Cistanche Deserticola سے الگ تھلگ Oligosaccharides کی ساخت کا تجزیہ اور مدافعتی سرگرمیاں

رابطہ: emily.li@wecistanche.com

خلاصہسے ایک oligosaccharide (CDOS) حاصل کیا گیا تھا۔Cistanche deserticolaالکلی (pH{{0}}) نکالنے، ایتھنول کی ترسیب، اور دو صاف شدہ حصوں (یعنی، CDOS-1 اور CDOS-2) کے ذریعے Sephadex G-100 میں تقسیم اور Sephadex G-25 کالم فلٹریشن کرومیٹوگرافی۔ سی ڈی او ایس کی مونوساکرائڈ کمپوزیشن کو ہائی پرفارمنس لیکویڈ کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعے پرکھا گیا تھا۔ یہ پتہ چلا کہ CDOS-1 صرف سوکروز پر مشتمل تھا اور CDOS-2 بنیادی طور پر سوکروز، rhamnose اور mannitol پر مشتمل تھا، جس کا تناسب 1:0.73:3.61 تھا۔ امیونولوجیکل ٹیسٹوں نے اشارہ کیا کہ CDOS نے ماؤس اسپلین انڈیکس پر ایک اہم اثر پیش کیا، میکروفیجز کی phagocytosis سرگرمی میں اضافہ اور اینٹی باڈی پیدا کرنے والے سیل کے پھیلاؤ کو متحرک کیا۔ امید ہے کہ CDOS کو فعال خوراک یا دوا میں تیار کیا جائے گا۔

مطلوبہ الفاظ:Cistanchedeserticola, oligosaccharide, purification, composition, immunological activity.

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

Cistanchedeserticola YCma. (Family Orobanchaceae) چین کے شمال مغرب میں رہنے والا ایک مختصر طفیلی پودا ہے۔ پورا خشک پودا (پھولوں کے بغیر) ایک ٹانک کے طور پر جانا جاتا ہے اور اسے "رو کانگرونگ" کہا جاتا ہے۔ مشرقی طب میں، اسے ذائقہ میں میٹھا اور نمکین، فطرت میں گرم، اور گردے اور بڑی آنت کے راستوں سے منسوب کیا جاتا ہے۔ کی تقریبحوصلہ افزادیگردہاور اضافی جوہر، آنت کو نمی بخشتا ہے، اور آنتوں کو آرام دیتا ہے [1]-[3]۔ جدید فارماسولوجیکل مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ یہ ڈی این اے کی ترکیب کو تیز کر سکتا ہے اور بڑھاپے کے عمل میں تاخیر کر سکتا ہے، اینٹی آکسیڈیٹیو میں اضافہ کر سکتا ہے [4]، امراض قلب کی روک تھام اور علاج [3]۔ اس کے علاوہ، یہ بھی ینالجیسک اورمخالف-اشتعال انگیزاثرات [5]، اعصاب کی نشوونما کے عوامل کو شامل کرکے سیکھنے اور یادداشت کو بڑھاتے ہیں [6]۔ کچھ مطالعات نے اشارہ کیا کہ C. deserticola کے نچوڑ چوہوں میں انٹرا پیٹ میکروفیج کے phagocytic فعل کو چالو کر سکتے ہیں [7]-[9] اورکو بڑھاناجسم's قوت مدافعت[10]۔ پچھلے مطالعات کے مطابق، اس پودے میں متعدد فعال اجزاء شامل ہیں جن میں phenylethanoid glycosides، iridoids، lignans، saccharides، alkaloids وغیرہ شامل ہیں۔ [11] جیسا کہ C.deserticolaphenylethanoidglycosidesاور پولی سیکرائڈز کو اہم فعال اجزاء کے طور پر تسلیم کیا جاتا ہے، متعدد مطالعات نے گزشتہ دہائیوں کے دوران ان کی ساخت اور حیاتیاتی سرگرمیوں پر توجہ مرکوز کی ہے [12]-[17]۔ میں قیمتی oligosaccharides کے لئے کے طور پرC. deserticolaرپورٹس کافی محدود ہیں۔ Oligosaccharides، homo- یا hetero-sugars پر مشتمل ایک شارٹ چین سیکرائیڈ، انسانی زندگی پر اپنے فائدہ مند اثرات کے لیے مشہور ہیں اور ایک طویل عرصے سے بڑے پیمانے پر استعمال ہو رہے ہیں [18]۔ فنکشنل oligosaccharides، جن کا جسمانی فعل ہوتا ہے جیسے کہ کم کیریوجنیسیٹی اور بائفیڈوبیکٹیریا گروتھ فیکٹر [19]، انسانوں اور جانوروں کی صحت کو بہتر بناتے ہیں۔ انہیں کھانے کے اجزاء کے طور پر استعمال کیا گیا ہے۔ حال ہی میں، oligosaccharides کے نئے افعال، جو انسانوں، جانوروں اور مچھلیوں میں مدافعتی نظام کو ماڈیول کرنے کی صلاحیت رکھتے ہیں، کی اطلاع دی گئی ہے [20]۔ اس مقالے میں، ہم تحقیقی پروگرام کے نتائج کے پہلے حصے کی اطلاع دیتے ہیں، فرکشنیشن۔ الٹرا فلٹریشن اور جیل پرمییشن کرومیٹوگرافی کے امتزاج کے ذریعہ C. deserticola کے الکلی نچوڑ سے حاصل کردہ کل oligosaccharides میں سے، اور اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعہ ان کی ساخت کا تجزیہ۔ اس کے علاوہ، ہم C. deserticola oligosaccharides کی مدافعتی سرگرمیاں بھی پیش کرتے ہیں۔ ہمارے علم کے مطابق، امیونوسٹیمولیٹری سرگرمی کے مطالعے کے بارے میں کچھ رپورٹس شائع ہوئی ہیں۔C. deserticolaoligosaccharides.

2. تجرباتی

2.1 مواد

C. deserticola کی کاشت کی گئی اور اسے Alxa League (اندرونی منگولیا، چین) سے جمع کیا گیا۔ کنمنگ چوہے (گریڈ II، چھ ہفتے پرانے) اندرونی منگولیا یونیورسٹی کے فارماکولوجی تجرباتی مرکز سے خریدے گئے تھے۔ Sephadex G-100,Sephadex G-25, trifluoroacetic acid (TFA), 1-phenyl-3-methyl-5- pyrazolone(PMP), D-گلوکوز, D- galactose, D-fructose, D-xylose, D-mannose, D-galacturonic acid, D-glucuronic acid, sucrose, rhamnose, mannitol, fucose, rhamnose, Sigma (St. Louis, MO, USA) سے خریدے گئے تھے۔ میڈیم RPMI-1640 Gibco Invitrogen Co. (San Diego, CA, USA) سے خریدا گیا تھا۔ باقی تمام کیمیکل تجزیاتی گریڈ کے تھے۔

2.2 oligosaccharides کا نکالنا

C. deserticola کی خشک لاشوں کو چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹ کر پاؤڈر میں مزید پیس کر مل کے ذریعے اینہائیڈروس ایتھنول (3×5000 ملی لیٹر) کے ساتھ 70 ڈگری پر 3 گھنٹے کے لیے ماحولیاتی دباؤ میں نکالا گیا۔ لپڈس کو دور کرنے کے لیے ایک ریفلوکس کنڈینسر مقرر کیا گیا تھا۔ اس کے بعد باقیات کو الکلی (pH=10) کے ساتھ 60 ڈگری پر 3 بار (ہر بار 2 گھنٹے) کے لیے نکالا گیا۔ سینٹرفیوگریشن کے بعد (2000 گرام 15 منٹ کے لیے، 20 ڈگری پر)، سپرنٹنٹ کو 50 ڈگری پر کم دباؤ کے تحت روٹری ایوپوریٹر میں حجم کے دسویں حصے پر مرتکز کیا گیا اور فلٹر کیا گیا۔ اس کے بعد فلٹریٹ کو سیواگ ریجنٹ [21] کا استعمال کرتے ہوئے ڈیپروٹینائز کیا گیا، اور ایکٹیویٹڈ کاربن سے رنگین کیا گیا۔

2.3۔ oligosaccharides کی تنہائی اور تطہیر

منجمد خشک خام oligosaccharides کو آست پانی میں تحلیل کیا گیا، سینٹری فیوج کیا گیا، اور پھر سپرناٹینٹ کو ایک Sephadex G-100 کالم (1×50 سینٹی میٹر) کے ذریعے صاف کیا گیا، جسے انتہائی صاف پانی سے ہم آہنگ کیا گیا۔ نمونے کے ساتھ لوڈ کرنے کے بعد، کالم کو 5 ملی لیٹر فی منٹ کی بہاؤ کی شرح سے انتہائی صاف پانی سے نکالا گیا تھا۔ ٹیسٹ ٹیوبوں کا استعمال کرتے ہوئے مختلف حصوں کو جمع کیا گیا تھا۔ ہر ٹیوب کے کل کاربوہائیڈریٹ مواد کو فینول-H2SO4 طریقہ [22] کے ذریعہ 490nm پر ماپا گیا۔ پانی سے نکلے ہوئے محلول کو دو حصوں CDOS-1 اور CDOs-2 میں الگ کیا گیا تھا۔ دو حصوں کو بالترتیب ایک Sephadex G-25 کالم (2.7×85 سینٹی میٹر) پر الٹرا پیور پانی (1 ملی لیٹر/منٹ کی بہاؤ کی شرح سے) استعمال کرکے مزید صاف کیا گیا۔ پیوریفائیڈ فریکشن کو اکٹھا کرنے کے بعد اسے لائو فلائز کیا گیا۔

2.4 مونوساکرائڈ کی ساخت کا تجزیہ

HPLC تجزیہ کے ذریعہ CDOs کی monosaccharide کی ترکیب حاصل کی گئی۔ CDOs (2 ملی گرام) کو پہلے اینہائیڈروس میتھانول کے ساتھ ہائیڈرولائز کیا گیا جس میں 2 M HCl 80 ڈگری پر 16 گھنٹے کے لیے نائٹروجن ماحول میں اور پھر 2 M TFA کے ساتھ 120 ڈگری پر 1 گھنٹے کے لیے۔ TFA کو وانپیکرن کے ذریعے ہٹانے کے بعد، ہائیڈرولسیٹس کو بعد میں رپورٹ شدہ طریقہ [23] کے مطابق PMP کے ساتھ اخذ کیا گیا اور HPLC کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا۔ HPLC علیحدگی EF-2002 HPLC سسٹم (KNAUER کمپنی، جرمنی) پر کی گئی تھی۔ PMP مشتق کو شوگر پی اے کے والیوم (6.5 × 300 ملی میٹر، واٹر کمپنی کے گلاسز، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے کرومیٹوگراف کیا گیا تھا، اور جاذبیت کو 245 nm پر ماپا گیا تھا۔ انجیکشن کا حجم 20µL تھا، اور PBS (سالوینٹ A) اور acetonitrile (سالوینٹ B) پر مشتمل موبائل مرحلہ 82 فیصد (A) سے 18 فیصد (B) کے حجم کے تناسب پر isocratic elution کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ کل HPLC رن ٹائم 40 منٹ تھا، اور بہاؤ کی شرح 0.5 mL/min تھی۔

2.5 امیونوبیولوجیکل سرگرمیاں

2.5.1 monocyte-macrophage کے phagocytic فعل

ساٹھ کنمنگ چوہے (گریڈ II، چھ ہفتے پرانے) اندرونی منگولیا یونیورسٹی کے فارماکولوجی تجرباتی مرکز سے خریدے گئے تھے اور استعمال کرنے سے پہلے 1 ہفتہ کے لیے ان کے موافق ہو گئے تھے۔ تمام چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، جن میں نمکین کنٹرول گروپ، اعلیٰ سی ڈی اوز خوراک گروپ، اعتدال پسند خوراک گروپ، اور کم سی ڈی اوز خوراک گروپ شامل تھے۔ چوہوں کو 5 دن کے لیے دن میں ایک بار 0.5mL oligosaccharides محلول کے ساتھ انٹراپریٹونی طور پر انجکشن لگایا گیا تھا۔ اعلی، اعتدال پسند، یا کم CDOs کی خوراک والے گروپ کو بالترتیب 10{{1{17}}}, 50، یا 25 mg/kg/BW CDOs موصول ہوئے؛ اور کنٹرول گروپ میں 0.5 ملی لیٹر نمکین انجکشن لگایا گیا تھا۔ ہاؤ [24] کے مطابق ساتویں دن کاربن پارٹیکل کلیئرنس کا تجربہ کیا گیا اور اسپلین انڈیکس اور تھیمس انڈیکس کی پیمائش کی گئی۔ مختصراً، 0.05 mL/10 g/bw انڈیا کی سیاہی ہر ماؤس میں vena caudalis کے ذریعے داخل کی گئی تھی، پھر انجیکشن کے 3 اور 7 منٹ بعد vena orbitalis posterior سے 20μL خون حاصل کیا گیا تھا۔ خون کے نمونے 2mL 0.1 فیصد Na2CO3 کے ساتھ ٹیوبوں میں رکھے گئے تھے، اور OD کی قدریں 600 nm پر ناپی گئیں۔ کلیئرنس انڈیکس (K)، phagocytic index ( )، اور امیون آرگن انڈیکس کا حساب درج ذیل (1)، t2 اور t1 کا مطلب ہے بالترتیب 7 منٹ اور 3 منٹ۔

2.5.2 اینٹی باڈی پیدا کرنے والے سیل کا پھیلاؤ

کنمنگ چوہوں کے گروپوں (فی گروپ میں پانچ) کو 2 x 107 SRBC کے 1.0 ملی لیٹر پی بی ایس میں 50 یوگ ٹیسٹ مواد کے ساتھ شامل کردہ انٹراپیریٹونیئل انجیکشن کے ذریعے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے (کنٹرول میں کوئی نہیں)۔ ایک ہفتے کے بعد، کنمنگ چوہوں سے splenocytes (106 خلیے فی 2 ملی لیٹر فی کنواں) ہر کلچر کے لیے سہ رخی میں ہوا میں 10 فیصد RPMI 1640 میڈیم میں 5 فیصد CO2 کے تحت 72 گھنٹے تک ٹیسٹ مواد کے ساتھ یا اس کے بغیر کلچر کیے گئے۔ SRBC کے خلاف PFC کی تعداد فی 106 splenocytes کا تعین کیا گیا تھا [25]، [26]۔

2.6۔ شماریاتی تجزیہ

اعداد و شمار کو اوسط اقدار ± SD کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ شدہ گروپس اور کنٹرول کے درمیان فرق کا تجزیہ طالب علم کے ٹی ٹیسٹ سے کیا گیا۔ P < 0.05="" کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

3. نتائج اور مباحثہ

3.1 oligosaccharides کی تنہائی اور تطہیر

CDOs کو C. deserticola کے خشک جسموں کے الکلی کے عرق سے 3 کی پیداوار سے الگ تھلگ کیا گیا۔{14}}7 فیصد۔ CDOS-1 اور CDOS-2 کے دو حصے بالترتیب Sephadex G-100 کالم کے ذریعے ڈسٹل واٹر ایلوٹ سے الگ تھلگ کیے گئے تھے (تصویر 1)۔ CDOS-1 اور CDOS-2 کے صاف شدہ حصوں نے Sephadex G-25 کالم پر ایک ہی چوٹی دکھائی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ نمونے میں کوئی اور oligosaccharides موجود نہیں تھے۔ مونوساکرائیڈ کمپوزیشن کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ CDOS-1 صرف سوکروز (Fig.2) پر مشتمل تھا اور CDOS-2 بنیادی طور پر سوکروز، rhamnose، اور mannitol (Fig.3) پر مشتمل تھا، جس میں ایک تل تناسب تھا۔ 1:0.73:3.61 میں سے۔

3.2 سی ڈی اوز کی امیونو بائیولوجیکل سرگرمیاں

ویوو اور ان وٹرو شواہد میں زیادہ تر نے یہ ثابت کیا ہے کہ قدرتی اولیگوساکرائڈز نے سیلولر اور مزاحیہ دونوں کو متحرک کرکے امیونو موڈیولٹنگ فنکشن کو ظاہر کیا ہے۔مدافعتی جوابات[27]، [28]۔ اس مقالے میں، 100 mg/kg/BW CDOs نے ماؤس اسپلین انڈیکس میں اضافہ کیا، لیکن علاج شدہ گروپس اور کنٹرول گروپس (ٹیبل 1) کے درمیان تھیمس انڈیکس میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ میکروفیجز وائرس کی انٹرا سیلولر نقل کو روک کر اور وائرس سے متاثرہ خلیوں کو مار کر وائرل انفیکشن کے خلاف میزبان دفاع کا ایک اہم جزو ہیں [29]۔ فعال ہونے پر، میکروفیجز سے مختلف قسم کے آکسیجن یا نائٹروجن انٹرمیڈیٹس اور سائٹوکائنز خارج ہوتے ہیں اور مختلف اہم حیاتیاتی افعال میں حصہ لیتے ہیں، جیسے سوزش اور اینٹی ٹیومر سرگرمیاں [30]-[32]۔ لہذا، میکروفیجز کی phagocytic سرگرمی حیاتیات کے مدافعتی افعال کا ایک اہم اشارہ ہے۔ اس مطالعہ میں، سی ڈی اوز کی اعتدال پسند اور زیادہ خوراکوں نے میکروفیجز (ٹیبل 1) کی فگوسیٹوسس سرگرمی میں اضافہ کیا۔ اینٹی باڈی پیدا کرنے والے سیل کے پھیلاؤ کا مطالعہ CDOs کے ذریعہ کیا گیا تھا جس کا مطالعہ کنمنگ چوہوں کی تلیوں میں ہیمولٹک پی ایف سی میں اضافے کے امتحان کے ذریعے کیا گیا تھا جنہیں SRBC کے علاوہ ٹیسٹ کے نمونے سے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے تھے۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ CDOs کی اعتدال پسند اور زیادہ خوراکیں نمایاں طور پر اینٹی باڈی پیدا کرنے والے سیل کے پھیلاؤ کو بڑھاتی ہیں (ٹیبل 2)۔ سی ڈی اوز کی زیادہ مقداریں پی ایف سی کی گنتی (P <0.01) میں="" انتہائی="" نمایاں="" اضافہ="" کا="" باعث="">

حوالہ جات

[1] جے لی، وائی جیانگ، آر فین۔ ویولیٹ تجزیہ کی بنیاد پر مخلوط حیاتیاتی سگنل کی پہچان۔ میں: Y. Jiang، et al (eds)۔ پروک UK-چین سپورٹس انجینئرنگ ورکشاپ۔ لیورپول: ورلڈ اکیڈمک یونین۔ 2007، صفحہ 1-8۔

[2] J. Ouyang، XD Wang، B. Zhao، et al. Cistanche deserticola خلیات کی نشوونما اور phenylethanoid glycosides کی پیداوار پر نایاب زمینی عناصر کے اثرات۔ JB io-technol, 2003, 102 (2) : 129-134

[3] Xu Zhaohui، Yang Junshan، Lu Ruimian، et al. Cistanche deserticola YCMA سے ایک نئی قدرتی مصنوعات۔ جرنل آف چائنیز فارماسیوٹیکل سائنسز، 1999، 8(2):61-63۔

[4] X. Wang, L. Li, Muhuyati, X. Wanag, N. Du. چوہوں کے بافتوں میں Cistanche کے گلائکوسائیڈز کی اینٹی آکسیڈیٹیو کارروائی۔ Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1998، 23(9):554-5۔

[5] Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CRAnti-nociceptive اور سوزش کی سرگرمی چوہوں میں Cistanche deserticola کی وجہ سے ہوتی ہے۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2002، 83(3):177-82۔

[6] چوئی، جے جی؛ چاند، ایم؛ جیونگ، ایچ یو؛ کم، ایم سی؛ کم، ایس وائی؛ اوہ، MS Cistanches Herba اعصابی ترقی کے عنصر کو شامل کرکے سیکھنے اور یادداشت کو بڑھاتا ہے۔ طرز عمل دماغی تحقیق۔ 2011، 216 (2): 652–8۔

[7] Zong G, He W, Wu G, Chen M, Shen X, Shi M. Cistanche deserticola YC Ma اور C کے درمیان موازنہ, tubulosa (Shenk) Wight on some pharmacological actions. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1996، 21(7):436-7۔

[8] ہی ڈبلیو، شو ایکس ایف، زینگ جی زیڈ، وغیرہ۔ C. deserticola کی جنسی قوت بڑھانے کا مطالعہ۔ J Chin Med.1996, 21(9): 534- 537۔

[9] زینگ جی زیڈ، ہی ڈبلیو، وو جی ایل، وغیرہ۔ کچھ فارماسولوجیکل اعمال پر Cistanche deserticola YC Ma اور C.tubulosa کے وزن کے درمیان موازنہ۔ جے چن میڈ۔ 1996، 21(7): 436-438۔

[10] Zeng QL، Zheng YF، Lu ZL Cistanche deserticola YC Ma کے پولی سیکرائڈ کے Immunomodulatory اثرات۔ J Zhejiang Univ، Med Sci. 2002، 31(4): 284- 287۔

[11] لی یوآن، گانا یوآن یوان، جانگ ہونگ کوان۔ کیمیکل اجزاء کی تحقیق میں پیشرفت اور Cistanche کی دواؤں کی سرگرمی۔ چینی جنگلی پودوں کے وسائل، 2010، 29(1):7-11۔

[12] Du NS، Wang H، Yi YH. Cistanche deserticola سے phenylethanoid glycosides کی تنہائی اور شناخت۔ نیٹ پروڈ آر اینڈ ڈی، 1993، 5(4): 5- 8۔

[13] Lu NS, Liu JL میکرو ریٹیکولر ریسین اسپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعہ Cistanche deserticola میں phenylethanoid glycosides کا تعین۔ نیٹ پروڈ آر اینڈ ڈی، 1993، 5(3): 30-33۔

[14] Xiong QB، Tezuka Y، Kaneko T، et al. چالو میکروفیجز میں فینی لیتھانوائڈز کے ذریعہ نائٹرک آکسائیڈ کی روک تھام۔

یورپی جرنل آف فارماکولوجی، 2000، 400: 137- 144۔

[15] ژاؤ وی، یان ہانگ، لیانگ ژونگ-یان، وغیرہ۔ Cistanche Deserticola Ma کے تنے سے الگ تھلگ پانی میں گھلنشیل پولی سیکرائیڈ SPA کا ساختی تجزیہ۔ چینی یونیورسٹیوں کا کیمیکل جرنل، 2005، 26(3):461-463۔

[16] وانگ Xiangyan. Cistanche deserticola کے polysaccharides کے مدافعتی فارماکولوجی اور جذب کردار پر مطالعہ کریں۔ 2011، نمبر S1، میڈیسن اینڈ ہیلتھ سائنسز، E057-235-1-70۔

[17] Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S. Cistanche deserticola سے phenylethanoids کی ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمی۔ پلانٹا میڈ۔ 1998، 64(2):120-5۔

[18] ہینڈ بک آف امیلیسس اور متعلقہ انزائمز (ایڈ۔ از امائلیس ریسرچ سوسائٹی آف جاپان)، پرگیمون پریس (1988)

[19] Araya, S. (ed.) ڈینٹل کیریز اور کپلنگ شوگر پر 5ویں کانفرنس کی کارروائی (جاپانی میں)، نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ، ٹوکیو (1980)

[20] کوڈو اوٹاکا۔ فنکشنل اولیگوساکرائڈ اور اس کا نیا پہلو بطور مدافعتی ماڈیولیشن۔ J. Biol میکرومول۔ 2006، 6(1)، 3-9۔

[21] Navarini L, Gilli R, Gombac V, Abatangelo A, Bosco M, Toffanin R. Polysacharides from hot water extracts of coffea arabica beans: Isolation and characterization. کاربوہائیڈ. پولیم.1999، 40:71–81۔

[22] Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. Colorimetric طریقہ شکر اور متعلقہ مادوں کے تعین کے لیے۔ مقعد کیم 1956، 28:350–356۔

[23] Yang X, Zhao Y, Wang Q, Wang H, Mei Q. اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعے انجلیکا پولی سیکرائڈز میں مونوساکرائڈ اجزاء کا تجزیہ۔ مقعد سائنس. 2005، 21:1177–1180۔

[24] Yufang Hou، Yubao Hou، Liu Yanyan، et al. ریڈ کڈنی بین سے لیکٹین کو نکالنا اور صاف کرنا اور لیکٹین اور چار چینی ہربل پولی سیکرائڈز کے ابتدائی مدافعتی فنکشن اسٹڈیز۔ جرنل آف بائیو میڈیسن اینڈ بائیو ٹیکنالوجی، 2010:1-9۔

[25] کننگھم، اے جے، اور اے سنبرگ۔ سنگل اینٹی باڈی بنانے والے خلیوں کا پتہ لگانے کے لیے تختی کی تکنیک میں مزید بہتری۔ امیونولوجی.1968، 14:599-600۔

[26] Haruhiko Takada، Tomohiko Ogawa، Fuminobu Yoshimura، et al. Fusobacterium nucleatum ATCC 10953 [J] سے الگ تھلگ ایک پورن فریکشن کی امیونو بائیولوجیکل سرگرمیاں۔ انفیکشن اور قوت مدافعت۔ 1988، 56(4): 855-863۔

[27] Wang MQ, Guilbert LJ, Ling L, Li J, Wu YQ, Xu SR, Pang P, Shan JJ CVT- E002 کی امیونوموڈولیٹنگ سرگرمی: شمالی امریکہ کے ginseng (Panax quinque folium) سے ایک ملکیتی عرق۔ J Pharm Pharmacol.2001, 53:1515–1523۔

[28] نیرگارڈ سی ایس، کیوہارا ایچ، رینالڈس جے سی، تھامس اوٹس جے ای، ماتسوموٹو ٹی، یاماڈا ایچ، پٹیل ٹی، پیٹرسن ڈی، مائیکلسن ٹی ای، ڈیالو ڈی، پالسن بی ایس کے ڈھانچے اور تین مائٹوجینک اور تکمیلی فکسنگ کے ڈھانچے کی سرگرمی کے تعلقات۔ مالیان کے اینٹی السر پودوں سے پییکٹک عربینوگالیکٹانس Cochlospermum tinctorium A. Rich اور Vernonia kotschyana Sch Bip۔ سابق والپ بایوماکرومولیکولس۔ 2006، 7:71–79۔

[29] E.-M. چوئی، A.-J. Kim, Y.O. کم، اور J.-K. ہوانگ، وٹرو میں Arabinogalactan اور Fucoidan کی Immunomodulating سرگرمی۔ جرنل آف میڈیسنل فوڈ۔ 2005، 8(4):446–453۔

[30] Y. چن، J.-A. Duan، D. Qian، et al. ICR چوہوں میں پیریٹونیئل میکروفیجز پر وٹرو میں انجلیکا سینینسس کے چار ہائیڈرو سولوبل فریکشنز کی امیونوریگولیٹری سرگرمی کا جائزہ اور موازنہ۔ بین الاقوامی امیونو فارماکولوجی۔ 2010، 10:422–430۔

[31] وائی ایس لی، اوکے ہان، سی ڈبلیو پارک، وغیرہ۔ پرو سوزش سائٹوکائن جین اظہار اور RAW 264.7 میکروفیج سیلز میں پانی سے نکالے گئے Astragali radix کا نائٹرک آکسائیڈ ریگولیشن۔ جرنل آف ایتھنوفارماکولوجی۔ 2005، 100(3): 289–294۔

[32] کے وائی لی اور وائی جے جیون۔ Poria cocos sclerotium سے الگ تھلگ پولی سیکرائیڈ NF-κB/ Rel ایکٹیویشن اور iNOS اظہار کو مورین میکروفیجز میں اکساتی ہے۔ بین الاقوامی امیونو فارماکولوجی۔ 2003، 3(10-11):1353–1362۔