پری کنڈیشننگ-ایکٹیویٹڈ AKT MDM2–p53 پاتھ وے کے ذریعے اسکیمیا کے لیے نیورونل رواداری کو کنٹرول کرتا ہےⅡ

3. بحث

ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ PI3K/AKT سگنلنگ پاتھ وے کی IPC ثالثی ایکٹیویشن پرائمری کارٹیکل نیوران میں MDM2–p53 کمپلیکس کو کنٹرول کرکے نیورونل IT کو متحرک کرتی ہے۔ ہم نے پہلے توثیق شدہ آئی پی سی تجرباتی ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے نیورو پروٹیکشن [33,39–41] کے لحاظ سے پیشگی شرط کی کارکردگی کی تصدیق کی۔

نیوران کے لیے cistanche tubulosa کے مضر اثرات کے لیے کلک کریں۔

ہم نے پایا کہ تجرباتی آئی پی سی ایک مختصر (20 منٹ) آکسیجن اور گلوکوز کی کمی (OGD) کی حوصلہ افزائی کے بعد 2 گھنٹے ری آکسیجنیشن کے نتیجے میں نیورو پروٹیکشن ہوا، جیسا کہ نیورونل اپوپٹوسس اور کیسپیس-3 ایکٹیویشن دونوں کی روک تھام سے ظاہر ہوتا ہے۔ OGD (90 منٹ) اس کے بعد 4 گھنٹے ری آکسیجنیشن (OGD/R)۔ ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ IPC کارٹیکل نیورونز میں کیسپیس-3 ایکٹیویشن کو کم کرتا ہے، جو بعد میں اور زیادہ شدید اسکیمک توہین کے بعد کم اپوپٹوسس سے منسلک ہوتا ہے۔

اسکیمیا [3,33,38,42-44] کے بعد نیورونل بقا کو یقینی بنانے کے لئے پرو اور اینٹی پوپٹوٹک سگنلز کے درمیان توازن بنیادی ہے۔ اگرچہ اس طرح کے واقعات کی مطابقت ویوو اسٹروک ماڈلز [43,45] میں ہیمرجک اور اسکیمک دونوں میں دکھائی گئی ہے، لیکن ان سگنلنگ راستوں کو منظم کرنے والے میکانزم کو اسکیمک رواداری کے تناظر میں ابھی تک پوری طرح سے سمجھا نہیں گیا ہے۔ کینسر کے خلیات [46,47] اور دماغی بافتوں [38,48] میں antiapoptotic AKT اور اس سے متعلقہ راستوں کے کردار کا بڑے پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے۔ تاہم، اب تک، اسکیمک چوٹ کے خلاف IPC کی ثالثی نیورونل رواداری میں AKT/MDM2–p53 سگنلنگ پاتھ وے کا کردار اب بھی غیر واضح ہے۔

یہاں، ہم نے پایا کہ IPC کی وجہ سے PI3K/AKT سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنا Ser166 میں MDM2 کے فاسفوریلیشن کو فروغ دیتا ہے، جو کہ اس کے جوہری نقل مکانی اور پروٹین کے استحکام کو متحرک کرتا ہے، p53-کیسپیس-3 ایکٹیویشن کے ذریعے apoptosis کو روکتا ہے۔ اسکیمیا کے بعد فاسفوریلیشن کے ذریعے AKT کو چالو کرنا نیورونل بقا کو فروغ دیتا ہے [24,49] اور IT [25,50] کو شامل کرنے میں حصہ ڈال سکتا ہے۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اسکیمک یا پیشگی شرط کے محرکات کے تحت AKT پروٹین کی نسبتا کثرت میں کوئی تبدیلی نہیں ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہم نے پایا کہ Ser473 پر AKT کا ابتدائی PI3K-ثالثی فاسفوریلیشن پیشگی شرط والے نیوران میں اسکیمیا سے متاثرہ p53 استحکام کو روکتا ہے۔

اثر p53 mRNA کی سطح [33,34,44] میں ترمیم کی وجہ سے نہیں تھا بلکہ OGD/R سے پہلے IPC کی وجہ سے p53 پروٹین کی سطح میں کمی کی وجہ سے تھا۔ چونکہ MDM2 p53 استحکام کا بنیادی ریگولیٹر ہے اور AKT کا براہ راست ہدف بھی ہے، اس لیے ہمارے نتائج اسکیمیا کے لیے نیورونل رواداری میں AKT/MDM2–p53 سگنلنگ پاتھ وے کے کردار کی نشاندہی کرتے ہیں۔ OGD [34] کے بعد MDM2 mRNA تیزی سے بڑھتا ہے، لیکن MDM2 سرگرمی بنیادی طور پر بعد از ترجمے کی تبدیلیوں کے ذریعے کنٹرول کی جاتی ہے، خاص طور پر فاسفوریلیشن [51]۔ اس کے ساتھ اچھے معاہدے میں، ہم نے پایا کہ IPC، AKT کے بعد فاسفوریلیشن کے ذریعے ایک بار چالو ہونے کے بعد، فاسفوریلیٹس MDM2 باقیات Ser166 پر، جو کہ جوہری لوکلائزیشن سگنل [52] کے قریب واقع ہے، اور یہ اثر OGD/R چوٹ کے بعد برقرار رہتا ہے۔

ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Ser166 پر MDM2 کا فاسفوریلیشن p53 عدم استحکام کے ذریعے IPC ثالثی نیورو پروٹیکٹو اثر کو بڑھانے کے لئے کافی ہے۔ اس طرح، اس کے ساتھ، ہم نے اسکیمک چوٹ کے بعد AKT/MDM2–p53 راستے کی وقت پر منحصر ایکٹیویشن کی نشاندہی کی اور درحقیقت، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ IPC سے متحرک AKT نے ایکٹوپک MDM2 کے جوہری نقل مکانی کے ساتھ ساتھ endogenous پروٹین کے استحکام کو بھی متحرک کیا۔

مزید برآں، AKT نیوکلئس کے اندر فعال رہتا ہے، جہاں PI3K بھی آکسیڈیٹیو تناؤ کے جواب میں ہجرت کر سکتا ہے اور پھر AKT فاسفوریلیشن [53] کا سبب بن سکتا ہے۔ AKT یا AKT دستک ڈاؤن کے PI3K ثالثی فاسفوریلیشن کی روک تھام سائٹوپلازم میں MDM2 پروٹین کی برقراری کو فروغ دیتی ہے، اور یہ MDM2 کے Ser166 فاسفوریلیشن کے ساتھ ساتھ اسکیمیا سے متاثرہ نیورونل اپوپٹوسس کے خلاف IPC کی ثالثی نیورو پروٹیکشن کو روکتی ہے۔ اس کے برعکس، ہم نے دکھایا کہ فعال AKT جوہری MDM2 پروٹین سے منسلک ہے۔

نتیجے کے طور پر، فعال AKT MDM2 کے فاسفوریلیشن اور اس کے جوہری استحکام دونوں کو فروغ دیتا ہے، جو IPC کی ثالثی نیورو پروٹیکشن میں حصہ ڈالتا ہے۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ IPC سے فروغ پانے والا نیورو پروٹیکشن PI3K- ثالثی AKT ایکٹیویشن پر منحصر تھا، جس نے MDM2 کو Ser166 پر فاسفوریلیٹ کیا، اسکیمک توہین کے بعد MDM2 جوہری جمع کو فروغ دیا۔

اس کے مطابق، PI3K/AKT کی wortmannin کے ذریعے روکنا یا SIRNA کے ذریعے AKT کی کمی نے IPC سے فروغ پانے والے نیورو پروٹیکشن کو ختم کر دیا، جس کے نتیجے میں p53 استحکام اور اسکیمیا کے بعد نیورونل اپوپٹوس کا باعث بنتا ہے۔ لہذا، ہمارے نتائج اسکیمک چوٹ کے خلاف نیورونل بقا میں AKT – MDM2 راستے کے IPC پر منحصر ایکٹیویشن کے ضروری کردار کو واضح کرنے میں مدد کرتے ہیں۔

p53 پروٹین فالج کے مریضوں [34,42,54] کے ساتھ ساتھ TIA کے مریضوں [3] میں نیورونل موت/بقا کے کنٹرول میں شامل ہے۔ P53 اسٹیبلائزیشن اسکیمیا/ریپرفیوژن انجری [33] سے پیشگی کنڈیشنگ ثالثی نیورو پروٹیکشن سے سمجھوتہ کرتی ہے۔ لہذا، MDM2–p53 تعامل اس تناظر میں نیورونل بقا کے لیے اہم ہو گا [34] اور اسکیمک چوٹ کے خلاف IPC کی ثالثی رواداری کے لیے [33]۔

Thus, the control of such interaction will also have an impact on stroke outcomes. In this context, we recently found that a single-nucleotide polymorphism (SNP) 309T>MDM2 پروموٹر میں G MDM2 کے اظہار کا تعین کرتا ہے اور اس کے نتیجے میں، فالج کے شکار مریضوں کی صحت یابی کو ماڈیول کرتا ہے [34]۔

مزید برآں، ہم نے مشاہدہ کیا کہ ایک Tp53 جین SNP (rs1042522) mitochondrial p53 استحکام اور اسکیمیا کے لیے نیورونل رواداری کو ماڈیول کرتا ہے جبکہ فالج سے پہلے TIA کا شکار ہونے والے مریضوں کی فعال بحالی کی پیش گوئی کرتا ہے [3]۔ لہذا، IPC کے نیوروپروٹیکٹو اثر کو یقینی بنانے کے لیے p53 اپوپٹوٹک راستوں کا کنٹرول ضروری ہوگا۔

یہ نتائج مطالعہ کے لیے ایک مترجم نقطہ نظر فراہم کرتے ہیں جو مستقبل میں مریضوں کے فائدے کے لیے لاگو کیا جا سکتا ہے، اور وہ اسکیمک اسٹروک میں پیشگی شرط سے فروغ پانے والی IT حکمت عملیوں کے لیے PI3K/AKT–MDM2–p53 سگنلنگ پاتھ وے کو ایک لازمی ہدف کے طور پر پیش کرتے ہیں۔ خلاصہ طور پر، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ IPC سے بڑھا ہوا PI3K/AKT سگنلنگ پاتھ وے Ser166 پر MDM2 کے فاسفوریلیشن کو فروغ دیتا ہے، جس کے نتیجے میں MDM2 جوہری نقل مکانی اور اس کے استحکام کا باعث بنتا ہے، جو p53 کے عدم استحکام کو فروغ دے کر نیورونل IT کو متحرک کرتا ہے اور اس کے نتیجے میں غیر فعال ہونے کی وجہ سے موت واقع ہوتی ہے۔

ہمارے نتائج آئی پی سی کی ثالثی نیورونل رواداری میں AKT کے ابتدائی ایکٹیویشن کے ممکنہ فوائد کو اجاگر کرتے ہیں، جو اسکیمک چوٹ کے تحت MDM2–p53 اپوپٹوٹک پاتھ وے کو منظم کرتا ہے۔ یہ نتائج ان میکانزم کو سمجھنے کے موقع پر روشنی ڈالتے ہیں جو AKT – MDM2–p53 سگنلنگ پاتھ وے کو نیورونل کو منظم کرتے ہیں تاکہ IT سے متعلقہ عوارض کے لیے نئی نیورو پروٹیکٹو حکمت عملی تیار کی جا سکے۔

4. مواد اور طریقے

4.1 کارٹیکل نیوران کی بنیادی ثقافتیں

نیورونل کلچرز C57Bl/6J یا p53-null (Tp53−/−, B6.129S2, The Jackson Laboratory) ماؤس ایمبریو (14.5E) cortices سے تیار کیے گئے تھے۔ نیورونز کو 1.8 × 105 خلیات/سینٹی میٹر میں 2 فیصد B27 اور 2 ایم ایم گلوٹامین (انویٹروجن، میڈرڈ، اسپین) کے ساتھ ضمیمہ کے ساتھ 1.8 × 105 خلیات/سینٹی میٹر پر سیڈ کیا گیا تھا اور 5 فیصد CO2- پر مشتمل فضا میں نمی میں 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 55]۔

4.2 آکسیجن گلوکوز کی کمی اور پیشگی شرط کے ماڈل

وٹرو (DIV) میں 9–1{{1{19}}}} دن کے بعد، ایک انکیوبیٹر میں 90 منٹ کے لیے 37 ◦C پر خلیات کو انکیوبیٹ کر کے نیورونز کو آکسیجن اور گلوکوز کی کمی (OGD) کا سامنا کرنا پڑا۔ ایئر لاک سے لیس اور 95 فیصد N2/5 فیصد CO2 کے ساتھ مسلسل گیس۔ انکیوبیشن میڈیم (بفرڈ ہینکس کا حل بغیر گلوکوز کے: 5.26 mM KCl، 0.43 mM KH2PO4، 132.4 mM NaCl، 4.09 mM NaHCO3، 0.33 mM Na2HPO4، 2 mM CaCl2، اور 20 فیصد پی ای ایس 5 ایم ایچ کے ساتھ پچھلے پی ایس 5، 74 ایم ایچ ایس گیس) 2 /5 فیصد CO2 30 منٹ کے لیے۔ ان حالات میں، انکیوبیشن میڈیم میں آکسیجن کی تعداد 6.7 ± 0.5 µM تھی جیسا کہ کلارک قسم کے آکسیجن الیکٹروڈ [56,57] سے ماپا جاتا ہے۔

جب اشارہ کیا گیا تو، نیوران اسکیمک پری کنڈیشننگ (IPC؛ مختصر OGD 20 منٹ کے لیے جس کے بعد 2 h reoxygenation) کے سامنے آئے تھے اس کے بعد کے طویل عرصے تک اسکیمیا (OGD، 90 منٹ) اور 4 h reoxygenation (IPC پلس OGD/R) (شکل S1B) )۔ متوازی طور پر، 95 فیصد ہوا/5 فیصد CO2 یا اسکیمک پری کنڈیشننگ (IPC) کے مرطوب ماحول میں 37 ◦C پر نورموکسیا (Nx) میں نیوران انکیوبیٹڈ تھے۔ جب اشارہ کیا گیا تو، بفرڈ ہینکس کے محلول (پی ایچ 7.4) میں آئی پی سی سے 30 منٹ پہلے نیوران انکیوبیٹ کیے گئے تھے، ورٹ مینن (100 این ایم ایل/ ایل) کی عدم موجودگی یا موجودگی میں، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [19]۔

4.3 سیل ٹرانسفیکشنز

نیوران (8 DIV) یا HEK-293T خلیات کو MDM2 انسانی پروموٹر سے YFP-tagged Mdm2 کا اظہار کرنے والے پلازمڈ ویکٹر سے منتقل کیا گیا تھا۔ MDM2p/Mdm2-YFP Uri Alon اور Galit Lahav (Addgene plasmid # 53962, Watertown, MA, USA) کی طرف سے ایک تحفہ تھا [58]۔ ضرورت پڑنے پر، ایک خالی ویکٹر (pYFP) کو انہی حالات میں بطور کنٹرول استعمال کیا جاتا تھا۔ مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق Lipofectamine® LTX (Invitrogen، Carlsbad، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے پلازمڈ ٹرانسفیکشن کی گئی تھی۔ خلیوں کو 1.5 µg/µL پلاسمڈ ویکٹر کے ساتھ تبدیل کیا گیا تھا اور 24 گھنٹے کے بعد استعمال کیا گیا تھا۔

6 DIV نیوران میں AKT ناک ڈاؤن چھوٹے مداخلت کرنے والے ڈبل پھنسے ہوئے رائبونیوکلیوٹائڈس (siRNA) کے ساتھ منتقلی کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ ھدف بنائے گئے سلسلے حسب ذیل تھے: 50–CUCAAGUACUCAUUCCAGAtt–30، antisense: 5 0–UCUGGAAUGAGUACUUGAGgg–30 (ماؤس، s62216، نیوکلیوٹائڈس 1006–10BanM تک رسائی، G95){9} نمبر۔ منفی کنٹرول کے طور پر، ہم نے Silencer™ سلیکٹ نیگیٹیو کنٹرول نمبر 1 siRNA (siControl) کا استعمال کیا۔ تمام siRNAs Ambion®، Invitrogen®، اور Thermo Fischer Scientific (Offenbach، Germany) سے خریدے گئے تھے۔ پروٹین ناک ڈاؤن کی ڈگری کے مطابق، منتقلی کے بعد 3 دن میں siRNA کی منتقلی کی کارکردگی کا تخمینہ 70-80 فیصد تھا۔ خاموشی کے تجربات کے لیے، مینوفیکچرر کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے، Lipofectamine® RNAiMAX (Invitrogen) کا استعمال کرتے ہوئے نیوران کو siRNA (10 nM) سے تبدیل کیا گیا۔ نیوران کو ان کے استعمال سے پہلے 72 گھنٹے تک نیوروباسل میڈیم میں مزید انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔

4.4 اپوپٹوٹک سیل کی موت کا فلو سائٹومیٹرک پتہ لگانا

پی بی ایس (پی ایچ 7.4) میں 1 ایم ایم ای ڈی ٹی اے ٹیٹراسوڈیم نمک کا استعمال کرتے ہوئے نیوران کو احتیاط سے پلیٹوں سے الگ کر دیا گیا تھا اور ان کو اینیکسن V/APC اور 7-AAD سے داغ دیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا بالکل ٹھیک کیا گیا تھا [55]۔

4.5 کیسپیس-3 سرگرمی پرکھ

کیسپیس-3 سرگرمی کا اندازہ سیل لائسیٹس [33] میں اور صنعت کار کی ہدایات کے مطابق SIGMA سے Fluorimetric Assay کٹ CASP3F کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا اور 405 nm کی طول موج پر اخراج پر پڑھا گیا۔ یہ طریقہ فلوروسینٹ 7-امائنو4-میتھائل کومارین (AMC) موئیٹی کے اجراء پر مبنی ہے۔ AMC ارتکاز AMC معیار کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا جاتا ہے۔

4.6 امیونو بلوٹس اور شریک امیونوپریسیپیٹیشن پرکھ

نیوران کو بفر میں لیس کیا گیا تھا جس میں 1 فیصد SDS، 2 mM EDTA، 150 mM NaCl، 12.5 mM Na2HPO4، اور 1 فیصد Triton X-100 (NP40: 1 فیصد NP40، EDTA diK پلس 5 mM، Tris pH{{13) }} ایم ایم ، این سی ایل 135 ملی میٹر ، اور 10 فیصد گلیسٹرول) فاسفیٹیس انبیبیٹرز (1 ایم ایم این اے 3 وی او 4 اور 50 ایم ایم این اے ایف) اور پروٹیز انبیبیٹرز (100 ملی میٹر فینیلمیتھلسلسلفونیل فلورائڈ ، 50 µg/ملی لیٹر اینٹی پاپین ، 50 I اینٹی پاپین/ایم ایل پیپٹین کے ساتھ پورا کیا گیا ہے۔ µg/mL اماسٹیٹن، 50 µg/mL لیوپیپٹن، 50 µg/mL بیسٹٹین، اور 50 µg/mL سویا بین ٹرپسن انحیبیٹر)، برف پر 30 منٹ کے لیے محفوظ کیا جاتا ہے اور 5 منٹ کے لیے ابالا جاتا ہے۔ لیس شدہ عرقوں کے ایلی کوٹس کو SDS پولی کریلامائڈ جیل (MiniProtean®, Bio-Rad) کا نشانہ بنایا گیا اور راتوں رات 4 ◦C پر اینٹی باڈیز سے داغ دیا گیا۔ اینٹی باڈیز استعمال کی گئیں اینٹی AKT (9272)، اینٹی پی (Ser473) AKT (9271)، اینٹی کلیویڈ کیسپیس-3 (Asp175، 9661) (سیل سگنلنگ، ڈینورس، MA، USA)، اینٹی p53 ( 554157، BD بایو سائنسز)، اینٹی MDM2 (2A10، ab-16895)، اینٹی (Ser166)MDM2 (ab131355)، اینٹی GFP (ab290؛ YFP کا بھی پتہ لگاتا ہے) (Abcam، Cambridge، UK)، اینٹی LAMIN B (sc-374015, Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Germany) اور antiGAPDH (Ambion, Cambridge, UK) راتوں رات 4 ◦C پر۔ ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز کنجوگیٹڈ بکری اینٹی خرگوش آئی جی جی (پیئرس، تھرمو سائنٹیفک) یا بکری اینٹی ماؤس آئی جی جی (بائیو راڈ) کے ساتھ انکیوبیشن کے بعد، جھلیوں کو فوری طور پر بہتر کیمیلومینیسینس سپر سگنل ویسٹ ڈورا (پیئرس) کے ساتھ 5 منٹ پہلے تک انکیوبیشن کیا گیا۔ XAR-5 فلم 1 سے 5 منٹ تک اور آٹوریڈیوگرامس کو اسکین کیا گیا۔ امیج جے 1.48 وی سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے بینڈ کی شدت کی مقدار درست کی گئی تھی، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [60]۔

کو-امیونوپریسیپیٹیشن پرکھ کے لیے، 50 ایم ایم ٹریس (پی ایچ 7.5)، 150 ایم ایم NaCl، 2 ایم ایم ای ڈی ٹی اے، 1 فیصد NP-40) ​​پر مشتمل آئس کولڈ بفر میں نیورونز کو لیس کیا گیا تھا جو اوپر بیان کیے گئے فاسفیٹیس انحیبیٹرز کے ساتھ شامل تھے۔ سینٹرفیوگریشن کے ذریعے ملبے کو صاف کرنے کے بعد، نیورونل لائسیٹس (100 ملی گرام) کو 1 ملی گرام اینٹی باڈی کے ساتھ 24 گھنٹے کے لیے 4 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا اور اس کے بعد 10 ملی لیٹر پروٹین A-agarose (GE Healthcare Life Sciences) کو 2 گھنٹے کے لیے 4 پر شامل کیا گیا۔ ◦C امیونوپریسیپیٹیٹس کو لیسیز بفر سے بڑے پیمانے پر دھویا گیا اور SDS-PAGE کے ذریعہ حل کیا گیا اور اشارہ شدہ اینٹی باڈیز کے ساتھ امیونو بلوٹ کیا گیا [61]۔ متعلقہ پروٹین کی کثرت کو شکل S1 میں دکھایا گیا ہے۔ مکمل دھبے اور جیل اسکین شکل S3 میں شامل ہیں۔

4.7 امیونوسیٹو کیمسٹری اور تصویری تجزیہ

نیوران شیشے کے کور سلپس پر اگائے گئے تھے اور 4 فیصد (w/v، PBS میں) پیرافارمیلڈہائیڈ کے ساتھ 30 منٹ کے لیے فکس کیے گئے تھے اور خرگوش اینٹی فاسفو اے کے ٹی (Ser473؛ 9271؛ سیل سگنلنگ، MA، USA)، ماؤس اینٹی MDM2 (2A10, ab-16895), ماؤس اینٹی MAP2 (1:500; M#1406, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) [55], mouse anti p53 (1:200; 554157, BD Pharmingen , San Diego, CA, USA)، اور اینٹی GFP (1:1000؛ ab290؛ YFP کا پتہ لگانے کے لیے بھی توثیق شدہ)۔ ثانوی اینٹی باڈیز اینٹی خرگوش IgG–Cy3 یا اینٹی ماؤس IgG–Cy2 (1:500؛ جیکسن امیونو ریسرچ۔ کیمبرج، یوکے) کا استعمال کرتے ہوئے امیونو لیبلنگ کا پتہ چلا۔

نیوکلی 40،6-diamidino-2 phenylindole (DAPI؛ D9542، Sigma-Aldrich) سے داغے ہوئے تھے۔ کور سلپس کو دھویا گیا، شیشے کی سلائیڈوں پر سلو فیڈ لائٹ اینٹی فیڈ ریجنٹ (انویٹروجن) میں نصب کیا گیا، اور مائکروسکوپ (نیکون انورٹیڈ مائکروسکوپ ایکلیپس Ti-E، (NY, USA) 40× مقصد سے لیس، ایک پری سینٹرڈ فائبر الیومینیٹر Nikon Intensilight کے استعمال سے جانچا گیا۔ C-HGFI، اور ایک بلیک اینڈ وائٹ چارج کپلڈ ڈیوائس ڈیجیٹل کیمرہ Hamamatsu ORCAER یا ایک سکیننگ لیزر کنفوکل مائکروسکوپ ("اسپننگ ڈسک" روپر سائنٹیفک اولمپس IX81، ٹوکیو، جاپان) تین لیزر 405، 491، اور 561 nm کے ساتھ۔ 40×, 63×، اور 100× PL Apo آئل وسرجن مقصد سے لیس ہائی ریزولوشن امیجنگ اور ڈیوائس ڈیجیٹل کیمرہ Evolve Photometrics۔

تمام خوردبین کی ترتیبات سنترپتی کے نیچے فلوروسینٹ امیجز کو جمع کرنے کے لیے سیٹ کی گئی تھیں اور تجربے میں لی گئی تمام تصاویر کے لیے مستقل رکھی گئی تھیں۔ امیجز کا تجزیہ ImageJ 1.48v سافٹ ویئر (نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ) سے کیا گیا۔ p(Ser473)AKT پلس اور p53 پلس نیورونز کا فیصد اور p(Ser473) AKT اور p53 کی زیادہ سے زیادہ پروٹین فلوروسینس شدت کی مقدار کو شکل S2A میں دکھایا گیا ہے۔ MDM2-GFP-منتقلی نیورونز میں، MDM2-GFP کی نیوکلیو سائیٹوپلاسمک تقسیم کا شمار جوہری اوسط فلوروسینس کے تناسب کے طور پر کیا جاتا ہے اور endogenous MDM2 کے cytoplasmic اوسط فلوروسینس کے تناسب سے، 24 نیورونز (چھ نیورونز) میں ماپا جاتا ہے۔ چار مختلف نیورونل ثقافتوں میں حالت) (شکل S2B) [62]۔

اینڈوجینس MDM2 سٹیننگ اور pSer473AKT کی زیادہ سے زیادہ جوہری فلوروسینس کی شدت کو درست کرنے کے لیے، 40 نیوران (چار مختلف ثقافتوں میں 10 نیوران فی حالت) کی پیمائش کی گئی (فگر S2C)، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [44]۔ شکل 5B میں دکھائے گئے نمائندہ کراس سیکشنل شدت والے پروفائلز میں، ہر حالت کے نیچے اشارہ کردہ p(Ser473) AKT اور MDM2 کا فیصد جوہری اوسط فلوروسینس کے طور پر درست کیا گیا تھا۔ تمام معاملات میں، نیوکللی کی شناخت ڈی اے پی آئی کے داغ سے ہوئی تھی۔ wortmannin یا siAkt کے ساتھ علاج کیے جانے والے نیورانز میں زیادہ سے زیادہ جوہری MDM2 فلوروسینس کی شدت کو شکل S2D میں دکھایا گیا ہے۔

4.8 شماریاتی تجزیہ

تجرباتی نتائج کا اندازہ تغیرات کے یک طرفہ تجزیہ سے کیا گیا، اس کے بعد بونفیرونی پوسٹ ہاک ٹیسٹ، متعدد گروپوں کے درمیان اقدار کا موازنہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ نتائج کا اظہار بطور مطلب ± SEM کیا جاتا ہے۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ اقدار کے دو گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تمام صورتوں میں، p < 0۔{4}}5 کو اہم سمجھا جاتا تھا (* p <0.05 بمقابلہ Nx؛ # p<0.05 versus OGD). Statistical analyses were performed using SPSS Statistics 24.0 for Macintosh (IBM).

Cistanche نیوران کی حفاظت کیسے کرتا ہے؟

کچھ ایسے شواہد موجود ہیں جو تجویز کرتے ہیں کہ Cistanche اپوپٹوسس (پروگرام شدہ سیل ڈیتھ) کو کم کرکے اور نیورونل بقا کو فروغ دے کر نیوران کی حفاظت کرسکتا ہے۔ اپوپٹوس ایک قدرتی عمل ہے جو جسم میں خراب یا ناپسندیدہ خلیوں کو ہٹانے کے لیے ہوتا ہے، لیکن جب یہ ضرورت سے زیادہ یا نامناسب طور پر ہوتا ہے تو یہ نقصان دہ ہو سکتا ہے۔ لیبارٹری کے مطالعے میں Cistanche apoptosis کو روکنے کے لیے پایا گیا ہے، اور یہ اثر نیوران کو نقصان سے بچانے میں مدد کر سکتا ہے۔

اس کے علاوہ، Cistanche میں کئی بایو ایکٹیو مرکبات ہوتے ہیں جن کے نیورو پروٹیکٹو اثرات دکھائے گئے ہیں۔ مثال کے طور پر، اس میں echinacoside شامل ہے، جو نیوران کو آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش سے بچانے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ اس میں ایکٹیوسائیڈ بھی ہوتا ہے، جس میں سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات پائی جاتی ہیں۔

حوالہ جات

1. ایمبرسن، جے؛ Lees, KR; Lyden، P.؛ بلیک ویل، ایل۔ البرز، جی؛ بلہمکی، ای. بروٹ، ٹی. کوہن، جی؛ ڈیوس، ایس. ڈونن، جی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. شدید اسکیمک اسٹروک کے لیے الٹی پلس کے ساتھ انٹراوینس تھرومبولائسز کے اثرات پر علاج میں تاخیر، عمر، اور فالج کی شدت کا اثر: بے ترتیب ٹرائلز سے مریض کے انفرادی ڈیٹا کا میٹا تجزیہ۔ لینسیٹ 2014، 384، 1929–1935۔ [کراس ریف]

2. وانگ، ڈبلیو ڈبلیو؛ چن، ڈی زیڈ؛ زاؤ، ایم؛ یانگ، X.-F.؛ گونگ، D.-R. اسکیمک اسٹروک کے مریضوں میں پہلے عارضی اسکیمک حملوں کا نیورو پروٹیکٹو اثر ہوسکتا ہے۔ محراب میڈ. سائنس 2017، 5، 1057–1061۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. Ramos-Araque, ME; Rodriguez, C.; Vecino, R.; گارسیا، ای سی؛ الفانسو، ایم ڈی ایل؛ باربا، ایم ایس؛ Colàs-Campàs, L.; پوروائے، ایف۔ Arenillas, JF; المیڈا، اے. ET رحمہ اللہ تعالی. نیورونل اسکیمک رواداری Tp53 Arg72Pro پولیمورفزم کے ذریعہ مشروط ہے۔ ترجمہ اسٹروک ریس 2019، 10، 204-215۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

4. Iadecola, C.; انراتھر، جے اسٹروک ایک چوراہے پر تحقیق: دماغ سے ہدایات مانگنا۔ نیٹ نیوروسکی 2011، 14، 1363–1368۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. زاؤ، سی.؛ جیانگ، ایم؛ ژانگ، ایل. Hu, Y.; Hu, Z.; ژانگ، ایم؛ کیو، جے؛ Su, A.; لو، این. Xian, X.; ET رحمہ اللہ تعالی. Peroxisome proliferator-activated ریسیپٹر گاما Vivo اور in Vitro میں glial glutamate transporter 1 کے ذریعے اسکیمک پری کنڈیشننگ کے ذریعے دماغ کی اسکیمک رواداری کے حصول میں حصہ لیتا ہے۔ J. نیورو کیم۔ 2019، 151، 608–625۔ [کراس ریف]

6. Rodriguez, C.; اگولا، جے؛ ڈیلگاڈو-ایسٹیبان، ایم. دماغ کو دوبارہ مرکوز کرنا: اسکیمک چوٹ کے خلاف نیورو پروٹیکشن میں نئے نقطہ نظر۔ نیورو کیم۔ Res. 2021، 46، 51–63۔ [کراس ریف] [پب میڈ] 7. سٹینزیل پور، ایم پی؛ سٹیونز، ایس ایل؛ Xiong, Z.; Lessov, NS; ہیرنگٹن، اے سی؛ موری، ایم. میلر، آر. روزنزویگ، ایچ ایل؛ توبر، ای. شا، ای ٹی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. دماغی اسکیمیا کے جینومک ردعمل پر اسکیمک پیشگی شرط کا اثر: ہائبرنیشن اور ہائپوکسیا روادار ریاستوں میں نیورو پروٹیکٹو حکمت عملیوں سے مماثلت۔ لینسیٹ 2003، 362، 1028–1037۔ [کراس ریف]

8. گڈے، جے ایم دماغی پیشگی شرط اور اسکیمک رواداری۔ نیٹ Rev. Neurosci. 2006، 7، 437–448۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

9. سٹیلر، RA؛ لیک، آر. Gan, Y.; لی، پی. ژانگ، ایف. Hu, X.; جِنگ، زیڈ۔ چن، جے؛ زیگمنڈ، ایم جے؛ Gao, Y. پیشگی شرط CNS بیماری کے ماڈلز میں نیورو پروٹیکشن فراہم کرتی ہے: پیراڈائمز اور کلینیکل اہمیت۔ پروگرام نیوروبیول۔ 2014، 114، 58–83۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

10. کوچ، ایس. ڈیلا مورٹے، ڈی۔ ڈیو، کے آر؛ ساکو، آر ایل؛ پیریز پنزون، AM بائیو مارکر فار اسکیمک پری کنڈیشننگ: جواب دہندگان کی تلاش۔ Br جے فارماکول۔ 2014، 34، 933–941۔ [کراس ریف]

11. لا روسا، ڈی۔ فریسینا، ایم؛ سیکنڈو، اے. بگیٹا، جی؛ امانٹیا، ڈی. دماغی اسٹور سے چلنے والے کیلشیم انٹری ریگولیٹری فیکٹر (SARAF) اور پیریفرل Orai1 کی ماڈیولیشن فوکل سیریبرل اسکیمیا اور چوہوں میں پیشگی شرط کے بعد۔ نیورو سائنس 2020، 441، 8-21۔ [کراس ریف]

12. سسلی، ایم جے؛ Annunziato, L.; اسکورزیلو، A. اسکیمک پری کنڈیشننگ میں نیورو پروٹیکشن کے لیے ناول سیلولر میکانزم: آرگنیلز کے اندر سے ایک منظر۔ سامنے والا۔ نیورول. 2015، 6، 115۔ [کراس ریف]

13. دورکن، A.؛ Tatlisumak, T. پیشگی شرط سے متاثرہ اسکیمک رواداری: دماغی تحفظ کے لیے اینڈوجینس گیئرنگ میں ایک ونڈو۔ ختم ترجمہ اسٹروک میڈ۔ 2010، 2، 2۔ [کراس ریف]

14. Broughton, BR; Reutens, D.; سوبی، سی جی؛ سمز، K.؛ پولیٹی، جے؛ بنیکازیمی، ایم. لی، پی. دماغی اسکیمیا کے بعد اپوپٹوٹک میکانزم۔ اسٹروک 2009، 40، 788–794۔ [کراس ریف]

15. زاؤ، ایچ. ساپولسکی، آر ایم؛ سٹینبرگ، جی کے فاسفینوسائٹائڈ-3-کناز/اکٹ سروائیول سگنل پاتھ ویز فالج کے بعد نیورونل سروائیول میں ملوث ہیں۔ مول نیوروبیول۔ 2006، 34، 249–270۔ [کراس ریف]

16. ازڈنسکی، اسکیمک اسٹروک کے بعد پینمبرا میں اے بی اپوپٹوس ریگولیشن: پرو اور اینٹی پوپٹوٹک پروٹین کا اظہار۔ اپوپٹوس 2019، 24، 687–702۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

17. فوکوناگا، K.؛ کاوانو، ٹی اکٹ دماغی اسکیمک انسلٹ میں سگنل ٹرانسڈکشن تھراپی کے لیے ایک سالماتی ہدف ہے۔ جے فارماکول۔ سائنس 2003، 92، 317–327۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

18. زاؤ، ای وائی؛ Efendizade, A.; Cai, L.; Ding, Y. اسکیمیا – ریپرفیوژن انجری میں اکٹ (پروٹین کناز بی) اور پروٹین کناز سی کا کردار۔ نیورول. Res. 2016، 38، 301–308۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

19. Delgado-Esteban, M.; Martín-Zanca, D.; اینڈریس مارٹن، ایل۔ المیڈا، اے. بولانوس، پیروکسی نائٹریٹ کے ذریعہ PTEN کی JP روکنا فاسفینوسائٹائڈ-3-kinase/Akt نیوروپروٹیکٹو سگنلنگ پاتھ وے کو متحرک کرتا ہے۔ J. نیورو کیم۔ 2007، 102، 194-205۔ [کراس ریف]

20. میننگ، بی ڈی؛ ٹوکر، A. AKT/PKB سگنلنگ: نیٹ ورک کو نیویگیٹنگ۔ سیل 2017، 169، 381–405۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

21. ڈیز، ایچ. گیریڈو، جے جے؛ وانڈوسیل، ایف۔ اپوپٹوس میں اکٹ آئی ایس او فارمز کے مخصوص کردار اور نیوران میں ایکسن گروتھ ریگولیشن۔ PLOS ONE 2012, 7, e32715۔ [کراس ریف]

22. سانتی، SA؛ لی، ایچ دی اکٹ آئسفارمز الگ الگ ذیلی خلیاتی مقامات پر موجود ہیں۔ ایم۔ جے فزیول۔ فزیول 2010، 298، C580–C591۔ [کراس ریف]

23. یانگ، سی.؛ تالقدر، MH؛ وردھاراج، ایس. ویلیوتھم، ایم؛ Zweier، JL ابتدائی اسکیمک پیشگی شرط کے لیے serine1176 فاسفوریلیشن کے ذریعے ENOS کی اکٹ- اور PKA ثالثی ایکٹیویشن کی ضرورت ہوتی ہے۔ کارڈیواسک۔ Res. 2012، 97، 33–43۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. Ouyang, Y.-B.; ٹین، وائی. کنگھی، ایم. لیو، C.-L.؛ مارٹون، ME؛ Siesjö, BK; Hu, B.-R. عارضی دماغی اسکیمیا کے بعد بقا اور موت کو فروغ دینے والے واقعات: اکٹ کی فاسفوریلیشن، سائٹوکوم سی کی رہائی، اور کیسپیس جیسے پروٹیز کا ایکٹیویشن۔ Br جے فارماکول۔ 1999، 19، 1126–1135۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. لی، ایس. حفیظ، اے. نوراللہ، ایف۔ گینگ، ایکس۔ شاؤ، جی؛ رین، سی. لو، جی؛ زاؤ، ایچ. ڈنگ، وائی۔ جی، ایکس نیورو پروٹیکشن میں پیشگی شرط: ہائپوکسیا سے اسکیمیا تک۔ پروگرام نیوروبیول۔ 2017، 157، 79–91۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

26. میو، ایل ڈی؛ ڈونر، ڈی بی اے فاسفیٹائیڈلینوسیٹول 3-کناز/اکٹ پاتھ وے Mdm2 کی سائٹوپلازم سے نیوکلئس تک نقل مکانی کو فروغ دیتا ہے۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 2001, 98, 11598-11603. [کراس ریف]

27. ایش کرافٹ، ایم. Ludwig, RL; ووڈس، ڈی بی؛ کوپلینڈ، ٹی ڈی؛ ویبر، HO؛ میکرا، ای جے؛ ووسڈن، ایچ ڈی ایم 2 کا KH فاسفوریلیشن از اکٹ۔ اونکوجین 2002، 21، 1955–1962۔ [کراس ریف]

28. چاؤ، بی پی؛ لیاو، جے؛ Xia, W. HER-2/neu اکٹ کی ثالثی MDM2 فاسفوریلیشن کے ذریعے p53 کو ہر جگہ پر اکساتی ہے۔ نیٹ سیل بائیول۔ 2001، 3، 973–982۔ [کراس ریف]

29. گراسمین، ایس آر؛ پیریز، ایم؛ کنگ، اے ایل؛ جوزف، ایم. منصور، سی. Xiao, Z.-X.; کمار، ایس. ہولی، پی. لیونگسٹن، DM p300/MDM2 کمپلیکس MDM2-ثالثی p53 انحطاط میں حصہ لیتے ہیں۔ مول سیل 1998، 2، 405–415۔ [کراس ریف]

30. Toth، A.؛ نکسن، پی. کن، ایل ایل؛ ایرہارڈٹ، P. کارڈیو مایوسائٹ بقا اور ہائپر ٹرافی کا امتیازی ضابطہ MDM2، ایک E3 Ubiquitin Ligase۔ J. Biol کیم 2006، 281، 3679–3689۔ [کراس ریف]

31. Hausenloy, DJ; سانگ، اے. Mocanu, MM; ییلون، ڈی ایم اسکیمک پری کنڈیشننگ ریپرفیوژن پر پروسرائیول کنیز کو چالو کرکے حفاظت کرتا ہے۔ ایم۔ جے فزیول۔ سرک فزیول 2005، 288، H971–H976۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

32. Mocanu, MM; ییلون، ڈی ایم p53 ڈاؤن ریگولیشن: اسکیمک پیشگی شرط میں شامل ایک نیا مالیکیولر میکانزم۔ FEBS Lett. 2003، 555، 302–306۔ [کراس ریف]

33. ویکینو، آر. Burguete, MC; Jover-Mengual, T.; اگولا، جے؛ Bobo-Jiménez, V.; سلوم، جے بی؛ المیڈا، اے. Delgado-Esteban, M. The MDM2-p53 پاتھ وے اسکیمیا کے لیے پیشگی شرط پر مبنی نیورونل رواداری میں شامل ہے۔ سائنس Rep. 2018, 8, 1610. [CrossRef] [PubMed]

34. Rodriguez, C.; Ramos-Araque, M.E.; Domínguez-Martínez, M.; Sobrino, T.; Sánchez-Morán, I.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M.; Gómez-Sánchez, J.C.; Bolaños, J.P.; Castillo, J.; et al. Single-Nucleotide Polymorphism 309T>MDM2 پروموٹر میں G فالج کے بعد فنکشنل نتیجہ کا تعین کرتا ہے۔ اسٹروک 2018، 49، 2437–2444۔ [کراس ریف]

35. فینگ، جے؛ پارک، جے؛ کرون، پی. ہیس، ڈی. ہیمنگس، BA کی شناخت PKB/Akt ہائیڈرو فوبک موٹف سیر-473 کناز بطور ڈی این اے پر منحصر پروٹین کناز۔ J. Biol کیم 2004، 279، 41189–41196۔ [کراس ریف]

36. لائی، ٹی ڈبلیو؛ Zhang, S.; وانگ، YT Excitotoxicity اور فالج: نیورو پروٹیکشن کے لیے نئے اہداف کی نشاندہی کرنا۔ پروگرام نیوروبیول۔ 2014، 115، 157–188۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

37. کانسٹینٹینو، ایل سی؛ بائنڈر، ایل بی؛ وانڈریسن-فلہو، ایس. وایولا، جی جی؛ لڈکا، ایف کے؛ لوپس، میگاواٹ؛ لیل، آر بی؛ Tasca، NMDA پری کنڈیشننگ میں فاسفیٹائیڈیلینوسیٹول-3 کناز پاتھ وے کا CI کردار: کوئنولینک ایسڈ کے ذریعے دوروں اور ہپپوکیمپل نیورونل انحطاط کے لیے مختلف میکانزم۔ نیوروٹوکس۔ Res. 2018، 34، 452–462۔ [کراس ریف]

38. غذائی، آر. چینگ، ایم. لی، ایم؛ Xiong, X.; دادی، ایم. ساپولسکی، آر ایم؛ Zhao, H. Akt Isoforms mTOR کی سرگرمیوں کو ریگولیٹ کرکے سٹروک سے متاثرہ نیورونل انجری کے خلاف فرق سے تحفظ فراہم کرتا ہے۔ Br جے فارماکول۔ 2013، 33، 1875–1885۔ [کراس ریف]

39. سوریانو، ایف ایکس؛ پاپاڈیا، ایس. Hofmann, F.; ہارڈنگھم، NR؛ بیڈنگ، ایچ. ہارڈنگھم، این ایم ڈی اے کی جی ای پری کنڈیشننگ خوراکیں نیورونل اتیجیت کو بڑھا کر نیورو پروٹیکشن کو فروغ دیتی ہیں۔ J. Neurosci. 2006، 26، 4509–4518۔ [کراس ریف]

40. گراب، ایم سی؛ چوئی، ڈی ڈبلیو اسکیمک ٹولرینس ان مورین کورٹیکل سیل کلچر: کریٹیکل رول فار این ایم ڈی اے ریسیپٹرز۔ J. Neurosci. 1999، 19، 1657–1662۔ [کراس ریف]

41. چن، ایم. Lu, T.-J.; چن، X.-J.؛ Zhou, Y.; چن، Q. فینگ، X.-Y.؛ Xu, L.; Duan, W.-H.; Xiong، Z.-Q. اسکیمک نیورونل سیل کی موت اور اسکیمک رواداری میں NMDA ریسیپٹر ذیلی قسموں کے مختلف کردار۔ اسٹروک 2008، 39، 3042–3048۔ [کراس ریف]

42. Gomez-Sanchez, JC; Esteban, MD; Rodriguez-Hernandez, I.; سوبرینو، ٹی. ڈی لا اوسا، این پی؛ Reverte, S.; بولانوس، جے پی؛ گونزالیزسرمینٹو، آر. Castillo, J.; المیڈا، A. انسانی Tp53 Arg72Pro پولیمورفزم فالج میں مختلف فنکشنل تشخیص کی وضاحت کرتا ہے۔ J. Exp. میڈ. 2011، 208، 429–437۔ [کراس ریف]

43. سو، ڈبلیو. گاو، ایل. لی، ٹی. زینگ، جے؛ شاؤ، اے. Zhang, J. Mesencephalic Astrocyte-derived Neurotrophic Factor (MANF) Intracerebral Hemorrhage کے چوہے کے ماڈل میں Akt/MDM2/p53 سگنلنگ پاتھ وے کے ایکٹیویشن کے ذریعے نیورونل اپوپٹوس کے خلاف حفاظت کرتا ہے۔ سامنے والا۔ مول نیوروسکی 2018، 11، 176۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

44. سانچیز-موران، I.؛ Rodríguez, C.; لاپریسا، آر. اگولا، جے؛ سوبرینو، ٹی. Castillo, J.; بولانوس، جے پی؛ المیڈا، A. نیوکلیئر WRAP53 فالج کے بعد اعصابی بقا اور فعال بحالی کو فروغ دیتا ہے۔ سائنس Adv. 2020، 6، eabc5702۔ [کراس ریف]

45. برمسٹرووا، او. اولیاس-ارجونا، اے. لاپریسا، آر. Jimenez-Blasco, D.; Eremeeva, T.; شیشوف، ڈی. رومانوف، ایس. Zakurdaeva، K.؛ المیڈا، اے. Fedichev, PO; ET رحمہ اللہ تعالی. PFKFB3 کو نشانہ بنانا چوہوں میں دماغی اسکیمیا-ریپرفیوژن چوٹ کو کم کرتا ہے۔ سائنس نمائندہ 2019، 9، 1-13۔ [کراس ریف]

46. ​​Tu, Y.; کم، ای. گاو، وائی؛ رینکن، GO؛ لی، بی؛ Chen, YC Theaflavin-3, 30 -gallate apoptosis اور G2 سیل سائیکل گرفتاری کو اکٹ/MDM2/p53 راستے کے ذریعے سسپلٹین مزاحم ڈمبگرنتی کینسر A2780/CP70 خلیوں میں اکساتی ہے۔ انٹر جے اونکول۔ 2016، 48، 2657–2665۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

47. وان، ڈبلیو. Hou, Y.; وانگ، کے؛ چینگ، وائی؛ Pu, X.; ہاں، X۔ LXR-623-کی حوصلہ افزائی طویل نان کوڈنگ RNA LINC01125 PTEN/AKT/p53 سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے چھاتی کے کینسر کے خلیوں کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔ سیل ڈیتھ ڈس۔ 2019، 10، 248۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

48. تاؤ، جے؛ Cui, Y.; Duan, Y.; ژانگ، این. وانگ، سی. Zhang, F. Puerarin PI3K/Akt1/GSK-3 دماغی اسکیمیا کے ان ویوو ماڈل میں سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے لوکوموٹر اور علمی خسارے کے ساتھ ساتھ ہپپوکیمپل نیورونل چوٹ کو کم کرتا ہے۔ Oncotarget 2017, 8, 106283–106295۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

49. Janelidze, S.; Hu, B.-R.; Siesjö، P.؛ عارضی فوکل اسکیمیا میں Siesjö، BK Alterations of Akt1 (PKB) اور p70S6K۔ نیوروبیول۔ ڈس 2001، 8، 147–154۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

50. Pignataro, G.; بوسیا، ایف. Esposito, E.; سیرابیلا، آر. کوومو، او۔ Vinciguerra, A.; ڈی رینزو، جی؛ Annunziato، L. NCX1، اور NCX3: برین اسکیمیا میں تاخیر سے پیشگی شرط کے دو نئے اثرات۔ نیوروبیول۔ ڈس 2012، 45، 616–623۔ [کراس ریف]

51. لی، جے؛ کروکاوا، ایم ڈی این اے کے نقصان کے بعد MDM2 استحکام کا ضابطہ۔ جے سیل فزیول 2015، 230، 2318–2327۔ [کراس ریف]

52. اولسن، ڈی سی؛ مریچل، وی. مومند، جے۔ چن، جے؛ روموکی، سی. لیون، اے جے ایک سے زیادہ mdm-2 پروٹین اور mdm-2-p53 پروٹین کمپلیکس کی شناخت اور خصوصیات۔ اونکوجین 1993، 8، 2353–2360۔ [پب میڈ]

53. اورنگا، RM؛ Katz, S.; Salvador, GA Enhanced Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt سگنلنگ میں ہپپوکیمپل نیورونز میں پلییوٹروپک اہداف ہیں جو آئرن سے متاثرہ آکسیڈیٹیو تناؤ کا شکار ہیں۔ J. Biol کیم 2013، 288، 19773–19784۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

54. المیڈا، اے. سانچیز-موران، I.؛ Rodríguez، C. Mitochondrial – نیوکلیئر p53 اسمگلنگ فالج میں نیورونل حساسیت کو کنٹرول کرتی ہے۔ IUBMB لائف 2021، 73، 582–591۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

55. Delgado-Esteban, M.; گارسیا-ہیگویرا، I.؛ Maestre, C.; مورینو، ایس. المیڈا، A. APC/C-Cdh1 نشوونما کے دوران نیوروجنسیس اور کارٹیکل سائز کو مربوط کرتا ہے۔ نیٹ کمیون 2013، 4، 2879۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

56. کانسٹینٹینو، ایل سی پری اور پوسٹ کنڈیشننگ کے ذریعے دماغی مزاحمت کی نشوونما میں NMDA ریسیپٹرز کا کردار۔ عمر رسیدہ Dis. 2014، 5، 430–441۔ [کراس ریف]

57. المیڈا، اے. Esteban, MD; بولانوس، جے پی؛ مدینہ، جے ایم آکسیجن اور گلوکوز کی کمی نیورونز میں مائٹوکونڈریل ڈیسفکشن اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو جنم دیتی ہے لیکن پرائمری کلچر میں ایسٹروائٹس میں نہیں۔ J. نیورو کیم۔ 2002، 81، 207–217۔ [کراس ریف]

58. لہو، جی. روزن فیلڈ، این۔ سگل، اے. Geva-Zatorsky، N.؛ لیون، اے جے؛ ایلووٹز، ایم بی؛ ایلون، انفرادی خلیات میں p53-Mdm2 فیڈ بیک لوپ کی U. ڈائنامکس۔ نیٹ جینیٹ 2004، 36، 147–150۔ [کراس ریف]

59. لی، جے؛ کراپلیس، اے سی؛ ہوانگ، ڈی سی؛ سیگل، پی ایم؛ کیمیرینڈ، اے. یانگ، ایکس ایف؛ مولر، ڈبلیو جے؛ کریمر، R. PTHrP چوہوں میں چھاتی کے ٹیومر کی شروعات، ترقی، اور میٹاسٹیسیس کو چلاتا ہے اور یہ ایک ممکنہ علاج کا ہدف ہے۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 2011، 121، 4655–4669۔ [کراس ریف]

60. Maestre, C.; Esteban, MD; Gomez-Sanchez, JC; بولانوس، جے پی؛ المیڈا، اے سی ڈی کے 5 فاسفوریلیٹس سی ڈی ایچ 1 اور سائکلن بی 1 کے استحکام کو اکسیٹوٹوکسٹی میں ماڈیول کرتا ہے۔ ای ایم بی او جے 2008، 27، 2736–2745۔ [کراس ریف]

61. ڈی ٹوڈیلا، MV-P. Esteban, MD; Maestre, C.; Bobo-Jiménez, V.; جمینیز-بلاسکو، ڈی۔ Vecino, R.; بولانوس، جے پی؛ المیڈا، A. Mitochondrial Cyclin B1-Cyclin-dependent Kinase-1 کی طرف سے Bcl-xL-ATP سنتھیز کے تعامل کا ضابطہ نیورونل بقا کا تعین کرتا ہے۔ J. Neurosci. 2015، 35، 9287–9301۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

62. Bobo-Jiménez, V.; Esteban, MD; Angibaud, J.; سانچیز-موران، I.؛ de la Fuente, A.; یاجیا، جے؛ Nägerl، UV؛ Castillo, J.; بولانوس، جے پی؛ المیڈا، A. APC/CCdh1-Rock2 پاتھ وے ڈینڈریٹک سالمیت اور میموری کو کنٹرول کرتا ہے۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 2017, 114, 4513–4518. [کراس ریف] [پب میڈ]