مقداری پروٹومک مطالعہ پولی سسٹک جگر کی بیماری میں فائبرنوجن کے راستے کو بے نقاب کرتا ہے Ⅱ

3. نتائج

3.1 گردے اور جگر ایک ہی سسٹک میکانزم کی پیروی نہیں کرتے ہیں۔

پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ Pkd1 جین کا ابتدائی غیر فعال ہونا (p12 سے پہلے) پولی سسٹک بیماری (سسٹک ونڈو) کی تیزی سے نشوونما کو متحرک کرتا ہے، جب کہ p14 کے بعد غیر فعال ہونا 4-5 ماہ کے بعد دیر سے سسٹ کی تشکیل کا باعث بنتا ہے، جس میں ہلکی فینوٹائپ (نان سسٹک ونڈو) ہوتی ہے۔ [19]۔ ADPKD (Pkd1cond/cond; Tam-Cre) [18,19] کے اسی آرتھولوجس ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے تفتیش کی کہ کیا گردوں کی نشوونما کی یہ ونڈو وقت کے ساتھ ہیپاٹک نشوونما کی اسی طرح کی کھڑکی سے مطابقت رکھتی ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعات کے ساتھ براہ راست موازنہ کرنے کے لئے [37]، چوہوں کو ٹاموکسفین کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی تھی تاکہ بعد از پیدائش کے دنوں 14 (p14) اور 12 (p12) میں Pkd1 جین کو غیر فعال کیا جاسکے اور 30 ​​دن (p30) کی عمر میں قربانی دی جائے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ، ہم نے بیماری کی مختلف ڈگری (ہلکے اور شدید) کے ساتھ دونوں ٹائم پوائنٹس پر ایک سسٹک فینوٹائپ کا مشاہدہ کیا، جس سے پتہ چلتا ہے کہ گردے اور جگر میں آزاد سسٹک ڈویلپمنٹ ونڈو (شکل 1a)، اور/یا بیماری کے مختلف اوقات اور بڑھنے کا امکان ہے۔ . غیر فعال ہونے کی دونوں کھڑکیوں کے درمیان اس ذبح کی عمر میں مردوں اور عورتوں کے درمیان کوئی فرق نہیں پایا گیا (n=6 اتپریورتیوں کے ہر گروپ کے لیے استعمال کیا گیا تھا)۔ p14 اتپریورتی جانوروں نے p12 اتپریورتی گروپ کے مقابلے میں ایک ہلکا فینوٹائپ پیش کیا جس میں سسٹک انڈیکس کی کم قدریں، سسٹس کی تعداد اور ALP سیرم ویلیو (شکل 1b – d) کے مطابق ہیپاٹک فنکشن۔ یہ پہلا مطالعہ ہے جس میں Pkd1 جگر اور گردے کی کمی کے لیے مختلف ترقیاتی ونڈو/میکانزم دکھایا گیا ہے۔ ان سالماتی اختلافات کو مستقبل کے مطالعے میں طے کرنا پڑے گا۔

شکل 1. دن 30 فارم p12 اور p14 مراحل میں سسٹک لیور فینوٹائپ کی خصوصیت۔ p12 پر Pkd1 کو حذف کرنے میں زیادہ شدید سیسٹوجنیسیس ہوتا ہے۔ (a) Pkd1cond/cond؛ Tam-Cre ماؤس وائلڈ ٹائپ (WT, Pkd1cond/cond; Tam-Cre−) اور Mutant (KO, Pkd1cond/Cond;+ ) بعد از پیدائش کے دن 14 (p14 گروپ) اور 12 (p12 گروپ) میں tamoxifen کے ذریعہ Pkd1 جین کو حذف کرنے کے ساتھ۔ تمام چوہوں کو p30 پر قربان کیا گیا۔ اسکیل بار، 2 ملی میٹر (اوپری پینل) 100 µm (نچلا پینل)۔ n فی گروپ کے نمونوں کی تعداد کی نمائندگی کرتا ہے، اور Bd کا مطلب بائل ڈکٹ ہے۔ (b،c) ہیپاٹک سسٹک انڈیکس اور مختلف فینوٹائپس کے سسٹوں کی تعداد۔ (d، e) خون کے سیرم ALP اور ALT قدریں۔ سلاخیں تمام صورتوں میں ± SEM کی نمائندگی کرتی ہیں۔ p <0.05 بذریعہ طالب علم کے ٹی ٹیسٹ (دو دم) کو ایک اہم نتیجہ سمجھا جاتا تھا۔ ns اہمیت کی نمائندگی نہیں کرتا ہے۔ * p < 0.05، ** p < 0.01، *** p < 0.001۔

گردے کی بیماری کے لیے cistanche herba کے لیے کلک کریں۔

3.2 PLD میں شاٹگن اور SWATH-MS پروٹومک تجزیہ

جیسا کہ شکل 2 میں حوالہ دیا گیا ہے، ہم نے وائلڈ ٹائپ (WT) جانوروں کے مقابلے میں Mutants (KO) کے دونوں سسٹک مراحل (p12—شدید سسٹک بیماری- اور p14—ہلکی سی سسٹک بیماری-) پر تفریق پروٹوم تجزیہ کیا، تاکہ شناخت اور جگر کے سسٹوجنیسیس اور بیماری کے بڑھنے سے گزرنے والے متعلقہ مالیکیولر میکانزم کی خصوصیت۔

تصویر 2. تصویری ورک فلو سکیم۔ ہم نے ADPKD murine ماڈل (Pkd1cond/cond; Tam-Cre چوہوں) کا استعمال کیا جس میں Pkd1 کی جینیاتی غیرفعالیت کو ٹاموکسفین انتظامیہ نے بعد از پیدائش کے دن 10 (p10) اور p11 (تیز بیماری کی ترقی) یا p15 اور p16 ​​(بیماری کے بڑھنے میں تاخیر) کی حوصلہ افزائی کی۔ ) رینل سیسٹوجنیسیس کے ترقیاتی سوئچ کے مطابق، مطالعہ کے دو گروپوں کی وضاحت کرتے ہوئے بالترتیب p12 اور p14 [19]۔ دونوں گروہوں کے لئے، ہم نے ہر حالت میں چھ جنگلی قسم (WT) اور اتپریورتی (KO) افراد کے برابر یا اس سے زیادہ کا استعمال کیا، اور تمام جانوروں کو p30 پر قربان کیا گیا۔ ہم نے جگر کی سسٹک بیماری کی دونوں شدتوں (شکل 1) میں WT اور KO جگر کے امتیازی پروٹوم کا مطالعہ کیا، دونوں مقداری پروٹومک SWATH – MS اور شاٹگن ڈیٹا پر منحصر حصول DDA-MS تجزیہ کا استعمال کیا۔ کثرت میں نمایاں تبدیلی کے ساتھ پروٹین میں سے، ہم نے بائیو انفارمیٹکس فگر 2 کا استعمال کیا۔ تصویری ورک فلو اسکیم۔ ہم نے ایک ADPKD مورین ماڈل (Pkd1cond/cond; Tam-Cre چوہوں) کا استعمال کیا جس میں Pkd1 کی جینیاتی غیرفعالیت کو ٹاموکسفین انتظامیہ نے بعد از پیدائش کے دن 10 (p10) اور p11 (تیز بیماری کی ترقی) یا p15 اور p16 ​​(بیماری کے بڑھنے میں تاخیر) کی حوصلہ افزائی کی۔ ) رینل سیسٹوجنیسیس کے ترقیاتی سوئچ کے مطابق، مطالعہ کے دو گروپوں کی وضاحت کرتے ہوئے بالترتیب p12 اور p14 [19]۔ دونوں گروہوں کے لئے، ہم نے ہر حالت میں چھ جنگلی قسم (WT) اور اتپریورتی (KO) افراد کے برابر یا اس سے زیادہ کا استعمال کیا، اور تمام جانوروں کو p30 پر قربان کیا گیا۔ ہم نے مقداری پروٹومک SWATH – MS اور شاٹگن ڈیٹا پر منحصر حصول DDA-MS تجزیہ دونوں کا استعمال کرتے ہوئے، جگر کی سسٹک بیماری (شکل 1) کی دونوں شدتوں میں WT اور KO جگروں کے امتیازی پروٹوم کا مطالعہ کیا۔ کثرت میں نمایاں تبدیلی کے ساتھ پروٹینوں میں سے، ہم نے بیماری میں شامل نئے علاج کے اہداف اور راستوں کا پتہ لگانے کے لیے بائیو انفارمیٹکس ٹولز کا استعمال کیا۔ آخر میں، ہم نے ان اہداف کو پہلے سلیکو (DDA بمقابلہ SWATH تجزیہ) میں اور آخر میں vivo کی حکمت عملیوں کے ساتھ ساتھ RT-qPCR، ویسٹرن بلوٹنگ اور امیونو ہسٹو کیمسٹری کا استعمال کرتے ہوئے توثیق کی۔ p کا مطلب ہے پیدائش کے بعد کا دن

Hepatic Cystogenesis میں پروٹین ایکسپریشن پیٹرن سب سے پہلے، ہم نے شاٹگن ڈیٹا پر منحصر حصول DDA-MS یا DDA کے ذریعے پروٹومک ماس سپیکٹرومیٹری تجزیہ کیا۔ یہ تجزیہ مکمل اور انفرادی نمونوں سے پروٹوم کی خصوصیت کی اجازت دیتا ہے، اعلی حساسیت کے ساتھ پروٹین کی موجودگی/غیر موجودگی فراہم کرتا ہے لیکن ان کی مقدار فراہم کیے بغیر۔ ہم نے بالترتیب وائلڈ ٹائپ اور اتپریورتی افراد کے p14 اور p12 مراحل کے لئے کل چھ نمونوں میں سے پانچ سے زیادہ آزاد نمونوں میں مختلف طور پر ظاہر کیے گئے تمام پروٹینوں پر خصوصی طور پر غور کیا (شکل S1)۔ p14 پر، 1 WT-خصوصی (یا بیماری کے لیے ڈاون ریگولیٹڈ) اور 7 MUT خصوصی (اپ-ریگولیٹڈ) پروٹینز کی نشاندہی کی گئی، جبکہ p12 پر، آٹھ WT-exclusive اور چھ MUT-خصوصی پروٹین دیکھے گئے (شکل S1)۔

اگلا، ہم نے ایک ایسا طریقہ استعمال کیا جس سے ہمیں مختلف پروٹینوں کی مقدار درست کرنے کی اجازت دی گئی۔ ہم نے اسی نمونوں پر ایک SWATH – MS مقداری پروٹومک تجزیہ کیا جو ہم نے DDA کے لیے استعمال کیا تھا، فی نمونہ ~ 1500 پروٹین اور ہر اسٹڈی گروپ میں 2000 سے زیادہ پروٹین حاصل کیے تھے۔ سب سے پہلے، ہم نے کل رقبہ کی رقم (TAS) کو معمول پر لایا تاکہ یہ اندازہ لگایا جا سکے کہ ہمارے نمونے ایک عام تقسیم کے پیٹرن کی پیروی کرتے ہیں، جیسا کہ اعداد و شمار S2 اور S3 میں دکھایا گیا ہے۔ اگلا، ہم نے وائلڈ ٹائپ اور اتپریورتی گروپوں کے درمیان اہم فرق کے ساتھ پروٹین کا مطالعہ کیا۔ جدول 1 دو گنا اضافے (اپ ریگولیٹڈ) یا کمی (ڈاؤن ریگولیٹڈ) کے ساتھ کثرت میں نمایاں تبدیلی کے ساتھ پروٹین کو دکھاتا ہے اور ڈبلیو ٹی بمقابلہ پیرامیٹرک اسٹوڈنٹ کے ٹی ٹیسٹ کے مطابق ایک اہم ایڈجسٹ شدہ پی ویلیو MUT نمونے p14 اور p12 پر۔ مجموعی طور پر، چھ پروٹینوں نے WT p14 اور MUT-p14 گروپس (پانچ اپ ریگولیٹڈ پروٹین اور ایک ڈاون ریگولیٹڈ پروٹین) کے درمیان پروٹین کی کثرت میں نمایاں فرق ظاہر کیا۔ WT-p12 اور MUT-p12 کے درمیان، 26 پروٹین (20 پروٹین اپ ریگولیٹڈ اور 6 پروٹین ڈاون ریگولیٹڈ) نے نمایاں فرق ظاہر کیا (شکل 3a اور جدول 1)۔ گرافک طور پر، ان تغیرات کا مشاہدہ آتش فشاں پلاٹوں کے ذریعے کیا جا سکتا ہے، جو لاگ (2) گنا تبدیلیوں کو ان کے −log(10) p-value (شکل 3b) کے خلاف شناخت کیے گئے تمام پروٹینوں کے لیے پلاٹ کرکے پیدا کیے گئے تھے۔ پروٹین کی کثرت کی سطحوں کے درمیان نمایاں فرق کو گرمی کے نقشے میں اسپیکٹرل لائبریری کے علاقوں کے مطابق انفرادی اقدار کے ساتھ تصور کیا جا سکتا ہے، اور کلسٹر ہیٹ میپ کے تجزیہ میں اس کی کلسٹرنگ لیول (اعداد و شمار 3c اور S4)۔ SWATH – MS تجزیہ کے ذریعے پائے جانے والے یہ کلسٹرز ہمیں ان کوالٹیٹو الگ الگ نمونوں کی شناخت کرنے میں مدد کرتے ہیں، جن پر مقداری تجزیہ (شکل S5) کے لیے غور کیا جانا چاہیے۔ نمونے (شکل S6) کے درمیان ڈیٹا کا موازنہ کرنے کے لیے پرنسپل جزو تجزیہ (PCA) کا استعمال کرتے ہوئے ایک غیر زیر نگرانی ملٹی ویریٹیٹ شماریاتی تجزیہ کیا گیا۔ ہیٹ میپ اور پی سی اے ڈیٹا نے نمونے کی سہ رخیوں میں تولیدی صلاحیت کا مظاہرہ کیا کیونکہ تینوں نقلیں دونوں تجزیوں میں قریب سے کلسٹرڈ ہیں۔ ہم PCA اور ہیٹ میپ کلسٹر تجزیہ (اعداد و شمار S5 اور S6) دونوں میں مشاہدہ کر سکتے ہیں کہ کس طرح کچھ نمونے صحیح طریقے سے گروپ نہیں ہوئے، دونوں کلسٹرز کے درمیان اوور لیپنگ۔ بہر حال، ہم وائلڈ ٹائپ اور اتپریورتی کلسٹرز میں ڈیٹا کو الگ کرنے کا رجحان دیکھ سکتے ہیں۔ p14 بمقابلہ p12 میں نمایاں فرق کے ساتھ پروٹین کی کم تعداد کو شدت کی مختلف ڈگری (شکل 2) سے جواز بنایا جا سکتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ سسٹک فینوٹائپ کی شدت اور بیماری کی حیثیت کی بنیاد پر پروٹین اور راستوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے۔

3.3 PLD میں جین کے اظہار کا کلسٹرنگ، پاتھ وے افزودگی اور پروٹین-پروٹین کے تعامل کا تجزیہ

SWATH-MS تجزیہ کے ذریعہ شناخت شدہ مختلف پروٹینوں سے متعلق فنکشن کو قائم کرنے کے لئے، ہم نے کئی بایو انفارمیٹک ٹولز اور تجزیوں کی شکلیں استعمال کیں۔ جین اونٹولوجی (GO) کی شرائط اور راستے کے تجزیے FunRich [39,40]، String [41] اور Reactome [42] کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔ پروٹینوں کو FunRich جین کی افزودگی کے تجزیہ میں ترتیب دیا گیا تھا۔ حیاتیاتی عمل کے حوالے سے، p14 گروپ (ہلکے سسٹک) کے لیے پروٹین کا سب سے زیادہ افزودہ گروپ فیٹی ایسڈ کی نقل و حمل اور پروسٹگینڈن بائیو سنتھیسس سے متعلق تھا، اور p12 (شدید سسٹک) گروپ کے لیے فائبرنوجن/فبرین سرگرمی، سیل سیل/میٹرکس چپکنے اور میٹابولک عمل (شکل 4a، اوپری پینل)۔ اے این ایکس اے 2 اور فائبرنوجن کمپلیکس بالترتیب p14 اور p12 گروپوں میں دو سب سے زیادہ افزودہ سیلولر اجزاء تھے۔ مزید برآں، ایکسٹرا سیلولر اسپیس سیلولر جزو تھا جس میں دونوں گروپوں میں پروٹین کی سب سے زیادہ فیصد تھی (شکل 4a، لوئر پینل)۔ اسی طرح، ایک ہی تجزیہ سٹرنگ تجزیہ کے ساتھ قائم کیا گیا تھا، جس میں مختلف میٹابولک عمل کو اہم حیاتیاتی عمل کے طور پر شناخت کیا گیا تھا، اور خلوی خلائی جگہ کو سب سے زیادہ افزودہ سیل جزو کے طور پر؛ GO نتائج کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے (شکل S7a)۔ آخر میں، ہم نے تجزیے کو Reactome پلیٹ فارم کے ساتھ دہرایا، یہ معلوم ہوا کہ میٹابولزم اور مدافعتی نظام سب سے زیادہ افزودہ راستے تھے (شکل S7b)۔

پروٹین – پروٹین یا کلسٹر تجزیہ سٹرنگ تجزیہ پر مبنی ممکنہ پروٹین – پروٹین کے تعاملات (تجرباتی شواہد کے ساتھ تعاملات) کی تحقیقات کے لیے بھی کیا گیا تھا۔ مختلف گروپس (شکل S8) میں پروٹین کے متعدد تعاملات کی نشاندہی کی گئی تھی، لیکن ایک کلسٹر p14 پر اور دوسرا p12 پر پروٹین کے درمیان تعامل کی تعداد اور اظہار کی سطح (شکل 4b) کی بنیاد پر سب سے زیادہ متعلقہ تھا۔ p14-کلسٹر میں annexin A2 پروٹین (ANXA2_P07356) ہوتا ہے جو کئی سیلولر افعال سے وابستہ ہوتا ہے، جیسے fibrinolysis، سیل کی حرکت پذیری (epithelial خلیات میں)، ایکٹین سے متعلق ایک پروٹین cytoskeleton اور cell-matrix تعاملات [43]، انٹرا سیلولر لپڈ ٹرانسپورٹ (FABP1_P12710 اور FABP5_Q05816) میں شامل دو دیگر پروٹینوں کے ساتھ تعامل۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ p12-کلسٹر میں پروٹین کے ایک اور متعلقہ گروپ کی نشاندہی کی گئی تھی جس میں کئی فائبرنوجنز (FGL1_Q71KU9, FIBB_Q8K0E8, FIBA{{22} کے درمیان ایک بہت مضبوط پروٹین – پروٹین کے تعامل کے ساتھ }}E9PV24 اور FIBGG_Q8VCM7)۔ فائبرنوجینز ہیپاٹوسائٹ کی نشوونما میں شامل ہیں، اور وہ خون کے پلیٹلیٹ کے پھیلاؤ، بیچوالا کولیجن اور فائبروٹک گھاووں میں ثالثی کرتے ہیں [44]۔ مزید برآں، اضافی پروٹین فائبرنوجینز (فگر S8) کے ساتھ تعامل کرتے ہوئے پائے گئے، جیسے سیرم امائلائیڈ پی-جزو (SAMP_P12246)، ہیموپیکسن (HEMO_Q91X72) یا ہائیڈروکسی ایسڈ آکسیڈیس 2 (HAOX{) {37}}Q9NYQ2)۔ مستقل طور پر سٹرنگ کے نتائج کے ساتھ، ANXA2 اور fibrinogen کمپلیکس بھی سب سے زیادہ افزودہ سیلولر اجزاء تھے جن کی شناخت FunRich تجزیہ (شکل 4a) کے ذریعے کی گئی تھی۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ جب DDA اور SWATH تجزیہ کے ذریعے حاصل کردہ ڈیٹا کا موازنہ کرتے ہوئے، ہم نے تصدیق کی کہ SWATH کے ذریعے شناخت کیے گئے متعدد پروٹینوں کی شناخت DDA تجزیہ کے ذریعے بھی کی گئی تھی، جن میں کئی فائبرنوجن کمپلیکس پروٹین (SAMP/Apcs اور S10A9/S100a9؛ Table S3) سے متعلق ہیں۔

3.4 SWATH-MS تجزیہ کی توثیق PLD سے متعلق ایک نئے مالیکیولر میکانزم کے طور پر فائبرنوجن کمپلیکس کو بے نقاب کرتی ہے۔

ان اعداد و شمار کی بنیاد پر، ہم نے RT-qPCR، ویسٹرن بلوٹنگ اور امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ساتھ vivo کی توثیق کے لیے p12 اور p14 مراحل میں فائبرنوجن کمپلیکس سے متعلق SWATH–MS تجزیہ (Figure S9) سے تبدیل شدہ پروٹینز کا انتخاب کیا، تاکہ ان کی تصدیق ممکن ہو سکے۔ بیماری کے اہداف. ان منتخب پروٹینوں میں سے 10 میں سے آٹھ کو mRNA کی سطح پر RT-qPCR (شکل 5) کے ذریعے توثیق کیا گیا تھا۔ ایک 14-اسٹیج (ANXA2_P07356) اور p12-گروپ (SAMP_P12246, FGL1_Q71KU9, ILK{{ پر ریگولیٹڈ 17}}O55222, S10A9_P31725, FIBB_Q8K0E8, HEMO_Q91X72, FIBA_E9PV24 اور FIBG_Q8-VCM7)، اور ایک نیچے p12 گروپ (HAOX2_Q9NYQ2) میں ریگولیٹڈ۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ فائبرنوجن گروپ (ILK اور S10A9) سے زیادہ فاصلے یا کم تعامل کے ساتھ دو پروٹینوں کے جین کا اظہار صرف وہی تھے جن کی توثیق نہیں کی گئی تھی (شکل 5c)۔

فائبرنوجن کمپلیکس (ANXA2، SAMP، FIBB، FIBA، FIBG اور HAOX2 پروٹین) کے اپ ریگولیشن کی مزید تصدیق مغربی بلاٹنگ (WB) تجزیہ (شکل 6) سے ہوئی۔ مجموعی طور پر، جین کا اظہار اور ڈبلیو بی SWATH-MS پروٹومک ڈیٹا کے ساتھ انتہائی مطابقت رکھتے تھے۔ آخر میں، ہم نے اتپریورتی اور پولی سسٹک جگر کے نمونوں (شکل 7) میں فائبرنوجن کمپلیکس کی امیونو ہسٹو کیمسٹری کی توثیق بھی کی۔ فبرینوجن سٹیننگ کو سسٹ لائننگ اپیتھیلیل سیلز اور بائل ڈکٹ ڈیلیٹیشن (شکل 7a) میں مضبوطی سے ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ یہ نتائج پہلی بار فائبرنوجن کمپلیکس کو ہیپاٹک سیسٹوجنیسیس سے متعلق ممکنہ راستے کے طور پر اور PLD کے ممکنہ مستقبل کے علاج کے ہدف کے طور پر بے نقاب کرتے ہیں۔

شکل 5. RT-qPCR کے ذریعے ممکنہ PLD اہداف کی توثیق۔ 8 سے 10 منتخب اہداف کا جین اظہار SWATH-MS ڈیٹا کے ساتھ منسلک ہے۔ اپ ریگولیٹڈ منتخب کردہ p14 ٹارگٹ انیکسین A2 (Anxa2) (a) کے RT-qPCRs؛ اپ ریگولیٹڈ پی 12 ایمیلائڈ پی جزو، سیرم (اے پی سی ایس، ایس اے ایم پی جین)، فائبرنوجن نما 1 (Fgl1)، فائبرنوجن بیٹا چین (Fgb)، ہیموپیکسن (Hpx)، فائبرنوجن الفا چین (Fga)، فائبرنوجن گاما چین (Fgg) کو نشانہ بناتا ہے۔ (b)، انٹیگرین لنکڈ کناز (Ilk) اور S10{{30} کیلشیم بائنڈنگ پروٹین A9 (S100a9) (c)؛ اور ڈاؤن ریگولیٹڈ p12 ٹارگٹ ہائیڈروکسی ایسڈ آکسیڈیز 2 (Hao2) (d)۔ n=6 ہر پروٹین گروپ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ گپدھ کو ہاؤس کیپنگ جین کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ سلاخوں کا مطلب ہے ± SEM۔ طالب علم کا دو دم والا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا اور p <0.05 کی قدر کو اہم سمجھا گیا۔ ns: اہم نہیں (p 0.05 سے بڑا یا اس کے برابر)، * p <0.05، ** p <0.01، *** p <0.001.

شکل 7. سسٹک اپیتھیلیا میں فائبرنوجن کمپلیکس اپ ریگولیٹ ہوتا ہے۔ (a، b) بائل ڈکٹ (اوپری پینل) اور جگر کے پیرینچیما (لوئر پینل) میں فائبرنوجن امیونو ہسٹو کیمسٹری کی نمائندہ تصاویر (a) اور اس کی مقدار (b)۔ n=6 ہر گروپ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ امیونو ہسٹو کیمسٹری تجزیہ نے سسٹک اپیتھیلیا کے ذریعے فائبرنوجن کے اپ ریگولیشن کو دکھایا۔ نمونے p12 گروپ کے مساوی تھے۔ اسکیل بارز 100 µm کی نمائندگی کرتے ہیں۔ بی ڈی کا مطلب بائل ڈکٹ ہے۔ سلاخوں کا مطلب ہے ± SEM۔ طالب علم کا دو دم والا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا اور p <0.05 کی قدر کو اہم سمجھا گیا۔ *** p < 0.001۔

Wecistanche کی معاون خدمت - چین میں سب سے بڑا cistanche برآمد کنندہ:

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

گردے کے انفیکشن کے لیے 25% ایکیناکوسائیڈ اور 9% ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ قدرتی آرگینک سیسٹانچ ایکسٹریکٹ حاصل کریں