اینٹی آکسیڈینٹ سپیکٹرم-اثر تعلقات پر مبنی Cistanches Herba کے معیار کے نشانات

خلاصہ

مقصد: کوالٹی مارکر (Q-markers) کے لیے تحقیق کا طریقہ قائم کرناCistanches Herba(CH) کی بنیاد پراینٹی آکسیڈینٹ سپیکٹرم اثر رشتہاس کے فارماسولوجیکل مادوں اور کوالٹی کنٹرول کے مطالعہ کے لیے ایک بنیاد فراہم کرتا ہے۔ طریقے: الٹرا ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (UPLC) کا استعمال CH کے 10 بیچوں کے لیے فنگر پرنٹ پروفائلز قائم کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ H2O2 کا استعمال کرتے ہوئے ایک سیل آکسیڈیٹیو نقصان کا ماڈل قائم کیا گیا تھا، اور CH کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا تعین ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کے نصف زیادہ سے زیادہ روکنے والے ارتکاز کے ساتھ ساتھ فارماسولوجیکل انڈیکیٹرز کے طور پر سپر آکسائیڈسمیوٹیز اور کیٹالیس کی سطحوں کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ سپیکٹرم-اثر تعلقات کو پرنسپل جزو تجزیہ، پیئرسن ارتباط تجزیہ، اور جزوی کم از کم مربع ریگریشن تجزیہ کے ذریعے بنایا گیا تھا۔ فعال اجزاء فارماسولوجیکل توثیق کے تابع تھے۔ نتائج: CH کے لیے فنگر پرنٹ پروفائلز UPLC کا استعمال کرتے ہوئے، 17 عام چوٹیوں کی نشاندہی کرتے ہوئے قائم کیے گئے تھے۔ سپیکٹرم-اثر ارتباط کے تجزیہ کی بنیاد پر، نو اجزاء کا انتخاب کیا گیا تھا۔ فارماسولوجیکل توثیق کے نتائج نے اشارہ کیا کہ جینیپوسیڈک ایسڈ، 8-ایپیلوگینک ایسڈ،echinacoside, ایکٹیوسائیڈ,isoacteoside، اورtubuloside Aحراستی پر منحصر انداز میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی نمائش کی۔ نتیجہ: اس مطالعہ نے اسپیکٹرم-اثر تعلقات کی بنیاد پر CH کے لیے Q-مارکر کی کھوج کی، اس کے فارماسولوجیکل مادہ کی بنیاد اور معیار کے معیار میں بہتری کے حوالے سے معلومات فراہم کی۔

مطلوبہ الفاظ:Cistanches ہرba; کیو مارکر؛سپیکٹرم اثر رشتہ; اینٹی آکسیڈینٹ

گردے کے کام کے لیے 30% ایکیناکوسائیڈ اور 12% ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ آرگینک سیسٹینچ ایکسٹریکٹ

Cistancheیہ خشک مانسل تنا ہے جس میں Cistanche deserticola YCMa یا Cistanche tubulosa (Schenk) Wight کے کھردرے پتوں کے ساتھ ایک پودا ہے جو Orobanchiaceae خاندان کے Cistanche کی نسل سے تعلق رکھتا ہے۔ یہ سب سے پہلے "شین نونگز میٹیریا میڈیکا" میں درج کیا گیا تھا اور اسے اعلی درجے کے طور پر درج کیا گیا ہے [1]۔ یہ فطرت میں گرم، ذائقہ میں میٹھا اور نمکین ہے۔ یہ گردے اور بڑی آنت کے میریڈیئنز میں واپس آجاتا ہے۔ اس میں گردے یانگ کی پرورش، جوہر اور خون کو بھرنے، آنتوں کو گیلا کرنے اور جلاب کے اثرات ہیں، اور یہ گردے کو ٹونیفائی کرنے اور جوہر کو بھرنے کے لیے ایک اہم دوا ہے [2-3]۔ گردے جوہر کو ذخیرہ کرتے ہیں، اور جوہر اور خون ایک ہی ذریعہ سے آتے ہیں۔ اگر جوہر اور خون کی کمی ہو تو اس سے انسانی جسم کی مجموعی زندگی کی سرگرمیاں متاثر ہوں گی۔ جوہر پیدا کرنے والا میرو ہڈیوں میں محفوظ ہوتا ہے، اور دماغ میرو سمندر ہے۔ اگر گردے کا جوہر ناکافی ہو تو ہڈیاں اپنی غذائیت سے محروم ہو جائیں گی اور دماغ کی کمی ہو جائے گی، جس کے نتیجے میں ہڈیوں کی انحطاطی تبدیلیاں جیسے ڈھیلی ساخت، دانتوں کا گرنا، یادداشت کی کمی، ڈیمنشیا، اور قوت مدافعت میں کمی [4-6]۔ Cistanche deserticola میں phenylethanol glycosides، iridoids، lignans اور دیگر ساختی اجزاء شامل ہیں، بشمول echinaceaside، verbascoside، isorbascoside، genipinic acid، اور 8-epistryanic acid۔ ، tubulin A، وغیرہ [7]. "Pharmacopoeia of the People's Republic of China" کے 2020 ایڈیشن میں Cistanche deserticola کا موجودہ کوالٹی کنٹرول صرف echinaceaside اور verbascoside کے مواد کو متعین کرتا ہے، جو روایتی چینی ادویات کی کثیر اجزاء اور کثیر ہدفی کارروائی کی خصوصیات کی مکمل عکاسی نہیں کر سکتا۔ ، جو اس کے کوالٹی کنٹرول اور تشخیص کے لیے سازگار نہیں ہے۔

روایتی چینی ادویات کی کوالٹی کنٹرول کی سطح کو بہتر بنانے اور روایتی چینی ادویات کے معیار کی جانچ کو بہتر بنانے کے لیے ماہر تعلیم لیو چانگ شیاؤ نے روایتی چینی ادویات کے معیار کے نشان (Q-marker) کا نیا تصور پیش کیا [8]۔ ان میں، "تاثریت" Q-marker کے "پانچ اصولوں" میں بنیادی عنصر ہے [9] اور یہ روایتی چینی ادویات کے معیار کی جانچ کا بنیادی عنصر بھی ہے۔

معیار کے معیارات اور ادویات کی افادیت کے درمیان خراب ارتباط کی موجودہ تحقیقی حیثیت کے پیش نظر، روایتی چینی ادویات کے Q-markers کی تلاش اور مزید سائنسی اور معقول معیار کے معیارات قائم کرنا روایتی چینی ادویات کے معیار کو بہتر بنانے کے لیے بہت اہمیت کا حامل ہے۔ سپیکٹرم اثر کا تعلق روایتی چینی ادویات کے فنگر پرنٹ کرومیٹوگرافک چوٹیوں کو مخصوص فارماکوڈینامک ڈیٹا کے ساتھ جوڑنا ہے تاکہ روایتی چینی ادویات کے موثر مادوں کو تلاش کیا جا سکے، اس طرح روایتی چینی ادویات کے موروثی معیار کی عکاسی ہوتی ہے [10]۔ اسپیکٹرل ایفیشینسی ریاضیاتی ماڈل کا قیام روایتی چینی ادویات کے QMarker کو "مکمل نظریہ" کے نقطہ نظر سے واضح کر سکتا ہے، جو روایتی چینی ادویات کے بعد کے معیار کے کنٹرول، معیار کے معیارات کی تشکیل اور فعال اجزاء کی اسکریننگ کے لیے مزید حوالہ فراہم کرتا ہے۔ یہ مطالعہ روایتی چینی ادویات کے سپیکٹرم-اثر تعلق کا مطالعہ کرنے کے لیے ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS IC50) کی نصف روک تھام کی شرح کے ساتھ مل کر فنگر پرنٹس کا استعمال کرتا ہے، سوپر آکسائیڈ ڈسموٹیز (SOD) اور کیٹالیس (CAT) کے مواد کا استعمال کرتا ہے، اور پرنسپل اجزاء کے تجزیہ کا استعمال کرتا ہے۔ Cistanche deserticola کے Q-marker کا جامع تجزیہ کرنے کے لیے اس کے کوالٹی کنٹرول کے لیے بنیاد فراہم کرنے کے لیے (PCA) )، Pearson correlation analysis (PCC) اور جزوی کم از کم اسکوائر ریگریشن تجزیہ (PLS)۔

1 مواد

1.1 نمونہ

Cistanche deserticolaیوٹیان کاؤنٹی، سنکیانگ اور اندرونی منگولیا میں سیستانچے ڈیزرٹیکولا گڈ ایگریکلچر پریکٹس (جی اے پی) پودے لگانے کے اڈے سے کاٹا گیا تھا۔ اس کی شناخت تیانجن فارماسیوٹیکل ریسرچ انسٹی ٹیوٹ کمپنی لمیٹڈ کے محقق ژانگ ٹائیجن نے Cistanche tubulosa (Schenk) Wight اور Cistanche deserticola کے طور پر کی۔

YC Ma، تفصیلی معلومات جدول 1 میں دکھائی گئی ہیں۔

1.2 ٹیسٹ دوائی

Echinaceaside (بیچ نمبر: 111670-201907، purity: 91.8%) اور verbascoside (بیچ نمبر: 111530-201914، پاکیزگی: 95.2%) دونوں چائنا انسٹی ٹیوٹ آف فوڈ اینڈ ڈرگ کنٹرول سے خریدے گئے تھے۔ isorescoside (بیچ نمبر: 61303-13 -7)، salidroside (بیچ نمبر: 10338-51-9)، 8-epistrychnoic acid (بیچ نمبر: 82509-41-9)، genipinic acid (بیچ نمبر: Z24A10X95926) , tuberosin B (بیچ نمبر: 112516-04-08)، 2-acetyl eugenol glycoside (Bach number: 94492-24-7) شنگھائی یوآنی بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدا گیا تھا، اس سے زیادہ یا اس کے برابر پاکیزگی 98% Cistanche glycoside A (بیچ نمبر: MUST -20062806، طہارت: 98.51%) اور vasculin A (بیچ نمبر: MUST19110102، طہارت: 98.57%) Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd. سے خریدے گئے تھے۔ chromatographically خالص acetonitrile اور formic acid Tianjin Concord Technology Co., Ltd. کمپنی سے خریدے گئے تھے۔ پیوریفائیڈ واٹر (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.) وٹامن ای (VE، V8010، بیجنگ سولاربیو کمپنی)؛

ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO, D2660-100ML, Sigma Company, USA); CellTiter 96® ایکوئس سنگل سلوشن سیل کے پھیلاؤ کا پتہ لگانے والی کٹ (G3580, Promega Company, USA); CAT ڈیٹیکشن کٹ (S0051)، SOD ایکٹیویٹی ڈیٹیکشن کٹ S0101M ) اور ROS ڈیٹیکشن کٹ (S0033S) شنگھائی بائیونٹیان بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھیں۔

1.3 آلات

واٹرس ایچ کلاس-PDA انتہائی اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگراف (واٹر کمپنی، USA)؛ سارٹوریئس بی ٹی 25 ایس الیکٹرانک بیلنس (سارٹوریئس کمپنی، جرمنی)؛ H1650 تیز رفتار ڈیسک ٹاپ سینٹری فیوج (Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.)؛ سپیکٹرا میکس M5

مائیکرو پلیٹ ریڈر (میگو مالیکیولر انسٹرومنٹ کمپنی لمیٹڈ)؛ WYS-41XDY حیاتیاتی مائیکروسکوپ (Tianjin Micro-Instrument Optical Instrument Co., Ltd.)۔

1.4 خلیات

اس تجربے میں انسانی برانن گردے کے خلیات HEK 293 خلیات استعمال کیے گئے اور چینی اکیڈمی آف سائنسز کے سیل بینک سے خریدے گئے۔

2 طریقے

2.1 فنگر پرنٹ میپ کا قیام

2.1.1 ٹیسٹ سلوشن کی تیاری: Cistanche deserticola میڈیسنیل مواد کا 2 گرام وزن، پانی کی مقدار کا 10 گنا، حرارت اور ریفلکس 3 بار، ہر بار 1 گھنٹہ، 1 پر سینٹری فیوج۔{16}} ×105r·min-1 15 منٹ کے لیے (سینٹری فیوگل رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹس کو یکجا کریں اور 100 mg·mL-1 کے بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ اسٹاک سلوشن بنانے کے لیے توجہ مرکوز کریں، اسے 10 بار پتلا کریں، اور اسے حاصل کرنے کے لیے اسے 0.22 µm مائکرو پورس فلٹر جھلی کے ذریعے فلٹر کریں۔

2.1.2 مخلوط حوالہ حل کی تیاری

ایپسٹریچنک ایسڈ، سیلڈرو سائیڈ، ایچائناسائیڈ، سیستانچے گلائکوسائیڈ اے، جینیپینک ایسڈ، ورباسکوسائیڈ، اینتھوسیانوسائیڈ اے، اسورباسکوسائیڈ، اور 2'-ایسٹیل یوجینول لیں۔ Glycoside اور angioside B حوالہ مادہ کو مناسب مقدار میں ناپا گیا اور درست وزن کیا گیا۔ تحلیل کرنے کے لیے 50% میتھانول محلول شامل کریں اور 20 µg·mL–1 کی بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ ایک مخلوط حوالہ جات کا محلول تیار کریں۔

2.1.3 کرومیٹوگرافک حالات

ACQUITY UPLC®BEH C18 کالم (100 ملی میٹر × 2.1 ملی میٹر، 1.7 µm)؛ موبائل مرحلہ acetonitrile (A) ~ 0.1% فارمک ایسڈ محلول (B)، گریڈینٹ ایلیوشن پروگرام (0 ~ 6 منٹ، 5% ~ 8% A؛ 6~10 منٹ، 8%~15%A ہے 10~13 منٹ، 15%~19%A، 13~20 منٹ، 19%~25%A) پتہ لگانے کی طول موج 237 این ایم ہے؛ بہاؤ کی شرح 0.4 mL·min -1 ہے؛ کالم کا درجہ حرارت 40 ڈگری ہے؛ انجیکشن کا حجم 3 µL ہے۔

2.1.4 حوالہ چوٹی کا انتخاب

Cistanche deserticola کے الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (UPLC) کرومیٹوگرام میں، چوٹی کے سب سے بڑے رقبے کے تناسب، معتدل برقرار رکھنے کا وقت اور اچھی علیحدگی والی چوٹی کو فنگر پرنٹ اسپیکٹرم کی حوالہ چوٹی کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔

2.1.5 طریقہ کار کا جائزہ

درستگی ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کے مطابق ٹیسٹ حل تیار کریں۔ نمونے کو مسلسل 6 بار انجیکشن کریں اور فنگر پرنٹ ریکارڈ کریں۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ہر چوٹی کا رشتہ دار چوٹی کا علاقہ RSD ہے 0.10%~4.61%، اور رشتہ دار برقرار رکھنے کا وقت RSD ہے یہ 0.08%~1.32% ہے، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ آلہ اچھا ہے صحت سے متعلق

ریپیٹیبلٹی ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کار کے مطابق متوازی طور پر ٹیسٹ سلوشن کے 6 نمونے تیار کریں، اور نمونے کو مسلسل انجیکشن لگائیں۔ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کا رشتہ دار چوٹی کا رقبہ RSD 1.35%~4.80% ہے، اور رشتہ دار برقرار رکھنے کا وقت RSD 0.10%~1.80% ہے، جو فنگر پرنٹ کی ضروریات کو پورا کرتا ہے اور ظاہر کرتا ہے کہ دہرانے کی صلاحیت آلہ اچھا ہے.

استحکام ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کار کے مطابق ٹیسٹ سلوشن تیار کریں، 0، 2، 4، 8، اور 12 گھنٹے میں ٹیسٹنگ کے لیے نمونے لگائیں، اور فنگر پرنٹ ریکارڈ کریں۔ ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کے رشتہ دار چوٹی کے علاقے کا حساب کیا گیا RSD ہے 0.53%~4.82%، اور متعلقہ برقرار رکھنے کے وقت کا RSD ہے 0.09%~2.17%، جو کہ ضروریات کو پورا کرتا ہے۔ فنگر پرنٹ اور اشارہ کرتا ہے کہ ٹیسٹ پروڈکٹ 12 گھنٹے کے اندر مستحکم ہے۔

2.2 Cistanche deserticola کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر پر تحقیق

2.2.1 Cistanche deserticola مادر شراب کی تیاری

مادری شراب کو آئٹم 2.1.1 کے نیچے لیں، اسے فلٹر کریں اور جراثیم سے پاک کریں، اور استعمال سے پہلے اسے کلچر میڈیم سے مطلوبہ ارتکاز تک پتلا کریں۔

2.2.2 Cistanche deserticola اور مثبت کنٹرول

HEK 293 خلیوں کی عملداری پر VE کا اثر نارمل گروپ (سیل معطلی)، Cistanche deserticola ایڈمنسٹریشن گروپ (25, 50, 100, 200, 400 µg·mL–1)، VE گروپ (20, 40, 60) کے طور پر مقرر کیا گیا تھا۔ , 80, 100 µmol·L–1)، ہر ارتکاز کے لیے 6 ڈپلیکیٹ کنویں سیٹ کریں، 24 گھنٹے کے لیے کلچر، سیل کی قابل عملیت کا پتہ لگانے کے لیے ہر کنویں میں 20 µL CellTiter 96® AQueous سنگل سلوشن ریجنٹ شامل کریں، 2 گھنٹے تک کلچر جاری رکھیں، اور 490 nm پر سیل کی قابل عملیت کا پتہ لگانے کے لیے مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کریں فارمولے (1) کے مطابق سیل کی بقا کی شرح کا حساب لگانے کے لیے ہر کنویں کی جاذبیت (OD) ویلیو کا استعمال کیا گیا تھا۔ بقا کی شرح (%)=(OD تجرباتی گروپ/OD خالی گروپ) × 100% (1)

2.2.3 H2O2 انڈکشن پر Cistanche deserticola

HEK 293 خلیوں پر ROS کا اثر۔ خلیات کو نارمل گروپ (سیل معطلی) اور Cistanche deserticola ایڈمنسٹریشن گروپ (6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg·mL–1 Cistanche deserticola اور 60 µm·L–1 H2O2) میں تقسیم کیا گیا تھا، اور 24 گھنٹے کو کلچر کیا گیا تھا۔ بعد کے آپریشنز کے لیے ROS ڈیٹیکشن کٹ کے مراحل پر عمل کریں، براہ راست ایک خوردبین کے ذریعے سیل کے داغ کا مشاہدہ کریں، اور ہر گروپ کی فلوروسینس کی شدت کا پتہ لگانے کے لیے مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کریں۔ پیرامیٹر کی ترتیبات میں 488 nm کی ایک جوش طول موج اور 525 nm کی اخراج طول موج کا استعمال کیا گیا۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

2.2.4 Cistanche deserticola جوڑا

HEK 293 خلیوں میں SOD پر H2O2 کا اثر۔ خلیوں کو نارمل گروپ (سیل معطلی)، ماڈل گروپ (60 µm·L–1 H2O2)، VE گروپ (60 µm·L–1 VE اور 60 µm·L–1 H2O2)، Cistanche deserticola انتظامیہ گروپ (100) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ µg·mL–1 Cistanche deserticola اور 60 µm·L–1 H2O2)، کلچر کے 24 گھنٹے بعد خلیات کو جمع کریں، خلیات کو لیس کرنے کے لیے SOD نمونے کی تیاری کا حل شامل کریں، اور 4 ڈگری اور 12000 r·min پر سینٹری فیوج کریں{{22} } منٹ (سینٹری فیوگریشن کا رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹ کو بطور نمونہ لیں جس کی جانچ کی جائے، اور بعد کے آپریشنز کے لیے SOD ڈیٹیکشن کٹ کے مراحل پر عمل کریں۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

H2O2 انڈکشن پر 2.2.5 Cistanche deserticola

HEK 293 خلیوں پر CAT کے اثرات کا علاج طریقہ کے مطابق 2.2.4 میں کیا گیا اور گروپوں میں تقسیم کیا گیا۔ علاج کے بعد، لیسز سلوشن شامل کریں، 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری اور 12000 r·min-1 پر سینٹری فیوج کریں (سینٹری فیوگل رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹ لیں، اور بعد کے آپریشنز کے لیے CAT ڈیٹیکشن کٹ کے مراحل پر عمل کریں۔ . تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

2.2.6 شماریاتی تجزیہ

SPSS 26۔{1}} سافٹ ویئر شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کے ہر گروپ کی نمائندگی (±±() کے ذریعے کی گئی تھی۔ تغیرات کا یک طرفہ تجزیہ اس ڈیٹا پر کیا گیا جو عام تقسیم کے مطابق تھا۔ اگر تغیرات برابر تھے، تو کم سے کم اہم فرق کا طریقہ استعمال کیا گیا تھا۔ اگر تغیرات تھے ناہموار، ڈنیٹ کا T3 طریقہ گراف پیڈ پرزم 8 استعمال کیا گیا تھا، اور P<0.05 was considered as a statistically significant difference.

2.3 Cistanche deserticola antioxidant کا سپیکٹرم اثر ارتباط کا تجزیہ

2.3.1 PCA Cistanche deserticola کے 10 بیچوں کی مشترکہ چوٹیوں کے چوٹی کے علاقے جنہوں نے فنگر پرنٹس قائم کیے ہیں انہیں Z ویلیو سے نارمل کیا گیا، اور 10×17 آرڈر ڈیٹا میٹرکس میں بنایا گیا، جسے SPSS 26.0 سافٹ ویئر میں درآمد کیا گیا تھا۔ پی سی اے کے لیے۔

2.3.2 پی سی سی

SPSS 26۔ اہمیت کی جانچ پی کے ساتھ دو طرفہ ٹیسٹ (T) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔<0.05 as the standard for statistically significant differences.

2.3.3 پی ایل ایس

Cistanche deserticola کے معیاری چوٹی کے علاقے اور اینٹی آکسیڈنٹ کے تجرباتی نتائج کو SIMCA-P 14.1 سافٹ ویئر میں درآمد کریں، چوٹی کے علاقے کو X متغیر کے طور پر سیٹ کریں، اور PLS کو انجام دینے کے لیے فارماکوڈینامک انڈیکس کو Y متغیر کے طور پر سیٹ کریں۔

2.4 Cistanche deserticola Q مارکر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی تصدیق

2.4.1 فعال اجزاء کے مادر حل کی تیاری۔ مناسب مقدار میں جینپینک ایسڈ، 8-ایپسٹریچنک ایسڈ، ایچائناسائڈ، ورباسکوسائیڈ، آئسوریباسکوسائیڈ، اور اینتھوسیانوسائیڈ اے کا درست وزن کریں، اور انہیں 10 mmol·L-1 حوالہ حل میں تحلیل کرنے کے لیے DMSO شامل کریں۔

2.4.2 HEK 293 cytotoxicity پر فعال اجزاء کا اثر۔

HEK 293 سیلز کو 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، ہر کنویں میں 2.4.1 سے کم فعال اجزاء کے حل کی مختلف ارتکاز شامل کریں ) 100 µL، مسلسل محرک

خلیوں کو 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، سیل ٹائٹر 96® ایکوئس سنگل سلوشن ریجنٹ کو سیل کی قابل عملیت کا پتہ لگانے کے لیے شامل کیا گیا۔

2.4.3 H2O2-کی حوصلہ افزائی HEK 293 سیلز پر فعال اجزاء کا اینٹی آکسیڈیٹیو نقصان اثر۔

سیلز کو اس طرح گروپ کیا گیا ہے: نارمل گروپ، ماڈل گروپ، اور VE گروپ 2.2.4 کے مطابق گروپ کیا گیا ہے۔ تجرباتی گروپ (0.781, 1.563, 3.125 µm·L–1 سرگرمی کی ترکیب اور 60 µm·L–1 H2O2)، 24 گھنٹے کے لیے ثقافتی بالترتیب 2.2.3، 2.2.4 اور 2.2.5 کے تحت طریقوں کے مطابق انٹرا سیلولر ROS لیول، SOD اور CAT انزائم کے مواد کا تعین کریں۔

Wecistanche کی معاون سروس

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https://www.xjcistanche.com٪2014-شاپ