔ ٹرائیٹرپینز، سٹیرائڈز، لگنانز، یا پہلے سے تیار شدہ بینزوفینونز۔ 15 پروپولیس کے حیاتیاتی اثرات کو بنیادی طور پر نہ صرف ان کے اینٹی آکسیڈنٹ، 16–18 اینٹی AGE (یعنی اعلی درجے کی گلیکشن اینڈ پروڈکٹ [AGE] کی تشکیل کی روک تھام)، 19 اینٹی آکسیڈینٹ کے بارے میں بیان کیا گیا ہے۔ - سوزش، 20 اور اینٹی ٹیومر اثرات، 21-23 لیکن ان کے اینٹی بیکٹیریل، 24-26 اینٹی فنگل، 15 اینٹی وائرل، 27 اور اینٹی پرجیوی 28 سرگرمیاں۔ Propolis اینٹی باڈیز کی پیداوار کو متحرک کرنے کے لیے بھی جانا جاتا ہے، جو کہ ویکسین میں اس کے ممکنہ استعمال کی تجویز کرتا ہے۔ سائنسی تحقیق میں، خاص طور پر جب اس کی کیمیائی ساخت کی وضاحت کی بات آتی ہے۔ زیادہ تر مطالعہ یورپ کے 19,30–33 اور لاطینی امریکہ کے نمونوں پر کیے گئے ہیں، خاص طور پر برازیل، 20,23,34–36 جبکہ افریقہ میں کچھ مطالعہ کیے گئے تھے۔

اس طرح، اس مطالعے کا مقصد بینن اور کانگو (افریقہ) کے مختلف فیٹو جیوگرافیکل زونز میں اکٹھے کیے گئے پروپولیس نمونوں سے بڑے مرکبات کی خصوصیات بنانا ہے جو MixONat سافٹ ویئر کے ساتھ 13C جوہری مقناطیسی گونج (NMR) ڈی ریپلیکیشن کا استعمال کرتے ہیں۔ 43,44 ڈیٹا بیس (DB) پر مشتمل ایک ابتدائی مطالعہ۔ NPs نے پہلے پروپولیس سے ان کی 13C کی پیشن گوئی کیمیکل شفٹوں (δC) کے ساتھ کوئی قابل استعمال ڈیٹا حاصل نہیں کیا جو عام طور پر پودوں کے نچوڑ سے حاصل کیے جانے والے تسلی بخش نتائج کے مقابلے میں۔ مقامی نباتات پر، کیموٹیکسونومک ڈی بی بنانا ناممکن بناتا ہے۔ اس طرح، بینینی اور کانگولیس پروپولیس کے بڑے مرکبات کو سمجھنے کے لیے، موجودہ کام میں ہم نے الٹرا وائلٹ اور بخارات سے متعلق روشنی کے بکھرنے کا پتہ لگانے والے ماس اسپیکٹومیٹری (HPLC-UV-ELSD-MS) اور گیس کرومیٹریگرافی کے ساتھ مل کر اعلی کارکردگی والی مائع کرومیٹریگرافی (ماس اسپیکٹومیٹری) کی۔ GC-MS) خام پروپولس کے نچوڑوں پر تجزیہ کرتا ہے تاکہ ان کی بنیادی ساختی خصوصیات کی نشاندہی کی جا سکے اور MixONat سافٹ ویئر کے لیے موزوں NPs کے متعلقہ DBs بنائیں۔ مزید پاکیزگی کے بغیر بڑے NPs کی شناخت۔ اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی AGE اسیس بھی کئے گئے۔

2. تجرباتی طریقہ کار

2.1 کیمیکل

1. 6-Hydroxy-2,- 5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox®) اور 50 - caffeoylquinic acid (chlorogenic acid) تھے Acros Organics (Geel, Belgium) سے حاصل کیا گیا۔

2.2 پروپولس کے نمونے

تین فائٹو جیوگرافک زونز (ٹیبل 1 اور فگر SI-1) میں شہد کی مکھیوں سے کھرچ کر آٹھ بینی پروپولیس کے نمونے جمع کیے گئے تھے۔ جمہوریہ کانگو کے مرکز میں بٹیک سطح مرتفع میں ببول کے درختوں کے مصنوعی جنگل میں کانگولی پروپولس کا ایک نمونہ جمع کیا گیا تھا (ٹیبل 1)۔

2.3 ایک قسم کا پودا نکالنا

پروپولیس کے ایتھانولک نچوڑ (EEPs) کو ابتدائی طور پر درج ذیل ایکسٹرکشن پروٹوکول کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا۔ تمام نمونوں کے لیے، 1 جی پروپولیس پاؤڈر 95 فیصد EtOH کے 20 ملی لیٹر میں ملایا گیا تھا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے تک ہلانے کے بعد، مکسچر کو سنٹرڈ گلاس ڈسک فنل فلٹر (16–40 μm تاکنا سائز) کا استعمال کرتے ہوئے فلٹر کیا گیا۔ اوشیشوں کو ایک ہی اقدامات کا استعمال کرتے ہوئے دو بار دوبارہ نکالا گیا۔ اس کے بعد، تینوں جمع کیے گئے فلٹریٹس کو راتوں رات 18 سینٹی گریڈ پر برقرار رکھا گیا، موم کو ہٹانے کے لیے فلٹر کیا گیا، اور EEPs دینے کے لیے کم دباؤ (40 C، 10 بار) کے تحت بخارات بن گئے۔

BC1 (1) اور BC2 (2) یا 10.3 جی سی جی (3) کے 8۔ فلیش کرومیٹوگرافی.

2.4 کل فینولک مواد کا تعین

کل فینولک مواد کا تعین Folin– Ciocalteu Colorimetric طریقہ کے ذریعے کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا، 19 اور حال ہی میں مائکرو پلیٹس میں براہ راست استعمال کے لیے ڈھال لیا گیا تھا۔ مختصراً، MeOH میں ہر ایک پروپولس نچوڑ کا 10 ul (BC1 کے لیے 3.5 mg/ml، BN2، BC2، اور CG کے لیے 5 mg/ml، BN1، BS1a، BS1b، اور BS2 کے لیے 7.5 mg/ml، اور BS3 کے لیے 10 mg/ml) کو 20 ul distilled water اور 10 ul Folin–Ciocalteu reagent کے ساتھ ایک 96- کنویں کی مائکروپلیٹ میں ملایا گیا۔ 3 منٹ کے بعد، 120 ul آست پانی اور 40 ul 20 فیصد آبی سوڈیم کاربونیٹ شامل کیا گیا۔ جاذبیت کو کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 30 منٹ کے بعد 760 nm پر TECAN® مائکروپلیٹ سپیکٹرو فوٹومیٹر (V6.5) پر ماپا گیا۔ نچوڑ کے محلول کی بجائے MeOH کا استعمال کرتے ہوئے اسی طرح ایک خالی تیار کیا گیا تھا اور انشانکن وکر (0.04–0.328 mg/ml; y=2.7241x 0.0039; r2=0 کا حساب لگانے کے لیے گیلک ایسڈ کا استعمال کیا گیا تھا۔ .9982)۔ ہر نمونے کا سہ رخی میں تجزیہ کیا گیا۔ کل فینولک مواد کا اظہار گیلک ایسڈ کے مساوی (ملی گرام) فی گرام ایکسٹریکٹ (ملی گرام GAE/g) کے لحاظ سے کیا گیا تھا۔

2.5 ابتدائی کرومیٹوگرافیکل تجزیہ

2.5.1 تجزیاتی TLC

تجزیاتی پتلی پرت کی کرومیٹوگرافی (TLC) TLC Alugram Xtra SIL G/UV254 (Macherey-Nagel, Düren, Germany) پر کی گئی تھی، جس میں cyclohexane: AcOEt کا مرکب استعمال کیا گیا تھا۔ کرومیٹوگرام میں دھبوں کو پہلے UV لائٹ (254 nm) کے تحت دیکھا گیا اور پھر وینلن – سلفورک ایسڈ ریجنٹ (1:99 w/v وینلن کے 98 ملی لیٹر میں 2 ملی لیٹر مرتکز سلفورک ایسڈ: 95 فیصد ایتھنول محلول) اور کرومیٹوگرامس کو 5 منٹ کے لیے 110 ڈگری سینٹی گریڈ پر گرم کریں۔

2.5.2 GC-MS طریقہ کار

GC-MS تجزیہ غیر اخذ کردہ نمونوں پر Shimadzu Gas Chromatograph GCMS-QP2010 SE (Noisiel, France) کا استعمال کرتے ہوئے 70 eV کے آئنائزیشن وولٹیج کے ساتھ کیا گیا تھا (الیکٹرانک کے اثرات). نمونے ڈائیکلورومیتھین (ڈی سی ایم) میں نچوڑ کے لیے 2 ملی گرام/ملی لیٹر اور فرکشن کے لیے 1 ملی گرام/ملی لیٹر پر تیار کیے گئے تھے۔ Phenomenex ZB5 کالم (0.25 mm فلم موٹائی کے ساتھ 30 m * 0.250 mm اندرونی قطر؛ Phenomenex، Le Pecq، France) کا استعمال کرتے ہوئے علیحدگیاں کی گئیں۔ درجہ حرارت کو حسب ذیل پروگرام کیا گیا تھا: 180 ڈگری سینٹی گریڈ (3 منٹ)، 180-280 ڈگری سینٹی گریڈ 10 سینٹی گریڈ فی منٹ، اور 280 ڈگری سینٹی گریڈ (27 منٹ)۔ ہیلیم کو 2.0 ملی لیٹر فی منٹ کی بہاؤ کی شرح پر کیریئر گیس کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ انجیکٹر اور ڈیٹیکٹر کا درجہ حرارت بالترتیب 250 ڈگری سینٹی گریڈ اور 280 ڈگری سینٹی گریڈ پر سیٹ کیا گیا تھا۔ میٹابولائٹس کی شناخت ان کے برقرار رکھنے کے اوقات (Rt)، برائے نام بڑے پیمانے پر، اور/یا ٹکڑے ٹکڑے کرنے کے نمونوں کے ساتھ مستند نمونوں اور/یا سامان کی فریگمنٹیشن پیٹرن لائبریریوں میں موجود (NIST11، NIST11s، اور FFNSC2) کے ساتھ کر کے کی گئی۔

2.5.3 HPLC-DAD-ELSD طریقہ کار

کرومیٹوگرافک تجزیہ شیمادزو 2030C 3D مائع کرومیٹوگراف (Noisiel، France) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جو ایک ڈایڈڈ سرنی سے لیس تھا۔ڈیٹیکٹر (DAD) اور ایک ELSD (Sedere®) جس میں Lichrospher® کالم 1{{10}0 RP-18 (125 mm * 4 mm id, 5 μm, Merck, Darmstadt, Germany) ) ایک Lichrocart® 4–4 گارڈ کارتوس (4 mm*4 mm id) کے ساتھ محفوظ، 1 ml/min کی بہاؤ کی شرح کا استعمال کرتے ہوئے۔ موبائل فیز میں پانی (سالوینٹ اے) اور میتھانول (سالوینٹ بی) میں 0.1 فیصد فارمک ایسڈ شامل تھا، اور علیحدگی درج ذیل لکیری میلان کے ذریعے کی گئی تھی: 25–100 فیصد B (0–40 منٹ)، 100 فیصد (40–45) منٹ)۔ UV – vis سپیکٹرا 190–600 nm کی حد میں ریکارڈ کیا گیا تھا، اور chromatograms 254 اور 280 nm پر حاصل کیے گئے تھے۔ ELSD کو 30 پر گرم کیا گیا تھا۔ڈگریC، اور 4 کا فائدہ سگنل پر لگایا گیا تھا۔ نمونے MeOH میں 10 mg/ml کے ارتکاز پر تیار کیے گئے تھے اور معطل شدہ مواد کے نشانات کو ہٹانے کے لیے انجیکشن (10 ul) سے 10 منٹ پہلے 13،000 g پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا۔

2.5.4 HPLC-UV-MS طریقہ کار

HPLC-UV-MS کے تجزیے ایک 2795 واٹرس علیحدگی ماڈیول (گیانکورٹ، فرانس) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے جو ایک ڈوئل λ 2487 واٹر ڈیٹیکٹر سے لیس تھا۔ کالم، موبائل فیزز، اور گریڈینٹ وہی تھے جیسا کہ اوپر HPLC-DAD-ELSD کے لیے بیان کیا گیا ہے۔ کرومیٹوگرامس 254 اور 280 nm پر حاصل کیے گئے تھے۔ بڑے پیمانے پر تجزیے بروکر (بریمن، جرمنی) الیکٹرو اسپرے آئنائزیشن/ وایمنڈلیی پریشر کیمیکل آئنائزیشن (ESI/APCI) Ion Trap Esquire 3000 plus پر مثبت اور منفی دونوں طریقوں سے کیے گئے تھے: تصادم گیس، He; تصادم توانائی کا طول و عرض، 1.3 V؛ نیبولائزر اور خشک کرنے والی گیس، N2، 7 L/منٹ؛ نیبولائزر گیس کا پریشر، 30 psi؛ خشک درجہ حرارت، 340 C؛ بہاؤ کی شرح، 1.0 ملی لیٹر/منٹ؛ سالوینٹ تقسیم کا تناسب، 1:9؛ اسکین رینج، m/z 100–1،000۔ نمونے MeOH میں 10 ملی گرام/ملی لیٹر کے ارتکاز پر تیار کیے گئے، 10 منٹ کے لیے 13,000 گرام پر سینٹرفیوگ کیے گئے، اور 0۔{27} μm پولیٹیٹرا فلوروتھیلین (PTFE) جھلی کے سرنج فلٹر کے ذریعے انجیکشن (20 ul) ہٹانے سے پہلے فلٹر کیے گئے۔ معطل مواد کی.

فلیش کرومیٹوگرافی کے ذریعے 2.6 EEP فریکشنیشن

سب سے پہلے، BC1 (1) کا 3.8 جی، BC2 (2) کا 3.5 جی، یا 4۔ جیل: نچوڑ کا تناسب، 2:1)۔ ان سب کے لیے، سالوینٹس کو تب تک بخارات بننے دیا جاتا تھا جب تک کہ ایک باریک خشک پاؤڈر حاصل نہ ہوجائے۔ ہر EEP کے لیے، اس کے بعد CombiFlash Teledyne ISCO اپریٹس (Lincoln, NE, USA) کا استعمال کرتے ہوئے سلیکا جیل کالم (Chromabond® Flash RS 4{{20} SiOH, 4{{83} } g، Macherey-Nagel، Hoerdt، France) 25 ملی لیٹر فی منٹ کی بہاؤ کی شرح پر سائکلوہیکسین (سالوینٹ اے) اور ایتھائل ایسیٹیٹ (ای ٹی او اے سی) (سالوینٹ بی) کے ساتھ درج ذیل گریڈینٹ ایلیوشن کا استعمال کرتے ہوئے: (1) BC1 EEP کے لیے، 5 فیصد B (0–10 منٹ)، 5–20 فیصد B (10–30 منٹ)، 20–30 فیصد B (30–60 منٹ)، 30–50 فیصد B (60–85 منٹ)، اور 50–100 فیصد B (85-110 منٹ)؛ 20 ملی لیٹر کی 160 ٹیوبیں جمع کی گئیں اور ان کے TLC کرومیٹوگرافک پروفائلز (سائیکلوہیکسین: ای ٹی او اے سی تناسب، 90:10 سے 50:50) کی بنیاد پر 14 حصوں (BC1_F1 سے BC1_F14) میں جوڑ دی گئیں۔ ); (2) BC2 EEP کے لیے، 5 فیصد B (0–10 منٹ)، 5–10 فیصد B (10–20 منٹ)، 10–30 فیصد B (20–40 منٹ)، 30–40 فیصد B (40–55) منٹ)، اور 40–100 فیصد B (55–70 منٹ)؛ 20 ملی لیٹر کی 100 ٹیوبیں جمع کی گئیں اور ان کے TLC کرومیٹوگرافک پروفائلز (سائیکلوہیکسین: ای ٹی او اے سی تناسب، 90:10 سے 60:40) کی بنیاد پر 8 حصوں (BC2_F1 سے BC2_F8) میں جوڑ دی گئیں۔ ); (3) CG EEP کے لیے، 5 فیصد B (0–10 منٹ)، 5–10 فیصد B (10–30 منٹ)، 10–20 فیصد B (30–50 منٹ)، 20–40 فیصد B (50–70) منٹ)، 40–60 فیصد B (70–80 منٹ)، اور 60–100 فیصد B (80–90 منٹ)؛ 20 ملی لیٹر کی 135 ٹیوبیں جمع کی گئیں اور ان کے TLC کرومیٹوگرافک پروفائلز کی بنیاد پر 23 حصوں (CG_F1 سے CG_F23) میں جوڑ دی گئیں۔ )۔

BC پر ایک اضافی فریکشنیشن مرحلہ انجام دیا گیا جیل: نچوڑ کا تناسب، 2:1)۔ علیحدگی کا احساس C18 کالم (Interchim® PF-C18HP, 4 g, Montluçon, France) پر پانی (سالوینٹ A) اور MeOH (سالوینٹ B) کے ساتھ 15 ملی لیٹر فی منٹ کے بہاؤ کی شرح پر درج ذیل گریڈینٹ ایلیوشن کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا: 50– 70 فیصد B (0–30 منٹ) اور 70–100 فیصد B (30–40 منٹ)؛ 8 ملی لیٹر کی 80 ٹیوبیں جمع کی گئیں اور ان کے HPLC-UV (280 nm) پروفائلز کی بنیاد پر 5 حصوں (BC2_F7-1 سے BC2_F7-5) میں جوڑ دی گئیں۔ .

2۔{1}} H اور 13C NMR تجزیہ

NMR سپیکٹرا (1D اور 2D) پروپولیس فریکشنز (7–58 mg) یا بعض اوقات NPs کو ڈیوٹریٹڈ کلوروفارم (CDCl3) یا deuterated methanol (CD3OD) (500 ul) میں JEOL NMR سپیکٹرومیٹر پر 400 MHz پر 1 H ​​اور 100 کے لیے ریکارڈ کیا گیا تھا۔ 13C کے لیے میگاہرٹز۔ NMR تجربات (1 H NMR, 13C NMR, DEPT-135, DEPT-90, اور 2D NMR) فریکشنز اور خالص NPs پر 298 K پر JEOL 400 MHz H اسپیکٹومیٹر پر کئے گئے (JEOL Europe, Croissy -سور-سین، فرانس) ایک الٹا 5-ملی میٹر پروب (ROYAL RO5) سے لیس ہے۔ کیمیکل شفٹوں (δH اور δC) کو پی پی ایم اور J قدروں میں Hz میں ظاہر کیا جاتا ہے۔

13C NMR (100 MHz) سپیکٹرا کے لیے، WALTZ-16 decoupling sequence کا استعمال 1.04 s (32,768 پیچیدہ ڈیٹا پوائنٹس) کے حصول کے وقت اور 2 s کی نرمی میں تاخیر کے ساتھ کیا گیا تھا۔ 1,500 اور 11 کے درمیان، تسلی بخش S/N تناسب حاصل کرنے کے لیے000 اسکینز جمع کیے گئے۔ فوئیر ٹرانسفارمیشن سے پہلے ہر فری انڈکشن ڈے (ایف آئی ڈی) پر 1 ہرٹز ایکسپونیشنل لائن کو وسیع کرنے والا فلٹر لاگو کیا گیا تھا۔ سپیکٹرا کو دستی طور پر مرحلہ وار اور بیس لائن سے درست کیا گیا MestReNova سافٹ ویئر (Mestrelab Research، Santiago de Compostela، Spain) اور δC 77.16 ppm (CDCl3) اور δC 49.00 ppm (CD3OD) پر ڈیوٹریٹڈ سالوینٹ کی مرکزی گونج پر حوالہ دیا گیا۔ پولرائزیشن ٹرانسفر (DEPT) تجربات کے ذریعے مسخ شدہ اضافہ کے لیے، 512 اور 5,500 کے درمیان اسکینوں کی ضرورت تھی اور 13C سپیکٹرا کے ساتھ سیدھ میں دیے گئے δC کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا تھا۔ اس کے بعد ایک کم از کم شدت کی حد کو دستی طور پر مثبت 13C NMR اور DEPT-90 سگنلز اور مثبت اور منفی DEPT-135 سگنلز کو جمع کرنے کے لیے استعمال کیا گیا جبکہ ممکنہ شور کے نمونے سے گریز کیا گیا۔

Propolis DB1 سب سے پہلے SciFindern پر propolis میں بیان کردہ مرکبات کی تلاش کے ذریعے بنایا گیا تھا، 47 جس کے نتیجے میں 1,471 NPs کا DB نکلا تھا۔ ایڈوانسڈ کیمسٹری ڈویلپمنٹ (ACD) NMR پیشن گوئی (C، H) کا استعمال کرتے ہوئے δC اقدار کی پیش گوئی کی گئی تھی۔ NPs پر مشتمل اس طرح کے DBs سے ان کی δC-SDF اقدار کے ساتھ، MixONat میں شامل CTypeGen روٹین نے ایک مناسب DB بنایا: یہ مقامی ڈیٹا فائل (SDF) کو پڑھتا ہے اور کیمیکل شفٹوں کو کاربن کی قسم کے مطابق ترتیب دیتا ہے۔ اس کے بعد مطلوبہ سی قسم کا SDF بنایا گیا، یعنی c-type Propolis DB1.43,44

Stilbenoids{{0}Phenanthrenoids DB2 بنایا گیا تھا۔ 276,518 NPs48 (LOTUS, 2022) پر مشتمل LOTUS DB میں مطلوبہ الفاظ stilbenoids اور phenanthrenes کا استعمال کرتے ہوئے مادوں کی تلاش نے SDF کے طور پر 2,681 NPs میں سے Stilbenoids_Phenanthrenoids DB2 حاصل کرنے کی اجازت دی۔ Flavanones DB3 پھر تخلیق کیا گیا: SciFindern47 پر 2-phenylchroman-4-کا استعمال کرتے ہوئے تلاش کی گئی جس سے 56,679 مالیکیولز کو منتخب کرنے کی اجازت دی گئی۔ SciFindern کے تجویز کردہ فلٹر "ریفرنس رول" کے ساتھ مادوں کے تجزیے کا استعمال کرتے ہوئے "قدرتی مصنوعات کی موجودگی" کا حوالہ دیتے ہوئے انہیں مزید کم کر کے 2,893 کر دیا گیا۔ متوقع مالیکیولر ویٹ (MW) (یعنی 340 سے 424 Da) کی بنیاد پر فلٹرنگ قدم کے ذریعے اضافی ریفائننگ کے بعد، تمام متعلقہ فلاونونز کو بعد میں Flavanones DB3 (684 NPs) سے NPs حاصل کرنے کے لیے SDF کے طور پر برآمد کیا گیا۔ DB2 اور DB3 کے ہر NPs کے لیے، δC-SDF اقدار کی پیش گوئی ACD NMR پیشن گوئی کرنے والے (C, H) سافٹ ویئر کے ساتھ ساتھ اس طریقہ کار کے ساتھ کی گئی تھی جو پہلے Nuzillard46 کے ذریعے بیان کی گئی تھی تاکہ MixONat کے استعمال کے لیے تیار c-type SDF کو براہ راست حاصل کیا جا سکے۔ مؤخر الذکر میں DB کے ہر کمپاؤنڈ کے لئے میتھائل، میتھیلین، میتھین، یا کواٹرنری کاربن کے طور پر ترتیب دی گئی پیشن گوئی شدہ δC اقدار شامل ہیں۔

Triterpenes DB4 PNMRNP3 DB49,50 سے ACD NMR پیشن گوئی کرنے والے (C, H) سافٹ ویئر میں SDF کے طور پر 100 اور 500 Da (یعنی تلاش ڈیٹا: triterpenes؛ تلاش MW: 100 سے 500) کے درمیان میگاواٹ کے ساتھ ٹرائیٹرپینز تلاش کرکے بنایا گیا تھا۔ مطلوبہ سی قسم کی فائل فارمیٹ میں براہ راست 6,623 ٹرائیٹرپینز کا DB حاصل کرنے کے لیے۔

Alk(en)yl resorcinol اور phenol derivatives DB5 کو PNMRNP3 DB49,50 سے بنایا گیا تھا جسے SDF کے طور پر ACD NMR پریڈیکٹرز (C, H) سافٹ ویئر میں M-alk(en)yl فینول سکیفولڈ کے ساتھ NPs کو تلاش کرکے اور فینول کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا۔ (یعنی، 3-(hexadec-8-en-1-yl)فینول سبسٹرکچر تلاش؛ تلاش Classyfire class: phenol) براہ راست مطلوبہ c-type فائل فارمیٹ میں 44 NPs کا DB حاصل کرنے کے لیے۔

2۔{1}}MixONat سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے C NMR پر مبنی ڈیپلیکیشن

ہر تجرباتی سپیکٹرم (13C NMR، DEPT-135، اور DEPT-90) سے حاصل کردہ چوٹی کی فہرست اور شدت کا ڈیٹا بطور ایک برآمد کیا گیا تھا۔ csv فائل Microsoft Excel (Microsoft 16.45) سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے اور MixONat سافٹ ویئر میں ان پٹ فائل کے طور پر استعمال ہوتی ہے۔ اس طرح کی فائلیں δC اقدار کی ایک فہرست پر مشتمل ہوتی ہیں جو ایک ہی لائن پر ان کی شدت سے منسلک گھٹتی ہوئی ترتیب میں ترتیب دی جاتی ہیں، کوما سے الگ کی جاتی ہیں۔

Data were then processed using MixONat, which exploits any dataset that provides molecular structures in the previously described SDF (i.e., c-type DB1–5 file format). Based on this information, MixONat was used to compare the experimental δC values of the fractions to the predicted δC-SDF values from the DB and made suggestions for specific NPs potentially present in the analyzed sample. In the end, MixONat provided NP proposals with scores ranging from 0 to 1, i.e., from 0% to 100% (where 1 corresponds to a perfect match and 0 indicates no similarity for a given compound from the used DB). Acceptable values for putative identification were >0.70۔ اس کے بعد، بہترین اسکور والے NPs کے تجرباتی ڈیٹا کا ادب سے موازنہ کیا گیا۔

2.9 طہارت

2.9.1 تیاری HPLC

فریکشن BC{{0}F6 اور BC1_F8 (40 ملی گرام MeOH کے 2 ملی لیٹر میں) شیمادزو ایل سی-20AP تیاری کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ مائع کرومیٹوگراف UV-vis ڈیٹیکٹر SPD-40 (Noisiel, France) سے لیس، 2 ملی لیٹر کا ایک انجیکشن لوپ، اور فریکشن کلیکٹر FRC-10A، تیاری کے کالم C18 (25{{39) کا استعمال کرتے ہوئے }} mm 21.2 mm id, 5 μm) (Pursuit XRs 5, Agilent, Les Ulis, France) 21.24 ml/min کی بہاؤ کی شرح پر۔ موبائل فیز میں پانی (سالوینٹ اے) اور میتھانول (سالوینٹ بی) میں 0.1 فیصد فارمک ایسڈ شامل تھا اور علیحدگی درج ذیل گریڈینٹ کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی: (1) BC1_F6 کے لیے، 40 فیصد B (0–5) منٹ)، 40–70 فیصد B (5–20 منٹ)، اور 70–90 فیصد (20–30 منٹ)؛ (2) BC1_F8 کے لیے، 40–70 فیصد B (0–15 منٹ) اور 70–90 فیصد (15-25 منٹ)۔ کرومیٹوگرامس 254 اور 280 این ایم پر حاصل کیے گئے تھے۔

2.9.2 ٹھوس مرحلہ نکالنا (SPE)

BC2-ای پی پی کا سب سے زیادہ قطبی حصہ حاصل کرنے کے لیے (200 ملی گرام MeOH کے 5 ملی لیٹر میں 350 ملی گرام سی (2 جی/15 ملی لیٹر، تھرمو سائنٹیفک™، ویلبون-سر-یویٹ، فرانس) پانی کے ساتھ: MeOH 7:3 (10 ml) اور پانی: MeOH 6:4 (10 ml)۔ ٹیوبیں 4–10 کو ان کے HPLC-UV (330 nm) پروفائلز کی بنیاد پر BC2 (BC2_SPE) کا قطبی حصہ بنانے کے لیے ملایا گیا تھا۔

2.10 اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی AGE اسسیس

2.10.1 ڈی پی پی ایچ ریڈیکلز کی صفائی

بینی EEPs کی DPPH ریڈیکل سکیوینگنگ تشخیص کی گئی تھی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا۔ 51 مختصراً، ٹیسٹ شدہ نمونوں کو مطلق EtOH میں 0 پر گھٹا دیا گیا تھا۔ (DMSO)۔ ان پتلے محلولوں میں سے ایلی کوٹس (100 ul) کو سہ رخی میں 96-کنویں پلیٹوں میں رکھا گیا تھا۔ 200 ul فی کنویں کا حتمی حجم حاصل کرنے کے لیے مائیکرو پلیٹ ریڈر کے انجیکٹر (Infinite® 200, Tecan, France) کا استعمال کرتے ہوئے تقریباً 25 ul تازہ تیار کردہ DPPH محلول (1 mM) کو 75 ul مطلق EtOH میں شامل کیا گیا۔ محیطی درجہ حرارت پر اندھیرے میں 30 منٹ کے بعد، جاذبیت کا تعین 517 nm پر کیا گیا۔ EtOH کو خالی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا، جب کہ انشانکن وکر کے لیے 10، 25، 50، اور Trolox (ایک ہائیڈرو فیلک ٹوکوفیرول اینالاگ) کے 75 μM حل استعمال کیے گئے تھے۔ کلوروجینک ایسڈ ایتھانولک محلول (0.02 ملی گرام/ملی لیٹر) کا نمونہ کوالٹی کنٹرول کے معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ نتائج کا اظہار ٹرولوکس کے مساوی کے طور پر کیا گیا تھا (ٹی ای کے مائکرومولز فی جی ایکسٹریکٹ)۔

2.10.2 اینٹی AGE پرکھ

AGE کی تشکیل پر پروپولس کے نچوڑ اور پانچ بڑے الگ تھلگ نارینجنن مشتق کے اثرات کا تعین کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔ 13}}.5 M) ایک ساتھ ٹیسٹ شدہ مرکب (3 μM سے 3 mM) یا 50 mM فاسفیٹ بفر میں pH 7.4 (NaN3، 0.02 فیصد) میں نچوڑ (1 ug سے 1 mg)۔ AGE فلوروسینس کی پیمائش سے پہلے ایک بند نظام میں 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر کنویں کی مائیکرو ٹائٹر پلیٹوں میں محلول کو انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ D-ribose کے بغیر ایک جیسی حالتوں میں انکیوبیٹڈ نمونے سے فلوروسینس کو ہر پیمائش کے لئے منہا کیا گیا تھا۔ پینٹوسیڈین نما (335 nm پر جوش، 385 nm پر اخراج) AGE فلوروسینس کی پیمائش فلورومیٹری سے کی گئی تھی۔ 52 IC50 اقدار کو نچوڑ کی مقدار (ug/ml) یا مثبت کنٹرول (μM) کے طور پر بیان کیا گیا تھا جو AGE کی تشکیل کو 50 فیصد تک کم کرنے کے لیے درکار ہے۔ منفی کنٹرول سے متعلق شماریاتی توثیق پرکھ کے مطابق، 53 درست IC50 کے تعین کے لیے ایک ہی تجزیہ کافی ہے۔

3. نتائج اور مباحثہ

3.1 کرومیٹوگرافک پروفائلنگ

نیم عالمگیر ELSD ڈیٹیکٹر کا استعمال کرتے ہوئے آٹھ بینی اور کانگولیس ای پی پی کی جنرل ایل سی پروفائلنگ سے پتہ چلتا ہے کہ تمام نمونوں میں غیر قطبی مرکبات موجود ہیں، جو کرومیٹوگرامس کے آخر میں تیار کیے گئے ہیں (شکل 1)۔ BC1 نے مزید قطبی مرکبات کی ایک بڑی مقدار بھی پیش کی، اور BC2 نے کچھ درمیانے قطبی مرکبات کو کم مقدار میں دکھایا۔ CG EEP میں غیر قطبی مرکبات بینی سے کافی مختلف دکھائی دیتے ہیں۔

اس طرح، ELSD پروفائلنگ کے نتیجے میں تین مختلف اور اصل نمونے سامنے آئے جن کی ساخت کی مزید تفتیش کی گئی: BC1، BC2، اور CG۔

سب سے پہلے، GC-MS کے تجزیے کیے گئے، جس میں MS فریگمنٹیشن کا NIST DB کے ساتھ موازنہ کیا گیا، تاکہ کیمیکل کلاسز کو نمایاں کیا جا سکے اور جب ممکن ہو، اجزاء کی شناخت کی جا سکے۔ پوٹیٹیو شناخت (NIST DB کے ساتھ میچ کے فیصد کی بنیاد پر) اور مرکبات کی کیمیائی کلاسیں جدول 2 میں پیش کی گئی ہیں (GC–کل آئنک کرنٹ [TIC] پروفائلنگ ڈیٹا کو شکل SI میں دکھایا گیا ہے-2)۔

تمام بینی EEPs نے غیر قطبی مرکبات کے ایک جیسے پروفائلز پیش کیے، جن پر حرف A سے F کا لیبل لگایا گیا ہے، لیکن ان کی مقدار مختلف ہو سکتی ہے۔ ان کی شناخت کے طور پر کی گئی تھی - یا -امرینون (A)، -امیرین (B)، لوپینون (C)، -amyrin (D)، - یا -amyrin acetate (E)، اور lupeol acetate (F) (cf. Figure SI) -3)، پہلے ہی میکسیکن propolis میں بڑے NPs کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔ 54 Zhang et al. (2014) اور Tamfu et al. (2020) نے مختلف افریقی پروپولیس نمونوں میں ٹرائٹرپینائڈز کو ایمیرین/لوپیول اور ایمیرین/لوپیول ایسیٹیٹس کے طور پر بھی بیان کیا۔ 41,55 صرف BC1 نے Rt 10 اور 15 منٹ کے درمیان اضافی NPs پیش کیے جو ان کے ٹکڑے کرنے کے پیٹرن کے مطابق میتھوکسیلیٹڈ اسٹیلبینائڈز یا فیننتھرین کے طور پر تجویز کیے گئے۔ کانگولیس ای ای پی نے بینی سے ایک مختلف پروفائل کی نمائش کی، جس میں C16 اور C18 ایسڈ ایتھائل ایسٹرز 94 فیصد کے اچھے میچنگ سکور کے ساتھ منسلک زیادہ اتار چڑھاؤ والے مرکبات کے ساتھ ہیں، Rt 13.1 منٹ پر ایک فینول ڈیریویٹیو، تین ریسورسینول ڈیریویٹوز – 14 کی حد میں۔ 17 منٹ، اور Rt 21 منٹ کے بعد مختلف قسم کے ٹرائیٹرپین مشتقات۔

اس کے علاوہ، غیر اتار چڑھاؤ والے NPs (cf. Figure SI-4) کو دیکھنے کے لیے HPLC-DAD-MS کے ذریعے EPPs کا تجزیہ کیا گیا۔ مختلف پروفائلنگ سے پتہ چلتا ہے کہ BC1 EEP نے 280 nm پر کروموفورس جذب کرنے والے درمیانے قطبی مرکبات کی ایک بڑی مقدار کی نمائش کی، اور ساتھ ہی BC2 چھوٹے تناسب میں، اور CG کے پاس 280 nm پر انتہائی ناقص UV پروفائل تھا۔

3.2 BC1 اور BC2 کی کیمیائی ساخت

MixONat اور مناسب DBs پر مبنی 13C NMR ڈیریپلیکیشن کا استعمال کرتے ہوئے ان کے بڑے NPs کی شناخت کرنے کے لیے، BC1 اور BC2 EEP کا ایک موٹا فریکشن پھر فلیش کرومیٹوگرافی کے ذریعے حاصل کیا گیا۔ درحقیقت، BC1 کے لیے، GC-MS تجزیہ نے methoxylated stilbenoids یا phenanthrenes کی موجودگی کا انکشاف کیا، جس نے ہمیں مخصوص Stilbenoids_Phenanthrenoids DB2 بنانے میں رہنمائی کی۔ BC2 کے لیے، Rt 3.8 منٹ پر زیادہ قطبی مرکبات کے علاوہ، تمام مرکبات نے flavanones-dihydro flavonols کا UV سپیکٹرا دکھایا، جس نے Flavanones DB3 بنانے کا مشورہ دیا۔

جیسا کہ جدول 3 میں دکھایا گیا ہے، dihydrophenanthrenes 1 اور 3–5، phenanthrenes 2 اور 6، اور dihydro stilbene 7 (Figure 2) کو BC1 EEP میں MixONat نے تجویز کیا تھا اور لٹریچر ڈیٹا (cf. معاون معلومات) کے ساتھ موازنہ کرکے اس کی توثیق کی گئی تھی۔ جب ضروری ہو، HPLC-MS ڈیٹا کی بنیاد پر MW فلٹر استعمال کیا گیا۔

مزید واضح طور پر، 9،10-DB2 میں 2,681 NPs میں سے dihydrophenanthrene مشتق، MixONat نے تجویز کیا 6-methoxycoelonin (2,7-dihydroxy-3,5-dimethoxy5- {10}،10-dihydrophenanthrene؛ 3، درجہ 1، اسکور 0.75، اعداد و شمار SI-13 اور SI-14) BC{{ 18}} F5 اور اس کی موجودگی کی تصدیق شائع شدہ NMR ڈیٹا کے مقابلے میں ہوئی۔ ابھی تک اس کی شناخت Combretaceae species56 اور آرکڈ Bulbophyllum vaginatum سے کی گئی ہے۔ 57 اور 2،7-ڈائی ہائیڈروکسی-3,4،6-ٹرائیمتھوکسی- 9،10-ڈائی ہائیڈروفینینتھرین (4، درجہ 1، اسکور 0.88، اعداد و شمار SI{{33) }} اور SI-16) کا قیاس BC1_F2 میں کیا گیا تھا۔ کمپاؤنڈ 4 کو پہلے ہی سینیگالی پروپولیس 58 میں بیان کیا جا چکا ہے اور اس کی موجودگی کی توثیق Pettit et al کے رپورٹ کردہ ڈیٹا کی بنیاد پر کی گئی تھی۔ افریقی درخت Combretum caffrum59 سے اور Lu et al. Dioscorea nipponica Makino.60 سے

13C NMR پر مبنی ڈیریپلیکیشن کے عمل نے بھی 2،6-ڈائی ہائیڈروکسی-3,4،7-ٹرائیمیتھوکسی-9،10-ڈائی ہائیڈروفینانتھرین (5، درجہ 8، اسکور) کی پیش گوئی کی 0.76، اعداد و شمار SI-15 اور SI-16) BC1_F2 اور 2,6،7-trihydroxy{{20 میں }},4-dimethoxy-9,10-dihydrophenanthrene (1، درجہ 2، اسکور 0.5، اعداد و شمار SI-5 اور SI-6 ) BC{{30}}F6-1 میں جب MW 288 Da پر ایک مالیکیولر فلٹر استعمال کیا گیا تھا۔ 1 کے لیے، اسکور کافی کم تھا (0.5)؛ لہذا، اضافی 2D NMR تجربات (ہیٹرونیوکلیئر ایک سے زیادہ کوانٹم ارتباط [HMQC]، heteronuclear ایک سے زیادہ بانڈ کنیکٹیویٹی [HMBC]، نیوکلیئر اوور ہاؤسر اثر اسپیکٹروسکوپی [NOESY]، cf. اعداد و شمار SI-7–SI-10) تھے۔ ساخت کی تصدیق کے لئے کارکردگی کا مظاہرہ؛ 5 کے لیے، سکور 0.76 تھا، یعنی 0.70 سے زیادہ۔ ان دو NPs (1 اور 5) کا تذکرہ پہلے لیچر ایٹ ال نے کیا تھا۔ Combretum پرجاتیوں میں 61,62 اور 1 پہلے ہی سینیگالی پروپولس میں پایا جا چکا ہے۔

فینانتھرین مشتقات میں، MixONat نے 2,6،7-ٹرائی ہائیڈروکسی-3،4-ڈائیمیتھوکسیفینانتھرین (2، درجہ 1، سکور 0.88، اعداد و شمار SI-11 اور SI{{10}) BC1_F8-1 میں، جس کی تصدیق لیچر ایٹ ال کے ذریعہ بیان کردہ اس کے اسپیکٹرل ڈیٹا کے ساتھ موازنہ سے ہوئی۔ Combretum apiculatum میں. 61 2,7-Dihydroxy-3,4,6-trimethoxyphenanthrene (6، درجہ 5، اسکور 0.94، اعداد SI-17 اور SI-18) پہلے Photolida Chinensis63 سے الگ تھلگ BC1_F4 میں تجویز کیا گیا تھا۔

Combretastatin B{{0}} (7)، ایک dihydro stilbene، MixONat نے BC1 EPP میں پہلے درجہ (اسکور 1.0، اعداد و شمار SI-17 اور SI-19) میں تجویز کیا تھا۔ ایک میگاواٹ فلٹر (MW 304 Da) اور پیٹٹ ایٹ ال کے ذریعہ بیان کردہ NMR ڈیٹا کے ساتھ موازنہ کرکے توثیق شدہ۔ کمبریٹم کیفرم میں۔ 59

مرکبات 2، 6، اور 7 کی شناخت پہلے ہی سینیگالی پروپولس میں ہو چکی ہے۔58

معاون معلومات میں 1-7 کا 1 H اور 13C NMR ڈیٹا دستیاب ہے۔

BC2 کے لیے، سات مرکبات کی شناخت کی گئی جن کا تعلق پولیفینول کی دو ساختی کلاسوں، کرومون-سی-گلوکوسائیڈ اور پرینیلفلاوانون مشتقات (8–14) سے ہے، جن میں سے کچھ کو پہلی بار پروپولس (شکل 3) میں بیان کیا گیا تھا۔

MixONat اور DB1 سے DB5 کا استعمال کرتے ہوئے 13C NMR پر مبنی عمل نے اصل NPs کی تجویز کرنے والے متعلقہ نتائج نہیں دیے۔ دو بڑے پروڈکٹس (8–9) کو ماس سپیکٹرا اور 1D اور 2D NMR ڈیٹا (1 H, 13C, HMQC, HMBC, cf. Figure SI-20–SI-23) کا استعمال کرتے ہوئے ایک مرکب کے طور پر مکمل طور پر نمایاں کیا گیا تھا۔ اور اس کی شناخت فلورین (8) اور آئسوبیفلورین (9) کے طور پر ہوئی، دو کرومینون-سیگلوکوسائڈز جو کہ نئے پروپولیس میں بیان کیے گئے ہیں، اس سے پہلے بالترتیب Pancratium biflorum64 اور Eugenia caryophyllata کے لونگ میں بیان کیے گئے ہیں۔65

flavanone مشتقات کے بارے میں، DB3 میں 688 NPs میں سے، MixONat نے تجویز کیا 6-prenylnaringenin (10، درجہ 1، اسکور 0.95، اعداد و شمار SI- 24 اور SI{{8} }}) پہلے ہی نائیجیرین ریڈ پروپولیس 66 میں BC{{10}F7-1 میں بیان کیا گیا ہے۔ 6،8-Diprenylaromadendrin (12، درجہ 1، سکور 1۔{36}}، اعداد و شمار SI-28 اور SI-29) اور 6,8-diprenylnaringenin (lonchocarpol A ) (13، درجہ 10، اسکور 0.84، اعداد و شمار SI-30 اور SI-31)، پہلے کیمرون پروپولیس نمونوں میں پائے گئے، 42 کی توثیق BC2_F{ بالترتیب {30}} اور BC2_F5۔ 6-Geranylnaringenin (14، درجہ 1، اسکور 0.84، اعداد و شمار SI-32 اور SI-33)، جو پہلے جزائر سلیمان کے پروپولس میں بیان کیے گئے تھے، 67 قبل مسیح میں قیاس کیا گیا تھا اور اس کی تصدیق کی گئی تھی{{41} }}F7-5۔ آخر میں، 6-ڈائمیٹائلل نارنگینن (11) کو BC میں MixONat نے دوسری پوزیشن میں تجویز کیا2_F6 (رینک 2، اسکور 0.65، اعداد و شمار SI-26 اور SI- 27)۔ پوزیشن 8 میں آئیسومر کو پہلی پوزیشن میں تجویز کیا گیا تھا، لیکن لٹریچر ڈیٹا 68,69 کے ساتھ موازنہ سے پتہ چلتا ہے کہ یہ پوزیشن 6 میں آئیسومر ہے۔ کمپاؤنڈ 11 پروپولیس میں نیا تھا لیکن پہلے ہی مونوٹس افریقینس کے نامیاتی نچوڑ میں بیان کیا گیا تھا۔ 70 1 8–14 کا H اور 13C NMR ڈیٹا معاون معلومات میں دستیاب ہے۔

【مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】