حصہ 1: ذیابیطس اور اس سے وابستہ پیچیدگیوں پر Isorhamnetin کے اثرات: ان وٹرو اور ویوو اسٹڈیز کا جائزہ اور اس میں شامل مالیکیولر پاتھ وے کا پوسٹ ہاک ٹرانسکروم تجزیہ

مزید معلومات کے لیے۔ رابطہtina.xiang@wecistanche.com

خلاصہ: ذیابیطسmellitus، خاص طور پر type2 (T2DM)، عالمی سطح پر صحت عامہ کا ایک بڑا مسئلہ ہے۔ DM کی خصوصیت گلیسیمیا کی اعلی سطح اور انسولین کی کمی کی وجہ سے ہوتی ہے جس کی وجہ انسولین کے اخراج اور خلیات کی انسولین کی حساسیت ہوتی ہے، جسے انسولین مزاحمت کہا جاتا ہے۔ T2DM متعدد اور شدید پیچیدگیوں کا سبب بنتا ہے جیسے نیفروپیتھی، نیوروپتی، اور ریٹینوپیتھی جس سے مختلف اندرونی بافتوں، خاص طور پر لبلبہ، دل، ایڈیپوز ٹشو، جگر اور گردے میں سیل آکسیڈیٹیو نقصان ہوتا ہے۔ پودوں کے نچوڑ اور ان کے بایو ایکٹیو فائٹو کیمیکلز T2DM اور اس سے منسلک پیچیدگیوں کے لیے نئے علاج اور روک تھام کے متبادل کے طور پر دلچسپی حاصل کر رہے ہیں۔ اس سلسلے میں isorhamnetin، ایک پوداflavonoid، اس کے ممکنہ اینٹی ذیابیطس اثرات کے لئے طویل عرصے سے مطالعہ کیا گیا ہے۔ یہ جائزہ گلوکوز کی سطح کو کم کرکے، آکسیڈیٹیو سٹیٹس کو کم کرکے، سوزش کو کم کرکے، اور وٹرو اور ویوو اسٹڈیز میں شامل سگنلنگ راستوں کو ریگولیٹ کرکے لپڈ میٹابولزم اور اڈیپوسائٹ تفریق کو ماڈیول کرکے ذیابیطس سے متعلقہ عوارض کو کم کرنے پر اس کے اثرات کو بیان کرتا ہے۔ مزید برآں، ہم اسٹیم سیل پر مبنی ٹول کا استعمال کرتے ہوئے isorhamnetin کی حیاتیاتی سرگرمیوں کا پوسٹ ہاک مکمل جینوم ٹرانسکرپٹوم تجزیہ شامل کرتے ہیں۔

مطلوبہ الفاظ: isorhamnetin quercetin؛ حیاتیاتی سرگرمیاں؛ ذیابیطس؛ سالماتی راستے؛ مائیکرو رے

مزید رابطے جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

قدیم زمانے سے دنیا کے تقریباً تمام براعظموں میں پودوں کو روایتی ادویات کے طور پر استعمال کیا جاتا رہا ہے۔ ان کے دواؤں کے استعمال کی وجوہات میں سائنسی تحقیق نے بائیو ایکٹیو مالیکیولز کی تلاش کا باعث بنا ہے۔ Extremophile پودوں کو جو انتہائی ماحولیاتی حالات میں اگتے ہیں دلچسپی کے بایو ایکٹیو مالیکیولز کا ایک اچھا ممکنہ ذریعہ سمجھا جاتا ہے۔ درحقیقت، یہ ماحولیاتی رکاوٹیں غیر فعال آکسیجن میٹابولزم کی اصل میں ہیں، جو رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) [1,2] میں اضافہ کرکے آکسیڈیٹیو تناؤ کا باعث بنتی ہیں۔ کچھ پودوں، جیسے ہیلوفائٹس، ایک طاقتور ہےاینٹی آکسیڈینٹان نقصان دہ مرکبات کو ختم کرنے کا نظام۔ دلچسپی کے بایو ایکٹو مالیکیولز میں، فینولک مرکبات ہیں۔ کئی مطالعات نے لیبارٹری [3-10] میں پابندی والی شرائط کے ساتھ یا بغیر پولی فینول سے بھرپور پودوں کی قدر کی ہے۔ متعدد حیاتیاتی اثرات پولی فینول سے بھرپور عرقوں سے منسوب ہیں، جیسے سوزش اور اینٹی کینسر سرگرمیاں [11-13]۔ دیگر مطالعات نے اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی مائکروبیل [8,14-16] کے ساتھ ساتھ اینٹی موٹاپا، اینٹی ذیابیطس اور اینٹی ہیپاٹک سٹیٹوٹک [17-19] isorhamnetin کے اثرات ظاہر کیے ہیں۔ ان پولیفینولز میں،flavonoidsممتاز ہیں. اس گروپ میں کئی ذیلی گروپس شامل ہیں، جیسے کہ flavonols۔ Isorhamnetin flavonols کے بڑے مرکبات میں سے ایک ہے۔ Isorhamnetin flavonoids کی کلاس سے ایک monomethoxy flavone یا O-methylated flavonol ہے۔ یہ ہےquercetinجس میں میتھوکسی گروپ پوزیشن 3 پر ہائیڈروکسی گروپ کی جگہ لے لیتا ہے۔ کچھ isorhamnetin مشتق فطرت میں موجود ہیں، جیسے isorhamnetin 3-O- -d-glucopyranoside، isorhamnetin 3-O-neohesperidoside، اور isorhamnetin 3-O-rutinoside Calendula officinalis L سے [20]۔ Isorhamnetin اہم حیاتیاتی خصوصیات پیش کرتا ہے جیسے اینٹی آکسیڈینٹ [21]، اینٹی کینسر [22]، اینٹی مائکروبیل [23]، اینٹی وائرل [24]، اینٹی سوزش اور اینٹی ذیابیطس اثرات [21,25-33]۔

اس جائزے میں، پہلی توجہ اصل، کیمیائی ساخت، تنہائی، اور نکالنے کے طریقوں کے ساتھ ساتھ isorhamnetin کے فائٹو کیمیکل پہلو پر ہے۔ اس کے بعد، دوسرے حصے میں، ہم گلوکوز کی سطح کو کم کرکے، آکسیڈیٹیو سٹیٹس کو کم کرکے، سوزش کو کم کرکے، اور لپڈ میٹابولزم اور ایڈیپوسائٹ کی تفریق کو ماڈیول کرکے ذیابیطس سے متعلق امراض کو کم کرکے اس فلاوونول کے ممکنہ انسداد ذیابیطس اثرات کو بیان کرنے پر توجہ مرکوز کرتے ہیں۔ آخر میں، ہم نے اپنے پہلے شائع شدہ مکمل جینوم مائیکرو رے ڈیٹا کا ایک ثانوی تجزیہ کیا تاکہ اسٹیم سیل پر مبنی ٹول میں اسورہیمیٹن کی ذیابیطس سے متعلق بائیو ایکٹیویٹی کو تلاش کیا جا سکے۔ ہمارا مقصد تحقیق کے اس شعبے میں استعمال ہونے والے ان وٹرو اور ان ویوو اسٹڈیز کی رپورٹنگ کے ذریعے شامل سگنلنگ راستوں کے ضابطے پر اس مالیکیول کے اثر کو بھی اجاگر کرنا ہے۔ اس جائزے میں، ہم نے اس کے مقابلے میں isorhamnetin کی ذیابیطس مخالف سرگرمی کی خصوصیات کو بے نقاب کیا۔quercetinجسے isorhamnetin کا ​​میٹابولائٹ سمجھا جاتا ہے اور ذیابیطس کے قدرتی علاج میں ایک اہم حوالہ ہے۔

2. خاص پولیفینولز اور فلاوونائڈز میں بایو ایکٹیو مالیکیولز کا عمومی جائزہ

2.1 پودوں میں بایو ایکٹیو مالیکیولز کی اصل کے طور پر آکسیڈیٹیو تناؤ

کئی پودوں کو مختلف ماحولیاتی حالات کا نشانہ بنایا جا سکتا ہے (نمک، خشک سالی، UV شعاعیں، بھاری دھاتیں، انتہائی درجہ حرارت، غذائی اجزاء کی کمی، فضائی آلودگی، اور روگجنوں کے حملے)۔ یہ رکاوٹیں آکسیجن میٹابولزم کی خرابی کی اصل میں ہیں، جو رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کو بڑھا کر آکسیڈیٹیو تناؤ پیدا کرتی ہیں۔ آکسیجن مالیکیول (O2) فتوسنتھیٹک جانداروں میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ اصل میں، اونچے پودوں اور طحالب میں، کلوروپلاسٹ میں الیکٹرانوں پر مشتمل گیس کا تبادلہ دن کے وقت کاربن ڈائی آکسائیڈ کو پکڑ کر اور آکسیجن پیدا کرنے سے ہوتا ہے۔ اس گیس کے تبادلے میں الیکٹران شامل ہیں۔ درحقیقت، شدید ماحولیاتی رکاوٹوں کی صورت میں، آکسیجن کا ایک بڑا حصہ کم نہیں ہوتا ہے اور اس طرح کلوروپلاسٹ کے مناسب کام میں عدم توازن اور الیکٹران کی منتقلی کی وجہ سے پودوں کے خلیوں سے کچھ آرگنیلز میں ROS پیدا کر سکتا ہے [1,2]۔ 1]۔ مزید برآں، اوپر بیان کردہ ماحولیاتی رکاوٹوں کے تحت، بہت سے ROS تیار کیے جاتے ہیں، جیسے ہائیڈروکسائل ریڈیکل (OH)، سپر آکسائیڈ anion ریڈیکل (O,-)، alkoxyl اور peroxyl radicals (RO: اور RO2، بالترتیب)، ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H2O2، )، ہائپوکلورائٹ ریڈیکل (-OCl)، سنگلٹ آکسیجن (O2)، نائٹرک آکسائیڈ ریڈیکل (NO) اور دیگر لپڈ پیرو آکسائیڈز (جیسے میلونڈیالڈہائیڈ اور 4-ہائیڈروکسینونل)[2,34,35]۔ بعض اوقات، ROS کا پودوں کے جسمانی رویے میں سیل سگنلنگ میں کردار ہو سکتا ہے، مثال کے طور پر بیج کی نشوونما اور نشوونما، ٹشوز کی نشوونما، اور تفریق کے ابتدائی مراحل کے دوران سیلولر پھیلاؤ سے خلیے کی لمبائی میں منتقلی [36] . اعلیٰ سطح پر، یہ مالیکیول مالیکیولر نقصان کا باعث بنتے ہیں جیسے جھلیوں کا لپڈ پیرو آکسیڈیشن، پروٹین اور ڈی این اے میں تبدیلی، اور سیل کی موت [1,35,37]۔ کچھ پودے، جیسے ہیلوفائٹس، ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ نظام کے ذریعے ان حالات کو اچھی طرح سے ڈھالنے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔ ہیلوفائٹس کو ثانوی میٹابولائٹس جیسے پولیفینول [3-10] کا ذریعہ جانا جاتا ہے۔ یہ مصنفین ظاہر کرتے ہیں کہ سخت حالات میں، پولی فینولز کو تناؤ کی وجہ سے آکسیڈیٹیو نقصان سے بچانے میں اہم کردار ادا کرنے کے لیے ترکیب کیا جاتا ہے۔ حیاتیاتی ترکیب، مواد، اور ان فینولک مرکبات کی سرگرمیاں کئی خارجی (روشنی، درجہ حرارت، نمکیات، اور خشکی) اور اندرونی (جینوٹائپ، عضو، اور نشوونما کا مرحلہ) پیرامیٹرز کا کام ہیں جو پودوں میں ان کے مواد اور تقسیم کو متاثر کرتی ہیں۔ 8،38،39]۔ مثال کے طور پر، Pyracantha coccinea میں، کچھ flavonoids جیسے flavanones، flavones، اور flavonols پودوں کے مرحلے کے دوران ٹہنیوں میں اور خاص طور پر تولیدی ایک کے دوران جڑوں میں موجود ہوتے ہیں 40]۔ دوسری طرف، کئی مصنفین نے دکھایا ہے کہ ان فینولک مرکبات میں دیگر حیاتیاتی خصوصیات ہیں جیسے سوزش اور اینٹی کینسر سرگرمیاں [11-13]۔ دیگر مطالعات میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی مائکروبیل [8,14-16] کے ساتھ ساتھ اینٹی ذیابیطس [18,41,42] فینولک نچوڑ کے اثرات بھی ظاہر ہوئے۔

2.2 قدرتی اینٹی آکسیڈینٹس کی درجہ بندی

اینٹی آکسیڈینٹ نظام کو ان اجزاء کی نوعیت کے مطابق انزیمیٹک یا غیر انزیمیٹک مرکبات میں درجہ بندی کیا جا سکتا ہے۔ سب سے پہلے میں سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD)، کیٹالیس (CAT)، ascorbate peroxidase، اور glutathione reductase [1,3542-44] شامل ہیں۔ ان انزائمز سے متعلق جینز نے ذخیرہ کرنے کے بعد کی جڑوں کے جسمانی بگاڑ کے دوران ان کی اہمیت کو ظاہر کیا اور آسموٹک تناؤ اور ابسیسک ایسڈ کے ساتھ ساتھ Xanthomonas axonopodis انفیکشن [44] کے جواب میں۔ دوسرے گروپ میں بنیادی طور پر فینولک مرکبات، کیروٹینائڈز، وٹامنز اور آسمولائٹس شامل ہیں [1]۔ فینولک مرکبات ایک یا ایک سے زیادہ بینزین کے حلقوں کی موجودگی کی خصوصیت رکھتے ہیں اور بنیادی مالیکیول کی پیچیدگی، ہائیڈروکسیل کی تعداد اور مقام اور پولیمرائزیشن کی ڈگری میں مختلف ہوتے ہیں۔ یہ مرکبات ثانوی میٹابولائٹس ہیں جو تین وسیع گروپوں میں آتے ہیں: فینولک ایسڈ (بینزوک اور سینامک ایسڈ کے مشتق)، فلیوونائڈز (فلاونولز، فلاوونولز، فلاوونز، فلاوونز، اینتھوسیاننز)، اور ٹیننز (ہائیڈرولیز ایبل ٹینینز اور پروانتھوسیانینز)۔ ان مالیکیولز کے علاوہ، سٹیل بینز، لگنان اور کومارینز بھی ممتاز ہیں [45]۔

2.3۔ فلاوونائڈز کی اصل اور حیاتیاتی کیمیائی ساخت، خاص طور پر، Isorhamnetin

فینولک مرکبات ثانوی میٹابولائٹس ہیں جو پودوں میں پائے جاتے ہیں۔ یہ مرکبات ایک یا زیادہ ہائیڈروکسیل گروپس (OH) کے ساتھ خوشبو دار انگوٹھی کے ساتھ ہوتے ہیں اور ان میں سادہ فینولک ایسڈ سے لے کر پولیمرائزڈ مرکبات جیسے ٹینن تک کے مالیکیول ہوتے ہیں۔ فینولک مرکبات کی ترکیب ایک پیچیدہ عمل ہے جو کئی مراحل سے گزرتا ہے۔ فینولک مرکبات بائیو ایکٹیو مالیکیولز ہوتے ہیں جن کے دو اصل راستے ہوتے ہیں: ایک طرف شیکیمک ایسڈ اور دوسری طرف فینیلپروپینائیڈ مالیکیول۔ flavonoids جیسے isorhamnetin کی حیاتیاتی ترکیب ان راستوں پر مبنی ہے۔ درحقیقت، ایک طرف، شکیمیٹ پولیفینول کا بنیادی ڈھانچہ دیتا ہے جس میں ایک یا زیادہ بینزین کے حلقے (C6) ہوتے ہیں جو ایک یا زیادہ ہائیڈروکسیل افعال کو لے کر ہوتے ہیں۔ دوسری طرف، C6-C3 بیس کی ترکیب ہے جو فینیلالینین کو سنامیک ایسڈ میں گاڑھا کرنے سے بنتی ہے (شکل 1)[46]۔

مزید واضح طور پر، شکیمک ایسڈ کئی رد عمل کی بنیاد پر ہوتا ہے، جو خوشبو دار امینو ایسڈز کے کنکال کی نمائندگی کرتا ہے، جو فینولک مرکبات کا آغاز کرتے ہیں۔ پہلا مرحلہ دو مالیکیولز کے امتزاج پر مشتمل ہوتا ہے: فاسفینولپائروویٹ اور اریتھروس 4- فاسفیٹ، جو چار رد عمل کے بعد، فینولک کا پہلا ڈھانچہ تشکیل دیتے ہیں: شکیمیٹ یا شیکیمک ایسڈ (CHoOs)۔ یہ بعد میں پہلی انگوٹھی پیش کرتا ہے، جو دو ہائیڈروکسیل گروپوں کے ساتھ فینولک کی خصوصیت رکھتا ہے۔ شکیمیٹ چھ رد عمل سے گزرتا ہے جو پہلے امینو ایسڈ پر ختم ہوتا ہے: فینی لالینائن۔ دو اہم خامروں کی بدولت، فینی لیلانین امونیا لائز (PAL) اور دار چینی-4-ہائیڈروکسیلیس (C4H)، فینیلالینین یکے بعد دیگرے cinnamate اور p-coumarate بناتی ہے۔ فینولک مرکبات p-coumarate مالیکیول coumarin derivatives کی اصل میں ہے۔ phenylpropanoid مالیکیولز کی ترکیب کا راستہ ایک کلیدی انزائم کی موجودگی سے خصوصیت رکھتا ہے جسے 4-coumarate CoA ligase (4CL) کہا جاتا ہے، جو coenzyme A(CoA) p-coumaric کے thiol فنکشن کی موجودگی میں اتپریرک ہوتا ہے۔ ایسڈ میں 4- coumaroyl CoA(C30Ha2N-O18P, S)۔ flavonoids کی خوشبودار A-ring malonyl-CoA (-C6) کے تین مالیکیولز کی گاڑھائی سے فراہم کرتی ہے۔

اس کے بعد، 4-coumaroyl CoA نے نارنجینن چالکون تیار کیا، جس نے خوشبودار B-ring اور 3C ون (C6-C3-) کے درمیان تعلق کی وضاحت کی۔ Chalcone اس موضوع میں ایک اہم عنصر ہے کیونکہ یہ تمام flavonoids کا پیش خیمہ ہے جس کی بنیاد پندرہ کاربن کنکال پر مشتمل ہے جس میں دو بینزین حلقے شامل ہیں۔ اس کے بعد، چالکون isomerase (CHI) کے عمل سے نارینجینن (جسے فلاوونن یا ٹرائی ہائیڈروکسی فلاوون بھی کہا جاتا ہے) میں تبدیل ہو جاتا ہے۔ ایک طرف، فلاوون کی موجودگی میں فلاوون جیسے ایپیگینن، ایکاسیٹن، کرائسن، یا لیوٹولن کو ترکیب کیا جاتا ہے۔ سنتھیز(FNS)۔دوسری طرف، مختلف فلاوونلز اور سوکسینک ایسڈ مرکبات نارینجنن سے دو خامروں کی موجودگی میں تیار ہوتے ہیں۔ flavanone 3-dioxygenase (F3D) اور flavonol synthase (FS)۔ flavonol مشتقات کے علاوہ، دیگر مرکبات، جیسے kaempferol، myricetin، اور quercetin، بھی تیار ہوتے ہیں۔ S-adenosyl-L-methionine سے میتھائل گروپ کی منتقلی کے ذریعے، isorhamnetin flavone 3'-O-methyltransferase (FMT) [47,48] کی موجودگی میں تیار ہوتا ہے۔ اس کے بعد، isorhamnetin flavonoids کی کلاس سے ایک monomethoxy flavone یا O-methylated flavonol ہے۔ یہ quercetin (پیشگی) ہے جس میں پوزیشن 3 پر موجود ہائیڈروکسی گروپ کو میتھوکسی گروپ سے بدل دیا جاتا ہے۔ کچھ isorhamnetin مشتق فطرت میں موجود ہیں، جیسے isorhamnetin 3-O- -d-glucopyranoside، isorhamnetin 3-O-neohesperidoside، اور isorhamnetin 3-O-rutinoside Calendula officinalis L سے [20]۔

درحقیقت، فلیوونائڈز کو پولیفینول فیملی کے سب سے اہم گروپوں میں سے ایک سمجھا جاتا ہے۔ ان کا ڈھانچہ ڈائفینائل پروپین قسم پر مبنی ہے جس میں دو بینزین حلقے ہیں (رنگ A اور B، شکل 2 دیکھیں) جو تین کاربن کی زنجیر سے جڑے ہوئے ہیں جو ایک بند پیران رنگ (C رنگ) بناتی ہے۔ لہذا، ان کی ساخت کو C6-C3-C6 کہا جاتا ہے۔ O-glycosylation پوزیشنیں C7 ہیں flavones، isoflavones، flavanones، اور flavonols میں، اور C3 flavonols اور anthocyanidins میں۔ C-glycosylation پوزیشنیں C6 اور C8 ہیں flavones [49] میں۔ اس کے علاوہ، فینولک مرکبات کے اینٹی آکسیڈینٹ کردار کی اہمیت مالیکیول کے ہائیڈرو آکسیلیشن کی ڈگری سے متعلق ہے۔ Flavonoids میں isoflavones، flavones، flavanones، اور ان کے glycosides اور flavonols شامل ہیں isorhamnetin، جسے 3'-methoxy quercetin اور 3-methyl quercetin [50] کا نام بھی دیا گیا ہے۔ پودوں میں، ایک انزائم، UDP پر منحصر glycosyltransferases، isorhamnetin (isorhamnetin 3-O-glucoside) کی گلائکوسائیڈ شکل کے لیے ذمہ دار ہے۔ یہ انزائم نیوکلیوٹائڈ ڈائی فاسفیٹ شکر، عام طور پر uridine diphosphate (UDP) - شکر کا استعمال کرتا ہے، میتھائل گروپ کو سائیکل میں منتقل کرتا ہے اور گلائکوسائیڈ فنکشن کو isorhamnetin [51] کے ساتھ جوڑتا ہے۔

2.4. دواؤں کے پودوں سے پیدا ہونے والے Ilsorhamnetin کی تنہائی اور تجزیہ

دواؤں کے پودوں میں isorhamnetin کی تقسیم بہت وسیع ہے اور نکالنے اور تجزیہ کرنے کے طریقے مختلف ہیں۔ Isorhamnetin مشتقات خاص طور پر مطلوب ہیں۔ ہائیڈروکسیل اور میتھائل گروپ ان کی خصوصیات میں مدد کرتے ہیں۔ کچھ طریقے isorhamnetin کو نکالنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں، جن میں سے فریکشنیشن کی بنیاد پر، کیمومیٹرک اپروچز، انزائم، اور سپر کریٹیکل فلوڈ نکالنے (SFE-CO2) کا استعمال کرتے ہوئے۔ سب سے پہلے، لیپڈ پر مشتمل نمونوں سے تمام تیل اور لیپوفیلک روغن کو نکال کر فریکشن کو آسان بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ defatted نمونہ بھی میتھانول اور پانی کے ایک مرکب میں maceration سے پہلے sonicated ہے. اس کے بعد کرومیٹوگرافی کو فینولک مرکبات کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، خاص طور پر flavonoids [49]۔ ان آخری مرکبات کے لیے، LC-MS کا استعمال کیا جاتا ہے اور دونوں الیکٹرو سپرے آئنائزیشن (ESI) اور وایمنڈلیی پریشر کیمیکل آئنائزیشن کو کثرت سے لاگو کیا جاتا ہے، اور flavonoids کے لیے بہترین حساسیت عام طور پر منفی آئن موڈ میں حاصل کی جاتی ہے [49]۔ مثال کے طور پر، تیونس کے صحرا سے اکٹھے کیے گئے Calligonum Azel Maire پلانٹ کے حصوں کی فائٹو کیمسٹری کا اندازہ لگایا گیا ہے اور ان میں phenolics کی شناخت کرنے کے لیے فلائٹ ماس سپیکٹرو میٹری UHPLC-ESI-QTOF کے چار گنا وقت کے ساتھ ایک انتہائی اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال کیا گیا ہے۔ اور flavanols، جو سب سے زیادہ پرچر فینولک مرکبات تھے جن کی نشاندہی کی گئی [52]۔ مزید خاص طور پر، LC/ESI-MS/MS ٹیکنالوجی [3] کا استعمال کرتے ہوئے خوردنی ہالوفائٹ Mesembryanthemum edule کے پتوں میں اہم مرکبات کے طور پر isorhamnetin glucoside اور isorhamnetin glucosyl-rhamnoside کی موجودگی کی تصدیق کی گئی۔ اس کام کی پیروی دوسرے لوگوں نے کی جنہوں نے LC-ESI-TOF-MS کو بہت سے پولیفینول کی خصوصیات کے لیے استعمال کیا ہے۔ ان میں سے، فلیوونائڈز کی شناخت ہالوفائٹس کے مکمل پھول کے مرحلے کے فضائی حصوں سے کی گئی تھی جیسے آرتھروکنیم انڈیکم [5]، تامارکس گیلیکا [16]، گلوشیم فلاوم[13]، اور سالسولا کالی[8]۔ آخری کاموں کی طرح، LC-ESI-TOF-MS اور GC-MS آرٹیمیسیا جڑی بوٹیوں کی پروفائلنگ فینولکس کی شناخت کے لیے کی گئی تھی، جیسے کہ فلاوون، فلاوونولس، اور فلاوونائڈ الکلائڈز[7]۔ Pancratium maritimum پر ایک اور کام کیا گیا اور HPLC-DAD-ESI/MS کے تجزیے سے flavonoids کی موجودگی کا انکشاف ہوا جس میں flavonol بطور isorhamnetin ان کے pentoxide اور hexoside conjugates جیسے isorhamnetin di-hexoside [53]۔

ایک غیر فیٹی مرکب کے طور پر، فلاوونول کو ہیکسین کے ذریعے الگ تھلگ کیا جا سکتا ہے۔ پھر، قطبی سالوینٹ جیسے ایتھنول کا استعمال کیا جا سکتا ہے۔ HPLC کا استعمال کرتے ہوئے Limoniastrum guyonianum پر ایک مطالعہ نے بہت سے phenolics کی موجودگی کو ظاہر کیا، ان میں isorhamnetin-3-O-rutinoside [54]۔

فینولک نچوڑ سے دور، فینولک مرکبات بھی تیل جیسے زیتون کے تیل میں پائے جاتے ہیں [55]۔ یہ مرکبات تیل کو آکسیکرن سے بچانے اور تیل کی غذائیت کو بہتر بنانے کی صلاحیت رکھتے ہیں۔ Isorhamnetin، ایک فینولک مرکب کے طور پر، تیونس کے سیاہ زیرہ (نائیجیلا سیٹیوا ایل.) کے بیجوں کے تیل کے عرق میں بھی پایا گیا ہے جو کہ ایک سبز سالوینٹ کے ساتھ حاصل کیا گیا ہے جیسے کہ 2-میتائل ٹیٹراہائیڈروفورن (MeTHF) پیٹرولیم یا ہیکسین کے متبادل کے طور پر۔ تیل سے افزودہ فینولک مرکبات کو نکالنے کے لیے بیسڈ سالوینٹ [10]۔ isorhamnetin کی موجودگی HPLC تجزیہ کے ذریعہ منظور کی گئی تھی۔ Diode Array Detector (LC-DAD) کے ساتھ مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے تجزیوں سے MeTHF اور ہیکسین کے ذریعے کالے زیرے سے تیل نکالنے کے بعد بالترتیب 6.3 اور 6.6（ug/g آئل） کے درمیان زیادہ مقدار میں isorhamnetin کا ​​انکشاف ہوا۔ اس کے علاوہ، H جوہری مقناطیسی گونج (HNMR) اور C نیوکلیئر مقناطیسی گونج (CNMR) کا استعمال کرتے ہوئے، کچھ flavonol glycosides جیسے kaempferol-3-O-rutinoside (nicotiflorin) اور isorhamnetin-3-O-rutinoside (narcissism) ایران کے صوبہ کردستان کے شہر ماریوان میں جمع ہونے والے Peucedanum aucheri Boiss کے فضائی حصوں سے خصوصیت کی گئی تھی [56]۔ NMR طریقہ اس خاصیت کا پتہ لگاتا ہے کہ کمپاؤنڈ کے بعض جوہری مرکز مقناطیسی میدان کے ساتھ تعامل کرتے ہیں۔ یہ خاصیت، جو کہ ایک خاص فریکوئنسی پر مقناطیسی گونج پیدا کرتی ہے، مالیکیول کی ساخت کے بارے میں معلومات فراہم کرتی ہے۔ دوم، ریاضیاتی ماڈلز کا انتخاب فلاوونول نکالنے کی کارکردگی کا جائزہ لینے کے لیے کیا جاتا ہے، خاص طور پر isorhamnetin-3-O-rutinoside [20] حاصل کرنے کے بہترین طریقے کو سمجھنے کے لیے۔ ایک ملٹی ویریٹیٹ فیکٹوریل تجزیہ کیلنڈولا آفیشینیلس کے پھولوں کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ لکیری، چوکور، مکمل کیوبک اور خصوصی کیوبک ماڈلز کا تجزیہ کیا گیا۔ حتمی مکمل مکعب سب سے زیادہ مناسب تھا، جس سے isorhamnetin-3-O-rutinoside کو 60 فیصد تک نکالنے میں زیادہ کارکردگی کی اجازت دی گئی۔ اس مطالعے کے لیے، انزائمز، Rapides Maxi Fruit اور Viscozyme کو کچھ اہم عوامل کے تحت استعمال کیا گیا جو انزائم کی سرگرمی کو سپر کریٹیکل CO2 حالات جیسے کہ دباؤ، درجہ حرارت، pH، وقت، اور آبی ایتھانول محلول کے تحت متاثر کرتے ہیں۔ آخر میں، سپرکریٹیکل سیال نکالنے کا طریقہ فینولک مرکبات جیسے فلاونولز کو نکالنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ بہت سال پہلے، یوکلپٹس گلوبلس کی چھال پر سپرکریٹیکل سیال نکالنے کا طریقہ کار پہلی بار استعمال کیا گیا تھا، جس میں پانی، ایتھائل ایسیٹیٹ اور ایتھنول کے ساتھ خالص اور تبدیل شدہ CO2 کا استعمال کیا گیا تھا [57]۔ مصنفین نے دکھایا کہ ایتھنول کے ساتھ مل کر سپرکریٹیکل CO2 فینولک مرکبات کی نمایاں مقدار نکال سکتا ہے، بشمول isorhamnetin۔ HPLC-MS کوانٹیفیکیشن نے کچھ فلاوونول کا تعین کیا، جیسے کہ isorhamnetin-hexoside (ex-tract کا 0.26 gg-I) اور سادہ isorhamnetin (14.29 mg:gI اقتباس)۔ ایتھنول کو شریک سالوینٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ مقدار کا تعین فوٹوڈیوڈ سرنی ڈیٹیکٹر سے لیس ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے ساتھ کیا گیا تھا۔ Isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnosyl-rhamnoside, isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnosyl-pentoxide, isorhamnetin 3-O-glucosyl-rhamnoside, and isorhamnetin {{47}O-Glucosyl-rhamnosyl-pentoxide} -پینٹاکسائیڈ او فکس-انڈیکا سپر کریٹیکل نچوڑ سے نکالے جانے والے سب سے زیادہ فلاوونول تھے۔ جیسا کہ پہلے ذکر کیا گیا ہے، ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی یا HPLC فینولک مرکبات کا تجزیہ کرنے کا ایک عام طریقہ ہے۔ سیب کے رس اور ناشپاتی کے رس میں، isorhamnetin 3-O-glucoside کا پتہ چلا۔ درحقیقت، HPLC اور ماس اسپیکٹومیٹری کے ذریعہ "Brettacher" سیب کے عرق میں flavonol glycosides کی علیحدگی نے دو گلائکوسائیڈ شکلوں کی موجودگی کا انکشاف کیا جیسے isorhamnetin 3-O-glucose اور isorhamnetin 3-O-galactoside [ 58]۔