Echinacoside جگر کے کینسر میں اینٹی ٹیومر سرگرمی کا مظاہرہ کرتا ہے۔

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

وین لی*، جینگ زو، یاجی ژانگ، جینگ ژانگ، زو لی، کیاؤ یان، جیابنگ ہان، اور فانگڈی ہو*

خلاصہ

پس منظر:Echinacoside (ECH) Cistanches Herba کا اہم فعال جزو ہے، جو میٹاسٹیٹک ٹیومر پر علاج کے اثرات کے لیے جانا جاتا ہے۔ تاہم، جگر کے کینسر پر ECH کے اثرات ابھی تک واضح نہیں ہیں۔ یہ مطالعہ جگر کے کینسر کے خلیوں کی جارحیت پر ECH کے اثرات کی تحقیقات کرنا تھا۔

طریقے:دو قسم کے جگر کے کینسر کے خلیات Huh7 اور HepG2 کا علاج مختلف اوقات اور میلان پر ECH کی مختلف خوراکوں سے کیا گیا۔ Huh7 اور HepG2 خلیوں کی عملداری پر ECH کے اثرات کا تعین کرنے کے لئے MTT اور کالونی تشکیل کے اسیس کا استعمال کیا گیا تھا۔ Huh7 اور HepG2 خلیوں کے حملے، ہجرت، apoptosis، اور سیل سائیکل پر ECH علاج کے اثرات کا پتہ لگانے کے لیے Transwell Assays اور فلو cytometry asses استعمال کیے گئے تھے۔ TGF- 1، smad3، smad7، apoptosis سے متعلق پروٹین (Caspase-3، Caspase-8)، اور Cyto C کے اظہار کی سطحوں پر ECH کے اثرات کا پتہ لگانے کے لیے ویسٹرن بلاٹ تجزیہ استعمال کیا گیا تھا۔ جگر کے کینسر کے خلیات میں. miR-503-3p اور TGF- 1 کے درمیان تعلق کا پتہ بائیو انفارمیٹکس تجزیہ اور Luciferase رپورٹر پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

نتائج:نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ECH نے خوراک اور وقت پر منحصر انداز میں Huh7 اور HepG2 خلیوں کے پھیلاؤ، حملے، اور منتقلی کو روکا۔ مزید یہ کہ ، ہم نے پایا کہ ECH نے S مرحلے میں خلیوں کو مسدود کرکے Huh7 اور HepG2 سیل apoptosis کا سبب بنا۔ مزید برآں، جگر کے ٹیومر کے ٹشوز میں miR-503-3p کا اظہار کم پایا گیا، لیکن ECH علاج نے Huh7 اور HepG2 خلیوں میں miR-503-3p کے اظہار میں اضافہ کیا۔ اس کے علاوہ، ہم نے پایا کہ TGF- 1 کی شناخت miR-503-3p کے ممکنہ ہدف کے طور پر کی گئی تھی۔ ECH نے TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن کو فروغ دیا اور Bax/Bcl-2 کے اظہار کی سطح میں اضافہ کیا۔ مزید یہ کہ، ECH مائٹوکونڈریل سائٹو سی کی رہائی کو متحرک کر سکتا ہے، اور رد عمل کاسپیس گریڈ کا سبب بن سکتا ہے۔

نتیجہ:یہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ ECH جگر کے کینسر میں miR-503-3p/TGF- 1/Smad محور کے ذریعے اینٹی ٹیومر سرگرمی کا مظاہرہ کرتا ہے، اور جگر کے کینسر کے لیے ایک محفوظ اور موثر اینٹی ٹیومر ایجنٹ فراہم کرتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: Echinacoside, جگر کا کینسر, Apoptosis, MiR-503-3p, TGF- 1/smad

Cistanche جگر کے کینسر کے لیے ایک محفوظ اور موثر اینٹی ٹیومر ایجنٹ ہے۔

تعارف

جگر کا کینسر سب سے زیادہ عام مہلک ٹیومر میں سے ایک ہے جس کی شرح بہت زیادہ ہے، اور جگر کے کینسر کے واقعات تیزی سے بڑھ رہے ہیں [1]۔ ہیپاٹیکٹومی مریضوں کے لیے جگر کے کینسر کے ابتدائی مراحل میں علاج کرنے کا بہترین طریقہ ہے [2]۔ تاہم، زیادہ تر مریضوں میں سرجری کے بعد تکرار اور میٹاسٹیسیس ہوتا ہے۔ 5-سال کی بقا کی شرح صرف 3–5 فیصد ہے [2]۔ لہذا، نئے علاج کے طریقوں اور ایجنٹوں کی فوری ضرورت ہے۔

پچھلے کچھ سالوں میں، کینسر کی دوائیوں کی نشوونما اور فائٹو کیمیکلز پر تحقیق نے ایتھنوفرماکولوجی [3، 4] پر توجہ دینا شروع کردی ہے۔ کلینیکل اور تجرباتی مطالعات کی ایک بڑی تعداد نے یہ ظاہر کیا ہے کہ دوائیوں کے مونومر پھیلاؤ کو روک سکتے ہیں، ہیپاٹو سیلولر کارسنوما خلیوں کے میٹاسٹیسیس، اپوپٹوس اور کینسر کے خلیوں کی تفریق کو آمادہ کر سکتے ہیں [5]۔ Cistanches Herba پودوں کے خاندان سے تعلق رکھنے والا ایک پودا ہے، جو چین میں روایتی ادویات ہے اور اسے "صحرائی ginseng" [6] کے نام سے جانا جاتا ہے۔ Cistanches Herba کیمیائی اجزاء کی اقسام سے مالا مال ہے، اور اندرون و بیرون ملک محققین نے اس سے سو سے زائد مرکبات کو الگ کیا ہے، جن میں phenylethanol glycosides، lignans، cycloaliphatic terpenes، شکر، امینو ایسڈ وغیرہ شامل ہیں [7]۔ Echinacoside (ECH) Cistanches Herba کا بنیادی جزو ہے اور اسے عام طور پر اس کا اہم فعال جزو بھی سمجھا جاتا ہے [6]۔ حالیہ برسوں میں، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ECH جارحانہ یا وسیع پیمانے پر میٹاسٹیٹک ٹیومر کے لیے علاج کا ایک نیا اختیار ہو سکتا ہے [8]۔ مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ ECH لبلبے کے کینسر، لیوکیمیا، گیسٹرک کینسر، اینڈومیٹریال کینسر، اور بہت سے دوسرے ٹیومر کو روک سکتا ہے [9]۔ تاہم، جگر کے کینسر کے بڑھنے پر ECH کے اثر کے بارے میں کوئی رپورٹ نہیں ہے۔

MiRNAs جین ایکسپریشن (10) کے پوسٹ ٹرانسکرپشن ریگولیشن میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ وسیع مطالعے سے معلوم ہوا ہے کہ miRNAs کا جگر کے کینسر [11] اور ایک سے زیادہ سکلیروسیس سے گہرا تعلق ہے۔ MiR-503-3p ایک نیا دریافت شدہ miRNA ہے جو ٹیومر کے خلیوں کے پھیلاؤ، منتقلی اور حملے میں ملوث ہے [12]۔ تاہم، جگر کے کینسر میں اس کا کام واضح نہیں ہے۔ فی الحال، miRNA بہاو والے ہدف جینوں کی تحقیق نسبتاً پختہ مرحلے میں ہے، لیکن بہت سے ہدف والے جین لوکی ابھی تک دریافت نہیں ہوئے ہیں۔ Te TGF- 1/Smad3 سگنل کی نقل و حمل کا راستہ خاص طور پر ٹیومرجینیسیس اور ترقی کے لیے اہم ہے [13]۔ یہ پتہ چلا کہ ہیپاٹوما ماڈل میں TGF- 1/Smad3 پاتھ وے کو چالو کیا گیا تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ TGF- 1/Smad3 پاتھ وے نے جگر کے کینسر کی نشوونما میں اہم کردار ادا کیا ہے [14]۔ TGF- 1/Smad3 راستے کے اعلی اظہار کو جگر کے کینسر کی موجودگی کی اہم وجوہات میں سے ایک سمجھا جاتا ہے [15]۔ جگر کے کینسر پر ECH کے اثرات میں ثالثی کرنے والے بنیادی میکانزم کی مزید چھان بین کرنے کے لیے، miRNA/ TGF- 1/Smad3 راستے کی کھوج کی گئی۔

اس مطالعہ میں، ہم نے جگر کے کینسر کے خلیات کی ترقی پر ECH کے اثرات کا جائزہ لیا اور پایا کہ ECH نے جگر کے کینسر میں miR-503-3p/TGF- 1/Smad محور کے ذریعے ٹیومر مخالف سرگرمی کی، اور جگر کے کینسر کے لیے ایک محفوظ اور موثر اینٹی ٹیومر ایجنٹ فراہم کرتا ہے۔

cistanche tcmکینسر کے خلاف ہے.

طریقے اور مواد

مواد

Echinacoside (ECH) (purity>98 فیصد، مونوہائیڈریٹ) Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co., Ltd (Sinjiang, China) سے حاصل کیا گیا تھا۔ ساختی فارمولہ تصویر 1 میں دکھایا گیا تھا۔

سیل کلچر اور ٹرانسفیکشن

انسانی جگر کے کینسر سیل لائنوں Huh7 اور HepG2 کو FENGHUISHENGWU (Hunan، China) سے خریدا گیا تھا۔ 5 فیصد CO2 سیل انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS، Gibco، USA) کے ساتھ DMEM میڈیم میں سیلز کو کلچر کیا گیا۔ MiR-503-3p mimic اور miR-NC شنگھائی جین فارماسیوٹیکل کمپنی لمیٹڈ (شنگھائی، چین) سے حاصل کیے گئے تھے۔ تمام منتقلی لیپوفیکٹامین 2000 ریجنٹ (انویٹروجن) کا استعمال کرتے ہوئے کارخانہ دار کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ اضافی 24-48 گھنٹے کے بعد، منتقلی شدہ خلیات کو جمع کیا گیا اور مزید مطالعات کے لیے کارروائی کی گئی۔

لوسیفریز رپورٹر پرکھ

کل RNAs خلیوں سے نکالے گئے تھے، اور TGF- کو WT اور MUT پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے بڑھا دیا گیا تھا۔ TGF- 1 کا ایک ٹکڑا pGL3-Bashc luciferase رپورٹر ویکٹر میں داخل کیا گیا جس کا نام TGF- -WT-Luc ہے۔ 1 اور miR-503-3p کے بائنڈنگ ریجن کو ایک اتپریورتی پلاسمڈ بنانے کے لیے تبدیل کیا گیا تھا جسے TGF- 1-Mut-Luc کے طور پر نامزد کیا گیا تھا۔ TGF 1-WT-Luc اور TGF- 1-Mut-Luc کو miR-503-3p mimic اور pRLTK کے ساتھ خلیوں میں باہم منتقل کیا گیا تھا۔ خلیوں کو منتقلی کے 6 گھنٹے بعد جمع کیا گیا تھا۔ ڈوئل لوسیفریز رپورٹر پرکھ کٹ (پرومیگا، میڈیسن، WI، USA) کا استعمال لوسیفریز سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔

سیل کی ترقی پرکھ

Huh7 اور HepG2 خلیات (2×105) کو کنویں کی پلیٹوں میں 96- رکھا گیا تھا۔ اس کے بعد خلیوں کا ECH کے ساتھ 24، 36، اور 48 گھنٹے تک علاج کیا گیا۔ اس کے بعد، ہر کنویں میں 10 ملی لیٹر ایم ٹی ٹی محلول شامل کیا گیا اور خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، DMSO کا 150 μL کنوؤں میں شامل کیا گیا۔ اور 570 nm پر جذب کی پیمائش ELISA ریڈر (Aoweiya، بیجنگ، چین) نے کی۔

کالونی کی تشکیل

سنگل سیل معطلی کو منتقلی خلیوں سے تیار کیا گیا تھا اور 7 دن تک انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ میڈیم کو ضائع کرنے کے بعد، خلیات کو رائٹ کے داغ سے 5 منٹ کے لیے داغ دیا گیا اور پھر 10 منٹ کے لیے جیمسا ڈائی سلوشن اور سورنسن فاسفومولیبڈیٹ بفر سلوشن (1:9) سے داغ دیا گیا۔ دھونے کے بعد، کالونیوں کو ایک خوردبین کے تحت شمار کیا گیا تھا.

ٹرانس ویل پرکھ

نقل مکانی اور حملے کے اسسز ٹرانس ویل چیمبرز (کوسٹار، بڈھویڈورپ، ٹی نیدر لینڈز) میں کیے گئے تھے جو {{0}}μm (پوری سائز) جھلی کی اوپری سطح پر ماریبل (BD بایوسینس) کے ساتھ یا اس کے بغیر لیپت تھے۔ منتقلی پرکھ کے لیے، منتقلی Huh7 اور HepG2 خلیات کو 200 µL سیرم فری DMEM میڈیم میں دوبارہ معطل کر دیا گیا اور بالائی چیمبروں میں بیج دیا گیا۔ یلغار پرکھ کے لیے، میٹریجل (30 ug/well) کو اوپری چیمبروں کی جھلیوں پر پہلے سے لیپت کیا گیا تھا اور دوسرے مراحل ہجرت کے پرکھ کی طرح تھے۔ 24 گھنٹے کے انکیوبیشن کے بعد، وہ خلیات جو جھلی کے ذریعے نچلی سطح پر منتقل ہو گئے تھے یا ان پر حملہ کر دیا گیا تھا، انہیں ایتھنول کے ساتھ طے کیا گیا تھا اور 0.2 فیصد کرسٹل وایلیٹ سے داغدار کیا گیا تھا۔ آخر میں، خلیات کا مشاہدہ کیا گیا اور ایک خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے پانچ بے ترتیب شعبوں میں شمار کیا گیا.

سیل سائیکل تجزیہ

Huh7 اور HepG2 خلیات کو 6-کنویں پلیٹوں میں 1×105 خلیات/mL کی کثافت پر سیڈ کیا گیا تھا۔ ای سی ایچ کے ساتھ 0، 24، 48 گھنٹے تک علاج کرنے کے بعد خلیوں کو جمع کیا گیا۔ اس کے بعد ٹیز سیلز کو 1 ملی لیٹر آئس پری کولڈ 75 فیصد ایتھنول کے ساتھ شامل کیا گیا، جو 2 گھنٹے کے لیے 20 ڈگری پر طے کیا گیا۔ اس کے بعد ، خلیوں کو PI داغدار حل کے ساتھ شامل کیا گیا اور 15 منٹ تک اندھیرے میں انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد سیل سائیکل کا بہاؤ سائٹوومیٹری کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا۔

اپوپٹوٹک سیل تجزیہ

سیلوں کو 5×105 سیلز کی کثافت پر 6-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا تھا۔ جمع کرنے کے بعد، خلیوں کو سینٹری فیوج کیا گیا تھا اور خلیوں کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے Annexin V-FITC بائنڈنگ سلوشن کا 195 μL شامل کیا گیا تھا۔ اگلا، 5 μL Annexin V-FITC اور 10 μL پروپیڈیم آئوڈائڈ سٹیننگ سلوشن شامل کیا گیا۔ خلیوں کو اندھیرے میں انکیوبیٹ کیا جاتا تھا اور پھر برف کے غسل میں رکھا جاتا تھا۔

Cistanche جگر کی حفاظت کرتا ہے۔

مقداری ریورس ٹرانسکرپشن PCR (qRT‑PCR)

کل RNAs کو TRIzol ریجنٹ (Haigene، Haerbin، China) نے نکالا تھا۔ Te viiA™ 7 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم qRT-PCR کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ RNA کو BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit (Beyotime Institute of Biotechnology) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA میں الٹا نقل کیا گیا تھا۔ U6 کو اینڈوجینس کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا [16]۔ پرائمر کی ترتیب حسب ذیل تھی:

miR-503-3p: فارورڈ: 5′-CTGATGGTTAAGAGAATGT-3′،

miR-503-3p: ریورس: 5′-GTCCCTTGGACATCCGGGCCG-3′،

U6: آگے: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′،

U6: ریورس: 5′-GATTACCCGTCGGGCCATCGATC-3′۔

مغربی دھبے کا تجزیہ

منتقلی شدہ خلیات جمع کیے گئے اور کل پروٹین نکالے گئے۔ BCA پروٹین پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی تعداد کا تعین کیا گیا تھا۔ پروٹین کے نمونوں کو 10 فیصد SDS-PAGE سے الگ کیا گیا اور پولی وینیلائیڈین فلورائیڈ جھلی پر منتقل کیا گیا۔ اس کے بعد جھلی کو اینٹی ٹی جی ایف- 1 (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، چین)، SMAD3 (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، چین)، SMAD 7 (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، China), Bcl-2 (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Bax (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Cyto C (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), caspase-2 {19}} (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، چین)، کیسپیس-8 (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، چین) اور اینٹی- -ایکٹین اینٹی باڈی (1:1000، شیفینگ، شنگھائی) ، چین) راتوں رات۔ دس جھلیوں کو اینٹی خرگوش سیکنڈری اینٹی باڈی (1:1000، شیفینگ، شنگھائی، چین) کے ساتھ لگایا گیا تھا [17]۔

شماریاتی طریقے

اعداد و شمار کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر پیش کیا گیا تھا۔ تمام شماریاتی تجزیے SPSS 13۔{1}} سافٹ ویئر کے ساتھ کیے گئے تھے۔ مقابلے کے لیے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا۔ p-value < 0.05="" کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

نتائج

انسانی جگر کے کینسر سیل کی سرگرمی اور پھیلاؤ پر ECH کا اثر

انسانی جگر کے کینسر کے خلیات کے فنکشن پر ECH کے اثر کی تحقیقات کے لیے، MTT پرکھ کی گئی اور نتائج سے معلوم ہوا کہ HepG2 (تصویر 2a) اور Huh7 (تصویر 2b) کی خوراک اور وقت کے اضافے کے ساتھ بتدریج سیل کی عملداری میں کمی واقع ہوئی ہے۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے ECH علاج (p < 0۔{13}}1)۔="" ech="" کے="" 48="" گھنٹے="" کی="" نمائش="" کے="" بعد،="" سیل="" کی="" قابل="" عملیت="" سب="" سے="" کم="" تھی،="" لہذا="" مزید="" تجربے="" کے="" لیے="" ech="" کے="" 48="" گھنٹے="" کی="" نمائش="" کا="" انتخاب="" کیا="" گیا۔="" کالونی="" کی="" تشکیل="" پرکھ="" کے="" نتائج="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" کنٹرول="" گروپ="" (p="">< 0="" .01،="" p=""><0.001)۔ یہ="" نتائج="" بتاتے="" ہیں="" کہ="" ech="" hcc="" سیل="" کی="" سرگرمی="" اور="" پھیلاؤ="" میں="" اہم="" کردار="" ادا="" کرتا="">

انسانی جگر کے کینسر کے خلیوں کی منتقلی اور حملے پر ECH کے اثرات

انسانی جگر کے کینسر سیل کے فنکشن پر ECH کے اثر کی مزید تحقیقات کے لیے، سیل کی منتقلی اور حملے کا پتہ چلا۔ جیسا کہ تصویر 3a، b میں دکھایا گیا ہے، ECH کے علاج کے بغیر گروپ کے مقابلے میں، خوراک پر منحصر طریقے سے ECH کے علاج کے بعد Huh7 اور HepG2 خلیات کی منتقلی اور حملے میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی تھی۔<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

ECH انسانی جگر کے کینسر کے خلیوں کی تقسیم اور اپوپٹوسس کو منظم کرتا ہے۔

جگر کے کینسر سیل اپوپٹوسس پر ECH کے اثر کو دریافت کرنے کے لئے ، فلو سائٹومیٹری کی گئی۔ جیسا کہ تصویر 4a میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، G0/G1 فیز میں Huh7 اور HepG2 سیلز کا فیصد خوراک پر منحصر طریقے سے ECH علاج کے بعد نمایاں طور پر کم ہوا تھا (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05)، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ECH نے Huh7 اور HepG2 خلیوں کی S مرحلے کی گرفتاری کی وجہ بنی۔ اس کے علاوہ، ECH کی خوراک میں اضافے کے ساتھ، کنٹرول گروپ کے مقابلے Huh7 اور HepG2 خلیوں کی apoptosis کی شرح میں بتدریج اضافہ ہوا (تصویر 4b، p<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

TGF-1/Smad راستے پر ECH کے اثرات

یہ معلوم ہے کہ TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے سیل اپوپٹوس میں اچھی طرح سے شامل ہے۔ HepG2 خلیوں میں ECH-حوصلہ افزائی apoptosis کے طریقہ کار کی تحقیقات کرنے کے لئے۔ TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے کے اظہار کا پتہ چلا۔ کنٹرول گروپ کے ساتھ مقابلے میں، ہم نے پایا کہ ECH علاج نے TGF- 1 اور Smad3 کے اظہار کی سطح کو mRNA (تصویر 5a) اور پروٹین (تصویر 5b) دونوں سطحوں پر نمایاں طور پر کم کیا، اور نمایاں طور پر اظہار کو منظم کیا۔ Smad7 mRNA اور پروٹین دونوں سطحوں پر خوراک پر منحصر انداز میں (p<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">

TGF-1 miR-503-3p کا براہ راست ہدف تھا۔

اس کے علاوہ، آن لائن پیشین گوئی کا آلہ Starbase v2. نے ظاہر کیا کہ TGF- 1 miR-503-3p (تصویر 6a) کا ممکنہ ہدف تھا۔ Luciferase رپورٹر جین پرکھ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ HepG2 خلیات اور Huh7 خلیوں کی luciferase سرگرمی miR-503-3p mimic اور TGF- 1-WT کے ساتھ مشترکہ طور پر منتقلی کی گئی تھی، لیکن خلیات miR کے ساتھ شریک منتقل نہیں ہوئے تھے-503-3 {10}}p mimic اور TGF- 1-MUT (تصویر 6b، p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">

سائٹوکوم سی اور کیسپیسز کی سرگرمیوں پر ECH کا اثر

جیسا کہ تصویر 7a میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ہم نے پایا کہ ECH علاج نے خوراک پر منحصر انداز میں Bcl-2 کے اظہار کی سطح میں نمایاں کمی واقع کی (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">

بحث

جگر کے کینسر کے مریضوں کے لیے سرجیکل ریسیکشن بنیادی علاج کا طریقہ ہے، اور جگر کے ریسیکشن کے بعد دوبارہ ہونے اور میٹاسٹیسیس کی شرح زیادہ ہے [18، 19]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ ECH کا جگر کے ٹیومر پر ایک خاص روک تھام کا اثر ہوتا ہے، اور یہ جگر کے کینسر کے لیے ایک محفوظ اور موثر اینٹی ٹیومر ایجنٹ فراہم کرتا ہے۔ کلینیکل پریکٹس نے ثابت کیا ہے کہ روایتی چینی ادویات جگر کے کینسر کے مریضوں کی طبی علامات کو مؤثر طریقے سے کم کر سکتی ہیں [20]۔ ECH کے لیے، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ECH میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ڈپریسنٹ، اینٹی سوزش، اینٹی وائرل، اینٹیٹیمر، اور اینٹی بیکٹیریل اثرات ہیں [21، 22]۔ بڑی آنت کے کینسر میں، ECH ڈی این اے آکسیڈیشن کو دلانے کے لیے کیسپیس-3 کو اپ ریگولیٹ کرکے اور ڈی این اے کی مرمت کے خامروں کو کلیویج کرکے ٹیومر سیل اپوپٹوس کو آمادہ کر سکتا ہے [23]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پہلی بار پایا کہ ECH جگر کے کینسر میں miR 503-3p/TGF- 1/Smad axis کے ذریعے اینٹی ٹیومر سرگرمی کا مظاہرہ کرتا ہے۔

یوکریاٹک خلیوں کے سیل سائیکل کے انٹر سیلولر مرحلے کو G1، S، اور G2 میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔ مختلف ادوار میں سیل سائیکل کے ریگولیشن پوائنٹس کو مختلف ریگولیٹری عوامل [24] کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ اس تحقیق سے پتا چلا ہے کہ G0/G1 اور G2/M مرحلے میں Huh7 اور HepG2 خلیات کا فیصد کم ہو گیا تھا، اور ECH کے بعد S مرحلے میں خلیوں کی فیصد میں اضافہ ہوا تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ ECH نے S مرحلے کی گرفتاری کی وجہ بنی۔ Huh7 اور HepG2 خلیوں کا۔ apoptosis کا عدم توازن انسانی ٹیومر کے اہم میکانزم میں سے ایک ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ اینٹی ٹیومر کیموتھراپیٹک ادویات عام طور پر کینسر کے خلیات کے اپوپٹوسس کی حوصلہ افزائی کرتی ہیں اور کینسر کے بڑھنے کو کنٹرول کرتی ہیں۔ ہمارے مطالعے میں، ہم نے یہ بھی پایا کہ ECH خوراک پر منحصر انداز میں جگر کے کینسر سیل اپوپٹوسس کو آمادہ کر سکتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ کینسر سیل اپوپٹوس کو دلانا جگر کے کینسر پر ECH کے بنیادی میکانزم میں سے ایک ہو سکتا ہے۔

MiRNAs HCC سیل کے پھیلاؤ، سائیکل، apoptosis، مختلف سگنلنگ پاتھ ویز اور مالیکیولز [25، 26] کے ساتھ تعامل کے ذریعے ہجرت کے ضابطے میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔ مثال کے طور پر، یہ پایا گیا کہ miR-26a عام جگر کے خلیوں میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے، لیکن یہ جگر کے کینسر کے خلیوں میں نمایاں طور پر کم ہوتا ہے اور پھیلاؤ کو روکتا ہے [27]۔ miR-503-3p کا زیادہ اظہار پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیوں کے apoptosis کو اکساتا ہے اور خلیوں کے حملے اور منتقلی کو روکتا ہے [28]۔ اس کے علاوہ، بڑی تعداد میں مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے جگر کے کینسر کی نشوونما میں اہم کردار ادا کرتا ہے [7]۔ مزید برآں، جب جگر کا کینسر مسلسل بڑھتا رہتا ہے، TGF- 1 کے اظہار میں بتدریج اضافہ ہونے کی اطلاع ہے [29]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ ECH ڈاؤن ریگولیٹڈ TGF- 1 اور Smad3، اور اپ ریگولیٹڈ Smad7، یہ ظاہر کرتے ہوئے کہ ECH نے TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے کو فعال کرنے سے روکا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ جگر کے ٹیومر کے ٹشوز میں miR-503-3p کا اظہار کم پایا گیا، لیکن ECH علاج نے Huh7 اور HepG2 خلیوں میں miR-503-3p کے اظہار کو بڑھا دیا۔ اس کے علاوہ، ہم نے پایا کہ TGF- 1 کی شناخت miR-503-3p کے ممکنہ ہدف کے طور پر کی گئی تھی۔ ECH نے TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن کو فروغ دیا اور Bax/Bcl-2 کے اظہار کی سطح کو بڑھایا۔ یہ نتائج تجویز کرتے ہیں کہ miR-503-3p/ TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے جگر کے کینسر پر ECH کے اثرات میں ثالثی کر سکتا ہے۔ یہ معلوم ہوا ہے کہ بڑھتا ہوا Bax/Bcl-2 تناسب مائٹوکونڈریا میں سائٹو سی کو سائٹوپلازم میں چھوڑنے کا سبب بن سکتا ہے۔ Cyto C Caspase-8 کے ساتھ تعامل کرتا ہے اور ایک اپوپٹوٹک باڈی بناتا ہے جو پھر Caspase کو بھرتی اور فعال کرتا ہے-3، جو Caspase cascade کا سبب بنتا ہے اور سیل کی موت کو فروغ دیتا ہے [30]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ ECH نے Bcl-2 کے اظہار کو کم کیا اور Bax، Cyto C، caspase-8، اور caspase-3 کے اظہار میں اضافہ کیا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ ECH ایک خاص حد تک مائٹوکونڈریل چوٹ کی مرمت کر سکتا ہے۔

نتیجہ اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ ای سی ایچ کے علاج نے پھیلاؤ، حملے، اور ہجرت کو روکا، اور جگر کے کینسر کے خلیات کے اپوپٹوسس کی حوصلہ افزائی کی۔ جگر کے کینسر کے خلیوں پر ECH علاج کا بنیادی طریقہ کار miR-503-3p/TGF- 1/Smad سگنلنگ پاتھ وے سے متعلق پایا گیا۔ یہ مطالعہ اینٹی ٹیومر پر ECH کی تحقیق کے لیے ایک خاص تجرباتی بنیاد فراہم کرے گا۔ یہ بات قابل غور ہے کہ موجودہ مطالعہ جانوروں کے تجربات کی کمی کی وجہ سے محدود ہے۔ لہذا، ہمارا مستقبل کا مطالعہ ہمارے نتائج کی مزید تصدیق کے لیے جانوروں کے تجربات کرے گا۔

صحرائی سیستانچ کے فوائدجگر کی حفاظت کریں.

مزید معلومات کے لیے، براہ کرم یہاں کلک کریں۔