Intracerebroventricular-Quinolinic Acid Rat ماڈل میں Diosmin-Induced Neuroprotection اور میموری کی بہتری میں میکانکی بصیرت: Mitochondrial Functions and Antioxidants Part 3

2. مواد اور طریقے

2.1 تجرباتی جانور۔ .is تحقیق کی اجازت IAEC نے پروٹوکول نمبر کے تحت دی تھی۔ ASCB/IAEC/14/20/145۔ AlbinoWistar چوہوں (یا تو جنس، 200 g سے 250 g، عمر 8 سے 9 ماہ) کو درجہ حرارت کی مصنوعی ترتیبات (23 ± 2 ڈگری)، 12:12 گھنٹے تاریک/روشنی ترتیب کے تحت مخصوص سائز کے پولی پروپیلین کیوبائیڈل انکلوژرز میں رکھا گیا تھا۔ ادارہ جاتی جانوروں کے گھر کے اندر نمی (40 ± 10%)۔ چوہوں کو معیاری غذائیت فراہم کرنے والی اشیائے خوردونوش (آشیرواد مینوفیکچررز، پنجاب) اور اپنی مرضی سے صاف پانی کھلایا جاتا تھا۔

نر اور مادہ کے درمیان تعلق اور یادداشت نے ہمیشہ زیادہ توجہ حاصل کی ہے۔ یہ بات مشہور ہے کہ مردانہ ہارمونز جسمانی نشوونما، صحت کو برقرار رکھنے، اور جنسی نشوونما اور جنسی افعال کو فروغ دینے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، حالیہ مطالعات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ مردانہ ہارمونز کا یادداشت سے گہرا تعلق ہے۔

مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ مرد یادداشت کے مخصوص کاموں میں خواتین کے مقابلے بہتر کارکردگی کا مظاہرہ کرتے ہیں۔ مثال کے طور پر، مرد عام طور پر مقامی یاداشت میں خواتین کے مقابلے بہتر کارکردگی کا مظاہرہ کرتے ہیں اور اس کی وجہ ہپپوکیمپس پر مردانہ ہارمونز کا اثر ہے۔ ہپپوکیمپس دماغ کا وہ علاقہ ہے جو مقامی میموری پر کارروائی کرتا ہے۔ مردانہ ہارمونز ہپپوکیمپس کے کام کو فروغ دے سکتے ہیں، اس طرح مردوں کی مقامی یادداشت کی صلاحیت کو بہتر بنا سکتے ہیں۔

تاہم خواتین کے ہارمونز بھی یادداشت پر مثبت اثر ڈالتے ہیں۔ مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ خواتین کے ہارمونز دماغ میں یادداشت سے متعلق جینز کے اظہار کو فروغ دے سکتے ہیں اور ہپپوکیمپس میں نیوران کی تعداد اور افعال کو بڑھا سکتے ہیں، اس طرح خواتین کی یادداشت بہتر ہوتی ہے۔ اس کے علاوہ، خواتین کے ہارمونز تناؤ کو دور کر سکتے ہیں، نیورونل سیل کی موت کو روک سکتے ہیں، دماغی نیوران کی حفاظت کر سکتے ہیں اور خواتین کی یادداشت کو مزید بہتر بنا سکتے ہیں۔

اس سے پتہ چلتا ہے کہ مردانہ ہارمونز اور زنانہ ہارمون دونوں ہی یادداشت کو بہتر بنانے پر مثبت اثر ڈالتے ہیں۔ مردوں اور عورتوں کی یادداشت مختلف ہوتی ہے، ہر ایک اپنے فوائد اور نقصانات کے ساتھ، لیکن اس کا یہ مطلب نہیں کہ مردوں کی یاداشت خواتین سے بہتر ہے یا یہ کہ خواتین کی یادداشت مردوں سے بہتر ہے۔ اس لیے ہمیں جنس کو یادداشت کی پیمائش کے طور پر استعمال نہیں کرنا چاہیے۔ ہر ایک کو اپنے فائدے کے لیے بھرپور کھیل پیش کرنا چاہیے اور اپنی یادداشت کو مسلسل بہتر کرنا چاہیے۔

آخر میں، چاہے مرد ہو یا عورت، ہمیں اپنی جسمانی صحت اور دماغی حالت پر توجہ دینی چاہیے اور اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کے لیے صحیح طریقے کا انتخاب کرنا چاہیے۔ مثال کے طور پر، مسلسل نئی چیزیں سیکھنا، معمول کے مطابق زندگی گزارنے کی عادتیں پیدا کرنا، اور جذباتی استحکام کو برقرار رکھنا یادداشت کو بہتر بنانے پر مثبت اثر ڈال سکتا ہے۔ آئیے ہم یادداشت کو بہتر بنانے اور اپنے لیے ایک بہتر مستقبل بنانے کے طریقوں کو مسلسل دریافت کرنے اور ان پر عمل کرنے کے لیے مل کر کام کریں۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche یادداشت کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے کیونکہ Cistanche ایک روایتی چینی دوا ہے جس میں بہت سے منفرد اثرات ہیں، جن میں سے ایک یادداشت کو بہتر بنانا ہے۔ Cistanche کی افادیت اس میں شامل مختلف فعال اجزاء سے آتی ہے، بشمول tannic acid، polysaccharides، flavonoid glycosides، وغیرہ۔ یہ اجزاء دماغ کی صحت کو کئی طریقوں سے فروغ دے سکتے ہیں۔

یادداشت کو بہتر بنانے کے 10 طریقے جانیں پر کلک کریں۔

تمام جانوروں کے طریقہ کار کو خصوصی طور پر CPCSEA، GOI، نئی دہلی کے رہنما خطوط کے مطابق انجام دیا جاتا ہے۔ .e جانوروں کے رکھوالوں اور ہینڈلرز کو جانوروں کے ساتھیوں کو سہولت فراہم کرنے والے مختلف علاج معالجے کے بارے میں اندھا کردیا گیا تھا۔ تفتیشی جانوروں کی آزمائشوں کو انجام دیا گیا، جس میں کم از کم ایک پندرہ دن کی واقفیت کی مدت کامیاب رہی۔

جانوروں کا استعمال کرتے ہوئے تمام تحقیقات دن میں 0900- اور 1600- گھنٹے کے درمیان انجام دی گئیں۔2.2۔ منشیات اور کیمیکل۔ Diosmin (DSM: 520-27-4)، quinolinic acid (QA: 89-00-9)، اور معیاری تجزیہ کار مرک (انڈیا) سے حاصل کیے گئے تھے۔

سوڈیم ڈائی ہائیڈروجن فاسفیٹ (NaH2PO4)، سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ (NaOH)، پوٹاشیم فاسفیٹ ڈائیباسک (K2HPO4)، نائٹرو بلوٹیٹرازولیئم (NBT)، فینازائن میتھو سلفیٹ (5-میتھائلفینازینیم میتھائل سلفیٹ)، {5-میتھائلفینازینیم میتھائل سلفیٹ)، {5-، البم ای ڈی ٹی اے ای ڈی ٹی اے ایم ای ٹی اے ایم ای ڈی، 5}}[4-({{7}hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(carboxymethyl) امینو] ایتھوکسی] ایتھین (ای جی ٹی اے)، رائبوفلاوین، سوڈیم سائینائیڈ (NaCN)، نیٹریومازڈ (NaN3)، ٹیٹراسوڈیم پائروفاسفیٹ، ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H2O2)، NADH disodium (DPNH)، NADPH ٹیٹراسوڈیم (Coenzyme acids II)، نمکیات کم Folin اور Ciocalteu's phenol (FCR)، اور sulphosalicylic acid (5-SSA) ریجنٹ (HiMedia Laboratories, Maharashtra, India)؛ ڈائیگلائسین، گلیشیل ایسٹک ایسڈ (CH3COOH)، ایل مینز ریجنٹ (3-کاربوکسی-4-نائٹروفینیلڈی سلفائیڈ، ڈی ٹی این بی)، ازابینزین (C5H5N)، اور سوڈیم لاریل سلفیٹ (SLS) (لوبا کیمی، ممبئی، انڈیا)؛ 4،6-Dihydroxy-2-mercaptopyrimidine (2-TBA)، disodium carbonate(Na2CO3)، اور (2-mercaptoethyl) trimethylammonium iodide acetate (TCI کیمیکلز، انڈیا)؛ زنک سلفیٹ (ZnSO4)، روچیل نمک (پوٹاشیم سوڈیم L(+)-ٹارٹریٹ)، 2-(1-Naphthylamino)ethylamine dihydrochloride، nitrous acidsodium (NaNO2)، اور p-aminobenzenesulfonamide (SiscoResearch India, Laborat) ); بٹائل الکحل (فشر سائنٹیفک، انڈیا) استعمال کیا گیا۔2.3۔ Quinolinic ایسڈ کا Intracerebroventricular انجکشن۔

جانوروں کو انجکشن کے لیے جراثیم سے پاک پانی کا استعمال کرتے ہوئے انٹراپیریٹونیلی (آئی پی) کیٹامین (90 ملی گرام/کلوگرام) اور زائلازین (10 ملی گرام/کلوگرام) کاک ٹیل دے کر اینستھیزیا کا نشانہ بنایا گیا۔ .ebody کو ایک گرم ہیٹنگ کشن پر پیشاب کی حالت میں رکھا گیا تھا، اور ایک سٹیریوٹیکسک سرجری کے آلے کے پہاڑ میں، سر واقع تھا۔ .e کھوپڑی کو وسط سیگیٹل پوائنٹ پر کاٹا گیا تھا، اور کھوپڑی کو جلد کو پیچھے ہٹا کر کھول دیا گیا تھا۔

دو لیٹرل وینٹریکلز میں سے کسی ایک کو من مانی طور پر منتخب کیا گیا تھا، اور کھوپڑی میں، پیریٹل ہڈی بور ہو گئی تھی (سٹیریوٹیکسک کوآرڈینیٹس -0.8 ملی میٹر اینٹروپوسٹیریر بریگما سے، ±1.5 ملی میٹر میڈی لیٹرل midsagittal سیون سے، اور ±3.6 mm 3.6. ) burr سوراخ بنانے کے لئے [21].

پہلے دن، پی بی ایس (Na+-K+ [PO4]2- بفرڈ نمکین، pH 7.4) میں quinolinicacid (QA) محلول تازہ (240 nmol) تشکیل دیا گیا اور ایک ہیملٹن مائیکرو سرنج کا استعمال کرتے ہوئے بتدریج انجیکشن لگایا گیا۔ ریٹس کے بائیں یا دائیں دماغی ویںٹرکل میں 1 µl/منٹ انجیکشن 5 µl ICV-وہیکل [22] کے حجم کے ساتھ 5 سے 6 منٹ کی مدت میں۔

پوری دوا کے ٹیکہ لگانے کے بعد، مائیکرو نیڈل کو 4 سے 5 منٹ تک خارج نہیں کیا گیا تاکہ دماغی اسپائنل فلوئڈ میں دوائی کے پھیلاؤ کو فعال کیا جا سکے اور اس کے ریگرگیٹیشن کو روکا جا سکے۔ PBS- گاڑی کے مساوی حجم (10 µl) کو شمرٹس میں ICV کا انتظام کیا گیا تھا جو یکساں طور پر چلائے گئے تھے، تاہم، QA نہیں لگایا گیا تھا۔

منشیات کے انجیکشن کے بعد، سوراخ ایک luting ایجنٹ (زنک فاسفیٹ، PYRAX®) کا استعمال کرتے ہوئے بحال کیا گیا تھا، اور جلد کی سلائی مکمل کی گئی تھی. آلودگی (بیکٹیریا کی افزائش) کو روکنے کے لیے، Neosporin® کو پرو ری ناٹا لگایا گیا تھا۔

Toevade postoperative sepsis, Orizolin (Zydus Cadila), 30 mg/kg (ip) کی خوراک دی گئی۔ ہر چوہے کو سرجیکل ہائپوتھرمیا سے بچنے کے لیے گرم ماحول (37 ± 0.5 ڈگری) فراہم کیا گیا تھا۔ ہر چوہے کو سات دن تک سرجری کے بعد نیم ٹھوس خوراک (پنجرے کے اندر) اور مفت پانی کی اجازت دی گئی اور الگ الگ پنجرے (30 × 23 × 14 سینٹی میٹر 3) میں الگ الگ رکھا گیا۔

2.4 تجرباتی پروٹوکول۔ DSM کو 50اور 100 mg/kg فی جسمانی وزن (bw) میں چوہوں میں intraperitoneal (ip) راستے سے 0.5% dimethylsulfoxidevehicle کا استعمال کرتے ہوئے نارمل نمکین (خوراک کی مقدار 5 ml/kg) میں انجکشن لگایا گیا تھا [17]۔

سنگل بلائنڈ موڈ (n � 5) میں جانوروں کو تصادفی طور پر 5 کلسٹروں میں مختص کیا گیا تھا: (i) شام (S)، (ii) QA، (iii) QA + DSM50، (iv) QA + DSM100، اور (v) QA + ڈی این پی۔ چوہوں کو پہلے دن QA (QA-ICV) کی انٹراسیریبروینٹریکولر انتظامیہ یا شیم سرجری کا نشانہ بنایا گیا۔

دن کے بعد سے QA-ICV کے بعد روزانہ 120 منٹ تک لگاتار 21 دن تک DSM کا انتظام کیا گیا۔ ڈونیپیزل (DNP) کو اس مطالعہ میں ایک معیاری دوا کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور QAICV سے لگائے گئے چوہوں میں لگاتار 21 دنوں تک انجکشن (3 ملی گرام/کلوگرام، آئی پی) لگایا گیا تھا۔

تھیشام اور کیو اے کنٹرول گروپس میں جانوروں کو 1 سے 21 دن تک گاڑی (جراثیم سے پاک 0.5% ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ نارمل نمکین میں خوراک کی مقدار 5 ملی لیٹر/کلوگرام) دی گئی تھی۔ تصویر 1.2.5۔ لوکوموٹر کی سرگرمی۔

تمام چوہوں کے جھرمٹ میں، اوسط لوکوموٹر کی سرگرمی کو ایکٹو فوٹومیٹر ڈیوائس کا استعمال کرتے ہوئے 5 منٹ تک دستاویز کیا گیا تھا۔ ایک الگ جانور کو ایکٹوفوٹومیٹر میں 3 منٹ کے موافقت کے لیے رکھا گیا تھا۔ اس کے بعد چوہوں کو 5 منٹ دیئے گئے، اور نتائج فی 5 منٹ کے حساب سے بتائے گئے [11].2.6۔ روٹروڈ ٹیسٹ۔

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 سیکنڈ پر چھڑی نو گردش فی منٹ (rpm) پر گھومتی ہے۔

حصول کے ٹرائلز کے بعد، بیلناکار شافٹ پر ایک الگ چوہا کھڑا کیا گیا، اور انقلاب کی رفتار کو 10 سیکنڈ کے مسلسل وقفے سے 6 rpm (ابتدائی رفتار) سے 30 rpm (اختتام کی رفتار) تک بڑھایا گیا، جو 50 سیکنڈ تک پھیلی ہوئی ہے۔ یعنی گھومنے والی بیلناکار شافٹ سے گرنے کی تاخیر (سیکنڈ میں) نتائج میں بیان کی گئی تھی۔2.7۔

پاؤں کے نشانات کا تجزیہ۔ چوہوں میں پاؤں کے نشانات کا تجزیہ کرنے کے پیچھے اصول چال کی اسامانیتاوں کا اندازہ لگانا ہے۔

قدموں کے نشانات کے لیے، چوہوں کے پاؤں کو چار متنوع رنگوں کے غیر زہریلے کھانے کے رنگوں میں ڈبو دیا گیا تھا اور انہیں مائل راستے (70 سینٹی میٹر × 10 سینٹی میٹر × 8 سینٹی میٹر) پر چلنے کی اجازت دی گئی تھی۔ رن وے کا بیس سفید رنگ کی سیلولوز شیٹ سے بند تھا۔ .e چوہوں کو واضح قدموں کے نشانات حاصل کرنے کے لیے رن وے کے آخر میں ایک مدھم اوپری حصے کی طرف ترغیب دی گئی تھی۔ ٹرائلز کے بعد نیم گرم پانی کا استعمال کرتے ہوئے ہر جانور سے ڈائی کو آہستہ سے ہٹا دیا گیا۔ پیروں کے نشانات کو اسکین کیا گیا تھا، اور "قدم کی لمبائی" کو معیاری حکمران کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ ایک جیسے چوہے کے پنجے کی ترتیب وار جگہوں کے درمیان فاصلے کا حساب لگا کر اسٹرائیڈ کی لمبائی کی مقدار درست کی گئی تھی [11]۔

2.8۔ ناول آبجیکٹ ریکگنیشن ٹاسک (NORT)۔ معیاری پروٹوکول کی پیروی کی گئی جیسا کہ کمار اور بنسل نے دیا تھا [23]۔

ORT ایک غیر منافع بخش اور غیر منقولہ ایکسٹروسیپٹیو آرکیٹائپ ہے جو چوہوں کے متاثر کن تحقیقات کے ذریعے استحصال کرنے والی ورکنگ قسم کی یادداشت کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ .e تفتیش چھت پر کھلے پلائیووڈ کیوبائیڈل برتن (80 سینٹی میٹر × 42 سینٹی میٹر × 62 سینٹی میٹر) میں کی جاتی ہے، ایک پرسکون علاقے میں پوزیشن میں، برتن میں مستقل چمک کو منظم کرنے کے لیے 60W LED سے روشن کیا جاتا ہے۔

سلنڈر (سفید)-، اہرام (سرخ)-، اور مکعب (سیاہ) کی شکل والی (12 سینٹی میٹر لمبا) لکڑی کی اشیاء (ایک جیسی تینوں میں) ٹھوس اور کافی وزنی تھیں تاکہ انہیں چوہوں کے ذریعے متحرک نہ کیا جا سکے۔ NORT 16 ویں دن 3 مراحل (S) میں انجام دیا گیا تھا: موافقت (S1)، حصول (S2)، اور نوول آبجیکٹ ریکگنیشن ایگزامینیشن (ریٹینشن) مرحلہ (S3)۔

S1 کے دوران، چوہوں کے ذریعہ جہاز کے خالی فرش کی بنیاد (5 منٹ) کو دریافت کرنے کے لیے مسلسل تین دن پہلے ٹرائلز جاری کیے گئے۔ S1 کی تکمیل پر، انفرادی جانور کو سیکھنے کے مرحلے (S2) میں ٹھوس اشیاء کے کسی ایک سیٹ کی عادت ڈال دی گئی۔

جڑواں جیسی چیزوں کو برتن کے 2 من مانی طور پر منتخب کردہ مخالف زاویوں میں رکھا گیا تھا (سائیڈ ریمپارٹس سے 9 سینٹی میٹر سے 11 سینٹی میٹر کا فاصلہ)۔ علیحدہ طور پر، ایک چوہا کو دو ٹھوس اشیاء کے مخالف برتن کے بیچ میں رکھا گیا تھا اور اسے 5 منٹ کے لیے دو ملتے جلتے اشیا کو دریافت کرنے کی اجازت تھی۔ 2-3 سینٹی میٹر سے کم یا اس کے مساوی فاصلے پر شے کے قریب تھوک کی رہنمائی کرنا یا توتن کے ساتھ شے کے ساتھ جسمانی رابطہ کو تفتیشی سلوک سمجھا جاتا تھا۔

S2 کے بعد، چوہا کو 60 منٹ کی انٹر ٹرائل ریسیس (ITR) کے ذریعے گھر کے پنجرے میں رکھا گیا تھا۔

S2 میں پیش کردہ کسی بھی سنگل ٹھوس آئٹم کو ایک مختلف ٹھوس آئٹم کے ذریعہ تبدیل کیا گیا تھا، اور چوہوں کو دوبارہ جڑواں آئٹمز کے سامنے پیش کیا گیا تھا، یعنی واقف شے کی نقل اور مختلف آئٹمز.. آئٹمز کے تمام امتزاج اور پوزیشنز کو آف سیٹ کیا گیا تھا۔ بعض ترتیبات یا آئٹمز کے لئے ایک رجحان کے ذریعہ ممکنہ تعصب کو ختم کرنا۔ .e برتن اور ٹھوس اشیاء کو بدبودار علامات کو روکنے کے لیے ہر چھان بین کے بعد (ایتھائل الکوحل 15% اور خشک کپڑا) کا صفایا کیا گیا۔ S2 اور S3 میں ہر آئٹم کو دریافت کرنے میں وقفہ وقفہ سے ایک سٹاپ واچ کا استعمال کرتے ہوئے دستاویزی کیا گیا تھا۔ .e مدت S2 (I1 � Ii1 + Ii2) میں دو مماثل آئٹمز کی چھان بین میں خرچ ہوئی اور S3 (I2 � Ii3 + Ib) میں دو مختلف آئٹمز، یعنی واقف اور مختلف کی چھان بین میں خرچ کیا گیا دورانیہ۔ ریکارڈ کیا گیا مختلف آئٹم کی چھان بین کے دوران خرچ ہونے والے دورانیے میں فرق اور واقف آئٹم کی چھان بین کا دورانیہ (Ib–Ii3 � DI) یادداشت کی برقراری کو ظاہر کرتا ہے۔

DI (امتیازی انڈیکس)/S3 واقفیت اور نئی آئٹم (ترمیم شدہ DI) دونوں کی چھان بین کا دورانیہ مکمل تفتیش میں فرقوں کے ذریعے جزئیات کو بہتر بناتا ہے اور واقف افراد کے برعکس مختلف اشیاء کے لیے رجحان کی نشاندہی کرتا ہے {DI � (Ib–Ii3) )/(Ii3 + Ib)}۔ یادداشت کی یادداشت کا اندازہ چوہوں کی مہارت کو S3 میں مانوس/ناول اشیاء کو اکٹھا کرنے کے لیے لگایا گیا تھا اور اسے DI (S3 میں مجموعی تحقیقاتی مدت کے لیے ترمیم شدہ) کہا گیا تھا [24]۔

2.9 مورس واٹر بھولبلییا (MWM)۔ معیاری پروٹوکول کی پیروی کی گئی، جیسا کہ کمار اور بنسل نے دیا ہے [25]۔ MWM تیراکی کے ٹرائلز کے ذریعے مقامی میموری کا فیصلہ کرتا ہے، جس میں چوہا چھپے ہوئے پوڈیم تک فرار کا راستہ تلاش کرتا ہے۔

ایک سیاہ رنگ کے سرکلر ٹینک (2 میٹر قطر، 0.6 میٹر اونچائی) میں پانی (25 ± 1 ڈگری ) 0.3 میٹر کی گہرائی تک بھرا ہوا تھا۔ آبی ذخائر کو دو نایلان ریشوں کا استعمال کرتے ہوئے 4 ملتے جلتے خطوں (R1, R2, R3, اور R4) میں گھڑی کی سمت سے الگ کیا گیا تھا، جو ٹینک کے اوپری دائرے پر کھڑے طور پر محفوظ تھے۔

ایک ڈائس (10.5 سینٹی میٹر × 10.5 سینٹی میٹر) پانی کے اندر (پانی کے نیچے 1 سینٹی میٹر) آبی ذخائر کے علاقے R4 میں رکھا گیا تھا۔ .e حصول کی مدت کے دوران ڈائس کی جگہ برقرار رہی۔

ہر ایک چوہے کو روزانہ چار سیریل ایکوزیشن راؤنڈ (5 منٹ ITR) کے ساتھ پیش کیا جاتا تھا۔ .e چوہا کو آہستہ سے ٹینک کی دیوار کا سامنا کرنے والے آبی ذخائر میں چھوڑا گیا، جس میں سائٹ R1-R4، R2-R1، R3-R2، اور R{{ سے ہر ایک آزمائش کے ساتھ مختلف ہوتی ہے۔ 7} 1 سے 4 دنوں میں بالترتیب R3، اور اسے پانی کے اندر پوڈیم کا پتہ لگانے کے لیے 120 سیکنڈ کی اجازت تھی۔ چوہا 20 سیکنڈ تک پوڈیم پر آرام کرتے رہے۔

120 سیکنڈ کے اندر پلیٹ فارم کا پتہ لگانے میں ناکامی نے پلیٹ فارم پر ratson کی دستی جگہ کا اشارہ کیا، اور پھر انہیں پلیٹ فارم پر 20 سیکنڈ کی اجازت دی گئی۔ Escape لیٹنسی ٹائم (ELT) آبی ذخائر میں چھپے ہوئے ڈائس کو دریافت کرنے کا دورانیہ ہے۔

مقامی سیکھنے کو پہلے دن بمقابلہ چوتھے دن ELT نشان زد کیا گیا تھا۔ تحقیقات کے مقدمے میں (5ویں دن)، چوہوں نے 120 سیکنڈ تک ذخائر کی چھان بین کی لیکن وہ پوڈیم سے محروم رہے۔ یعنی پورے آبی ذخائر (4 علاقوں) میں خرچ کی گئی اوسط مدت ریکارڈ کی گئی۔ یعنی R4 میں خرچ کیا گیا اوسط دورانیہ (TSTQ: ٹارگٹ کواڈرینٹ میں گزارا گیا وقت) چھپے ہوئے پوڈیم کی جانچ پڑتال کو ریفرنس میموری کا ایک اشاریہ سمجھا جاتا تھا۔ لیبارٹری میں موجود اشیاء کے مقابلے میں ٹینک کی تقابلی ترتیب جو بصری علامات کے طور پر کام کرتی ہے اور تفتیش کار کی پوزیشن بغیر کسی رکاوٹ کے [26]۔

2.10 بائیو کیمیکل پیرامیٹرز کا تخمینہ۔ رویے کے معائنے مکمل کرنے کے بعد، تھیراٹس کے مکمل دماغ کو اکٹھا کیا گیا اور اسے pulverized آئس کیوبز پر رکھا گیا، جس کے بعد باقیات اور خون کو نکالنے کے لیے منجمد جراثیم سے پاک نمکین (isotonic308 mOsmol/l NaCl) سے غسل کیا گیا۔

پورے دماغ کی ہم آہنگی کو فوری طور پر ایک منجمد علیحدگی بفر (pH 7.4) میں مکمل کیا گیا جس کی ساخت 215 mM D-mannitol، 20 mM 2-[4-(2-hydroxyethyl پائپرازین-1-yl]ایتھین سلفونک ایسڈ، 1 ایم ایم 1،2-بیس[{{12}[bis(کاربوکسی میتھیل)امینو]ایتھوکسی]ایتھین، 75 ایم ایم سیکروز، اور 0.1٪ BSA۔ .e homogenate کو 5 منٹ کے لیے 13000 × g قوت کا استعمال کرتے ہوئے 4 ڈگری پر سینٹرفیوگیٹ کیا گیا تھا۔ .e گولی کو مسترد کر دیا گیا تھا، اور سپرنٹنٹ کو دو حصوں میں الگ کر دیا گیا تھا اور اسے 5 منٹ کے لیے 13000 × g فورس پر ری فیوج کیا گیا تھا۔ .e کروڈ مائٹوکونڈریل گولی کو 1،2-bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethoxy]ethane کے ساتھ 12,500 × g پر 11 منٹ (4 ڈگری) کے ساتھ ایک بار پھر سینٹرفیوج کرکے الگ کیا گیا تھا۔ غیر آلودہ مائٹوکونڈریا پر مشتمل سیمی سولڈ ڈپازٹ کو الگ کرنے والے بفر (pH 7.4) میں دوبارہ معطل کیا گیا جس میں 75 mM saccharose، 20 mM 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin{{36} yl] ایتھین سلفونیکاسڈ، اور 215 ایم ایم ڈی مینیٹول [27]۔

بعد میں، معیاری طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے بائیو کیمیکل مارکروں کا تعین کرنے کے لیے پورے دماغ کے ہوموجنیٹ کے مائٹوکونڈریل فریکشن کا استعمال کیا گیا۔2.11۔ مائٹوکونڈریل کمپلیکس کا تخمینہ۔

2.11.1 NADH: Ubiquinone Oxidoreductase سرگرمی۔ کنگ اور ہاورڈ [28] کی تکنیک کی پیروی کرتے ہوئے پیچیدہ I (NADH dehydrogenase) کی سرگرمی کی مقدار (nmol NADH آکسائڈائزڈ/منٹ/mg پروٹین) کو درست کر دیا گیا۔ NADH سے NAD+ کی eoxidative نسل سائٹوکوم c میں کمی کے ساتھ ہے۔ .e پرکھ کا مرکب cytochrome c (10.5 mM)، 6 mM -nicotinamide adeninedinucleotide (DPNH) 2 mM diglycinebuffer کا استعمال کرتے ہوئے تحلیل کیا گیا، اور diglycine buffer (0.2 M, pH 8.5) پر مشتمل ہے۔

رد عمل کو متحرک کرنے کے لیے پرکھ کی ترکیب میں ایک تحلیل ہونے والا مائٹوکونڈریل حصہ شامل کیا گیا تھا۔ .e آپٹیکل کثافت (OD) میں λmax � 550 nm میں تغیر 120 سیکنڈز کے لیے فالو کیا گیا۔

2.11.2 Succinate: Ubiquinone Oxidoreductase Activity..e کی شرح succinate dehydrogenase (complex II) کی سرگرمی کنگ [29] کی تکنیک پر عمل کرتے ہوئے مقدار (nmol succinate oxidized/minute/mg protein) کی گئی تھی۔

Succinic acidoxidation ایک فرضی الیکٹران ریسیور، potassiumcyanoferrate (K3Fe(CN)6) سے شروع ہوتا ہے۔ .e پرکھ کا مرکب سوکسینک ایسڈ (0.63 M)، 1% BSA، K3Fe(CN)6 (0۔{13}}36 M)، اورNa+-K+ پر مشتمل ہے۔ [PO4]2- بفر (0.23 M، pH 7.6)۔ رد عمل کو متحرک کرنے کے لیے پرکھ کی ترکیب میں ایک تحلیل ہونے والا مائٹوکونڈریل حصہ شامل کیا گیا تھا۔ OD atλmax � 420 nm میں تغیر 120 سیکنڈ کے لیے فالو کیا گیا۔2.12۔ آکسیڈیٹیو سٹریس بائیو مارکرز کا تعین 2.12.1. iobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS)۔

TBARS (nmol فی ملی گرام پروٹین) [30] کا جائزہ لینے کے لیے، تجزیہ کا مجموعہ (اختتام پذیر مقدار ∼4 ملی لیٹر) جس میں0.10 ملی لیٹر ہم آہنگ دماغ، 1.51 ملی لیٹر 4،{{ 7}}dihydroxy-2-mercaptopyrimidine (0.8%), 200 µl SLS (8.18%), 1.49 ml glacialacetic acid (21%, pH 3.51)، اور 0.71 ml deionized پانی کو 96 ڈگری پر پانی سے غسل کرنے کے لیے زیر کیا گیا تھا۔ 60 منٹ

بیوٹائل الکحل/ازابینزین (5.1 ملی لیٹر) کا 15:1 تناسب ایک تجزیہ کنکشن میں شامل کیا گیا تھا جسے 4،000 × gpower (10 منٹ) پر سینٹرفیوگیٹ کیا گیا تھا، اور سپرنٹنٹ کو الگ رکھا گیا تھا۔

جڑواں بیم UV1700 سپیکٹرو فوٹومیٹر (Shimadzu، جاپان)، کروموفور میلونڈیالڈہائڈ-4،6-ڈائی ہائیڈروکسی-2-مرکاپٹوپیریمائڈائن OD کے ساتھ طول موج (λmax � 532 nm)، اور 5ε × �16۔ 105/M/cm (molar extinctioncoefficient) کا اطلاق 4،6-dihydroxy-2-mercaptopyrimidine addducts کے حساب سے کیا گیا تھا۔

2.12.2 Glutathione (Lc-Glutamyl-L-Cysteinyl-glycine) کی سطح میں کمی۔ ایل مین کا [31] طریقہ کار L-glutathione (GSH) مواد کا اندازہ لگانے کے لیے لاگو کیا گیا تھا۔ .e ٹیسٹ concoctionencompassing homogenate (1.1 ml) اور 1 ml of 4% 2-hydroxy-5-sulfobenzoic acid (5-SSA) کو 2,500 × g پاور پر 11 منٹ کے لیے سینٹرفیوگیٹ (4 ڈگری) کیا گیا تھا۔ .

بعد میں، 2.8 ملی لیٹر Na+-K+[PO4]2- بفر (51.2 mM، pH 7.77) اور {{10}}.21 ml 3-carboxy{{13 }} نائٹروفینائل ڈسلفائڈ (0.12 mM، pH 7.89) کو اوپر سے الگ کیے گئے سپرنٹنٹ (0.12 ملی لیٹر) کے ساتھ ملایا گیا تھا۔

ٹریپپٹائڈ (μmolGSH فی mg پروٹین) کو ٹوئن-بیم یو وی 1700 سپیکٹرو فوٹومیٹر (λmax � 412 nm) کے ساتھ مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ لاگو کرنا � 1.36 × 104/M/cm.2.12.3۔

گلوٹاتھیون پیرو آکسیڈیز سرگرمی۔ glutathione peroxidase (GPx) (EC 1.11.1.9) کی سرگرمی کا اندازہ موہنداس وغیرہ کی تکنیک کو لاگو کرکے لگایا گیا تھا۔ [32]۔ .eanalyse مرکب جس میں 100 µl of 10% homogenate، 100 µl سوڈیم ایزائیڈ (1.11 mM)، 100 µl EDTA (1.13 mM)، 40 µl glutathione-diduct-ase (GSR، 1 IU/ml) (EC1.8.1.7)، 10 µl H2O2 (0.28 mM)، 40 µl Lc-glutamyl-L-cysteinyl-glycine (1.2 mM)، 100 µl coenzyme II نے ٹیٹراسوڈیم نمک کم کیا (0.2mM) )، اور 0.12 M 1.49 ml Na+-K+ [PO4]2-بفر (pH 7.4) 2000 μl کی پوری مقدار میں۔ .e λmax � 340 nm پر coenzyme II-redued tetrasodium کا نقصان 25 ڈگری کے درجہ حرارت پر دستاویز کیا گیا تھا۔ GPx کی شرح 6.22 × 103/M/cm کے ε � کا استعمال کرتے ہوئے nmol NADPH آکسائڈائزڈ/منٹ/mg پروٹین کے طور پر شمار کی گئی۔

For more information:1950477648nn@gmail.com